Informe Final de Bio

SEPARACIÓN DE AMINOÁCIDOS POR CROMATOGRAFÍA
Andrea carolina Martínez abab, Ingris García ramos, Haviesli villalba Alvares,
Santiago santana.
RESUMEN
La cromatografía es una técnica de análisis químico cuyo objetivo es la separación de

sustancias puras en mezclas complejas. En la cromatografía de papel una muestra
liquida (fase móvil) fluye por una línea vertical de papel (fase estacionaria). En esta
práctica se utilizó la treonina, valina y lisina como muestras de referencia, durante el
proceso se tomó un trozo de papel cromatográfico donde se trazó una línea horizontal
y se marcaron los puntos para luego sembrar las muestras, seguido de esto en un
beaker se agregaron aproximadamente 2,0 ml de fase móvil (que no llegara a la línea
antes trazada) y se introdujo el papel, luego esta se selló en la cámara cromatográfica.
Cuando el frente del solvente alcanzó la distancia total de su recorrido, se retiró el
papel cromatográfico y se llevó a la estufa para secar el solvente y así proceder a
realizar la respectiva revelación con la ninhidrina y volverse a someter a calor para
poder revelar las manchas respectivas para la identificación de cada aminoácido. El
parámetro experimental asociado a la técnica es el Rf (coeficiente de reparto)
INTRODUCCIÓN.
Los aminoácidos son unidades o monómeros a partir de las cuales se constituyen

cadenas polipeptídicas de proteínas, existen alrededor de 300 aminoácidos hallados,
pero solo 20 de ellos se encuentran con mayor frecuencia en las proteínas, de los
cuales algunos pueden ser sintetizados de manera natural por el organismo y otros no.
En esta práctica se lleva a cabo la separación de aminoácidos mediante la aplicación
del método de cromatografía de papel, analizados por medio del cálculo de los
respectivos RF. La cromatografía en papel es un tipo de cromatografía de reparto, en
donde los componentes de una mezcla se separan en base a una distribución
diferente entre la fase móvil y la fase estacionaria. La cromatografía es un método de
análisis que permite separar, aislar e identificar componentes estrechamente
relacionados presentes en mezclas complejos. Existen diferentes tipos de
cromatografía en los cuales se utilizan una fase móvil y una estacionaria. De acuerdo
a los tipos de fase estacionaria y móvil, estos pueden ser en papel, en capa fina, gas,
liquido, en gel y de afinidad. El presente artículo pretende interpretar un cromatograma
de una corrida cromatografía en papel y calcular su RF para identificar una muestra
determinada.
METODOLOGÍA
Para realizar la práctica se cortó un papel con aproximadamente 15 x 15 cm. Luego,

se trazó con lápiz una línea a lo largo de una de las extremidades a 2,5 cm del borde.
Se marcaron cuatro puntos distintos con distancias adecuadas a lo largo de la línea,
se aplicó metionina (p1), valina (p2), lisina (p3) y el punto de muestra (p4) de 0,5 cm
de diámetro usando tubos capilares. Se grapó el papel en forma circular y se introdujo
el papel en la cámara cromatográfica cuidando que la línea marcada no tocara el
solvente. Se selló la cámara cromatografía y dejó que el solvente actuara por
aproximadamente 30 min hasta que alcanzó 1cm sobre la parte superior del papel. A
continuación, se retiró el cilindro de papel y se marcó con lápiz la altura que alcanzo el
solvente, se llevó a secar a la estufa, finalmente se adicionó ninhidrina al 0,1 en
acetona y se dejó secar. En el grupo de trabajo se tomaron anotaciones al respecto.
RESULTADOS
A continuación se ilustran los resultados obtenidos en la práctica:
1.
Figura 1: En la imagen se observan las distintas muestras que se utilizaron en la

práctica p1, p2, p3, p4.
2.
Figura 2: trazo de la línea horizontal y dibujo de los puntos para las muestras.
3.
Figura 3: se aprecia como el solvente (fase móvil), asciende por capilaridad a través
del papel cromatográfico (fase estacionaria).
.4.
Figura 4: Resultado final de la cromatografía de papel.
Las medidas obtenidas fueron las siguientes:
Tabla 1: resultados del laboratorio
Sustancia Distancia recorrida por la muestra

P1 metionina 1,3 cm
P2 Valina 2,8 cm
P3 Lisina 1 cm
P4.1 Muestra 1 1,4 cm
P4.2 Muestra 2 2,6 cm
Distancia recorrida por el solvente: 5,2 cm
Aplicando la fórmula del factor retención:
Se procede a calcular los Rf de cada patrón y de la muestra para así determinar

cuales son los aminoácidos presentes en nuestra muestra.
Distancia recorrida por la muestra

R F=
distancia recorrida por el solvente
1,3 cm
 R FP 1= =0,25 cm
5,2 cm
2,8 cm
 R FP 2= =0,538 cm
5,2cm
1 cm
 R FP 3= =0,192 cm
5,2 cm
Rf de los puntos de la muestra:
1,4 cm
 R Fp 4.1= =0,269 cm
5,2 cm
2,6 cm
 R FP 4.2= =0,5 cm
5,2 cm
Palabras clave: cromatografía, solvente, aminoácidos, ninhidrina, coeficiente de

reparto.
DISCUSIÓN
Teniendo en cuenta los resultados del recorrido frontal de los patrones y de la

muestra, se puede decir que en dicha mezcla de aminoácidos se encuentran
presentes solamente 2 de los tres patrones que se utilizaron en la práctica de
cromatografía; esto lo logramos afirmar dado que los resultados de la muestra
coindicen con el patrón de la metionina y la valina y para asegurar de forma
precisa que estamos en lo cierto se realizó la diferencias con el Rf y los valores
más aproximados de la muestra coincidieron con el treonina y la lisina.
Comparando los valores conocidos de los patrones con los valores obtenidos
de los aminoácidos de la sustancia problema podemos que la lisina tuvo la
distancia recorrida más baja de todas, seguida de la treonina que la distancia
fue baja aunque un poco más que la lisina y por último la valina fue la que más
recorrió en distancia. Esto se debe a que podemos comparar la polaridad de los
aminoácidos, observando la distancia recorrida por cada uno de ellos en el
cronograma. A mayor polaridad menos distancia recorrerá como es el caso de
la lisina y treonina, y viceversa, una mayor distancia recorrida indicara menor
polaridad, por tener afinidad, por la fase móvil como es el caso de la valina.
CONCLUSIONES
La cromatografía en papel es una técnica que mediante la ayuda de un solvente

permite separar diferentes sustancias en este caso aminoácidos gracias a su
diferencia en los factores de retención.
Este método es muy efectivo, ya que permite observar de una manera fácil los
aminoácidos presentes en la muestra.
Llevada a cabo esta práctica se pudo comprender que la cromatografía en papel, es

una técnica de separación muy versátil; a sapiencia de que el flujo de la fase móvil es
producido por capilares. Además de ello presenta características tales como: es
sencilla, rápida y principalmente no requiere el uso de aparatos complicados.
Para realizar una mejor cromatografía en papel de aminoácidos, se sugiere utilizar

fases móviles polares y corridas bidimensionales para que la separación sea eficiente.
BIBLIOGRAFÍA
Abbott, D. y Andrew, R.S. 1977. Introducción a la cromatografía. (3ra. ed.). Madrid,

España: Editorial Alhambra, S. A. pp.49.
LAITINEN, HERBERT Y HARRIS, WALTER. Análisis químico 1ra edición. México:

editorial reverte S. A.
MERCK Y DARMSTADT. Información sobre cromatografía en capa fina 1. Alemania.
Rodrigues-Sotres, Rogelio. La estructura de las proteínas.

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SEPARACIÓN DE AMINOÁCIDOS POR CROMATOGRAFÍA

La cromatografía es una técnica de análisis químico cuyo objetivo es la separación de

Los aminoácidos son unidades o monómeros a partir de las cuales se constituyen

Para realizar la práctica se cortó un papel con aproximadamente 15 x 15 cm. Luego,

A continuación se ilustran los resultados obtenidos en la práctica:

Figura 1: En la imagen se observan las distintas muestras que se utilizaron en la

Figura 4: Resultado final de la cromatografía de papel.

Las medidas obtenidas fueron las siguientes:

Tabla 1: resultados del laboratorio

Sustancia Distancia recorrida por la muestra

Aplicando la fórmula del factor retención:

Se procede a calcular los Rf de cada patrón y de la muestra para así determinar

Distancia recorrida por la muestra

Palabras clave: cromatografía, solvente, aminoácidos, ninhidrina, coeficiente de

Teniendo en cuenta los resultados del recorrido frontal de los patrones y de la

La cromatografía en papel es una técnica que mediante la ayuda de un solvente

Llevada a cabo esta práctica se pudo comprender que la cromatografía en papel, es

Para realizar una mejor cromatografía en papel de aminoácidos, se sugiere utilizar

Abbott, D. y Andrew, R.S. 1977. Introducción a la cromatografía. (3ra. ed.). Madrid,

LAITINEN, HERBERT Y HARRIS, WALTER. Análisis químico 1ra edición. México:

MERCK Y DARMSTADT. Información sobre cromatografía en capa fina 1. Alemania.

Rodrigues-Sotres, Rogelio. La estructura de las proteínas.

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