Practica 3. Acido Urico

UNIDAD DE CIENCIAS BÁSICAS
ASIGNATURA DE BIOQUÍMICA
GUÍA DE PRÁCTICAS
SEGUNDO AÑO
PRACTICA 3. DETERMINACION DE ACIDO

URICO EN SUERO
DETERMINACION DE ACIDO URICO EN SUERO
1. INTRODUCCION.
La producción de urato es el mecanismo por el cual el organismo elimina el

nitrógeno procedente de las bases nitrogenadas. Diariamente se producen unos 4,5
mmol; el 60% aproximadamente, es de origen endógeno, como el metabolismo del
ADN y el 40% restante de origen exógeno, sobre todo procedente de los alimentos.
La constante de disociación (pKa) del ácido úrico es de 5.57, de modo que, a pH
fisiológico, este compuesto se encuentra fundamentalmente como urato.
El 75% del urato producido se elimina por la orina y el resto pasa al aparato
gastrointestinal.
La concentración plasmática de urato depende de la edad y el sexo, también

influyen la dieta y diversas variables genéticas y ambientales.
La hiperuricemia se define como la existencia de concentraciones elevadas de urato

en la sangre, la mayoría permanecen asintomáticos, pero algunos pueden
desarrollar gota y alteraciones renales. Las causas de hiperuricemia puede ser un
aumento de la producción de urato (aumento en la síntesis de novo de purinas o
mayor catabolismo de las purinas) o por reducción de su eliminación renal.
La gota es una enfermedad metabólica que se caracteriza por la precipitación de

cristales de urato monosódico en los tejidos del organismo, llamados tofos que se
producen en el líquido sinovial de las articulaciones y sobre los tejidos que las
rodean y causan la aparición de artritis dolorosas.
2. OBJETIVO.
Determinar la concentración de ácido úrico en suero, mediante un método

espectrofotométrico.
Comparar el valor de nuestra muestra sérica con los rangos de referencia de ácido
úrico.
3. FUNDAMENTO DEL MÉTODO.
La determinación del ácido úrico se fundamenta en la siguiente secuencia de

reacciones enzimáticas:
Ácido úrico + 2 H2O +O2 Alantoína+ H2O2 + CO2
2H2O2 + 4-aminofenazona + 3,5-DHS quinonimina (color)
El ácido úrico es oxidado por la enzima específica uricasa generándose alantoína y

H2O2 (peróxido de hidrogeno), el cual en una reacción mediada por la enzima POD
(peroxidasa), reacciona con el ácido 3,5-DHS (3-5-Dicloro-2-Hidroxi-
Bencenosulfónico) y 4-AF (4-aminofenazona) produciéndose un compuesto
coloreado (quinonimina), que se cuantifica por espectrofotometría.
3. EQUIPOS, MATERIALES, REACTIVOS Y MUESTRA.
3.1. EQUIPOS.
Espectrofotómetro Baño de agua
Cronometro
3.2. MATERIALES.
Tubos de vidrio 13 x 100 Gradilla
Micropipetas Tips de micropipetas
Recipiente de bioseguridad Cubetas del espectrofotómetro
3.3. REACTIVOS.
Kit para determinar ácido úrico.
Contiene: Estándar: solución de ácido úrico 10 mg/dL.
Reactivo A: sal sódica de 3,5 diclorohidroxibenceno sulfónico (DHS).
Reactivo B: solución conteniendo buffer Good pH 7.8, 4-aminofenazona (4-AF),

uricasa (UOD), peroxidasa (POD), y ferrocianuro de potasio
3.4. MUESTRA.
Se debe obtener suero o plasma de la manera usual. Si se emplea plasma, se

recomienda solo heparina como anticoagulante.
4. PROCEDIMIENTOS.
4.1. En tres tubos de ensayo rotulados como B, ST y M, colocar:
Blanco Estándar Muestra

Reactivos
(B) (ST) (M)
Reactivo A (µL) 800 800 800
Reactivo B (µL) 200 200 200
Estándar (µL) _ 20 _
Suero (uL) _ _ 20
4.2. Mezclar e incubar durante 5 minutos en baño de agua a 37ºC.
4.3. Retirar y colocar en una cubeta y realizar la lectura en el espectrofotómetro a

505 nm, llevando el equipo a cero con el blanco.
4. Anotar los resultados de densidad óptica (DO) de los tubos ST y M.
5. CÁLCULO DE LOS RESULTADOS.
Calcule la concentración de ácido úrico utilizando la siguiente formula:
Ácido úrico en suero (mg/dL) = DO muestra x Concentración estándar
DO estándar
Ejemplo:
DO muestra = 0.134
Concentración del estándar = 10 mg/dL
DO estándar = 0.284
Ácido úrico en suero = 0.134 x 10 / 0.284 = 4.72 mg/dL
6. VALORES DE REFERENCIA.
Mujeres: 2,0 a 6,0 mg/dL.
Varones: 3,5 a 7,0 mg/dL.
Para convertir las unidades al sistema internacional, se utiliza la siguiente formula:
Ácido úrico (mg/dL) x 0.059 = Ácido úrico (mmol/L)
7. BIBLIOGRAFIA.
Alvaro Gonzales Hernandez. Principios de bioquímica clínica y patología molecular.

3ª ed. Elsevier España. 2019
Gota. Rev. Fac. Med. (Méx.) [revista en la Internet]. 2014 Ago [citado 2020 Jun 23];
57(4): 58-60. Disponible en:
http://www.scielo.org.mx/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0026-
17422014000400058&lng=es.

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UNIDAD DE CIENCIAS BÁSICAS

PRACTICA 3. DETERMINACION DE ACIDO

La producción de urato es el mecanismo por el cual el organismo elimina el

La concentración plasmática de urato depende de la edad y el sexo, también

La hiperuricemia se define como la existencia de concentraciones elevadas de urato

La gota es una enfermedad metabólica que se caracteriza por la precipitación de

Determinar la concentración de ácido úrico en suero, mediante un método

3. FUNDAMENTO DEL MÉTODO.

La determinación del ácido úrico se fundamenta en la siguiente secuencia de

Ácido úrico + 2 H2O +O2 Alantoína+ H2O2 + CO2

2H2O2 + 4-aminofenazona + 3,5-DHS quinonimina (color)

El ácido úrico es oxidado por la enzima específica uricasa generándose alantoína y

Espectrofotómetro Baño de agua

Tubos de vidrio 13 x 100 Gradilla

Micropipetas Tips de micropipetas

Recipiente de bioseguridad Cubetas del espectrofotómetro

Kit para determinar ácido úrico.

Contiene: Estándar: solución de ácido úrico 10 mg/dL.

Reactivo A: sal sódica de 3,5 diclorohidroxibenceno sulfónico (DHS).

Reactivo B: solución conteniendo buffer Good pH 7.8, 4-aminofenazona (4-AF),

Se debe obtener suero o plasma de la manera usual. Si se emplea plasma, se

4.1. En tres tubos de ensayo rotulados como B, ST y M, colocar:

Blanco Estándar Muestra

Reactivo A (µL) 800 800 800

Reactivo B (µL) 200 200 200

4.2. Mezclar e incubar durante 5 minutos en baño de agua a 37ºC.

4.3. Retirar y colocar en una cubeta y realizar la lectura en el espectrofotómetro a

4. Anotar los resultados de densidad óptica (DO) de los tubos ST y M.

5. CÁLCULO DE LOS RESULTADOS.

Calcule la concentración de ácido úrico utilizando la siguiente formula:

Ácido úrico en suero (mg/dL) = DO muestra x Concentración estándar

Concentración del estándar = 10 mg/dL

Ácido úrico en suero = 0.134 x 10 / 0.284 = 4.72 mg/dL

Mujeres: 2,0 a 6,0 mg/dL.

Varones: 3,5 a 7,0 mg/dL.

Para convertir las unidades al sistema internacional, se utiliza la siguiente formula:

Ácido úrico (mg/dL) x 0.059 = Ácido úrico (mmol/L)

Alvaro Gonzales Hernandez. Principios de bioquímica clínica y patología molecular.

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