BIO-005 Laboratorio 2

ACTIVIDAD N° 2
pH y Soluciones Buffer.
APRENDIZAJES ESPERADOS
 Evaluar la capacidad amortiguadora de diferentes soluciones.

 Determinar gráficamente la curva de titulación de un ácido.
 Determinar los intervalos de pH en que una especie se comporta como buffer.
INTRODUCCIÓN
La regulación del pH es importante en muchas reacciones químicas, como así también en el

control de procesos metabólicos dentro de nuestro organismo y la mantención de la homeostasis.
Una solución amortiguadora (tampón o buffer) corresponde a la combinación de un ácido débil y

su base conjugada, y tienen la propiedad de mantener estable el pH de una solución frente a la
adición de cantidades pequeñas de ácidos o bases fuertes. Debido a que las soluciones
amortiguadoras presentan efecto de ión común, es posible aplicar la ecuación de Henderson –
Hasselbalch con la finalidad de prepararlas:
[base conjugada ( sal ) ]

pH= p K a + log
[ácido]
En la mantención de la homeostasis, encontramos diversos sistemas de soluciones

amortiguadoras, como por ejemplo el buffer fosfato o bicarbonato. El ácido fosfórico (H 3PO4, pK1=
2,14; pK2= 6,86; pK3=12,4) es un ácido poliprótico que presenta tres equilibrios de ionización,
asociado cada uno a una constante de disociación ácida distinta.
−3
+¿ + PO ¿
−2 4
+¿ +HP O ↔H ¿
−¿↔ H 4
¿
+¿+ H 2 P O 4 ¿
H 3 P O4 ↔ H
Dentro de las células, la alta concentración de fosfato favorece la formación de soluciones

amortiguadoras en base a este compuesto. A pH fisiológico la especie ácida del buffer es un
fosfato monobásico (H2PO4-), mientras que la base conjugada corresponde a un fosfato dibásico
(HPO4-2).
−2
+ ¿+ HPO 4 pK 2 =6.86 ¿
↔H
H 2 P O−¿ ¿
4
Químicamente, el valor del pK indica que a ese pH el equilibrio de la reacción tendrá una
disociación del 50%, es decir habrá igual cantidad de ácido (H 2PO4-) y de base conjugada (HPO4-2).
La capacidad buffer de esta mezcla se mantendrá en un rango de ±1 el valor del pK, o sea, entre
5,86 y 7,86.
Adicionalmente, especies como los aminoácidos pueden actuar como agentes tamponantes,
variando su grado de disociación o desprotonación. Estas especies biológicas pueden actuar como
ácidos dipróticos o tripróticos, donde siempre el pK 1 corresponderá a la reacción de
desprotonación del ácido carboxílico, mientras que el pK 2 se asocia a la desprotonación del grupo
amino. En el caso de ser un aminoácido con su radical ácido o básico, la desprotonación de esta
especie estará ligada al pKR.
Como ejemplo de un aminoácido que se comporta como ácido diprótico encontramos a la glicina,
cuyos valores de pK son 2,34 y 9,60 (pK 1 y pK2, respectivamente). Debemos recordar que la
capacidad tamponante se asocia a la mezcla, en concentraciones similares de un ácido y su base
conjugada, por lo que la capacidad de servir como un buffer para la glicina está en torno a sus
valores de pK. Es por ello que, este aminoácido al ser titulado presentará dos regiones de acción
característica para un buffer, entre los rangos de pH 1,34 – 3,34 y 8,60-10,60, lo que implica que
no serviría como tampón fisiológico.
.
ACTIVIDADES VIRTUALES
1. Comprendiendo la escala de pH.
a) Ingrese al siguiente link:

https://phet.colorado.edu/sims/html/ph-scale/latest/ph-scale_es.html
b) En la sección “Macro”, mida el pH 250 mL de agua, y de otros dos compuestos a su

elección.
c) Diluya cada uno de los compuestos seleccionados, agregando 250 mL de agua.

Posteriormente, agregue otros 500 mL más de agua. Registre sus resultados.
Compuesto medido
Solución
H2O A B
Puro
Compuesto + 250
--
mL de agua
Compuesto + 750
--
mL de agua
Pregunta Crítica: ¿Por qué cambia el pH a medida que diluimos el compuesto?
d) Ahora vaya a la sección “Micro” (Esta actividad puede desarrollarla fuera de horario)
e) Agregue 500 mL de un compuesto neutro, uno ácido y uno básico y vea la relación entre
H+ y OH-. Después, dilúyalos, agregando 500 mL de agua y vuelva a revisar dicha relación.
Pregunta Crítica: ¿Qué puede concluir de sus observaciones?

ACTIVIDADES SIMULADAS
En las siguientes actividades se le plantean situaciones experimentales, y ud en base a

su conocimiento debe describir y discutir los resultados obtenidos.
1. Comparación entre la capacidad amortiguadora del suero salino, un buffer y un aminoácido.
a) Se preparó un set de 6 tubos como se indica en la tabla, y se registró el color antes y

después de la adición de HCl:
Tubo
Solución
1 2 3 4 5 6
Suero salino (mL) 11 10 -- -- -- --
Buffer fosfato pH 7 (mL) -- -- 11 10 -- --
Glutamato 0,05M; pH 7 (mL) -- -- -- -- 11 10
Azul de timol 5 gotas a cada tubo
HCl 0,1M (mL) -- 1 -- 1 -- 1
Pregunta Crítica: ¿Cómo funcionan los indicadores de pH, como el azul de timol?
RESULTADOS OBTENIDOS
1.1 Explique y discuta los resultados obtenidos, en base al objetivo de esta actividad.
2. Determinación de la curva de titulación para un aminoácido.
a) En un matraz se colocó 50 mL de una solución de glicina 0,05M.
b) Se adicionaron 10 gotas de azul de timol y se midió el pH, dando un valor igual a 1,0.
c) Posteriormente, se aplicaron alícuotas de 5 mL de NaOH 0,1 M a la solución de glicina con

una bureta, y se mide el pH luego de cada adición de base (Tabla 2)
RESULTADOS OBTENIDOS II
Tabla 2: (agregue un título) _________________________________________________________

Volumen
pH
NaOH (mL)
0 1,00
5 1,66
10 1,98
15 2,13
20 2,27
25 2,34
30 2,41
35 2,55
40 2,71
45 3,02
50 5,97
55 8,92
60 9,24
RESULTADOS OBTENIDOS III
1. 2.1 Con el programa Excel, construya un gráfico de dispersión de puntos, con la curva de
titulación del aminoácido, utilizando como variable dependiente (Y)_________________ y
variable independiente (X)___________________.
Gráfico 1: (agregue su descripción) ____________________________________________________
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
2.2 Identifique en su gráfico las regiones correspondientes comportamiento como tampón,

pKa1, pKa2 y pI correspondientes a la glicina.
2.3 Compare los valores de pKa1, pKa2 y pI de su gráfico con los valores de literatura.
2.4 Discuta el comportamiento de la glicina como tampón fisiológico.
Pregunta Crítica: ¿Qué habría ocurrido si la titulación con NaOH hubiese continuado?

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ACTIVIDAD N° 2

 Evaluar la capacidad amortiguadora de diferentes soluciones.

La regulación del pH es importante en muchas reacciones químicas, como así también en el

Una solución amortiguadora (tampón o buffer) corresponde a la combinación de un ácido débil y

[base conjugada ( sal ) ]

En la mantención de la homeostasis, encontramos diversos sistemas de soluciones

Dentro de las células, la alta concentración de fosfato favorece la formación de soluciones

1. Comprendiendo la escala de pH.

a) Ingrese al siguiente link:

b) En la sección “Macro”, mida el pH 250 mL de agua, y de otros dos compuestos a su

c) Diluya cada uno de los compuestos seleccionados, agregando 250 mL de agua.

Pregunta Crítica: ¿Por qué cambia el pH a medida que diluimos el compuesto?

Pregunta Crítica: ¿Qué puede concluir de sus observaciones?

En las siguientes actividades se le plantean situaciones experimentales, y ud en base a

1. Comparación entre la capacidad amortiguadora del suero salino, un buffer y un aminoácido.

a) Se preparó un set de 6 tubos como se indica en la tabla, y se registró el color antes y

a) En un matraz se colocó 50 mL de una solución de glicina 0,05M.

c) Posteriormente, se aplicaron alícuotas de 5 mL de NaOH 0,1 M a la solución de glicina con

Tabla 2: (agregue un título) _________________________________________________________

RESULTADOS OBTENIDOS III

2.2 Identifique en su gráfico las regiones correspondientes comportamiento como tampón,

2.4 Discuta el comportamiento de la glicina como tampón fisiológico.

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