Análisis de Efectividad A Desinfectantes

Pruebas de efectividad
1. MATERIAL DE REFERENCIA (CEPAS MICROBIOLOGICAS)
2. PRODUCTOS A ESTUDIAR
 BC BACTYODO
 BC CLORIDE 506
 BC PER 15
 BC PEROXY 35
 BC QUAT AROMA
 BC QUAT 10
3. MATERIALES PARA LA PRUEBAS
ÍTEM DESCRIPCIÓN CANTIDAD

FONDO PLANO 40
TUBOS DE ENSAYO 28
mL
FRASCOS BOECO 1000 mL 2
TUBOS CON CALDO Commented [D1]: AQUÍ LA NORMA RECOMIENDA QUE
10 mL 6
LETHEEN TENGAS UN NEUTRALIZANTE DE ACUERDO AL ANEXO A,
ASAS DEBEN TRATAR DE TRABAJAR CON ALGUNO DE ESTOS
BACTERIOLÓGICAS 10 uL punta 2 PUEDE SER EL DE POLISORBATO 80+ LECITINA
DESECHABLES
REJILLAS 1
PUNTAS ESTÉRILES 100 - 1000 uL 16
CAJAS PETRI 3
PIPETA 100 - 1000 uL 1
MECHERO ALCOHOL 1
PLACAS COMPACT DRY 12
TIMER DIGITAL 4 - 5 TIEMPOS 1
ESTANDAR DE MC
1
FARLAND
TUBO SPENDORF 1
3,1 EQUIPOS PARA LAS PRUEBAS

INCUBADORA A temperatura del ensayo 1
AUTOCLAVE Esterilización materiales 1
HORNILLA 1
EQUIPO DE PROTECCIÓN

Mascarilla descartable 1 unidad
Guantes descartable 2 a 3 pares
Mandil descartable 1 a 2 unidades
DÍA 1 Y 2
EJEMPLO STAPHYLOCOCCUS
 Se tiene el Kwik stik , Se activa la válvula para que caiga el contenido y se homogeniza con
el hisopo y liofilizado que contiene la cepa Commented [D2]: La activación de la cepa que vimos es
 Se inocula y cultiva la bacteria atenuada en placas con agar SOYA TRIPTICASA. Dos placas algo general cuando le entreguen la cepa viene con
instrucciones especificas para cada microorganismos
en total.
 Se incuba a 35 ± 2 oC entre 24 y 48 H.
NOTA 1: Para mejorar el almacenamiento se deben guardar las crioperlas en las puntas cónicas, Commented [D3]: Esto se llama conservación de cepas
para su uso posterior. Es 1 paquete de 25 bolitas por caja petri. Total 50 bolitas.
NOTA 2: ABRIR 1 PAQ x 25 y por unidad deslizarla con el asa estéril (sobre la placa que contiene
el microorganismo), por unos segundos. Esto se COLOCA EN TUBO SPENDORF CON GLICERINA.
Se agita y se deja en contacto POR 30 MIN. Luego elimino el glicerol. Para su almacenamiento se
congela a -15 ± 5 oC.
Día 2
 Se agarra un TUBO SPENDORF del congelador, se lo deja temperar al temperatura 20 ± 2
o
C.
 Se quita una perla con ayuda de la asa y se lo astria en una placa con agar SOYA
TRIPTICASA.
 Se incuba a 35 ± 2 oC entre 24 y 48 H.
DÍA 3
 Conforme a la norma se establece un nivel de turbidez #2 para asegurar la concetración

6x10^8.
 Con el asa estéril, poco a poco, tomar una pequeña muestra de bacterias proveniente de la
placa incubada. Introducirlo en un tubo de ensayo que contiene 10 mL de agua peptonada.
Hasta obtener la turbidez deseada.
ESCALA DE MC FARLAND
A partir de nuestra solución madre se realiza las diluciones correspondientes:
SOLUCION 1ml en 1ml en 1ml en 1ml en 1ml en 1ml en 1ml en

MADRE 9ml Agua 9ml Agua 9ml 9ml Agua 9ml Agua 9ml Agua 9ml Agua
Peptonad Peptonad Agua Peptonad Peptonada Peptonad Peptonad
a a Peptona a a a
da
6x 10 ^8 6x 10 ^7 6x 10 ^6 6x 10 ^5 6x 10 ^4 6x 10 ^3 6x 10 ^2 6x 10 ^1
100-1000 10-100 1-10
EJEMPLO STAPHYLOCCUS 600 60 6
NOTA 1: Todos los tubos diluidos se almacenan en refrigeración a 4 ± 2 oC.
 A partir de las tres últimas diluciones, se extrae 1 ml y se cultiva c/u en placas compact dry
TC a 35 ± 2 oC entre 24 y 48 H.
NOTA 2: Solo pueden leer max 300 colonias en los compact dry.
DÍA 4
 Leer las placas del día 3 y comprobar que hemos partido de la solución madre correcta, con
concentración: 6x 10 ^8.
 Retiramos los tubos, de las diluciones, de la refrigeradora y dejamos temperar a ambiente.

PRUEBA DE EFECTIVIDAD CON EL DESIFECTANTE
 En un tubo vacío, se añade:
TUBO 1: Solución que estuvo en contacto con el microorganismo
8ml Desinfectante
1ml Agua destilada
Solución concentrada 6x 10 ^8 a T.
1ml
AMBIENTE: 20 ± 1 oC
Variables a considerar TIEMPO DE CONTACTO Y CONCENTRACION
Por ejemplo:
Acorde a la ficha técnica:
PRODUCTO: BC BACTYODO
CONCENTRACIÓN: RANGO ( MIN-MAX)
TIEMPO: 5-10-15 MIN
EJEMPLO: DESPUES DE 5 MINUTOS, ACORDE A LA FT. En un tubo de ensayo vacio, se añade:
TUBO 2
1ml TUBO 1
8ml Solución Neutralizante (Letheen)
1ml Agua Destilada
 Se espera 5 min
SOLUCION 1ml en 1ml en 1ml en 1ml en 1ml en 9ml 1ml en

MADRE- 9ml Agua 9ml Agua 9ml Agua 9ml Agua Agua 9ml Agua
TUBO 2 Peptonad Peptonada Peptonad Peptonad Peptonada Peptonad
8ml de a a a a
neutralizante
1ML AGUA
DEST
1ml TUBO 1
6x 10 ^7 6x 10 ^6 6x 10 ^5 6x 10 ^4 6x 10 ^3 6x 10 ^2 6x 10 ^1
INCUBAR INCUBAR INCUBAR
EN CD EN CD EN CD
NOTA 1: Realizar esto para todos los tiempos y concentraciones acorde a la FT.
NOTA 2: Por lo general se incuba en las tres primeras diluciones. Porque desde una de ellas ya Commented [D4]: SE DEBE SERMBARA EN PLACAS
se puede contar. COMPACT DRY TODAS LAS DILUCIONES E INCUBAR TODAS
LAS DILUCIONES
DÍA 5
 En este punto ya deberíamos tener listas nuestras placas cd incubadas para el conteo de la Commented [D5]:
prueba.
Por ejemplo:
DILUCIÓN 6x10 ^6 6x10 ^5 6x10 ^4

CONTEO >300 >300 180 COLONIAS
Se realiza el siguiente cálculo:
No. Logaritmos eliminados= Concentración inicial - Concentración final de acuerdo al conteo.
No. Logaritmos eliminados= 6x10 ^8 - 6x10 ^4 Commented [D6]: PERFECTO LA NORMA IGUAL TRAE
UNA FORMULA PERO PARA INICIAR PUEDEN EMPEZAR POR
No. Logaritmos eliminados= 6x10 ^4 = 4 Logaritmos REDUCCION LOGARITMICA QUE ES COMO LO EXPRESAN LA
MAYORIA DE LAS EMPRESAS
PRUEBA DE TOXICIDAD
1 mL AGUA 1 mL PRODUCTO MAYOR CONC

8 mL NEUTRALIZANTE 8 mL NEUTRALIZANTE
 Agitar por unos segundos y luego dejar ambos tub
 os en reposo por 5 minutos.
 Después de los 5 minutos adicionar a cada tuvo:
1 mL AGUA 1 mL PRODUCTO MAYOR CONC

8 mL NEUTRALIZANTE 8 mL NEUTRALIZANTE
1 mL cepa a 6x10 ^2 o 6x10 ^3 1 mL cepa a 6x10 ^2 o 6x10 ^3
 Agitar por unos segundos y luego dejar ambos tubos en reposo por 30 minutos a 20 ± 1 oC.
 Inocular e incubar dos placas compact dry por cada tubo de ensayo.
DÍA 6
 En este punto ya deberíamos tener listas nuestras placas cd incubadas para el conteo de la
prueba.
 Para que aseguremos que el neutralizante no está eliminando bacterias. La diferencia en el

conteo de ambos pares de placas no debería ser significativo.

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1. MATERIAL DE REFERENCIA (CEPAS MICROBIOLOGICAS)

3. MATERIALES PARA LA PRUEBAS

ÍTEM DESCRIPCIÓN CANTIDAD

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 Conforme a la norma se establece un nivel de turbidez #2 para asegurar la concetración

A partir de nuestra solución madre se realiza las diluciones correspondientes:

SOLUCION 1ml en 1ml en 1ml en 1ml en 1ml en 1ml en 1ml en

NOTA 1: Todos los tubos diluidos se almacenan en refrigeración a 4 ± 2 oC.

 Retiramos los tubos, de las diluciones, de la refrigeradora y dejamos temperar a ambiente.

 En un tubo vacío, se añade:

TUBO 1: Solución que estuvo en contacto con el microorganismo

Acorde a la ficha técnica:

CONCENTRACIÓN: RANGO ( MIN-MAX)

TIEMPO: 5-10-15 MIN

EJEMPLO: DESPUES DE 5 MINUTOS, ACORDE A LA FT. En un tubo de ensayo vacio, se añade:

SOLUCION 1ml en 1ml en 1ml en 1ml en 1ml en 9ml 1ml en

DILUCIÓN 6x10 ^6 6x10 ^5 6x10 ^4

Se realiza el siguiente cálculo:

No. Logaritmos eliminados= Concentración inicial - Concentración final de acuerdo al conteo.

1 mL AGUA 1 mL PRODUCTO MAYOR CONC

 Agitar por unos segundos y luego dejar ambos tub

 os en reposo por 5 minutos.

 Después de los 5 minutos adicionar a cada tuvo:

1 mL AGUA 1 mL PRODUCTO MAYOR CONC

 Para que aseguremos que el neutralizante no está eliminando bacterias. La diferencia en el

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