“Año de la universalización de la salud”

UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA

FACULTAD DE INGENIERIA INDUSTRIAL
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERIA
AGROINDUSTRIAL E INDUSTRIAS
ALIMENTARIAS

Practica N°3:
Aislamiento de ADN de los seres vivos.
Docente:
Ing. Henry Robles Cueva.
Curso:

Biotecnología – Laboratorio

Ciclo:

VII.

Presentado por:

MADRID SANDOVAL, Cristina Elizabeth.

OLAECHEA JIMÉNEZ, Valeria Scarlet.

Fecha de entrega:
17 de septiembre del 2020

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Contenido

1. INTRODUCCIÓN.....................................................................................................3

2. OBJETIVOS..............................................................................................................5

3. MARCO TEÓRICO...................................................................................................5

3.1 AISLAMIENTO DEL ADN EN LOS SERES VIVOS.........................................5

3.2 FACTORES PARA LA EXTRACCION DEL ADN............................................5

3.3 PASOS INDISPENSABLES PARA LA EXTRACCION Y PURIFICACION

DEL ADN..........................................................................................................................6

3.4 EXTRACCIÓN Y PURIFICACIÓN DE ADN.....................................................8

3.5 PROTOCOLOS DE EXTRACCIÓN TRADICIONAL Y COMERCIAL.........10

3.5.1 PROTOCOLO TRADICIONAL......................................................................12

3.5.2 PROTOCOLO COMERCIAL..........................................................................13

3.5.3 VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE LOS PROTOCOLOS DE

EXTRACCIÓN TRADICIONALES Y COMERCIALES.............................................15

4. METODOLOGÍA....................................................................................................17

5. PROCEDIMIENTO.................................................................................................17

6. ANÁLISIS DE RESULTADOS..............................................................................18

7. CONCLUSIONES...................................................................................................21

8. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS.....................................................................21

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 1. INTRODUCCIÓN

¡Todos los seres vivos tenemos genes, las fresas también! Los genes son las unidades de
almacenamiento de la información genética, segmentos de ADN que contienen la
información sobre cómo deben funcionar las células del organismo. Los genes tienen
elementos que indican de dónde a dónde se ha de leer y su contenido determina la
composición de las proteínas que se han de formar.

Precisamente es en la cadena de ADN donde se encuentra todo el código genético de un

organismo. Por lo que las técnicas de secuenciación del ADN son esenciales para
obtener organismos con las características deseables que exprese su genotipo; por lo
cual es necesario identificar las etapas básicas de los protocolos de extracción de ADN,
realizar la extracción de ADN de células vegetales y animales mediante procedimiento
artesanal homologo al protocolo de extracción en laboratorio de biología molecular que
es más especializado así como ejemplo; pero fundamento de la técnica vienen a ser
prácticamente el mismo.

Las fresas son ideales para hacer este experimento por dos motivos: son la fruta con la
que se obtiene más cantidad de ADN y, además, son octoploides, es decir, tienen ocho
juegos idénticos de cromosomas (las células humanas son diploides, es decir, tienen dos
juegos de cromosomas a excepción de los gametos). Estas circunstancias hacen que el
ADN de la fresa sea fácil de extraer y de ver.

En cuanto a los componentes presentes en la solución de extracción: el jabón ayuda a

disolver las membranas celulares y se añade la sal para romper las cadenas de proteínas
que unen los ácidos nucleicos liberando las cadenas de ADN. Finalmente, se utiliza el
alcohol porque el ADN es insoluble y aún menos si este está frío.

El ADN será la sustancia blanquecina que observaremos en nuestra mezcla.

El ADN es un ácido desoxirribonucleico, es un compuesto orgánico que contiene la

información genética de un ser vivo, en virus, en las células procariotas y en el núcleo
de las células eucariotas.

Tiene como función principal almacenar información genética para la construcción de

proteínas y ARN que es imprescindible para cualquier función vital de un organismo.

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A continuación, veremos el procedimiento que debemos seguir para extracción de ADN
en una fresa y así poder apreciar el material genético de la fresa.

2. OBJETIVOS

 Conocer el procedimiento para la identificación del ADN.

 Realizar el aislamiento del ADN, con el proceso de extracción en la muestra

vegetal(fresa).

 Utilizar técnicas sencillas para la extracción del ADN.

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 3. MARCO TEÓRICO

3.1 AISLAMIENTO DEL ADN EN LOS SERES VIVOS

El ADN se encuentra en el núcleo de las células eucarióticas donde aparece unido a

proteínas formando la cromatina. Es la molécula portadora de la información genética,
donde se encuentra la clave de los caracteres hereditarios que se traspasan de la célula
madre a las células hijas y en definitiva de padres a hijos. Cada persona tiene su propia
información genética, heredada del padre y de la madre. Y, por tanto, el ADN de cada
persona es único y constituye sus señas moleculares de identidad. Sin embargo, la
estructura de la molécula del ADN es igual en todos los seres vivos y consta de una
doble cadena de nucleótidos de A (Adenina), T (Timina), C (Citosina) y G (Guanina)
enrollados en hélice. La estructura del ADN, llamada la doble hélice, fue descubierta
por Watson y Crick en 1953 y abrió el camino de la Genética Molecular.

El primer paso para desarrollar experimentos con marcadores moleculares es la

extracción del material genético de plantas que, por sus características fenotípicas,
poseen caracteres agronómicos de interés.

3.2 FACTORES PARA LA EXTRACCION DEL ADN

Para la extracción del ADN vegetal es necesario tener en cuenta tres factores:

1. El tipo de planta y de tejido que se va a emplear como fuente. Por ejemplo, los
tejidos jóvenes contienen más ADN que los tejidos viejos. Además, es necesario
considerar la composición bioquímica de los tejidos. Por ejemplo, el método de
extracción del material genético proveniente de tejidos ricos en compuestos fenólicos es
diferente al método empleado con tejidos ricos en carbohidratos o aceites.

2. El tipo de ADN que se va a extraer. Las plantas poseen tres tipos de ADN: el
nuclear, el mitocondrial y el cloroplástico. Reciben estos nombres dependiendo del tipo
de organelo celular en el que el ADN se encuentre. Los distintos tipos de ADN tienen
características bioquímicas semejantes. Sin embargo, el tipo de información biológica
que codifican es completamente diferente.

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3. El tipo de análisis a realizar (RFLP, RAPD, AFLP, secuenciación, etc). Con base
en la cantidad y la calidad del ADN se pueden desarrollar diversas técnicas de análisis,
algunas de las cuales serán explicadas con mayor detalle en próximos artículos.

El objetivo principal en un experimento de extracción de ADN es obtener una

preparación de buena calidad y en gran cantidad. La calidad se refiere a la posibilidad
de almacenar el ADN por tiempo indefinido, manteniendo su estructura y propiedades y
es la calidad del ADN el factor responsable de la reproducibilidad en experimentos
posteriores. La cantidad, por su parte, es un concepto relativo que depende, entre otros,
del número y estado de las células propias del tejido a estudiar. Por lo tanto, como regla
general, un buen método de extracción debe mantener la integridad física y bioquímica
del ADN e incrementar sus rangos de pureza y concentración (Sambrook et al. 2001).

3.3 PASOS INDISPENSABLES PARA LA EXTRACCION Y PURIFICACION

DEL ADN

En plantas existen múltiples protocolos para extraer y purificar el ADN. Sin embargo,
todos ellos incluyen cuatro pasos indispensables:

1. Ruptura de tejidos y paredes celulares. Este paso consiste en pulverizar el material

vegetal a bajas temperaturas, generalmente empleando nitrógeno líquido o hielo seco
(Rogers y Bendich 1988). También existe la pulverización en seco, un proceso en el
cual los tejidos se deshidratan por secado en un horno o con silicagel. Sin embargo, este
procedimiento no es de aplicación general y en palma de aceite, por ejemplo, el
tratamiento de secado no permite recuperar ADN de buena calidad. Para degradar
paredes celulares se pueden utilizar, además, enzimas tipo celulasas.

2. Ruptura de membranas. Una vez el tejido es disgregado en células, se hace

necesario romper las membranas celulares para liberar el ADN. Esto puede ser llevado a
cabo químicamente con detergentes (SDS, Triton o detergentes comerciales). También
se emplean métodos físicos, como aquellos basados en ultrasonido.

3. Inhibición de enzimas que destruyen al ADN. Como un mecanismo de defensa

natural, las células contienen enzimas que destruyen al ADN (ADNasas). Estas enzimas
deben ser inactivadas para garantizar la calidad de las preparaciones de ADN. La
inhibición puede realizarse mediante métodos físicos, tales como desnaturalización por
calor (a temperaturas de 65 C) o con métodos químicos.
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Estos últimos incluyen tratamiento con solventes orgánicos (fenol y cloroformo), con
antioxidantes (Ditiothreitol y β-mercaptoetanol), con agentes quelantes (EDTA, EGTA)
que capturan los iones magnesio necesarios para la funcionalidad de las ADNasas, o con
agentes caotrópicos que actúan removiendo el agua estructural de las proteínas (Rogers
y Bendich 1988). Por lo general se utilizan mezclas de varios de estos reactivos para
asegurar la inhibición de tales enzimas.

4. Extracción de contaminantes. El objetivo de extraer ADN es obtener preparaciones

enriquecidas en esta molécula. Sin embargo, el ADN está asociado con proteínas
(histonas) e inmerso en un medio que contiene estructuras de composición química
diversa. Además, los reactivos empleados en los procesos iniciales de purificación se
convierten en agentes contaminantes. Las metodologías para retirar los contaminantes
de una preparación de ADN incluyen: la centrifugación a altas velocidades, la
electroforesis, la separación a través de columnas e incluso la utilización de imanes
(biomagnética) para obtener preparaciones de alta pureza.

Todos los pasos anteriormente mencionados se basan en las características

fisicoquímicas del ADN. Pues aparte de ser una molécula de alto peso molecular, muy
larga y delicada, es un ácido capaz de formar sales con iones cargados positivamente
(cationes). Además, es soluble en soluciones concentradas de sales (sal de cocina, por
ejemplo), pero insoluble en alcoholes (tipo etanol o isopropanol). Adicionalmente, el
ADN es destruido (depurinado) a pH ácido (menor de 4,0), es insoluble a pH 5.6, pero
es soluble a pH 8,0. Por lo tanto, los procesos de extracción, purificación y
almacenamiento del ADN deben mantener el pH óptimo y brindar una alta
concentración iónica.

3.4 EXTRACCIÓN Y PURIFICACIÓN DE ADN

La extracción consiste en el aislamiento y purificación de moléculas de ADN y se basa

en las características fisicoquímicas de la molécula. El ADN está constituido por dos
cadenas de nucleótidos unidas entre sí formando una doble hélice. Los nucleótidos están
integrados por un azúcar (desoxirribosa), un grupo fosfato y una base nitrogenada
(adenina, guanina, timina o citosina). La unión de los nucleótidos ocurre entre el grupo
fosfato y el azúcar, mediante enlaces fosfodiéster, dando lugar al esqueleto de la
molécula. Las bases de cadenas opuestas se unen mediante puentes de hidrógeno y
mantienen estable la estructura helicoidal.

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A lo largo del tiempo se han diseñado distintos protocolos con la finalidad de obtener
una cantidad y calidad de ADN adecuados, así como garantizar la eliminación de
inhibidores potenciales que dificulten el tratamiento posterior de la molécula. Los
métodos tradicionales, desarrollados en los años 50, utilizan solventes orgánicos para
separar a las proteínas del ADN y, una vez suspendido en la fase acuosa, aislarlo por
precipitación con etanol. Estos métodos requieren preparar soluciones y la extracción
puede tomar desde unas horas hasta varios días por los numerosos pasos que deben
realizarse. En general, los protocolos tradicionales consisten de cinco etapas principales:
homogeneización del tejido, lisis celular, separación de proteínas y lípidos,
precipitación y redisolución del ADN.

Figura1. Etapas de la técnica.

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 La selección del método de extracción es un paso fundamental en las técnicas
moleculares y depende del organismo bajo estudio, el tejido disponible y su estado de
conservación, la técnica que se aplicará posteriormente, así como la infraestructura de
los laboratorios, los recursos económicos y tiempo para obtener resultados.
Independientemente del método seleccionado es recomendable encontrar un equilibrio
entre pureza y rendimiento de acuerdo a la aplicación posterior. Con la finalidad de que
el usuario conozca las diferentes opciones y elija la más apropiada, de acuerdo con sus
objetivos y recursos, en los siguientes párrafos se describen de manera general las
etapas de los protocolos tradicionales y comerciales, se explican los métodos de análisis
(concentración e integridad de la molécula) y almacenamiento del extracto.

3.5 PROTOCOLOS DE EXTRACCIÓN TRADICIONAL Y COMERCIAL.

Una colecta y manejo apropiado de la muestra permite obtener ADN integro y sin
contaminantes, los cuales afectan la acción de las enzimas durante la reacción de PCR.
Cada tejido tiene sus consideraciones propias y siempre será necesario conocerlas o
preguntar a los especialistas de cada grupo para llevar a cabo una colecta y extracción
exitosas.

Tabla 1. Recomendaciones sobre la colecta y manejo de algunos tejidos de plantas y

animales.

Organismo Colecta en campo / Almacenamiento de la muestra

Transporte de la muestra previo a la extracción

Plantas El tejido foliar, Almacenar el tejido a -80 °C,

Se recomienda colectar tejido joven evitar ciclos de congelación y
pues contiene más células por unidad de descongelación antes de proceder
peso, posee menos polisacáridos y con la extracción.
polifenoles que dificultan la extracción. Se recomienda congelar varios
Una vez colectado, paquetes pequeños de la misma
Debe congelarse inmediatamente en muestra con la cantidad de
nitrógeno líquido para evitar la material que será procesada.
formación de cristales

Animales Tejido Las muestras deben almacenarse

Cortar el tejido en pedazos pequeños de acuerdo con el método de

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 (aproximadamente .5x0.5 cm o colecta utilizado, en etanol a 4 °C
menores) para facilitar su maceración o si fue congelado con nitrógeno
posterior. El tejido se puede deshidratar líquido a -80 °C.
con etanol al 70 % (aunque esta opción
puede degradar el ADN o acarrear
contaminantes) o bien, congelarse con
nitrógeno líquido.
Para transportar la muestra es
recomendable utilizar un buffer
especializado que inactive las
endonucleasas.

Sangre
Utilizar agujas de calibre apropiado, Las muestras pueden mantenerse
respetar la relación muestra/ por unos días a 4 ºC después de su
anticoagulante y homogeneizar colecta. Si se congela la muestra a
correctamente la muestra para evitar la -20 °C, debe descongelarse a
hemólisis* y/o coagulación**, y la temperatura ambiente y
contaminación bacteriana. procesarse en su totalidad pues
Una vez obtenida la muestra es una vez descongelada, inicia la
importante evitar movimientos bruscos hemólisis, por ello es aconsejable
durante el transporte. hacer alícuotas.

HOMOGENEIZACIÓN DEL TEJIDO

La homogeneización, mecánica o química, consiste en romper las uniones entre las

células para facilitar la interacción con las soluciones de lisis que ayudan a liberar el
material genético.

a) La homogeneización mecánica incluye el uso de:

Nitrógeno líquido. _ Este procedimiento consiste en macerar la muestra con

nitrógeno líquido, en un mortero de porcelana, hasta obtener un polvo muy fino. El
nitrógeno líquido, congela de inmediato la muestra y evita que se formen cristales en
el interior de la célula que rompen la estructura celular e inicie el proceso de
degradación

Pistilos u homogeneizadores. _ El proceso se realiza manualmente, con pistilos

plásticos o con ayuda de dispositivos electrónicos, conocidos como
homogenizadores.

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 Es recomendable adicionar un poco del buffer de lisis antes de iniciar, estas
soluciones desnaturalizan a las proteínas y mantienen estable al ADN. Cuando se
utilizan dispositivos es necesario colocar el tubo sobre una cama de hielo, lo cual
evita que el ADN se fragmente por el calor que genera la fricción.

b) Homogeneización química

En la homogeneización mediante agentes químicos, la muestra se mantiene en

solución a altas temperaturas en presencia de detergentes, proteasas y agentes
caotrópicos que rompen las uniones entre las células o que incluso pueden perforar
la membrana celular. La disgregación química es recomendable para bacterias,
muestras pequeñas de tejidos frescos o sangre.

3.5.1 PROTOCOLO TRADICIONAL

Separación de proteínas y lípidos

En esta etapa se separa el ADN de las proteínas y lípidos mediante solventes orgánicos
y ciclos de centrifugación. Se utiliza la fuerte tendencia hidrofílica de los grupos fosfato
para separarlos en medios acuosos, mientras que las proteínas y los lípidos se separan en
solventes orgánicos (Sambrook etal. 1989). La fase acuosa y la orgánica se separan por
centrifugación lo que permite aislar al ADN. Los solventes que se usan frecuentemente
son el fenol, el cloroformo y el alcohol isoamílico (Stulnig y Amberger 1994). Estos
reactivos contaminan fácilmente el ADN, por lo que se debe evitar acarrearlos en el
proceso de purificación.

Precipitación del ADN

Después de que son eliminados los lípidos y las proteínas, se recupera el ADN. Para
ello, se adiciona etanol y soluciones con altas concentraciones de iones de sodio o
amonio que se unen a los grupos fosfato, esta mezcla reduce las fuerzas repulsivas entre
las cadenas y permite que el ADN se pliegue sobre sí mismo haciéndolo insoluble. Un
paso de centrifugación permite que el ADN permanezca en el fondo del tubo mientras
que el etanol es desechado. Los restos de etanol se eliminan con un lavado con etanol al
70% y el remanente se elimina por evaporación.

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 Redisolución del ADN

Una vez que se ha eliminado el etanol, el paso siguiente es hidratar el ADN para
mantenerlo en solución. En el caso de emplear agua, el pH debe ser de 7 para permitir la
redisolución completa del ADN y evitar una hidrólisis ácida. Cuando se utiliza una
solución amortiguadora, es preferible utilizar una solución de Tris-HCl a 10mM y
EDTA a 0.1M a un pH de 8.0 (low TE) para almacenar el material. Cuando se está
disolviendo el ADN es importante evitar el pipeteo y la agitación agresiva pues se
pueden fragmentar moléculas de alto peso molecular. Una opción que evita la
fragmentación consiste en incubar a 55 °C el ADN, 1 a 2 horas con agitación suave.

3.5.2 PROTOCOLO COMERCIAL

Unión del ADN a la matriz inorgánica y lavado

En el caso del kit con membrana de sílice, en algunos casos a la mezcla de lisis se le
añade la solución de unión que tiene un pH específico. Antes de pasar la solución de
lisis a través de la columna, se adiciona etanol a la solución, eliminando la capa
hidratante del ADN y exponiendo sus grupos fosfato, facilitando con ello la adsorción
de la molécula a la membrana cargada positivamente. Los lípidos y proteínas no son
afines a la membrana y se eliminan con ayuda de la solución de lavado y un ciclo de
centrifugación, mientras que el material genético permanece unido a la matriz.

Recuperación del ADN de la matriz

En los kits es necesario liberar al ADN de la matriz. La membrana y el ADN se

deshidratan con soluciones de lavado y ciclos de centrifugación, después se recomienda
centrifugar nuevamente la columna para evaporar el etanol y eliminar el exceso de las
soluciones. Posteriormente, se adiciona agua o solución amortiguadora al centro de la
membrana, se espera a que el ADN se hidrate, se centrifuga para recuperarlo de la
matriz y re suspenderlo.

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Figura 2. Etapas de la extracción del ADN. La homogeneización y lisis celular son
similares en ambos protocolos. Protocolo tradicional: separación de proteínas y lípidos
con solventes orgánicos (1A); precipitación del ADN mediante etanol y sales (1B) y
Redisolución del ADN (1C). 2. Protocolos comerciales (membrana de sílice y perlas
magnéticas): unión del ADN a la matriz inorgánica (2A); separación de proteínas y
lípidos mediante soluciones a pH básico (2B); recuperación del ADN de la matriz (2C).
Las flechas circulares indican ciclos de centrifugación.

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Es necesario saber que la mayoría de los kits tienden a ser generales a la hora de su
aplicación, pero se diseñan con un propósito específico. Por ejemplo, un kit para extraer
ADN de sangre total considera la presencia de hemoglobina y eritrocitos durante el
proceso. Este método será más agresivo en comparación con un kit diseñado para
extraer ADN de células o tejidos animales. En los manuales proporcionados por el
fabricante se detallan, además de los pasos a seguir en cada caso, la cantidad de muestra
recomendada y el rendimiento esperado de acuerdo al tipo de tejido (Invitrogen 2005).

3.5.3 VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE LOS PROTOCOLOS DE

EXTRACCIÓN TRADICIONALES Y COMERCIALES

La obtención de ADN integro y puro es una parte fundamental para el buen desempeño
de las técnicas utilizadas en biología molecular.

Una de las ventajas de utilizar métodos tradicionales es su bajo costo, así como un alto
rendimiento. Sin embargo, en ocasiones el material obtenido está fragmentado. Estos
métodos son susceptibles de contaminación, variación y errores por los múltiples pasos
de manipulación.

En los últimos años ha aumentado el uso de los de métodos de extracción comerciales

debido a que la matriz permite capturar selectivamente al ADN haciendo posible
obtener un extracto de alta pureza con moléculas íntegras; al tiempo que se reduce el
número de pasos en la extracción y se disminuye la posibilidad de contaminación con
ADN o ARN exógeno.

Independientemente del método de extracción que se utilice, lo importante es realizar

cada paso con cuidado para obtener ADN integro y puro que permita llevar a cabo las
técnicas posteriores.

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Tabla 2. Ventajas y desventajas de los métodos tradicionales y comerciales de
extracción y purificación de ADN.

Condición Métodos tradicionales Métodos comerciales

Material inicial Miligramos o gramos. De 50 a 250 mg como
máximo.
Uso de sustancias tóxicas En la mayoría de los Se evita utilizarlas
protocolos.
Tiempo de proceso Hasta varios días debido a Menor a 3 hrs.
los numerosos pasos a
desarrollar.
Integridad (considerando Se requiere experiencia Generalmente se obtienen
tejido en buen estado de para evitar que el ADN se moléculas de ADN de alto
conservación) fragmente. peso molecular
Rendimiento Varios microgramos, Varios nanogramos, pero
aunque puede incluir en su mayoría con
moléculas de ADN moléculas de ADN
fragmentadas. integras.
Inhibición enzimática Los reactivos utilizados Poco frecuente si se siguen
para la extracción los pasos y cantidades
fácilmente se acarrean con recomendadas por el
la muestra e interfieren fabricante.
con aplicaciones
posteriores.
Automatización Poco factible por los Altamente recomendable.
múltiples pasos y el uso de
solventes corrosivos.
Costo Bajo Alto

4. METODOLOGÍA

MATERIALES Y REACTIVOS

Materiales

- Fresa - Vidrio reloj

- Mortero - Balanza analítica
- Gorro desechable - Cuchara de metal
- Beaker - Frasco Schott

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 - Matraz - Tubo tapa rosca
- Pipeta - Placa Petri
- Asa

Reactivos

- Agua destilada
- NaCl(11gr)
- NaHCl 2 (13 gr)
- Detergente lavavajilla (8 ml)
- Alcohol etílico 95%

5. PROCEDIMIENTO

1. Preparación de la muestra
- Triturar la muestra.
- Pasar la muestra por un colador (10 ml).

2. Preparación del tampón de lisis

- Mezclar el agua destilada con la sal, el bicarbonato y el detergente.

3. Solubilización de las membranas.

- Tomar 10 ml de la muestra y mezclar con 20 ml del tampón.
- Agitar por 5 min

4. Extracción del ADN

- Del filtrado anterior tomar 5 ml y llevar al tubo.
- Adicionar 10 ml de alcohol cuidadosamente por la pared del tubo.
- Dejar reposar hasta la precipitación del ADN.
5. Recolección del ADN
- Introducir el asa en la interfase y hacer movimientos circulares, enrollando el
ADN.
- Retirar cuidadosamente.
- Depositar en la placa Petri y visualizar.

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 6. ANÁLISIS DE RESULTADOS

Realizado el procedimiento para el proceso de extracción y aislamiento del ADN en la

muestra vegetal utilizada en este caso para Fragaria (Fresa) con el método artesanal para
esta práctica.

Primero se maceró la muestra (Fragaria) con la utilización de un mortero y se procedió a

un filtrado para descartar residuos sólidos de la muestra-, obteniendo así un licuado casi
completamente líquido denominado lisado celular. (Fig. 1).

Figura 1. Lisado celular

obtenido en el primer paso.

Para la preparación de la
solución buffer se añadieron
determinadas cucharadas según
se citaba en la literatura, pero al
poseer equipo especializado
para la determinación de masa de un reactivo se realizó una medición de este peso
utilizando una balanza analítica. Los resultados son los siguientes:

Tabla 3: Cantidad de reactivo agregado en la solución buffer.

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 PESO DEL RELOJ (gr) PESO
REACTIVO CANTIDAD
VIDRIO TOTAL (gr) NETO (gr)
Cloruro de Dos cucharas
21* 32,1 11.1
Sodio. razas
Bicarbonato Seis
de cucharadas 21* 33.68 12.68
Sodio. razas
* El pesaje de ambos reactivos se realizó en el mismo vidrio reloj.

El peso neto de cada reactivo al ser muy cercanos, aproximando al Ciruro de Sodio a
una cantidad de ll gr y al Bicarbonato de Sodio 13gr. Posiblemente se añadió poco
Bicarbonato teniendo en cuenta su relación 3:1 con la Sat en definitiva, el Bicarbonato
debió arrojar un resultado de peso neto algo mayor al adicionado.

El otro reactivo esencial utilizado fue el jabón de lava vajilla del cual se agregaron 8 ml
medidos con la utilización de una pipeta con succionador. Este problema en la solución
buffer (Fig. 2) obtenida con la dilución de 250ml de Agua Destilada y la cantidad de
solventes en el frasco Schott, ocasionó una posible acidificación moderada del medio lo
que disminuyó ha viscosidad del material genético; esto provocado por fata de
Bicarbonato en la disolución.

Figura 2. Solución amortiguadora en el

frasco Schott.

A continuación, se realizó la solubilización

de la membrana en donde se tomaron 10ml

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de la muestra y 20ml de la solución amortiguadora, luego se mezclan en un matraz
(Fig. 3), utilizando una agitación constante durante 5' para conseguir así una
solubilización parcial de la membrana.

Figura 3. Proceso de solubilización de la

membrana por agitación en el matraz

Finalmente, llego de esperar 10' El ADN se había precipitado y podría ser extraído en
un

caja de Petri utilizando un Asa. (Fig. 4)

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 Figura 4. Material genético obtenido de Fragaria.

7. CONCLUSIONES

Al realizar el procedimiento adecuadamente, resulta que las fibrillas de ácidos

nucleicos, tanto ADN como ARN comienzan a emerger, de un color blanco precipitado
por sobre el alcohol Con ayuda de un asa se obtiene y extrae del tubo de ensayo el
material genético aislado en el procedimiento. En el caso para el ADN de la Muestra
Vegetal (Fragaria) se consiguió realizar el aislamiento con éxito obteniendo el
precipitado esperado, pero no con la viscosidad óptima para su extracción del tubo de
ensayo con el asa. Debido a la acidificación que sufrió el medio por la poca aplicación
de Bicarbonato de Sodio para la realización de la solución buffer.

8. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

 SAMBROOK, J.; RUSSELL, D.W.; SAMBROOK, J. 2001. Molecular Clonlng.

3Rd ed. Cold Spring Harbor Laboratory, New York.
 ROGERS, S.O.; BENDICH, A.J. 1988. Extraction of DNA from plant tissues.
Plant Molecular Biology Manual. A6: 1- 10. Kluwer Academic Publishers,
Belgium.
 Invitrogen. 2005. Nucleic acid purification and quantification sourcebook.
Invitrogen Industries, EE. UU.
 Sambrook J., E. F. Fritsch y T. Maniatis. 1989. Molecular Cloning: A
Laboratory Manual. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor,
New York, EE.UU.
 Stulnig T. M. y A. Amberger. 1994. Exposing contaminating phenol in nucleic
acid preparations. BioTechniques 16: 402-404.
 Störmer M., K. Kleesiek y J. Dreier. 2007. High-Volume Extraction of Nucleic
Acids by Magnetic Bead Technology for Ultrasensitive Detection of Bacteria in
Blood Components. Clinical Chemistry 53: 104–110
 Padilla, J.F. (12 de Mayo de 2010). Medicina Joven.com. Obtenido de

20
 http://www.medicinajoven.com/2010/05/como-extraer-adn-de-forma-casera.html

 Castellanos, C. (s.f.). Academia.edu. Obtenido de

https://www.academia.edu/17019047/INFORME_EXTRACCION_DE_ADN

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