“AÑO DE LA UNIDAD, LA PAZ Y EL DESARROLLO”

UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA

Faculta de Ciencias de la Salud

Escuela de Enfermería
PRACTICA N°3
CURSO: Bioquímica
TEMA: Métodos cromatográficos y de separación en la
determinación de aminoácidos y proteínas
DOCENTE: Belinda Elvira Samante Talledo
ESTUDIANTE: Herrera Rosas Karol Leonardo

CICLO II
 INTRODUCCIÓN
Para comprender los métodos cromatográficos es fundamental
empezar con una definición y de donde vino, fue dada por el
botánico ruso Mikhael Semenovich Tswett (1872-1919) quien
estableció las ventajas de esta técnica, puso la terminología y
definió los procesos experimentales en 1906. Ni bien estableció
esos datos se le consideró como el PADRE DE LA
CROMATOGRAFÍA.
Es un método muy utilizado por los químicos en su investigación,
debido a su versatilidad y facilidad para separar, identificar y
cuantificar diferentes sustancias químicas.
Es un proceso en el que los componentes de una mezcla se
separan al moverse a diferentes velocidades en una fase
estacionaria, mientras que la fase móvil los lleva. La elección
adecuada de las fases permite una separación efectiva de los
solutos y su identificación según su velocidad de avance.
Los componentes disueltos en una mezcla se mueven entre las
fases en constante asociación con la fase estacionaria, mientras
migran a la misma velocidad que la fase móvil. La separación
ocurre cuando uno de los componentes tiene una velocidad
diferente en la fase estacionaria. El tiempo que toma que un
componente pase por la fase estacionaria depende de su afinidad
por ella en las condiciones dadas.
 I. OBJETIVOS
 Conocer los tipos de métodos que nos ayudan para la determinación de
las proteínas.

 Conocer los colores de las proteínas y de los aminoácidos después de a

ver aplicado los métodos cromatográficos.

II. MARCO TEÓRICO

2.1 CROMATOGRÁFIA
La cromatografía a diferencia de otros métodos de separación, utiliza dos
fases, una estacionaria y otra móvil puede ser un gas, líquido o un fluido. La
muestra se introduce en la fase móvil y viaja a través de una columna que
contiene la fase estacionaria. Con las fases adecuadas, los componentes de la
muestra se separan en bandas en la fase móvil. Al final del proceso, los
componentes separados emergen en orden de interacción con la
fase estacionaria. Ejemplo, EL PAPEL (es la fase estacionara) y EL
DISOLVENTE (es la fase móvil).
Para cumplir la separación se debe a la influencia de dos efectos
contrapuestos:
 -Retención: Es el impacto que tiene sobre los elementos de una mezcla
una fase que está quieta, ya sea un sólido o un líquido que está unido a
un soporte sólido.
 -Desplazamiento: Es el efecto causado en los componentes de una
mezcla por una fase que se mueve, ya sea un líquido, un gas o un
fluido supercrítico.
Partes del sistema de cromatográficas:
 Fase fija: Puede ser sólido o líquida, se distribuye como una capa fina y
homogénea sobre un soporte plano de material inerte. Los métodos que
utilizan esta forma se denominan cromatografías en capa fina.
 Fase móvil: La primera categorización importante de los métodos
cromatográficos está determinada por el tipo de fase móvil utilizada,
donde es posible elegir entre varios tipos de líquidos. Tradicionalmente,
los líquidos fueron los primeros en ser utilizados, lo que condujo al
desarrollo de una amplia variedad de métodos conocidos como
cromatografía líquida
2.2 CLASIFICACIÓN DE LOS MÉTODOS CROMATOGRÁFICOS:
La fase móvil puede ser un gas o un líquido, mientras que la fase estacionaria sólo puede ser un
líquido o un sólido dando lugar a la cromatografía de gases y a la cromatografía líquida.

En la Cromatografía de gases el más importante es la Cromatografía de GAS-LÍQUIDO (GLC).

CROMATOGRAFÍA
DE GASES

Cromatografía de gases
PUEDES SABER MAS INGRESANDO AL LINK:
https://www.youtube.com/watch?app=desktop&v=atTT5Rztnog

CROMATOGRAFÍA
DE LÍQUIDOS

Cromatografía de líquidos
PUEDES SABER MAS INGRESANDO AL LINK:
https://www.youtube.com/watch?app=desktop&v=woJp1-jdL5M
2.3 PRECIPITACIÓN ISOELECTRÍCA:
La solubilidad de la mayoría de las proteínas es altamente dependiente del pH
del sistema. Casi todas las proteínas tienen un pH en el que su solubilidad es
mínima, conocido como su punto isoeléctrico, el cual es el pH en el que la
molécula no tiene carga eléctrica. Por ejemplo, la ovoalbúmina tiene un punto
isoeléctrico de pH 4.6 y la ureasa de pH 5. En estas condiciones, las proteínas
tienden a coalescer y precipitar debido a la falta de repulsión electrostática
entre moléculas vecinas.
Cuando el pH está por encima o por debajo del punto isoeléctrico, todas las
moléculas de proteínas tienen una carga eléctrica neta del mismo signo, lo que
provoca que se repelan mutuamente y se impida la formación de agregados
insolubles.
Dado que las diferentes proteínas tienen puntos isoeléctricos diferentes, a
menudo pueden ser separadas mediante precipitación isoeléctrica. Esto se
logra ajustando el pH de una mezcla de proteínas al punto isoeléctrico de uno
de sus componentes. La mayoría o la totalidad del componente precipitará,
mientras que las otras proteínas permanecerán en solución en su conformación
nativa y pueden ser disueltas en un medio con el pH y la concentración
de sal apropiados.
III. MÉTODOS
3.1 PRIMERA PARTE:
3.2 METODOS PRACTICOS EN LA DETERMINACIÓN DE PROTEINAS Y
AMINOÁCIDOS
3.2.1 Materiales
REACTIVOS
1. Fase móvil para cromatografía de papel (solvente): metano -H2O Piridina
(80-20-4).
2. Fase fija: papel de filtro o Whatman.
3. Solución de aminoácidos (muestra problema).
4. Patrones:
5. Solución de ninhidrina:
 2-arginina

Muestra problema

1-serina

3.2.2 Experimento y observaciones

1) Se le proporcionará una tira de papel Whatman N-1 de aproximadamente
15x25cm, evite manipularlo en la medida de lo posible y colóquelo sobre una
superficie limpia. Asegúrese de fijar un hilo en la parte superior del papel
Whatman.
2) Luego, utilizando un lápiz, dibuje una línea llamada línea de siembra a 1,5cm
del borde inferior del papel y marque el punto donde se depositará la solución
de aminoácidos o muestra problema. Asegúrese de incluir los patrones puros
de identidad ya conocidos (1-serina, 2-alanina) utilizando capilares.
MUESTRA MP 1S 2ª
NOTA: Para aplicar la muestra tocar el papel levemente con el tubo capilar
puesto verticalmente. Retire el tubo cuando la mancha haya alcanzada unos
3mm de diámetro. Una vez seca la mancha repetir la aplicación 2 veces más.
3) Coloque el papel en la cámara dejando que el borde inferior quede
sumergido 1 cm en el solvente, en posición rectal asegurando los hilos a los
lados de la cinta adherida. La línea de siembre no debe quedar sumergida en el
solvente.
 4) Una vez que la muestra halla corrido, sacar el papel.

5) Marcar el límite de migración de frente del solvente.

6) Secar los papeles en un horno.

7) Rociar una solución reveladora, Ninhidrina-colina-ácido acético glacial.

8) Calentar el papel en un horno a 100°C hasta que aparezcan las manchas.

M 1-S 2-A

9) Calcular el Rf de cada mancha, e identifique los aminoácidos.

distancia del punto de origen al centro de la mancha
Rf=
distancia del punto de origenal frente del solvente
 Rf: Factor de retención

D2=5

MUESTRA D1 Rf
SERINA 1 d1 1
Rf1= = =0.2
d2 5
ARGININA 4 d1 4
Rf1= = =0.8
d2 5

Al finalizar la corrida cromatográfica, la identidad de

los componentes de la muestra problema se
determina por comparación de la distancia
recorrida por cada uno de ellos con la distancia
recorrida por cada uno de los patrones.

III.2.3 INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

1) El Rf de una de las manchas de la muestra problema coincide con el Rf
(1-serina), lo que quiere decir que este aminoácido serina está presente
en nuestra muestra problema.
2) El Rf de una de las manchas de la muestra problema coincide con el Rf
(2-argnina), lo que quiere decir que este aminoácido arginina esta
presente en nuestra muestra problema.
3.3. SEGUNDA PARTE
3.3.1 Determinación del punto isoeléctrico de la caseína.
3.3.2 OBJETIVOS
 Determinación del punto isoeléctrico de la caseína.
3.3.3 MATERIALES
 9 tubos de ensayo
 Pipeta
 Reactivos
 Agua destilada
 Ácido acético 1N
 Caseína en acetato de sodio 0.1N
3.3.4 EXPERIMENTO Y OBSERVACIONES
Diseño experimental
PROCEDIMIENTO
 Marcar una serie de tubos del 1 al 9
 En el tubo 1, medir 3.2 ml de ácido acético 1N y 6.8 ml de agua
destilada
 Medir 5ml de agua destilada en cada uno de los otros 8 tubos
 Sacar 5ml de solución del tubo 1 y agregarlos al tubo 2, mezclar
 Observar el efecto en la solubilidad en cada tubo.
 Después de 30´ anotar el pH
 Agregar 1 gts, de fenolftaleína y mezclar
 Agregar Na (OH) al 10%, agitar hasta la aparición de un color
rosado y observar el efecto sobre la solubilidad.
PRIMERO

SEGUNDO
TERCERO

POR ÚLTIMO

EXPERIMENTO
a) En primer lugar, calculamos las concentraciones tanto de nuestro
ácido como de nuestra sal para cada uno de los tubos.
 TUBO 1
1N 100ml
X 3.2ml
 3.2
X(ácido)= (Ac. acetico) ± 6.8ml. agua destilada 10ml
100
Dado que cada tubo contiene 5 ml de solución, agregue 1 ml de acetato de
sodio. Ahora obtenga una nueva solución de 6 ml. Recuerda aquí el primer
tubo de ensayo contiene Ac en una concentración de 1,6 ml. Después del ácido
acético se han realizado todos los procedimientos anteriores.
1.6
6ml
1000
Xf 1000ml
1.6
Xf1= (Concentración de ácido final)
6
 TUBO 2
Como la repartición es a la mitad la concentración seguirá una
progresión geometría.
0.8
Xf2= (Concentración de ácido final)
6
 TUBO 3
0.4
Xf3= (Concentración de ácido final)
6
 TUBO 4
0.2
Xf4= (Concentración de ácido final)
6
 TUBO 5
0.1
Xf3= (Concentración de ácido final)
6
 TUBO 6
0.05
Xf3= (Concentración de ácido final)
6
 TUBO 7
0.025
Xf3= (Concentración de ácido final)
6
 TUBO 8
0.0125
Xf3= (Concentración de ácido final)
6
 TUBO 9
 0.00625
Xf3= (Concentración de ácido final)
6
b) Cálculo de la concentración de sal: Como la cantidad de Acetato
de Na es la misma en todos los tubos, la concentración será
también la misma.

0.1N 1000ml
X 1ml
0.1
X= 6ml
1000
Xf 1000ml
0.1
Xf =
6
Una vez que ya hemo calculado la concentración tanto de nuestra sal como del
ácido procedemos a calcular el valor del pH en cada uno de los tubos, con los
datos que hemos obtenido, mediante la fórmula:
pH= pKa + Log ¿ ¿
 Tubo 1
pH= 4.7 + Log¿ ¿ pH= 4.7 – 1.2 → pH= 3.5
 Tubo 2
pH= 4.7+ Log¿ ¿ pH= 4.7 – 0.9 → pH= 3.8
 Tubo 3
pH= 4.7 + Log¿ ¿ pH= 4.7 – 0.6 → pH= 4.1
 Tubo 4
pH= 4.7 + Log¿ ¿ pH= 4.7 – 0.3 → pH= 4.4
 Tubo 5
pH= 4.7 + Log¿ ¿ pH= 4.7 – 0 → pH= 4.7
 Tubo 6
pH= 4.7 + Log¿ ¿ pH= 4.7 + 0.3 → pH= 5.0
 Tubo 7
pH= 4.7 + Log¿ ¿ pH= 4.7 + 0.6 → pH= 5.3
 Tubo 8
pH= 4.7 + Log¿ ¿ pH= 4.7 + 0.9 → pH= 5.6
  Tubo 9
pH= 4.7 + Log¿ ¿ pH= 4.7 + 1.2 → pH= 5.9
OBSERVACIÓN DE RESULTADOS
Estas observaciones son siguiendo el procedimiento anteriormente descrito:
1. Hay una pequeña solubilidad los dos primeros tubos, estos están
nubosos; mientras que los últimos se muestran transparentes.
2. Algunos están transparentes, mientras que otros tienen una pequeña
opacidad. En el tubo 2 y 3 está el pH por su turbidez.
3. Todos están ácidos.
4. Luego alcanzamos los tubos, por lo que la turbidez desparece.
5. Se pone de color rosado.
6. En el tubo 2, a pH alcalino la caseína es totalmente soluble.
7. A medida que se avanza a echar la fenolftaleína se echa menos gotas
porque su pH es elevado.
8. La turbidez inicial se debe al pH, mientras que el color rosa lo da la
fenolftaleína.
Al encontrar el punto isoeléctrico, procedemos a echar Na (OH), posteriormente
medimos el pH con una gota del indicador Fenolftaleína. Si se tiñe de rojo nos
informará que es medio ácido, si resulta azul, entonces es básico. El resultado
fue color rojo.
Al calentarla, la caseína se constituye como una de las pocas proteínas que
sigue soluble a 100°C.
Ahora completamente la tabla resumen de la práctica:
N° de tubos 1 2 3 4 5 6 7 8 9
pH de cada tubo 3.5 3.8 4.1 4.4 4.7 5.0 5.3 5.6 5.9
Enturbiamiento al NO NO NO SI SI NO NO NO NO
mezclar
Enturbiamiento o NO NO NO NO NO NO NO NO NO
precipitado a 30´
Solubilidad NO NO NO + o - SI NO NO NO NO
después de
calentar

 Cargas positivas neutralizan a las negativas y se demuestran en la

práctica porque se pone turbia la solución demostrando justamente que
PI es 4.7.
 Posteriormente se vuelve a retirar la proteína de su punto alcalinizando
Na (OH) y usando un indicador Fenoftaleína, la caseína se solubiliza
totalmente a pH que salen de su punto isoeléctrico.
  El aumento de la temperatura influye en la solubilidad de proteínas,
porque la temperatura aumenta el movimiento de las moléculas
entonces hace que pierda la capacidad de solubilizarse; cuando la
temperatura baja a 25°C la proteína de nueva se vuelve azul.
 Las proteínas se denaturalizan ya sea por efecto de la temperatura o pH
pero al final cuando se ponen bajo condiciones normales se
renaturalizan y vuelve a tener sus propiedades biológicas.

CUESTIONARIO

- ¿Qué entiende por cromatografía?

Por las siglas entendemos “chrom” (color) y “graphe” (escribir) es decir, escribir
colores.
Eso es si lo vemos con los términos, pero si lo vemos en general, es un método
de separación, pero es muy diferente pues este método utiliza dos fases
llamadas: Fase móvil y fase estacionaria.
Ambas son muy importantes en este método pues las distingue de los demás,
cada una cumple una función. La fase móvil es el DISOLVENTE que se va a
usar y la fase estacionaria es el papel filtro.
También nos ayuda mucho en la:
 Separación y purificación
 Sensibilidad y precisión
 Identificación
 Versatilidad

- Diga tres aplicaciones de la cromatografía en muestra

biológicas
La cromatografía es una técnica que permite separar, identificar y cuantificar los
componentes de una muestra compleja, como las de origen biológico. Algunas de las
aplicaciones de la cromatografía en muestras biológicas son:

 Separación y análisis de los pigmentos fotosintéticos presentes en las

plantas, como la clorofila y los carotenoides.
 Determinación de la presencia y la concentración de azúcares,
aminoácidos, ácidos orgánicos, vitaminas, antioxidantes y otros
metabolismos en alimentos y bebidas.
 Detección e identificación de drogas, toxinas, pesticidas, contaminantes
y otras sustancias nocivas.
 Diagnósticos de enfermedades metabólicas, genéticas o infecciones
mediante el análisis de biomarcadores.
 Medición en los niveles de hormonas, proteínas, enzimas, anticuerpo y
otras moléculas.
 Separación y caracterización de los componentes de la sangre.
 Estudio de la estructura y la función de los ácidos nucleicos (ADN y
ARN).
- Diga el fundamento de 2 tipos de cromatografía.
1) La cromatografía de interacción hidrofóbica (HIC) se utiliza ampliamente
en la purificación de proteínas terapéuticas y se basa en la interacción
de las proteínas con una matriz cromatográfica hidrofóbica. Esta
interacción se produce en presencia de sales de alta polaridad, como el
sulfato de amonio, que excluyen el agua tanto de la proteína como de la
superficie de la matriz, promoviendo así las interacciones hidrofóbicas y
la precipitación de la proteína. Estas interacciones son fundamentales en
diferentes procesos, como la estabilización de la estructura de las
proteínas y su unión a enzimas o sustratos.

2) La cromatografía de exclusión molecular es un método de separación de

biomoléculas basado en su tamaño cuando una solución fluye a través
de un medio poroso. Se utiliza la propiedad de tamiz molecular de
diferentes materiales porosos para separar las moléculas de acuerdo a
su tamaño. Las moléculas de alto peso molecular no pueden entrar en
los poros y pasan rápidamente a través de la matriz, mientras que las
moléculas más pequeñas tienen diferente accesibilidad a las cavidades
de la matriz porosa.
 - Diga dos importancias de la separación de proteínas desde el
punto de vista de la aplicación biológica.
1. Comprender la estructura y función de las proteínas: La separación de
proteínas es fundamental para estudiar y analizar la estructura y función de
cada proteína individualmente. La separación permite identificar la presencia de
diferentes proteínas en una mezcla y estudiar su composición, tamaño, peso
molecular y actividad biológica. Esto proporciona información valiosa para
comprender cómo las proteínas interactúan y cómo cumplen sus funciones
biológicas.

2. Diagnóstico y análisis de enfermedades: La separación de proteínas es

esencial en el diagnóstico y análisis de enfermedades ya que muchos
problemas de salud están relacionados con alteraciones en la cantidad,
distribución o actividad de ciertas proteínas en el cuerpo. La separación de
proteínas permite identificar marcadores específicos de enfermedades, evaluar
la respuesta del cuerpo a los tratamientos y monitorear la progresión de la
enfermedad. Esto facilita el diagnóstico temprano, la selección de terapias
adecuadas y el seguimiento del progreso de la enfermedad.
 - ¿Qué entiende por punto isoeléctrico de las proteínas?
El punto isoeléctrico de las proteínas es el pH en el cual la carga neta de la
molécula es igual a cero. En otras palabras, es el pH en el cual la proteína tiene
igual número de cargas positivas y negativas, lo que resulta en una carga neta
igual a cero.

Las proteínas tienden a ser menos solubles en agua y pueden precipitar. Esto
se debe a que las cargas opuestas se neutralizan entre sí y las interacciones
electrostáticas que estabilizan la solvatación de la proteína se ven afectadas.

Es importante en diversos procesos biológicos, como la separación y

purificación de proteínas mediante técnicas de electroforesis y cromatografía.
También puede influir en las propiedades físicas y funcionales de las proteínas,
como su solubilidad, estabilidad y capacidad de interacción con
otras moléculas.

- ¿Qué entiende por coagulación, precipitación y

desnaturalización de proteínas?
La coagulación de proteínas se refiere al proceso en el cual las proteínas
cambian su estado natural y se vuelven más densas y más sólidas. Esto puede
ocurrir debido a la acción de factores externos, como el calor o la acidez, o
debido a la interacción con otras sustancias químicas. Es común en la cocina,
donde la cocción de alimentos con proteínas, como los huevos o la carne,
provoca cambios en su estructura y textura.

La precipitación de proteínas se refiere al proceso mediante el cual las

proteínas se separan de la solución en la que se encuentran disueltas y forman
un sedimento o precipitado. Esto ocurre cuando se agregan sustancias
químicas, como sales o solventes orgánicos, que provocan cambios en la
solubilidad de las proteínas. Se utiliza frecuentemente en técnicas de
purificación de proteínas, donde se busca separarlas de otras sustancias
presentes en una mezcla.

La desnaturalización de proteínas es el proceso por el cual las proteínas

pierden su estructura tridimensional nativa y se convierten en estructuras
desplegadas o desordenadas. Esto puede ocurrir debido a cambios en la
temperatura, pH, presión, solventes orgánicos o agentes químicos. Afecta
negativamente su función biológica y puede conducir a la pérdida de actividad
enzimática o estructura. La desnaturalización de proteínas se utiliza en varios
procesos bioquímicos, como la desnaturalización de enzimas para detener una
reacción o la desnaturalización de proteínas en análisis de laboratorio para
separar y estudiar sus componentes.

- Señalar 3 métodos de fraccionamiento de las proteínas y

fundamentar
1) Electroforesis: Es uno de los métodos más utilizados para el fraccionamiento
de las proteínas. Se basa en la migración de las proteínas en un campo
eléctrico a través de un medio, como un gel de poliacrilamida. Las proteínas se
separan de acuerdo a su carga eléctrica y su tamaño molecular, lo que permite
obtener una separación muy precisa y reproducible. Además, la electroforesis
puede combinarse con técnicas de tinción o detección específica de las
proteínas, lo que facilita su identificación.

3) Cromatografía: La cromatografía es una técnica ampliamente utilizada

para el fraccionamiento de proteínas. Hay diferentes tipos de
cromatografía, como la cromatografía de exclusión por tamaño, la
cromatografía de intercambio iónico y la cromatografía de afinidad. Estos
métodos se basan en la separación de las proteínas a través de su
interacción con una matriz estacionaria o una fase móvil con
propiedades específicas, como tamaño, carga o afinidad por ciertos
 ligandos. La cromatografía es una técnica versátil y puede utilizarse para
la purificación de proteínas, así como para su análisis cuantitativo y
cualitativo.

4) Ultra centrifugación: La ultra centrifugación es un método utilizado para

el fraccionamiento y la purificación de proteínas basado en la
sedimentación diferencial. Se basa en la aplicación de una fuerza
centrífuga muy alta a una muestra que contiene proteínas. Las proteínas
se sedimentan en función de su tamaño y densidad y pueden separarse
en diferentes fracciones. Este método es particularmente útil para el
fraccionamiento de proteínas de alto peso molecular o complejos
proteicos. La ultra centrifugación puede realizarse en diferentes tipos de
equipos, como el ultra centrífugo de gradiente de densidad o el ultra
centrífugo analítico, dependiendo de los objetivos
específicos del estudio.

- ¿Cómo se clasifica las proteínas?

Las proteínas se pueden clasificar de diferentes maneras, dependiendo de los
criterios utilizados. Algunas de las formas más comunes de clasificar las
proteínas son:

1. Clasificación por estructura: Las proteínas se pueden clasificar en función de

su estructura primaria, secundaria, terciaria y cuaternaria. La estructura
primaria se refiere a la secuencia de aminoácidos en la proteína, la estructura
secundaria se refiere a las conformaciones espaciales locales de la cadena de
polipéptidos, la estructura terciaria se refiere a la conformación tridimensional
completa de la proteína y la estructura cuaternaria se refiere a la organización
de varias subunidades de proteínas.
2. Clasificación por función: Las proteínas pueden clasificarse según su función
en el organismo. Algunos ejemplos de proteínas funcionales incluyen enzimas,
transportadores, receptores, hormonas y anticuerpos.

3. Clasificación por solubilidad: Las proteínas se pueden clasificar en proteínas

solubles e insolubles. Las proteínas solubles son aquellas que se disuelven en
agua u otros solventes, mientras que las proteínas insolubles son las que no se
disuelven en agua.

4. Clasificación por origen: Las proteínas pueden clasificarse en proteínas

animales y proteínas vegetales, según su origen.

- Diga 8 funciones de las proteínas

1. Estructurales: las proteínas forman la base estructural de células, tejidos y
órganos, proporcionando soporte y rigidez a las estructuras biológicas.
2. Enzimáticas: muchas proteínas actúan como enzimas, que catalizan
reacciones químicas en el cuerpo, regulando el metabolismo y facilitando las
diversas funciones celulares.
3. Transporte: algunas proteínas se encargan de transportar moléculas y
nutrientes a través de las membranas celulares y en el torrente sanguíneo.
4. Contráctiles: las proteínas contráctiles, como la actina y la miosina, son
responsables de la contracción muscular, permitiendo el movimiento y la
locomoción.
5. Hormonales: ciertas proteínas, como las hormonas, actúan como
mensajeros químicos dentro del cuerpo, regulando diversas funciones y
procesos biológicos.
6. Defensa: las proteínas del sistema inmunológico, como los anticuerpos,
ayudan a defender al organismo contra infecciones y patógenos.
7. Almacenamiento: algunas proteínas se utilizan para almacenar nutrientes y
moléculas esenciales en el cuerpo, como el hierro en el caso de la ferritina.
8. Reguladoras: las proteínas pueden regular la expresión génica, actuar como
factores de transcripción y controlar la síntesis de otros compuestos
químicos en el cuerpo.
 - ¿En que se fundamenta la electroforesis?
La electroforesis se fundamenta en el principio de la migración de iones o
moléculas cargadas en un medio acuoso bajo la influencia de un campo
eléctrico.

En la electroforesis, se aplica un campo eléctrico a través de un gel (como gel

de agarosa o gel de poliacrilamida) que contiene una muestra de moléculas
cargadas. Las moléculas cargadas se mueven a través del gel debido a la
atracción o repulsión eléctrica generada por el campo eléctrico.

La velocidad de migración de una molécula en el gel depende de su carga,

tamaño, forma y propiedades del gel. Las moléculas más pequeñas y cargadas
se moverán más rápidamente hacia el electrodo de carga opuesta, mientras
que las moléculas más grandes y menos cargadas se moverán más
lentamente.

La electroforesis se utiliza ampliamente en la separación y análisis de

moléculas como ácidos nucleicos (ADN y ARN) y proteínas. Permite separar y
visualizar diferentes fragmentos de ADN o diferentes proteínas en función de su
tamaño y carga, lo que facilita el análisis de muestras y la identificación de
moléculas de interés.

- ¿En qué se fundamenta el método cromatográfico de exclusión?

El método cromatográfico de exclusión se fundamenta en la capacidad de
separación de los componentes de una muestra en función de su tamaño y
forma molecular.
En este método, se utiliza una columna de cromatografía que contiene un
material poroso, como gel de agarosa o gel de poliacrilamida. Este material
poroso tiene una estructura en forma de red tridimensional, con poros de
diferentes tamaños.

Cuando se aplica la muestra en la columna, los componentes de menor tamaño

y forma molecular pueden penetrar en los poros del material poroso, y por lo
tanto, se retienen en mayor medida en la columna. Por otro lado, los
componentes de mayor tamaño y forma molecular no pueden penetrar en los
poros y fluyen más rápidamente a través de la columna.

De esta manera, los componentes de la muestra se separan en función de su

tamaño y forma, permitiendo así su posterior identificación y cuantificación.

El método cromatográfico de exclusión es especialmente utilizado para separar

y analizar macromoléculas como proteínas, polisacáridos y ácidos nucleicos, ya
que su tamaño y forma juegan un papel crucial en su función biológica.

CONCLUSIONES
En conclusión, conocer los tipos de métodos que nos ayudan a determinar las
proteínas nos permite obtener resultados precisos y confiables en la
identificación de estas biomoléculas. La utilización de métodos cromatográficos
nos permite visualizar los diferentes colores de las proteínas y aminoácidos, lo
que a su vez nos brinda información sobre su estructura y composición. Estos
métodos son fundamentales para investigaciones científicas y aplicaciones en
campos como la biología, bioquímica y medicina, entre otros. El estudio de las
proteínas y aminoácidos a través de métodos cromatográficos es esencial para
comprender su función y su implicación en enfermedades y procesos
fisiológicos, contar con el conocimiento de estos métodos y sus resultados nos
proporciona una herramienta invaluable para el análisis y estudio
de las proteínas.
 BIBLIOGRAFÍAS
- Corzo, Adriana Técnicas de análisis en Química Orgánica : cromatografía :
Cátedra de Química orgánica y Biológica / Adriana Corzo. - 1a ed . - Santiago
del Estero : Universidad Nacional de Santiago del Estero - UNSE. Facultad de
Ciencias Forestales, 2019.
Libro digital, PDF

- de Los Solutos 2. 1. Clasificación DE Los Métodos Cromatográficos 2. 2.

Comportamiento Cromatográfico. TEMA 2. CROMATOGRAFÍA: PRINCIPIOS
GENERALES [Internet]. Rua.ua.es. [citado el 8 de octubre de 2023]. Disponible
en: https://rua.ua.es/dspace/bitstream/10045/8246/7/T2cromagraf.pdf
- de la cromatografía: EDC de C. TIPOS DE CROMATOGRAFÍA
[Internet]. Educa.co. [citado el 8 de octubre de 2023]. Disponible en:
https://blog.utp.edu.co/docenciaedwin/files/2014/09/TIPOS-CROMATOGRAF
%C3%8DA.pdf
- Mayolo-Deloisa K, Martínez LM, Rito-Palomares M. Técnicas cromatográficas
y su aplicación a estudios de cambios conformacionales, estabilidad y
replegamiento de proteínas. Rev Mex Ing Quim [Internet]. 2012 [citado el 8 de
octubre de 2023];11(3):415–29. Disponible en:
http://www.scielo.org.mx/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1665-
27382012000300006