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    Floculación Sífilis

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    Laura Alejandra
    Este documento describe una práctica de laboratorio sobre reacciones de floculación, con un enfoque en la prueba de VDRL para el diagnóstico de sífilis. Los objetivos son brindar conceptos sobre la floculación, diferenciar lecturas positivas vs negativas, y aprender la aplicación clínica. Se explica el fundamento, materiales, procedimiento y lectura de la prueba de VDRL, así como su importancia en el diagnóstico de sífilis.

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    Este documento describe una práctica de laboratorio sobre reacciones de floculación, con un enfoque en la prueba de VDRL para el diagnóstico de sífilis. Los objetivos son brindar conceptos sobre la floculación, diferenciar lecturas positivas vs negativas, y aprender la aplicación clínica. Se explica el fundamento, materiales, procedimiento y lectura de la prueba de VDRL, así como su importancia en el diagnóstico de sífilis.

    Título original

    FLOCULACIÓN-SÍFILIS (1)

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    Este documento describe una práctica de laboratorio sobre reacciones de floculación, con un enfoque en la prueba de VDRL para el diagnóstico de sífilis. Los objetivos son brindar conceptos sobre la floculación, diferenciar lecturas positivas vs negativas, y aprender la aplicación clínica. Se explica el fundamento, materiales, procedimiento y lectura de la prueba de VDRL, así como su importancia en el diagnóstico de sífilis.

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    Floculación Sífilis

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    Este documento describe una práctica de laboratorio sobre reacciones de floculación, con un enfoque en la prueba de VDRL para el diagnóstico de sífilis. Los objetivos son brindar conceptos sobre la floculación, diferenciar lecturas positivas vs negativas, y aprender la aplicación clínica. Se explica el fundamento, materiales, procedimiento y lectura de la prueba de VDRL, así como su importancia en el diagnóstico de sífilis.

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    UNIVERSIDAD COLEGIO MAYOR DE CUNDINAMARCA

    FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD


    INMUNOLOGÍA GENERAL- LABORATORIO
    PRÁCTICA N°4
    REACCIONES DE FLOCULACIÓN

    1. OBJETIVO GENERAL
    Brindar al estudiante conceptos claros acerca del fundamento e importancia clínica de esta
    reacción in Vitro en la que interacciona el Antígeno (VDRL) con el anticuerpo (reaginas)
    presentes en las muestras biológicas del paciente (Suero y LCR).

    2. OBJETIVOS ESPECIFICOS
     Establecer diferencias del fundamento y manejo de técnicas de floculación con la
    aglutinación.
     Diferenciar la lectura de una reacción positiva de una negativa para informar el título
    definitivo en la muestra del paciente.
     Aprender la aplicación clínica de esta técnica.

    3. GLOSARIO
     FLOCULACIÓN
    Mecanismo que sirve para evidenciar la reacción antígeno-anticuerpo in vitro, es considerada
    como interacción secundaria porque no necesita ningún reactivo o sustancia biológica adicional
    para hacer visible la reacción, su lectura se realiza microscópicamente.

     PRUEBAS NO TREPONÉMICAS
    Usadas como tamizaje, evalúan la eficacia del tratamiento. Tienen baja sensibilidad en sífilis
    primaria temprana.
    Incluyen: VDRL (Venereal Disease Research Laboratory, RPR (Rapid plasma reagin), USR
    (Unheated-serum reagin) y TRUST (Toluidine red unheated-serum test).
    El antígeno utilizado es una solución alcohólica, con cardiolipina, colesterol y lecitina.

     PRUEBAS TREPONEMICAS
    Fueron desarrolladas utilizando la cepa de Nichols de Treponema pallidum y usando células o
    Ag derivados de esta treponema, detectan anticuerpos específicos anti treponémicos clase IgG
    o IgM y permanecen de por vida, aún con terapia exitosa

    MARTHA PATRICIA ISAZA CORTES


    Utilizadas cuando las pruebas no-treponémicas son reactivas o como pruebas confirmatorias
    cuando el cuadro clínico es sugestivo, pero la serología es no reactiva, como ocurre en la sífilis
    tardía.

     SÍFILIS
    Enfermedad de transmisión sexual (ETS), producida por la espiroqueta Treponema pallidum.

    4. ENLACES RECOMENDADOS
    https://www.youtube.com/watch?v=w6WhPrdQep8
    https://www.youtube.com/watch?v=rwAC6IyeURc
    http://www.authorstream.com/Presentation/Moon09-876803-s-filis/

    5. MARCO TEÓRICO
    La sífilis es una enfermedad de transmisión sexual (ETS), producida por la bacteria
    Treponema Pallidum, se desarrolla en diferentes etapas, cada una con síntomas o
    signos característicos.
    La sífilis es contagiosa en las etapas primaria, secundaria y algunas veces en la latencia
    temprana.

    Sífilis primaria
    Inicia con la presencia de una pequeña llaga única o múltiples conocida como chancro, se
    presenta alrededor de tres semanas después de la exposición con la bacteria y
    generalmente sana por sí solo al cabo de tres a seis semanas.

    Sífilis secundaria
    Inicia al curar el chancro, se caracteriza por la presencia de erupciones que
    comienzan en el tronco, palmas de las manos y plantas de los pies, acompañada de
    úlceras similares a verrugas en boca y/o área genital, se puede observar pérdida de
    cabello y cejas, dolor muscular, de garganta, fiebre e inflamación de los ganglios
    linfáticos, estos signos y síntomas pueden desaparecer en pocas semanas o
    aparecer y desaparecer durante el transcurso del año.

    Sífilis latente
    Etapa oculta, porque no se observan signos ni síntomas, puede durar años.

    Sífilis terciaria o tardía


    Sin tratamiento (15-30% de pacientes) pueden sufrir complicaciones en el cerebro, sistema
    nervioso (neurosífilis), corazón, hígado (sífilis gomosa), huesos y articulaciones.

    Sífilis congénita
    Mujeres embarazadas pueden infectar al bebé a través de la placenta o durante el parto.
    Algunos recién nacidos con sífilis congénita precoz presentan erupciones en palmas de
    manos y plantas de los pies, nariz en silla de montar, paladar hendido y labio leporino.

    MARTHA PATRICIA ISAZA CORTES


    Y algunos presentan signos y síntomas posteriores al nacimiento (sífilis congénita tardía)
    como sordera, dientes de Hutchinson y huesos en sable, en algunas ocasiones los bebés
    pueden nacer prematuramente, nacer muertos o morir después del nacimiento.

    TREPPONEMA PALLIDUM SÍFILIS PRIMARIA

    https://www.telemundopr.com/destacados/fotos-sifilis-enfermedad-de-transmision-sexual/1943431/
    http://dermatoscopia.camfic.cat/2020/02/03/ulcera-en-la-boca/

    SÍFILIS SECUNDARIA

    Clinica.Enfermedades. Venéreas. Guatemala/photos/d41d8cd9/1710654995843630

    SÍFILIS TERCIARIA: SÍFILIS GOMOSA

    https://www.merckmanuals.com/es-us/professional/multimedia/image/v37930598_es

    MARTHA PATRICIA ISAZA CORTES


    SÍFILIS CONGÉNITA PRECOZ SÍFILIS CONGÉNITA TARDÍA: dientes de Hutchinson

    http://www.siicsalud.com/des/expertoimpreso.php/111242
    https://www.facebook.com/730654067064418/photos/la-s%C3%ADfilis-cong%C3%A9nita-puede-producir-los-
    denominados-dientes-de-hutchinson-que-so/1356726187790533/

    Para el diagnóstico de la sífilis, se cuenta con los siguientes grupos de pruebas:


     Examen directo mediante microscopía: campo oscuro y fluorescencia directa.
     Serología: pruebas no treponémicas: VDRL y RPR (Rapid plasma reagin).
     Pruebas treponémicas: FTA-ABS (Fluorescent treponemal antibody absorption), MHA-
    TP (Micro hemaglutinación para Treponema pallidum).
     Pruebas confirmatorias: Western blot con suero y PCR con muestras sanguíneas,
    exudados y tejidos.

    La prueba de VDRL (Venérea Disease Research Laboratories), determina la presencia de


    anticuerpos conocidos como reaginas (Mezcla de anticuerpos IgM e IgA dirigidos contra
    algunos antígenos distribuidos en tejidos normales), son heterófilos (anticuerpos no
    específicos contra el treponema), reaccionan con antígenos lipídicos presentes en personas
    infectadas, con la capacidad de flocular frente al antígeno constituido por cardiolipina,
    lecitina y colesterol (Utilizado desde 1946). Estos anticuerpos se encuentran en el suero de
    personas que presentan entidades clínicas como sífilis, paludismo, TBC, enfermedades del
    colágeno y además en sujetos normales, en condiciones de embarazo y en pacientes de
    edad avanzada o recientemente vacunados.
    La prueba de VDRL, utiliza suero o LCR, mezclado con el antígeno en una lámina y se observa
    al microscopio como un precipitado de partículas finas (floculación).
    Los resultados de VDRL en lámina se informan como:
    No reactivos: no hay presencia de flóculos.
    Débilmente reactivos: escasa o ligera floculación.
    Reactivos: floculación definitiva.
    Con los sueros reactivos se preparan diluciones consecutivas base dos y se realiza la prueba,
    informando el título máximo obtenido.

    MARTHA PATRICIA ISAZA CORTES


    Falsos negativos: fenómeno de pro zona, bajo título de anticuerpos, presencia de sustancias
    inhibidoras en el suero del paciente, VIH, temperatura ambiental fuera del rango de 23-29°
    C o error técnico.
    Falsos positivos: 10 a 30% reportados en casos de síndrome de anticuerpos anti fosfolípidos,
    lupus eritematoso sistémico (LES), fiebre reumática, neumonía viral, neumonía
    neumocócica, mononucleosis infecciosa, hepatitis infecciosa, lepra, malaria, artritis
    reumatoide, embarazo, ancianos, y muestras hemolisadas o contaminadas.

    FIGURA: http://sisbib.unmsm.edu.pe/BVRevistas/dermatologia/v10_sup1/pruebas_lab.htm

    Criterio para el diagnóstico de sífilis


    Prueba % sensibilidad % especificidad
    Primaria Secundaria Latente Tardía No sífilis
    No treponémicas

    VDRL 78(74-87) 100 95(88-100) 98(96-99)


    71(37-94)
    RPR 86(77-100) 100 98(95-100) 98(93-99)
    73
    USR 80(72-88) 100 95(88-100) 99
    TRUST 85(77-86) 100 98(95-100) 99(98-99)
    Treponémicas

    FTA-ABS 84(70-100) 100 100 96 97(94-100)

    5.1 MATERIALES
     Agitador de velocidad variable, graduado a 180 RPM,
     Microscopio óptico
     Pipetas de 5 -50 ul y puntas amarillas
     Láminas con anillo de cerámica o parafina de 14 mm
     Placa dilutora o tubos de ensayo

    5.2 REACTIVOS
     Antígeno de V.D.R.L: solución alcohólica incolora la cual contiene 0,03% ml de
    cardiolipina, 9% de colesterol y cantidad suficiente de lecitina purificada
     Solución Salina 0.9%
     Control positivo
     Control negativo

    5.3 PROCEDIMIENTO
     Ambientar los reactivos.
     En cada pozo colocar 25 ul de antígeno previa agitación de este, más 25 ul de control
    positivo, control negativo y suero del paciente
     Agitar por 8 min. 180 RPM
     Leer en microscopio óptico, observar la presencia de floculos.

    MARTHA PATRICIA ISAZA CORTES


    http://www.pac.com.ve/images/avisos/FOTOS/0000002261/FOTO_7.PNG

    https://microbiologyinfo.com/wp-content/uploads/2017/01/Rapid-Plasma-Reagin-RPR-Test-for-the-diagnosis-of-Syphilis.jpg

    Lectura al microscopio e interpretación


     GRUMOS GRANDES Y MEDIANOS REACTIVO
     NO GRUMOS NO REACTIVO
    Ocasionalmente puede presentarse el fenómeno de pro zona

    5.3.1 PRUEBA DE VDRL CUANTITATIVA.


    Se realiza a todos los sueros que en la prueba cualitativa hayan sido reactivos
    Preparar las diluciones seriadas base dos con solución salina 0.9%
     Las diluciones usuales son: 1/2, 1/4, 1/8, 1/16 y 1/32
     Colocar en cada pozo correspondiente 25 ul de cada dilución
     Agregar 25 ul del antígeno VDRL a cada pozo
     Agitar por 8 min. 180 RPM
     Leer en microscopio óptico, observar la presencia de flóculos e informar la última
    dilución en la que se observa floculación.

    5.4 HEMAGLUTINACIÓN
    Utiliza suero y LCR, los anticuerpos presentes, reaccionan con glóbulos rojos de pollo o
    carnero sensibilizados con Treponema pallidum, como fase sólida, prueba semicuantitativa,
    se realiza con diluciones seriadas de la muestra, con alta especificidad, comparada con FTA-
    ABS, pero su sensibilidad es menor en sífilis temprana, latente y tratada.

    MARTHA PATRICIA ISAZA CORTES


    FIGURA: http://slideplayer.es/slide/8712121/

    6. AUTOEVALUACIÓN

    Logros objetivos Fortalezas Debilidades Sugerencia de mejoramiento


    cumplidos a cada debilidad

    7. REFERNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
    HARRISON PRINCIPIOS DE MEDICINA INTERNA; Fauci, Braunwald, Kasper, Hauser, Longo,
    Jameson, Loscalzo; Editorial McGraw Hill; 17ª Edición 2009; Sección 7: Enfermedades
    infecciosas, Capítulo 162: Sífilis; Páginas: 1038-1045. BIBLIOGRAFÍA
    https://www.mayoclinic.org/es-es/diseases-conditions/syphilis/symptoms-causes/syc-
    20351756
    http://dermatoscopia.camfic.cat/2020/02/03/ulcera-en-la-boca/
    Pinilla,G.,et al.(2018)Detección de Treponemma pallidum subespecie pallidum para el
    diagnóstico se sífilis congénita, mediante la reacción PCR anidada.v.38,n.1,pp.128-
    135.Bogotá:Biomédica.

    ELABORADO POR:
    MARTHA PATRICIA ISAZA CORTES

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