APUNTES DE AMPLIACIÓN DE

MICROBIOLOGÍA
2019-2020
BLOQUE I: INTRODUCCIÓN

TEMA 1: ACTUALIZACIÓN DE CONCEPTOS Y ASPECTOS FUNDAMENTALES DE LA

MICROBIOLOGÍA

Los procariotas son los microorganismos más abundantes del planeta, poseen diversas
características metabólicas y taxonómicas diferenciativas. Les permite distribuirse por todos los
hábitats debido a su gran diversidad y estrategias metabólicas. Existe mayor diversidad entre los
microorganismos que entre todas las demás formas de vida que habitan el planeta.

Para obtener un cultivo estéril se debe tomar una muestra (agua, aire, suelo...) y en el laboratorio
proceder a una dilución si corresponde y siembra de los microorganismos. Mediante una tinción,
siendo la tinción de Gram la más utilizada para hacer una diferenciación clara. Después realizar
pruebas bioquímicas para poner de manifiesto los requerimientos del microorganismo (prueba
catalasa, O/F...).

- "Nacemos 100% humanos y morimos 90% procariotas". En el cuerpo humano hay 10 veces más
de células procariotas que eucariotas, debido a su menor peso y tamaño. Ya se sabe que el feto no
es completamente aséptico antes de nacer, ya posee una pequeña microbiota en el útero
materno.

La disbiosis es una alteración de la composición de la microbiota del cuerpo humano. La mayoría

de los microbiomas del cuerpo humano no son reproducibles en el laboratorio, ya que es difícil
reproducir las interacciones de todos los microorganismos. Solo se ha podido cultivar alrededor de
un 1% y no más de un 10%.

Entendemos por microbiota al conjunto de procariotas generalmente asociado a tejidos sanos de

forma normal con una interacción beneficiosa para el organismo. El microbioma podría ser un
sinónimo de microbiota. Pero realmente la microbiota es una parte del microbioma, es el conjunto
de grupos genéticos de un bioma.
En esta microbiota puede haber especies oportunistas como Candida albicans que es un hongo
unicelular no patógeno normal en la microbiota, pero tiene una forma invasiva filamentosa que
produce una infección cuando las defensas del huésped están disminuidas.

Viroma: conjunto de virus que se pueden encontrar en el cuerpo humano, que es incluso más
abundante que las bacterias.
● HÁBITATS DE LOS MICROORGANISMOS:

- Suelos: superficie y profundidad (hasta 1000m)

- Aguas: dulces y salinas. A altas y bajas temperaturas. En superficie o profundidad.
- Aire: en suspensión, aunque no es un ambiente propicio. La carga microbiana aumenta cuando
hay movimiento (lab)
- Asociados a plantas y animales.

● CATEGORÍAS TRÓFICAS MICROBIANAS.

Requerimientos nutricionales de los microorganismos según su fuente de energía y de carbono.

(fuentes de C, N, H, sales, vitaminas, energía…)
- Quimiotrofos: su fuente de energía es un compuesto químico.
⮚ Quimioorganotrofos: si el compuesto químico es orgánico.
▪ Quimioorganoheterótrofos: son quimioorganotrofos que utilizan como fuente de
carbono compuestos orgánicos
⮚ Quimiolitotrofos: utilizan compuesto químico inorgánico (compuestos inorgánicos
reducidos) exclusivo de procariotas.
▪ Quimiolitoautoheterotrofos: fijan CO2 como fuente de carbono (inorgánico)
▪ Mixótrofos: quimilitotrofos que utilizan compuestos orgánicos como fuente de
carbono

- Fototrofos: su fuente de energía proviene de la luz.

⮚ Fotoautótrofos: fijan CO2 como fuente de carbono.
⮚ Fotoheterotrofos: fijan C orgánico
⮚ CRECIMIENTO MICROBIANO Y OXÍGENO: ROS Y DEFENSAS

- Aerobios estrictos: Respiración aerobia para realizar su catabolismo, oxígeno como

aceptor final de electrones. Estos organismos pueden ser quimioorganotrofos o
quimiolitotrofos.
SOD+ Cat+
- Anaerobios facultativos: Efectos Pasteur, indica que el organismo en presencia de oxígeno
respira y sin él fermenta o respira anaerobiamente (la posibilidad de la respiración
anaerobia depende del aceptor final de electrones). Cambian su metabolismo en función
de la presencia o ausencia de oxígeno (necesitan alrededor del 21% de oxígeno).
SOD+ Cat+
- Anaerobios aerotolerantes: Fermentan incluso en presencia de oxígeno. Ej: bacterias del
ácido láctico.
SOD+ Cat- Peroxidasa+
- Anaerobios estrictos: El oxígeno es tóxico para ellos, su metabolismo depende de la
respiración anaerobia, aunque algunos fermentan como por ej: Clostridium mediante la
Reacción de Stickland (fermentación de aa).
SOD- Cat-
- Microaerófilos: Respiración aerobia con concentraciones de oxígeno menores a las
anteriores.
SOD- Cat-/+

Las enzimas implicadas en la destrucción de ROS (hidroxilo, superóxido, H2O2…) son:

- SOD: dismutación de superóxido en oxígeno y peróxido de hidrógeno.
- Catalasa: desdobla el peróxido de hidrógeno en oxígeno y agua.
- Peroxidasa: la misma función que la catalasa, pero sin liberación de oxígeno.
⮚ CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
1. Composición química
- Complejo: No se sabe ni cuanti ni cualitativamente la composición exacta. (YPD para
levaduras o LB para E. coli)
- Definido: Consta la composición exacta del medio (nutrientes, vitaminas, fuente de
energía...)
2. Estado físico: Depende de la concentración de agar (agente espesante). Pueden ser
líquidos, semisólidos (concentración de agar 0,algo) y sólidos.
- Los medios de cultivo sólidos ayudaron a la obtención de cultivos puros
3. Disposición: Tubos, placas, matraces…
4. Finalidad o utilidad
- Comunes: medio con todos los requerimientos para la mayoría de bacterias, utilizado para
la realización de pruebas rutinarias.
- Selectivos: selecciona la bacteria a estudiar, inhibiendo el resto. (MacConkey)
- Enriquecidos: Utilizados para organismos más exigentes que requieren algo específico.
- Diferenciales: Medio con incorporación de algún componente, como un indicador de pH,
que no produzca ningún efecto en el crecimiento microbiano. Cambia de color en función
del metabolismo bacteriano, utilizando el pH. (MacConkey)

● OBTECIÓN DE CULTIVOS PUROS

El agar tiene una gran importancia en la práctica microbiológica ya que nos aporta una
superficie sólida donde poder hacer una separación de las células microbianas, que se puede
hacer por distintos procedimientos: Siembra en estría, por extensión o siembra en
profundidad en vertido (aislamiento en placa) y diluciones seriadas.
Cada una de ellas dará una colonia. Las colonias son un cultivo puro, ya que proviene de una
sola célula.
⮚ Curva de crecimiento microbiano en un cultivo discontinuo (en sistemas cerrados líquidos)
En un sistema de cultivo cerrado, como por
ejemplo un matraz con medio líquido donde se
inocula una bacteria y se incuba a Tª y
condiciones adecuadas, comienzan a crecer
hasta que se acaban los recursos y entra en la
fase de muerte celular (porque no hay
reposición de nutrientes, a diferencia de un
cultivo abierto)
En la fase exponencial de esta curva podemos
utilizar esta fórmula: NT=N0 x 2n
Donde n es el número de generaciones y se
puede calcular mediante:

n= T/g . Donde T= tiempo de crecimiento exponencial y g=tiempo de generación o duplicación

(exclusivo de cada bacteria).
● QUIMIOORGANOTROFÍA

Éstos organismos utilizan compuestos

orgánicos para la obtención de
energía (reacciones de oxidación),
fuente de poder reductor (donador
de electrones compuestos orgánicos)
y fuente de carbono para biosíntesis.
El catabolismo de estos compuestos
orgánicos se puede hacer mediante
fermentación o respiración (aerobia o
anaerobia).

● QUIMIOLITOTROFOS

Es un tipo de catabolismo es exclusivo del

mundo procariota (bacterias y algunas
arqueas). Se encuentran en ambientes
extremos, son los productores primarios
de materia orgánica en la base de las
cadenas tróficas.

Es un sistema metabólico que genera

energía a partir de la oxidación aeróbica
de compuestos orgánicos reducidos. Utilizan estos compuestos inorgánicos reducidos como
fuente de energía, y en la mayoría de los casos utiliza CO2 como fuente de carbono.
La mayoría son autótrofos, realizan el ciclo de Calvin para fijar CO2, requiere ATP y NADH (poder
reductor) para pasar el CO2 a carbono orgánico. A partir de su catabolismo sacan energía, ATP y
NADH. Tiene un crecimiento lento porque tienen que oxidar elevadas concentraciones de
compuestos inorgánicos para poder duplicarse.

Pueden realizar el ciclo de TCA inverso de electrones normal (relacionado con el potencial redox)
donde el aceptor final de electrones O2 (E0=+0,82) y el donador de electrones es NADH o FADH
(E0=-0,32) con un potencial redox muy electronegativo, muy distinto al potencial del O2. Los
donadores ceden los electrones formando una cadena de transporte directo
(termodinámicamente estable, de más a menos potencial, de E0 negativo a positivo) y así general
ATP por la fuerza motriz de protones que se produce.

En el transporte inverso de electrones el donador es un compuesto inorgánico reducido con un

elevado potencial redox (sustrato poco energético) que, dependiendo de la diferencia de potencial
que tenga con el oxígeno (distancia o largo de la cadena), generará distinta potencial y por tanto
distinta energía. Ej: de nitrito a nitrato: de 0,42 hasta 0,82 del O2 genera una cadena más corta que
con el NADH, por lo que genera menos energía.
Para fijar el CO2 necesitan también NADH, con dirección inversa de potencial, tienen que impulsar
los electrones hacia arriba en la cadena de transporte, lo que les supone un gasto de energía
obtenido del ATP y NADH del donador, siendo un movimiento termodinámicamente inestable.

● FOTOTROFÍA

La característica principal es que posee

fotosistemas capaces de captar la luz, activando la
cadena de transporte de electrones (que se
encuentra en la membrana) para transformarla en
energía química (ATP) por la fuerza motriz del
transporte de dos electrones. Este ATP junto con el
NADH, le permite fijar CO2, puesto que muchos
fotótrofos son autótrofos. La fijación del CO2 se
realiza por el ciclo de Calvin, aunque algunos lo
hacen por TCA inverso.
La fotosíntesis puede ser de dos tipos:
- Fotosíntesis oxigénica: es un flujo
abierto de electrones en el que
intervienen 2 PS, en el cual se
produce oxígeno. Se encuentra en
cianobacterias y algas (eucariotas
autótrofos). El donador de
electrones es el agua y el aceptor
final el O2.

- Fotosíntesis anoxigénica: ciclo

cerrado con un solo PS que no
genera O2. Se da en el resto de
bacterias fotosintéticas donde el
donador de electrones no es el
agua, sino un compuesto reducido.
(Ej: verdes y rojas del azufre, el
donador es un compuesto reducido
de S. SH2->S0 + e-).

● USO DE LA ENERGÍA EN BIOSÍNTESIS Y PROCESOS ESPECIALIZADOS

La fuerza protón motriz que no se utiliza para la obtención de ATP se utiliza para otros fines, como
por ejemplo la rotación del flagelo, transporte activo, síntesis de componentes celulares o PG,
fijación de N2 (este último ejemplo exclusivo de procariotas).

PREGUNTAS REPASO:
 - Componentes de la membrana de dentro a fuera: 1. Membrana citoplasmática, 2. Espacio
periplásmico, 3. PG, 4. Bicapa de fosfolípidos, 5. Cápsula.

- Partiendo de glucosa, indica el proceso de respiración anaerobia donde se obtiene más

energía. NO3-/NO2- E0: +0,43. (a mayor incremento de potencial mayor energía se
obtiene porque el donador y el aceptor están más alejados en la cadena de transporte).

- Bacterias autótrofas sin ciclo de Calvin. Bacterias verdes del azufre, que realizan TCA
inverso.

BLOQUE II: ECOLOGÍA MICROBIANA Y MICROBIOLOGÍA AMBIENTAL

TEMA 2. INTRODUCCIÓN A LA ECOLOGÍA MICROBIANA. PAPEL DE LOS
MICROORGAANISMOS EN LOS ECOSISTEMAS NATURALES.

Ecología microbiana: estudio del comportamiento y actividades de los microorganismos en su

ambiente natural. Se centra en estudiar cómo se juntan las poblaciones microbianas para formar
comunidades y cómo estas comunidades interaccionan entre sí con su ambiente
(microbiambiente).
Microbiología ambiental: relación de todos los procesos microbianos que ocurren en el suelo, el
agua, etc. No se ocupa particularmente del microambiente, sino de los efectos a más gran escala
de la presencia y actividades microbianas en el ambiente.

Estos términos pueden ser sinónimos, pero la ecología microbiana hace referencia al
comportamiento en el microambiente y la microbiología ambiental se basa en los procesos que
ocurren a mayor escala y su repercusión.

● LOS MICROORGANISMOS COMO COMPONENTES DE LOS ECOSISTEMAS.

Los microorganismos mantienen una continuidad viable entre el mundo vivo y no vivo por la
descomposición de la materia orgánica mediante mineralización para así poder ser aprovechada
por otros organismos. La materia orgánica que descomponen suele transformarse en materia
inorgánica que vuelve a ser disponible. Siendo así el soporte de todos los ecosistemas naturales
(base de funcionamiento).
El ciclo de la materia de los ecosistemas: así como la energía pasa de un nivel trófico al siguiente
para al final perderse en forma de calor, la materia sigue un proceso cíclico pues al final puede ser
de nuevo reutilizada. Los microorganismos se encuentran en la base del funcionamiento
equilibrado de los ecosistemas y del correcto reciclaje de los elementos esenciales para la vida

Los motores de cambio global que actualmente reciben una mayor atención por parte de los
investigadores:
- Aumento de la carga de aerosoles
- Toxificación de la biosfera
- Cambio climático
 - Acidificación de los océanos
- Desgaste de la capa de ozono estratosférico
- Alteraciones en el ciclo del N y del P
- Cambios en el suelo
- Cambios en el ciclo hidrológico
- Pérdida de la biodiversidad

En el artículo “La mayoría invisible” sostienen la existencia de todas las formas de vida superiores y
tienen una importancia crítica para regular el cambio climático. La actividad de los
microorganismos puede acelerar o contrarrestar casi todos los motores actuales de cambio global.
Por este motivo el estudio de los microorganismos en su medio natural se ha colocado en el
centro de intensos esfuerzos de investigación multidisciplinar: están en el centro de estudio de
cualquier cambio global porque responden y lo hacen rápido de ahí la importancia de su estudio.
Las bacterias podrían tener una repercusión positiva o negativa, son organismos sensibles a los
cambios que responden de forma rápida porque tiene una alta capacidad de adaptación. El
cambio en la biodiversidad bacteriana afecta a los ecosistemas. Ej: el calentamiento global ayuda a
la proliferación de patógenos y vectores para la transmisión de éstos (enfermedades infecciosas).

● PAPEL ECOLÓGICO DE LOS MICROORGANISMOS: PAPEL VITAL EN EL FUNCIONAMIENTO DE

UN ECOSISTEMA

1. Productores primarios (plantas y millones de bacterias) producen O2 y capta CO2

comportándose como sumideros de CO2, con efecto positivo. Son organismos
principalmente fotótrofos y quimiolitotrofos (autótrofos).
2. Descomponedores o mineralizadores (bacterias y hongos) que actúan como recambio de
materia inorgánica a orgánica. Son organismos quimioorganotrofos.
3. Consumidores primarios (protozoos que se alimentan de bacterias)
4. Organismos que transforman compuestos xenobióticos y recalcitrantes en otros
compuestos más sencillos con más facilidad para ser degradados.
5. Organismos que liberan compuestos antimicrobianos, algunos antibióticos o enzimas que
regulan la presencia de microorganismos.
● LOS MICROORGANISMOS COMO COMPONENTES DE LOS ECOSISTEMAS

En los ecosistemas naturales el difícil encontrar un cultivo puro, ya que existe la colaboración
entre los distintos microorganismos produciéndose una sintrofía, donde los metabolitos que unos
producen son necesarios para el crecimiento de otras bacterias.

Los microorganismos no viven aislados, se organizan en grupos de mayor

o menor entidad.
Las bacterias (célula individual) normalmente se encuentran en
agrupaciones de la misma especie llamada población (grupo de células
relacionadas que derivan del mismo parental por divisiones sucesivas). A
su vez, estas poblaciones se agrupan formando gremios (poblaciones
relacionadas metabólicamente), estos gremios poseen un metabolismo
semejante o incluso explotan un mismo recurso. El conjunto de gremios
constituye una comunidad, que se entiende como un conjunto de
gremios o poblaciones con procesos metabólicos complementarios.

Poblaciones, gremios y comunidades: ejemplos de la estructura de

comunidades microbianas en un ecosistema lacustre. En un lago no hay movimiento horizontal y
por ello se diferencian las 3 comunidades: fototrofos aerobios, quimioorganotrofos aerobios y
zona anóxica con 3 gremios: fermentadores, con respiración anaerobia (desnitrificantes y
sulfatorreductoras con nitrato y sulfato como aceptores finales respectivamente) y bacterias o
arqueas metanogénicas (último eslabón de la descomposición inorgánica, utilizan compuestos
sencillos para
dar metano. Poseen
el CO2 como aceptor
final de
electrones).
● EL AMBIENTE MICROBIANO. ESPACIO FÍSICO

En los microorganismos, una pequeña variación en el espacio físico tiene una elevada repercusión
sobre la presencia de un microorganismo. Ej: hombre de 2m y bacteria como E.coli de 3 µm,
ambos x1000. 3mm tiene la misma repercusión sobre una bacteria que
sobre nosotros 2 km.

En una partícula de suelo es sometido a un microelectrodo (capilar muy

fino) para medir los distintos parámetros en el espacio físico, como el O2.
Se midió el O2 en el grano de suelo y se vio que desde la superficie al
interior iba disminuyendo la concentración de O2, es 6mm de grano hay
una variación del 21% de oxígeno hasta 0%, lo que indica que en esos 6
mm puede haber todo tipo de bacterias con distintos requerimientos de
oxígeno (este espacio tan pequeño tiene una elevada repercusión). Para
cada organismo existe un nicho efectivo o principal en el que tendrá mayor
éxito, pero también puede habitar en otros nichos, aunque con menor
éxito.

⮚ Recursos nutricionales:

- Fuente de energía: fotótrofos y quimiótrofos

- Fuente de Carbono: autótrofos y heterótrofos
- Oxígeno: aerobios obligados, microaerófilos, anaerobios obligados, anaerobios
facultativos, anaerobios aerotolerantes
- Fuente de Nitrógeno: a partir de amonio, sales de amonio, N2, nitratos, hidroliados
proteicos…
- Fósforo: a partir de fosfatos orgánicos e inorgánicos
- Azufre: a partir de sulfuros, sulfatos.
- Iones inorgánicos: a partir de sales minerales
- Factores de crecimiento: vitaminas, aminoácidos, purinas, pirimidinas, etc.
- Agua: solvente de los nutrientes
- Factores físicos: temperatura, pH, presión, etc.

⮚ Concentración de nutrientes y velocidades de crecimiento:

- Los recursos nutricionales entran en un ecosistema, normalmente, de forma intermitente.
Un gran aporte de nutrientes (hojarasca, cadáver…) pueden ir seguido de un período de
escasez. La existencia de los microorganismos en la naturaleza alterna entre el festín y la
hambruna. Así es normal que acumulen material de reserva.
- Los períodos largos de crecimiento exponencial microbiano son raros en la naturaleza,
suelen crecer a brotes según la disponibilidad de recursos y condiciones físico-químicas.
- La distribución de los nutrientes en el hábitat microbiano no es uniforme.
- El crecimiento microbiano en la naturaleza es muy diferente al del laboratorio. Hay un
crecimiento más lento en la naturaleza.
o Ej: E.coli en el lab puede tener un tiempo de generación de 20min y en nuestro
intestino (que comemos a intervalos regulares) de unas 12h. Estudios sobre
bacterias del suelo indican que en estas crecen en el suelo a menos del 1% de
cómo lo hacen en el lab en unas condiciones óptimas.
- La competencia entre microorganismos por los recursos en un hábitat puede ser intensa y
depende en parte de la tasa de captación de nutrientes.
- Algunos microorganismos colaboran entre sí para llevar a cabo transformaciones que no
podrían realizar solos (sintrofía; comen juntos, es cooperativa, mutualista): interacciones
microbianas. Se da cuando un microorganismo genera un metabolito que es necesario
para la supervivencia de otro, este conocimiento se está aprovechando para generar
métodos de cultivo de alto rendimiento lo que solucionaría el problema que podemos
tener en el laboratorio al intentar cultivar microorganismos que dependen de metabolitos
de otros.
- Las superficies y la formación de biopelícula (biofilms) constituyen otro modo de facilitar el
acceso a los nutrientes como proteínas… , y protegerse de depredadores y frente a
compuestos microbianos. Se forman estas películas en ambientes pobres en nutrientes,
oligotróficos. Se regulan a través del mecanismo intercelular denominado Quorum sensing
(percepción de quorum) el cuál es un mecanismo bastante sofisticado que presentan
algunas bacterias, hongos y levaduras (Candida albicans su paso forma de levadura a hifa
está regulada por este mecanismo). Se ha descrito tanto en bacterias gram + como en
bacterias gram -.
Consiste en que una determinada célula bacteriana libera unas moléculas
autoinductoras (moléculas que pueden ser detectadas por la misma célula que las produce
y emitir una respuesta al hacerlo), éstos autoinductores son diferentes en gram + y gram -
, por ejemplo; en bacterias gram - las principales moléculas autoinductoras son acetil-
homoserin lactonas y en gram + principalmente son pequeños péptidos y oligopéptidos.
El objetivo es el mismo, es decir cuando se acumula una gran cantidad de células que
es el quorum, cada una está produciendo esas moléculas autoinductoras, y cada una de
ellas tiene la capacidad de reconocer esas moléculas y al llegar a una concentración crítica
de ese autoinductor, al detectarlo la célula dispara una señal. Que haya un gran número
de células, permite un mayor éxito en la respuesta lo que va a asegurar la emisión de esa
respuesta como puede ser; por ejemplo bioluminiscencia (vibrio), formación de
biopelículas, bacterias fijadoras de nitrógenos con raíces de leguminosas, se garantizan el
éxito en la respuesta que van a emitir. En esencia, esas moléculas autoinductoras regulan
la expresión génica una vez han entrado en la célula, permitiendo a la bacteria emitir luz,
regular la síntesis de un compuesto polisacarídico para que se formen estas biopelículas,
etc…
 Además para que se forme una biopelícula siempre se necesita un soporte sólido, ya sea
orgánico o inorgánico, pj: en bacterias infectivas se consigue encima de un tejido, o en un
soporte inerte como una piedra. Sobre ese soporte se van pegando estas bacterias y
sintetizan mayoritariamente un hexopolisacárido (EPS); el cual es mucoso y viscoso, y se
libera al exterior, también están compuestas por agua. Permiten esta fijación al soporte
sólido, y la fijación entre las propias células. Se pueden adherir otros tipos célulares o
moléculas que se encuentre en el ambiente por lo que estas biopelículas suelen tener una
composición bastante compleja.
Finalmente, las células se encuentran en un microambiente que les protege de la
desecación, en el que pueden captar nutrientes de una forma más exitosa y actualmente a
la hora de estudiar compuestos microbianos se intenta eliminar o impedir la formación de
biopelículas ya que muchos procesos infecciosos se generan gracias a la formación de
estas biopelículas, ya que esos materiales actúan de protección frente a la penetración de
ciertos antibióticos.
En algunos casos sobre todo en ambientes acuáticos pueden llegar a ser incluso
macroscópicas, y tener varios centímetros de espesor. Se suelen formar en ambientes
acuáticos pocos profundos en la interfase entre el agua, aire y un soporte sólido que se
encuentre debajo. Los estromatolitos realmente son tapetes microbianos.
Un tapete microbiano (normalmente acuático) presenta en las capas más superficiales
bacterias fotótrofas oxigénicas, en las capas centrales bacterias rojas y verdes del azufre
fotótrofa anaerobias, y en las capas más profundas (anóxicas) bacterias
sulfatorreductoras, que le confieren ese aspecto oscuro a los sedimentos.
⮚ Biocapas microbianas perjudiciales
o Placa dental, responsable de la caries. Soporte esmalte dentario.
o Las formadas sobre prótesis, catéteres, lentillas. Soporte inerte.
o Las que crecen en círculos de refrigeración que pueden integrar
patógenos como Legionella y contibuyen a su proliferación y
diseminación.
o Las que corroen metales, piedras, etc…
o Las que proliferan en intercambiadores de calor, cascos de barcos…

⮚ Biocapas microbianas beneficiosas

o Microbiota de piel y mucosas.
o Microbiota del rumen, adherida a las partículas de celulosa y a las
paredes.
o Bioflóculos de los sistemas de los sitemas de lodos activos y BC de los
filtros percoladores.
o Biopelículas y bioagregados que depuran los ambientes naturales.

- La relación superficie-volumen (S/V) es un parámetro muy importante en el mundo

microbiano, ya que en general los microorganismos presentan superficies muy reactivas,
es decir suele ser una relación alta en comparación con cualquier otro tipo de organismo,
 y es importante porque los microorganismos son absortibos, y a partir de su superficie
captan los nutrientes para mantenerse con vida.
o Relación S/V E. coli: 12
o Relación S/V ballena: 1,25

● MÉTODOS DE ESTUDIO DE LOS MICROORGANISMOS EN SUS AMBIENTES NATURALES.

Los componentes principales de la ecología microbiana son biodiversidad y actividad
microbiana:

1. Determinación de la biodiversidad microbiana en la naturaleza: (lo que hay en la

muestra)

Recogida de muestra. (Tema 3).

El muestreador para cada unidad de muestreo es dependiente del objetivo de estudio y la

matriz (gaseoso, líquido y sólido). La toma de muestras está acreditada según la norma
UNE-EN-ISO 17025. Cuando las muestras que se van a tomar son de origen sanitario hay
que ceñirse muy bien a las normas establecidas.

Para aguas y vertidos: Realización y planificación de tomas de muestras acreditadas en

aguas (de consumo, residuales, continentales, marinas, de proceso, etc.).

Para suelos y sedimentos: Toma de muestras de sedimentos en ríos, lagos, embalses,

zonas portuarias o fondos marinos, mediante dragas. Toma de muestras de suelos para el
estudio de suelos contaminados.

Aire: aparatos específicos de muestreo.

o Técnicas basadas en cultivo (sólo permiten recuperar entre el 0,1 y el 10% de los
microorganismos ambientales)
- Enriquecimiento.
- Aislamiento.
- Recuento (NMP)
o Técnicas no basadas en cultivo
- Tinción y anticuerpos fluorescentes.
- Sondas de ácidos nucleicos.
- Amplificación de DNA por PCR.
- Metagenómica.

2. Medida de la actividad microbiana en la naturaleza: (lo que hacen esos

microrganismos)
- Isótopos radiactivos.
- Microelectrodos.
 - Ensayos enzimáticos.

Técnicas basadas en cultivo:

Tienen una limitación importante ya que solo se han podido cultivar entorno al 1% de los
microorganismos que sabemos que existen.

● Enriquecimiento: se basa principalmente en utilizar medios de cultivo selectivos para

obtener la bacteria de interés y contraseleccionar aquellos microrganismos que no son de
interés, ya que en la naturaleza los microbios existen en cultivos mezclados llamados
comunidades microbianas. Por ello, para aislar a un organismo particular se usan estas
técnicas de enriquecimiento.

*Posible pregunta diseñar un medio para una determinada bacteria.

Selección de fijadores de nitrógeno: si partimos de una muestra de suelo y me interesa

aislar una bacteria de nitrógeno atmosférico del suelo, en medio puro y clasificarla
taxonómicamente.
Lo primero que tendríamos que hacer en diseñar un medio de cultivo en el que el
único nitrógeno que va a tener a tener esa condición de cultivo va a ser el nitrógeno
presente en el aire. En paralelo como control negativo de este ensayo puedo hacer el
mismo medio de cultivo pero suministrándole amoniaco (una fuente de nitrógeno
combinada).
En ambos cultivos, va a haber crecimiento de microorganismos pero en el primer caso voy
a forzar el crecimiento de bacterias fijadoras de nitrógeno, y en el segundo el crecimiento
de bacterias que utilicen como fuerte de energía este compuesto de nitrógeno reducido.
Para finalmente aislar esta bacteria en cultivo puro, debemos sembrar en medio sólido
(agar) realizando una siembra en estría, donde las colonias aisladas constituirían el inicio
de un cultivo puro de bacterias fijadoras de nitrógeno.
Azotobacter puede crecer rápidamente fijando N2 del aire, los medios de
enriquecimiento carentes de amoníaco u otras formas de nitrógeno fijado son muy
selectivos para este organismo; las bacterias no fijadoras de nitrógeno o las bacterias
fijadoras de nitrógeno anaeróbicas son contra-seleccionadas con este método.

Columna de Winogradsky: Padre de la quimiolitotrofía. Los quimiolitotrofos en muchas

ocasiones no pueden ser cultivados en agar, ya que este es un medio orgánico siendo
inhibidos por el propio medio. Por ello, en estos casos se suele usar otro agente espesante
como el gel de sílice, silicato de sodio, para que no haya interferencia a la hora de hacer
crecer a un quimiolitotrofo.
La columna de Winogradsky no es más que reproducir lo que ocurre en la
naturaleza, lo que ocurre en un lago eutrófico estratificado. Un lago eutrófico es un lago
rico en nutrientes, en materia orgánica. En un lago no suele haber movimiento horizontal
del agua, por lo que podemos localizar bien la ubicación de las comunidades microbianas a
lo largo de su eje vertical, siendo una buena forma esta técnica para representar en el
laboratorio lo que ocurre en la naturaleza.
 Para ello, utilizamos un cilindro de cristal, y en él añadimos 1/3 de fango apretado
al fondo, con suficiente materia orgánica para asegurarnos, podemos añadir peptonas u
otro tipo de material orgánico nosotros. Y llenamos los otros 2/3 con agua del lago. Esto se
expone a la luz.
Es un método de enriquecimiento sobretodo para bacterias rojas y verdes del
azufre (fotótrofas anoxigénicas, anaeróbicas y generalmente acuáticas).
Por lo tanto estas bacterias, crecerán en cualquier medio acuático donde no haya oxígeno,
pero llegue la luz.
A la columna también se le suele poner un agente tamponador como puede ser el
carbonato cálcico, sulfato cálcico (actúa como fuente de sulfato).
En la columna se forman dos gradientes inversos, a medida que profundizamos en la
columna la concentración de oxígeno va a ir de mayor a menor, sin embargo el azufre,
concretamente el sulfuro va a encontrarse formando un gradiente inverso al del oxígeno,
yendo de menor a mayor concentración conforme se va bajando en la columna. Por lo que
es importante que añadamos una fuente de sulfato (forma de azufre oxidada) porque es
esencial para que se genere este gradiente que se encuentra en el propio fango.
En la base de la columna encontramos bacterias anaeróbicas y fermentadoras
como Clostridium (anaerobia, gram+, esporulada, metabolismo fermentativo),
Desulfovibrio (sulfatorreductora, degrada materia orgánica mediante respiración
anaerobia utilizando el sulfato como aceptor final de electrones, y el sulfato se acaba
reduciendo finalmente a sulfuro, el cual genera este gradiente inverso).
En la zona media, se encuentran las bacterias pigmentadas del azufre, donde
 encuentran una zona con azufre, luz y anóxica. Éstas utilizan el sulfuro como donadores
externos de electrones compuestos reducidos de azufre (para generar NADH) y la luz
como fuente de energía.
En las capas más superficiales, encontramos bacterias fototrofas
oxigénicas/microaerófilas.

● Aislamiento y/o recuento:

Si lo que nos interesa es hacer un recuento de la carga microbiana por unidad de

muestra (cuantificación por gramo de suelo, por mL de agua…) tendríamos que recurrir a
las siguientes técnicas:
o Siembra en placa: aislamiento de colonias.
- Siembra por estría.
- Siembra por extensión.
o Diluciones: hay que tener en cuenta el factor de dilución para obtener las UFC
(unidades formadoras de colonias por unidad de muestra). Se utiliza para muestra
líquida, para muestra sólida y para muestra gaseosa.
o Cámaras de recuento, para obtener la carga microbiana por muestra, tanto de
viables como de no viables.
o Técnica del número más probable (NMP): en prácticas se utilizará para hacer el
análisis microbiológico de una muestra de agua. Es una técnica cuantitativa que
nos permite determinar carga microbiana por unidad de muestra. Inicialmente es
cualitativa y finalmente cuantitativa. Normalmente se hacen diluciones de la
muestra y se generan baterías de tubos (siembra de tubo múltiple). Se siembran
varios tubos por serie con un medio de cultivo apropiado y en un tiempo estimado
(1 o 2 días dependiendo de la muestra), se hace una lectura de los tubos la cual es
cualitativa porque se basa en ver un cambio de color (indicador de pH) o turbidez
dependiendo del medio de cultivo. (Ej: dirías tengo 3 tubos positivos en esta serie,
dos tubos positivos en la segunda, y uno positivo en la tercera). Al obtener ese
código cualitativo tenemos unas tablas del número más probable (que se
encuentran en internet o en manuales) y en ellas podemos comparar nuestro
código (3,2,1 de positivos en nuestro ejemplo), dándonos estadísticamente un
número de bacterias por mL de muestra. En la técnica debemos tener en cuenta la
dilución que se emplea en cada serie. NMP= NMP/100 mL. En ella para obtener
cultivos axénicos de utiliza como inóculo la mayor dilución que muestra
crecimiento y se repite el procedimiento.
 ● Aislamiento:

o Cultivos axénicos de alta tecnología.

- Las pinzas láser.

Las pinzas de láser consisten en un microscopio óptico invertido equipado con un láser infrarrojo
enfocado con precisión y un instrumento de miromanipulación.

Nos permite aislar una solo célula, ya que estando en el campo de visión es atrapada por el haz de
rayos láser y separada del resto de los microorganismos contaminantes.

Se utiliza principalmente para aislar bacterias de crecimiento lento que pueden ser superadas por
el crecimiento rápido de otras poblaciones en los cultivos de enriquecimiento típicos o para
organismos presentes en bajo número.

El mecanismo para aislar bacterias consiste en que el haz del láser crea una fuerza que empuja una
sola célula microbiana (o partícula) y la deja inmóvil por fuerzas de radiación descendentes (en la
imagen Fa, Fb). Después, al mover el haz del láser la célula atrapada se mueve con él. Para aislarla
finalmente, el haz de rayos puede enfocarse para alejar lo suficiente a la célula y que quede
aislada del resto, quedando esta unida al capilar y pudiendo este cortarse para finalmente poder
cultivarla en un medio estéril.

Es una técnica que nos permite aislar una sola célula, la

técnica se basa en que estas pinzas son un
micromanipulador muy sofisticado. Este sistema incorpora
una fuente de luz laser, un laser infrarrojo muy potente y
fino, y muy definido. Todo esto, se encuentra incorporado
en un microscopio invertido y también con un instrumento
de micromanipulación.

**El miscroscopio invertido, presenta como característica

principal que la luz incide desde arriba y no desde abajo
como en el microscopio óptico convencional. Al incidir
desde arriba, nos permite hacer un seguimiento in vivo, y
tienen una gran resolución, y los más mejorados presentan
una luz laser acoplada.
 - Citometría de flujo.

La citometría de flujo permite analizar un elevado número

de partículas (desde 1.000 a más de 100.000 células)
adquiridas en un corto periodo de tiempo (decenas de miles
de células por segundo). Además, permite contar células de
una población y separarlas en función de diferentes
parámetros.

Realiza medidas cualitativas y cuantitativas de más de 15

parámetros simultáneamente y de cualquier célula o
partícula suspendida desde 0,2 hasta 150 micras.

El citómetro también cuenta con una fuente de luz láser. El

funcionamiento consiste en el paso de las células a través de
un capilar o microtubo muy fino, de manera que las células
van pasando una a una, y la luz láser incide sobre ellas
haciendo una lectura en función del tamaño, el color
(marcaje con sondas fluorescentes), complejidad… Pudiendo
separar células individuales de una población mixta.

Derivado de esto se han creado lo que se denomina actualmente los cultivos axénicos o cultivos de
alto rendimiento.

● Ej: Pelagibacter ubique, es una de las bacterias más abundantes del planeta, es una
bacteria gram negativa y una alfa-proteobacteria, es una bacteria
quimioorganoheterotrofa a nivel nutricional pero es oligotrófica, lo que significa que crece
en ambientes pobres en nutrientes. Por ello, los intentos de cultivo de esta bacteria no
han sido faciles. La técnica de cultivo de alto rendimiento que se ha desarrollado gracias a
las pinzas láser y al citómetro de flujo han permitido desarrollar una microplaca que tiene
micropocillos los cuales se pueden rellenar con medios diferentes y se inoculan con esta
bacteria que ha sido aislada de una muestra de agua marina. Para generar estos medios se
ha utilizado agua del ambiente donde ha sido cogida la muestra y se ha filtrado, y lo
mismo ocurre con algunas bacterias de suelo donde se ha utilizado parte de extracto de
suelo para generar el medio también filtrado. Incorporar agua filtrada o extractos de suelo
ha funcionado en algunos casos, esto resulta exitoso en algunos casos ya que muchos
microorganismos son sintróficos es decir que utilizan metabolitos de otros
microorganismos para su propio metabolismo, por lo que coger agua y filtrarla (para
quitar otro tipo de microorganismo) permite al microorganismo a estudiar utilizar los
metabolitos secundarios que hay en el medio natural. Es el método actual que intenta
representar la vida del microorgarnismo de una manera más fiel a la realidad.
Técnicas no basadas en cultivo

● Tinción y anticuerpos fluorescentes.

o Tinción microbiana con colorantes fluorescentes.

El colorante fluorescente DAPI y Naranja de Acridina se usan con frecuencia para teñir
microorganismos en hábitat opacos. Se unen a los ácidos nucleicos. Estos colorantes son
fluorescentes cuando se incide sobre ellos con luz ultravioleta (máx. absorción DAPI 40nm, máx.
absorción del Naranja de Acridina 500nm), por eso hay que utilizar la microscopía de fluorescencia
para ver la emisión de fluorescencia y hacer el recuento de viables o totales de la muestra.

La tinción con DAPI es ampliamente usada para la cuantificación de microorganismos en el

ambiente, muestras de suelo, en alimentos y en muestras clínicas. Para muestras acuáticas, las
células pueden ser teñidas sobre la superficie de un filtro, después que la muestra líquida ha sido
pasada a través del mismo.

DAPI es un colorante fluorescente inespecífico que tiñe ácidos nucleicos y no suele reaccionar con
la materia inerte. DAPI es una forma razonable de estimar el número de células presentes en una
muestra. Por un lado, es ventajoso, porque es una muestra sencilla y al ser inespecífico tiñe todos
los microorganismos de la muestra. Por otro, su desventaja es que no diferencia entre células vivas
y muertas, ni permite el rastreo de organismos específicos en el ambiente.

TINCIÓN DE VIABLES:

Hay métodos de tinción fluorescentes que permiten distinguir entre células vivas y muertas. Están
basadas en la integridad de la membrana citoplasmática (MC). Ala muestra se añaden dos
colorantes fluorescentes uno verde y otro rojo.
El kit utilizado es el kit LIVE/DEAD BacLightTM: contiene dos marcadores de ácidos nucleicos. El
fluorocromo verde SYTO9 que es una pequeña molécula que puede penetrar en todas las
bacterias que tienen intacta la membrana citoplasmática (vivas). El IP (fluorocromo rojo: yoduro
de propidio) sólo penetra en las células con la membrana citoplasmática dañada (muertas).

Se utiliza con cultivos bacterianos de laboratorio (muestras clínicas, del ambiente y de alimentos).
La desventaja que presenta es que tiñe de forma inespecífica los materiales inertes, por ello, no es
un buen método para examinar muestras naturales ya que tiñe de forma inespecífica a los
materiales inertes.

ANTICUERPOS FLUORESCENTES.

Esta técnica explota la especificidad de anticuerpos contra los constituyentes de la superficie de un

organismo particular, utilizándose para la identificación o seguimiento de organismos en hábitat
complejos con muchos microorganismos, tales como suelos o muestras clínicas que contengan
una mezcla de muchos organismos.

Para el uso de esta técnica se requiere la preparación de anticuerpos específicos contra el

microorganismo de interés lo cual es largo y laborioso. Sin embargo, para el estudio de
microorganismos clínicos, los anticuerpos relevantes están disponibles comercialmente.

Esta técnica se basa en la reacción antígeno anticuerpo, como hemos comentado tiene una
particular importancia en microbiología clínica y para su observación es necesario el microscopio
de fluorescencia.

*Proteina fluorescente verde para el etiquetado celular: Las células bacterianas pueden ser
alteradas mediante técnicas de ingeniería genéticas para volverlas fluorescentes (epitopar,
marcar). Se puede insertar en su genoma el gen que codifica por la proteína verde fluorescente
(GFP). Al expresase, las células que contienen la GFP aparecen de color verde cuando se observan
a un microscopio de luz ultravioleta. Las células etiquetadas con GFP se pueden introducir en un
medio, como las raíces de las plantas, y seguir con el microscopio la célula etiquetada. Aunque
este método no resulta útil para medir poblaciones naturales. Con este método, los ecólogos
microbianos pueden estudiar in situ la competencia microbiana entre la microbiota nativa y la
cepa con GFP introducida, o evaluar el efecto de la perturbación en el ambiente. La GFP también
se puede utilizar como un gen indicador “reporter” fusionado a un operón para estudiar la
regulación de la transcripción de distintos promotores por medición de la fluorescencia.

Por lo tanto, este método no es un método de tinción sino que es un método de etiquetado
molecular.

● Técnicas genéticas.
o Sondas de ácidos nucleicos e hibridación in situ.

La sonda de ácido nucleico es un oligonucleótido de DNA o RNA complementario a un gen diana,

son un instrumento poderoso para identificar y cuantificar microorganismos en la naturaleza.

La técnica de hibridación fluorescente in situ (FISH) usa sondas de DNA o RNA fluorescentes para
identificar organismos que contienen una secuencia de ácido nucleico que es complementaria a la
sonda. La técnica FISH es una herramienta muy común en ecología microbiana y permite la
identificación rápida de organismos patógenos específicos en la industria alimenticia y en el
diagnóstico.

Su uso consiste en el marcado de sondas de diferentes maneras, con reactivos, convirtiendo a la

sonda en un chivato del gen que estamos buscando. También podemos usar para ello colorantes
fluorescentes (FISH). Si la sonda es marcada radioactivamente, la detección de la bacteria a
estudiar será con películas de radiografías, si es con fluorescencia será a través de microscopía
fluorescente.

Esta técnica se puede usar para realizar estudios filogenéticos. Para ello, se utilizan la sonda
signatura para especies microbianas individuales, así como para dominios enteros de organismos.
La sonda signatura reconoce una secuencia concreta, y compartida por distintos taxones
microbianos. Son sondas dirigidas a detectar la subunidad ribosómica 16 s en procariotas y 18 s en
eucariotas, son particularmente útiles porque evolutivamente han cambiado muy poco su
secuencia. Dependiendo de lo específica que sea la sonda se podrá diferenciar en la muestra
ambiental entre bacterias y otros, o incluso entre taxones inferiores como bacterias
endosporuladas o incluso a nivel de especie. Si por ejemplo fuera una sonda universal de arqueas
hibridaría con todas ellas, si lo es de bacterias hibridaría solo con bacterias.

Para utilizarla, se recoge la muestra, se permeabilizan las células, se le añaden la o las sondas
marcadas que hibridarán con el ARN r de la subunidad pequeña de los ribosomas, se hacen una
serie de lavados y se ve la fluorescencia en prácticamente toca la célula por la microscopía de
fluorescencia.

La tecnología FISH también puede hacer uso de múltiples sondas filogenéticas. Con un conjunto de
sondas, cada una diseñada para reaccionar con un organismo concreto de un grupo y cada una
con su propio colorante fluorescente, con la FISH se pueden obtener imágenes de muchos taxones
en un hábitat, en un solo experimento. Si se combina la FISH con la microscopía confocal se puede
explorar poblaciones microbianas en profundidad, como por ejemplo en una biopelícula.

Por lo tanto, presenta diversas aplicaciones, podríamos calcular el % de arqueas de una muestra
hibridándolas con una sonda, y si utilizamos DAPI podríamos teñir toda la muestra sabiendo así el
% de arqueas respecto a las totales.
 o Amplificación de DNA por PCR y DGGE.

La PCR relaciona genes específicos con microorganismos específicos. Muchos estudios en ecología
microbiana no necesitan aislar los microorganismos, ni siquiera por microscopia con las tinciones
antes descritas. Generalmente, el objetivo de un estudio es evaluar la biodiversidad de un hábitat
sin emplear técnicas de cultivo, ni observar células. Con este objetivo, se han aislado y
caracterizado genes específicos como medida de la biodiversidad de la comunidad microbiana.

Los pasos que se siguen para la PCR se corresponden a la fotografía.

Por lo tanto, el procedimiento consiste en que se mezclan el DNA

molde, los oligonucleótidos, los cebadores específicos que flanquean
la zona de interés, la polimerasa, magnesio, los dNTP y se meten en
un termociclador.

En él se generan los ciclos de desnaturalización para abrir la doble

cadena del DNA molde, produciéndose una minihibridación donde
los cebadores y los oligonucleótidos se unen específicamente al DNA
si está en nuestra muestra para amplificarlo, y se produce la
extensión que es el funcionamiento de la polimerasa.

Esta técnica sirve como diagnóstico para detectar concretamente un

microorganismo y también tiene aplicación en ecología microbiana
para establecer fenotipos.

Existen cebadores comerciales para aplicar a un determinado gen de

una actividad metabólica o podemos recurrir al uso de cebadores
(primers) universales que codifican el RNA ribosómico 16s, del
dominio Bacteria.

Lo que se hace para diseñar esos cebadores es utilizar secuencias

conservadas y secuencias hipervariables de un determinado gen.
La estrategia es diseñar cebadores de secuencias conservadas que flanqueen secuencias
hipervariables, esas secuencias, serán diferentes en diferentes microorganismos. Con estos
cebadores hago la PCR.

Lo primero tenemos es la muestra natural donde hay una mezcla de bacterias u otros
microorganismos, extraemos el DNA de toda la comunidad con kits comerciales. Una vez que
tenemos el DNA eso es el DNA molde, los cebadores o los hemos diseñado o son comerciales,
pueden ser a nivel de taxon o a nivel de bacteria formadora de endosporas, por ejemplo, si fueran
más restrictivos.

Lo que se obtiene es un amplicón que se corresponde a una banda, ya que se amplifica el gen X de
todos los microorganismos que tengan estas secuencias conservadas, entonces se hace la PCR se
carga en un gel de agarosa normal y ahí saco mi producto de la PCR, generalmente se obtiene una
sola banda, pero esa banda está constituida por múltiples secuencias diferentes aprovechando
esas secuencias conservadas y esas secuencias hipervariables. El producto de PCR se puede digerir,
clonar y secuenciar. A partir de las secuencias obtenidas se construye un árbol filogenético.

Una de las técnicas más usadas es la DGGE

(electroforesis desnaturalizante en gradiente
en gel): es un método de electroforesis que
separa los genes del mismo tamaño que
difieren en la secuencia de bases. La técnica
utiliza un gradiente de urea y formamida que
desnaturaliza el DNA. Un fragmento de DNA
bicatenario se desplaza por el gel y cuando
llega a una determinada concentración
“desnaturalizante” las cadenas de DNA se
separan y el desplazamiento se interrumpe.

Por lo que se preparan los fragmentos por

PCR, y una vez los hemos obtenido se cargan
en este gel en gradiente de urea y
formamida. Esa mezcla lo que hace es
competir por los enlaces de los puentes de
hidrógeno entre las bases nitrogenadas.
Cuando una secuencia encuentra la
concentración del agente desnaturalizante
apropiada para separar la doble banda inicial
del DNA en bandas individuales, deja de
migrar. Eso ocurre por la competición entre
los dobles y triples enlaces de las bases nitrogenadas.

Por lo tanto, con el gel de agarosa normal conseguimos separar el DNA por su tamaño y en el
DGGE se separa por su secuencia. Posteriormente se extrae, se purifica y se secuencia.
Las bandas individuales obtenidas por DGGE se puede cortar y secuenciar. Usando como gen diana
el rRNA 16s, el análisis por DGGE proporciona una visión detallada del número de filotipos (genes
de rRNA 16s distintivos) presentes en el hábitat. Secuenciando estas bandas, es posible
determinar las especies presentes en la comunidad por comparación con las secuencias de
especies conocidas disponibles a partir de bases de datos apropiadas. Con otros genes (por
ejemplo, genes metabólicos) se obtiene información acerca del número de tipos diferentes de
organismos presentes en la comunidad que contiene el gen específico. El análisis por DGGE revela
la biocomplejidad de un hábitat con respecto a un gen específico.

Con el gel de agarosa normal coneguimos el DNA por tamaño solo, aquí se separa por secuencia.
Con un visturí las corto se extrae y se purifica y ya se secuencian. Y cada secuencia corresponde a
lo que se denomina filotipo difernetes microorganismos con distintas secuencias de ese mismo
gen que se ha amplificado.

● Metagenómica o genómica ambiental.

Se trata del estudio de la información genética que está contenida en todos los
microorganismos que se encuentran en una comunidad o muestra ambiental. Utiliza la
secuenciación y el análisis de todos los genomas microbianos de un ambiente concreto
para caracterizar el contenido genético completo de dicho ambiente.

El objetivo inicial de la metagenómica era la captura de fragmentos al azar de DNA

ambiental en plásmidos pequeños o grandes, que eran usados para crear genotecas de
 DNA (librerías metagenómicas) ambietal para secuenciación, para buscar nuevos genes
(ej. Producción de antibióticos)

Con la introducción de los

métodos de la tecnología de
secuenciación de DNA de alto
rendimiento por secuenciación
masiva de NGS (Next Generation
Sequencing) se acelera el
proceso y se elimina la
necesidad de clonar el DNA. Así
el DNA se puede secuenciar
directamente del DNA total.
Puede detectar genes nuevos y
organismos nuevos.

El procesamiento de la muestra, es decir

la extracción del DNA, se lleva a cabo
mediante kits comerciales.

Para la secuenciación del DNA hay varias

opciones, entre ellas: librerías
metagenómica, secuenciación masiva de
alto rendimiento, genes concretos RNAr
16S.

Análisis taxonómico y funcional: obtener

una visión integral del funcionamiento de
las comunidades microbianas en todos
los ecosistemas, que nos permiten
responder a las preguntas: ¿Quién está
allí? y ¿Qué estan haciendo?

2. Medida de la actividad microbiana en la naturaleza

La actividad microbiana in situ se puede medir mediante la utilización de:

- Radioisótopos
 - Microelectrodos
- Isótopos estables
- Ensayos enzimáticos

1 ) Uso de radioisótopos.

Consiste en medir la tasa natural de captación de

sustratos marcados radiactivamente que se le
suministra a una muestra microbiana

Los análisis usando radioisótopos son muy sensibles y

muy específicos para medir procesos químicos; usan
tiempos cortos de incubación; las mediciones
obtenidas son mas representativas de las muestras
como existen en la naturaleza; hay que hacer control
con células muertas para verificar que ocurre un
proceso bioquímico y no una transformación químicia.

2) Uso de microsensores o microelectrodos

- Hay electrodos de vidrio muy finos que miden ph, oxígeno, N2O, CO2, H2 O H2S.

- Usado para el estudio de transformaciones químicas y fotosíntesis en tapetes microbianos.

- Los tapetes microbianos son comunidades microbianas estratificadas

conteniendo usualmente cianobacterias en las capas superiores, bacterias
fototróficas anoxigénicas en las capas subsiguientes y bacterias
quimiorganotrofas en las capas inferiores.

- Los tapetes microbianos son encontrados a menudo en las zonas

intermareales y
junto a fuentes
termales.
 3) Uso de isótopos estables

Los isótopos estables no son radiactivos y se utilizan para el estudio de diversas transformaciones
microbianas en la naturaleza. Los elementos mas comúnmente usados para estudios con isótopos
estables en la ecología microbiana son el carbono y el azufre.

En la naturaleza, el carbono se encuentra principalmente como 𝐶 12 , y en pequeña cantidad

(alrededor del 5%) como 𝐶 13 . Lo mismo sucede con el azufre, cuya forma principal es el 𝑆 32 , pero
también se encuentra en menor cantidad como 𝑆 34 .

Las reacciones bioquímicas tienden a favorecer el isótopo más liviano, los más pesados son
discriminados negativamente.

Fraccionamiento isotópico: las moléculas

producidas bioquímicamente son más livianas que
los compuestos producidos gegoquímicamente.
Esto es particularmente cierto para la enzimas que
fijan CO2.

La composición isotópica de un organismo tiende

a aproximarse a la composición isotópica de su
principal alimento. Esto permite rastrear el flujo
de C a través de un ecosistema. El fraccionamiento
isotópico del C en una muestra se calcula como el
grado de emprobecimiento en 𝐶 13 en relación al
𝐶 12 , se representa en partes por mil: 𝐶 13 (cuanto
menor es su valor mayor actividad biológica).

La actividad de las bacterias reductoras de sulfuro

es fácil de reconocer a partir de su
fraccionamiento de los isótopos de S en los
sulfuros: sulfuro de hidrógeno microbiano
(sedimentos marinos) está enriquecido en 𝑆 32

El fraccionamiento isotópico del S en una muestra

se calcula como el grado de empobreciomiento
en 𝑆 34 en relación al 𝑆 32 (Cuanto menor es su
valor mayor actividad biológica)
4) Determinación de actividades enzimáticas.

Podemos hacer estudios más concretos, diseñando medios de cultivo con un fin concreto
podemos aislar bacterias concretas con una derterminada actividad enzimática de la muestra.
TEMA 3. Ecosistemas microbianos. Microbiología de ecosistemas terrestres.
Microbiología de ecosistemas acuáticos. Microbiología del aire.
Ambientes terrestres: microbiología del suelo.

- Suelo: complejo dinámico, caracterizado por una atmósfera interna, una cantidad
particular de agua, elementos minerales, flora y fauna determinadas. “La parte más
diversa, biológicamente, de la Tierra”.

- Composición del suelo:

● Fracción mineral (la más
abundante)
● Fracción orgánica
● Agua
● Aire
● Organismos vivos

Distribución de grupos microbianos en el perfil

del suelo :

El inventario de la vida (en términos de Biomasa): cuando se estima la biomasa del planeta, las
plantas representan el 80% de la biomasa total, el segundo puesto lo ocupan los microorganismos
de todos los ecosistemas con el 15% de biomasa (publicado en PNAS 2018).

¿Cómo se encuentran los microorganismos en el suelo? La mayor parte se encuentran adheridos a

las micropartículas del suelo (formando biopelículas) y una pequeña parte la encontramos en el
agua intersticial.

Normalmente a nivel
metabolico, se encuentran
metabolicamente latente
(festín hambruna),
durante un período tienen
a sus disposición mucha
materia orgánica,
mientras que en otro
período no tienen nada.
MÉTODOS DE ESTUDIO DE LOS MICROORGANISMOS DEL SUELO

1. Recogida de la muestra de suelo

2. Recuento y detección de microorganismos:
a. Recuento de viables: en placa, NMP..
b. Tinción y anticuerpos fluorescentes
c. Sondas de ácidos nucleicos
d. Amplificación de DNA por PCR
e. Metagenómicas
3. Estudio de actividad microbiana en el suelo de la composición y diversidad

RECOGIDA DE MUESTRAS DE SEDIMENTOS Y SUELO

El suelo es una muestra muy rica en microorganismos, no

necesitamos medidas asépticas estrictas, a diferencia que en
el subsuelo (todo en condiciones asépticas). Podemos hacer
desde algo muy sencillo, sobre tubos o bolsas. Pero si lo que
vamos a analizar es un estudio serio tenemos que hacer un
planing de muestreo con todo etiquetado y planificado.

Obtención de muestras mediantes corers, perforadoras,

sondas, etc.

COMPOSICIÓN Y DIVERSIDAD MICROBIANA DEL SUELO:

Estos datos son resultado de múltidud de estudios, estimaciones de recuentos de viables, que
evidentemente varia con el tipo de suelo, ya que no es lo mismo un suelo que esté a ph ácido que
uno que esté a ph neutro, varía mucho con la humedad.
Como vemos las bacterias siempre ganan en número, van a dominar en cantidad y biodiversidad
por encima de los hongos. Otra cosa es la biomasa, en este caso los hongos están por encima de
las bacterias, esto es lógico ya que el cuerpo del hongo (estamos hablando de células eucarioticas)
es mucho mayor que la biomasa que aporta una célula
bacteriana.

En las capas más superficiales del suelo la carga

microbiana es mayor y a medida que profuncizamos en
suelo la carga microbiana es menor.

Si hay plantas en el suelo la mayor parte de

microorganismos los vamos a encontrar en la zona circundante a las raíces de éstas, lo que
conocemos como rizobioma o microbioma de la rizosfera.

Influecia de la proximidad a las raíces

sobre la abundancia de bacterias

¿Qué hacen las bacterias en la zona circundante a las raíces de las plantas? ¿Por qué la cantidad de
bacterias es mayor en esas zonas? Es algo de sentido común, en esa zona hay liberación de
nutrientes que las bacterias aprovechan. Esto también ocurre a la inversa, hay degradación de
determinados compuestos (muchos de ellos inorgánicos) por parte de las bacterias y que las
plantas necesitan. Muchas de las bacterias del rizobioma están interaccionando en positivo con las
raíces de las plantas, estableciendo relaciones de mutualismo, comensalismo. Hay otro porcentaje
de bacterias ``malas´´ que son las patógenas para las plantas.
IMPORTANCIA DE LOS MICROORGANISMOS COMO INDICADORES DE LA CALIDAD DE SUELOS.

Los microorganismo se pueden contemplar como buenos indicadores de la calidad microbiana e

incluso fertilidad del suelo. El cambio climático está intensificando la aridez del planeta, lo que
repercute en los microorganismos del suelo y una menor cobertura vegetal. Los microorganismos
tiene un particular papel en los suelos aridos.

Se estima que el 35% de la masa continental de la Tierra

es árida, y consta de unas formaciones llamadas costras
biologicas del suelo que son aliadas contra la
desertización. Cuando estas costras se analizan
bacteriologicamente se ve que están formadas en su
mayor parte por bacterias del género Microcoleus que
actúan como productoras primarias. Junto a estas
cianobacterias pueden aparecer hongos, microalgas,
líquenes. Estas costras son fundamentales para frenar la
erosión.

La fertilidad de los suelos depende en gran medida de sus propiedades bioquímicas y

microbiológicas. Bacterias, hongos y ciertos artrópodos descomponedores de suelo son
responsables de la retención de nutrientes en el suelo. Si dichos nutrientes no son retenidos
dentro un ecosistema, la futura productividad del mismo puede ser reducida.

En términos generales se pueden hacer recuentos de bacterias y de hongos para demostrar la

calidad y fertilidad de los suelos.

¿Qué beneficios aportan los microorganismos al suelo?:

Bacterias:

- Se expresa en UFC/g de suelo

- Su función básica es la descomposición y mineralización de la materia orgánica
- Mediante su metabolismo liberan al medio sustancias (enzimas, proteínas, metabolitos,
nutrientes, etc)
- Propician un incremento en el desarrollo de las raíces de plantas
- Mejoran las propiedades físicas del suelo, textura, aireación, etc.

Hongos:

- Su función básica es descoposición y mineralización de materia orgánica

- Favorecen la retención de agua por el sulo y su textura.

Respiración microbiana o actividad microbiana del suelo:

- Se determina mediante el comsumo de oxígeno en el medio o bien estimando la

transformación de carbono orgánico en CO2.
DIVERSIDAD PROCARIÓTICA EN EL SUELO

En esta imagen podemos observar un análisis en el que se han estimado secuencias de genes que
codifican RNAr 16S del dominio bacteria y dominio arquea.

Representado en sectores según su abundancia, vemos que las bacterias más abundantes son las
proteobacterias (bacterias importantes gram -). En segundo puesto tenemos las acidobacterias y
los bacteriodetes.

Las arqueas (en color violeta) en términos generales suelen ser menos abundantes que las
bacterias.

Otro aspecto son los análisis de los microorganismos del subsuelo, hasta hace unas décadas se
pensaba que por debajo de los 100 metros no había bacterias, pero se ha demostrado que sí
incluso hasta los 3000 metros de pronfundidad.

En esta foto podemos observar como se recoge una muestra de

agua a 55 ºC de una fisura minera. Todos estos estudios se han
podido a llevar a cabo gracias a los equipos de perforación que se
han diseñado y que se están utilizando para extraer muestras por debajo de 600 metros. Todo
esto de manera aséptica.

Microbiología de ecosistemas acuáticos

- La hidrosfera es un hábitat más adecuado que la atmósfera para el crecimiento

microbiano, en ella existen poblaciones microbiana autóctonas. La hidrosfera esta
compuesto por hábita de agua dulce (3%) y hábitat marinos (97%).
- Ofrece ecosistemas donde la diversidad microbiana es enorme.
- Neuston: conjunto de microorganismos que vamos a encontrar en las capas superficiales
de los ecosistemas acuáticos. La carga microbiana puede ser de 10 a 100 veces mayor que
en las capas subyacentes.
- El desarrollo microbiano en los ambientes acuáticos está condicionado por varios factores
físico y químicos (en rojo aparecen los factores más importantes):
⮚ Temperatura
⮚ Presión hidrostática
⮚ Luz
⮚ Salinidad
⮚ Turbidez
⮚ Ph
⮚ Compuestos orgánicos e inorgánicos

1. Hábitat de agua dulce.

Formados a su vez por ecosistemas lénticos y lóticos. En los ecositemas lénticos no hay realmente
o de forma importante una mezcla horinzontal del agua, lo que nos va a permitir distinguir una
disposición horizontal de comunidades bacterianas. Sin embargo, en los sistemas lóticos si existe
una mezcla de agua y por tanto no vamos a poder distinguir esa disposición de bacterias a lo largo
de un eje vertical.
Dentro de los ecosistemas lénticos vamos a empezar con los lagos, en los cuales podemos
distinguir dos situaciones un poco extremas:

a. Lago oligotrófico: pobre en nutrientes, agua saturada en oxígeno, aguas transparente, no

turbias, lagos en los que la profundidad de la zona fótica es muy importante ya que la luz
penetra bien en todos los puntos del lago. La carga microbiana es baja, encontramos
bacilos gram -, no patógenos del hombre.

b. Lago eutrófico: ricos en nutrientes, ricos en materia orgánica. Se observan aguas turbias
debido a la materia en suspensión, la luz no penetra facílmente, por lo que tendremos luz
en las capas superficiales. Distinguimos una capa superficial rica en oxígeno y una capa
profunda anóxica. En estas capas profundas debido a la falta de oxígeno empiezan a morir
organismos macroscopicos y por la fuerza de la gravedad tienden a depositarse en el
fondo. Por tanto tenemos una situación de un lago con fondos anóxicos ricos en materia
orgánica.

LAGO EUTRÓFICO

Como hemos descrito anteriormente se trata de un lago con fondos anóxicos y ricos en
materia orgánica. Estos lagos son muy sensibles a las variaciones estacionales.

¿Cómo afectan las estaciones a una lago eutrófico?

En las estaciones cálidas, es decir, en verano y primavera ocurre que la capa más superficial
del agua la vamos a tener más caliente y menos densa, llamandose EPILIMNION, y una capa
más pronfunda fría y densa, llamada HYPOLIMNION. Entre estas dos capas tenemos una zona
intermedia llamada TERMOCLINA, que se define como una capa de disminución rápida de la
temperatura. (La línea punteada mide temperatura)

Aquí se establecen distintos gradientes de parámetros fisicoquímicos, vamos a tener oxígeno

desde una situación de saturación en epilimnion y va disminuyendo hasta llegar a las capas
anóxicas de los fondos. También vamos a encontrar un gradiente inverso al de oxígeno de
sulfuro de hidrógeno, de manera que vamos a tener mayor conentración en la parte anóxica
que tiende a difundir a las capas más superficiales y va disminuyendo.

En invierno este hecho no es tan patente, ya que la capa más superficial puede llegar a
congelarse y el
aire entrar por los
cristalitos de hielo
y de alguna
manera remover
toda el agua del
lago.

ESTE FENÓMENO
ES LO QUE
CONOCEMOS
COMO
ESTRATIFICACIÓN
TÉRMICA
ESTACIONAL.

En términos microbiológicos ocurre lo siguiente: en estos lagos eutróficos estratificados

tenemos acumulación en los fondos anóxicos de materia orgánica, una capa más superficial
donde llega la luz aeróbica, de manera que vamos a ver un gradiente inverso de oxígeno y
sulfuro. Este esquema se parece a la columna de Winogradsky, tenemos los mismos
gradientes y además si empezamos a describir las poblaciones microbianas a lo largo del eje
vertical del lago vemos desde bacterias anaerobicas fermentadoras y respiradoras anaeróbicas
que oxidan la materia orgánica en condiciones anaeróbicas. Las sulfato reductoras son las que
producen el sulfuro y además siempre las vamos a tener asociadas a fondos anóxicos ricos en
materia orgánica, éstas forman fangos de color oscuro como consecuencia de la asociación del
sulfuro producido por ellas con iones metálicos del suelo, dando lugar a sulfuros metálicos que
le proporciona ese color oscuro al fango. Las bacterias sulfato reductoras son las responsables
de ese gradiende inverso sulfuro, este sulfuro difunde a las capas más superficiales y aquí ya
empiezan a crecer bacterias fototrofas anoxigénicas (rojas, verdes del azufre). En las capas ya
superficiales encontramos fototrófos oxigénicos (cianobacterias).

IMP
ORT
ANT
E:
EN
EL
AUD
IO
DICE
QUE
LAS
COMUNIDADES BACTERIANAS YA LAS HEMOS VSITO EN LA COLUMNA DE WINOGRADSKY, Y
QUE POR TANTO SI PREGUNTA ESTO EN EL EXAMEN LE TENEMOS QUE DESCRIBIR LO QUE YA
VIMOS.

Otro concepto es el proceso de eutrofización, en el que un lago o cualquier ecosistema

acuático oligotrófica puede transformarse en un ambiente eutrofizado. Esto puede ocurrir
porque reciba un aporte directo de materia orgánica, o lo que es más usual, que reciba un
aporte continuo de nitrógeno y fosfóro procedente de los abonos utilizados en agricultura. Los
sistemas acuáticos son limitantes en estos nutrientes y cuando reciben un aporte extra de
éstos disparan el crecimiento de manera masiva de cianobacterias y microalgas, creciendo en
la superficie. Estos actúan como productores primarios y esto conlleva el desarrollo de otros
organismo que consumen el oxígeno de la masa de agua, produciendo condiciones
anaeróbicas, produciendo
la muerte de otros
organismos, los cuales se
acumulan en el fondo
aumentando así la
materia orgánica. De este
modo pasa un lago
oligotrófico a eutrófico.

Otra cosa muy diferente

es lo que ocurre en los ríos, estos se tranta de sistemas lóticos donde la distribución horinzatal
del agua no se da. Los ríos reciben importantes aportes industriales y urbanos de materia
orgánica, aportes de residuos tóxicos y aportes de fertilizantes agrícolas.

Cuando este aporte de materia orgánica no es excesiva, es decir no supera la capacidad

depurativa del río, este puede autodepurarse. Por el contrario si son muy altos estos aportes
se altera drásticamente la microflora. Predominan las baterias coliformes, estreptococos
fecales y algunas especies de Bacillus, Proteus, Clostridium, Sphaerotilus, Beggiatoa, Thiothriz,
Thiobacillus y virus del grupo entérico.

Cuando hay una marcada deficiencia de oxígeno se producen malos olores y compuestos
tóxicos para los organismos superiores.

Existe un parámetro muy utilizado, no solo en los ríos, sino en todas las masas de agua
llamado DBO (demanado bioquímica de oxígeno). Este parámetro se define como la cantidad
de oxígeno necesaria para que la bacterias de una masa de agua degraden la materia orgánica
presente en esa agua. Cuanto mayor es la DBO, mayor cantidad de MO y también mayor
cantidad de bacterias.

¿Cómo se mide en el laboratorio? Cogemos la muestra de agua que queremos analizar en una
botella hermética, la incubamos a 20ºC durante 5 días y tras el período de incubación
medimos la concentración residual de oxígeno.

Hay otro parámetro que se usa menos llamado demanda química de oxígeno, este se
determina usando un agente oxidante (dicromato potásico). Después del ensayo lo que se
mide es el dicromato potásico residual, cuanto más se haya consumido más materia orgánica
habia en la muestra. Cuanto mayor es la DQO mayor cantidad de materia orgánica en la
muestra.

Cuando comparamos ambos parámetros el DQO siempre es mas alto que DBO en una
muestra, ya que se trata de una medida química y cualquier partícula no biológicos pueden
oxidarse y consumir dicromato. Ambos procesos no se pueden comparar porque la DQO da
falsos positivos.
 2. Hábitat de agua salada

Otra parte muy importante de la hidrosfera es el medio marino (97%), aquí tenemos la mayor
parte de la diversidad microbiana, aunque mucha de ella desconocida. Hay dos parámetros muy
importantes: la temperatura y la presión, la mayor parte del agua está por debajo de los 100
metros a una temperatura cte de 3ºC. La presión aumenta 1 atmósfera cada 10 metros.

¿Qué tipo de microorganismos encontramos en el medio marino?

 Existe una
mayor
diversidad microbiana en las capas
superficiales y a manera que vamos
profundizamos va disminuyendo. Con
las arqueas ocurre lo contrario,
conforme vamos profundizando la
diversidad de éstas va aumentando. Esto
ocurre debido a que las arqueas están
adaptadas a estas condiciones extremas.

Con un análisis de metagenómica podemos concluir que la mayoría de microorganismos

encontrados en los ambientes marinos son las
proteobacterias. Otro grupo abundante son las
cianobacterias, las cuales forman parte del
fitoplancton y además intervienen en el ciclo del
carbono ya que participan en la fijación de CO2 y
liberación de O2 al planeta. También son
relevantes los bacteroidetes: bacterias Gram -,
anaerobias, muy abundantes en los ambientes
naturales (suelo, sistemas acuatico, tracto digestivo). Las arqueas están también muy
representadas y otros microorganismos, no identificados.

Los datos son resultados de análisis conjuntos de 25975 secuencias de genes de rRNA 16S de
diversos estudios de aguas marinas pelágicas.

Tara oceans: estudio metagenómico del bacterioplancton

Es un estudio en el que se recogieron muestras de aguas pelágicas (hasta profundidades de 1000

m). Y se concluyó que hay entorno a 106 bacterias/ml, muchas de las cuales son fijadoras de CO2, y
suponen el segundo pulmón del planeta.

Expedición Malaspina: biodiversidad en el océano profundo.

Recogieron muestras de agua de zonas bentónicas (mayor profundidad, por debajo de 3000 m), y
pusieron de manifiesto que hay diversidad microbiana que todavía no conocemos.

Esto es relevante ya que los ambientes acuáticos constituyen gran parte del planeta. Pero el
desarrollo de nuevas técnicas genómicas nos permite explorar la diversidad microbiana en las
profundidades de los océanos y evaluar su papel en el metabolismo global del océano.

2.1. Recogida de muestras de agua

Las muestras se recogen con dos grandes objetivos:

● Análisis metagenómico: estudio de la biodiversidad.

En ambientes marinos se emplean las botellas de Niskin. Permiten recoger muestras a distintas
profundidades. En una columna de agua podemos usar varias en paralelo.

En estos análisis los barcos en los que se lleva a cabo la expedición suelen estar equipados con un
laboratorio, en el cual se filtran las muestras recogidas para coger las posibles bacterias y con los
kits para muestras de agua, se obtiene el DNA. El DNA ya es más estable y se puede conservar
mejor. La secuenciación ya se hace posteriormente.

● Análisis sanitario: Es importante ya que el agua es un importante transmisor de

microorganismos causantes de diversas enfermedades protozoarias, víricas,
bacterianas, como por ejemplo, Vibrio cholera, Salmonella Typhi…

Para el análisis hay una normativa muy detallada. Para recoger la muestra existen muestreadores
automáticos, otros más básicos. Las muestras de agua se guardan en botellas de cristal
previamente esterilizados en el autoclave, se recogen las muestras, se guardan a 4 oC hasta su
análisis.

En general, podemos medir varios parámetros:

Bacterias heterótrofas mesófilas. No tienen por qué ser patógenas. Se pueden cuantificar por
diluciones seriadas, filtración en membrana… Los medios de cultivo que se emplean aportan
compuestos orgánicos y nutricionalmente rico. Con esto se hace un recuento de viables, dándonos
una idea de la carga microbiana que tiene el agua: si es muy alta, no puede ser utilizada para
bebida.
Indicadores de contaminación fecal en el agua: nos muestran si el
agua ha recibido o tiene contaminación fecal. Los más utilizados son
coliformes (E. coli), estreptococos fecales (Enterococcus faecalis),
clostridios sulfatos reductores (Clostidium prefringens) y colifagos
(bacteriófagos que infectan E. coli). Todos estos indicadores viven en
el intestino de animales y del hombre.

En su conjunto, las técnicas que detectan coliformes como indicador

fecal se denominan colimetrías. Los coliformes son enterobacterias
que fermentan la lactosa. Hay enterobacterias que fermentan la
lactosa que también se denominan coliformes.

- Coliformes totales: son aquellas enterobacterias que

fermentan la lactosa a una tª entre 35-37oC (mesófilas) produciendo ácido y gas. Pe: E.
coli, Citrobacter, Klebsiella…
- Coliformes fecales (termorresistentes): están dentro del grupo de los coliformes totales.
Son aquellos que fermentan la lactosa a 44’5 oC, aunque también pueden fermentarla a
35-37 oC. Por ejemplo: E. coli (por excelencia).

Una técnica común para determinar la contaminación fecal en aguas que se sospecha que están
muy contaminadas es la técnica del número más probable (NMP).

De la muestra de partida realizamos diluciones seriadas.

1. Etapa presuntiva: cultivamos las diluciones seriadas en un medio selectivo y diferencial

para coliformes a 35-37 oC. Incubamos 24h.
2. Lo pasamos a BGB, un caldo de verde brillante, que confirma si hay alta concentración de
sales biliares. Se incuba otras 24h a 35-37 oC.
3. Los tubos positivos se inoculan en medio de cultivo EC (a 44’5 oC), detectan y
cuantificamos coliformes fecales.

Los medios que se utilizan para la colimetría son todos selectivos y diferenciales para coliformes. Y
todos llevan como sustrato la lactosa. Llevan indicadores de pH (fermentación de la lactosa) y
también llevan campanas de durham (retiene el gas producido). Tubo positivo, vira el indicador de
pH a ácido y gas en la campana.

Otro método es la filtración en membrana. En este caso, a

diferencia del anterior, concentramos la muestra, ya que no
debería contener muchos coliformes.

Se hace pasar la muestra de agua pro un filtro donde

quedan las bacterias, se cultivan en un medio selectivo y
diferencial (Agar MacConkey). Sobre el propio filtro se
desarrollan las colonias de los coliformes fecales. Se
cuantifican las UFC/vol de muestra.

También hay estrategias específicas para determinar los

estreptococos (estreptometrías). Se suele buscar
Enterococcus faecalis: Gram +, aerotolerante. Los medios de cultivo suelen llevar acida sódica, la
cual bloquea la cadena de transporte de electrones (medio selectivo – ellas fermentan).
Clostridium prefingens también se usa medios de cultivo con sulfito y las colonias que se forman
son negras (por la reducción del sulfito).

Tanto para las estreptometrías como para las colimetrías hay sistemas estandarizados para
detectar coliformes y enterococos. Los dos sistemas se basan en el sistema de sustrato definido.

Para la detección de coliformes (Colilert), los sustratos definidos son:

ONPG (galactósido, incoloro) con la beta galactosidasa galactósido + o-nitrofenil (amarillo). Por
tanto, si en nuestra muestra hay coliformes totales, tendremos un color amarillo. Este método
también incorpora MUG.

MUG (glucurónido, incoloro) con la beta glucuronidasa � glucurósido + 4-metilumberifelona (azul

con luz UV). Con este sustrato vemos la actividad de la beta glucuronidasa, la cual solo está
presente en los coliformes fecales.

Para la detección de estreptococos (Enterolet). Son los mismos sustratos definidos que en Colilert,
pero ahora el MUG es un glucósido, medimos la actividad beta glucosidasa / también puede usar
ONPG. Además, también incorpora agentes selectivos como el tiosulfato de sodio, sustituye a la
acida.

*Hay que distinguir entre un organismo indicador y patógeno. Un indicador:

- Debe estar presente en todos los casos de vertido fecal.

- Deber perdurar en el agua más que cualquier patógeno del agua.
- Deben existir métodos fiables y reproducibles para su detección. Suelen estar
recogidos en la normativa.
- Normalmente, no son patógenos directos del hombre.
Los recuentos de colonias para el agua de bebida, los análisis son muy restrictivos, no se permiten
presencia de patógenos. Para detectarlos podemos utilizar: PCR, anticuerpos fluorescentes,

medios de cultivo y diferenciales para un patógeno concreto… Si hay un rango permitido de

indicadores de contaminación fecal.

3. Microbiología del aire

No existen microorganismos autóctonos del aire. Encontramos organismos asociados a partículas

de polvo, microgotas, micropartículas, contaminantes…

Es importante estudiar los microorganismos del agua y suelo tanto como los del aire, ya que una
persona adulta, respira una media de 8 L/min.

El aire es una mezcla de gases, principalmente, N y O2, partículas de agua y de polvo. Los
contaminantes presentes en el aire son:

Fisicoquímicos: son los más abundantes. NO2, principal contaminante, procedente del tráfico
rodado. También hay SOx, O3, COV, PM.

- Pm10: en torno a 10 micras.

- Pm2,5: 2,5 micras o inferiores.

Son importantes ya que se ha visto que tienen una repercusión directa sobre la salud (pe. asma).
Hay leyes a nivel local; directiva europea que indica que las partículas no pueden superar los 50
µg/m3 de aire.

Biológicos: hay que tenerlos en cuenta ya que se determinan la presencia de partículas biológicas,
pe. polen, esporas de hongos, de bacterias, bacterias, virus… Algunas de ellas se relacionan con
enfermedades respiratorias, principalmente, como resfriados, bronquitis, amigdalitis, meningitis,
tuberculosis, neumonía, micosis, micotoxicosis, alergias (acción sinérgica) …

Los contaminantes biológicos son variables ya que viajan asociados a micropartículas (de polvo,
microgotas, aerosoles…), cuando estas partículas portadoras de microorganismos pasan al aire, las
partículas (+ de 5µm) se secan y su tamaño se hace inferior (0.1 – 1 µm) pudiendo entrar en las
vías respiratorias inferiores (alveolos) y de ahí se puede producir un proceso infeccioso o si es una
partícula fisicoquímica se produce una cicatrización de parte del tejido alveolar, perdiendo así
capacidad pulmonar.

Aerobiología (años 30, por Fred E. Meier): se refiere a la disciplina que estudia las partículas
biológicas que se pueden distribuir por el aire. En España existe la red española de aerobiología y a
nivel local, la región de Murcia también tiene la suya.

3.1. ¿De dónde proceden los microorganismos que encontramos en el aire?

Proceden de todas las actividades y superficies de todos los ecosistemas y microbiomas:

- Directamente de los humanos: cuando tosemos, hablamos, las microescamas de la piel.

- Superficie de plantas.
- Superficie de los animales.
- Vertederos.
- Movimientos de agua: todas las microgotas pueden llevar asociadas microorganismos…
- Actividades de labranza, agricultura…
- Micropartículas que pueden ser emitidas de las E.D.A.R (Depuradoras de Aguas
Residuales).

Las propias partículas biológicas (el polen) también puede llevar otros microorganismos asociados.

Los viables por m3 del aire varían dependiendo de las regiones que muestreemos, el rango está
entre 102 – 107 bacterias/m3. Uno de los factores que afectan al nº de microorganismos en el aire
son las zonas con movimiento del mismo: cuanto más movimiento, más partículas y
microorganismos en el aire.

Teniendo en cuenta que respiramos unos 8 L/min, en un aire con ese rango de contaminación,
introduciríamos en nuestro cuerpo entre 103 – 108 de microorganismos/día. Los ecosistemas que
tienen su propia microbiota presentan mayor carga microbiana.

3.2. Supervivencia de los microorganismos en el aire

No hay microorganismos autóctonos del aire ya que éste no es un ecosistema con unas
condiciones nutricionales, fisicoquímicas apropiadas para el crecimiento microbiano. El aire se
caracteriza por bajos niveles nutricionales y por la poca disponibilidad del agua, esto impide que
los microorganismos puedan crecer y desarrollarse en el aire.

No impide que puedan aguantar estas condiciones durante un tiempo: una endospora bacteriana
> espora de hongo; Gram + > Gram – (por su estructura de pared); una bacteria estrictamente
acuática, al pasar al aire aguanta muy poco tiempo (Vibrio cholerae, Salmonella typhi), sin
embargo, los corineformes y las bacterias Gram + y las endosporas de las mismas, pueden
permanecer hasta un millón de años.

Por tanto, la supervivencia de los microorganismos dependerá de las características biológicas de

cada uno.

3.2.1. Factores que afectan a la supervivencia y dispersión de los microorganismos

en el aire

Temperatura: la supervivencia está muy condicionada por ella. En general, con temperaturas
extremas la carga microbiana es menor. Cuanta más temperatura, menos carga microbiana.

Movimiento del aire: si hay viento, se facilita la incorporación de microorganismos al aire y su

dispersión. Cuanto más partículas en el aire, más microorganismos.

Radiación ultravioleta.

Polvo y aerosoles: cuanto más polvo y aerosoles más microorganismos podrán ir asociados a ellos
y, por tanto, también se favorece la dispersión.

Disponibilidad de agua y nutrientes: cuanto más de ambos, más carga microbiana.

3.3. Enfermedades asociadas a los microorganismos

Muchos microorganismos causantes de patologías encuentran como vehículo de transmisión el

aire.

Por ejemplo:

Hay que destacar que muchas de estas enfermedades tienen sus picos (de infección) en los meses
fríos, ya que hay más contacto persona-persona y también pasamos más tiempo en lugares
cerrados. Esto también influye en la transmisión de enfermedades infecciosas.
Por ejemplo, la legionelosis podemos contraerla por ambientes acuáticos asociada a una ameba y
se dispersa a través del aire, asociada a microgotas del aire.

Psitacosis: al respirar micropartículas secas al respirar heces de estas aves (loros y palomas).

3.4. Aplicaciones del análisis microbiológico

Vigilar las poblaciones de partículas aerotransportadas. Conteos de polen esporas, colonias

bacterianas…

En la industria farmacéutica, para determinar la calidad microbiológica del flujo laminar del aire,
para el envase de productos farmacéuticos de forma aséptica…

En la industria de alimentos y bebidas para evaluar la contaminación aerotransportada.

En los hospitales para detectar microorganismos patógenos aerotransportados en sales de cirugía,

de cuidados intensivos, de convalecencia de pacientes… También es importante para vigilar las
partículas alergénicas específicas (esporas fúngicas…), para determinarse las causas de las alergias
de los pacientes…

3.5. Muestreo microbiológico de aire

El análisis microbiológico del aire es relativamente reciente. En la década de los 70 fue el inicio de
controlar la calidad microbiológica del aire, por tanto, se comenzó con técnicas muy sencillas:

Técnica de sedimentación en placa: distribuimos de forma aleatoria una serie de placas de cultivo
con medio, abiertas, durante un tiempo determinado. Después las cerramos y vemos lo que crece.

Pero esto no es preciso, es solo un método cualitativo, y que carece de repetitividad. Las UFC no
se relacionan con un volumen determinado de aire.

Sistemas de impregnación en sólido o sistemas de trampa líquida. La diferencia radica en que el

aire incide en un medio de cultivo sólido (impregnación en sólido) o capturar la muestra de aire en
un medio líquido. Esto necesita una bomba de succión de aire, que nos permita determinar el
volumen de aire que ha incidido sobre el medio de cultivo. Es una técnica rudimentaria.
En los sistemas de impregnación en sólido (técnica de cedazo y ranura): se pone una placa
perforada para que cuando incidiese, de alguna manera, la muestra de aire quedase distribuida
por toda la placa.

En los dispositivos de trampa líquida capturamos el aire (+ micropartículas + microorganismos

asociados) en un medio líquido y luego se sembraba en medio sólido para finalmente cuantificar
las UFC/ m3 de aire.

Actualmente, se utilizan métodos más modernos.

Filtración de membrana o directamente sobre el agar:

Para muestras de exterior: Se colocan en puntos altos y van continuamente rodando y capturando
aire. Pueden utilizarse para realizar estudios de metagenómica, hacer recuentos de UFC/ m 3.

Son sistemas de impactación, el aire impacta sobre una superficie sólida, que puede ser un filtro
de membrana o la superficie de un medio de cultivo dispuesto en una placa Petri. El cabezal puede
incorporar una membrana filtrante, y succiona con una bomba interna el aire. Nosotros
determinamos la cantidad de aire que va a succionar, por tanto, al contar las UFC lo haremos
sobre un volumen ya conocido (luego lo pasamos a m3).

La superficie puede ser una membrana, a continuación, la membrana la ponemos sobre la

superficie de un medio de cultivo sólido.

Hay otros que en el cabezal (que va a rosca), se coloca una placa Petri con un medio de cultivo
apropiado, es decir, no excesivamente rico en nutrientes, ya que en el aire los microorganismos
están en condiciones básicamente de inanición. El cabezal va perforado de forma homogénea. Una
vez recogida la muestra se incuba a una temperatura en torno 22 – 25 oC. Si los ponemos en un
medio de cultivo muy rico en nutrientes y a 37 oC, aunque pudiera ser su tª óptima de crecimiento,
inicialmente, es un estrés importante para una bacteria. De manera que alargamos el tiempo de
incubación hasta llegar a 37 oC para que se vayan adaptando.

3.6. Muestreos de aire

Hay que distinguir entre ambientes de exterior e interior.

La normativa de muestreo de aire está mucho menos desarrollada que en otros ecosistemas, y
casi toda, se refiere a muestreos en ambiente de interior ya que es más controlado y no depende
de las condiciones medioambientales, las cuales son muy variables (aire, temperatura, grado de
humedad…).

La calidad del interior está mucho más controlado. Se miden los parámetros microbiológicos en
cualquier recinto cerrado (avión, hospital, oficinas, restaurante…). Pasar muchas horas en un
ambiente cerrado y hermético (sin ventilación) puede llevar al síndrome del edificio enfermo.
Como consecuencia, el personal comienza a experimentar dolores de cabeza, malestar… muchas
veces no se encuentra una causa, pero puede ser la elevada carga microbiana y compuestos
químicos.

La carga microbiana de los ambientes cerrados procede de los ocupantes (si los hay), de la
actividad que se desarrolle en el interior… Si analizamos la carga microbiológica de los ambientes
con y sin ocupantes vemos que con ocupantes la carga microbiana tiende a crecer, porque cada
uno de los ocupantes libera micropartículas y con el movimiento también pasan al aire partículas
que pueden llevar asociados microorganismos.

Cuando no se disponían de métodos para analizar la calidad microbiana del aire, a veces se
continúa haciendo en paralelo a otros estudios, se muestrean superficies en habitaciones
desocupadas. Con la calma, la micropartículas tienden a depositarse sobre la superficie. Se emplea
en la industria alimentaria, junto con el análisis de carga microbiana.

En general, los análisis determinan que, en el interior, dominan las bacterias sobre los hongos. Sin
embargo, en el exterior, donde los organismos van a proceder del suelo, agua, industria…
predominan las esporas de los hongos frente a las bacterias, porque en el interior, la mayor parte
de bacterias forman parte de la microbiota del cuerpo humano.

3.7. Control de los microorganismos del aire

La normativa está muy poco desarrollada. Según la Asociación Española de Ingeniería Hospitalaria
los valores admisibles son hasta las 500 UFC/m3, a partir de aquí se deberían tomar medidas
correctoras.

Las medidas correctoras pueden ser:

- Agentes químicos que se distribuyan mediante aerosoles, de manera que las

micropartículas de los aerosoles establecen contacto directo con los microorganismos.
- Lámparas UV.
- Sistemas de filtración HEPA: retienen partículas en los sistemas de filtración de la
habitación.
 TEMA 4: CICLOS BIOGEOQUÍMICOS

1. Introducción

Los nutrientes fundamentales para la vida son reciclados por los microorganismos y por los
macroorganismos, pero en cada nutriente en concreto, dominan las actividades de origen
microbiano. Comprender como funcionan estos ciclos microbianos de los nutrientes es importante
porque estos ciclos y sus circuitos de retroalimentación, son esenciales para la agricultura y la
salud global.

Si analizamos el término biogeoquímico, este deriva del movimiento cíclico de los elementos que
forman los seres vivos (bio), y del ambiente (geo) e intervienen en un cambio químico.

En los ciclos biogeoquímicos, los distintos elementos suponen un intercambio a través de una serie
de transformaciones químicas, muchas de ellas llevadas a cabo por microorganismos. Los ciclos
deben mantener las reacciones en equilibrio, pero presentan descompensaciones como
acumulación de CO2 en la atmósfera, metano con efecto invernadero etc.…

2. Requerimientos nutricionales de los organismos

Se pueden clasificar en función de su requerimiento en:

- Macronutrientes: constituyen más del 95% de peso seco y con C, H, O, N, P, S, K, Mg, Ca y

Fe.
- Micronutrientes o elementos traza: Mn, Co, Cu, Zn, Mo, Ni etc.
- Factores de crecimiento
- Agua: es el solvente ideal en todos los organismos vivos ya que constituye entre el 70-90%
del peso total celular.

Estos nutrientes se pueden encontrar combinados, formando parte de sustancias orgánicas o

inorgánicas. Se obtienen a partir de los medios de cultivo y son utilizados para la biosíntesis y
obtención de energía.

3. Ciclos
3.1. Ciclo del carbono y oxígeno estrechamente relacionados

El ciclo del carbono es la base estructural de todos los seres vivos y se relaciona con todos los
ciclos.

El CO2, principal fuente de carbono inorgánico, asimilable por los organismos, es fijado y por tanto
reducido principalmente por las plantas terrestres mediante el proceso de fotosíntesis oxigénica.
En este proceso el CO2 es fijado y transformado por el ciclo de Calvin en carbono orgánico y libera
O2. En los ambientes marinos también hay plantas acuáticas y fitoplancton como cianobacterias y
procloróficos, principales grupos de bacterias fotótrofas oxigénicas. Estas bacterias son
importantes fijadoras de CO2 en estos ecosistemas, transformando el CO2 en materia orgánica a la
misma vez que producen oxígeno (producen aproximadamente la mitad del O2 liberado), ya que
realizan la fotosíntesis oxigénica.
La materia orgánica vuelve para cerrar el ciclo mediante su descomposición en CO 2. Esta
degradación se produce principalmente por los procesos de respiración de microrganismos,
animales y el hombre.

También hay que tener en cuenta el aporte de CO2 como gas de efecto invernadero producido por
la propia actividad humana, como el uso de los combustibles fósiles que, desde la revolución
industrial, el hombre ha ido progresando y a la vez contaminando el ambiente. Los hidratos de
metano cuando se libera a la atmósfera actúan como gas de infecto invernadero que se produce y
se acumula en los ambientes anóxicos ya que es producto de la descomposición anaeróbica de la
materia orgánica llevada a cabo por arqueas metanogénicas. Ese metano se acumula en los
ecosistemas que están sometidos a baja temperatura y alta presión como los sedimentos marinos
de los fondos, en el permafrost del ártico… en forma de hidratos de metano congelados y
retenidos.

El reservorio de carbono en el planeta se da fundamentalmente en las rocas y sedimentos, donde

se libera muy poco.

3.2. Ciclo de oxidación-reducción del carbono

La parte de reducción implica la fijación del CO2, es decir, la transformación del carbono inorgánico
en carbono orgánico tanto en condiciones aerobias como anaerobias. Ese CO2 aeróbicamente es
fijado hasta compuestos orgánicos principalmente por cianobacterias y microalgas mediante su
proceso de fotosíntesis oxigénica. También intervienen bacterias quimiolototrofas con crecimiento
lento debido a que los compuestos de partida que utilizan son compuestos inorgánicos reducidos
como amoniaco, que son muy poco energéticos. Estas participan en la fijación de CO2 mediante el
ciclo de Calvin, siendo esta mucho más lenta, y en ambientes extremos actúan como productores
primarios, soportando la cadena trófica. Esta fijación lenta se debe en parte a que el agente
reductor puede ser limitante y requieren cantidades más elevadas.

En la parte anóxica del ciclo, el CO2 es pasado a carbono orgánico por un grupo de bacterias
fotótrofas anoxigénicas, (rojas y verdes del azufre). Son bacterias anaeróbicas y acuáticas por lo
que se encuentran en ambientes anóxicos a los que llega la luz. La gran mayoría utiliza una fuente
de carbono inorgánico, pero otras utilizan fuente de carbono orgánica. La fijación de CO2 por lo
general en ambientes anóxicos se debe a estas bacterias.

En la parte de oxidación, los compuestos orgánicos mayoritariamente se oxidan hasta CO 2 y H2O

por las bacterias aerobias con metabolismo oxidativo. Y en ambientes anóxicos, la descomposición
de la materia orgánica se debe a bacterias anaeróbicas con respiración anaerobia y a
fermentadoras, incluso otras que pueden realizar ambas como las bacterias anaerobias
facultativas.

También pueden aparecer organismos aerotolerantes que degraden la materia tanto aeróbica
como anaeróbicamente.

Por otro lado, en la generación de metano intervienen las metanogénicas. La manera más
eficiente de degradar la materia orgánica se debe a la respiración aerobia pero otra parte se
acumula en condiciones anóxicas que finalmente es descompuesta formando CO2 y metano. En la
degradación anaeróbica de la materia orgánica, participan distintas comunidades microbianas
siendo los metanógenos los principales en los últimos eslabones de esta degradación. Esto se
denomina consorcios microbianos, donde el producto de unos sirve de sustrato para otros y así
sucesivamente y a veces para la degradación de materia orgánica o incluso de componentes
tóxicos, se requieren dichos consorcios.
 3.2.1. Descomposición anaeróbica de compuestos orgánicos

La metanogénesis, además, requiere de un proceso denominado sintrofía (comer juntos) de

manera que unos organismos requieren compuestos que están produciendo otros en el ambiente
natural. Este proceso impide que se puedan aislar
determinados microorganismos.

Cuando la materia orgánica se acumula en

condiciones anóxicas, compuestos complejos como
celulosa, polisacáridos, proteínas, lípidos…
inicialmente intervienen un grupo de
microorganismos con actividad celulolítica, con
capacidad de degradar los polímeros en monómeros.
En segunda instancia, estos monómeros o
compuestos más sencillos los pueden utilizar
fermentadores primarios, bacterias acidogénicas, que
generan acetato, ácidos orgánicos, alcoholes, es decir,
generan productos típicos de una fermentación. A
continuación, las bacterias acetogénicas, es decir,
fermentadoras secundarias, que son las sintróficas,
utilizan estos compuestos (ácidos orgánicos y
alcoholes) para transformarlos en otros más sencillos,
liberando acetato, CO2, H2… siendo estos últimos los sustratos que requieren los metanógenos
para producir metano.

Para que las bacterias sintróficas existan, tienen que estar en cooperación/simbiosis con los
metanógenos para que el H2 pueda ser retirado y transformado en metano. Las arqueas
metanogénicas utilizan el CO2 como aceptor final de electrones en una respiración anaerobia y
ese CO2 se reduce formando metano, con lo que finalmente después de la descomposición
anaeróbica de la materia orgánica se produce principalmente metano.

Este ciclo ocurre también en el compostaje anaeróbico de la materia orgánica, es decir, la

descomposición de la materia donde participan distintas categorías microbianas y que finalmente
permite producir metano, el cual se puede aprovechar para producir biogas. Esto es típico en las
estaciones de depuración de aguas residuales donde el lodo que se va generando se trata
mediante este proceso de compostaje anaeróbico para que se degrade y se produzca metano. Si el
metano pasa a la atmósfera, junto con el CO2, contribuye al efecto invernadero. El metano
presenta un efecto en torno a 20 veces más potente que el CO2 como gas de efecto invernadero.
También actúan otros gases como los óxidos de nitrógeno, que contribuyen a dicho
calentamiento.

Podemos encontrar otras bacterias Gram -, que respiran aeróbicamente los compuestos de un
solo carbono, es decir, “comen metano”, produciendo finalmente CO2.

3.2.2. Consideraciones sobre el ciclo del carbono

Las bacterias autótrofas marinas fijan el 50% del carbono global. Las bacterias heterótrofas
marinas, cuya abundancia ronda el millón por mililitro, son los principales responsables de la
degradación del carbono orgánico disuelto, ya sea de origen autóctono (excreción del
fitoplancton) o alóctono (vertidos antropogénicos). Las bacterias captan esa materia orgánica para
su propio metabolismo y reproducción. Respiran una parte importante del carbono y devuelven al
medio CO2, que, en condiciones naturales, es reabsorbido por el fitoplancton. Pero si un exceso de
carbono orgánico alóctono disuelto le sumamos un incremento de la temperatura, surgirá un
desequilibrio entre el CO2 producido y el reabsorbido, que revertirá en la retroalimentación del
efecto invernadero y, por tanto, mayor producción de CO2. Bastan pequeños incrementos de
temperatura para incidir en la diversidad bacteriana, ya sea por el mismo efecto de la
temperatura, que propicia la aparición de nuevas especies y la desaparición de otras que no se han
adaptado a la nueva situación, o por la competencia con especies más oportunistas.

3.3. Ciclo de oxidación-reducción del nitrógeno

Por un lado, la fijación del nitrógeno, que puede ocurrir aeróbica o anaeróbicamente. Se trata de
un proceso de reducción del N2, siendo el mayor reservorio de nitrógeno el que se encuentra en la
atmósfera. Este N2 puede ser fijado y reducido hasta finalmente dar amoniaco tanto en
condiciones aeróbicas como anaeróbicas, dependiendo del microorganismo. Para esta fijación es
necesario que los microorganismos presenten un complejo enzimático denominado complejo
nitrogenasa, formado por 2 enzimas. Este complejo es muy sensible al oxígeno por lo que en
función de cómo se produzca la fijación, en simbiosis o en vida libre, utilizan distintas estrategias
para proteger este complejo. Por ejemplo, las que se encuentran en simbiosis, utilizan la Leg-
hemoglobina producida en los nódulos de las leguminosas para proteger estos nódulos del
oxígeno y otras en cambio, las de vida libre, producen células especializadas denominadas
heterocistes para fijar el nitrógeno. Estos heterocistes permiten la fijación sin intervención del
oxígeno por la presencia de compartimentos y porque actúan como fotótrofas anoxigénicos ya
que únicamente presentan el fotosistema I, por lo que al no participar el H2O, ya no se produce O2.

El amoniaco también se puede generar por procesos de degradación de la materia orgánica, tanto
aeróbica como anaeróbica. Se trata de un proceso de amonificación, es decir, conversión de la
materia orgánica rica en proteínas en amoniaco, mediante la liberación de los grupos amino de los
aminoácidos. En los suelos donde hay una descomposición activa de esta materia orgánica, suelen
tener un pH bastante alcalino.

Este amoniaco puede ser asimilado como fuente de N.

En segundo lugar, se produce la nitrificación, donde el amoniaco se transforma para dar nitrato en
condiciones aeróbicas. Es un proceso de oxidación llevado a cabo por bacterias quimiolototrofas
del N, que se subdividen en bacterias de tipo nitroso y de tipo nitro. El amoniaco primero es
transformado en nitrito por las bacterias del grupo nitroso y ahora ese nitrito, mediante las
bacterias del grupo nitro se transforma en nitrato, del cual se obtiene energía y fuente de poder
reductor para crecer. Además, estas bacterias también fijan CO2 por lo que el ciclo del carbono
está relacionado con todos los ciclos, ya que un microorganismo necesita una fuente de C, una
fuente de N, una fuente de S…

Finalmente se produce la desnitrificación, un proceso anaeróbico, donde se produce la

transformación del nitrato hasta N2. Estas bacterias utilizan las formas oxidadas del N, nitrato y
nitrito, como aceptor final de electrones en una respiración anaerobia, es decir, comen materia
orgánica como fuente de carbono y energía y la metabolizan mediante respiración anaerobia.
Pseudomas denitrificans es destacable en este proceso, también algunas enterobacterias… Este
proceso puede tener una cierta trascendencia a nivel ambiental porque si se produce un abono en
un campo con nitrato, este actúa como fuente de N para plantas y microorganismos, que puede
pasar a sustratos anóxicos del suelo, proceso que favorece la desnitrificación y durante el camino
se pueden producir intermediarios como óxidos de nitrógeno, óxido nítrico, óxido nitroso… estos
óxidos también presentan efecto invernadero. La desnitrificación también se puede aprovechar
para eliminar nitratos del agua e impedir la eutrofización.

3.3.1. Proceso Anammox

Este proceso constituye la oxidación anaeróbica del amoniaco. Se descubrió a partir de los 90. Esta
oxidación se produce por una bacteria denominada anammoxina ya que a nivel estructural es una
mezcla de bacterias y arquea debido a que no presenta peptidoglicano y, además, presenta unos
orgánulos denominados anammoxoma, el cual presenta una membrana lipídica muy impermeable
y compacta constituida por lípidos laderanos o en escalera. En este orgánulo se produce la
oxidación anaeróbica del amoniaco utilizando nitrito como aceptor final de electrones, liberando
finalmente N2. Como intermediarios del proceso se produce hidroxilamina e hidracina,
compuestos muy tóxicos para la célula pero que no llegan a pasar al citoplasma ya que son
retenidos por la membrana del anammoxoma. Este proceso también se puede utilizar para retirar
amoniaco en condiciones anóxicas en las plantas depuradoras de aguas residuales.
Resumen

3.4. Ciclo de oxidación-reducción del azufre

Aparecen dos formas extremos de oxidación y reducción, el sulfato, la forma más oxidada y
estable del azufre y el sulfuro, la forma más reducida. Si tenemos en cuenta estos dos
componentes, en la parte aeróbica, el sulfuro pasa por distintas etapas, como azufre elemental,
sulfito… hasta finalmente sulfato, proceso de oxidación aeróbica del sulfuro lo realizan bacterias
quimiolototrofas como las incoloras del azufre, las cuales oxidan sulfuros, es decir, compuestos
reducidos de azufre inorgánico para dar lugar a sulfato.

Por otro lado, en la parte anóxica, el mismo proceso de oxidación de sulfuro hasta sulfato lo
realizan bacterias fotótrofas anaeróbicas como bacterias rojas y verdes del azufre, que utilizan
compuestos reducidos del azufre como dadores externos de electrones, presentan un único
fotosistema, necesitan generar NADH…En condiciones anóxicas, el paso inverso de sulfato a
sulfuro, proceso de reducción desasimilatoria del azufre, lo llevan a cabo las bacterias sulfato
reductoras. Se trata de una reducción desasimilatoria porque estas bacterias utilizan el sulfato
como aceptor final de electrones, mediante la respiración anaeróbica y no como fuente de azufre.
Durante esta respiración, el sulfato se reduce a sulfuro y estos reaccionan con iones metálicos
presentes en los sedimentos, formando sulfuros metálicos que dan un color pardo oscuro a los
fondos anóxicos. Una bacteria típica sulfato reductora es Desulfovibrio, Gram -. Estos dos grupos
de bacterias se encuentran compartiendo ecosistema porque el producto de las sulfato
reductoras, sulfuro, es el sustrato de las fotótrofas anoxigénicas.

El sulfato puede ser asimilado tanto aeróbica como anaeróbicamente ya que es empleado como
fuente de azufre, dando lugar a una reducción asimilatoria ya que la fuente de azufre se utiliza
para sintetizar determinados grupos sulfhidrilo de los aminoácidos, es decir, para incorporarla
directamente al material celular.

También se puede producir la desulfurilación tanto aeróbica como anaeróbicamente donde por
consecuencia de la degradación de la materia orgánica rica en proteínas, se van a liberar los
grupos sulfhidrilo y se van a transformar en sulfuros.

Además, gran parte del azufre se encuentra en forma de compuestos orgánicos como el
dimetilsulfuro (DMS), abundante en ambientes marinos. El DMS procede principalmente del
dimetilsulfopropionato (DMSP) el cual es acumulado por algas o microalgas dentro de la célula
como protector osmótico, es decir, es una manera que tienen estas microalgas de compatibilizar el
interior celular con el agua salada en la que se encuentran. Cuando las microalgas mueren, este
DMSP es utilizado por bacterias marinas como fuente de materia orgánica para liberar DMS como
consecuencia de dicha metabolización. Este DMS es muy volátil y cuando pasa a la atmósfera, en
presencia de O2 y radiación ultravioleta, se oxida para formar aerosoles de sulfato que condensan
la humedad incrementando así la densidad de las nubes. Se dice que este compuesto es un
amortiguador del calentamiento del planeta. Cuando el DMS se acumula en condiciones
anaeróbicas, puede ser utilizado por otros microorganismos y se transforma en DMSO (forma
oxidada), pudiendo ser utilizado como aceptor final de electrones en una respiración anaerobia.
Resumen del ciclo del azufre

3.5. Ciclo de oxidación-reducción del hierro

Es un ciclo muy sencillo ya que el hierro tiene dos estados, el ferroso y el férrico. El hierro a pesar
de ser el 4º elemento más abundante del planeta puede llegar a ser un nutriente limitante por su
baja solubilidad y biodisponibilidad, ya que, se encuentra generalmente formando óxidos de
hierro altamente insolubles difíciles de captar por los microorganismos. Existen algunas bacterias
que producen en el entorno de la célula moléculas solubilizantes de hierro denominadas
sideróforos. El hierro es muy importante para la viabilidad celular ya que forma parte de los
fitocromos, proteínas...

En la parte anaeróbica del ciclo, se produce la reducción del férrico a ferroso (Fe 3+ -- Fe2+). Esto es
llevado a cabo por Geobacter metallireducens o Shewanella putrefaciens, las cuales utilizan el Fe3+
como aceptor final de electrones en una respiración anaerobia.

En la parte aeróbica, se produce la oxidación del ferroso a férrico. Esto es más complejo porque el
hierro en condiciones aeróbicas y pH neutro tiende a precipitar y oxidarse formando precipitados
de óxido de hierro de forma espontánea, los cuales son insolubles y poco aprovechables por los
microorganismos. En cambio, sí que hay bacterias que pueden oxidar el Fe2+ y extraer energía,
pero principalmente lo realizan bacterias que crecen en ambientes ácidos como Tiobacillus
ferrooxidans, que además de oxidar compuestos reducidos de azufre, puede oxidar el Fe2+ a Fe3+.
Otras bacterias creen de forma quimilitotrofos en condiciones ácidas, donde no ocurre la
oxidación espontánea, por lo que el Fe2+ está más biodisponible, de modo que estas bacterias
pueden crecer a expensas de la oxidación de ferroso a férrico. La oxidación de ferroso a férrico es
un proceso que reporta poquísima energía ya que el compuesto de partida que actúa como
donador de electrones, tiene un potencial redox de +0.77V y estas bacterias acidófilas oxidan el
Fe2+ hasta O2, que actúa como aceptor final de electrones, tiene un potencial redox de +0.82V,
generando una cadena de transporte de electrones muy corta, de modo que el rendimiento de
ATP es muy bajo. Tiobacillus ferrooxidans no solo obtiene energía por este proceso, sino que
también se produce una obtención de energía ayudada por el ambiente ácido con un pH en torno
a 2 y teniendo en cuenta que el fitoplasma de esta bacteria presenta un pH en torno a 6, la
diferencia de cargas protónicas del propio ambiente donde vive impulsa la síntesis de ATP. Para
que una bacteria pueda utilizar como fuente más disponible el ferroso, para pasarlo a férrico, es
necesario un ambiente ácido.

También podemos encontrar Galionella¸ mixótrofa, que puede crecer a expensas de hierro ferroso
y Sulfolobus, una arquea que puede vivir a expensas de compuestos reducidos de azufre y se
encuentra en ambientes ácidos.

3.6. Ciclo del fósforo

Es un ciclo donde la intervención microbiana es muy limitada y no se contemplan reacciones de

oxidación-reducción como en los otros ciclos. El fósforo puede ser un nutriente limitante ya que el
mayor reservorio se encuentra en las rocas fosfatadas y la liberación de este es limitante. Además,
hay algunos microorganismos, tanto bacterias como hongos, que durante su metabolismo liberan
determinados compuestos que favorecen la solubilización del fósforo. Cuando plantas, animales u
otros organismos mueres, la descomposición de estos cadáveres, es decir, la mineralización de
dicha materia orgánica es la que permite que el fósforo entre en la cadena alimenticia.

El fósforo no forma compuestos volátiles, a diferencia del resto, por lo que queda restringido a la
litosfera y a la hidrosfera.
 4. Conexión entre todos los ciclos biogeoquímicos
Interconexión de distintos grupos
de microorganismos de los ciclos
del N y el S con el ciclo autótrofo
del C. Como fijadores del CO2
tenemos los fotótrofos oxigénicos y
anoxigénicos, es decir, productores
primarios en ambientes aeróbicos y
anaeróbicos respectivamente,
también aparecen quimilitotrofos
del S (oxidan sulfuros), del N
(bacterias nitrificantes y nitro), del
Fe, todos ellos actúan como
productores primarios.

Interconexión entre el ciclo

heterótrofo del C y microrganismos
que intervienen en el ciclo del N y
S. La materia orgánica carbonada
es oxidada por heterótrofos
aeróbicos que consumen O2 y
producen CO2, las bacterias
reductoras del sulfato en
ambientes anaeróbicos utilizan el
sulfato como aceptor final de
electrones para producir sulfuro,
los metanógenos, que participan
en la descomposición anaeróbica de la materia orgánica y las desnitrificantes, que, en condiciones
anaeróbicas, utilizan compuestos oxidados del N como aceptores finales de electrones.
 TEMA 5: MICROBIOLOGÍA Y DESARROLLO SOSTENIBLE

1. Introducción
1.1. ¿Qué es el desarrollo sostenible?

La sostenibilidad es el desarrollo que satisface las necesidades del presente sin comprometer la
capacidad de las futuras generaciones, garantizando el equilibrio entre el crecimiento económico,
el cuidado del ambiente y el bienestar social.

Es la capacidad de una sociedad para cubrir las necesidades básicas de las personas sin perjudicar
el ecosistema ni ocasionar daños en el medio ambiente.

1.2. Algunos ejemplos de cómo los microbios pueden influir en estos objetivos de desarrollo
sostenible

Los microorganismos son la forma de vida predominante en el planeta, tanto en numero como en
biomasa total ya que están en todas partes y, además, son capaces de colonizar cualquier
ambiente. Son importantes productores primarios en la cadena trófica.

Metabolizan los elementos clave y realizan los ciclos

biogeoquímicos de los nutrientes, ciclo del carbono,
nitrógeno…

Los microorganismos son un factor esencial en el

reciclaje de los nutrientes, materiales y residuos
biológicos, en la producción y disipación de los gases
de efecto invernadero. Algunos son capaces de
degradar materiales tóxicos mediante la
biorremediación microbiana.

Son esenciales en la producción de energía. El gas

natural (metano) es un resultado de la actividad
microbiana. Los microorganismos fotosintéticos
pueden utilizar la energía luminosa para producir
biomasa, y otros producen biocombustibles (etanol) durante la fermentación microbiana.

Juegan un papel esencial en el cambio climático, en la estructura y fertilidad de los suelos y en la

calidad y productividad de las aguas, lo cual esta relacionado con varios de los objetivos del
desarrollo sostenible.

En definitiva, también son administradores biológicos de la salud y sostenibilidad del plante y

gracias a ellos es posible la vida.

2. Bioinsecticidas: insecticidas microbianos

En la primera mitad del siglo XX el control mediante insecticidas biológicos tuvo un gran auge,
pero fueron sustituidos por los insecticidas químicos más baratos y efectivos inmediatamente.
Actualmente, se vuelve a considerar a los insecticidas biológicos. El inconveniente de los
insecticidas químicos es que muchos de ellos son aromáticos, xenobióticos, que quedan retenidos
en el medio ambiente, pasando a los animales, personas, agua… difíciles de degradar por los
organismos.

Una alternativa son los insecticidas biológicos, que son biodegradables y mucho más respetuosos
con el medio ambiente. Estos presentan algunas desventajas: son más caros de obtener ya que se
tienen que emplear grandes fermentadores y cultivos, esto se optimiza mediante el uso de medios
de cultivo baratos que procedan de otras empresas, la velocidad de acción es mucho más lenta
que uno químico. En cuanto a las ventajas, algunos países financian la mejora de estos
bioinsecticidas, son muy estables y solo se activan en el medio interno de los insectos, aportando
estabilidad y seguridad.

Bacillus thuringiensis se utiliza como un insecticida biológico por muchas empresas. Se han
descrito varias cepas y subespecies con distinta patogenicidad sobre distintos insectos como
lepidópteros, dípteros… El uso de esta bacteria como insecticida esta relacionado con que es Gram
+, endosporulada, típicas del suelo y aerobia.

Durante las últimas etapas de la formación de la endospora, esta bacteria forma un cristal de
naturaleza proteica que se libera junto a la espora, denominado cristal paraesporal. Este cristal es
el que puede actuar como una potente toxina frente a determinadas larvas de insectos. Este cristal
está formado por dos tipos de proteínas que actúan como toxinas (endotoxinas), estas son la
proteína cry (cristal) y la proteína cyt (citólisis). Estas dos presentan un efecto final que consiste en
la formación de poros en las células del epitelio intestinal de la larva. Pero no todas las
subespecies de Bacillus producen ambas proteínas, sino que la gran mayoría producen solamente
la proteína cry y algunas adicionalmente también la cyt. La proteína mas estudiada ha sido cry.

Cuando la larva del insecto come material vegetal donde se puede encontrar Bacillus o la espora
con el cristal paraesporal, cuando el cristal llega al intestino, donde el pH es alcalino, este favorece
la disolución del cristal y, por tanto, la liberación de la endotoxina. A continuación, las propias
proteasas intestinales, digieren la endotoxina y liberan la toxina activa. Esta toxina ya activada
reconoce receptores específicos de naturaleza proteica localizados en la superficie del epitelio
intestinal de la larva, se inserta en la membrana y produce un poro el cual ocasiona una lisis
osmótica y, por tanto, la muerte. Esto se debe a que a través del poro entra el contenido alcalino
del intestino produciendo un colapso intestinal y muerte de la larva Estos receptores no se
presentan en las células humanas por lo que la toxina no afecta al humano. La especificidad del
proceso radica en gran medida en el reconocimiento del receptor.
Estas larvas muerta sirven como fuente de materia orgánica para las esporas de Bacillus para
germinar y formar nuevamente bacilos, endosporas y así sucesivamente. Esta toxina se
comercializa como insecticida biológico.

Algunas especies presentan en el cristal de proteína, además de la endotoxina cry, también la cyt,
la cual produce también finalmente poros en las células epiteliales de la larva. Concretamente se
ha descrito la toxina cyt en la subespecie de Bacillus thuringiensis israelensis, siendo una de las
mejores subespecies como insecticida. El efecto final de esta especie es similar al ya descrito y los
receptores a los que se une la toxina cyt son principalmente los lípidos de membrana. Además, la
toxina cyt, cuando la bacteria produce ambas, la cyt se intercala en la membrana y una vez unida a
esta, actúa como receptor de cry. De modo que las cepas que presentan ambas toxinas desarrollan
un efecto sinérgico con mayor efectividad.

El problema de estos insecticidas biológicos es que, a la larga, las propias larvas e insectos pueden
desarrollar resistencia. Esta resistencia se basa en la modificación de la propia toxina y en la
alteración de los receptores.

Existen dentro de Bacillus otras dos especies, Bacillus sphaericus y Bacillus popillae. Estas dos
especies también presentan interés como insecticidas. Bacillus sphaericus produce una toxina y un
mecanismo muy semejante al ya descrito. Muy específico, siendo limitado a larvas de mosquitos
del género Culex. En cambio, Bacillus popillae también produce un cristal de proteína del cual se
desconoce su función, pero lo que hace frente a larvas es invadir a la propia larva. En este caso, las
esporas deben germinar en el intestino de la larva y finalmente se produce una muerte por
invasión por parte de la bacteria.

3. Obtención de plantas transgénicas resistentes a plagas

3.1. Identificación, aislamiento, remodelación del gen de interés e inserción del ADN-T del
plásmido Ti de Agrobacterium tumefacines.

Utilizando este plásmido Ti mediante ingeniería genética, se puede sustituir el ADN-t con el gen
que codifica la toxina cry y transferir el plásmido a plantas con el objetivo de conseguir plantas
transgénicas, es decir, planta que ya han incorporado la resistencia a determinadas plagas de
insectos.
4. Bioinsecticidas microbianos:

- Bacillus sphaericus:
Muy específico: limitado a larvas de mosquitos, especialmente del género Culex.
Produce un cristal de proteína (protocxina de naturaleza proteica) que actúa de modo
semejante a Bacillus thuringiensis (debe ser ingerida por las larvas en su medio acuático).

- Bacillus popillae:
Produce un cuerpo parasporal bipiramidal (su papel no está claro en el desarrollo de la
enfermedad). Una vez ingerida la bacteria, cuando llega al intestino medio, las esporas
germinan y se reproducen, iniciándose la infección del epitelio intestinal que rápidamente
pasa a la hemolinfa.
El efecto negativo final sobre la plaga de insectos se debe, más que a la propia toxina del
cristal proteico, a la invasión de la propia bacteria.

- Hongos entomopatógenos:
Encontramos géneros como Metarhizium, Beauveria, Paecilomyces, Verticillium, Rhizopus
y Fusarium.
Producen un efecto final letal
sobre determinadas plagas de
insectos.
El efecto que producen estos
hongos es una invasión a través
de las hifas y colonización masiva
de las larvas.
Los efectos secundarios de estos
hongos sobre el medio ambiente
no han sido ampliamente
estudiados por lo que su
aplicación actual se encuentra
muy reducida.
 Habría que hacer previamente un estudio del impacto y de los efectos secundarios del uso
de estos hongos como bioinsecticidas.

- Wolbachia:
Se trata de una bacteria del género Rickettsia, parásita intracelular y endosimbionte de
muchos insectos. Es quizás la bacteria más infectiva dentro del mundo de los insectos.
El efecto final de esta bacteria se resume en una feminización de la población (es decir, va
eliminando a los machos). Consigue que los machos infectados sean incompatibles para la
fecundación con hembras sanas: solo pueden reproducirse con hembras infectadas.
Es una bacteria de transmisión materna que hace que poco a poco vaya reduciéndose la
población total debido a las incompatibilidades que genera. Además, con este modo de
actuación, la bacteria se asegura su supervivencia en los individuos de una generación a
otra.
El uso de esta bacteria como bioinsecticida es un arma de doble filo ya que se ha
observado que algunos insectos infectados con esta bacteria producen determinados
péptidos que impiden la replicación viral. Esto es positivo para reducir la transmisión viral
por vectores como insectos.

5. Bioinsecticidas víricos:

5.1. Baculovirus como insecticidas:

Virus que infectan a insectos utilizándose así como insecticidas.

Los baculovirus son virus de dsADN circular. Pertenecen al grupo I de la clasificación de Baltimore.
Son virus en forma de báculo/bastón cilíndricos con nucleocápside en forma de “bacilo” y están
envueltos (envoltura membranosa).

Este virus presenta 2 estados:

 - Virus brotados/gemados: cuando encontramos las partículas víricas cilíndricas con
envoltura. Esta conformación corresponde al estado intracelular del virus.
- Virus ocluido (cuerpo de inclusión): las partículas víricas se pueden ocluir (varios báculos
se presentan en una matriz de naturaleza proteica y adquieren una conformación
poliédrica). Normalmente esta conformación corresponde al estado extracelular de este
tipo de virus.

5.2. Ciclo de vida:

Cuando la larva de un insecto ingiere material vegetal contaminado con estos baculovirus (cuerpos
de inclusión), se introducen hasta alcanzar el intestino. En el intestino de la larva encontramos
condiciones alcalinas (pH 9) que permiten que se disuelva/desorganice ese cuerpo de inclusión y
se liberen los baculovirus. Esas partículas víricas (viriones) se pegan a los receptores específicos
que se encuentran en la pared del epitelio intestinal, se absorben y penetran en las células
epiteliales alcanzando el núcleo celular donde replican su material vírico. Poco a poco como
resultado del proceso infectivo se van formando nuevos viriones que irán saliendo de la célula
infectada en un proceso de gemación muy poco a poco (de ahí lo de virus brotados). En el proceso
de salida es donde adquieren su estructura membranosa.

Esas partículas víricas que se van liberando de las células infectadas se extienden por toda la
hemolinfa del insecto para originar una infección sistémica. En los últimos estadíos de la infección
las células infectadas se lisan y salen al exterior los virus ocluidos.

El problema del uso de estos baculovirus es su producción: es más costosa su producción en

condiciones de laboratorio que los insecticidas químicos (tiempo y dinero).

6. Bioplásticos: BPL

Otro de los usos de los microrganismos es la producción de plásticos que, en comparación con los
plásticos químicos, van a ser totalmente biodegradables.
Todos conocemos el problema actual con los plásticos no biodegradables que utilizamos a diario.
Son contaminantes muy dañinos para el planeta ya que la mayoría, como ya sabemos, son
sintéticos (altos tiempos de degradación). El desarrollo de este problema ha generado la búsqueda
de alternativas para obtener plásticos biodegradables.

Uno de los principales problemas a la hora de la elaboración de plásticos microbianos son las
fuertes leyes de control del uso de microorganismos: control de uso de microorganismos
modificados genéticamente. Se tienen que cumplir unas normas muy estrictas (prevención de
posibles efectos secundarios).

Ya existen empresas que utilizan estos plásticos para envasar productos como: cosméticos,
champús… Para el tema alimenticio hay más reticencias.

Cuando hablamos de estos plásticos nos referimos a unos polímeros (poliésteres) que acumulan
algunas bacterias como fuente energética y de carbono (actúan como reservas de naturaleza
lipídica). Concretamente nos referimos a los poli-beta-hidroxialcanoatos (PHA) que son polímeros
del ácido polihidroxialcanoico. Se acumulan formando unos orgánulos conocidos como
carbonosomas (pueden representar incluso más del 90%
del peso seco de la bacteria).

Estas reservas aparecen cuando se induce a las bacterias

a una situación de estrés nutricional: se cultivan en
presencia de un exceso de fuente de carbono pero en
condiciones limitantes de otro nutriente como N, P, S, O
o Mg. La falta de N es muy efectiva.

Como la bacteria encuentra carbono en exceso lo

acumula en los carbonosomas para que, cuando se
recupere la situación limitante de otro elemento (ej: N),
pueda hacer uso de ese carbono.

Según el monómero que se repita para formar los poliésteres, la longitud y la naturaleza de la
cadena lateral R se formarán diferentes compuestos: Polihidroxibetabutirato (PHB),
Polihidroxibetavalerato (PHV) o una combinación de ambos (PHBV). El más extendido es el PHB.

Ej de bacterias: Ralstonia eutropha (acumula altas cantidades de poliésteres: 96% de peso seco).

Hay una mejora de este proceso en microbiología industrial: conociéndose los genes de interés
que participan en este proceso se puede clonar de manera heteróloga en una bacteria modelo
para industrializar el proceso (sobreproducción).

Se ha caracterizado la ruta biosintética con los enzimas utilizados en la síntesis de estos plásticos:
ej de PHB en un vector de expresión en E.coli para inducir la expresión de los genes y producir el
polímero.
Ejemplos de empresas que producen bioplásticos:
Comparación de un bioplástico con un plástico químico:

7. Biofertilizantes

Otro de los usos de los microorganismos es la formación de biofertilizantes.

Los biofertilizantes son productos formulados con uno o varios microorganismos beneficiosos
(hongos y bacterias, generalmente procedentes del propio suelo) los cuales aumentan la
disponibilidad de nutrientes para las plantas y mejoran las propiedades del suelo. Normalmente
en la etiqueta del producto se suele indicar si presentan microorganismos aunque no se
especifiquen exactamente cuáles (evitar competencia de otras empresas, trabajo complejo y una
gran inversión de tiempo y dinero por parte de la empresa patente).

Lo que se buscar con estos biofertilizantes es que sustituyan o complementen a los fertilizantes
químicos.

Los biofertilizantes pueden presentar grandes ventajas: mayor producción a menor costo,
protección del ambiente y aumento de la fertilidad y biodiversidad del suelo (SOSTENIBILIDAD).

Ejemplos dentro de los biofertilizantes:

- Microorganismos que son capaces de fijar el nitrógeno atmosférico libremente en el suelo;

fijar el nitrógeno atmosférico en simbiosis con la planta (nódulos de leguminosas).
- Microorganismos capaces de solubilizar diferentes nutrientes del suelo haciéndolos
asequibles a las plantas.
- Microorganismos que inducen la producción de diferentes fitohormonas, las cuales
favorecen, por ej, el enraizamiento y desarrollo de las plantas.
- Microorganismos que favorecen la captación, por parte de las plantas, de determinados
microelementos, tales como el hierro (muy poco biodisponible).
Lo que se busca es favorecer la carga de microorganismos cercanos a las plantas que estimulen su
desarrollo.

7.2. Fijadores de nitrógeno

Como ya hemos mencionado, existen microorganismos con la capacidad de transformar el 𝑁2

atmosférico a amonio y suministrarlo a los cultivos mediante varios procesos:

FIJACIÓN NO SIMBIÓTICA DE 𝑁2 FIJACIÓN SIMBIÓTICA DE 𝑁2

- Este proceso se presenta sin - Se presenta una relación mutualista

necesidad de una relación entre el microorganismo (huésped) y
mutualista la planta
- La asociación se encuentra en una - El proceso se realiza en estructuras
amplia gama de cultivos de interés especializadas (nódulos)
agrícola - Relación leguminosa – Rhizobium
- Dentro de los microorganismos que - Puede suplir de 40 a más de 300 kg
tienen esta capacidad se de N/ha/año, dependiendo del
encuentran: Bacterias de vida libre cultivo.
(Azotobacter, Azospirillum,
Clostridium)

7.3. Solubilizadores de fosfato y captación de fósforo

Varias bacterias y hongos del suelo, en particular especies de Pseudomonas, Bacillus, Penicillium,
Aspergillus, etc. Secretan ácidos orgánicos y bajan el pH (ambiente ácido) en sus alrededores para
llevar a cabo la disolución de fosfatos del suelo aumentando así su solubilidad y disponibilidad.

Ej caso real: experimento de la compañía BioAg Alliance

Se realizó un proyecto financiado de 3 años de duración.

A partir de muestras de suelo, recogidas y llevadas al laboratorio, se realizó una siembra masiva de
placas con el objetivo de aislar microorganismos del suelo. Solo un escaso 1% de lo que cultivaron
formó colonias aisladas (como ya conocemos: de toda la biodiversidad microbiana que sabemos
que existe, un bajo %, no mayor del 10%, es cultivable).

Tras el aislamiento se hizo un cribado para seleccionar los microorganismos edáficos, teniendo en
cuenta sus características bioquímicas y genéticas, y así eliminar todos los organismos patógenos
de las muestras. Consiguieron seleccionar los microorganismos potencialmente beneficiosos.

Esos microorganismos fueron cultivados a una escala superior y con esos cultivos recubrieron,
formando una especie de biopelícula, semillas de maíz. Tras el análisis de esas semillas se observó
que el rendimiento de las cosechas era de 200kg/ha superior a las semillas sin tratar. Con esto se
obtuvo una mejora de la producción a nivel sustancial.

Esos microorganismos podrían actuar como protectores frente a plagas y también favorecer la
captación de nutrientes.
8. Biorremediación

La biorremediación, en realidad, es un proceso que ocurre de forma natural ya que todos los
microorganismos de los ambientes naturales, cuando hay un vertido o una liberación de un
compuesto de materia orgánica o compuesto tóxico, se encargan de eliminar/transformar estas
sustancias. Lo que se busca es mejorar o potenciar esta biorremediación.

La biorremediación microbiana consiste en utilizar las capacidades y características metabólicas de

los microorganismos para eliminar/transformar/reducir contaminantes (muchas veces
compuestos xenobióticos introducidos por el hombre).

Una célula microbiana puede atacar a un compuesto tóxico de diferentes maneras:

- Biotransformación: la célula microbiana incorpora el compuesto contaminante y con su

metabolismo lo transforma y libera en otra forma, un compuesto no contaminante. Se
trata de una transformación bioquímica por parte del microorganismo pasando de un
compuesto tóxico a uno no tóxico.

- Bioacumulación: el microorganismo va retirando el compuesto contaminante del medio y

lo acumula en su interior.

- Bioprecipitación: la célula microbiana convierte el compuesto tóxico en uno menos tóxico

pero por una estrategia diferente. Como consecuencia de su metabolismo libera
compuestos al medio que al interaccionar con el compuesto tóxico lo convierten en un
compuesto insoluble no contaminante. Incluso a veces ese nuevo compuesto puede ser
utilizado por otros microorganismos.

- Biosorción: introducción del compuesto contaminante a nivel de membrana.

El término biorremediación fue acuñado en la década de los 80. Los científicos observaron que era posible
aplicar estrategias de remediación que fuesen biológicas basadas en la capacidad de los
microorganismos de realizar procesos degradativos.

Las primeras observaciones de biorremediación fueron con el petróleo, después de algunos

organoclorados y organofosforados: “se advirtió que los microorganismos no sólo eran patógenos,
sino que además eran capaces de absorber compuestos orgánicos, algunos naturales, otros
sintéticos y degradarlos, lo que constituye el objeto de la biorremediación.”

Existen dos estrategias de biorremediación: IN SITU y EX SITU

8.1. Biorremediación IN SITU

(la más usual, tratamiento en el mismo sitio donde se produce el vertido)
- Biorremediación natural o intrínseca: acción de los microorganismos autóctonos (no
hacemos nada, los propios microorganismos lo degradan)
.
- Bioestimulación: adición de nutrientes (N y P) para favorecer la degradación microbiana
de compuestos tóxicos (ayudamos a la proliferación de microorganismos).

- Bioventilación: aireación forzada en suelos contaminados para facilitar la actividad de los

microorganismos aerobios.

- “Bioaugmentation” (“bioaumento”): adición de microorganismos para estimular la

biodegradación. Estos microorganismos suelen estar seleccionados y modificados
genéticamente.

Solo está permitido la liberación al ambiente de microorganismos GRAS (“Generally Recognized

As Safe”): leyes muy estrictas de control.
8.1.1. Degradación de xenobióticos

Xenobióticos: compuestos químicos sintetizados por el hombre que no existían previamente en la

naturaleza. Son muy recalcitrantes (se persisten mucho tiempo en la naturaleza, difíciles de
eliminar).

Estos compuestos han sido producidos masivamente en los últimos 50 años. Presentan estructuras
químicas nuevas (no reconocidas por las enzimas degradativas existentes) y la capacidad evolutiva
de la naturaleza no ha podido adaptarse todavía a su enorme variabilidad, de tal manera que
podemos decir que sólo los xenobióticos con moléculas naturales muy relacionadas sufren
biodegradación.

La causa de que la mayoría de los compuestos xenobióticos sean recalcitrantes son: su estructura,
su solubilidad en agua, su toxicidad y su exceso peso molecular. Al no ser solubles no pueden estar
disponibles para los microorganismos.

La exposición repetida a diferentes tipos de compuestos tóxicos hace que los microorganismos
vayan mejorando sus estrategias adaptándolas a las nuevas condiciones.

Además, en la mayoría de casos, tenemos que tener en cuenta que no solo un tipo de
microorganismos va a desarrollar esa biodegradación sino que varios tipos se van a compenetrar
formando lo que conocemos como consorcios microbianos (los metabolitos de unas le sirven de
sustrato a otras…).

Ej de compuestos xenobióticos:

- Halocarbonados:
Freones, 𝐶𝐶𝑙3 𝐹, 𝐶𝐶𝑙2 𝐹2 (aerosoles).
Trihalometanos como cloroformo, bromodiclorometano…
Clorinados etenos como el tricloroetileno (TCE) y el percloroetileno
(PCE).
Biorremediación: bacterias reductoras de sulfato y bacterias
metanogénicas.

- Haloaromáticos:
Fenoles clorinados (herbicidas, insecticidas, fungicidas disolventes)
Biorremediación: bacterias sulfurogénicas y metanogénicas.

- Nitroaromáticos:
Son liberados al medio por la combustión incompleta del petróleo, explosivos, colorantes
y pesticidas.
Biorremediación: Desulfovibrio, Clostridum.
 - Plásticos:
Polietileno, cloruro de polivinilo, poliestireno…

- Organofosforados:
Pesticidas y guerra química.
Biorremediación: Agrobacterium radiobacter

8.1.2. Biorremediación de plaguicidas mediante biosurfactantes (comp. anfipáticos solubilizadores):

Bacterias y hongos del suelo que producen moléculas biosurfactantes. Esas moléculas tienden a formar
micelas alrededor de compuestos tóxicos que haya en el ambiente (ej:plaguicida). Estos
compuestos tóxicos son muy hidrofóbicos y muy insolubles y ahí radica el problema de su
degradación. Gracias a la formación de la micela consiguen disolver estos compuestos tóxicos y
que así puedan ser metabolizados por el microorganismo.
 Clasificación de biosurfactantes y su uso en la remediación de sitios contaminados con
metales pesados e hidrocarburos.

8.1.3. Biorremediación IN SITU del petróleo

El petróleo es un líquido negro, viscoso y con una composición química sumamente compleja, pudiendo
contener miles de compuestos, básicamente de la familia de los hidrocarburos (cíclicos,
aromáticos…).
El petróleo puede actuar como fuente de materia orgánica para algunos microorganismos.

Los hidrocarburos, principales componentes del petróleo, son un grupo importante de compuestos
orgánicos persistentes:
- Hidrocarburos alifáticos
- Hidrocarburos alicíclicos
- Hidrocarburos aromáticos
Todos estos hidrocarburos son susceptibles de degradación aeróbica, para su degradación rápida se
requiere 𝑂2 . Puede también ocurrir en ausencia de oxígeno pero el proceso se vuelve muchísimo
más lento.
 También hay que destacar que los hidrocarburos alifáticos lineales son más biodegradables que los
ramificados; la presencia de átomos halógenos disminuye su biodegradabilidad. Los acíclicos y
aromáticos son menos biodegradables. También contiene resinas y otros compuestos mucho
menos biodegradables.

Velocidad de degradación:

HC saturados > aromáticos ligeros > aromáticos alto PM > asfaltenos, resinas

FACTORES QUE AFECTAN A LA DEGRADACIÓN DE PETRÓLEO

Temperatura - Rango de Tª: -2 – 35𝐶 𝑜

- Menor degradación a menor temperatura
25 -> 5𝐶 𝑜 : la velocidad de degradación disminuye 10
veces
- Menor volatilidad, mayor viscosidad

Oxígeno - Su disponibilidad no suele ser limitante en ambientes

marinos
- La biodegradación aerobia es mucho mayor que la
anaerobia
- Depende de su ubicación en el ambiente marino, por
ej: es mucho menor en sedimentos, playas de baja
energía…

Nutrientes - Su disponibilidad suele ser más limitante que la de 𝑂2

- La mayoría de los ambientes marinos son deficientes en
algunos nutrientes esenciales como N, P o Fe
- Relación C/N/P eficiente: 120:10:1

Microorganismos que degradan el petróleo:

- Suelos: Pseudomonas
- Agua: Alcanivorax (G-)

La bioestimulación ha sido el método de biorremediación más estudiado y se presenta como el de más

factible aplicación para la mayoría de vertidos (adición de N y P que son limitantes en estos
ecosistemas). También la bioventilación (cuando se han ido al fondo, “remover”).

8.2. Biorremediación EX SITU: COMPOSTAJE

(el producto contaminado se traslada a una planta de tratamiento o biorreactores donde se trata)

El proceso de biorremediación ex situ es el compostaje (eliminación de residuos sólidos).

COMPOSTAJE: se trata de un proceso biológico controlado de descomposición de la materia orgánica,
procedente de restos vegetales, animales y urbanos en condiciones aeróbicas o anaeróbicas y
 cuyo resultado es un producto denominado compost, que ha sido estabilizado e higienizado.
Contiene un alto contenido en sustancias húmicas.

El compost se puede utilizar como un nutriente o biofertilizante para el suelo ya que mejora su estructura,
la retención de agua, reduce la erosión…

En el proceso de compostaje, la materia orgánica (restos orgánicos de la basura, lodos de depuración de

aguas…) se suele mezclar con agentes eponjantes (2:1) como virutas de madera, para disminuir la
compactación y favorecer la aireación en las pilas de compostaje.

Sucesión microbiana y ambiental durante el compostaje

Sucesión microbiana y ambiental durante el compostaje

En este proceso vemos que la relación C/N va desde un mínimo de 10 hasta un máximo de 30 = la
biodisposición de carga de C tiene que ser 10 o 30 veces superior a la de N.

En la gráfica observamos diferentes tipos de comunidades microbianas y de hongos que actúan en

el proceso de compostaje. Estas comunidades se reflejan en una curva similar a la curva de
crecimiento microbiano. Esto ocurre porque en sí el compostaje es igual que realizar un cultivo,
solo que este proceso se hace a macroescala. Tenemos una pila de materia orgánica que sirve
como fuente de nutrientes a nuestros microorganismos, unos parámetros físico-químicos
ambientales que afectarán en mayor/menor medida a la comunidad (Tª, pH, C/N…).

En el caso de un cultivo tenemos un proceso en microescala donde controlamos también

diferentes parámetros para el crecimiento de nuestros microorganismos de interés.

También se destacan diferentes puntos de “volteo de la pila” para airear la pila de materia
orgánica y que favorezca la degradación aeróbica (metabolismo oxidativo).

El proceso de compostaje se puede dividir en diferentes fases:

- Fase Mesófila:
Los microorganismos que se van a desarrollar en esta fase son mesófilos, principalmente
bacterias, aunque también encontramos hongos y levadura.
Los hongos tienen un papel muy importante porque pueden atacar compuestos como
lignina, celulosa u otros que las bacterias no son capaces de degradar. Además, los hongos
crecen mejor en ambientes ácidos (en comparación con bacterias).

La Tª en esta fase oscila desde 15-40𝐶 𝑜 .

Como consecuencia del metabolismo de estos microorganismos se va acumulando calor

en la pila de materia que hace que paulatinamente la temperatura vaya subiendo hasta
alcanzar una máxima, generalmente, de 60𝐶 𝑜 .

- Fase Termófila:
El aumento de la temperatura de la pila de m.o. actúa como agente seleccionador de los
microorganismos que continúan el proceso (aquellos que soporten las temperaturas de
60-70𝐶 𝑜 ).
Estos microorganismos van a ser principalmente bacterias termófilas. En esta fase no se
suele observar hongos.

Con la subida de temperatura, además, se consigue una desinfección/aseptización de

toda la pila ya que se eliminan la mayoría de patógenos y mueren también muchos otros
microorganismos.
Las esporas de algunas bacterianas y hongos se conservan en el tiempo para etapas
posteriores.
 También se impide la posible germinación de semillas que hubiese en toda la mezcla de
residuos orgánicos.
Todo esto nos permite mantener la materia estabilizada y desinfectada.
La temperatura va bajando paulatinamente hasta alcanzar la siguiente fase.

- Fase de Enfriamiento:
Durante la bajada de temperatura (muy lenta, puede llegar a durar días/meses…)
comienza esta fase.
Algunos microorganismos resurgen en esta etapa, generalmente procedentes de esporas
que han sobrevivido a las altas temperaturas.

- Fase de Maduración:
En esta fase final se observa como los hongos empiezan a dominar sobre las bacterias
porque la temperatura ha bajado de forma considerable y el ambiente ácido favorece el
desarrollo de estos.

A nivel temporal esta fase puede prolongarse incluso mucho más que las 3 fases
anteriores.
El producto resultante es el compost (materia estabilizada que puede aplicarse sobre el
suelo).

9. Tratamiento del agua

La actividad humana (uso doméstico, agrícola, industrial) genera las llamadas aguas residuales,
que no pueden ser vertidas a las mismas fuentes de donde volveremos a tomar el agua para
nuestro uso.

Las aguas residuales son las que han sido usadas por una comunidad e incluyen desechos
domésticos, agrícolas, industriales así como las aguas profundas, superficiales y atmosféricas, que
entran en el mismo sistema de drenaje.

Los objetivos del tratamiento de agua son:

- Eliminar microorganismos patógenos para evitar problemas sanitarios.

- Eliminar sustancias tóxicas, para evitar dañar el medio ambiente y evitar problemas
sanitarios si esta agua va a ser reutilizada para beber y para cultivos.
- Reducir la cantidad de sólidos y de materia oxidable en el efluente final para evitar la
eutrofización de las aguas.

Procesos de tratamiento de aguas residuales:

- Medio rural: fosas sépticas.

- Ciudades e industrias: depuradoras de aguas residuales.
9.1. Depuración de aguas residuales

Lo que busca este proceso es reducir la demanda bioquímica de oxígeno (DBO) y eliminar
bacterias/microorganismos patógenos.

Menos DBO = menos carga orgánica, menos bacterias en el agua.

El agua que entra en las estaciones depuradoras de aguas residuales (EDAR) presenta una DBO
altísima. En el siguiente esquema se presentan los procesos que sufre el agua que entra a una
EDAR. Las aguas que se obtienen al final generalmente se utilizan para riego o se devuelven a los
ríos, mares…

Antes de entrar a la EDAR, el agua sufre un pretratamiento y después le siguen un tratamiento

primario, secundario y terciario.
El Pretratamiento y el Tratamiento Primario son procesos físicos para eliminar residuos/partículas
gruesas del agua. Se puede bajar la DBO en esta fase entre un 20-30%.

Pretratamiento
Desbaste: se trata de una criba con rejillas de mayor a menor tamaño para eliminar los residuos
gruesos.

Tratamiento Primario
Se acumulan las partículas gruesas que queden en el agua por sedimentación (lodo primario).
Tratamiento Secundario
La estrategia más usada es un proceso biológico y aerobio que se basa en fangos o lodos
activados. Requiere aireación del agua. Se elimina la materia orgánica e inorgánica que quede en
el agua, fundamentalmente gracias a Zooglea ramigera y otras bacterias.
En este proceso se forman flóculos, fácilmente sedimentables que van atrapando poco a poco
diversas partículas y/o bacterias.
Después, en otro tanque de sedimentación se acumulan dichos flóculos formando el lodo
secundario o lodo activado (denominado así por la presencia de bacterias).
Parte de este lodo se utiliza para inocular un nuevo lote de agua que va a recibir el tratamiento
secundario. Pero la mayor parte se añade al lodo primario para su posterior procesamiento.
Finalizado el tratamiento secundario se ha reducido la DBO en un 90 hasta un 95%.
Los otros tipos de tratamientos secundarios biológicos y aerobios se usan sobre todo con masas de
agua más pequeñas:
- Filtros de percolación: Rellenos de material filtrante que permite la formación de
biopelículas que se encargan de descomponer la materia orgánica del agua.

- Sistema de biodiscos: en este caso, las biopelículas microbianas se forman sobre la

superficie de discos rotatorios.

Tratamiento Terciario
No es aplicado en todas las depuradoras pero es necesario. Puede realizarse mediante procesos
físicos-químicos, biológicos o una mezcla de ambos; dependiendo del uso y finalidad de la planta
de depuración. Busca eliminar los patógenos que hayan podido quedar en el agua, además del
exceso de nutrientes como el Nitrógeno y el Fósforo que pueden favorecer una rápida
eutrofización. Los distintos tipos de tratamientos son:
- Filtración
- Radiación UV
- Adición de compuestos químicos clorados
- Uso de la desnitrificación (en condiciones anóxicas)
- Uso de la nitrificación (en condiciones aerobias con de bacterias quimiolitotrofas)
- Adición de microorganismos como Acinetobacter o Klebsiella para eliminar el Fósforo
(puesto que acumulan el fosfato en gránulos)
- Adición de sales de aluminio o hierro para eliminar Fósforo
Los lodos/fangos obtenidos se llevan a vertederos o se derivan a la agricultura. También se pueden
tratar en la propia planta depuradora para obtener biogás por un proceso de compostaje
anaeróbico.
Este biogás (CH4) puede usarse en la propia planta como combustible (p. ej.: para calentar el
tanque 1 del Tratamiento Secundario).

Molécula orgánica

1. Bacterias celulolíticas

Monómeros

2. Bacterias

Ácidos orgánicos,

3. Fermentadores secundarios,
(sintróficos: Bacterias
Acetato, H2, CO2
4. Bacterias
Metano (CH4)
Otro sistema de depuración de aguas residuales es el denominado lagunaje. La masa de agua se va
trasladando a distintas balsas cada vez menos profundas. Por medio de procesos de
sedimentación y gracias microorganismos se va eliminando la materia orgánica e inorgánica del
agua.
 TEMA 6: INTERACCIONES MICROBIANAS

La simbiosis engloba todas las interacciones, aunque habría que añadir una denominación (p.ej.:
simbiosis mutualista ≣mutualismo). Distinguimos dos grandes tipos de simbiosis:
- Simbiosis positiva: aquella donde al menos un miembro de la asociación sale siempre
beneficiado pero ninguno sale perjudicado.
- Simbiosis negativa: aquella donde al menos un miembro de la asociación sale perjudicado.

Simbiosis Positiva
- Mutualismo: Los dos miembros reciben beneficio. Es
una interacción física obligada.
Ej: bacterias tipo Rhizobium y leguminosas.

- Comensalismo: Uno de los dos miembros recibe el

beneficio. Un microorganismo que secreta un
metabolito que otro va a utilizar a su favor.
Ej: Nitrosomonas (producen NO2) y Nitrobacter
(utilizan el NO2 para producir NO3)

- Cooperación: Los dos miembros reciben beneficio.

Es una interacción NO obligada.
Ej: bacterias fotótrofas anoxigénicas del azufre
(Chromatium) y bacterias sulfatorreductoras
(Desulfovibrio).

Simbiosis Negativa
- Depredación: Un miembro ataca o
atrapa a una presa para
alimentarse y, generalmente, le
provoca la muerte. Con un periodo
de contacto generalmente corto.

- Parasitismo: Un miembro obtiene un beneficio del otro y

el hospedador resulta dañado. Ej: virus

- Amensalismo: Un organismo provoca un efecto

negativo sobre otro. Es unidireccional, la liberación de
un compuesto tiene un efecto negativo sobre otro
organismo.
 - Competición: Ambos microorganismos
compiten por nutrientes o posición física.

MUTUALISMO: MICORRIZAS
Asociación mutualista entre hongos y raíces de
plantas. Encontramos: Endomicorrizas, Ectomicorrizas
y Ectendomicorrizas (una asociación que mezcla características de los otros dos grupos)

Endomicorrizas o Micorrizas arbusculares: El proceso del inicio de la asociación mutualista

comienza con una señalización química recíproca entre la planta y el hongo. Las raíces de las
plantas exudan estrigolactona, que induce la germinación de las esporas del hongo, la elongación
y la ramificación de las hifas hacia las células de la planta. Por su parte, los hongos producen
factores micorrízicos (factores mic) que inducen la activación de los genes de la planta
relacionados con la simbiosis, que finalmente dirigen la penetración de los arbúsculos dentro de
las células.
Esta simbiosis se ha visto que favorece enormemente la capacidad enraizadora de la planta e
incluso la capacidad de colonizar ambientes extremos.

El siguiente esquema muestra el intercambio de nutrientes entre la hifa y la célula de la raíz

vegetal, que se lleva a cabo en el Espacio periarbuscular. Se puede apreciar que las formaciones
arbusculares de la hifa están completamente rodeadas por la membrana plasmática de la célula
vegetal (sin llegar a contactar con el citoplasma), teniendo así una gran superficie de contacto
célula-hifa, esencial para el traspaso de nutrientes entre los organismos.
La planta aporta al hongo una fuente de carbono y el hongo aporta una importante fuente de
fósforo y de nitrato.
MUTUALISMO: EL RUMEN Y SUS MICROBIOS
En el rumen de los animales rumiantes se ha descrito una importante y abundante microbiota
(1010-1012 bacterias/arqueas por gramo de contenido rumiado, además de unos 106
protozoos/hongos). Esta microbiota cambia en función del alimento principal del animal (plantas
herbáceas o almidones).
La microbiota se encarga de digerir la materia orgánica vegetal ingerida (normalmente bacterias
heterótrofas son las que hidrolizan los polímeros como celulosa o almidón hasta monómeros),
puesto que el rumiante carece de las enzimas necesarias para este cometido. Estos monómeros
son fermentados por bacterias fermentadoras que liberan ácidos orgánicos (acetato, butirato,
propionato…) que sí son absorbibles por la pared del rumen hasta la sangre y son utilizados por el
animal como fuente de energía. Otra parte de estos ácidos orgánicos se transforman en CO2 e H2,
sustrato principal para que las arqueas metanogénicas produzcan metano.
Parte de esta microbiota termina pasando al intestino donde es digerida y sirvie al animal como
fuente de aminoácidos.
 MUTUALISMO: MICROORGANISMOS E
INVERTEBRADOS
Encontramos en fuentes hidrotermales
submarinas un tipo de poliqueto llamado
Riftia pachyptila que carece de sistema
digestivo. Sin embargo, en lugar de ser
absortivo, participa en una relación
simbiótica mutualista con unas bacterias
endosimbiontes quimiolitotrofas del
azufre que se encuentran en el interior
de las propias células del poliqueto
(denominadas bacteriocitos). Estos
poliquetos están muy vascularizados y,
podemos encontrar una zona
denominada pluma, de un intenso color
rojo, que contiene altas cantidades de
hemoglobina que captura O2 y sulfuro,
transportándose hasta el endosimbionte
que oxida el sulfuro a sulfato utilizando el
oxígeno como aceptor final de
electrones, obteniendo así ATP que va a
utilizar en parte para fijar C02 por el ciclo
de Calvin, materia orgánica que va a
proporcionar al poliqueto.

MUTUALISMO: SINTROFÍA OBLIGADA

La sintrofía es bastante típica entre microorganismos en ambientes naturales y el motivo por el
cual en muchos casos no se pueden cultivar ciertos microorganismos en el laboratorio al precisas
de ciertos compuestos formados por otros microorganismos.
Un ejemplo se da entre
estos dos procariotas
termófilos: Pelotomaculum
thermopropionicum
(bacteria que actuaría como
degradador primario) y
Methanothermobacter
thermoautotrophicus
(arquea que actúa como
consumidor). Entre ellos
existe una conexión física
formada por nanocables
producidos por la bacteria
que conectan con la arquea.
Pelotomaculum pertenece a
la clase Clostridia (Gram +,
endosporulada, anaerobia, fermentadora), fermenta propionato que precisa la eliminación de H 2
(fuente de poder reductor) del medio para ser termodinámicamente favorable. Esta eliminación
de H2 la provoca la metanoarquea que lo utiliza para producir metano.
La transferencia de este H2 se produce a través de los nanocables, anteriormente mencionados, de
naturaleza proteica y muy similares a flagelos bacterianos, están constituidos por proteína FliC (se
encarga de transportar el H2 de la bacteria a la arquea) y proteína FliD (activa de alguna manera el
proceso de metanogénesis en la arque para que consuma el H2) en el extremo terminal.

DEPREDACIÓN: BDELLOVIBRIO

Bdellovibrio ataca a otras bacterias gram -,

es uno de los organismos más veloces.
Posee un potente flagelo envainado que le
confiere una enorme velocidad que usa
para impactar contra su presa y se aloja en
el periplasma, donde va consumiendo el
contenido de la bacteria, replicándose y
generando nuevos Bdellovibrios.

Existen otras bacterias depredadoras

como: Vampirococcus, Daptobacter.
PARASITISMO: PATÓGENOS SOBRE
PLANTAS
Infección por Agrobacterium tumefaciens por la introducción de su plásmido Ti en el genoma de la
planta, aprovechando heridas o rozaduras, se introduce en la planta y produce las denominadas
agallas o tumores en la zona de células afectadas, estas células transformadas además, sintetizan
Opinas (aminoácidos que sirven de alimento para la bacteria).

PARASITISMO: PATÓGENOS SOBRE INSECTOS

Wolbachia es un endosimbionte que se transmite infectando los huevos del hospedador. A la larga
reduce la población mediante la eliminación de los machos.

COMPETICIÓN: QUORUM QUENCHING

Actualmente, se están investigando diversos mecanismos que interfieran con el Quorum Sensing
como alternativa a los antibióticos. Estos mecanismo de interceptación bacteriana se denominan
Quorum Quenching.
De esta forma se podría impedir la formación de las biopelículas microbianas que tantos
problemas pueden causar dado que aumentan la resistencia y el carácter invasivo de las bacterias
que las conforman.

Los mecanismos mejor conocidos de interrupción del Quorum Sensing (en gram -), consisten en la
producción de enzimas que hidrolizan o modifican químicamente, inactivándolos, los
autoinductores AHL (Acetil Homoseril Lactona) más frecuentes en proteobacterias:
- Lactonasas: abren el anillo de las AHL.
- Amidasas o acilasas: hidrolizan el enlace amida de las AHL.
- Reductasas: sustituyen el 3-oxo de la AHL por 3-hidroxil.
- Citocromo oxidasas: oxidan la cadena acilada.
TEMA 7: INTERACCIONES DE LOS MICROORGANISMOS CON LOS
HUMANOS

Microbiota: hace referencia a la especie microbiana que aparece en un sitio determinado del
organismo.
Microbioma: engloba a la aportación genética del genoma de los microorganismos y no sólo a su
especie (las diferencias genéticas entre microorganismos de la misma especie presentes en
distintos organismos).

MICROBIOMA HUMANO
El término microbioma humano se emplea para referirse a los microorganismos presentes en los
individuos sanos y engloba todos los sitios habitados por éstos.
Los microorganismos no se reparten de forma homogénea en nuestro organismo.
Debemos tener en cuenta que los órganos y fluidos internos están libres de microorganismos.
El cuerpo humano está formado por 1013 células y hay 1014 células microbianas en el cuerpo.
Se pensaba que las Enterobacterias eran el microorganismo mayoritario en el tracto digestivo
pero, gracias a las nuevas técnicas, se ha descubierto que esto no es así.

Proyecto Genoma Humano (HGP): Provocó un rápido avance de las técnicas de secuenciación del
ADN, con fines clínicos. Busca ver qué variaciones causan qué enfermedades y distinguir aquellas
con causa ambiental de las genéticas.

Técnica NGS (Tecnología de Secuenciación Masiva): permitió ahorrar el paso previo de

cultivo/clonación/librerías/… que provocaba un sesgo. Gracias a la secuenciación del gen 16S que
es el que se sigue usando actualmente para la identificación de especies.

A partir de 2007 se trató de establecer un microbioma de referencia (siempre con muestras de

individuos sanos) estudiando muestras de todos los órganos (sobre todo del intestino porque es el
que más proporción de microbiota aporta), con la finalidad de relacionar la presencia de
microorganismos concretos con enfermedades concretas, diferenciándolos de los que son
intrínsecos a nosotros.
La relación entre cambios en el genoma de los microorganismos intrínsecos pueden afectar a las
rutas metabólicas que llevan a cabo que provoquen alguna enfermedad en el individuo.

Microorganismos Residentes: siempre están presentes y son capaces de proliferar. Su interacción

con el individuo es positiva. Compiten con microorganismos dañinos.
Microorganismos Transeúntes: su presencia es ocasional, en baja proporción, no están asentados
y son incapaces de multiplicarse.
Patógenos: al igual que los transeúntes, no están presentes siempre y suelen estar en baja
proporción.
Patógenos Oportunistas: tienen el potencial de causar enfermedades pero no lo hacen hasta que
el individuo presenta una debilidad inmunológica o se cambian de ubicación (Ej: E. coli).

MICROBIOMA HUMANO: PIEL

La piel es una barrera física en aquellas superficies sin mucosas. También representa una barrera
química según pH (ácido), humedad (baja) y [NaCl] (alta). La superficie de la piel no es homogénea,
se forman microambientes:
- Regiones húmedas: axilas, ombligo, zona interior del codo.
- Regiones secas: antebrazos, glúteos, manos.
- Regiones sebáceas: frente, espalda, zona posterior de las orejas.
Se calcula que tenemos 2m2 de piel en la cual se estiman unas 1012 células bacterianas. El
microbioma de la piel viene definido por 5 filos bacterianos mayoritarios: Actinobacteria,
Firmicutes (gram-positivos), Proteobacteria, Bacteroidetes y Fusobacteria (gram-negativos). La
diversidad de estos microorganismos varía según las regiones: secas > húmedas > sebáceas.
Se cree que la predominancia de microorganismos gram + en la piel se debe a una mejor
adaptación a la baja humedad.
Dentro de las células epidérmicas encontramos:
- Asociadas a glándulas sudoríparas: agua, aminoácidos, electrolitos…
Predomina Staphylococcus epidermidis
- Asociadas a glándulas sebáceas: destacamos a Propionibacterium acnes (Actinobacteria),
degrada lípidos, tiene acción antibacteriana contra gram-negativos. Es la causante del olor
corporal (desodorantes con antimicrobianos frente a gram-positivos) y del acné.
- Presencia de hongos dimórficos: Candida spp. y Malassezia spp.

La diversidad de microorganismos viene Influenciada por:

- Clima: Temperatura y humedad.
- Edad: los niños presentan más diversidad y patógenos potenciales
- Higiene (a menor higiene, mayor diversidad)

MICROBIOMA HUMANO: TRACTO RESPIRATORIO

Las membranas mucosas tienen secreciones continuas.
Existe una tendencia de las partículas y bacterias a adherirse a las paredes conforme se reduce el
flujo de aire (vías inferiores).
Las células epiteliales ciliadas expulsan partículas hacia las vías altas.
Presenta un sistema inmune (macrófagos alveolares) y enzimas antibacterianas (lisozima nasal).

No existe microbiota residente del tracto respiratorio.

El tracto respiratorio superior está colonizado por estafilococos, estreptococos, difteroides y cocos
gram-negativos. Ocasionalmente aparecen especies patógenas de Staphylococcus aureus o
Streptococcus pneumoniae (individuos portadores).
El tracto respiratorio inferior está libre de bacterias (salvo patógenos).

MICROBIOMA HUMANO: CAVIDAD ORAL

En la cavidad oral hay presencia de nutrientes (baja concentración, pero con acumulación en
dientes y encías), pH neutro y temperatura moderada.
La secreción salival contiene enzimas antibacterianas: lisozima, lactoperoxidasa.
Las perturbaciones mecánicas y el arrastre físico llevan posibles patógenos hacia el estómago.
Podemos destacar los siguientes microorganismos:
- Firmicutes: Streptococcus spp., Veillonella parvula (anaerobio), Staphylococcus spp.
- Bacteroidetes: anaerobios obligados
- Proteobacteria: Neisseria spp., Acinetobacter spp., Moraxella spp.

La microbiota es muy variable, le influyen factores genéticos y ambientales. Un individuo puede

presentar una determinada composición y mañana por efecto de los factores pueden presentar
otra, esto también está influido por la dieta.
Hoy nos centramos en el tracto intestinal, en la microbiota presente en esta zona, es una de las
partes anatómicas del cuerpo más estudiadas a nivel de la microbiota ya que es una de las zonas
donde más presentes se encuentran los microorganismos.

El tracto digestivo tiene diferentes modificaciones funcionales para llevar a cabo diferentes
procesos, lo más característico es aumentar la superficie de contacto para la absorción de los
nutrientes. Nuestro intestino tiene una superficie en torno a 400m 2, como una cancha de
baloncesto. Toda esta superficie es el espacio disponible que tienen los microorganismos para
colonizar.

Los microorganismos no van a colonizar todos los espacios, sino que lo van a hacer de manera
peculiar, por las adaptaciones que presenta el sistema digestivo, porque hay ambientes que
pueden ser más o menos aptos para la colonización.

En zonas como el estómago que tiene unas condiciones muy restrictivas los recuentos de células
de la microbiota que podemos encontrar aquí va a ser muy limitada y conforme van mejorando las
condiciones y alcanzando el máximo en el intestino grueso vamos a encontrar unos recuentos de
células con una diversidad y abundancia de organismos mucho mayor.

En total encontramos en torno a 1014 células microbianas en todo el intestino. La distribución no

es homogénea, se concentran sobre todo en el intestino grueso por las condiciones de pH,
oxígeno, nutrientes disponibles, de secreciones que tienen una actividad microbiana que hacen
que el ambiente en el intestino grueso sea el óptimo para el desarrollo de microorganismos.
Mayoritariamente hay anaerobios, Gram + y -, Firmicutes y Bacteroidetes, que en conjunto suman
el 80% de la microbiota del intestino. Las enterobacterias como E.coli, su abundancia es menor del
8%.

Los Firmicutes son Gram + y los Bacteroidetes Gram -.

Este gran número de células tienen unas condiciones óptimas, y para mantener la microbiota
tienen que reproducirse y multiplicarse para que el asentamiento de los microorganismos sea
estable, con las heces eliminamos cada día en torno a 1013 microorganismos, con lo que se tienen
que duplicar para mantener los niveles de flora bacteriana. La microbiota es beneficiosa y actúa
como defensa contra organismos patógenos. Ahora se le asocia otra serie de papeles a la
microbiota intestinal.

Se han detectado determinadas zonas donde pueden aparecer hongos como la levadura cándida y
arqueas, asociados a procesos patológicos. Lo que no se asocia a microbiota normal son los
protistas: hongos, protozoos, amebas… esto se asocia siempre con algún proceso patológico.
DIFERENCIACIONES DEL TRACTO DIGESTIVO.

En el estómago el pH acido en torno a 2, muy limitante en la cantidad de microorganismos que

soportan estas condiciones. Esto hace que haya unos niveles muy bajos de células en torno a 10
células/ml. Los grupos mayoritarios van a ser los estreptococos, estafilococos, Lactobacillus,
Peptostreptococcus spp y levaduras como Candida spp… Lactobacillus, tiene resistencia al pH, con
una serie de particularidades que le permiten adaptarse a estas condiciones. Estos son los grupos
que más frecuentemente se aíslan, pero hay poca abundancia.

En el intestino delgado al inicio hay secreciones pancreáticas, enzimáticas, biliares, que tienen
actividad antimicrobiana y
no es una zona optima de
crecimiento, pero la
neutralización del pH sí que
va a ir mejorando. El pH va
aumentando conforme nos
alejamos de la zona del
estómago, esto implica un
aumento de la diversidad
microbiana. Empezamos a
ver Bacteroides
(Bacteroidetes, anaerobio,
Gram –), Lactobacillus (por
su resistencia a esas
condiciones de pH), pero lo
que más abunda son
diversas especies de Gram+
como Clostridium, Mycobacterium, Enterococos. Las condiciones mejoran conforma avanzamos en
el intestino.

En el grueso encontramos un pH neutro con condiciones óptimas para la proliferación de gran

diversidad de microrganismos. E.coli tiene un papel fundamental, es anaerobio facultativo y
representan menos del 8% pero tiene un papel fundamental, se asocia a que son capaces de
consumir los restos de oxígeno que presenta el estómago en esta zona, con esto conseguimos
condiciones de anaerobiosis que permite la proliferación de los microorganismos anaerobios, por
eso encontramos tanta diversidad microbiana en este nivel.

El porcentaje de contribución en cada zona del intestino no siempre se relaciona con el de la

diversidad. Aunque los porcentajes puedan ser bajos, hay mucha diversidad de ese tipo de
bacterias, y cuando los porcentajes son altos puede ser que la contribución de ese microorganismo
sea mayor, pero puede tener menor diversidad.
Las enterobacterias son gamma-proteobacterias, anaerobios facultativos, Gram -, no esporulados,
oxidasa -, catalasa + y fermentadores de distintos carbohidratos. Son Salmonella, Shigella,
Serratia, Yersinia, Proteus, Enterobacter, Citrobacter, Klebsiella…

ETAPAS DE DESARROLLO DE LA MICROBIOTA.

Desde el punto de vista del desarrollo, la microbiota se desarrolla durante el embarazo y en este
momento somo estériles, la microbiota es 0. En el nacimiento dependiendo de la forma del
nacimiento entramos en contacto con unos microorganismos u otros y esto es lo que nos va a
condicionar en parte la microbiota inicial.

-Por parto natural, entramos en contacto con la microbiota de la vagina, con lo cual los primeros
microorganismos en entrar en nuestro intestino están asociados a Lactobacillus y Prevotella.

-Por cesárea, estos microorganismos están más asociados con la microbiota de la piel y vamos a
encontrar Estafilococos.

En los primeros días depende de la alimentación; por biberón la microbiota va a ser escasa. Con
leche materna Lactobacillus, Mycobacterium y también por el contacto con la piel de la madre
encontramos Estafilococos y Enterococos…. Seguimos evolucionando a alimentos sólidos por lo
que entramos en contacto con nueva microbiota, y se reducen las Bifidobacterium (relacionados
con la alimentación de lactancia), y comienza un aumento de la diversidad microbiana, durante los
primeros años la microbiota intestinal evoluciona de manera rápida y caótica, no hay un
establecimiento claro, aparecen unos grupos que rápidamente se cambian por otros, vuelven a
aparecer los primeros, y todo esto está muy relacionado con la nueva dieta, muy variable, con los
nuevos contacto con el medio ambiente…

Una vez que ya se ha comparado la evolución de todos los años, la diversidad microbiana tiende a
aumentar, y cuando somos adultos al ser nuestro estilo de vida más estable, la diversidad
microbiana va a ir aumentando, inicialmente presentamos una mayor proporción de
microorganismos pertenecientes a los aerobios que van a ir siendo sustituidos por anaerobios
como Firmicutes y Bacteroidetes.

Uno de los factores más importantes a la hora de determinar la microbiota va a ser la dieta. Si
consumimos productos ricos en proteínas y grasas saturadas la microbiota va a ser diferente si la
dieta es vegetariana. Va aumentando la diversidad con la edad, si no variamos los alimentos van a
haber microorganismos mejor adaptados que otros a la degradación y utilización de esos
alimentos.

MICROBIOMA HUMANO Y SALUD

La función de los microrganismo en el intestino, uno de los papeles fundamentales es la digestión

de los nutrientes, para que sean modificados a partir de Bacteroidetes y Firmicutes, modifican los
compuestos y producen otra serie de productos como ácidos grasos volátiles, monosacáridos,
vitaminas, aminoácidos, proteínas y otra serie de compuestos como metabolitos resultantes de su
metabolismo que van a estar disponibles tanto para ellos como para nuestras células epiteliales.

Estos productos generados de su metabolismo de alguna manera condicionan el funcionamiento

de nuestras células, esos metabolitos son detectados por nuestras células y producen cambios en
la expresión génica de nuestras células para adaptarse a esos compuestos. Si estos
microorganismos como producto de su metabolismo generan glucosa, las células epiteliales verán
que hay glucosa inducirán cambios genéticos, para activar los transportadores de glucosa. Esto
también lo podemos aplicar a los aminoácidos, etc. Los microorganismos no solo están ahí
pidiendo alimentos y creciendo ellos, sino que como productos o derivados de su metabolismo
también condicionan el funcionamiento de nuestras células. Hay una interacción muy estrecha
que no solo es para convivir juntos, condicionan esa presencia génica por parte de nuestras células
epiteliales y también de alguna manera condicionan al sistema inmune durante esos primeros
contactos en las primeras etapas de la vida con microorganismos, el sistema inmune aprende a
reconocer los microorganismos que son dañinos de aquellos que no y ayuda a facilitar el
asentamiento de esa microbiota normal, atacándolos, influyendo en sus supervivencia…

La microbiota intestinal contribuye a la captación de nutrientes.

Existe una relación más íntima que condiciona lo que es el funcionamiento de nuestras células.

Referente al metabolismo de esos nutrientes que llegan al tracto digestivo, algunos estudios lo
que han visto es que independientemente de las proporciones de procesos de grupos mayoritarios
como Firmicutes y Bacteroidetes, el pool de genes implicados en el metabolismo de esos
compuestos parece que se mantiene estable.

Las especies en concreto pueden variar de un individuo a otro, o incluso en un mismo individuo
debido a factores varios, su función metabólica del pool de genes disponible para degradar esos
metabolitos y obtener esos compuestos secundarios, se mantiene de una manera estable, es
decir, pueden varias las especies, es decir, si hay 100 genes disponibles para degradar las proteínas
en toda la microbiota total, independientemente de que varíen los grupos tanto en concentración
como en proporción, siempre va a haber el mismo número de genes, sustituyéndose unas especies
por otras pero al final su valor funcional va a ser más o menos el mismo.

MICROBIOMA INTESTINAL Y OBESIDAD

Se ha relacionado esa microbiota con distintos aspectos de la salud. Uno de los más estudiados
han sido la obesidad y las enfermedades intestinales. En el caso de la obesidad hay muchos
estudios en ratones, donde se ha evaluado y comparado esa microbiota en 3 ratones normal de
peso a los cuales se han sometido a unas condiciones con ratones que son obesos. Lo que se ha
observado es una primera conclusión que dice que la presencia de microorganismos en el
intestino facilita la absorción de nutrientes y con ello la ganancia de peso. Los ratones en ausencia
de microbiota y se compara el peso que tienen estando estériles y luego se le transfiere la
microbiota y se vio que ganaban peso, en parte por la disponibilidad mayor de esos
microorganismos, porque los microorganismos degradan los nutrientes generando otros de mayor
absorción o de mayor utilidad en este caso para el ratón y este incluye más nutrientes en sus
células lo que conlleva a una ganancia de peso. La presencia de microorganismos facilita la
absorción de nutrientes por parte del ser vivo.

A la hora de comparar la composición microbiana en microorganismos con sobrepeso y los que no,
se vieron diferencias observables y cuantificables con una reducción del grupo de los
Bacteroidetes (G-), un aumento de los Firmicutes (G+), y un aumento de la presencia de arqueas
metanogénicas. La hipótesis es que la arqueas consumen el hidrógeno presente en el ambiente y
facilitan la fermentación de los compuestos, por lo que los microrganismos ejercen una mejora en
las fermentaciones por ausencia del hidrogeno y facilitan la generación y por tanto absorción de
esos nutrientes.

Esto en humanos esta menos estudiado, pero sí que ya hay indicios que esto sucede a nivel del
embarazo, que se tiende a la ganancia de peso, por lo que se ha observado algunas variaciones a
nivel de la microbiota.

ENFERMEDAD DE CROHN

Son problemas a nivel intestinal, inflamaciones, diarreas, sobre todo el daño es causado en los
tejidos intestinales. Se intentó asociar con un patógeno, pero se vio que no se podía asociar este
trastorno con ningún microorganismo. Se vio que esto está asociado a una disbiosis que es un
desequilibrio en la microbiota que cambia
drásticamente. A nivel metagenómico se ha
observado que la diversidad metabólica que
es aportada por la microbiota es mucho
menor que en pacientes sanos. Es decir, estos
pacientes poseen una microbiota que no
aporta suficiente diversidad metabólica para
la degradación de esos nutrientes. Presentan
un desequilibrio a nivel del intestino grueso de
esa microbiota y a nivel metagenómico de la
contribución del pool de genes implicados en
el metabolismo de genes es menor en los pacientes que no están sanos.

Se ha intentado siempre relacionar microbiota con problemas intestinales, pero hoy en día, debido
a esa relación que se ha descubierto que la microbiota es capaz de influir en la expresión génica de
nuestras células y condicionarlas en su comportamiento, también se está estudiando la relación de
ese microbioma intestinal con enfermedades o patologías fuera de esa zona anatómica.

Se ha propuesto la existencia del eje microbioma-intestino-sistema nervioso central; de alguna

manera la microbiota que tenemos en nuestro intestino es capaz de influir en nuestro cerebro
sobre el SNC, ya se ha demostrado que el microbioma es capaz de alterar la expresión génica de
las células epiteliales de nuestro intestino pues también se ha propuesto que a través de los
compuestos metabólicos de las células, mediando por las células del sistema inmune que serían
sensibles a estos compuestos, mediante de la liberación de citoquinas y demás, que son factores
que promueven inflamación, y comunicación, por lo que las células del sistema inmune serían
capaces de comunicarse con el plexo nervioso que existe a nivel del intestino, y este directamente
con el cerebro, produciendo alteraciones en la expresión de genes, en el comportamiento con las
neuronas…

Este microbioma también se puede relacionar con alteraciones como el Alzheimer.

ESTUDIOS DE LA COMPOSICION MICROBIANA están relacionados con alteraciones a nivel del

corazón, alergias, problemas respiratorios… simplemente con patologías que no se sabe si están
asociado a un patógeno, o a un factor clave, estas enfermedades pueden ser multifactoriales y
ahora lo que se trata es relacionar la influencia de este microbiana a nivel de estos síndromes o
patógenos.

La diversidad de microorganismos evoluciona desde el nacimiento hasta la salida de los dientes

como
se
muest
ra en
el
siguie
nte
esque
ma:
TEMA 8.- ENFERMEDADES INFECCIOSAS CAUSADAS POR VIRUS.
Los virus son entidades víricas sin organización celular que presentan un genoma que puede estar
compuesto por DNA o RNA. Nunca pueden aparecer los dos juntos, o es DNA o RNA. Sin embargo,
nuestras células tienen DNA para almacenar información y además producen RNA para que
funcione esa información. A diferencia de las células donde la información se almacena en forma
de DNA, los virus la pueden almacenar de las dos formas.

Son parásitos intracelulares obligados. No son capaces de multiplicarse ni de llevar a cabo ningún
principio de actividad metabólica fuera del interior de las células hospedadoras. Necesitar estar
dentro de una célula para llevar a cabo sus actividades: replicarse y multiplicarse.

Los virus se encuentran un

poco en la frontera de la vida
y no vida, de hecho, el debate
todavía está abierto, porque
tiene la particularidad de que
no tienen las características
propias de una organización
celular.

Estructuralmente tienen el componente fundamental que es el material genético, protegido por

una estructura proteica que se denomina cápside, cuyas subunidades fundamentales son
denominadas capsómeros y que conjuntamente forman material genético. Este material genético
junto con la cápside forma la
nucleocápside.

Adicionalmente existen otros virus

donde la cápside va a estar protegida
por una membrana lipídica. Los que
poseen dicha membrana se denominan
virus envueltos, y los que no se
denominan virus desnudos.

EL VIRION.
El virión es una forma de virus extracelular, que vamos a observar fuera de las células, es
metabólicamente inactiva, no tiene ninguna función metabólica (no se multiplica ni replica) y su
única función es infectar a las células, pasar de una célula a otra.
Los virus se clasifican según la clasificación Baltimore que se basa en el mecanismo de producción
de mRNA.
En el interior de las células ya es donde se observan todas las características vivas o actividades
propias del virus que van a ser fundamentalmente multiplicarse y generar nuevos virus.

CICLO DE REPLICACIÓN VIRAL.

1. Fijación/Absorción. En esta etapa el virión va a entrar en contacto con las células y se va a
unir a ellas a través de un receptor celular. Esta etapa es altamente específica, es decir, los
virus no pueden infectar a cualquier tipo celular, sino que tiene que interaccionar a través
de un receptor y esto limita el tipo de célula que puede infectar.

2. Penetración. El virus entra por diferentes mecanismos (endocitosis, fusión de

membranas…) en el interior de la célula.

3. Parasíntesis. Se produce la multiplicación de los componentes del virus. El virus tiene que
crear nuevo material genético, nuevas proteínas de esa cápside para formar nuevos virus.
Una vez que se están formando le sigue la siguiente etapa de ensamblaje.

4. Ensamblaje. Los componentes proteicos se van a ir uniendo para formar la cápside, y esta
al menos debe contener una copia de todo su material genético.

5. Liberación. El virus sale de la célula por distintos mecanismos que puede ser por rotura
total de las células, por exocitosis...

DIVERSIDAD VÍRICA.
Hay una gran diversidad de virus, además de la que se pensaba inicialmente. Hay virus que
contienen DNA, otro que cuyo genoma se compone de RNA, cada uno de estos pueden ser de
desnudos o envueltos, y otra forma de clasificarlos es también por la simetría de la nucleocápside,
generalmente helicoidal o icosaédrico.

Al no tener características celulares, los virus no se integran en los esquemas del árbol de la vida,
no sabemos de donde proceden realmente. A la hora de estudiarlos taxonómicamente esto se
vuelve un problema. En el caso de las células, este árbol de la vida se genera gracias a la diferencia
que se observan a nivel del genoma y concretamente del gen 16S, pero claro, los virus no tienen
ribosomas, no podemos integrarlos ni establecer un punto de divergencia de los virus con el resto
de los seres vivos.

A la hora de estudiarlos taxonómicamente también son complejos porque no presentan regiones

comunes. Tienen un orden diferente cada uno con lo cual, a nivel taxonómico se han hecho
agrupaciones sobre toda a partir de familias, pero por encima de esto es difícil concretar de donde
proceden y donde se agrupan porque no existe una diferencia clara en alguna región de ese
genoma.
A la hora de analizarlos taxonómicamente se sigue el sistema Baltimore, donde se clasifican en 7
clases distintas. Esta clasificación se basa en:
- El tipo de genoma que presenta el virus: DNA o RNA.
- Si el genoma es mono o bicatenario.
- La producción de mRNA vírico.

La polaridad hace referencia a si la cadena es igual a la del mRNA que se genera o es distinta. En
términos generales se puede decir que el RNA con cadena + va a ser cuando el genoma del virus se
puede traducir directamente por parte de la célula, es decir, tiene un genoma que ya conlleva la
información para ser traducida y el orden de los nucleótidos codifican para la formación de esas
proteínas necesarias para la replicación del virus. Si la cadena es -, lo que ocurre es que ese RNAm
o el DNA no se puede traducir por parte de la célula porque no codifica proteínas necesarias para
el virus. Entonces el mecanismo será generar una complementaria para que obtengamos ese RNA
mensajero de cadena +.

CLASFICACIÓN BALTIMORE
Clase Descripción Grupo
Replicación genoma: dsDNA  dsDNA Virus de DNA de
I
Síntesis mRNA: dsDNA  Mrna doble cadena (ds)
Replicación genoma: ssDNA  dsDNA  ssDNA Virus de DNA de
II
Síntesis mRNA: ssDNA  dsDNA  mRNA cadena simple (ss)
Replicación genoma: dsRNA  ssRNA  dsRNA
III Virus de dsRNA
Síntesis mRNA: dsRNA  mRNA
Replicación genoma: +RNA  -RNA  +RNA Virus de RNA de
IV
Síntesis mRNA: +RNA = mRNA  -RNA  mRNA polaridad +
Replicación genoma: -RNA  +RNA  -RNA Virus de RNA de
V
Síntesis mRNA: -RNA  mRNA polaridad -
Replicación genoma: ssRNA  dsDNA  ssRNA
VI Retrovirus
Síntesis mRNA: ssRNA  dsDNA  mRNA
Replicación genoma: dsDNA  ssRNA  dsDNA Virus de DNA de
VII
Síntesis mRNA: dsDNA  mRNA transcripción inversa

Los virus: producción de mRNA vírico.

Una de las características que tiene esta clasificación es como se genera el ARN mensajero para
poder ser traducido.

-Clase I. Los virus de clase I presentan dsDNA, al igual que nuestras células. Una de ellas se
transcribe y directamente se genera un mRNA con información y puede ser traducido por las
células. (Utilizan polimerasas celulares).

-Clase II. En el caso de los virus de DNA monocatenario, tenemos una sola cadena de DNA, por lo
que se crea un intermediario de doble cadena, dsDNA. En principio, las cadenas de ssDNA son
inestables en el interior de la célula, entonces el virus lo primero que hace es generar este
intermediario para protegerse y a partir de esta doble cadena tenemos la misma situación de
antes, una de las cadenas se transcribe y es la que obtiene información.

-Clase III. Estos presentan dsRNA. Una de las cadenas va a servir para generar ese mRNA y se
puede traducir directamente. Simplemente el virus deberá portar una RNA polimerasa
dependiente de RNA para replicar ese RNA, cosa que las células no son capaces de hacer, ya que
todas las enzimas que tenemos son dependientes de DNA (lo utilizan como molde). En este caso,
al usar la RNA polimerasa dependiente de RNA, se genera una cadena sencilla de mRNA, que es la
que exporta el virión.

-Clase IV. Estos presentan RNA+, que se pueden traducir directamente por las células. Al entrar en
la célula la molécula de RNA, esta es reconocida por los ribosomas celulares que la van a traducir
para generar posteriormente las proteínas víricas necesarias.

-Clase V. En este caso, la cadena de RNA tiene polaridad – por lo que se necesita generar una copia
+, para ello, estos virus necesitan la presencia de RNA polimerasa. Utilizando como molde el RNA
son capaces de generar otra molécula complementaria de RNA que codifique la información para
las proteínas necesarias.

-Clase VI. Presentan ssRNA, del grupo de los Retrovirus, pero en vez de ser traducido directamente
por las células, genera un intermediario de doble cadena (dsDNA) que normalmente se integra en
el genoma de la célula y es el que genera el resto de mensajeros, por transcripción celular
utilizando los mecanismos de la RNA polimerasa celular.

-Clase VII. Es un tipo especial de virus de DNA de doble cadena. A la hora de introducir su genoma,
el dsDNA, no lo hace por una replicación normal, sino que lo hace a partir de RNA. Es un caso
excepcional, pues para que se replique el virus que es de DNA, pasa a RNA y, genera una
transcriptasa inversa que lo traduce otra vez a DNA a partir de ese RNA.
Los virus: efectos celulares.
Los virus pueden causar en la célula distintos efectos:
- Infección aguda. El virus se multiplica en el interior de la célula creando copias de este y
salir de la célula matando a esta, ya sea avisándola o acabando con su metabolismo,
generando esas múltiples copias de virus que van a infectar a otras células de alrededor.

- Infección persistente.
o Infección latente. El virus infecta a la célula, pero no manifiesta efectos sobre esta,
no se multiplica, permanece adormecido, en estado latente. Se puede detectar el
virus, partes de él, como su genoma, pero no se encuentran viriones ni efectos
citopáticos. No hay una manifestación de enfermedad. En determinadas
circunstancias, el virus se reactiva y pasa a infección aguda, a multiplicarse y
causar daños. Algunos ejemplos son el virus de la varicela o el virus del herpes
labial.
o Infección crónica. En este caso, el virus infecta a la célula y comienza a
multiplicarse de una manera que no daña a la célula. Produce una cantidad virus
de manera constante, al igual que causa daños de manera constante pero no de
una forma brutal. Continuamente se generan nuevos virus que salen a infectar
otras células, pero sin causar la muerte celular que causa la infección aguda.
Algunos ejemplos son el virus del sida (VIH) o la hepatitis B.

- Transformación celular. Se ha visto que la infección de algunos virus está relacionada con
la transformación de células tumorales o cancerígenas. Esto se debe en muchos casos a
que el virus se integra en el genoma de la célula hospedadora, afectando a genes
implicados en el ciclo celular, transformando la célula. Algunos ejemplos son el virus del
papiloma, virus del sarcoma.

R0: Número básico de reproducción.

Es el número teórico promedio de nuevos casos que una persona infectada va a causar durante su
periodo de infección a una población susceptible. Es una medida de riesgo de transmisión de una
enfermedad. Es un número
teórico, se calcula a
posteriori. Puede variar en
función de la población, si se
han tomado medidas de
contención, vacunación…
 Si el número básico de reproducción es 2, una
persona infectada causaría la infección a dos
personas sanas y cada una de esas dos
infectaría a otras dos, consiguiendo así una
expansión de la enfermedad de manera
exponente. Cuando el numero básico de
reproducción es superior a 1 o a 2, la
enfermedad puede diseminarse de forma
epidérmica incluso de forma pandémica,
Mientras que, si el número de reproducción es
inferior a 1, en esos casos la enfermedad
puede ser más contenida.

Enfermedades víricas transmitidas persona-persona: aire.

-Sarampión.

Es un virus que pertenece a la familia

Familia: Paramyxoviridae.
Paramyxoviridae, al grupo de la Clase V de Baltimore,
Género: Morbillivirus.
su genoma es RNA monocatenario de signo -. Es un
Especie: Virus del Sarampión
virus envuelto y tiene una nucleocápside de simetría (MeV).
helicoidal. Grupo Baltimore: Clase V
(ssRNA-).
Causa 175.000 muertes al año a nivel mundial. Estas
muertes están asociadas a países en vía de desarrollo
donde la carencia de condiciones sanitarias no permite la vacunación. Es altamente contagioso,
R0: 12-18. Se transmite por aerosoles, vía respiratoria o conjuntiva ocular. No existe reservorio
animal, es decir, solo se transmite de humano a humano.

Su tiempo de incubación (tiempo entre el primer contacto con el patógeno y hasta que se
manifiestan los primeros síntomas) es de 7-10 días. Causa fiebre, tos, dolor de cabeza,
conjuntivitis, secreción nasal… A partir de la infección inicial a nivel respiratorio, el virus pasa a los
nódulos linfáticos, se disemina por la sangre al resto del cuerpo hasta causar los efectos que van a
causar los primeros síntomas. Aparecen las manchas típicas, secreciones cutáneas que aparecen
de manera aislada inicialmente pero luego se van extendiendo y se van fusionando.
Aparecen las manchas de Koplik a nivel de
la mucosa oral, lengua, paladar, signo
característico de la enfermedad. En principio
se resuelve sola, no se suele tratar a no ser
que haya complicaciones. Tiene una
reacción inmunológica potente. El tiempo
medio de generación de anticuerpos ante
una enfermedad ronda entre los 10 días-2 semanas. En este caso, en torno a los 5 días, hay
anticuerpos circulantes.

No se suele diagnosticar a nivel del laboratorio, en clínica con los síntomas característicos ya se
diagnostica. Si fuera necesario se puede diagnosticar por microscopia, se observan efectos
citopáticos, las células infectadas aparecen agrandadas, lo que se denomina células gigantes, se
puede hacer inmunofluorescencia, serología o PCR.

Inmunofluorescencia  se utiliza Ac marcados con fluorocromo que reconocen el antígeno, si tu

muestra tiene el virus, los Ac quedan unidos y al emitir luz con el láser se ve la fluorescencia.

Este virus tiene su genoma totalmente secuenciado. El virión (forma completa del virus) presenta
en su superficie unas espículas, oligoproteínas complejo de hemaglutinina y proteína F implicada
en la fase de penetración. El virus reconoce el CD46, presente en muchas células o el CD150

presente en células del sistema inmune.

El receptor se une a la hemaglutinina y mediado por la proteína F, se produce la fusión de

membranas, penetra la nucleocápside que va acompañada de una RNA polimerasa dependiente
de RNA, que genera una copia positiva que ya puede ser traducida por las células y generar todas
esas proteínas necesarias para completar su ciclo.
Por otro lado, esa misma polimerasa, utilizando ese RNA molde genera esas formas positivas que
va a utilizar también para generar múltiples copias de signo negativo. Entre esas proteínas
traducidas del RNAm, están proteínas de nucleocápside, proteínas necesarias para multiplicarse,
se van ensamblando, van introduciendo en su interior nuevos genomas de signo – y se generan
nuevos virus que son liberados al exterior.

-Parotiditis (paperas).

Pertenece a la familia Paramyxoviridae, clase V de

Familia: Paramyxoiviridae.
Baltimore, son RNA monocatenarios de signo -. Afecta
Género: Rubulavirus.
también a niños, se transmite por aerosoles, por
Especie: Rubulavirusparotiditis
respiración. Es mucho menos infectivo que el sarampión, (MuV)
R0: 4-7. Tiene un periodo de incubación un poco más Grupo Baltimore: Clase V
largo. (ssRNA-).
Envoltura: Sí.
El virus entra
Nucleocápside: Helicoidal.
en contacto
con el
paciente, se produce una replicación a nivel del epitelio
respiratorio y se dispersa fundamentalmente hacia las
glándulas salivales, glándula parótida, produciéndose
una inflamación. También se disemina hacia otras
partes del cuerpo, que en principio si no hay
complicaciones no son importantes, pero podría causar
meningitis, encefalitis y esterilidad en varones adultos.

El diagnóstico clínico a nivel ordinario no se hace, por los signos se sabe el tipo de infección que
presenta. En el caso de querer hacerlo se puede detectar por ELISA (presencia de Ac contra la
enfermedad) de manera espontánea y también en cultivos celulares. El tratamiento es
sintomático. Existe vacuna y se trata de un virus atenuado, virus iguales, pero menos infectivos. La
capacidad de causar daños es menor.

-Rubeola.
Pertenece a la familia Togaviridae, a la clase IV de
Familia: Togaviridae.
Baltimore, RNA monocatenario de polaridad +. Se
Género: Rubivirus.
transmite por el aire a través de la respiración, llega a la
Especie: Virus de la rubeola.
mucosa respiratoria y ahí es donde se produce su Grupo Baltimore: Clase IV
infección inicial. (ssRNA+).
Envoltura: Sí.
Presenta un R0: 6-7. Tras el periodo de incubación
Nucleocápside: Icosaédrica.
aparecen unos puntos rojos similares al sarampión, pero
la fiebre es mucho menor y esas manchas están
limitadas al torso superior, mientras que en el sarampión se extendían por todo el cuerpo.
Los síntomas no son debidos a los efectos citopáticos o a los daños que causa el virus en las
células, sino que es una respuesta inmune. Una particularidad es que es capaz de afectar a los
fetos en embarazada, capaz de atravesar esa
barrera placentaria. Puede afectar al feto de
distintos tipos en lo que puede ser como
rubeola congénita en la cual el futuro bebé
nace con varios defectos a nivel ocular,
corazón, oído… Y también puede provocar
abortos, partos prematuros…

El diagnóstico puede hacerse por serología (Ac por ELISA). Suele ser una enfermedad que se cura
espontáneamente, no hay tratamiento farmacológico. Existe vacuna es un virus atenuado.

Normalmente las tres enfermedades vistas anteriormente: sarampión, paperas y rubeola se

administra en una sola vacuna en la llamada triple vírica que contiene virus atenuados para los
tres tipos de enfermedad.

-Varicela.
Es un virus de la familia Herpesviridae. Es clase I de
Baltimore, es decir, DNA de doble cadena, envuelto y de Familia: Herpesviridae.
Género: Varicellovirus.
simetría icosaédrica. La importancia de este virus es que
Especie: Virus Varicela-Zóster
causa infecciones latentes. Suele adquirirse durante la
(VZV).
infancia y se transmite a través de los niños por lugares
Grupo Baltimore: Clase I
hacinados y también por fómites (aerosoles, gotas (dsDNA).
infectadas). Envoltura: Sí.
Durante el periodo de
incubación, el virus ha entrado
a través de la vía respiratoria,
pasa al sistema linfático (vía
linfocitos T) y se disemina al
resto del cuerpo y se produce
de manera rápida la respuesta
papular que se trata de
erupciones cutáneas por todo
el cuerpo. No suele haber
complicaciones, excepto que esas pápulas son heridas que se van a abrir y pueden infectarse. En
algunos casos puede haber neumonía.

Una vez que hemos pasado la enfermedad parece que ya nos hemos curado, a diferencia del
resto, la inmunidad es de por vida. La varicela va a reaparecer porque es capaz de infectar las
neuronas, sobre todo aquellas presentes en los ganglios trigémino y torácico y permanece de
manera latente. Parece que nos hemos curado, no hay signos manifestantes de la enfermedad,
pero pasado un tiempo, reaparece en forma de
virus Zóster. Cuando esto ocurre, es en
circunstancias que tampoco se conocen muy
bien, pero, siempre están vinculadas por
pacientes con inmunodepresión, pacientes con
VIH, personas mayores, vinculado con esa
bajada de defensas. Son vesículas muy
dolorosas que se extiende por toda la zona por
donde se extiende el nervio, torácicos 
dorsales, trigémino  cara. Los síntomas son
neuralgia. Dura bastantes semanas en curarse,
puede haber otras complicaciones, encefalitis,
daños en los ojos.

El diagnóstico clínico se conoce por los síntomas, pero a nivel de laboratorio podría hacerse por
microscopia electrónica con heridas de las vesículas iniciales, inmunofluorescencia. Por PCR (virus
de dsDNA con retrotranscripción) a partir de muestras del líquido cefalorraquídeo o muestras
oculares, cultivos celulares, ELISA. El tratamiento es sintomático, en general, para las infecciones
víricas no hay tratamiento específico, solo en algunos casos. Hay una vacuna que es un virus
atenuado que evita la reactivación en forma de virus Zóster. En el caso de pacientes
inmunodeprimidos se pueden aplicar algunos antivirales como aciclovir, valaciclovir y vidarabina
que son análogos de nucleósidos que afectan al ciclo replicativo de los virus.

-Viruela.
Su importancia es debido a que fue la primera
Familia: Poxviridae.
enfermedad contra la que se generó una vacuna.
Género: Orthopoxvirus.
Fue una enfermedad muy extendida que causaba
Especie: Virus de la viruela (Variola
unos altos niveles de mortalidad. La primera vacuna virus, VARV).
fue elaborada por Edward Jenner a finales del Grupo Baltimore: Clase I (dsDNA).
s.XVIII. Envoltura: Sí.

Jenner observó que la gente que se dedicaba a

ordeñar vacas no quedaba infectada por la viruela, pero sí que observó que padecía un tipo de
enfermedad similar, pero restringida a las manos. Su
idea fue coger esas pústulas de las manos, extraer el pus
que generaban e inoculárselo a un niño y luego lo
expuso a una infección por viruela. Vio que no desarrolló
los síntomas. La OMS inicio un tratamiento masivo de
vacunación a nivel mundial. El último caso descrito se
dio en 1977 y en 1980 se declaró la enfermedad como
erradicada, el hombre al igual que el sarampión es el
único reservorio, no existen asintomáticos, todos
aquellos infectados desarrollan la enfermedad y tienen un periodo de inefectividad durante 3-4
semanas.

La transmisión es aérea, por contacto a través de fluidos. El virus entra en el tracto respiratorio,
atraviesa la mucosa y pasa a los nódulos
linfáticos y de ahí al resto del cuerpo. Los
primeros signos se muestran a nivel de la
cavidad oral, pasan a ser infecciosos y en 24h se
desarrollan todas esas heridas corporales. Suele
provocar un dolor intenso, fiebre. La muerte
suele ser más por los daños del virus, por la
toxicidad causada por la respuesta inmune.

Tiene importancia por el riesgo de su uso en

bioterrorismo. Es una enfermedad que se
considera erradicada, es decir, ya no se vacuna,
con lo cual, la mayor parte de la población es
susceptible y muy pocos han tenido esa
vacunación natural (ya nadie ordeña vacas). El
diagnóstico se puede hacer por microscopía, serología o detección de Ac.

Es un virus de clase I, de dsDNA, utiliza una polimerasa dependiente de DNA. Replica esas dos
cadenas y a partir de una de ellas genera un ARNm con una ARNpol será la celular. En el caso de la
enzima que lleva a cabo esa duplicación de la cadena del DNA, el propio virus codifica una DNApol
propia.

-Resfriado común.

Pertenece a la familia Picornaviridae, hay muchas

Familia: Picornaviridae.
especies de virus y todas se engloban dentro de la clase
Género: Enterovirus.
IV de Baltimore, es decir ssRNA de polaridad +. En
Especie: Rhinovirus -.
concreto, las especies pertenecen a los Rhinovirus, de las Grupo Baltimore: Clase IV
cuales entre el 35-60% son las responsables los resfriados (ssRNA+).
comunes. El resto está asociado a virus del tipo Envoltura: No.
coronavirus. Nucleocápside: Icosaédrica.
Se
tran
smite a través de aerosoles, fómites,
contacto. A nivel celular reconoce los
marcadores ICAM-1 y CD54, presentes en el
endotelio, linfocitos. Es resistente a solventes
orgánicos (su mecanismo de acción es
disolver membranas), pues no tienen envoltura, pero sensibles a hipoclorito (lejía).

La transmisión inicial se produce porque entra en contacto con la mucosa respiratoria. Produce
tos, estornudos, secreción nasal, fiebre. El diagnóstico a nivel clínico no suele hacerse. A nivel de
laboratorio es complicado porque existen muchos serotipos (<115). Por tanto, diseñar vacunas es
complicado, no existe. Por esta gran cantidad de serotipos nos resfriamos varias veces al año,
porque la cantidad de que sea el mismo serotipo es muy baja, por tanto, nuestros anticuerpos no
están inmunizados.

-Gripe.

Es una enfermedad recurrente. A nivel

Familia: Orthomyxoviridae.
mundial causa 300.000-600.000 muertes al
Género: Influenzavirus.
año, pero generalmente siempre va a estar
Especie: Virus de la gripe (Influenza virus).
Grupo Baltimore: Clase V (segmentado asociado a individuos con otras patologías e
ssRNA-). inmunodeprimidos. A diferencia de otras
Envoltura: Sí. enfermedades, existe un reservorio animal
Nucleocápside: Helicoidal. que afecta a mamíferos y a aves. Se han
descrito tres clases: A, B y C. Fue descrita
por Hipócrates. En 1918 hubo una gripe
española.

Se transmite por inhalación de partículas infectivas,

aerosoles, tienen un periodo de incubación muy breve.
Se manifiestan rápidamente los síntomas que son
estornudos, secreciones nasales, malestar, fiebre…
Dura varias semanas y puede causar el vómito en niños.

A nivel estructural, es un virus perteneciente a la

familia Orthomyxoviridae, de la clase V de Baltimore, es
decir, ssRNA de polaridad – y su genoma aparece
segmentado en el interior del virión. Destaca también
que es un virus envuelto y la presencia
de espículas, factores de virulencia que
son de hemaglutinina (HA) y
noraminidasa (NA), importantes en su
ciclo replicativo.

Este virus, a diferencia del resto no lleva

a cabo su ciclo replicativo en el
citoplasma, sino que lo hace en el
núcleo. Al estar en contacto con las
células, las espículas de HA reconocen el
ácido siálico o glutamínico que presentan las células en la superficie, penetra por endocitosis, se
forma un endosoma que llega hasta el núcleo y se produce la liberación de la nucleocápside,
liberando, en este caso, su genoma fragmentado.

Son 7-8 fragmentos y cada uno tiene 1-2 proteínas. Al ser virus RNA, requieren RNA polimerasa
dependiente de RNA, dicha polimerasa es un heterodímero formado por 3 subunidades PB1, PB2 y
PA codificadas por los fragmentos 1,2 y 3. Cada subunidad tiene una función. La PB1 es una RNA
replicasa, a partir de un RNA molde genera otra copia. La PB2 reconoce las caperuzas que
presentan los pre-mRNA celulares. La PA es una endonucleasa que corta esa caperuza en 5’ y lo
fusiona a los fragmentos generados por la replicasa.

La salida del virus se produce arrastrando la membrana celular. La NA es necesaria para su

liberación porque hidroliza los residuos de ácido siálico que mantienen la partícula vírica unida a la
superficie celular por la HA.

Una vez que pasas la enfermedad, no presentas inmunidad, esto se debe a que se producen
cambios antigénicos importantes. De los serotipos, la más importante van a ser las dos proteínas
de la superficie: hemaglutinina y noraminidasa. Hay varios serotipos descritos, siendo lo más
frecuentes de hemaglutinina H1, H2 y H3, y le noraminidasa N1 y N2.

Existen distintos tipos de gripe existe en la

naturaleza no solo en el hombre, también en los
animales. Se puede dar transferencia de unos a
otros. Los cerdos actúan como reservorio
intermedio de la gripe transmitiéndola tanto a
humanos como a aves.

Además de existir distintos serotipos de la HA y

NA, se dan efectos de deriva antigénica, cada
una de estas proteínas tiende a mutar
espontáneamente debido a la evolución del
virus, de modo que la versión final que puede
acabar después de un año de un mismo
antígeno, por ejemplo, de H1, es diferente a la versión inicial.

Cada cierto tiempo se produce el salto antigénico, un cambio significativo de los antígenos de
superficie por reorganización de los segmentos víricos. En un mismo hospedador, se ha sufrido
infección por dos tipos de virus, por ejemplo, el de los cerdos y el de los humanos. Cuando en una
misma célula coexisten los dos virus, se intercambian los fragmentos, por ejemplo, el virus
humano era H1N1 y el de los cerdos H2N2 pues los resultantes de esa coinfección son H1N2 y
H2N1, de modo que se generan virus totalmente nuevos con antígenos nuevos.

La facilidad de mutación del genoma y la reorganización de los segmentos hace que se generen
nuevas variantes que afectan a nivel mundial a la población. La más reciente fue en el 2009 que se
conoció como gripe porcina asociada a H1N1. Se espera que haya otra pandemia causada por
gripe. Hay seguimientos en todo el mundo de todas las gripes para prevenir los posibles nuevos
antígenos.

A nivel de laboratorio, se detecta por secreciones en el tracto respiratorio, técnicas moleculares:

microscopía, PT-PCR, cultivos celulares. No existe tratamiento, simplemente se pasa la
enfermedad. Se producen todos los años a nivel mundial una vacuna, utilizando el antígeno HA e
que genera mejor respuesta y trata de prevenir para una nueva infección.

Se han realizado pruebas con distintos fármacos que afectan algunas partes del ciclo del virus. El
Tamiflu bloquea la liberación del virus afectando a la NA, pero se ha encontrado resistencia, por lo
que ya es inútil. La amantadina y la rimantadina bloquean la decapsidación del virus. Se puede
reducir los síntomas si se administra 48 horas tras la infección.

-Síndrome respiratorio agudo y grave (SARS).

Es un coronavirus, del grupo IV de Baltimore ssRNA+. Se
Familia: Coronaviridae.
estima que es responsable de 1/3 de los resfriados
Género: Coronavirus.
comunes. El otro 2/3 son los Rhinovirus. El reservorio son
Especie: Virus SARS-CoV.
los murciégalos. Hubo un brote que se extendió en China Grupo Baltimore: Clase IV
a nivel (ssRNA+).
mundial en Envoltura: Sí.
2002.

Se transmite por contacto próximo, por inhalación de

aerosoles. Causa síntomas similares a la gripe: fiebre,
problemas a nivel del tracto respiratorio inferior,
neumonía. Puede resultar fatal en 1/10 casos, siempre
asociados a pacientes con otras patologías o
inmunodeprimidos.

Es de los genomas víricos más grandes, tiene en torno a

unas 30 Kb. Se traduce directamente nada más entrar
en la célula. Una de las principales moléculas que se
traduce es la replicasa, necesaria para generar nuevos
RNA+ a partir de un molde de RNA de polaridad -. Estos viriones se ensamblan en el Aparato de
Golgi.

Enfermedades víricas transmitidas persona-persona: contacto.

-Herpes labial y genital (HSV-1, HSV-2).
Estos virus pertenecen a la familia Herpesviridae. La
Familia: Herpesviridae.
patología que producen es a nivel del de las células
Género: Simplexvirus.
epiteliales, produciendo su lisis. La particularidad de
Especie: Herpes simple (HSV-1,
estos virus es que son capaces de infectar las neuronas HSV-2).
y permanecen como infección latente (al igual que la Grupo Baltimore: Clase I (dsDNA).
varicela y el VIH). Cada cierto tiempo vamos a tener Envoltura: Sí.
una manifestación típica de esta infección. Las Nucleocápside: Icosaédrica.
infecciones son orofaríngeas, oculares y en menor
medida encefalitis.

Pertenecen a la clase I (dsDNA) envueltos con

simetría icosaédrica, una vez que entra en la
célula del hospedador se circulariza y utiliza el
mecanismo de círculo rodante. Para replicarse
se genera un corte en esa molécula, se crea así
un extremo 3’ para añadir nucleótidos, de tal
forma que la polimerasa añade nucleótidos
desplazando a la cadena preformada
anteriormente, generándose así una hebra
muy larga formada por muchas subunidades
genómicas denominadas concatémeros, que
posteriormente se irán cortando. Esto ocurre a
nivel de la cápside, conforme va entrando el
ácido nucleico hasta que no cabe más, entonces se corta. Este espacio coincide exactamente con
una unidad genómica.

El HSV-1 se relaciona con las afecciones a nivel labial y el HSV-2 está relacionado a nivel genital.

En el caso del HSV-1, se transmite por contacto con esas lesiones. Tras unos días (3-5) aparecen
esas heridas, por lisis de las células epiteliales, dura unas 2 semanas. Finalmente se cura, pero al
ser latente, en situaciones de estrés o inmunodepresión surge de nuevo. Suele quedar latente
afectando a las neuronas del nervio trigémino. Se pueden dar infecciones oculares por
autoinoculación.

En el caso del HSV-2, se transmite por contacto sexual. El contagio puede producirse durante la
infección aguda, pero también en el periodo de infección latente, es decir, aunque no haya una
manifestación clara del virus, se puede transmitir, por eso, usa condón pendejo. Se puede
transmitir al feto durante el parto. A mujeres con esta enfermedad se valora si hacer el parto por
cesáreo o natural. Parece que las infecciones de este tipo de virus pueden estar relacionado con el
desarrollo de cáncer de cérvix.
Para este virus no existe cura, pero se pueden tratar de manera local las lesiones con algunos
antibióticos. El diagnóstico del virus se puede hacer por cultivo celular, microscopía, PCR,
detección de Ag… de lesiones y exudados (secreción, pus).

-Hepatitis vírica.
Se han descrito hasta 11 tipos de virus
diferentes que pueden causar hepatitis. La
hepatitis como tal es inflamación del hígado,
pero cuando nos referimos a la enfermedad,
suele ir asociado a necrosis en el tejido y fallo
hepático. De los virus centrados que solo causan
fallos a nivel del hígado son 9 y los mejor
conocidos son 5 que se denominan con las
letras A, B, C, D y E.

La hepatitis A y E se transmiten por alimentos,

mientras que la B y D por contacto o sangre.

*Regla nemotécnica  vocales A, E vocales, boca, alimento. D y B, blood, contacto o sangre. *

La mayoría de ellos son monocatenarios, mientras que la hepatitis B es dsDNA (clase VII), genera
un RNA intermediario a partir del cual con una transcriptasa inversa generaba las nuevas copias.

- HBV (hepatitis sérica).

Se transmite a través de la sangre y
Familia: Hepadnavirus.
fluidos corporales como saliva, sudor,
Género: Orthohepadnavirus.
semen, leche materna… y vía placentaria.
Especie: Virus de la Hepatitis B (HBV).
Mayormente las secreciones son Grupo Baltimore: Clase VII (dsDNA,
asintomáticas, o con periodos de fiebre, parcial).
pérdida de apetito… sin síntomas muy Envoltura: Sí.
claras excepto cuando se produce la Nucleocápside: Icosaédrica.
infección aguda. Estos daños se detectan
por el incremento de transaminasas en
sangre (alteran metabolismo de proteínas), ictericia (acumulación de bilirrubina), fallo
hepático, y en el caso de una infección crónica, aparece cáncer de hígado. Se ha observado
que este virus no afecta a los hepatocitos, sino que la mayor parte de los síntomas son
debido a la respuesta inmunitaria.
El virión se denomina partícula de Dane. Como hemos mencionado anteriormente,
requiere una transcriptasa inversa. No todo su genoma es de doble cadena, existe un
extremo de cadena sencilla. Se detecta por técnicas moleculares, presencia de Ac o PCR.
Existen vacunas para la población de riesgo y vacunas preventivas. También interferón que
puede ayudar a evitar esa infección inicial.
- HDV.
 Es de la clase V. Se considera un virus
Familia: Hepadnavirus. defectivo, satélite dependiente del HBV.
Género: Deltavirus.
Es defectivo porque no es llevar a cabo
Especie: Virus de la Hepatitis D (HDV).
todo su ciclo replicativo infectivo. Puede
Grupo Baltimore: Clase V (ssRNA-,
replicar su genoma, sin embargo, no es
defectivo).
capaz de formar sus propias cápsides,
tiene que aprovechar las cápsides de
otros virus, en este caso, del virus de la hepatitis B. Este virus siempre va a estar asociado
a infecciones con HBV. Se estima que un 5% de los infectados de la HBV también están por
la HDV. El individuo puede coinfectarse a la vez de los dos virus, o puede infectarse
primero del HBV y posteriormente de la HDV. Pone de manifiesto una hepatitis aguda y en
los casos de infecciones crónicas acelera sus efectos. El diagnostico es similar al HBV. La
vacunación del HBV puede prevenir la infección del HDV. También se puede utilizar el
interferón, que recordamos, es una sustancia de alerta que secretan nuestras células
cuando son infectadas por virus, activando a células del sistema inmune. En este caso, se
ha visto que este tratamiento con interferón mejora la respuesta del sistema inmunitario
del propio hospedador para eliminar las células infectadas y evitar la propagación de la
infección.

- HCV.
Está asociado su contagio por contacto sexual,
Familia: Flaviviridae.
trasplantes, sangre, vía feco-oral y placentaria. Su
Género: Hepacivirus.
relevancia deriva de que fue una expansión
Especie: Hepacivirus C, Virus de
pandémica a nivel mundial por transfusiones de la Hepatitis C (HCV).
sangre, porque este virus se desconocía. Se Grupo Baltimore: Clase IV
puede detectar por ELISA o RT-PCR -virus de clase (ssRNA+).
IV, ssRNA+ -. No existe vacuna, está en Envoltura: Sí.
investigación. Se puede tratar con interferón, Nucleocápside: Icosaédrica.
ribavirina, y en algunos casos trasplante.

-SIDA- VIH (Virus de la Inmunodeficiencia

Humana).
Familia: Retroviridae.
Género: Lentivirus. Es un virus de la clase VI, ssRNA+, evolutivamente se
Especie: Virus de la conoce que deriva de un virus que afecta a simios, hay
inmunodeficiencia humana (VIH). dos variedades: VIH-1 y VIH-2.
Grupo Baltimore: Clase VI
(ssRNA+). Se transmite por sangre, semen, secreciones vaginales
Envoltura: Sí. y leche materna. También se ha descrito que hay cargas
Nucleocápside: Icosaédrica. virales a nivel de saliva, pero no parece tener relevancia
a la hora de la transmisión. Su genoma son dos
moléculas de ssRNA, asociado a bastantes enzimas necesarias para su ciclo replicativo, la más
importante la transcriptasa inversa.

A nivel de la envoltura viral:

vamos a encontrar dos espículas
fundamentales: dos
glicoproteínas la gp120 y la gp41,
responsables de interaccionar con
los marcadores: CD4, CCR5,
presentes en las células del SI:
principalmente linfocitos TH, pero
también en células dendríticas,
monocitos, macrófagos. Una vez
que se produce la interacción el virus penetra y entra en acción la transcriptasa inversa (RNApol
dependiente de RNA) que utiliza como molde el RNA para generar moléculas de dsDNA. Presenta
además actividad ribonucleasa, es decir, una vez que genera esa cadena de DNA, degrada el RNA,
destruye su propio genoma para quedarse con esa cadena bicatenaria de DNA.

Esta enzima se caracteriza por carecer de proofreading, que es comprobación de que se han
incorporado los nucleótidos adecuados, es decir, promueve la aparición de mutaciones cada vez
que se replica. Una vez que lleva a cabo su actividad, gracias a otra enzima que es la integrasa, el
genoma se integra en el interior del DNA celular, creando así una infección latente.

Este esquema indica que los virus a la hora de

expresar su genoma, lo hace en un orden, no
expresa todas las proteínas de golpe. En muchos
casos se distinguen proteínas tempranas,
intermedias y finales que están asociadas a la
etapa concreta del ciclo replicativo en la que se
encuentra el virus. Mientras que las proteínas
tempranas están relacionadas con la integración
y replicación del genoma, las proteínas finales
están asociadas a la formación de la cápside,
aunque hay varias excepciones, dependiendo
del tipo de virus.

Este virus genera RNA monocistrónicos, es decir, genera muchas proteínas, presenta muchas
regiones que posteriormente deben ser cortadas para codificar dichas proteínas.

A nivel epidemiológico, el SIDA afecta a 34M de personas. Cuando se desarrolla propiamente el

SIDA causa la mortalidad del 100%. No hay que confundir la infección con el SIDA. El SIDA es una
serie de características de enfermedad que ahora veremos y la infección puede durar muchos
años. Cuando el SIDA se desarrolla puede ser rápido entre 2 y 3 años o largo entre 8 y 10 años,
dependiendo del individuo.
En la infección del virus se pueden distinguir varias etapas y en la final se da el desarrollo del SIDA.
Etapas:

1. Fase Aguda. Tras el contagio (2-8 semanas), se manifiestan algunos síntomas, fiebre,
malestar, dolor de cabeza…En esta etapa se está replicando el virus. Comienzan a
detectarse esos Ag en nuestra sangre y se produce la respuesta de nuestro S.I,
incrementan los anticuerpos contra los Ag virales de superficie (gp120 y gp41).

2. Fase Asintomática. Puede durar de 6 meses a 10 años. No hay manifestación del virus, los
niveles de Ag se mantienen bajos, pero sí que se mantienen altos los anticuerpos, lo que
indica que el virus se está multiplicando de forma continua.

3. Fase Crónica. Puede durar entre meses y años. En esta etapa se produce el descenso de
los linfocitos T, implicados en la lucha contra el virus, que va acompañada de fiebre,
diarrea, pérdida de peso, fatiga y la aparición de infecciones oportunistas.

4. SIDA. Existe fiebre permanente y unos niveles de linfocitos T por debajo de los 200/ml (lo
normal es 1000/ml). Permanecen infecciones oportunistas, generalmente fúngicas que
son las más complicadas de tratar, pero se pueden intentar combatir con el uso de
antibióticos. El resultado final es la muerte.
No es curable, pero existen determinados tratamientos para moderar la multiplicación viral. Se
opta por distintos inhibidores: inhibidores de la transcriptasa, de la proteasa (implicada en la
rotura de RNA monocistrónicos), de fusión (entrada del virus en la célula), de la integrasa…

El problema para generar la vacuna es la acumulación de mutaciones por la falta de actividad

proofreading, que se generan principalmente en esas proteínas de membrana (gp120 y gp41) que
son las proteínas contra las que nuestro cuerpo genera anticuerpos.

Si que se ha observado que aquellas personas que tienen un receptor celular CCR5 defectivo, es
decir, variado o ausente, no son infectadas por el virus del SIDA. Se necesita esa doble interacción
entre los receptores CD4 y CCR5, entonces cuando uno de esos receptores está ausente no es
posible llevar a cabo esa infección inicial, y estas personas esta inmunizadas de forma natural. Otra
alternativa son los tratamientos con trasplantes de medula, es decir, eliminar todas las células del
S.I y reemplazarlas con un individuo sano podría dar resultado efectivo. La profilaxis para evitar la
infección: no compartir jeringuillas, uso de preservativos durante las relaciones sexuales y test
periódicos, especialmente si se han mantenido relaciones de riesgo.

-Verrugas.
Las verrugas vulgares o comunes son lesiones
Familia: Papillomaviridae.
frecuentes en la población ocasionadas por
Género: Alphapapilomavirus.
proliferación de piel, causadas por el virus del
Especie: Virus del papiloma humano
papiloma humano (VPH). Se transmiten por (HPV).
Grupo Baltimore: Clase I (dsDNA,
circular).
Envoltura: No.
Nucleocápside: Icosaédrica.
contacto directo de persona a persona, e indirecto a través de ropa y fómites. También, pueden
diseminarse a otras áreas del cuerpo del paciente. En la mayoría de los casos, el contagio se
produce mediante el contacto cutáneo casual o a través de objetos compartidos, como toallas o
paños

Habitualmente las verrugas se resuelven de forma espontánea

en meses o en años, pero hay personas que optan por la
eliminación de esta. Se piensa que las verrugas sexuales pueden
provocar el desarrollo de cáncer.

Familia: Herpesviridae.
Género: Lymphocryptovirus.
Especie: Virus de Epstein-Barr (EBV).
Grupo Baltimore: Clase I (dsDNA).
Envoltura: Sí.
Nucleocápside: Icosaédrica.

-Mononucleosis.
Se transmite por saliva. En niños y
adolescentes provoca faringitis, fiebre,
inflamación de los nódulos linfáticos… Tiene
una duración de entre 1 y 6 semanas.

Enfermedades víricas transmitidas por vectores.

Los Arbovirus (ARthorpod-BOrne Viruses) son aquellos que se
transmiten por artrópodos, cuando estos pican al huésped. Incluye
a las familias Bunyaviridae, Flaviviridae, Reoviridae y Togaviridae.

-Encefalitis equina.
Tiene su reservorio en Familia: Togaviridae.
caballos, cuyo caso puede Género: Alphavirus.
ser mortal. Las variantes Especie: Virus de la Encefalitis
de especies asociadas con Equina.
localizaciones geográficas, Grupo Baltimore: Clase IV
que son EEE (Encefalitis (ssRNA+).
Envoltura: Sí.
Nucleocápside: Icosaédrica.
equina del Este), WEE (Encefalitis equina del Oeste), VEE (Encefalitis equina venezolana). Los
vectores de transmisión son: mosquitos Aedes y Culex spp. que se alimentan de equinos
infectados.

En humanos provoca fiebre, dolor de cabeza, meningitis y encefalitis, parálisis, coma y la muerte.
Se puede detectar por serología con Ac o Ag.

-Fiebre amarilla y dengue.

Ambas se dan en América latina y África y se
Familia: Flaviviridae.
transmite por el mosquito Aedes spp.
Género: Flavivirus.
Especie: Virus de la Fiebre Amarilla La fiebre amarilla puede ser asintomática. Tiene
(YFV) dolencias ligeras como fiebre, escalofríos, dolor de
Grupo Baltimore: Clase IV (ssRNA+).
cabeza y espalda, náuseas, o incluso mortal. Solo 1/5
Envoltura: Sí.
alcanza una fase tóxica que es la ictericia, una
Nucleocápside: Icosaédrica.
coloración amarillenta de la piel y las mucosas que se
produce por aumento de la bilirrubina en la sangre,
como resultado de ciertos trastornos hepáticos. Puede estar acompañado con hemorragias
bucales, oculares y gastrointestinales, que en el 20% lleva a un fallo multiorgánico. Se detecta por
ELISA. No tiene un tratamiento específico, solo la respuesta inmunitaria, aunque existe una vacuna
preventiva para el control de los vectores, pues
reduce su diseminación. Familia: Flaviviridae.
Género: Flavivirus.
El dengue provoca complicaciones y hemorragias Especie: Virus Dengue (DENV).
similares a la fiebre amarilla (sin ictericia). No existe Grupo Baltimore: Clase IV
vacuna, solo tratamientos para aliviar los síntomas. (ssRNA+).
Hay controles químicos del mosquito y reducción de Envoltura: Sí.
sus hábitats de multiplicación (agua estancada). Nucleocápside: Icosaédrica.

-Zika.
Provoca fiebre moderada, conjuntivitis, dolor de
cabeza, muscular y articular y dura entre 3 y 12 días. Familia: Flaviviridae.
Género: Flavivirus.
Generalmente, no deja secuelas, pero pueden
Especie: Virus del Zika (ZIKV).
producirse daños neurológicos, especialmente en
Grupo Baltimore: Clase IV
recién nacidos. Tiene su reservorio en primates (ciclo
(ssRNA+).
selvático, transmisión entre monos por mosquitos)
Envoltura: Sí.
Los vectores de transmisión son el mosquito Aedes spp. Nucleocápside: Icosaédrica.
y también se puede transmitir de persona a persona. Hay casos por vía sexual, transfusiones y en
el embarazo de la madre al feto.
En España, solo hay casos de viajeros (512 entre 2015-2017). Hay riesgo en el futuro por la
presencia del mosquito tigre (Aedes albopictus) en zonas de litoral mediterráneo.

-Fiebre del Nilo.

Aparece en Medio Oriente, África y sureste de Asia
Familia: Flaviviridae. (1937, Uguanda). El vector de transmisión es el
Género: Flavivirus.
mosquito Culex spp.
Especie: Virus del Nilo Occidental
que se alimenta de
(WNV).
aves infectadas. Hay
Grupo Baltimore: Clase IV (ssRNA+).
posibilidad de
Envoltura: Sí.
infección a través de
trasplantes y trasfusiones de sangre.
No hay pruebas de transmisión
directa de aves infectadas.

El pico de infección fue a finales de

agosto y septiembre (donde hay una
mayor concentración de virus en el vector) con reducción del riesgo
con la bajada de las temperaturas. Provoca fiebre, dolor de cabeza,
náuseas (3-6 días), encefalitis/meningitis en el 1% de los casos.
Tiene una mortalidad baja en humanos, del 4%, frente a équidos (caballos), donde supone un 40%
de los casos.

Se diagnostica por serología con Ag. No existe vacuna, solo un tratamiento de síntomas. Al igual
que el caso anterior, se intenta eliminar las fuentes de multiplicación (aguas estancadas) mediante
el uso de repelentes.

Virus y el cáncer.
El cáncer es el resultado del crecimiento sucesivo de poblaciones celulares que acumulan
mutaciones y/o modificaciones epigenéticas que afectan a las rutas de regulación que controlan la
comunicación, crecimiento y división celular y conducen a una proliferación descontrolada y
desorganización tisular.

En 1908, V. Elleman y O. Bang descubrieron que lo retrovirus pueden causar cáncer. La leucemia
aviar transmitida por filtrados de células o suero. P. Rous aisló un agente filtrable de sarcomas de
pollo (RSV). La mayoría eran dsDNA. La excepción es que no es un requerimiento para la
propagación de los virus.

Los mecanismos de inducción son:

- Transformación celular. Expresión de

oncogenes sin homólogos celulares, genes
necesarios para la multiplicación del virus u
oncogenes incorporados de otras células
hospedadoras.
- Alteración de la expresión de proto-
oncogenes celulares (por la inserción del
provirus). Son genes necesarios para la
multiplicación del virus: p53, Rb.
Hay una gran supervivencia frente al sistema inmune.
Y tiene una gran capacidad de invadir tejidos (maligno). Más del 20% de tipos de cáncer, por
ejemplo, cáncer de cérvix e hígado, están relacionados con infecciones virales.

-Virus del papiloma humano (HPV).

HPV-16 y 18 son
responsables de la mayoría
de los casos de cáncer de
cérvix. Se produce la
expresión de oncogenes
virales (E6 y E7) necesarios
para la inmortalización de
fibroblastos y células
epiteliales.

-Hepatitis (HBV).
Los enfermos crónicos de esta enfermedad tienden a desarrollar cáncer hepático (5 años). Causa 1
millón de muertes al año. Existe vacuna. La reacción del S.I destruyendo las células infectadas
favorece la proliferación celular lo que conlleva a cirrosis y cáncer. Se produce una asociación
cáncer-virus por presencia de DNA viral, aunque sea desconocen los vínculos con proto-oncogenes
o proteínas virales. El tiempo necesario sugiere reacciones acumuladas.
-Sarcoma de Kaposi.
Es un Herpesvirus, dsDNA, aparece en enfermos de SIDA. La bajada de defensas característica del
SIDA permite el desarrollo de otros agentes causantes de cáncer.

Hay virus que pueden usarse para la terapia anticancerígena: Picornaviridae, Herpesviridae,
Paramyxoviridae, Reoviridae, Poxviridae, Parvoviridae, Retroviridae se están estudiando para

infectar específicamente células tumorales (virus oncolíticos).

TEMA 9.I.: “ENFERMEDADES INFECCIOSAS CAUSADAS POR BACTERIAS Y
HONGOS”
- Enfermedades bacterianas transmitidas de persona a persona
- Enfermedades bacterianas transmitidas por vectores

ENFERMEDADES BACTERIANAS TRANSMITIDAS PERSONA-PERSONA

VÍA INHALATORIA
•Streptococcus pyogenes (estreptococo grupo A)
- Son cocos esféricos (1-2 μm anaerobios (facultativos),
catalasa -.
- Se encuentran formando parte del microbioma natural del
tracto respiratorio superior.
- Antígeno del grupo A: NAG y ramnosa
- Factores de virulencia:
• Ácido lipoteicoico y Proteína F (adhesión células a través de fibronectina)
• Estreptoquinasa
• Estreptolisina O (hemolisina inactivada por O2; induce generación de Ac —> Test anti-
estreptolisina)
• Estreptolisina S (hemolisina estable en O2; también actividad leucocidina)
• DNasas
• Cápsula (ácido hialurónico)
• Proteína M (impide actuar al complemento; fiebres reumáticas)

FARINGITIS ESTREPTOCÓCICA
- Transmitido por gotas de saliva y secreciones nasales.
- Inflamación, hemolisis y lisis leucocitosàexudados
- Fiebre, malestar, dolor de cabeza.
- Autolimitado, aunque se recomienda tratamiento en
niños.

Otras manifestaciones: erisipela, impétigo, otitis media,

mastitis…

Enfermedades secundarias:
FIEBRE ESCARLATA
- Cepas infectadas por virus lisogénico —> Toxinas pirogénicas (SpeA, SpeB, SpeC y SpeF) =
Superantígenos
- Síndrome del shock tóxico.
- Faringitis + fiebre + reacción piel
- Se recomienda tratamiento para evitar complicaciones (fascitis necrotizante, daños en tejidos).

FIEBRES REUMÁTICAS
- Cepas reumatogénicas de S. pyogenes: antígenos de superficie similares a proteínas en corazón
y articulaciones.
- Reacción autoinmune: daños permanentes en tejidos.

IDENTIFICACIÓN Y DIAGNÓSTICO
- Confirmación por cultivo
- Métodos rápidos de detección de antígenos (antígeno grupo A).

TRATAMIENTO Y PROFILAXIS
- Penicilina V, amoxicilina, cefalosporinas.
- Tratamiento precoz o riesgo de enfermedades secundarias.
- Confusión con faringitis víricas conlleva el uso innecesario de antibióticos, esto contribuye a la
resistencia microbiana.
NEUMONÍA (Streptococcus pneumoniae)
•

- Diplococos/cadenas cortas con cápsula, “fastidioso”

- Flora normal de garganta y nasofaringe. Infecciones
secundarias.
- Presencia de cápsula —> Resistencia fagocitosis
(invasividad+++)
- Neumonía: invasión y resistencia a fagocitosis conlleva inflamación (fagocitos + fluídos) à
reducción de función pulmonar.
- Complicaciones —> bacteriemia e invasión de otros tejidos (sinusitis, conjuntivitis, otitis,
endocarditis)

- Factores de virulencia:
• Proteasa de IgA (impide adhesión al moco)
• Pneumolisina (α-hemolisis en Agar sangre; crea poros en las membranas celulares;
activa complemento)
• Cápsula
• Ácidos teicoicos, enzima amidasa (liberación fragmentos pared celular), pneumolisina
—> inflamación (daño tisular).

IDENTIFICACIÓN Y DIAGNÓSTICO
- Confirmación por cultivo y tinción de muestras respiratorias (Gram, cápsula)
- Métodos rápidos de detección de antígenos capsulares (orina)
- PCR
- Sensibilidad a optoquina

TRATAMIENTO Y PROFILAXIS
- Existen vacunas (polisacáridos cápsula).
- Penicilina o vancomicina en caso de resistencia.

Difteria (Corynebacterium diphtheriae)

•

- Bacteria pleomórfica, 0,3-0,8 x 1-8 μm, tinción irregular.

- Humanos como único reservorio (aersoles y contacto). Bajo control
excepto en lugares endémicos (India, Africa, Sureste asiático).
- Desde asintomático a fulminante (inmunocomprometidos).
- Tras 2-4 días, daños en la faringe (multiplicación): malestar, inflamación de
garganta, exudado faríngeoàpseudomembrana (bacteria+linfocitos, células
plasmáticas, fibrina).
- Complicaciones: miocarditis (arritmias, muerte), neurotoxicidad (faringe,
paladar, ojos, neuritis).

- Factores de virulencia:
 • Toxina diftérica (tipo AB) codificada por un fago lisogénico (expresión activada en
presencia de hierro): Unión receptor HB- EGF (abundante en células nerviosas y
cardíacas). Inactivación EF-2 (síntesis proteica).

IDENTIFICACIÓN Y DIAGNÓSTICO
- Cultivos nasofaringe y garganta en CTBA o medio Tinsdale.
- Cystinasa +, pirazinamidasa –
- PCR (toxina, genes específicos de especie)
- Elek test (detección de toxina)

TRATAMIENTO Y PROFILAXIS
- Antitoxina
- Penicilina o eritromicina
- Existe vacuna a partir del toxoide (aplicar también tras
tratamiento).

•Tuberculosis (Mycobacterium tuberculosis)

- Bacilos aerobios estrictos. Ácidos micólicos. Multiplicación lenta (horas-
años). Parásitos intracelulares (infección crónica).
- Tuberculosis: M. tuberculosis (R. Koch, 1882); M. bovis, M. africanum
- Transmisión por aerosoles. 1/3 de la población mundial expuesta.
- Fiebre, fatiga, pérdida de peso y tos con esputo con sangre.

- Tuberculosis primaria: inhalación de aerosoles con bacterias vivas

alcanzan la región pulmonar —> Activación sistema inmune
(macrófagos).
—> Lípidos de pared inhiben la unión fagosoma-lisosoma
—> Supervivencia y multiplicación
—> Tubérculos (bacteria, células sistema inmune, proteínas) —> Infección latente
- Tuberculosis posprimaria:
- Tuberculosis activa: progresión de lesiones (—> Cavidades tuberculosas)
- Tuberculosis miliar: diseminación y formación de nuevos tubérculos por el cuerpo.

- Factores de virulencia:
• Pared celular rica en lípidos (ác. micólicos): resistencia a detergentes, desinfectantes,
antibióticos y respuesta inmunitaria.
• Multiplicación intracelular (macrófagos alveolares): evita fusión fagosoma-lisosoma;
cataboliza NO y O2-.
• Supervivencia en granulomas alveolares (estado latente)
IDENTIFICACIÓN Y DIAGNÓSTICO
- Test de la tuberculina, PPD o de Mantoux: Indicativo de
infección reciente en niños (relativo en adultos, > 15 mm).
- Confirmación por rX (tubérculos), análisis esputo (microscopía,
cultivo,...)
- Cultivo (medio Lowenstein Jensen, semanas/meses) y
microscopía.

TRATAMIENTO Y PROFILAXIS
- Isoniazida (inhibación síntesis ac. Micólicos) + Rifampicina (inhibidor síntesis RNA) (meses).

Lepra (Mycobacterium leprae)

•

- Enf. de Hansen. Enfermedad de la piel causada por M. leprae

(zonas tropicales). Síntomas hasta 20 años después de la infección.
- Transmisión por contacto o inhalación de secreciones nasales
(sospecha).
- Progresión (inmunocomprometidos) en forma de:

A. Lepra lepromatosa: Incubación 3-5 años: invade nervios periféricos, fagocitos y células
epiteliales como parásito intracelular obligado —> (hipersensibilidad y gran
invasividad bacteriana) —> Erupción epidérmica en las extremidades y cara,
destrucción nervios y tejidos (pérdida de sensibilidad).
B. Lepra tuberculoide: multiplicación de la bacteria en las células de la piel: daños

tisulares, erupciones localizadas coloreadas.

IDENTIFICACIÓN Y DIAGNÓSTICO
- NO cultivables —> Microscopía inmunofluorescencia (biopsia).
- Serología (ELISA).

TRATAMIENTO Y PROFILAXIS
- Dapsona (inhibidor ácido fólico) + rifampicina + clofamizina (inhibidor respiración e intercambio
irónico).
- Tratamiento profiláctico en niños con padres infectados.
Meningitis (Neisseria miningitidis, meningococo)
•

- Inflamación de las meninges (SNC) (también otros

microorganismos).
- Diplococo aerobio estricto, gram-negativo, oxidasa +,
catalasa +, penetra en el cuerpo a través de las células
de la nasofaringe —> bacteriemia y diseminación.
- Síntomas: dolor de cabeza, vómitos, rigidez de cuello, coma y muerte (24h).
- La meningitis surge en forma de brote epidémico. Transmisión por aerosoles.
- N. meningitidis aparece hasta en un 30% de portadores sanos, y se desconocen las causas de su
paso a forma patógena.
- Otras afecciones: Meningococemia (septicemia), neumonía, artritis, uretritis.

- Factores de virulencia:
• Cápsula polisacarídica (evita fagocitosis mediada por Ac)
• Pili (tipo IV) (adhesión y diseminación)
• Supervivencia intracelular
• LOS (liberación fragmentos membrana, endotoxina)
• Receptores de transferrina humana
• Proteasa de IgA

IDENTIFICACIÓN Y DIAGNÓSTICO
- Cultivos de muestras de la nasofaringe, sangre o LCR en medio Thayer-Martin.
- Diplococos Gram positivos presentes en LCR.

TRATAMIENTO Y PROFILAXIS
- Inmunidad pasiva a través de lactancia.
- Penicilina (inicio antes de confirmación, basándose en cuadro clínico).
- Rifampicina (preventivo), ciprofloxacino.
- Vacunas para inmunización.

CONTACTO DIRECTO
•Staphylococcus aureus
- Cocos gram-positivos, catalasa +, no esporulados, agrupados en racimos,
aerobios o anaerobios facultativos, resistentes a la desecación y altas
concentraciones de sal (10% NaCl).
- Transmisión de portadores asintomáticos (flora normal piel, nariz, axilas) a susceptibles.
- Manifestaciones clínicas:
- Infecciones de piel (acné, espinillas, impétigo), heridas
- Infecciones viscerales (implantes, artritis, meningites, mastitis...)
- Septicemias, síndrome de shock tóxico
 - Intoxicaciones
alimentarias, enterocolitis aguda

- Piel, nariz, axilas.

- Numerosos factores de virulencia:
• Proteínas de adhesión:unión a colágeno, fibrinógeno y fibrina
• Contra las defensas del hospedador: cápsula polisacarídica, Proteína
A
• Toxinas:
- Toxina ⍺ (fosfolipasa contra plaquetas y monocitos; activa
liberación de citokinas que provocan inflamación y choque
séptico)
- Toxina ß (esfingomielinasa: hemolisis)
- Enterotoxinas
- TSST-1
• Proteínas extracelulares:
- Leucocidinas
- Coagulasa (fibrinógeno —> fibrina)
- Hialuronidasa, fibrinolisina, lipasa, DNasas,…
- Estafiloquinasa (plasminógeno —> plasmina; asociada a fago)
- Beta-lactamasas
- Varias hemolisinas
IDENTIFICACIÓN Y DIAGNÓSTICO
- Cultivos de muestras de heridas purulentas en medio Agar sal-manitol (7.5% NaCl, manitol, rojo
fenol —> S. aureus vs S. epidermidis), Catalasa, Coagulasa, DNasa.
- Específicas: PCR, test API
- Cultivos en medio con meticilina para identificar cepas resistentes (MRSA).
- Infecciones nosocomiales (hospitalarias).
TRATAMIENTO Y PROFILAXIS
- Resistentes a β-lactámicos (penicilina y cefalosporina).
- Clindamicina y tetraciclinas para MRSA (inhibe ribosoma).
- Difícil prevención por ser flora normal y portadores asintomáticos.

•Ulcera gástrica (Helicobacter pylori)

- Bacilos en forma de espiral, gram-negativos, móviles relacionados
con
gastritis, úlceras (80%) y cáncer gástrico.
- 50% asintomáticos, se desconoce su mecanismo de transmisión
- Invade mucosa gástrica (protección) y diversos factores de virulencia promueven la inflamación,
destrucción del tejido y ulceración:
- Citotoxina VacA (exotoxina)
- Ureasa
- LPS

IDENTIFICACIÓN Y DIAGNÓSTICO
- Test aliento (no invasivo): urea marcada radiactivamente —> +
ureasa = CO2 marcado.
- Biopsia úlcera gástrica

TRATAMIENTO Y PROFILAXIS
- Antiácidos solo alivian temporalmente.
- Metronidazol + tetraciclina/amoxicilina + antiácidos (bismuto) durante 15 días.

CONTACTO DIRECTO: TRANSMISIÓN SEXUAL (ETS)

•Sífilis (Treponema pallidum)
- 5-12 millones de nuevos casos al año (incremento en los últimos años).
- Morfología y movimiento característicos (endoflagelos, flagelos
periplásmicos).
- Microaerófilos/anaerobios, 5-15 x 0,1-0,4 μm. Carece del ciclo de Krebs y
depende del hospedador para obtener BN y aminoácidos.
- Transmisión sexual y transplacentaria (Sífilis congénita).
- Sífilis: primaria y secundaria (infecciosa), latente y terciaria.

- Factores de virulencia:
• Membrana externa (adherencia)
• Hialuronidasa
 • Protección mediada por cubierta por fibronectina

IDENTIFICACIÓN Y DIAGNÓSTICO
- Lesiones durante etapas primaria y secundaria
- NO cultivable —> Microscopía (campo oscuro/inmunofluorescencia) a partir de lesiones.
- Presencia de Ac en suero en etapas primaria y secundaria
- PCR

TRATAMIENTO Y PROFILAXIS
- Salvarsán (P. Ehrlich, inicios quimioterapia s. XX).
- Penicilina G en fase primaria; complicado en fases posteriores.
- Inmunidad no completa (nuevas infecciones).
- Educación sexual, uso de profilácticos, tratamiento casos nuevos y seguimiento de los
diagnosticados.

•Gonorrea (Neisseria gonorrhoeae)

- Distribución mundial (gonococo, diplococo aerobio estricto):
tracto genitourinario, ojos, recto y garganta (ser humano único
hospedador)
- Tras contacto con las mucosas —> multiplicación e invasión. Activación del sistema inmune
causa los principales daños.
- Síntomas tras 2-21 días: secreción amarillenta, pus y dolor al orinar. Asintomática o mal
diagnosticada en mujeres —> aborto y esterilidad
- Diseminación por sangre (bacteriemia): artritis gonorreica, endocarditis y faringitis.

- Factores de virulencia:
• Adhesinas (Pili)
• Proteínas Opa: unión células epiteliales y células fagocíticas.
• Porinas (PorB): invasión células epiteliales; bloquea desgranulación
neutrófilos.
• Proteínas Rmp: inhiben anticuerpos.
• Supervivencia en fagocitos. Células sistema inmune dan paso al
tejido fibroso.
• LipoOligoSacarido (LOS, liberación fragmentos membrana, endotoxina)
• Receptores de sideróforos humanos (transferrina, lactoferrina,
hemoglobina)
• Proteasa de IgA
• β-lactamasas

- Oftalmia neonatorum o conjuntivitis del recién nacido (ceguera).

- Nitrato de plata o cóctel de antibióticos al nacer.

IDENTIFICACIÓN Y DIAGNÓSTICO
- Cultivos muestras uretra: morfología, tinción y oxidasa+.
- PCR (complementaria)

TRATAMIENTO Y PROFILAXIS
- Cefalosporinas (ceftriaxona) (Resistencia a penicilinas, tetraciclinas, quinolonas).
- No se genera inmunidad permanente (Ac específicos de cepa + cambios antigénicos).
- Anticonceptivos orales modifican pH vaginal —> cambio microbiota natural.
- Síntomas desapercibidos en mujeres.
Chlamydia
•

- Parásitos intracelulares obligados (no síntesis de ATP).

- Ciclo de vida característico: cuerpos elementales (0,3-0,4 μm;
infectivos) y cuerpos reticulados (0,8-1 μm; multiplicación).
- C. trachomatis (Uretritis no gonocócica (primera ETS); tracoma (ocular); conjuntivitis de
inclusión y neonatal); C. psittaci (psitacosis, aves); C. pneumoniae (neumonía).

- C.trachomatis: En hombres: secreción uretral, picor e inflamación del tejido reproductor.

Síntomas inapreciables en mujeres, pero complicaciones (aparato reproductor: esterilidad,
aborto, conjuntivitis en recién nacido)
- A menudo asociada a gonorrea.
- Tracoma: principal causa de ceguera. Transmitido por gotas contaminadas a través de manos,
contacto con ojos afectados y moscas.

IDENTIFICACIÓN Y DIAGNÓSTICO
- Cultivos celulares —> PCR a partir de muestra genitales
- Serología (anticuerpos específicos).
- Microscopía (cuerpos de inclusión por Giemsa o tinción de iodo; inmunofluorescencia).

TRATAMIENTO Y PROFILAXIS
- Tetraciclinas (inhibidor ribosomal): Doxiciclina o azitromicina.

ENFERMEDADES BACTERIANAS TRANSMITIDAS POR VECTORES

•Rickettsias

- Parásitos intracelulares obligados de animales (no cultivables en

medios artificiales), aerobios, 0,3 x 1-2 μm.
- El ser humano es hospedador accidental (reservorio en roedores,
transmitido por pulgas, piojos y garrapatas).
• Metabolismo altamente especializado (reducido):
• No uso de glucosa ni ácidos orgánicos (sólo glutamato o glutamina).
• Uso de metabolitos celulares.
- Entrada en la célula de manera activa, multiplicación y liberación con lisis celular.
-

Fiebre de las montañas rocosas (Rickettsia rickettsii)

•

- Transmisión por garrapatas infectadas en sus glándulas salivares.

- Multiplicación en núcleo celular y citoplasma. Proteína OmpA para
adherirse a las células endoteliales —> Multiplicación y diseminación
por los vasos sanguíneos.
- 3-12 días de incubación: fiebre, dolor de cabeza y exantema
generalizado acompañado de vómitos y diarrea. 1% de mortalidad en
casos tratados (hasta 30% no tratados).

IDENTIFICACIÓN Y DIAGNÓSTICO
- Microscopía (Giemsa), inmunofluorescencia.
- PCR (gen ompA)

TRATAMIENTO Y PROFILAXIS
- Tetraciclinas (Doxiciclina) y cloranfenicol.
- No existe vacuna

Tifus epidémico (Rickettsia prowazekii)

•

- El hombre es el único mamífero hospedador conocido.

- Transmisión por picadura del piojo humano (Pediculus humanus)
contaminada con heces que contienen las bacterias.
- Tras multiplicación (3 semanas): fiebre, dolor de cabeza, debilidad
corporal y exantema característico en axilas que se extiende al resto del
cuerpo —> daños en el SNC, pulmones, riñones y corazón (30% mortalidad)

IDENTIFICACIÓN Y DIAGNÓSTICO
- Inmunofluorescencia

TRATAMIENTO Y PROFILAXIS
- Tetraciclina (Doxiciclina) y cloranfenicol
- Vacunas preventivas en caso de viajes a zonas afectadas

•Enfermedad de Lyme (Borreliella burgdorferi)

- Zoonosis (roedores, ciervos, aves) transmitida por artrópodos.
- B. burgdorferi (B. garinii y B. afzelii en Europa): cromosoma lineal.
(0,2- 0,5 x 8-30 μm). Transmisión por garrapata Ixodes spp.
- 3 etapas de la enfermedad (multiplicación e invasión; no factores de virulencia
salvo respuesta inmune):
1. 10 días: Eritema localizado en la picadura con extensión en anillo —>
malestar, fatiga, fiebre y escalofríos.
2. Semanas/meses: daños neurológicos, inflamación cardíaca y artritis en
articulaciones (efecto autoinmune) —> inflamación y daños
 permanente.
3. Años: desmielinización neuronal —>“ Alzheimer y esclerosis múlltiple”?

IDENTIFACIÓN Y DIAGNÓSTICO
- Serología (ELISA, Western-blot)
- PCR
- Cultivo (no siempre)

TRATAMIENTO Y PROFILAXIS
- Etapas tempranas: Amoxicilina (β-lactámico) y doxicilina (tetraciclinas)
- Daños neurológicos: Ceftrianoxa (Cefaslosporina)
- Reducción del vector y protección al salir al campo (repelentes, ropa adecuada).

Peste (Yersinia pestis)

•

- Bacilos anaerobios facultativos, oxidasa -

- Plaga en la Edad Media (1/3 de la población)
- Zoonosis: Reservorio: ardillas, roedores... Transmisión por pulgas
(Xenopsylla cheopis) o animales infectados (aerosoles, deshechos).
- Peste bubónica: Multiplicación en sangre y linfa —> fiebre, escalofríos, cansancio y
aparición de bubones (nódulos linfáticos inflamados) y hemorragias (muerte negra)
—> 50-70% muerte en 3-5 días por septicemia (casos no tratados).
- Peste pulmonar/neumónica: transmitida por aerosoles o derivada de la bubónica
—> Síntomas desapercibidos hasta aparición de esputos con sangre —>
paso a sangre y muerte del 100% en 12-24h. Muy contagiosa entre
personas.
- Peste septicémica: multiplicación en sangre sin aparición de bubones —
> choque séptico.
- Factores de virulencia:
• LPS (endotoxina)
• Cápsula
• Resistencia a fagocitosis (Sistema de secreción tipo III:
inhibición y citotoxicidad).
• Plásmidos codificantes de genes antifagocitosis (proteína F1 de
cápsula) y proteasa Pla (degrada elementos del complemento).

IDENTIFICACIÓN Y DIAGNÓSTICO
- Microscopía, cultivo y serología.
- Laboratorios limitados y controlados (bioterrorismo).
- PCR

TRATAMIENTO Y PROFILAXIS
- Estreptomicina, cloranfenicol (aminoglucósidos; 30S y 50S)
- Tetraciclinas (doxiciclina).
- Generación de memoria inmune.
- Control de plagas (pulgas y roedores), aislamiento enfermos.
- Existe vacuna.
TEMA 9.II.: “ENFERMEDADES INFECCIOSAS CAUSADAS POR
BACTERIAS Y HONGOS”
- Infecciones fúngicas
- Infecciones parasitarias

ENFERMEDADES FÚNGICAS
- Hongos patógenos: levaduras, mohos (hongos filamentosos)

- 50 especies descritas que causan enfermedades en humanos.

- Raramente afectan a individuos sanos (ej. excepción: pie de

atleta), pero pueden causar infecciones sistémicas en personas
inmunocomprometidas.

Muchos hongos patógenos son dimórficos.

Diagnóstico por cultivo, identificación microscópica y técnicas moleculares.

ENFERMEDADES FÚNGICAS
A. Alteración de la respuesta del sistema inmune (Alergias)
Proteínas celulares que actúan como alérgenos.
Ejemplo de ello son: Aspergillus spp. y Alternaria spp.

B. Producción de toxinas (micotoxinas)

Exotoxinas
- Aflatoxinas (Aspergillus flavus). Agentes intercalantes en el DNA —> Dañios hepáticos (cirrosis,
cáncer).
- Fumonisinas (Fusarium moniliforme). Inhibe ruta de síntesis de lípidos —> Cáncer de esófago.

C. Infecciones fúngicas (micosis)

- Micosis superficiales (pelo, piel, uñas)
- Micosis subcutáneas (capas profundas de la piel)
- Micosis sistémicas (órganos internos): infecciones primarias o secundarias. Tratamientos largos,
ya que son complejas de tratar.

MICOSIS SUPERFICIALES
•

Llamados genéricamente Dermatofitos: Epidermophyton, Trichophyton y

Microsporum.

Trichophyton spp: pie de atleta, tiña corporal o inglinal.

Antifúngicos tópicos como miconazol (inhibición síntesis ergosterol).
- Las esporas se adhieren a las superficies queratinizadas.
- Tras la germinación, las hifas penetran en el estrato córneo (Proteasas que degradan la
queratina. Endo- y Exoproteasas; Serinproteasas y metaloproteasas)
- Quitina, glucano, glucopéptidos (pared) activan sistema inmune àinflamación, reacción de
hipersensibilidad,…

•MICOSIS SUBCUTÁNEAS
El hongo penetra a través de heridas hasta capas internas de
la piel.

Esporotricosis (Sporothrix schenckii; trabajos en contacto con el suelo:

campo, minas, jardín); Cromoblastomicosis (Phialophora verrucosa,
Fonsecaea spp., Cladosporium spp.)

Tratamiento con azoles orales.

F. pedrosoi produce melaninas que le protegen de la acción

química del sistema inmunitario y la acción de antifúngicos.

MICOSIS SISTÉMICAS
•

Esporas de hongos del suelo son inhaladas —> infección pulmonar y

diseminación por el cuerpo.

• HISTOPLASMOSIS (Histoplasma capsulatum)

Parásito dimórfico: hifas tabicadas, formación de esporas (microconidos) infectivas;
levadura intracelular (fagocitos).

- Asintomática o síntomas similares a gripe: fiebre, tos, dolor de cabeza y

muscular. Lesiones pulmonares similares a tuberculosis.
- División por gemación durante la infección en el hospedador.
- Forma filamentosa en suelo + excrementos aves (gaviotas, pollos, pavos; No se
ven afectados)
- Microconidios (esporas) son inhaladas —> infección (no persona a persona).
- Endémica de África, Australia, India y zonas de EEUU.

- Factores de virulencia:
• Dimorfismo térmico (30ºC: hongo filamentoso; 37ºC: levadura)
• Producción de sideróforos y moléculas de captación de Calcio.
• Proteínas de adhesión a células fagocíticas
 • Parásito intracelular de fagocitos (diseminación y supervivencia)
• Alteración de la composición de pared (glucano)

IDENTIFICACIÓN Y DIAGNÓSTICO
- Pruebas de fijación del complemento
- Microscopía (Giemsa, levaduras intracelulares)
- Test de hipersensibilidad en piel

TRATAMIENTO Y PROFILAXIS
- Uso de máscaras en zonas con suelos infectados
- Cura espontánea
- Anfotericina B, ketoconazol, itraconazol.

• CRYPTOCOCOSIS (Cryptococcus ssp.)

- C. gattii (+++), C. neoformans (afectados VIH)
- Unicelular (levadura o células pequeñas)
- Heces de paloma —> inhalación células —> infección pulmonar
- Infección transitoria (neumonía); o diseminación (piel, huesos,
órganos y SNC —> meningitis)
- No transmisible de persona a persona

- Factores de virulencia:
• Cápsula polisacarídica
• Producción de melanina
• Producción de ureasa (supervivencia en macrófagos)

IDENTIFICACIÓN Y DIAGNÓSTICO
- Microscopía (Tinta china: levaduras con gruesa pared, esféricas en pus, esputo o exudado de
heridas)
- Cultivo en Sabouraud Dextrose Agar
- Técnicas inmunológicas

TRATAMIENTO Y PROFILAXIS
- Evitar zonas con alta población de aves
- Anfotericina B o fluconazol (preventivo)
• CANDIDIASIS (Candida spp.: C. albicans, C. glabrata)

- Hongos aerobios estrictos, microbiota normal (bucal, gastrointestinal, respiratorio y vaginal)

- En situaciones de alteración microbiota normal, inmunodepresión, patógenos nosocomiales, y
transmisión sexual (oportunistas).
Candidiasis orofaríngea:
- Sistema inmune debilitado (recién nacidos, tratamiento con esteroides),
dentaduras postizas.
- Abundantes manchas blancas en la cavidad oral/faringe.

Candidiasis intertriginosa: Axilas, ingles, pliegues cutáneos (zonas húmedas y

calientes)

Candidiasis vaginal: diabetes, antibióticos, anticonceptivos orales, embarazo... asociado a

descenso en microbiota natural de Lactobacillus (= ascenso de pH) —> flujo espeso
blanco/amarillento.
Transmisión a hombres (balanitis: vesículas, picor, quemazón e inflamación).

IDENTIFICACIÓN Y DIAGNÓSTICO
- Cultivo
- Microscopía (levaduras gemantes y
pseudohifas)

TRATAMIENTO Y PROFILAXIS
- Antimicrobianos tópicos (Nistatina, miconazol, Propionato sódico…)
- Anfotericina B, fluconazol, intraconazol para infecciones sistémicas.

ENFERMEDADES PARASITARIAS

- Patógenos que no forman parte de la microbiota natural.

- Entrada vía oral o parental (heridas, vectores)
- Contacto o ruta de entrada es determinante (parásitos
intestinales vs. sanguíneos)
- Ciclos complejos (fases), especies hospedadoras limitadas y
multiplicación restringida a unos órganos/tejidos.
- Adhesión inespecífica, estructuras mecánicas (Disco ventral de Giardia
lamblia) o interacciones moleculares (adhesinas; antígenos sanguíneos
para Plasmodium spp.).
- Multiplicación intra- o extracelular.
- Daños a través de toxinas (proteasas, fosfolipasas), daños en tejidos
(invasión) y respuesta inmunitaria.

- Resistencia a las defensas del hospedador.

- Detección e identificación del parásito por microscopía es fundamental (conocer la biología del

organismo). Serología y PCR.

• Infecciones parasíticas viscerales

• Infecciones parasíticas en sangre y tejidos
• AMEBIASIS (Entamoeba histolytica)
- Protista ameboide con movilidad por pseudopodios
(trofozoito)
- Ciclo biológico que incluye: quiste (forma de
transmisión), trofozoito (activo, que invade
otros tejidos, se multiplica en el intestino grueso
o forma nuevos quistes)
- Transmisión por agua o comida contaminada
con los quistes —> diarrea y dolor intestinal —>
disentería: inflamación intestinal, fiebre, heces
sanguinolentas y mucosas.
- Sin tratamiento alcanza hígado, pulmones y
cerebro —> muerte.

- Factores de virulencia:
• Lectinas de superficie celular con doble
función (Gal/GalNAc): adhesión a
mucosa intestinal e inhibición de la ruta
del complemento.
• Lipofosfoglicanos en la superficie celular protegen del sistema inmune.
• Proteasas (degradación tejidos).

IDENTIFICACIÓN Y DIAGNÓSTICO
- PCR, ELISA
- Microscopía

TRATAMIENTO Y PROFILAXIS
- Numerosos casos asintomáticos (no tratar)
- Amebiasis invasiva intestinal y extra-intestinal: Metronidazol
- Tratamiento de aguas para evitar infección
• GIARDIASIS (Giardia intestinalis/lamblia/duodenalis)
- Protozoo flagelado transmitido por agua con contaminación fecal.
- Transmisión por ingesta de quiste (10-25), exquistamiento en
intestino delgado —> trofozoito
- Asintomática o giardiasis: diarrea acuosa abundante y maloliente,
dolor abdominal, náuseas, pérdida de peso (sin sangre).
Recuperación espontánea tras 2 semanas si no existen
complicaciones.
- Alimentos (vegetales, fruta) contaminados, persona-persona por
ruta feco-oral.
- Quistes resistentes a la cloración. Presencia en aguas naturales
(lagos, estanques y ríos) (animales portadores)

- Factores de virulencia (en estudio):

• Flagelos permiten el desplazamiento; lectinas de superficie actúan como
adhesinas; variación de los antígenos de superficie (evasión sistema
inmunitario).
• Aginina-desaminasa priva de Arg a las células del hospedador.
• Numerosos genes que codifican proteasas.

IDENTIFICACIÓN Y DIAGNÓSTICO
- Observación de trofozoitos o quistes en heces.
- Detección de antígenos por ELISA, inmunoelectroforesis.

TRATAMIENTO Y PROFILAXIS
- Tratamiento de las fuentes de agua con cloración + otros métodos (filtración).
- Metronidazol + furazolidona

• TRICOMONIASIS (Trichomonas vaginalis)

- Protozoo flagelado que alterna formas de trofozoito
(infectivo) y ameboide (tras contacto con células del
hospedador).
- Transmisión de persona a persona por contacto sexual (trofozoito)
- Sin formas de resistencia, pero perdura horas en orina o semen
(otros mecanismos potenciales de transmisión: toallas, baños
públicos, saunas...)
- Infección uretra, vagina y próstata —> infección asintomática o uretritis, prostatitis (hombres);
secreciones amarillentas, picor y quemazón (mujeres).
- Se nutre de las células del hospedador y microbiota asociada (bacterias y hongos) —>
adquisición de genes (metabolismo de glicanos —> invasión mucosa)

IDENTIFICACIÓN Y DIAGNÓSTICO
- Observación trofozoitos móviles en secreciones (Giemsa)
- Cultivo
- Inmunofluorescencia

TRATAMIENTO Y PROFILAXIS
- Metronidazol (también pareja)
- Higiene y control en hombres (asintomáticos)

• TOXOPLASMOSIS (Toxoplasma gondii)

- Parásito intracelular.
- El ciclo biológico requiere el paso por felinos (hospedador
obligado; Reservorio: roedores, pájaros y pequeños
animales). Quistes maduran en el medio externo.
- Transmisión por carne poco cocinada, contacto con heces de
gato
o agua contaminada con los quistes.
- Exquistamiento en intestino:
• asintomático (90% población)

• dolor de cabeza, malestar, dolor muscular

• dispersión por tejidos: ojos (retinitis), cerebro,

pulmones
- Riesgo en inmunocomprometidos (SIDA, transplantados) y
mujeres embarazadas.

- Factores de virulencia:
• Proteínas en superficie de reconocimiento y adhesión a células del
hospedador (SAGs, SRSs, antígenos unidos a GPI,...).
• Secreción de proteínas MIC (adhesinas) y RON (invasión células)
• Inyección de efectores (proteínas ROP) en el interior de las células
del hospedador, alterando su funcionamiento (microtúbulos,
estabilidad)

IDENTIFICACIÓN Y DIAGNÓSTICO
- Serología, Resonancia magnética (quistes)
- PCR de sangre, LCR, tejido o líquido amniótico (embarazo)

TRATAMIENTO Y PROFILAXIS
- Inhibidores ácido fólico, macrólidos.

• TRIPANOSOMIASIS (Trypanosoma spp.)

- Protozoo flagelado, 20 μm de largo, en forma de cresta.

- Enfermedad del sueño (T. brucei) y Enfermedad de Chagas (T. cruci)

• Enfermedad del Sueño (T. brucei gambiense y T. brucei

rhodesiense)
- Vector: mosca tse-tse (Glossina spp., Africa, área
subsahariana).
- Fiebre intermitente, dolor de cabeza, malestar.
- Multiplicación (fisión binaria) del parásito (triypomastigote) en
sangre hasta llegar al SNC: alteración del sueño (tryptophol) —
> coma, fallo multiorgánico y muerte (meses, años).

IDENTIFICACIÓN Y DIAGNÓSTICO
- Microscopía (frotis sangre, LCR)
- ELISA, inmunofluorescencia

TRATAMIENTO Y PROFILAXIS
- Compuestos para tratar enfermedad durante infección (Suramin) o durante síntomas
neurológicos (Melarsoprol).
- Control del vector y humanos infectados.

• Enfermedad de Changas (T. cruci)

- Vector: chiche besucona (Triatoma spp.; Continente americano):
expulsión de heces durante la picadura (irritación y herida tras rascarse).
- Trypomastigotes migran a los tejidos (corazón, hígado, cerebro)
- Presenta forma intracelular (amastigote) sin flagelo ni membrana
ondulante (multiplicación, rotura celular y liberación).
- Chagoma (Signo de Romaña) en lugar de la picadura. La infección aguda cursa con fiebre,
escalofríos, mialgia y fatigaàmuerte o fase crónica (invasión tejidosàfallo cardíaco o daño
cerebral.)

IDENTIFICACIÓN Y DIAGNÓSTICO
- Microscopía (frotis sangre durante fase aguda; biopsia en fase crónica)
- PCR

TRATAMIENTO Y PROFILAXIS
- Benznidazol y nifurtimox (fase aguda)
- Control del vector
 TEMA 10: LOS MICROORGANISMOS COMO AGENTES PATÓGENOS.
FACTORES DE VIRULENCIA.
Nosotros entramos en contacto con microorganismos patógenos por el aire, heridas, alimentos,
vectores, enfermedades de transmisión sexual. Vía inhalatoria, vía digestiva (enteral), contacto
directo y transmisión parenteral.

VIA INHALATORIA (AEROSOLES)

-Gotitas de Flüggeal toser, estornudar o hablar.

-Sistemas de aire acondicionado (Legionellaspp.)
-Trabajo en un laboratorio: centrifugación, esterilización de asas, etc.
-Polvo (neumonía, tuberculosis, meningitis, etc.).

CONTACTO DIRECTO

A) Contacto persona-persona(ETS como sífilis, gonorrea, sida, etc.)

B) Fómites: objetos inanimados que no facilitan la proliferación del microorganismo, pero este
puede sobrevivir aquí durante un tiempo ilimitado. Utensilios de cocina, barras de metro, tranvía,
puertas, puente de agua…

VIA PARENTERAL

A) Inoculación directa a través de la piel (traumatismos, heridas, perfusiones de sangre,

transplantes,) (Ej: VIH, hepatitis B).

B) Vectores: animales que pueden transmitir agentes infecciosos al hombre u otros animales por
picaduras o abrasiones, actuando como intermediarios.(ej. Yersinia pestis por una pulga de rata al
hombre).

C) Vía transplacentaria (Ej: toxoplasmosis)

VIA ENTERAL

A) Alimentos y agua (Ej: Salmonella spp., Vibrio cholerae, Salmonella typhi)

B) Ruta feco-oral (Ej: Giardia intestinalis)

C) Vectores (Ej: moscas y Shigella)

MICROORGANISMOS PATÓGENOS: TERMINOLOGIA

-Infección: invasión de un microorganismos a un huésped y su multiplicación en él. Puede

conllevar o no el desarrollo de una enfermedad.
-Infección latente: el microorganismos patógeno persiste, pero permanece inactivo durante
periodos de tiempo variables (ej. Virus de la varicela, que en la edad adulta puede reactivarse
provocando herpes zóster).

-Microorganismo patógeno: cualquier microorganismo (transeúnte o flora normal) que posee la

capacidad de provocar enfermedad (patogenicidad).

-Virulencia: grado de patogenicidad de un microorganismo. Este potencial para causar una

enfermedad se medie con la DL50 (dosis letal 50): número de patógenos que matan al 50% de un
grupo experimental de animales.

FACTORES DE VIRULENCIA

Son moléculas, proteínas o estructuras que los microorganismos patógenos deben de tener para
conseguir que se desarrolle la enfermedad en los organismos hospedadores.

El proceso de infección tiene una serie de pasos, que se pueden clasificar en 4:

1.Adhesión: a partir de ese primer contacto que tiene el microorganismo con el hospedador, debe
aferrarse a la superficie. El hospedador tiene una serie de mecanismos que hace que el
microorganismo puede adherirse a sus superficie.

2. Atravesar la superficie inicial y entrar en contacto con las células del hospedador (Invasión),
para proseguir con el propio proceso de infección que es la multiplicación y el crecimiento en los
tejidos del hospedador.

3.Infeccion y multiplicación, el microorganismo aquí es donde va a empezar a causar daños por

rotura de células, degradación de tejidos, favorecido por la toxicidad o invasividad.

4. Una vez que el patógeno se ha establecido puede alcanzar una vía de diseminación como por
ejemplo el sistema sanguíneo, a través de la sangre, llegando a otras zonas iniciando otro nuevo
proceso de infección.
Los factores de virulencia se pueden definir como proteínas, moléculas, generalmente estructuras
que participan en el desarrollo de la enfermedad producida por el patógeno, básicamente
cualquier cosa que le sirva al microorganismo para cualquiera de los pasos indicados en el proceso
de infección.

Como tales compuestos, proteínas y demás van a estar codificados en alguna parte del genoma
de la bacteria como pueden ser elementos exógenos como plásmidos (que se transfieren entre
bacterias) o la infección de virus lisogénicos que al insertarse en el cromosoma bacteriano pueden
conferir algunos de los factores de virulencia, en este caso el proceso se denomina____________,
ya que una cepa de una bacteria que puede no ser patógena, por la infección de ese virus
lisogénico que se inserta en el cromosoma bacteriano y que aporta un material genético con
factores de virulencia, una cepa que no era patógena, pasa a serlo al incorporar este factor de
virulencia. Esa nueva proteína, molécula, propiedad, es lo que le permite llevar a cabo una
infección dañina y desarrollar la enfermedad.

FACTORES DE VIRULENCIA. ISLAS DE PATOGENICIDAD.

Relacionado a nivel genético en donde y como se codifican

esos factores de virulencia, existen las denominadas islas de
patogenicidad. Estas islas son regiones cromosómicas
bacterianas que presentan agrupaciones de genes que
codifican para factores de virulencia, estas regiones a
menudo están flaqueadas por elementos genéticos móviles
de inserción, que se transfieren en grupos, con lo que estos
genes tienen un contenido de G+C totalmente diferente al
resto de las regiones del cromosoma. Se llega a pensar que
son adquiridos de manera exógena, es decir, no es por
evolución del propio microorganismo. Tienen varias ORF, y
estas islas se encuentran ausentes en cepas no patógenas.

FACTORES DE VIRULENCIA: ADHERENCIA (Adhesinas)

1. Adherencia: el microorganismo establece un primero contacto, y lo que tiene que hacer es

sujetarse fuerte. Este tipo de factores de virulencia se denomina de manera genética
adhesinas. Algunos ejemplos son: fimbrias, capsulas, proteínas específicas y espículas.
-Fimbrias: no aparecen en todas las bacterias, sirven como sujeción del microorganismos a la
superficie. Son numerosas y de un tamaño pequeño, distribuidas por toda la superficie de la
célula homogéneamente, y generalmente sirven de adhesión. No es habitual que participen en
el movimiento de las bacterias. Las bacterias que las presentan son: E. coli, salmonella tipi…

-Pili: sirven para la conjugación, que es un proceso de intercambio genético entre las bacterias,
no son muy numerosos (1 o 2). Nisseria gonorrhoeae ha desarrollado un tipo especial de pili
que está implicado en la adhesión y además se considera como uno de los factores de
virulencia más importante de este microorganismo. Lo importante de esta adhesión es la
presencia de los pilis, que se denominan de tipo 4, son más numerosos que los pilis normales.

-Cápsula: es una envoltura celular, que está en la parte externa de la pared bacteriana, tiene
naturaleza polisacarídica, aunque hay más complejas con otro tipo de componentes, no todos
los microorganismos forman capsulas. Es importante en los patógenos, porque las
propiedades que le confieren es de adherencia a la superficie, también le sirve como
protección contra el sistema inmune, ya que es una envoltura que protege a las estructuras
básicas como la pared celular por tanto el sistema inmune no es capaz de acceder a él y
reconocer al microorganismo, como exógeno, o no es capaz de actuar sobre el cómo los
fagocitos. Su composición y expresión también depende de las condiciones ambientales. Ej:
Acinetobacter (que causa diferentes tipos de infecciones, heridas), Streptococcus pneumoniae
(causa infecciones en el sistema respiratorio, como la neumonía).

-Proteínas específicas: proteínas que están diseñadas para adherirse. Un ejemplo de bacteria
que las presenta es Nisseria gonorrhoeae, que además de presentar pilis, tiene este tipo de
proteínas OPA, que reconoce
un receptor especifico presente
en las células epiteliales, en
este caso es receptor CD66
(CEACAM), es importante
destacar que este receptor solo
se expresa en las células
epiteliales de determinados
tejidos, o determinadas partes
anatómicas, como el epitelio
genitourinario, ojos, recto y
garganta, aquí es donde el
patógeno puede llevar a cabo la infección inicial, en zonas donde no existen estos receptores,
la adhesión va a estar dificultada y por tanto no va a poder desarrollar la infección. Otro
ejemplo es el Streptococcus pyogenes que genera la Proteína M forma dímeros y adopta una
estructura de alfa-hélice y se une específicamente a los glucosaminoglicanos presentes en el
aparato respiratorio. Son proteínas específicas que reconocen estructuras específicas.

-Espículas: son estructuras asociadas a los virus. Son proteínas del grupo de las glucoproteínas
que aparecen en la superficie de los virus tanto desnudos como envueltos, pero no aparecen
en todos los virus. Son protuberancias, que actúan como ligando de receptores celulares. Un
ejemplo es del virus de la gripe que presenta una espícula de hemaglutinina y que interactúa
con los ácidos siálicos, como el ácido N-acetilneuramínico presente en las superficie de las
células del aparato respiratorio. Es un sistema especifico donde la hemaglutinina va a
interaccionar con ese receptor, si está ausente este receptor el virus no se ancla.
Como factores de virulencia que faciliten la adhesión vale cualquier cosa, el propio
lipopolisacárido puede actuar facilitando esa adhesión por interacciones electrostáticas o
interacciones de los azucares que pueda presentar en su superficie, con los de las superficie
del hospedador. Los ácidos teicoicos y lipoteicoicos presentes en bacterias Gram+, o la
generación de biofilms. Determinados microorganismos comenzaran a formar esa matriz
extracelular de azucares que facilitan esa adhesión. La laca dental es un tipo de biofilm que
está en la cavidad oral y que facilita esa adhesión de microorganismos en esta zona.

Cuando un microorganismo ha tenido en la fase de adherencia pasa a la siguiente, y va a

intentar penetrar de manera más interna en los tejidos. La finalidad de estos factores de
virulencia va a ser por un lado evitar las defensas del hospedador, y, por otro lado, ir dañando
tejidos y células para penetrar en el interior del organismo.

FACTORES DE VIRULENCIA: INVASIÓN/COLONIZACIÓN (Invasinas)

Invasión activa Rotura de células, uniones

celulares/tejidos.

Relacionado con esta etapa hay unos términos como:

-Invasividad: es la capacidad de un microorganismo para penetrar, crecer, reproducirse y

propagarse en el interior del organismo huésped.

-Bacteriemia: presencia de bacterias viables en la sangre. El momento en el que una bacteria o

patógeno alcanza el sistema sanguíneo, provoca un grave problema porque facilita su
diseminación a lo largo de todo el cuerpo, y además la sangre presenta grandes cantidades de
nutrientes glucosa, muchos factores de crecimiento…

Cuando esto ocurre y se produce un crecimiento descontrolado de las bacterias a este nivel, se
produce:

-Sepsis/septicemia: respuesta sistémica del organismo. La presencia de bacterias o sus

productos tóxicos, como toxinas en la sangre, se produce una respuesta involuntaria que es
formulada por el sistema inmune que conlleva fiebre, aumento del ritmo cardiaca, aumento
del sistema inmunitario y que provoca inflamaciones, no se produce el riego correcto de los
órganos, se produce un fallo sistémico multiorgánico y en algunos casos conlleva a la muerte.

LISTA DE FACTORES DE VIRULENCIA IMPLICADOS EN LA INVASION (invasinas).

La mayoría tienen la terminación -asa, que viene asociada a la degradación de algo, como las
proteasas, que están asociadas a la degradación de las proteínas; lipasa, degradación de
lípidos.
Hay muchos ejemplos de estos factores como la elastasa, que se encarga de la degradación de
la elastina presente en la lámina basal del epitelio. DNasas, degradación de ácido nucleico.

Algunos ejemplos:

-Coagulasa (es la excepción a los ejemplos anteriores), no degrada coágulos, sino que lo que
hace es fomentarlos. Es producido por Staphylococcus coagulasa +, en concreto
Staphylococcus aureus, que activa la ruta de coagulación, es una reacción en cadena donde se
activan algunos factores y esto desencadena una respuesta que lleva a la formación del
coagulo, y en los pasos finales a la formación del fibrinógeno que se encuentra de forma
soluble en fibrina.

Lo que hace la coagulasa es interaccionar directamente con un intermediario de esa ruta que
es la protrombina generando la estafilotrombina que actúa directamente y activa al
fibrinógeno transformándose en fibrina.

Lo que se fomenta es la formación de fibrina en su superficie, con esto consigue que las fibras
de fibrina confundan al sistema inmune porque ya no va a tener acceso a esa superficie
bacteriana que es la que reconoce y el sistema inmune lo que se va a encontrar son las fibras
de fibrina que van a pasar desapercibidas (ya que el sistema inmune puede pensar que se
trata de alguna herida) , generalmente lo que hace es engañar al sistema inmune
recubriéndose de fibrina, la idea no es recubrirse completamente sino tener algunas
moléculas de fibrina que confundan al sistema inmune para que no la reconozca como
exógena, y no pueda reconocer esa superficie, evitando así la fagocitosis por células del
sistema inmunitario.

La presencia de la coagulasa es una prueba que se realiza en el laboratorio para distinguir

distintos tipos de Staphylococcus. Con esto podemos distinguir si los Staphyloccocus son
coagulasa + o -. S. epidermidis (Coagulasa +) y luego hay otros ejemplos como S. molicus…
(Coagulasa -).

-Colagenasa: degrada el colágeno. Muchos de nuestros tejidos, sobre todo el conectivo tiene
grandes cantidades de colágeno, que su función es servir de anclaje o de separación entre las
distintas capas de los tejidos.
Lo que hace la colagenasa es degradar el colágeno y permitir la entrada de Clostridium (por
ejemplo) al interior de los tejidos. Esto a nivel industrial o medico se ha aprovechado para
aplicarlo en algunos casos como en la enfermedad de Dupuytren que es un síndrome que hace
que se generen placas de colágeno donde no deben y se acumulen de una manera excesiva a
nivel de la palma de la mano lo que hace que se produzca la flexión involuntaria del dedo. Esta
acumulación provoca que los dedos queden flexionados continuamente y a nivel industrial se
ha aprovechado la existencia de esta proteína y se ha visto que la aplicación localizada de la
colagenasa de C. histolyticum permite romper esas fibras de colágeno y pueda aliviar ese tipo
de síndromes.

-Toxina botulínica: es otro tipo de proteína que tiene una aplicación a nivel industrial, su uso
controlado puede conseguir un beneficio social.

SIGUIENTES FACTORES DE VIRULENCIA: SUPERVIVENCIA Y MULTIPLICACION INTRACELULAR

En el sistema inmune, muchos de los mecanismos implican la fagocitosis de células de los

patógenos y su muerte intracelular por liberación de compuestos tóxicos, exposición a
procesos oxidativos… algunas bacterias en vez de evitar esto lo que hacen es aprovecharlo
para su beneficio. Entran en el interior de las células y una vez que han penetrado salen de la
vía endocítica al citoplasma y se multiplican en él y una vez dentro de las células ya están
eluyendo a todo el sistema inmune porque macrófagos, neutrófilos y demás no son capaces
de entrar en contacto con las bacterias una vez que se están multiplicando en el citoplasma.
Este es el caso de Listeria monocitogenes o de Francisella tularensis.

Otro mecanismo es que, en vez de replicarse en el citoplasma, se quedan en la vesícula

endocítica, este es el caso por ejemplo de Salmonella, que una vez que penetra en el interior
por fagocitosis, lo que hace es producir una serie de proteínas que recubren esa vesícula la
cual han penetrado evitando la fusión con el lisosoma y su posible degradación y una vez en el
interior de esa vesícula aprovechan para multiplicarse... esto también es característico de
Mycobacterium tuberculosis.

OTRO FACTOR IMPLICADO EN LA INVASION/COLONIZACIÓN

Otro factor va a ser la expresión de Proteína A o Proteína G en la pared celular. Se ha

observado que esto lo realiza Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, en los cuales se
expresa este tipo de factor cuya funcionalidad es la de unirse a las inmunoglobulinas presentes
en la sangre. La función de las inmunoglobulinas es neutralizar (toxinas), pero una de las más
importantes es la de opsonización, es decir, señalizar y atraer a otros factores del
complemento en este caso o células del sistema inmune (fagocitos, neutrófilos...).
Lo que hacen las proteínas A o G de estos microorganismos es unir esos anticuerpos pero por
la fracción Gc que es la que atrae a otros elementos del sistema inmune, al unirse por esta
fracción esta no queda expuesta al exterior. La fraccion Gc es la que lleva a cabo esta
señalización por la activación del complemento y al no estar expuesta lo neutraliza. Esto
también se ha aprovechado a nivel biotecnológico en algunas aplicaciones como en la
amplificación de anticuerpos, generando anticuerpos de manera industrial o artificial en un
conejo, ratón, en una cabra, luego hay que amplificar estos anticuerpos de alguna manera,
una forma de hacerlo es a través de columna cromatográficas, donde en la fase estacionaria lo
que tiene son unas bolitas recubiertas con la proteína A o G, en esa columna se vierte un suero
fluido que contenga anticuerpos y la proteína G va a reconocer la acción constante de los
anticuerpos y la va a unir para que queden retenidos para que posteriormente de alguna

manera se puedan purificar.

La proteína M de Streptococcus pyogenes es como una adhesina, es un mecanismo que sirve

para que el microorganismo se fijara a la superficie concretamente al sistema respiratorio a
través del reconocimiento de esos glucosaminoglicanos y que también se ha visto que tiene
potencial como invasina, ya que bloquea la activación del complemento. Lo que hace esta
proteína M es unirse al factor H que desactiva al complemento. El factor H usualmente
aparece asociado a nuestras propias células para evitar que el complemento reaccione con
ellas y esta proteína lo que hace es reclutar ese factor H por si se activa la ruta del
complemento retenerlo en las fases iniciales y que no se forme esa acumulación de proteínas
monoméricas que crean esos poros.

El microorganismo ya ha establecido contacto, ya está dentro de los tejidos, comienza a

duplicarse y a crecer, como resultado de esta acción comienza a producir compuestos tóxicos
o a invadir de manera extensa los tejidos.
FACTORES DE VIRULENCIA: INFECCIÓN. TOXINAS

Uno de los factores de virulencia más importantes en esta etapa va a ser la producción de
toxinas.

Toxicidad: capacidad de un microorganismos para causar una enfermedad mediante la

producción de toxinas.

Toxemia: condición generada por la presencia de toxinas en la sangre.

Generalmente existen dos tipos de toxinas: endotoxinas y exotoxinas. Se diferencian en su

naturaleza y en el mecanismo de acción.

Exotoxinas: liberan al exterior.

Endotoxinas: no es que se viertan al interior, sino que forman parte de la estructura de la

pared celular, en concreto, del lipopolisacárido, más en concreto el lípido A que es de
naturaleza lipídica.

Las exotoxinas van a ser proteínas, A o B. En el caso de las endotoxinas son de naturaleza
lipídica que es el lípido A presentes en el lipopolisacárido que aparece en bacterias GRAM -,
forma parte de la membrana externa. En este caso no se produce fiebre.

Las exotoxinas son proteínas, son factores de virulencia generalmente asociadas a plásmidos o
la integración de fagos lisogénicos.
La acción de los exotoxinas es específica, actúa sobre grupos concretos de células, se vierten al
exterior desde un punto localizado y pueden actuar en otro punto donde existan receptores
para las proteínas. Enfermedades que estas producen: botulismo, listeria o el tétanos.

Las endotoxinas son de naturaleza lipídica, no tienen acción especifica. Tienen un efecto a
nivel sistémico, el principal va a ser la fiebre. En las endotoxinas las enfermedades siempre van
a estar asociadas a las GRAM- como E.coli, Sigella, Salmonella…

Las endotoxina forman parte de la membrana externa con lo cual siempre van a estar
presentes en los genes cromosómicos.

Las exotoxinas son secretadas y las endotoxinas están asociadas a los microorganismos, son
liberadas cuando las bacterias mueren, se rompen o incluso es la propia bacteria la que
promueve esa liberación para causar efectos sobre el hospedador.

Relacionado con la producción:

-las exotoxinas son producidas por plásmidos, fagos y pueden estar presente en cualquier tipo
de bacteria tanto GRAM+ como GRAM-.

-las endotoxinas, de manera externa solo están presente en bacterias GRAM-.

ESTABILIDAD TERMICA

Las proteínas se desnaturalizan, por eso la estabilidad térmica de las exotoxinas es baja.

En el caso de las endotoxinas, su naturaleza lipídica hace que tengan buena estabilidad
térmica, de hecho, para degradarlas se utilizan tratamiento muy largos, aplicándoles altas
temperaturas a 180ºC durante 3h.

-TOXOIDES: son toxinas inactivadas que tienen carácter inmunogénico, es decir, se utilizan en
muchos casos como vacunas para generar esa resistencia a la posibilidad de un patógeno que
produzca esas toxinas. Se generan por inactivación térmica, por eso en el caso de las
exotoxinas se pueden desnaturalizar esas proteínas y conseguir los toxoides. Mientras que las
endotoxinas son muy poco inmunogénicas no se pueden generar estos toxoides, porque son
muy resistentes a las condiciones térmicas.

Las exotoxinas tienen una toxicidad muy alta a bajas concentraciones, mientras que las
endotoxinas, requieren grandes cantidades para generar ese efecto toxico. Aunque se
requieren grandes cantidades, una vez que se acumulan mucho pueden dar lugar a efectos
sistémicos muy graves como un fallo multiorgánico.
LAS EXOTOXINAS

Nos vamos a centrar en algunos ejemplos de exotoxinas que tienen actividad especifica. Las
exotoxinas se pueden dividir en 3 grupos principales por su mecanismo de acción y por su
naturaleza.

-CITOTOXINAS: dañan las células del hospedador generalmente por un efecto citotóxico,
generalmente conlleva a la lisis celular.

-TOXINAS TIPO A,B: son toxinas proteicas, que presentan dos subunidades la A y la B. La B
actúa reconociendo a algún receptor extracelular en la superficie de nuestras células, sirve de
anclaje superficial para unir a la toxina a la superficie de la célula. La subunidad A, lleva a cabo
la actividad toxica la cual ejerce en el interior de las células.

En cuanto a la subunidad B, la unión con ese receptor internaliza a la toxina completa, en la

mayoría de los casos, una vez ya en la ruta endocítica comienza a acidificarse el endosoma, se
produce la ruptura entre las dos subunidades, la subunidad A pasa al medio intracelular, al
citoplasma. Mientras que el receptor y el resto se recicla, vuelve a la membrana para que
vuelvan a interaccionar de nuevo con las exotoxinas.

-SUPERANTIGENOS: la toxinas no lleva a cabo una acción directa de daños sobre nuestras
células, sino que este tipo de toxina activa al sistema inmune provoca una acción exagerada y
nuestra reacción propia de defensa es la que va a dañar a los tejidos.

Los superantígenos activan los linfocitos T, este tipo

de toxinas sirven de anclaje entre esos dos receptores
celulares que deben interaccionar con el antígeno.
Por un lado, interaccionan con el receptor del
linfocito y por otro lado con la molécula del complejo
histocompatibilidad 2, y sin necesidad del antígeno se
produce la actividad del linfocito. Una vez que el
linfocito se activa comienza a liberar citoquinas de
manera masiva, y activa a respuestas inflamatorias…
al activar muchos linfocitos es cuando se produce la
acción exagerada que es la que lleva a cabo los daños
que se producen.

-ENTEROTOXINAS: no son un tipo especial de exotoxinas, se denominan así por su actividad en

el intestino. Puede ser cualquiera de las anteriores.

EXOTOXINAS CON UN MECANISMO DE ACTUACION DE TOXICIDAD CELULAR

-CITOTOXINAS: son proteínas, producidas en el interior de la célula, después se excretaban y lo

que hacían en este caso es llevar a cabo la lisis celular por su actuación a nivel de las
membranas celulares. De manera genérica se denominan hemolisinas, en parte porque la
forma de detectar su presencia se hace en medios característicos como agar que contiene
sangre, es decir, que contiene eritrocitos y la presencia de esas hemolisinas se ponen de
manifiesto por la aparición de esos halos de lisis.

Algunos ejemplos son las fosfolipasas que se unen a fosfolípidos de membrana, en este caso
las toxinas tienen que llevar a cabo un reconocimiento a nivel celular para llevar a cabo su
función. En este caso las
fosfolipasas reconocen la
fosfatidilcolina de las células. Las
células tienen gran cantidad de
este tipo de compuestos que son
reconocidos por las alfatoxinas
producidas los C. perfringens y
por Staphylococcus aureus. El
tipo de actuación es un poco
similar a la del complemento
(reconocía a nivel de la pared la
membrana celular de las células y se iban uniendo distintas subunidades hasta formar un poro,
por el cual la célula perdía electrolitos y al final moría, debido a que no puede soportar esa
presión osmótica). Esto es lo que les ocurre a nuestras células, en este caso, esta toxina en
concreto reconoce la fosfatidilcolina de nuestras células de la subunidad, se van uniendo
varias subunidades del mismo tipo generando ese poro y la célula al no poder mantener esa
homeostasis al final lisa.

Otro ejemplo es la estreptolisina, reconoce los esteroles (compuestos que están en las
membranas), es producida por los Estreptococos grupo A, como Streptococcus pyogenes.

El ultimo tipo de citotoxinas son las leucocidinas, lo que hacen es matar leucocitos, pero no
actúan sobre los eritrocitos, es decir, no son hemolisinas propiamente dichas ya que no
producen la lisis de los hematíes de los leucocitos. Estas leucocidinas, lo que hacen es unirse a
los receptores de citoquinas y de complemento que tienen los leucocitos y producen la lisis
celular de los leucocitos. Destacan la leucocidina denominada de Panton valentine, producida
por Staphylococcus. Los receptores a los que se va a unir son receptores de citoquinas, además
esta toxina es producida por un profago, integrado en el genoma de la bacteria y al activarse
produce este tipo de toxinas. Las leucocidinas no son hemolíticas, es decir, no producen la lisis
de los eritrocitos, sino que producen la destrucción de los leucocitos.

Los patógenos tienen diferentes tipos de toxinas, algunos como Staphylococcus aureus tienen
muchas y por un lado tiene toxinas alfa que son hemolíticas, y por otro lado también destruye
los linfocitos. Esto le da una ventaja muy buena para invadir y engañar al sistema.
EJEMPLOS DE TOXINAS DE TIPO AB

-TOXINA COLÉRICA: producida por Vibrio cholerae, patógeno que causa el colera, que es una
diarrea masiva con una gran pérdida de electrolitos por parte del individuo. Se transmite a
partir de agua y alimentos contaminados, el patógeno alcanza el intestino delgado y aquí
comienza a producir esta toxina que es del tipo de las enterotoxinas. Es enterotoxina porque
actúa a nivel del intestino, pero en realidad su mecanismo de acción es el de una toxina de
tipo AB.

Esta toxina actúa a nivel de los enterocitos, células de nuestro intestino. El funcionamiento
normal de nuestro intestino es captar sobre todo iones de sodio y con ello también arrastra
agua del lumen del intestino hacia el torrente sanguíneo.

La toxina tiene un receptor celular de

reconocimiento, en este caso es el
gangliósido (GM1) que se encuentra en
la membrana de los enterocitos. Esta
toxina se une al receptor, la subunidad
catalítica A es interiorizada, puede ser conjuntamente o por traspaso al interior de las células y
su acción la lleva a cabo a través de la adenilato ciclasa presente en las células. La adenilato
ciclasa, es una ruta que participa generando muchos mensajeros secundarios y en muchas
respuestas celulares. El resultado final tras su activación es un incremento de AMPc y en estas
células, este incremento implica el cierre de los canales de Na, por lo que ya no se va a
capturar sodio, y se produce la apertura de canales de iones Cl e iones Ca, desde el torrente
sanguíneo hasta el lumen. Se produce un bloqueo del receptor, la actividad catalítica activa al
adenilato ciclasa, incrementa los niveles de AMPc y esto implica el cierre de los canales de Na
y la apertura de los canales de iones Cl y Ca en el otro extremo celular. Se produce un trasvase
de esos iones que se van acumulando en el lumen del intestino que son osmóticamente
activos con lo cual se produce un arrastre de agua desde el sistema sanguíneo hasta el interior
del lumen. Esto es lo que provoca esta diarrea masiva, donde posteriormente se requiere la
recuperación de los electrolitos.

-TOXINA TETÁNICA: el tétano es producido por el Clostridium tetani, se transmite por

infecciones a través de heridas al estar en contacto con tierra (endosporas), o también por
contacto con metales oxidados ya que pueden existir unas esporas de este microorganismo
que entran en contacto directo con nuestro sistema.

Este tipo de infecciones son poco invasivas, no tienden a multiplicarse mucho, pero los efectos
que tiene su infección es debido principalmente a la producción de neurotoxinas tipo AB que
bloquean la señal nerviosa al músculo.

Actúa a nivel muscular, el musculo funciona por acción de una neurona motora que es la que
lleva a cabo la activación y contracción del musculo, y luego la señalización de inhibición por
una neurona intermedia que liberaba una sustancia para que el musculo se relajara. Lo que
ocurre con este tipo de toxinas es precisamente el bloqueo de esa señal de relajación, esa
liberación de neurotransmisores que relajan la neurona motora.

La toxina una vez producida se internaliza por la neurona motora, viaja hasta el soma de esta
neurona, esta a su vez la expulsa al nivel del espacio sináptico y la neurona inhibidora.
Entonces ahora lo recaptura esa toxina y en el interior la
neurona inhibidora reconoce a la toxina gracias a la
subunidad B que se une al receptor de membrana de
esta célula, se internaliza y en el interior la actividad
catalítica de la subunidad A la lleva a cabo sobre la
sinaptobrevina. La sinaptobrevina es una proteína que aparece unida a las vesículas de
secreción y su papel es fundamental para la fusión de esas vesículas de la membrana externa y
con la membrana celular para la exocitosis.

Lo que hace la toxina es producir la rotura de la sinaptobrevina de modo que las vesículas con
esa glicina no se liberan y el musculo permanece constantemente contraído.

-SUPERANTIGENOS: antes hemos hablado de que el efecto que tenían era de estimular de
manera exagerada a las respuestas del sistema inmune. En concreto lo que hacen los
superantígenos es actuar de puente entre las dos moléculas implicadas en la respuesta; que
van a ser:

-Molécula de MHCII, por parte de las células

presentadoras de antígenos.

-Receptor de linfocitos T: para conseguir activar a

un linfocito T, este tiene que reconocer al
antígeno que esta presentado por las células
presentadoras de antígeno a través de la molécula
MHCII.

Lo que ocurre con estas toxinas es que se unen tanto a la molécula de MHCII y al receptor de
linfocitos T sin que exista un reconocimiento real de un antígeno y provoca la liberación de
activación de linfocitos, liberación de citoquinas… Cuando esto ocurre a nivel de un linfocito
no pasa nada, pero la producción de muchas toxinas induce la activación de muchos linfocitos
al mismo tiempo y produce la respuesta exagerada dañando los tejidos y favoreciendo a la
diseminación de ese patógeno.
Destaca que la respuesta fisiológica a este tipo de toxinas provoca el síndrome del shock
toxico, que conlleva a la caída de presión sanguínea, fiebre, diarrea, descamaciones de piel,
exantema, y puede provocar la muerte si no se trata a tiempo.

Microorganismos que producen este tipo de toxinas: TSST-1 de Staphylococcus aureus, tiene
una gran variedad de este tipo de toxinas que producen estas respuestas.

MECANISMOS DE DEFENSA DEL HOSPEDADOR

Para defendernos de los patógenos tenemos, por un lado:

-BARRERAS FISICAS: son más o menos inespecíficas, pero son epitelios y unión entre tejidos,
tos, estornudos y células ciliadas. Secreciones corporales (moco, lagrima, orina).

-BARRERAS QUIMICAS: secreciones glándulas (ácidos grasos, ácido láctico, HCl,), lisozima,
péptidos antimicrobianos: histatina, lactoferrina, defensinas.

-BARRERAS BIOLOGICAS: sistema inmunitario (innato y adquirido; células y humoral),

microbiota establecida (Bacteriocinas).
 TEMA 11: EPIDEMIOLOGÍA DE LAS ENFERMEDADES
INFECCIOSAS.

OBJETIVOS
- Tomar contacto con la epidemiología como disciplina relacionada con enfermedades infecciosas.
- Diferenciar diversos términos relacionados con la epidemiología, conocer su alcance y utilidad.
- Conocer distintas medidas de control de enfermedades, su ámbito de aplicación y ejemplos.
- Identificar las enfermedades emergentes y reemergentes que afectan a nivel global y los factores
implicados en este fenómeno.
- Conocer las pandemias actuales en datos epidemiológicos.
- Evaluar el riesgo y peligro del uso de los microorganismos en conflictos militares y amenazas
terroristas.

EPIDEMIOLOGÍA: ciencia que evalúa la aparición, los determinantes y la distribución de las

enfermedades, a la vez que desarrolla métodos para la prevención de las mismas.

1. EPIDEMIOLOGÍA Y SALUD PÚBLICA.

TERMINOLOGÍA

1.1 Infección.
- Crónica: enfermedad de larga duración y progresión lenta. Es variable según la patología; Ej:
bronquitis crónica si los síntomas se mantienen más de 3 meses.
- Aguda: enfermedad de corta duración, generalmente de inicio repentino.

1.2 Afectados.
- Incidencia: número de casos nuevos de una enfermedad en un período determinado.
- Prevalencia: número total de afectados en la población por una enfermedad en un período dado.

1.3 Medidas.
- Mortalidad: medida del número de enfermos fallecidos por una determinada enfermedad.
- Morbilidad/Morbididad: medida del número de nuevos casos de una enfermedad en relación
con el total de la población.

Ej. si hay 15.000 muertes por SIDA en un año y el número total de personas infectadas es de
30.000, la tasa de mortalidad es del 50 %).
Ej. si en un mes hay 700 nuevos casos de gripe por cada 100.000 individuos, la tasa de morbilidad
es del 0.7%.

1.4 Alcance.
- Enfermedad Endémica: enfermedad que existe a niveles bajos, estables
y a intervalos regulares.
- Enfermedad Epidémica: cualquier enfermedad que aparece o incrementa su incidencia por
encima del nivel normal en una población dada.
- Pandemia: incremento de la incidencia de una enfermedad a nivel global (epidemia mundial).

1.5 Transmisión.
- Reservorio: localización ambiental natural donde el patógeno reside normalmente. Puede ser
animado o inanimado. Ej: agua, suelo, alimentos, animales…
- Fuente: localización desde donde se transmite el patógeno, directa o indirectamente a través de
un agente intermediario. Puede ser inanimada (agua, suelo o alimento) o animada (humanos o
animales). Puede coincidir con Reservorio.
- Portador: individuo infectado que puede ser fuente potencial de infección para los demás.

1.6 Zoonosis.
Las zoonosis son enfermedades animales que pueden transmitirse a los humanos. En ellas, los
animales son los reservorios.
El contagio ocurre por contacto directo con la carne del animal enfermo (Tularemia); bebiendo
leche de vaca contaminada (ej. tuberculosis, brucelosis); inhalando partículas de polvo
contaminadas con excrementos o productos animales (fiebre Q, carbunco); o comiendo carne
infectada cocinada insuficientemente (triquinosis).

1.7 Control de enfermedades.

- Control de medios de transmisión: Purificación del agua, medidas de manipulación de alimentos,
control de vectores…
- Control del reservorio: Control de poblaciones, fumigación, eliminación animales infectados…
- Inmunización: vacunación…
- Educación: higiene, educación sexual…
- Erradicación: por ejemplo la viruela…
- Cuarentena, aislamiento y vigilancia: declaración de enfermedades, coordinación de servicios…

2. ENFERMEDADES INFECCIOSAS Y PATÓGENOS EMERGENTES Y REEMERGENTES.

Cambios en el patógeno, hospedador y/o ambiente promueven la aparición o re-aparición de

enfermedades que no existían o estaban controladas.

Cada punto rojo indica una

enfermedad infecciosa
emergente. El número de
estas es significativo, a
pesar de los extensos
programas de
saneamiento, vacunación y
terapia con fármacos
antimicrobianos que han
reducido la mortalidad por
enfermedades en el último siglo en el mundo desarrollado.
FACTORES DE EMERGENCIA DE LAS ENFERMEDADES INFECCIOSAS
Factor de emergencia Ejemplo Patógeno / enfermedad
VIH/ Sida
Demografía y comportamiento humano Urbanización
Fiebre del dengue
Infecciones asociadas a la atención Patógenos resistentes a los
Tecnología e industria
sanitaria medicamentos
Construcción de la presa de Aswan Fiebre del Valle del Rift
Desarrollo económico y uso de la tierra Cambios en las áreas recreativas y
Enfermedad de lyme
de vivienda
E.coli O157:H7
Distribución central de alimentos
Infecciones de la sangre.
Viajes y comercio internacional
El transporte de animales a través Brotes de filovirus de Marburg y
de las fronteras internacionales Ébola
Adaptación y cambio de los patógenos Mutaciones del virus del ARN Pandemia de gripe (H1N1) en 2009
Epidemias de cólera Brote de cólera en Haití en 2010
Salud pública Brotes de tosferina en Europa del
Inmunización inadecuada
Este y Estados Unidos
Eventos inusuales que alteran el equilibrio El clima templado permite que se Brotes de Hantavirus en Estados
habitual entre patógenos y huéspedes amplíe la población de roedores unidos

Enfermedades infecciosas epidémicas emergentes y reemergentes

Agente Enfermedad y síntomas Modo de transmisión Causa de la emergencia
Enfermedad de Lyme:
erupción, fiebre, Aumento de las
Borrelia Mordedura de garrapata
anormalidades poblaciones en las
burgdorferi infecciosa
neurológicas y cardíacas, zonas boscosas
artritis
Gotas de esputo
Tuberculosis: tos, pérdida (exhaladas al toser o La resistencia a los
Bacterias, Mycobacterium
de peso y lesiones estornudar) de una medicamentos
rickettsias tuberculosis
pulmonares. persona con antimicrobianos
y clamidias
enfermedad activa
Saneamiento e higiene
Agua contaminada con
deficientes;
heces de personas
Cólera: diarrea severa y transportados a zonas
Vibrio cholerae infectadas; alimentos
deshidratación rápida- no endémicas a través
expuestos a agua
de viajeros infectados y
contaminada
comercio
Control deficiente de los
mosquitos; aumento de
La mordedura de un la urbanización en los
Virus Dengue Fiebre hemorrágica
mosquito infectado trópicos; aumento de
los viajes y el
transporte marítimo
 El contacto directo con
Filovirus Fiebres hemorrágicas, de El contacto con los
sangre, órganos,
(Marburg y alta mortalidad y reservorios
secreciones y semen
Ébola) fulminantes (vertebrados)
infectados
Contacto directo con
Peligro de reordenación
animales o humanos
Fiebre, dolor de cabeza, del virus animal-
Influenza H5N1 infectados, no se
tos, neumonía y alta humano;
(gripe aviar) propaga fácilmente a
mortalidad desplazamiento
través de los aerosoles
antigénico
respiratorios
La flora endógena se
convierte en un
Candidiasis: infección Inmunodepresión;
patógeno oportunista;
fúngica en tracto dispositivos médicos
Hongos Candida Contacto con las
gastrointestinal, vagina y (catéteres); uso de
secreciones o
cavidad oral antibióticos
excreciones de las
personas infectadas

3. PANDEMIAS ACTUALES

Los virus nuevos o reemergentes pueden provocar nuevas infecciones virales. Por qué
aparecen otra vez puede ser debido a diferentes factores como:

- Biología de los virus: la mayoría son RNA. Estos son más frágiles y su frecuencia de
mutación es más alta. Además también puede producirse la recombinación entre virus.
- Factores humanos (acciones): nuestro estilo de vida influye en la aparición de nuevas
infecciones. El 50 % de la población vive en grandes urbes que provoca el aumento del
hacinamiento, polución, falta de agua. Esto facilita las infecciones sobre todo
respiratorias y gastrointestinales. Además durante los viajes también se pueden
transmitir los virus.
- Cambios ambientales.

3.1. Sida (VIH)

El virus de inmunodeficiencia
humana (VIH) causa el
síndrome de la
inmunodeficiencia adquirida
(SIDA). Este es la última etapa
de la infección. El virus afecta
a los linfocitos T CD4.

El síndrome comienza con una

infección aguda (estilo gripe)
 durante unas semanas, después puede darse un periodo de latencia que puede durar incluso
años pero en realidad el virus está infectando a los linfocitos.
Otros microorganismos oportunistas aprovechan la falta de defensas y crean infecciones
(clamidias, tuberculosis, herpes incluso cáncer).

Los tratamientos anti retrovirales alargan la fase de latencia (no aparecen los síntomas del sida).
El mayor problema es que la mayor cantidad de casos se da en países en vía de desarrollo (Los
datos de infectados son: en América 3 millones, en el este y centro de Europa 0.9 millones, en el
este y centro de Asia 1.4 millones, en África 23.8 millones, en el este de Asia y el pacífico 0.9
millones, en el sur y sureste de Asia 4 millones y en Oceanía 53.000 personas).
Entre 1981 y 2010, 80 millones de personas fueron infectadas (34 millones actuales)

Este virus se trasmite por actividades con

intercambio de fluidos corporales (uso de drogas,
sexo, lactancia materna). El mayor grupo de
afectados son personas de entre 30 y 39 años, se
corresponden con el 35% de los casos.

En España, en el año 2018 se dieron 3244 nuevos

diagnósticos de VIH, de estos:
- 0.1 % fueron trasmitidos de forma vertical.
- 3.2 % eran personas que se inyectaban
drogas
- 26.7 % eran heterosexuales.
- 56.4 % se corresponden a hombres que
tienen sexo con hombres.
- 47.6 % Fueron diagnósticos tardíos.
- El 85.3 % de estos diagnosticados eran
hombres y el 14.7 % mujeres.
- La mediana de edad era de 36 años
- 37.6 % Eran nacidos fuera de España.

(Se recomienda ver el tema 8)

3.2. Cólera (Vibrio cholerae)

Presenta una incidencia de entre 3 y 5 millones anuales con 100.000 muertes. Esta enfermedad es
frecuente en zonas con condiciones sanitarias pobres y tras desastres naturales (terremoto Haití
2010 República Dominicana 2011).Además es endémica en África, Sudeste asiático, India, y
América central y sur.

El cólera se caracteriza por que el afectado presenta diarrea intensa y deshidratación.

Se transmite por el agua y los alimentos contaminados (ostras, almejas, mejillones).
Sus hábitats naturales son estuarios y ambientes marinos ya que resisten la alta salinidad.

Diferentes biotipos son los responsables de las distintas pandemias en la historia.

 Las siete pandemias de cólera han sido casi contiguas desde
hace más de 200 años. La séptima comenzó en 1961 y sigue
en curso. La cepa O139 que apareció en 1991 es endémica
en Bangladesh y en el Golfo de Bengala . Esta puede ser el
preludio de una octava pandemia.

Los casos de cólera notificados entre 2000 y 2011 muestran

una tendencia creciente que indica la continuación de la
séptima pandemia (o el comienzo de una octava pandemia).
Hasta del 95 % de los casos de cólera no se tiene
información (OMS)

(Se recomienda ver el tema 13)

3.3. Gripe (Influenza)

La gripe es causante de entre 300.000 y 600.000 muertes al

año.

Se producen pandemias recurrentes cada 10-40 años asociadas

a cambios genómicos en el virus tipo A. La más recientes son:

- Gripe porcina H1N1 (2009):

fue producida por un salto
antigénico del virus en Méjico.
Este brote tuvo una expansión
más allá de la estacionalidad
típica.
Los menores de 50 años no presentaban inmunidad.
- Gripe aviar H5N1 (2012): Tuvo menor intensidad.

En España existe un plan de vacunación anual en los meses de

octubre y noviembre para grupos de riesgo. Es decir, mayores de 65
años, personas con riesgo de complicaciones derivadas
(enfermedades asociadas) y personal sanitario.

(Se recomienda ver el tema 8)

4. BIOTERRORISMO.

Se conoce como bioterrorismo a la amenaza o uso de virus, bacterias, hongos o toxinas

procedentes de seres vivos para matar o provocar una enfermedad en humanos, animales o
plantas.

Se usan patógenos o toxinas ya que son:

- Fáciles de producir
- Seguras de manipular
- Capaces de incapacitar o matar a las personas de manera sistemática y consistente

Agentes y enfermedades según la categoría de amenaza de las armas biológicas

Categoria Enfermedad Patógeno
Antrax Bacillus anthracis
Botulismo TClostridium botulinum (toxina)
A Peste Yersina pestis
viruela(smallpox) Variola major
Tularemia Francisella tularensis
Fiebres hemorrágicas Filovirus y Arenavirus
Brucelosis Brucella
Intoxicación Clostridium perfringens
alimentaria por toxina
Épsilon
Intoxicación Salmonella, Escherichia coli (O157:H7), Shigella
alimentaria
B
Muermo (Glanders) Burkholderia mallei
Melioidosis Burkholderia pseudomallei
Psitacosis Chlamydophila psittaci
Fiebre Q Coxiella burnetii
Ricina Ricinus commuis
Intoxicación Staphylococcus aureus
alimentaria por
 enterotoxina B
Fiebres tifoideas Rickettsia prowazekii
Encefalitis Alphavirus
Contaminación del Vibrio cholerae, Cryptosporidium parvum
agua
Enfermedades Hantavirus
C
infecciosas
emergentes

A -> Agentes de máxima prioridad que representan un riesgo para la seguridad nacional. Esos
agentes se difunden o transmiten fácilmente y dan lugar a altas tasas de mortalidad. Requieren
una acción especial para la preparación de la salud pública.

B -> Agentes de segunda prioridad. Estos agentes son moderadamente fáciles de diseminar, dan
lugar a una morbilidad moderada y una baja mortalidad, y requieren mejoras específicas de la
capacidad de diagnóstico de la salud pública y de la vigilancia de las enfermedades.

C -> Los agentes de tercera prioridad son los patógenos emergentes que están disponibles, se
producen y se difunden fácilmente y que tienen un alto potencial de alta morbilidad y
mortalidad.

4.1. Bacillus anthracis (Carbunco)

Esta bacteria produce endosporas causantes del carbunco

(cutáneo, gastrointestinal y pulmonar)
Esta enfermedad muestra un 100% de mortalidad.
Estas endosporas son preparadas junto a un agente
particulado como el talco para su dispersión (desarrollo
en WWII; uso en 2001).

La relación entre esta bacteria y el carbunco (Ántrax) fue

demostrada en 1976 por R. Koch.

4.1.1. Tipos de Carbunco:

- Cutáneo (heridas o abrasiones): pápula indolora que progresa con ulceración y formación de
escara; inflamación dolorosa de los nódulos linfáticos.
 - Pulmonar (inhalación de esporas): rápida aparición de sepsis, fiebre, edema e inflamación de
nódulos linfáticos.

- Gastrointestinal (ingestión de esporas por alimentos contaminados): ulceración en zona de

invasión (boca, esófago, intestino), inflamación ganglios cercanos, edema y sepsis.

4.1.2. Factores de virulencia:

• Cápsula codificada por plásmido.

• Exotoxina compleja codificada en otro plásmido pXO1:

- PA (Antígeno Protector) se une a receptores superficiales en fagocitos (CPM-2) atrayendo a más

receptores hasta formar anillo, que une EF y LF.

- EF (Factor Edema): activa a adenilato ciclasa lo que provoca el aumento de AMPc.

- LF (Factor Letal): bloquea las rutas de señalización celular (MAP-quinasas) produciendo edema,
bloqueo de las citoquinas y muerte de los macrófagos ya que liberan su contenido intracelular.
Esto provoca fiebre, hemorragias internas, choque séptico y la muerte (100% carbunco pulmonar
y gastrointestinal; 20-50% cutáneo).

Una proteína llamada

antígeno protector (PA)
entrega otras dos proteínas, el
factor de edema (EF) y el
factor letal (LF), al receptor de
la proteína de morfogénesis
capilar-2 (CMP-2) en la
membrana celular de un
macrófago, donde el PA, el EF
y el LF son transportados a un
endosoma. El PA entonces
entrega el EF y el LF desde el
endosoma al citoplasma del macrófago, donde ejercen sus efectos tóxicos (ÁNTRAX).

4.1.3. Tabla resumen:

FACTOR IDENTIFICACIÓN TRATAMIEN

TAXONOMIA ESTRUCTURA TRANSMISIÓN ESPORAS ENFERMEDAD
VIRULENC DIAGNÓSTICO PROFILAXIS
 IA

Phylum: Gram+, En vacas, Elípticas, Carbunco Cápsula Cultivo y Ciprofloxac

Firmicutes endosporulad cabras y viables en (Cutáneo, Exotoxina microscopía Penicilina
Clase: Bacilli o, inmóvil, ovejas. suelo y pulmonar y (PA, (esporas) Doxicliclin
Orden: cápsula de Transmisibl productos gastrointestin EF,LF) Inmunofluorescencia (si la [toxin
Bacillales (poli-D e a animales al) (cápsula) es baja).
Familia: glutámico) humanos durante Vacunación
Bacillaceae por décadas animales
Género/ contacto o personal
especie: productos Germinación contacto
Bacillus de y
anthracis animales. multiplicaci
ón en
células
fagocíticas
muerte y
liberación al
torrente
sanguíneo

4.2. Variola major (Viruela)

Su transmisión es por aerosoles y presenta

una mortalidad superior al 30%.
Más del 90% de la población es susceptible.

Se encuentra erradicada, se conservan

muestras en USA y Rusia.

(Se recomienda ver el tema 8)

AUTOEVALUACIÓN.

- Definir correctamente los términos de uso más habitual relacionados con la epidemiología y
saber interpretarlos.
- Diferenciar los términos relacionados con la transmisión de enfermedades y saber aplicarlos
correctamente.
- Especificar distintas medidas de control de enfermedades y proponer ejemplos.
- Enumerar diversas razones implicadas en la reaparición de enfermedades y relacionarlas con
ejemplos concretos.
- Aportar datos epidemiológicos relacionados con las pandemias actuales de SIDA, gripe y cólera.
- Detallar las características que posibilitan que los microorganismos puedan emplearse como
arma, su clasificación y ejemplos concretos.
TEMA 12: MICROBIOLOGÍA DIAGNÓSTICA
En este tema se van a tratar las normas de seguridad en el laboratorio de microbiología clínica, las
técnicas para el aislamiento e identificación de microorganismos patógenos y los métodos
moleculares.

 SEGURIDAD EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA CLÍNICA

Para evitar el contagio de los trabajadores y prevenir la dispersión de los diversos patógenos y las
enfermedades que provocan, es necesario tener formación sobre los consejos y normas de
seguridad.

 ESTÁNDARES DE SEGURIDAD EN UN LABORATORIO MICROBIOLÓGICO

- Acceso restringido: Solo los trabajadores del laboratorio o el personal cualificado puede
tener acceso.
- Buenas prácticas de higiene: Está prohibido comer, beber o aplicarse cosméticos en el
laboratorio. Aconsejable el lavado de manos continuo para evitar la propagación de
patógenos.
- Uso de equipo de protección: Recomendado el uso de guantes, bata, gafas protectoras y
respiradores u otros requerimientos dependiendo del patógeno que se esté
manipulando.
- Vacunación: El personal debe estar vacunado de los agentes con los que tenga contacto,
si existe vacuna.
- Manipulación segura de las especies: Tener en consideración la infectividad de los
distintos patógenos y manipularlos apropiadamente.
- Descontaminar: Después de la exposición, descontaminar las superficies y los materiales
mediante desinfección, autoclave o incineración.
Hay mayor número de contagios durante la manipulación de muestras de pacientes que con
cultivos microbianos. El trabajador tiene la responsabilidad última y por eso debe cumplir
debidamente las normas.

 GRUPOS DE RIESGO Y LAS PRÁCTICAS ADECUADAS

TMA: Técnicas Microbiológicas Apropiadas. BSL: BioSecurity Level.
CSB: Cabina de Seguridad Biológica.
  EQUIPOS Y MEDIDAS NECESARIAS EN FUNCIÓN DEL NIVEL DE RIESGO

El guión (-) indica que es opcional.

- NIVEL 1 (Sin riesgo): Ningún requerimiento especial

- NIVEL 2 (riesgo individual moderado): Necesaria la salida de aire con filtro HEPA y uso de
cabinas de flujo. Opcional el uso de salas con presión de aire y ventilación controladas y
uso de autoclave.
- NIVEL 3 (riesgo individual alto): Necesario un laboratorio aislado, sala especial de
descontaminación con autoclave. Presión y ventilación de aire controlada, la salida de
aire debe tener un filtro HEPA. Uso obligatorio de cabinas de seguridad.
- NIVEL 4 (riesgo alto individual y colectivo): Igual que Nivel 3 añadiendo entradas de
doble puerta y vigilancia del personal obligatoria.
 Nivel 1: Escherichia coli. Nivel 2: Staphylococcus aureus. Nivel 3: Mycobacterium
tuberculosis. Nivel 4: Ébola y Virus de Marburgo.

 TÉCNICAS DE AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE PATÓGENOS

Existen normas y protocolos específicos que normalizan todos los pasos implicados: toma de
muestra, transporte, conservación, análisis válidos (microscopía, medios y condiciones de cultivo,
test moleculares…) e interpretación de resultados. La fuente de la que proviene el patógeno y la
historia del paciente guían la elección de una u otra técnica de las siguientes. No se aplican todas
las pruebas a todos los microorganismos, pero todos los laboratorios deben ser capaces de poder
llevarlas a cabo o derivarlas a otros laboratorios.

 TESTS RÁPIDOS E INMUNOENSAYOS

- Bacterias y hongos: Identificación bioquímica.
- Bacterias, hongos, protozoos y virus: ELISA, Citometría de flujo, ensayo de fijación del
complemento, etc.
 MICROSCOPÍA
- Para bacterias, hongos y protozoos: Óptica.
- Para virus: Electrónica.
 CULTIVOS
- Bacterias y hongos: Purificar y amplificar.
- Virus: Estudios citopatológicos.
 TESTS BIOQUÍMICOS
- Bacterias y hongos: identificación y sensibilidad.
 TESTS MOLECULARES
- Bacterias, hongos, protozoos y virus: Amplificación de ácidos nucleicos, secuenciación,
estudio de la huella genética, etc.
A menudo se requiere la confirmación por dos o más técnicas para asegurar el resultado.

 TOMA DE MUESTRAS CLÍNICAS

La toma de muestras debe hacerse:

- Antes de iniciar tratamiento antimicrobiano (o suspenderlo 48-72 h antes)

- Desde el área afectada (más en otros lugares para diferenciar la microbiota normal del
patógeno)
- En condiciones asépticas y material estéril (para evitar contaminaciones)
- Volumen suficiente (duplicados y cantidad)
- Identificarse correctamente (rótulos, etc)
- Transporte, almacenamiento y mantenimiento adecuados

 MUESTRAS DE PIEL Y MUCOSAS (Ojos, oído, nariz, heridas): mediante el uso de un hisopo
 estéril y transporte con Amies o Stuart.

 MUESTRAS DE ORINA: Micción en recipiente estéril o punción directa en la vejiga.

 MUESTRAS DE LCF (LÍQUIDO CEFALORAQUÍDEO) Y SANGRE: Aspirado con aguja y jeringuilla.
 MUESTRAS DE VÍAS RESPIRATORIAS: Saliva o esputo.
 MUESTRAS DE ÓRGANOS CON CAVIDADES: Intubación, o uso de catéter o sonda.

 OBSERVACIÓN DIRECTA AL MICROSCOPIO

- Preparaciones en fresco: para observar movilidad, morfología, estructura de los hongos…
- Tinciones simples: tienen mayor contraste y definición
- Tinciones diferenciales: Gram, Micobacterias (ácidoalcohol resistentes), etc.

- Tinciones
específicas: para
visualizar la
cápsula,
endosporas,
flagelos, etc.
- Microsco

pía de Fluorescencia, de campo oscuro, contraste de

fases…

 CULTIVOS
Objetivo: Aislamiento y aumento de la masa de microorganismos.

- Medios enriquecidos y diferenciales, así como selectivos o

específicos.
 - Condiciones óptimas de incubación (Temperatura, humedad, gases, etc)

 PRUEBAS BIOQUÍMICAS
 MÉTODOS DEPENDIENTES DE CULTIVO: Tras realizar los cultivos y obtener los crecimientos
bacterianos, se realizan a partir de estos las distintas pruebas bioquímicas para finalizar la
identificación. Ejemplos:
- Kit API E20 para identificación
bacteriana.
https://w
ww.youtu
be.com/w
atch?v=tk
GpcdBH9
N0

- Identificación por MALDI TOF MS (espectrometría de masas). Se transfiere el material

biológico a una placa con una matriz líquida y se posiciona en una cámara que dispara un
 haz de rayos láser UV contra la muestra, los reflejados serán absorbidos por un sensor,
que determinará la absorbancia, esta es característica de cada especie.

https://www.youtube.com/w
atch?v=m-ENo9sYpdw

- Análisis clásicos cuyos resultados conjuntos permiten la identificación: Anaerobiosis,

prueba de la oxidasa, prueba de la glucosa, morfología, resistencia a antibióticos…

 MÉTODOS INDEPENDIENTES DE CULTIVO

BASADOS EN INTERACCIONES ANTÍGENO-ANTICUERPO

- Serología: Reacción de aglutinación y titulación

(cuantificación) de anticuerpos. El Título es la dilución más
alta (concentración más baja) que da reacción positiva.
Ej: Titulos

superiores a 1/32-1/64 para Chalmydia indican

infección.

- Test cutáneos: Tuberculina (Test de Manteux) Se inyectan antígenos de forma

intradérmica para comprobar si se ha producido contacto con la bacteria. Los + o – se
determinan dependiendo del tamaño que alcance la pápula.
- Inmunofluorescencia: Se inocula a la muestra un anticuerpo, marcado con una sustancia
fluorescente, contra el

microorganismo que buscamos.

- Inmunoensayo (ELISA): Permite la detección tanto del Antígeno como del Anticuerpo.

- Tests Rápidos
Se añade plasma del paciente al test (que contendrá los anticuerpos contra el antígeno de
interés), posteriormente se añade una matriz líquida que hará visible el complejo Ag-Ac.

-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
- Inmunoblotting (Western-blot): se separan las proteínas por tamaño con una
electroforesis, se transfieren a un soporte sólido y se marcan con anticuerpos específicos.
Ej: Diagnóstico de B. burgdorferi (Enf. de Lyme, la de Justin Bieber)
 BASADOS EN ÁCIDOS NUCLEICOS

- qPCR: PCR cuantitativa. Es cuantitativa ya que contabiliza la cantidad de DNA del

patógeno, teniendo en cuenta cuantos ciclos de amplificación son necesarios para
obtener determinada cantidad de fluorescencia, es decir, cuanto menor sea el número de
ciclos que se necesitan más cantidad de DNA habrá. Ej: La curva (A) alcanza 0.15 de
fluorescencia en 15 ciclos y (B) en 22. (A) tiene más abundancia en el DNA a estudiar.

- RT-PCR: PCR con transcriptasa inversa. Requiere un paso previo de transformación del
RNA del patógeno en cDNA gracias a esta enzima.

 ANÁLISIS DE ORINA
 TOMA DE MUESTRA:
- Recogida de la primera orina de la mañana en recipiente estéril.
- Tomar la muestra a mitad de la micción (descartar el principio y final).
- Abrir el recipiente antes de la toma y cerrarlo inmediatamente tras la recogida.
- Llevar al laboratorio o guardar a 4ºC. (Existen envases con medio de conservación)
 TRATAMIENTO DE LA MUESTRA Y DIAGNÓSTICO:

1) Visualización al microscopio: presencia de bacterias, levaduras, cristales, glóbulos blancos

y rojos (sedimento) Descartar en ausencia de proteínas (proteinuria), leucocitos
(leucocituria) o eritrocitos (hematuria).
 2) Cultivo en medios específicos: agar EMB Levine, agar CLED (distingue lac+ vs lac-); 35-
37ºC durante 16-24h.

 RESULTADOS:
- 103-104 UFC/ml  Normal
- >105 UFC/ml  Identificación+ sensibilidad a antibióticos
- Más de 2 patógenos= “cultivo mixto, contaminación”  Repetir toma de muestra

 ENFERMEDADES MICÓTICAS

 TOMA DE MUESTRAS:
- Limpiar área con etanol 70%, dejar secar y realizar raspado y depositar en envase
estéril. En caso de muestras de fluidos, aspirar empleando material estéril.
- La carga microbiana suele ser menor que en caso de enfermedades bacterianas (tomar
suficiente muestra).

 TRATAMIENTO DE LA MUESTRA Y DIAGNÓSTICO:

- Visualización al microscopio: (fresco + KOH; tinciones: blanco de calcoflúor, GIEMSA,
tinta china): hongos filamentosos vs. levaduras; esporas, hifas, conidios
 Diagnóstico presuntivo.
- Cultivo de las muestras (Agar Sabouraud con cloranfenicol; Agar infusión cerebro-
corazón; Agar de Staib; Medio de Leeming (LNA)…). Incubar a 30ºC durante 4 semanas
 Microscopía y pruebas bioquímicas
- Patógenos primarios identificados con mayor facilidad que oportunistas (Aspergillus,

Candida…)
BLOQUE IV: MICROBIOLOGÍA DE LOS ALIMENTOS E INDUSTRIAL

TEMA 13: MICROORGANISMOS Y DESCOMPOSICIÓN DE

LOS ALIMENTOS
Los microorganismos pueden tener efectos tanto negativos como positivos sobre los alimentos.
Por un lado, pueden llevar a cabo una serie de transformaciones, pero alterando las propiedades
de modo que sigan teniendo un gran valor nutricional o comercial, pero en otros casos pueden
tener efectos perjudiciales que generalmente están asociados a la producción de enfermedades.

ALTERACIÓN DE ALIMENTOS

Los alimentos constituyen una fuente rica en materia orgánica susceptible a ser degradada por los
microorganismos para obtener las moléculas orgánicas y energía necesarias para su crecimiento y
reproducción. Como resultado de su metabolismo, se alteran las características físico-químicas del
alimento. Dependiendo de las características originales de estos alimentos se pueden clasificar en
tres grupos según el grado de susceptibilidad a la degradación microbiana:

- Estables o no perecederos: Están en ese grupo legumbres, harinas, azúcar… Con unos
cuidados mínimos se mantendrá bien
- Semi-perecederos: con el cuidado adecuado se pueden mantener un cierto tiempo. Es el
caso de las patatas, nueces, pan…
- Perecederos: Son la inmensa mayoría del os alimentos, sobre todo los frescos, que
presentan una serie de características que los hacen muy atractivos para los organismos
ya que son fáciles de degradar, y por tanto requieren medida de conservación para que
perduren en el tiempo.
Factores que intervienen en la alteración de los alimentos por microorganismos:

 Factores intrínsecos (del propio alimento):

- pH
- Disponibilidad de agua
- Contenido de nutrientes en los alimentos
- Sustancias antimicrobianas presentes en los alimentos
- Estructuras o envoltorios
 Factores extrínsecos (ambiente de conservación del alimento):
- Temperatura
- Humedad relativa
- Atmósfera de conservación y Oxígeno: hoy día la mayoría de alimentos envasados no
llevan aire en su interior, sino una combinación modificada de O2, CO2 Y N2 que inhibe el
crecimiento de determinados organismos y permite así alargar la vida de los alimentos
- Procesos industriales
MICROBIOLOGÍA PREDICTIVA

La microbiología predictiva es una disciplina que comprende el estudio de la respuesta de

crecimiento o inhibición de los microorganismos sobre los alimentos en función de muchos de los
factores que hemos mencionado anteriormente con el objetivo de predecir lo que pasará durante
el almacenamiento, procesado y demás etapas que sufren los productos alimentarios desde la
materia prima hasta su consumo. Esta disciplina trata por tanto de predecir el comportamiento de
los organismos en base a las características intrínsecas del propio alimento y a las distintas
condiciones ambientales a las que dicho alimento puede someterse.

Se basa en la aplicación de modelos matemáticos que contemplan todas estas variables para
predecir el comportamiento de los microorganismos en esas condiciones y en base a ello
establecer la vida útil o comercial del propio alimento.

Principales Microorganismos responsables de la alteración de los alimentos:

Encontramos tanto bacterias como hongos, la mayoría ambientales

1. Hortalizas, verduras y frutas:

- Bacterias: Erwinia carotovora, Pseudomonas, Corynebacterium
Hongos: Botrytis, Alternaria, Cladosporium, Penicillium, Rhizopus, levaduras
2. Carnes y mariscos:
- Bacterias: Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter, Flavobacterium, Proteus, Salmonella,
Escherichia, Campylobacter, Lysteria, Micrococcus, Clostridium
- Hongos: Cladosporium, Mucor, Rhizopus, Penicillium, Geotrichum, Candida, Rhodotorula,
Sporotrichium
3. Huevos: Salmonella
4. Leche: Bacterias lácticas (Streptococcus, Lactococcus…), Pseudomonas, Proteus,
Mycobacterium, Brucella
5. Alimentos azucarados: Clostridium, Bacillus, Flavobacterium
6. Cereales y harinas: Penicillium, Rhizopus, Claviceps.
ENFERMEDADES TRANSMITIDAS POR LOS ALIMENTOS

Pueden clasificarse en:

 Infecciones: Se deben a la presencia de la bacteria en el alimento, y la enfermedad está

producida por la multiplicación y acción del organismo en nuestro cuerpo. Su periodo de
incubación suele ser de entre 24-72h (o más)
Ejemplos: Salmonella sp, Campylobacter jejuni o E.coli enteropatogéno
 Intoxicaciones: Son enfermedades derivadas de la presencia de productos microbianos
tóxicos (toxinas) en los alimentos, por lo que no es necesaria la presencia del
microorganismo en el alimento o ni siquiera que esté vivo mientras que esté presente esta
toxina y que esta sea activa. El periodo de incubación suele ser de 1-6h
Ejemplos: S. aureus
Las enfermedades causadas por microorganismos a través de alimentos contaminados con estos o
sus toxinas se las denomina genéricamente como toxiinfecciones.

Dosis infectiva mínima (DI): dosis o número de microorganismos necesario para que se produzca
la toxiinfeción
Periodo de incubación: tiempo comprendido entre la entrada del patógeno o toxina y la aparición
de los signos y síntomas.

INFECCIONES

Campylobacter jejuni
Gram negativo, móvil, microaerófilo, helicoidal

Fuente: carnes de ave de corral, cerdo, agua… Tiene una DI ≤ 104 cels

Patogenia: el principal mecanismo es invasión de la mucosa

intestinal.

Los signos clínicos pueden incluir:

- Periodo de incubación corto (1-10 días, siendo más frecuente entre 2-5 días)
- Diarrea líquida o pastosa (generalmente se resuelve en 7-10 días)
- Recaídas en un 10-25% de los casos
- Fiebre, náuseas, vómitos, dolor abdominal, de cabeza y muscular.
- Heces con sangre visible u oculta
Diagnóstico:

 Se usan heces (y raramente la sangre) para diagnosticarlo. Se puede hacer un diagnóstico

presuntivo detectando las características de movilidad en el microscopio de campo oscuro
o de contraste de fases.
 El diagnóstico definitivo se hace mediante aislamiento del organismo causante.
 Técnicas de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y serología (ELISA) para detección
rápida o confirmación del cultivo.
Tratamiento: A menudo se limita a terapia para reponer fluidos y electrolitos. Ocasionalmente se
dan antibióticos si los síntomas son graves o prolongados.

Salmonella (Salmonelosis no tifoidea)

Se trata de un cuadro clínico de diarrea que no suele ser especialmente
grave que es causado por S. enteriditis y S. thypimurium.

Dosis infectiva oscila entre 104-106 células. El periodo de incubación oscila

entre 6-48 horas.

Reservorio: aves de corral, animales domésticos y el propio ser humano si

está contagiado (se elimina por heces)

Fuente:
 - Consumo de carnes de aves y reses mal preparada de animales infectados
- Alimentos elaborados con huevos crudos o poco cocidos (mayonesa, salsas…)
- Vegetales de consumo crudo regados con aguas residuales
Se transmite de manera indirecta por consumo de animales contaminados o incluso de manera
directa de manera fecooral entre un infectado y una persona sana.

Suelen surgir brotes en verano con la peor conservación de los alimentos con las altas
temperaturas.

Salmonella (Salmonelosis tifoidea)

Producida por S. typhy y S. paratyphi A/B/C

El reservorio es el hombre y la transmisión se produce por alimentos o agua contaminada,

principalmente por falta de higiene.

No presentan un cuatro característico de diarrea (aunque puede aparecer en algunos casos) sino
que producen una infección sistémica vía torrente sanguíneo y se disemina por distintos órganos.

Tras varios días de la ingesta de los alimentos contaminados, los pacientes comienzan a sufrir
fiebre y cuadros inespecíficos de tos, dolor de garganta, cabeza y mareos.

El tratamiento es fundamentalmente a través de antibióticos y electrolitos (en el caso de diarrea)

La enfermedad sigue afectando a millones de personas a lo largo del mundo, en especial en países
en vías de desarrollo, donde las condiciones de higiene pueden ser menores, y por tanto se
recomienda la vacunación cuando se viaja a estos países, donde la enfermedad es endémica, y
seguir algunos consejos como no comer alimentos crudos y no beber agua si no es embotellada o
ha sido hervida previamente.

Escherichia coli (enterohemorrágica. Seriotipo EHEC)

Pese a que E.coli es un microrganismo típico de nuestra microbiota intestinal, algunas cepas han
adquirido determinados factores de virulencia que les permite desarrollar un cuadro clínico
severo. Estas cepas presentan un reservorio natural en el tracto digestivo de animales como
vacuno y ciervos.

Las fuentes de transmisión suelen ser productos derivados, aguas contaminadas o incluso
persona-persona vía fecooral.

Su dosis infectiva es realmente baja, unas 500 células son suficientes para el desarrollo de la
enfermedad. Tras un periodo de incubación de entre 3- días comienzan los síntomas, que incluyen:

- Espasmos intestinales
- Diarrea (frecuentemente con sangre)
- Fiebre
- Nauseas
Suele ser autolimitada, tras unos días los síntomas desaparecen, pero pueden surgir
complicaciones como fallo renal que cause el síndrome urémico hemolítico (SUH). Tiene una
letalidad muy baja, entre el 3-5%

El serotipo más común de estas cepas de E. coli enterohemorrágicas es el O157H7, que son
capaces de producir la verotoxina, una toxina similar a la toxina Shiga producida por Shigella
dysenteriae, causante de la disentería. Se trata de una exotoxina de tipo AB cuyo mecanismo de
acción final es bloqueo de la síntesis de proteínas, que es en primera instancia el responsable de la
diarrea sanguinolenta a nivel intestinal, pero que a nivel de los riñones puede causar la
insuficiencia renal. Es neutralizada por el mismo suero que se usa contra la toxina Shiga. Hay dos
tipos, conocidas como SLT1 y SLT2.

INTOXICACIONES

Staphylococcus aureus
Se trata de una bacteria capaz de crecer a altas
concentraciones de sal y azúcar. Es una bacteria
termorresistente, capaz de permanecer a 120ºC durante 10-40
minutos.

Es capaz de producir una enterotoxina causante de un cuadro

clínico característico: vómitos, diarrea, espasmos intestinales,
no fiebre. Se trata de una enfermedad autolimitada, que se
resuelve en 1-2 días sin ser necesarios los antibióticos.

El reservorio principal somos nosotros mismos, ya que esta bacteria forma parte de nuestro
microbiota normal, aunque también pueden encontrarse en otros animales.

Los alimentos más frecuentemente contaminados van a ser carne, quesos y productos de
pastelería. Suelen aparecer brotes en la población por consumo de estos alimentos por mala
manipulación o principalmente por su mala conservación (el 75% de los brotes se produce a causa
de insuficiente refrigeración de los alimentos).

Ya que se trata a una contaminación debida a las toxinas presentes ya en el alimento, el cuadro
clínico se desarrolla en un tiempo muy breve, en cuestión de horas (30 min- 3h).

Clostridium botulinum (botulismo)

Existen distintas cepas que producen distintas toxinas identificadas
de la A a la G, de las cuales solo la A, B y E producen cuadro clínico
en humanos.

El efecto es justo el contrario al que producía la toxina tetánica. La

toxina botulínica produce parálisis flácida, bloqueando la
transmisión del impulso nervioso activador de la contracción
muscular.
 Se trata de una toxina termolábil que puede inactivarse durante la ebullición (5 min) y cocción
(70-80ºC en 30-60 min) de los alimentos.

La bacteria aparece en ambientes naturales (suelo, productos agrícolas, sedimentos marinos,

tractos intestinales de animales, incluso el de peces…) pero en su mayoría de los casos suelen
producirse por el enlatado casero de productos agrícolas que no han sido tratados
adecuadamente (tratamiento térmico insuficiente, causante del 72% de los brotes). No se
transmite persona-persona

Al tratarse de una bacteria anaerobia, las condiciones de las conservas en lata les beneficia.
Durante su crecimiento y metabolismo durante el cual generan la toxina, generan gas, el cual
produce el abombamiento de las latas, y de ahí que no se recomiende consumir los productos
enlatados (sobre todo si son carnes) si el envase está deformado.

De nuevo, ya que se trata de una intoxicación, el cuadro clínico se desarrolla en pocas horas (12-36
h).

ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO DE LOS ALIMENTOS

Consta de dos aspectos: cuantificación e identificación. Para ambos aspectos, especialmente para
la identificación existe una normativa que marca qué pruebas se deben realizar, cómo se deben
llevar a cabo y cómo interpretar los resultados. Además, esta normativa y los valores que
determinan si un alimento es apto o no para su consumo varía dependiendo del alimento.

Métodos de cuantificación

1. Cultivo: se puede hacer en medio sólido y estimar las UFC/ml o UFC/gr y se usarán los
medios de cultivos indicados en la normativa. Generalmente se evalúa la concentración de
aerobios mesófilos, anaerobios, bacterias indicadoras de contaminación fecal
(enterobacterias, enterococos) o testigos de higiene y manipulación como estafilococos,
además de levaduras y mohos. También existen protocolos de cuantificación en medios
líquidos como la técnica del número más probable (NMP) o el uso de medios líquidos con
fluorógenos y cromógenos que permiten detectar la presencia de bacterias específicas
como Clostridium o E. coli por reacciones bioquímicas que se ponen de manifiesto al
iluminarlas con luz ultravioleta en el caso de los primeros o cambio de color en el caso de
los cromógenos.
2. Técnicas moleculares: También permiten la cuantificación de patógenos o sus productos
con métodos basados en la PCR, ELISA, sondas de a. nucleicos…
Métodos de identificación

Se basan en pruebas bioquímicas o técnicas moleculares como PCR o la secuenciación de ARNr.

Como se menciona anteriormente, todos estos análisis están altamente regulados por normativa,
tanto los procedimientos, los valores finales admitidos, los microorganismos a detectar…
Otro aspecto a tener en cuenta son los planes de muestreo. Obviamente no se pueden analizar
todos los alimentos que salen al mercado, por lo que se diseñan planes de muestreo que
garanticen, por lotes, que se cumplen los criterios de calidad. Es una aproximación estadística que
garantiza, dentro de un rango que todas las muestras de un lote cumplen esos criterios de calidad.

EJEMPLO

En este tipo de muestreo se analizan distintos parámetros:

Parámetro N: número de unidades o muestras a analizar. Esto generalmente viene determinado

por la legislación.

Número C: Número de unidades de muestras que pueden rechazarse dentro del muestreo, es
decir, un número mayor de muestras rechazadas superior a este número C obliga a rechazar el
parámetro completo.

Parámetro m: límite máximo de microorganismos aceptable en una muestra. Por encima de este
límite se rechaza y pasaría a contabilizarse para calcular el número anterior C.

Parámetro M: límite de valores microbiológicos que obligan a rechazar el lote si se encuentra en

tan solo una de las unidades del muestreo.

Definidos estos parámetros, se puede aplicar un plan de muestreo de dos clases, en el que sólo se
manejan los atributos “aceptable” y “rechazable”. Por ejemplo, a la hora de detectar patógenos, si
se detectan, aunque sea en una sola muestra, se rechaza el lote, o bien también pasan a valorarse
los componentes N y C.

En el caso de un plan de muestreo de tres clases, intervienen ya todos los parámetros

mencionados anteriormente, los atributos de aceptable o rechazo dependerán del número C, pero
condicionado a los recuentos microbiológicos encontrados en las muestras. En cualquier caso,
siempre que se encuentre una muestra con unos recuentos superiores a los valores especificados
por M se rechazaría el lote.

En la tabla 1 se observa un plan de muestreo de tres clases, en el cual se seleccionan un número N

de 5 muestras que se someten a los respectivos análisis microbiológicos.

La tabla 2 muestra los criterios microbiológicos de cada una de las variables anteriores para este
tipo de alimentos (en este caso se trata de un producto pasteurizado).
Existe un valor de N=5, de ahí que se hayan analizado 5 unidades, y un valor de C=2, aunque existe
algún caso de C=0 dependiendo de la variable, como por ejemplo en Salmonella. También
tenemos unos valores m y M que establecen los límites microbiológicos.

Si comprobamos los datos vemos que hay varios criterios que permitirían la aceptación del lote,
pero existen varios que no. Un solo criterio incumplido sería suficiente para rechazarlo, y en este
caso encontramos dos. Por un lado, la concentración de coliformes fecales supera los límites
marcados por m en más de las unidades permitidas por C y además los valores de Staphylococcus
aureus encontrados en una de las unidades supera los valores máximos permitidos por M
 TEMA 14
MICROBILOGÍA INDUSTRIAL Y BIOTECNOLIGÍA.
En este tema se tratará el uso de microrganismos para actividades de puedan ser beneficiosas
para el ser humano, como son bienes, servicios o productos de interés. En este tema se verá cómo
podemos hacer uso de los microorganismos de manera controlada para obtener un beneficio para
la sociedad.

Biotecnología microbiana
Aplicaciones de la biotecnología que implican el uso de microorganismos. La microbiología
industrial se ocupa de la producción de bienes y servicios usando microorganismos, por lo tanto, la
biotecnología microbiana es una de las áreas mas importantes, ya muchos de los procesos
industriales de producción de compuestos de interés hacen uso de los microorganismos.

Agrupación por colores de la biotecnología.

Los distintos campos de aplicación de la biotecnología se han clasificado en colores en función de
sus principales características o de empleo final del producto. Son cuatro:

 Biotecnología azul (Marina): Está relacionada con el mar y la acuicultura. En ella se buscan
sustancias marinas para obtener posibles nuevos fármacos, disminuir la mortalidad de los
peces, generar vacunas, etc.
 Biotecnología blanca (Industrial): Está relacionada con la industria. Busca la producción de
sustancias como productos químicos o nuevos combustibles. También trabajan en el
campo de diseño de organismos para obtener productos de interés.
 Biotecnología roja (Médica): Es la biotecnología de la salud y está relacionada con el
campo de la medicina. Investigación para prevenir o curar enfermedades, crear
anticuerpos monoclonales, desarrollo de terapias génicas y celulares…
 Biotecnología vede (Vegetal/Agroalimentaria): Es la biotecnología forestal y está
relacionada con actividades agrícolas y ganaderas. Investigación para crear plantas más
resistentes, con mayor crecimiento, animales resistentes a enfermedades, etc..
En todas ellas se hace uso de los microorganismos en alguna de las etapas.

El interés de la utilización de microorganismos a nivel industrial puede estar en, por ejemplo,
producir las propias células microbianas, como son las levaduras. También se pueden utilizar los
microorganismos para llevar a cabo un proceso de transformación o bioconversión, a partir de un
sustrato transformarlo en otro que no se podría obtener de otra manera, ya sea por resultar muy
caro o por llevar muchos pasos o tiempo, como son las fermentaciones para obtener bebidas
alcohólicas, yogures, quesos, pan, vinagre, etc. Otro uso sería el de emplearlos para generar en
altas cantidades productos de su metabolismo, como son enzimas, antibióticos, aditivos
alimentarios, o incluso, mediante la modificación genética, hacer que produzcan compuestos que
normalmente no producirían como es el caso de la insulina.
Historia de la microbiología industrial.
Aunque los avances en temas de microbiología industrial se han producido fundamentalmente en
el siglo XX, el uso de los microorganismos para distintos fines se lleva realizando mucho tiempo.

Periodo A.C.: Existen registro de que diversas civilizaciones producían su propia cerveza, pan o
queso gracias a las fermentaciones de los microorganismos, aunque desconocían de su existencia,
ya que se trataba de un uso empírico.

Período e descubrimiento (s. XVII-XIX):

 Siglo XVII-XVIII: Desarrollo del microscopio y descubrimiento de los microorganismos.

 Siglo XIX: Pasteur describe la fermentación.
 Se descubre que algunas enfermedades son causadas por microorganismos
 Primeros pasos para tratar aguas residuales con microorganismos.
Período de desarrollo industrial (Posterior a 1900):

 1900-1950: Desarrollo de procesos fermentativos industriales; fermentaciones alcohólicas,

producción de ácidos acético, láctico, cítrico, acetona, butanol y glicerol.
 Procesos aeróbicos y anaeróbicos.
 Durante la Segunda Guerra Mundial producción de penicilina.
 Durante la post-guerra se presentó un retroceso debido al crecimiento de la industria
petroquímica.
Años 60´s: Avance importante debido a la investigación para la producción de masa microbiana
como fuete de proteína, por parte de compañías multinacionales.

1970-Actualidad: inicia con el desarrollo de las manipulaciones genéticas de microorganismos in

vitro, dando origen a la ingeniería genética. Insulina humana (1982). Era de la nueva
Biotecnología.

Propiedades de un microorganismo de interés industrial

 Ser capaz de producir una sustancia de interés de forma rentable.
 Tiene que estar disponible en cultivo puro, libre de otros organismos.
 Ser capaz de crecer y sintetizar el producto en un cultivo a gran escala
 Es preferible que produzca esporas o alguna forma de célula reproductora, que pueda ser
fácilmente inoculada en los grandes tanques de cultivo.
 Debe crecer rápidamente y sintetizar el producto deseado en un período relativamente
corto de tiempo.
 Poder crecer en un medio de cultivo líquido barato que se comercialice a granel.
 Que sea posible separarlos del medio de cultivo.
 No debe ser patógeno, especialmente para seres humanos, animales o plantas.
 Debe ser susceptible de manipulación genética, porque en Microbiología Industrial a
menudo se incrementa el rendimiento mediante mutación y selección.
 Tiene que ser fácilmente conservable en períodos largos de tiempo.
En la imagen de la derecha están
representados, de manera
esquemática, los pasos de
producción de un compuesto a
través de un proceso
biotecnológico, partiendo de una
materia prima hasta su purificación
y posterior formulación para la
salida al mercado. Se desarrollarán
los pasos más a adelante, pero, sin
entrar en mucho detalle, cada una
de estas etapas debe de
optimizarse desde un punto de
vista de producción y económico ya que todos los pasos están interrelacionados. La materia prima
ha de ser de alta calidad y pureza, pero a la vez fácil de obtener, manipular y lo más barata posible.
Esta materia prima e ingredientes serán los empleados para crear ese caldo de cultivo donde
crecerá el microorganismo seleccionado, que previamente ha de ser esterilizado para garantizar
que solo el microorganismo de interés crece en nuestro reactor. Si, por ejemplo, estamos
cultivando un hongo, para producir antibióticos, y este se contamina con una bacteria, tendríamos
entonces que desechar toda la producción, aplicar procesos de limpieza y esterilización a todo el
equipamiento, lo que puede implicar varios días de parón con las consecuentes pérdidas
económicas.

Por otro lado, la búsqueda. Aislamiento, selección y mejora genética de la cepas de

microorganismos lleva muchos años de investigación y muchos gastos económicos asociados,
sobre todo en la industria farmacéutica, aunque quizás no tanto en otros campos como la
alimentación.

Una vez se tiene ese microorganismo y ese medio de cultivo optimizado la puesta en contacto se
hace en un fermentador o biorreactor, donde también hay un trabajo detrás de optimización y
escalado, desde el matraz en el laboratorio a los tanques de cientos de litros que se utilizan, el
control de la condiciones optimas de incubación, la temperatura, la aireación, niveles de
nutrientes…todo ello requiere d una supervisión y control de todas las variables para que la
producción sea óptima y la calidad esté mantenida entre lotes. Además, una vez finalizada la
producción, hay que separar el producto de interés de toda esa matriz biológica de producción.

En productos como el yogurt, por ejemplo, el derivado de la producción es, en esencia, el propio
producto generado pero, en la producción de antibióticos, una molécula que se excreta al medio
de cultivo tiene que ser separada de las células y restos celulares por filtración o centrifugación,
concentrarlo para no estar trabajando con grandes volúmenes en las líneas de purificación,
separarlo de otras moléculas contaminantes propias del caldo de cultivo o del metabolismo de las
células por cromatografía u otros procesos, además de pasos posteriores de formulación,
envasado, etc. Todos estos pasos se pueden someter a mejora continua y que deben estar muy
regulados para optimizar la producción.
Formación de los metabolitos a lo largo del crecimiento microbiano .
Las diferencias entre el metabolismo primario y secundario van a condicionar la forma en la que
utilizamos los microorganismos.

 Metabolitos primarios: son aquellos que se generan durante la trofofase y van destinados
al crecimiento y multiplicación de l microorganismo, como son los aminoácidos,
nucleótidos, productos finales del metabolismo fermentativo y las enzimas necesarias en
esta etapa.
 Metabolitos secundarios: son aquellos que se generan durante la idiofase, tras el
crecimiento activo, y corresponde a la fase estacionaria del crecimiento, en la que se
activan las rutas metabólicas no relacionadas con la síntesis de material celular. Es la fase
de producción de antibióticos o micotoxinas.
Si el producto de interés se corresponde con estos últimos, nos interesará obtener una gran
cantidad de masas microbiana los más rápido posible y optimizar esta ultima fase. Si, por el
contrario, nuestro producto de interés se expresa o forma durante la fase de crecimiento, o nos
interesa la transformación de la materia prima y esta ocurre por la actividad metabólica de los
microrganismos durante la fase de crecimiento nos interesará prolongar y optimizar esta primera
fase. En ambos casos estas pueden controlarse o dependen de varios factores, como son la
cantidad de nutriente, la aireación, la temperatura, el pH…

Fermentación
El término fermentación, dependiendo del campo de trabajo, puede significar varias cosas,
concretamente para un microbiólogo puede estar referido a:

1. Cualquier proceso que implique el cultivo masivo de microorganismos, sean aerobios o

anaerobios.
2. Descomposición de los alimentos
3. Producción de bebidas alcohólicas.
4. La utilización de un sustrato como donados y aceptor de electrones.
5. Crecimiento dependiente de la fosforilación a nivel de sustrato.
Aunque desde el punto de vista formal y bioquímico, la definición mas correcta sería que la
fermentación es un tipo de catabolismos específico referido a la degradación anaerobia de
azúcares para dar productos de oxidación intermedia.

En Microbiología industrial el término fermentación hace referencia a cualquier proceso

microbiano a gran escala, sea o no una fermentación en el sentido bioquímico.

Se habla de fermentador para referirse al recipiente donde se llevan a cabo las fermentaciones
microbianas, también conocido como biorreactor. Mientras que fermentación debe entenderse en
este campo de trabajo como el conjunto de etapas bioquímicas que originan un producto, más
relacionado con el termino biotransformación.
Etapas que componen la fermentación.
1. Conservación del inoculo o microorganismo de interés industrial.
El primero sería conservar ese inoculo o microorganismo que lleva a cabo la fermentación
deseada. Debemos asegurarnos de que siempre va a estar disponible y que va a mantener
las mismas características y propiedades originales que permiten el desarrollo de ese
proceso.
Una manera de conservarlo es similar al mantenimiento de cualquier cepa de laboratorio.
Se pueden realizar subcultivos o resiembras periódicas, aunque esto no es muy eficiente
en algunos casos, porque requiere mucho trabajo, material, se corre riesgo de
contaminaciones o de mutaciones espontaneas, así que esta técnica se reserva cuando se
v a trabajas con un microorganismo durante un tiempo concreto y continuo.
Para periodos de almacenamiento más largos se recurre a un almacenamiento por
congelación, con la adición de crioprotectores si fueran necesarios; la liofilización, es
decir, la conservación en forma deshidratada o la conservación de esporas si el
microorganismo las genera.
2. Desarrollo de los medios de cultivo.
En esta se incluyen el desarrollo y la optimización de los medios de cultivo desde el punto de vista
de los nutrientes necesarios para que el microorganismo lleve a cabo la fermentación deseada en
las condiciones óptimas, pero también se hace esto desde el punto de vista económico. En el
siguiente cuadro se pueden ver algunos ejemplos d materias primas que se emplean para el
aporte de los distintos elementos que componen los medios de cultivo, además de agentes
antiespumantes, ya que los procesos a gran escala a menudo conllevan la formación y
acumulación de espuma que dificulta la aireación del cultivo y puede convertirse en un problema.
 3. Crecimiento del microorganismo en un marco industrial: cultivo de
prefermentación y escalado
Como venido comentando, las variables como pH, temperatura, aireación, etc. No deben ser
limitadores para la fermentación, sino que deben optimizarse y mantenerse bajo control en todo
el proceso. Esto es especialmente importante durante el escalado, en la etapa desde pequeños
contenedores como pueden ser matraces, hasta el fermentador industrial de varios miles de litros.

Una de las etapas críticas es mantener la proporción de células en el cultivo, ya que su exceso o
defecto puede alterar considerablemente la producción final.

4. Fermentación de producción: fermentadores industriales.

Existen distintos tipos de fermentadores industriales. Una diferencia fundamental son as
condiciones de aireación del cultivo, aquellos en los que se lleva a cabo una fermentación en
condiciones aeróbicas requerirán un equipo más complejo para asegurar la aireación de todo el
cultivo. Por el contrario, los anaeróbicos serán mas sencillos, pero necesitarán de un sistema para
disipar el calor generado durante la fermentación.

Los fermentadores son de distinto tamaño según el producto que queremos obtener o los
organismos con los que se va a trabajar. Por ejemplo, para la producción de enzimas de restricción
u antibióticos se utilizan relativamente pequeños, de hasta 150.000 L, aunque no todo ese líquido
es el producto final, ya que hay que purificar una molécula concreta. En el caso del vino o la
cerveza los fermentadores llegan a ser d 500.000L.

Existen distintos tipos de fermentadores según sus características diferenciadoras.

 Fermentación discontinua (Bach): Consiste en un

taque cerrado en el que desde el inicio se añaden
todos los nutrientes y componentes del necesarios
para el crecimiento del microorganismo, además del
propio inoculo. Se ponen las condiciones óptimas
para que ocurra la fermentación y, tras el tiempo
estipulado, esta se interrumpe, según queramos
metabolitos primarios o secundarios. Su aplicación
es sencilla y no requiere de mucha infraestructura.
Sin embargo, el rendimiento está muy desaprovechado por la interrupción condicionada al
agotamiento de los nutrientes.

 Fermentación alimentada (Fed-bach): Es una

mejora frente al diseño anterior, en el que ahora
hay un aporte discontinuo de algunos
componentes al fermentador durante el proceso.

 Fermentación continua: En este tipo de

 fermentación el sistema deja de ser cerrado y hay un aporte continuo de nutrientes al
fermentador, para compensar la entrada, se retira el mismo volumen del fermentador. Se
aprovecha mucho mas el material de producción y las instalaciones, pero requiere un
mayor control de su funcionamiento y al funcionar durante periodos más largos se corre
mayor riesgo de contaminación.

 Reactores de enzimas o células

inmovilizadas: No es un cultivo al uso, sino
que en ellas existe una matriz donde
quedan fijadas las células o enzimas, y se
hace pasar medio fresco a través del
biorreactor en el que se encuentran. Para
esa inmovilización, sobre todo de enzimas,
existen distintas estrategias; como la
adsorción, en la que el enzima se une por fuerzas de Van der Waals, interacciones
hidrofóbicas o puentes de hidrógeno; la unión covalente del enzima a la resina o el
atrapamiento, en la que el enzima queda atrapado en una matriz formada por una red que
impide su arrastre. Este tipo de fermentaciones tienen la ventaja de que no hay que
controlar la biomasa del reactor, también evita los riesgos de mutaciones, que pudieran
suceder de las continuas divisiones de las células, y es mejor a la hora de purificar el
producto, ya que no hay que separar las células del cultivo. El principal inconveniente es
que no todos los microorganismos pueden inmovilizarse de manera efectiva y los
volúmenes de trabajo son considerablemente menores.

5. Recuperación del producto.

La etapa final es la de recuperación del producto. Se trata de una etapa más o menos compleja
dependiendo de la naturaleza del complejo que queremos recuperar, que siempre requiere de
varios pasos y cuyo objetivo final es aislar nuestro compuesto y obtenerlo de la manera más pura
posible.

Generalmente se inicia con un paso de separación de sólidos para eliminar las células y restos
celulares y quedarnos con una solución acuosa que contenga nuestro compuesto. Esto se puede
con centrifugación o filtración principalmente. El siguiente paso es reducir el volumen, los miles de
litros del fermentador tenemos que reducirlos para poder trabajar más cómodamente,
normalmente se hace por evaporación del agua. A continuación, hay una etapa de concentración o
extracción que puede conseguirse por precipitación, mezcla con disolventes, etc. Una mayor
purificación se puede conseguir mediante cromatografía, centrifugación, electroforesis…

En la imagen inferior se pueden ver los distintos tipos de técnicas que se pueden emplear además
de las que se han mencionado.
Búsqueda de microorganismos con interés industrial: Prospección,
selección y mejora.
El primer paso, de búsqueda o prospección, debe diseñarse con características como que esta sea
barata, rápida, sensible, adaptable a un número elevado de muestras, predictiva y específica para
ls actividades deseadas. Hay que tener claro desde el principio qué se va a buscar, dónde y
diseñar una serie de pruebas que permitan identificar la actividad deseada de una manera, rápida,
sencilla y con el menor coste posible, ya que la búsqueda de nuevos microorganismos va a
requerir realizar muchos muestreos y testar muchos organismos.En la imagen se ven algunos
ejemplos de ello.

Ahora se explica un método para la detección de organismos productores de antibióticos

mediante la técnica de los tacos de agar.
Partiendo de agar donde han crecido muchos microrganismos distintos obtenidos de un ambiente
natural concreto; un suelo particular, lagos, el mar… en ocasiones se puede apreciar como una
colonia concreta aparece separada del resto, lo que podría ser indicativo de que produce algún
compuesto con actividad antimicrobiana, que inhibe el crecimiento de los microorganismos
circundantes. Empleando un sacabocados podemos aislar esa colonia y el trozo de agar que está
inmediatamente debajo. Este taco se superpone sobre el agar de una placa donde, previamente,
hemos hecho una siembra del microrganismo contra el que queremos encontrar compuestos que
inhiban su crecimiento, la idea es que, si la colonia que hemos aislado está produciendo
antibióticos, estos difundirán desde el taco de agar de manera uniforme sobre la superficie de la
nueva placa con el organismo test sembrado. Tras 24 horas de incubación, observaremos un
césped de crecimiento microbiano por toda la placa, excepto alrededor de aquel aco de agar que
porta una colonia de un microorganismo productor de antibiótico.

La búsqueda de nuevos antibióticos es un tema sobre el que se está poniendo mucho interés
actualmente, y es que durante muchos años se han estado empleando los mismos antibióticos o
derivados de estos, y ya han dejado de ser efectivos debido a la aparición de resistencias por parte
de los microorganismos. Estas resistencias surgen cuando los microorganismos que causan
infecciones sobreviven a la exposición a antibióticos, ya sea por emplear dosis inferiores a la
recomendada, interrumpir el tratamiento, la aparición espontanea de resistencia natural por
mutaciones o por mecanismos naturales de transferencia de información genética entre
microorganismos. Esto constituye un problema de salud global ya que, según la OMS y otros
autores, se estima que para 2050, si no encontramos soluciones, habrá más de 10.000.000 de
muertes al año por esta causa (entorno al 44% de las causas de muerte a nivel mundial). Por ello
ahora se está fomentando el desarrollo de nuevos sistemas de búsqueda y prospección de
microorganismos con capacidad para producir compuestos antimicrobianos. La diversidad
microbiana es muy grande, pero se sigue teniendo dificultad para trabajar con la mayoría de los
microrganismos ya que desconocemos los requerimientos para su mantenimiento en el
laboratorio, y si no se consiguen aislar y trabajar con ellos en el laboratorio no se puede proceder
a su estudio y pasa a temas de producción a gran escala.

Una vez se ha aislado un microorganismo con una actividad de interés el siguiente paso es el de
intentar mejorar esa cepa, fundamentalmente en temas de producción, aunque la mejora puede ir
encaminada en muchos aspectos.

Algunas de las técnicas más empleadas son la mutagénesis al azar, la fusión de protoplastos o
todos los procedimientos relacionados con la técnica del DNA recombinante.

 Mutagénesis al azar: Se consigue sometiendo al microorganismo al tratamiento con un

agente mutágeno, ya sea físico, como la luz UV, o químico como agentes alquilantes o
agentes intercalantes en el DNA, como el naranja de acridina. Es decir, agentes que dañan
o afectan al DNA con la intención de generar cambios o mutaciones en la secuencia de
nucleótidos y que esto se traduzca en un cambio de interés en la cepa microbiana. Se
pueden obtener una gran variedad de mutantes, a veces incluso mutaciones simultaneas,
y si esta o alguna de ellas resulta de interés o suponen una mejora a la hora de trabajar
con el microorganismo o en temas de producción se seguirá trabajando con esta nueva
 variante mejorada. Sin embargo, esta técnica es complicada, porque, al ser al azar, no
podemos dirigir nuestros esfuerzos en modificar una propiedad concreta, o puede que la
mutación deseada quede enmascarada por otra mutación simultanea que afecte a la
viabilidad del microorganismo.
 Fusión de protoplastos: Es una técnica muy utilizada en hongos, que consiste en la
obtención de protoplastos, es decir, células sin pared celular. Esto se consigue mediante la
degradación de la pared con enzimas líticos y en un medio en presencia de un
estabilizador osmótico, ya que si no la célula, al carecer de pared, tendería a una lisis
osmótica. A continuación, se procedería a la fusión de estos protoplastos, creando
híbridos, que podrían seleccionarse posterior mente creando siembras en medios
selectivos. La ventaja de esta técnica es que permite fusionar protoplastos de diferentes
especies microbianas, consiguiendo así combinar los caracteres deseados pero presentes,
a priori, en microorganismos distintos.
 Tecnología del DNA recombinante: Son todas aquellas estrategias que impliquen la
manipulación de los ácidos nucleicos de una manera dirigida. Estas técnicas de
manipulación permiten modificar de manera precisa el DNA y, por tanto, conseguir los
cambios deseados, pudiendo aprovecharse junto con mecanismos naturales como la
transformación, la conjugación o transducción. Además, estas técnicas han abierto un gran
abanico de posibilidades, no solo en la mejora de las cepas, sino en la modificación de los
microorganismos para que hagan lo que nosotros deseamos, por ejemplo, expresar
compuestos no codificados en su genoma natural, mediante la expresión de proteínas
heterólogas o recombinantes. Un claro ejemplo de la producción a nivel industrial es la
producción de insulina a nivel mundial empleando Eschericha coli o, por ejemplo, abriendo
nuevos campos como el uso de los microorganismos para expresar antígenos víricos con
los que, una vez purificados, prepa rar vacunas como la de Hepatitis C.
TEMA 15: PROCESOS INDUSTRIALES RELACIONADOS CON LOS ALIMENTOS

-Producción microbiológica de alimentos y bebidas.

-Microbiología de los alimentos fermentados.

-Fermentación láctica. Fermentación alcohólica.

En este tema nos vamos a centrar en ver el papel o la aplicación

de los microorganismos en la industria alimenticia, y en
particular, aquellos implicados en la fermentación láctica y
alcohólica.

El esquema general de producción de alimentos que siguen esta

dinámica, sigue estos pasos: a partir de unas materias primas, se
les añade un cultivo STARTER o inóculo que contiene los
microorganismos encargados de llevar el proceso de
fermentación. Este proceso fermentativo va a ser de tipo láctico
o alcohólico, y los microorganismos implicados van a ser
principalmente bacterias lácticas, levaduras y hongos
filamentosos. Tras este proceso de fermentación se va a llevar a
cabo una purificación con el fin de obtener el producto final que
será comercializado.

1. FERMENTACIÓN LÁCTICA

Existen más de 3.400 productos derivados de la fermentación láctica, siendo los más conocidos el
queso, el requesón, kefir o yogurt.

Gracias a esta técnica conseguimos algunos beneficios, como mejorar la conservación de los
productos en cuestión que son resultado de esta fermentación, consigue reducir el contenido de
agua y produce una bajada de pH que limita el grupo de microorganismos que puedan crecer y
transformar de nuevo el producto. En algunos casos también se acumulan bacteriocinas, que
funcionan como antimicrobianos.

Por otro lado, la fermentación láctica va acompañada de cambios organolépticos en el producto,

como el sabor, el olor… que en algunos casos hace que el producto sea más atractivo para el
consumidor consumidor.

¿Cómo se obtiene?
El proceso se inicia con la materia prima, que va a ser la leche, que no tiene por qué ser estéril.
Aún así lo habitual es utilizar leche pasteurizada, que ya ha sufrido un tratamiento de eliminación
de patógenos y reducción de la posible carga microbiana.

A esa leche se le añadirá el inóculo microbiano o cultivo STARTER, que llevará a cabo la
fermentación de la lactosa, que es el principal carbohidrato de la leche, transformándola en ácido
láctico. Como resultado, se reduce el pH y se acumula otra serie de compuestos como el diacetilo
o el acetaldehído que también modifican el olor y el aspecto del producto final.

Tipos de fermentaciones lácticas

Se pueden distinguir dos tipos de fermentaciones lácticas atendiendo a su bioquímica:

Fermentación homoláctica: Se denomina así al tipo de fermentación cuyo único producto final es
el ácido láctico. Su ecuación global es:

Glucosa + 2ADP +2 Pi → 2 ácidos lácticos + 2 ATP

Es un proceso de fermentación presente en muchas bacterias del grupo láctico: Streptococcus y

varias especies de Lactobacillus.

Fermentación heteroláctica: denominada así porque su producto final no es exclusivamente ácido

láctico. Su ecuación global es:

Glucosa + ADP + Pi → Ac. Láctico + etanol + CO2 + ATP

El proceso tiene un rendimiento menor al de la fermentación homoláctica, puesto que solo se

produce un mol de ATP por mol de glucosa fermentada.

Este proceso lo llevan a cabo bacterias del grupo láctico pertenecientes a los géneros Leuconostoc
y Lactobacillus.

Ejemplos de cultivos STARTER utilizados en procesos de fermentación láctica

Todas ellas son ejemplos de bacterias ácido-lácticas homofermentativas.

Bacterias mesófilas= Fermentan en un rango de temperatura de entre 25-30ºC

  Lactococcus lactis subesp. Lactis
 Lactococcus lactis subesp. Cremoris.
Bacterias termófilas= Fermentan en un rango de temperatura de entre 37 y 42ºC

 Streptococcus thermophillus
 Lactobacillus delbrueckii subesp. Bulgaris
 Lactobacillus helveticus.
Elaboración de productos mediante fermentación láctica

Yogurt

La materia prima del yogur va a ser leche pasteurizada, a la que una vez enfriada a 43ºC se le va a
añadir un cultivo iniciador o STARTER con bacterias del género Streptococcus thermophilus y
Lactobacillus delbrieckii ssp bulgaris en una relación 1:1.

Streptococcus es capaz de crecer más rápido en un principio, promoviendo condiciones anóxicas

que inician la reducción del pH. Seguidamente, Lactobacillus es el que progresa reduciendo más el
pH y aportando distintos productos finales de su metabolismo, como el diacetilo o el acetaldehído,
que le aportan el sabor y olor característicos al yogurt.

Posteriormente se pueden añadir los denominados “probióticos”, que son microorganismos que
no intervienen en el proceso de fermentación, pero que se añaden porque pueden contribuir a
mantener o mejorar la microbiota intestinal del cuerpo, y pueden ser Lactobacillus acidophilus o
Bidifobacterium bifidum.
Queso

Existen más de 2000 variedades distintas de quesos que se agrupan en 20 tipos generales.
Basándose en la textura o dureza, tenemos quesos blandos tipo brie, quesos semiblandos como el
queso azul, duros como el queso suizo, o muy duros como el parmesano.

Para su fabricación de parte de la misma materia prima que en el caso del yogurt, es decir, de
leche que se someterá a una fermentación láctica. En este caso el tratamiento previo de
pasteurización de la leche no siempre es completo, pudiendo variar las condiciones, lo que
permite que puedan estar una mayor variedad de microorganismos desde un principio. La
presencia de dichos microorganismos debe seguir una gran caracterización bajo un control
normativo tanto desde el punto de vista microbiológico como químico.

Una vez rebajada la temperatura de la leche (30-35ºC) se añade el cultivo STARTER, como
Lactococcus lactis, y opcionalmente, algunos aditivos como colorantes.

Se deja fermentar durante un tiempo limitado que oscila entre 10 y 75 minutos, lo que produce
una bajada del pH debido al metabolismo microbiano.

A continuación le sigue la fase de la coagulación de la caseína, la principal proteína de la leche.

Para realizar esta coagulación se siguen distintas estrategias: por ejemplo, una de ellas sería dejar
que la caseína precipite por la bajada del pH, provocado por acumulación de ese ácido láctico
producto del metabolismo microbiano; otra alternativa sería la coagulación enzimática añadiendo
rennina, también llamada quimosina, que es una enzima producida a nivel industrial por
microorganismos, o cuajo animal que también presenta esta enzima; otra alternativa sería una
mixta, donde tanto el pH como la proporción de la quimosina que se añade darán distintas
variaciones en la textura de la cuajada, que es el resultado de la coagulación.

Esta cuajada se corta, se somete a agitación más o menos intensa dependiendo del tipo de queso,
y se someterá a deshidratación para eliminar el exceso de agua.

A continuación, se separa esa masa semisólida del suero líquido o lactosuelo. En este paso se
puede proceder a la adición de otros inóculos microbianos, como algunos mohos como Penicillium
(en el caso de quesos azules o Roquefort)

Finalmente le siguen etapas de prensado y maduración.

Una de las etapas clave es la coagulación, que en la mayoría de los casos se lleva a cabo debido a
la acción de la quimosina. Se trata de una aspartil-proteasa, que a nivel molecular, en el estómago
de mamíferos rumiantes, se expresa como preproenzima, que por corte proteolítico pasa a
proquimosina y que es finalmente activada por la bajada del pH.

Esta enzima actúa principalmente sobre la caseína de la leche. La caseína en realidad es una
mezcla heterogénea de proteínas o variantes de ellas, pudiendo encontrar distintas proporciones
de β-caseínas, α-caseína y k-caseína (o kappa-caseína). Estas variantes se asocian en las
denominadas submicelas, que son agrupaciones de α y β caseínas con fosfato cálcico, que se
rodean de una “capa protectora” de k-caseína. A su vez, estas submicelas se asocian para formar
micelas de tamaño mayor que en general exponen esa superficie formada por la capa caseína.
Esta k-caseína expone hacia el exterior sus residuos hidrofílicos, mayormente cargados
negativamente, lo que hace que las micelas de la leche tiendan a repelerse entre ellas.

La función de la quimosina es actuar como coagulante de esta proteína, actuando concretamente

sobre la k-caseína, rompiendo el enlace entre los residuos de fenil-alanina y metionina de esta
proteína. Al hacerlo, se reducen las cargas negativas presentes en la superficie de las micelas, lo
que permite que se vayan formando esos coágulos que culminarán con la formación de la cuajada.
La quimosina se produce de manera natural en el estómago de los rumiantes y a día de hoy aún se
sigue utilizando ese cuajo para hacer algunos tipos de quesos. Sin embargo, por las elevadas
cantidades que se emplean a nivel industrial se ha optado por su producción biotecnológica.

El gen que codifica la quimosina animal se ha clonado e introducido en la levadura Kluyveromyces

lactis, para su expresión heteróloga y para conseguir rentabilizar su producción, de modo que la
mayoría de industrias dedicadas a la producción de quesos emplean esta quimosina producida por
microorganismos.
La variedad de quesos es muy grande debido a las variaciones que se pueden realizar en las
distintas etapas de producción del queso. Quedaría por comentar la microflora secundaria que se
puede añadir en las etapas finales de producción. Diferentes microorganismos llevarán a cabo
diferentes transformaciones y con ello distintos resultados en el producto final. Se pueden
emplear tanto bacterias como hongos:
2. FERMENTACIÓN ALCOHÓLICA
Las levaduras del tipo Saccharomyces, que tienen como modelo a Saccharomyces cerevisiae son
levaduras que se dividen por gemación, ya sea en su forma haploide o diploide. En el tema que nos
interesa llevan a cabo una fermentación alcohólica clásica, una reacción que no requiere presencia
de oxígeno y por la cual los azúcares en forma de glucosa son transformados en piruvato vía
glucolisis. Ese piruvato es descarboxilado y transformado en acetaldehído, que por acción de una
alcohol-deshidrogenasa, se transforma finalmente en etanol.
Etapas de producción de la cerveza

La materia prima de partida es el cereal, en particular, la cebada. Sin embargo, esta no presenta
azúcares fermentables porque la levadura no es capaz de degradar el almidón por sí misma, por lo
que se precisa una fase previa de sacarificación para transformar todo ese almidón que contiene la
semilla en azúcares fermentables para la levadura.

Antes de proceder con la sacarificación, se inicia una etapa previa de malteado. Es una etapa en la
que se controla la germinacion del grano de cebada, se humedece y se deja en condiciones
óptimas para que se inicie la germinación. En estas condiciones se produce de manera natural la
producción de enzimas amilasas, glucanasas y proteasas que hidrolizan los compuestos de reserva
que tiene el grano. Se obtiene así la cebada malteada o malta.

El siguiente paso es el macerado, cuyo objetivo es la extracción de los azúcares de esa malta. La
cebada malteada se tritura y mezcla con agua a temperatura controlada para fomentar la hidrólisis
del almidón por las amilasas activadas durante la etapa anterior de germinación. El grado de
tueste determina que unas cervezas sean más o menos oscuras. Es en esta etapa donde se
produce esa sacarificación de la que hemos hablado, y que es necesaria para que se acumulen
esos azúcares presentes inicialmente en el grano del cereal.

El siguiente paso es la cocción. El procesao de macerado y sacarificación se detiene en el punto

deseado. A continuación se separa los restos de grano de extracto acuoso que contienen los
azúcares, y este extrato se cuece añadiéndole el lúpulo. El lúpulo que se emplea es la flor de la
planta Humulus lupulus, que aporta diversos compuestos de tipo terpenoide, varios ácidos de tipo
alfa como las humulonas o de tipo beta como lupulonas. Estos productos le aportan ese sabor
amargo a la cerveza y además aportan otro tipo de compuestos que tienen actividad
antimicrobiana.

El proceso de cocción produce:

 Isomerización de los α ácidos a iso-α-ácidos que son más amargos.

 Esterilización y concentración del caldo al eliminar vapor de agua.
 Inactivación de enzimas.
 Desnaturalización y precipitación de proteínas no deseadas.
 Eliminación de compuestos volátiles no deseados que afectarían al sabor final.
 Desarrollo de compuestos que dan sabor y color.
El siguiente paso es el de la fermentación propiamente dicha. En este paso se pone en contacto
ese extracto cocido que contiene los azúcares y otros componentes provenientes del lúpulo con la
cepa de lavadura concreta. Distintos tipos de cervezas y marcas usan unas cepas de levadura
concretas para darle esas características particulares del sabor, además de tener muy controlados
los pasos anteriores.

Aunque hoy en día existen muchos tipos de cervezas, a nivel de fermentación se distinguen dos
tipos: las de tipo LAGER y las ALES.
Las de tipo LAGER usan levaduras de fondo, porque tienden a sedimentar en el tanque, por lo que
la fermentación suele ocurrir ahí. Son fermentaciones lentas que pueden durar semanas o meses
que ocurren a una temperatura de entre 5 a 10ºC. Generan cervezas ligeras de sabor suave.

Las de tipo ALES y STOUT se llaman de alta fermentación, manteniéndose las levaduras en las
superficies de los tanques. Ocurren a temperaturas superiores a las anteriores, entre 14-23ºC y se
mantiene durante menos tiempo, unos 2-7 días. Se generan unas cervezas de sabor fuerte e
intenso.

Los fermentadores utilizados en cualquiera de los dos casos son de varios miles de litros, que
deben contar con mecanismos para regular la temperatura, la agitación y eliminación de gases
generados durante el proceso como el CO2.

El último paso es el de maduración y embotellado, que incluye pasos como el de separación de la

levadura del producto líquido por sedimentación o filtración. También pasos de pasteurización
para el control microbiano, y el envasado, en donde en muchos casos el CO2 retirado durante la
fermentación se aprovecha para añadirlo al producto embotellado.

Etapas de producción del vino

La producción de vino al igual que la de la cerveza tiene un gran mercado, que mueve grandes
cantidades de dinero y tiene una ciencia detrás, la enología. España se encuentra entre los
primeros países en producción y exportación de vino, con más de cuatro toneladas por año.

La producción de vino incluye algunas variaciones con respecto a la de la cerveza, ya que destaca
por ejemplo la posibilidad de realizar una segunda fermentación de tipo maloláctica, que es
opcional.

Las etapas serían:

1. Obtención del mosto de la uva

2. Tratamiento del mosto con sulfitos.

3. Fermentación

4. Fermentación maloláctica.

5. Trasiego, clarificación y envejecimiento.

6. Embotellado
El proceso también va a depender del tipo de vinos que queramos producir: vino tinto o vino
blanco.
*El SO2 posee una doble función: por un lado actúa como elemento de conservación protegiendo
de la oxidación de los compuestos presentes en el mosto, y al mismo tiempo poseen actividad
antimicrobiana, impidiendo la proliferación de bacterias lácticas pero permitiendo la de las
levaduras que serán las que lleven a cabo los procesos fermentativos.

*En el caso de los vinos tintos se deja en contacto el mosto con el hollejo, que es el que le da el
color rojizo al vino, puesto que el zumo de todas las uvas es blanco, y el color lo aportan los
taninos y antocianinas presentes en las pieles, semillas y raspón.

*En el caso del vino blanco, a diferencia del tinto, no se produce una maceración y fermentación
previa con todos los componentes de la uva, sino que la primera fermentación ocurre ya solo con
el mosto.

Propiedades y diferencias en la producción de distintos vinos en algunas etapas

ETAPA 1: Obtención del mosto de las uvas.

 Variedad de uva
 Condiciones climáticas de la estación de crecimiento.
 Tiempo de recolección.
 Tipo de suelo, fertilizante, agentes añadidos (pesticidas…)
  Forma de prensado, vino blanco o tinto.
 Corrección del mosto.

ETAPA 3: Fermentación

En principio, si se deja el mosto tal cual se tiende a una fermentación espontánea, tal y como se
daba en la antigüedad. Hoy, industrialmente se opta por la fermentación dirigida, en la cual se
hace un tratamiento con sulfitos. Los sulfitos tienen distintas funciones y su uso está regulado por
normativas: no puede superar los 80 mg/l. Tiene funciones antioxidantes, desinfectantes y
favorece la síntesis del glicerol, que tendrá efectos sobre las propiedades del producto final.

La fermentación propiamente dicha es una fermentación alcohólica, donde a partir de la glucosas,

por glucolisis o vía Embden-Meyerhoff se obtienen dos moléculas de piruvato, que se
descarboxilan a acetaldehído y se reducen hasta etanol. Por cada molécula de glucosa obtenemos
2 moléculas netas de etanol.

Durante los primeros minutos de la fermentación alcohólica, la producción de glicerol representa

una ruta alternativa para regenerar NAD+ que será utilizado en el paso del gliceraldehído 3-P a
1,3-bifosfoglicerato para proseguir la ruta hasta la obtención de etanol.

El glicerol es, tras el etanol, el segundo componente mayoritario obtenido en la fermentación

alcohólica. El vino contiene entre 5-8g/l de glicerol, que aporta sabor ligeramente dulce, y debido
a su naturaleza viscosa, contribuye a la suavidad, consistencia y cuerpo de los vinos.

Una estrategia para sobre producir glicerol por las levaduras, es el tratamiento del mosto con
dosis elevadas de sulfitos. El sulfito actúa como reductor y bloquea a la alcohol deshidrogenasa,
favoreciendo la generación de NADH que pasa a NAD+ por acción de la glicerolfosfato
deshidrogenasa, formando el glicerol. También el estrés osmótico que supone el alto contenido de
azúcar para la levadura desencadena la producción de glicerol.
ETAPA 4: Fermentación maloláctica

Es especialmente importante en los vinos tintos para reducir la acidez.

En esta fermentación, el ácido málico, que está presente desde el principio en el mosto es
transformado en ácido láctico por la enzima maloláctica en una reacción compleja en la que
intervienen NAD y cofactores como Mn y K.

Esta fermentación la llevan a cabo bacterias lácticas como Leuconostoc oenos, Lactobacillus sp o
Pediococcus, presentes de forma natural en el hollejo de la uva.

Esta fermentación ocurre una vez finalizada la alcohólica y si se siguen una serie de condiciones:

 10-13% etanol
 Temperaturas superiores a 15ºC
 pH superior a 3,0
 SO2 total bajo <50mg/L; carbohidratos, vitaminas y aminoácidos.
ETAPA 5: Trasiego, clarificación y envejecimiento.

El trasiego de los vinos se entiende como el cambio de envase o de recipiente, y tiene como
propósito separar el vino limpio de las partículas decantadas que quedan en el fondo del envase.

La clarificación sería un proceso para eliminar partículas más finas y hacer el vino más limpio y
transparente.

En el caso de los vinos tintos se emplean polifenoles con cargas negativas que reaccionan con las
cargas positivas de la pulpa que aún puedan estar presentes.

En el caso de los vinos blancos se añaden agentes clarificantes como la bentonita, un tipo de
arcilla.

Una vez clarificado, el vino debe conservarse en condiciones libres de microorganismos y

especialmente del oxígeno. En caso de los vinos relativamente baratos se filtran y embotellan,
mientras que los de alta calidad pasan a barricas de madera donde se consigue el envejecimiento
controlado durante un periodo variado de años.

ETAPA 6: Embotellado

Después del envejecimiento se procede al embotellado, aunque previamente se produce una

filtración para eliminación de partículas y posibles contaminantes.
3. USOS INDUSTRIALES DE LEVADURA Y PRODUCTOS DE LEVADURA
TEMA 16: Productos de la microbiología industrial
La búsqueda de microorganismos con actividad de interés industrial no lleva tiempo y necesitan
cumplir una serie de requisitos formales de seguridad que permitan su uso industrial y de los
compuestos extraídos de ellos.

1. Aislamiento de microorganismos productores de enzimas y otros compuestos de interés

Se suelen emplear siempre los mismos. Para usar un

microorganismo que produzcan enzimas de consumo humano,
se deben de cumplir una serie de requisitos legales, a estos
microorganismos se les conoce como GRAS (Generally
Recognized As Safe). Son considerados seguros para su uso en la
industria méidica, farmacéutica y alimentaria. Éstos han
demostrado una larga historia de seguridad. Existen unos 50
microorganismos GRAS aprobados por la industria alimentaria:

-Bacillus: B. subtilis y B. licheniformis.

-Saccharomyces cerevisiae (levadura de panadería)

-Aspergillus niger y A. oryzae

-Lactobacyllus y estreptococos lácticos.

2. Diferentes sistemas de expresión

Se pueden emplear distintos seres vivos como sistemas de expresión. Mediante manipulación
genética podemos expresar y producir compuestos en organismos diferentes a aquellos donde se
encontraron por primera vez. Se pueden expresar y purificar proteínas de interés a partir de
microorganismos y células de mamíferos o insectos.
Por sus ventajas a nivel de manipulación se opta por el uso de microorganismos ya que son
sistemas que funcionan bien para la expresión de proteínas intracelulares:

-Producción de grandes cantidades a bajo coste.

-No afectada por las estaciones del año.
-Uso de mutante y procesos de selección que aumentan la producción.
-Producción de enzimas hechas a medida a través de ingeniería genética y diseño de proteínas.

No obstante, tienen desventajas las cuales están relacionadas con los productos a nivel molecular
ya que no siempre presentan las modificaciones post traduccionales adecuadas o el plegamiento
de las proteínas.

Insectos o cultivos de celulares de células de mamíferos presentan problemas a nivel de escalado

para la producción de grandes cantidades y el coste que supone.

3. Enzimas microbianas y sus aplicaciones

Muchos de los productos que usamos o consumimos diariamente los tenemos gracias a los
microorganismos. Se usan para la obtención de detergentes, alimentos, papel, energía, productos
farmacéuticos… Su uso está muy extendido y toda la industria relacionada con la producción de
enzimas mueve importantes cantidades de dinero. Las importantes son: las sacarasas, proteinasas,
quimosinas, ptoeasa empleada para la producción del queso, lipasas y células. Entre ellas el
principal grupo de enzimas que por demanda generan más dinero son las proteinasas implicadas
en la degradación de proteínas.
  Amilasas
Las amilasas son enzimas hidrolíticas que degradan el almidón para la obtención de dextrinas y
polímeros pequeños compuestos por unidades de glucosa (maltosa). Las glucoamilasas generan
unidades de glucosa. Distintas enzimas presentan distintos mecanismos de acción y liberan
residuos de distinta longitud. La amiloglucosidasa del grupo de las glucoamilasas liberan unidades
libres de glucosa mientras que las B-amilasa liberan unidades libres de maltosa.

Estas enzimas poseen aplicaciones en industrias alimentarias, textil, papelera, de fabricación de

detergentes etc. Son enzimas que funcionan bien en un amplio rango de temperatura.

Las bacterias productoras de amilasa más eficientes pertenecen al género Bacillus: B. subtilis,
B.licheniformis y B. amyloliquefaciens y el hongo Aspergillus.

Características:

-Están presentes en eucariotas y en procariotas, no obstante, se prefiere la fuente bacteriana a

nivel de producción por su facilidad para trabajar con estos microorganismos.
-Son enzimas extracelulares las cuales a nivel de producción industrial está muy bien porque no es
necesario romper las células previamente a la hora de purificar el producto.
-Fácil extracción
-Bajo coste
-Su producción es barata
-a-amilasa de Bacillus y glucoamilasa de Aspergillus piger

Ejemplos de uso en industria alimentaria:

o Jarabe de cereales rico en fructosa (Edulcorantes) :

1) Clarificación del almidón: se emplean a/B-amilasas, las cuales liberan fragmentos de almidón
en forma de dextrinas y maltosa.
2) Sacarificación: se emplea glucoamilasa las cuales terminan de romper todos estos fragmentos
en unidades libres de glucosa.
3) Isomerización: glucosa isomerasa la cual transforma toda esa flucosa en fructosa.

o Panadería
Al añadirlas a la masa acelera la degradación del almidón consiguiendo más azúcar libre y
acelerando la fermentación. Como resultado final conseguimos que el volumen del pan aumente.

o Textil (jeans)
Para llevar a cabo el proceso: desengomado. Antes de comenzar a tejer las telas como algodón se
les recurre de almidón para darle consistencia, luego es necesario eliminarlo. Por tanto, se realiza
un tratamiento de amilasas para eliminar el almidón que recubre las telas (desengomado)
.
 Proteasas

Las enzimas llamadas proteasas son enzimas que hidrolizan los enlaces peptídicos presentes
en las proteínas. Por otro lado entre las proteasas existen ejemplos con distintos grados de
especificidad. Así, mientras que la subtilisina hidroliza cualquier enlace peptídico
independientemente de los aminoácidos que intervengan, otras proteasas solo hidrolizan
aquellos enlaces peptídicos en los que participan determinados aminoácidos (tabla 1). Por
 ejemplo la tripsina rompe los enlaces peptídicos del extremo C-terminal de los aminoácidos
lisina y arginina. La subtilisina es la proteasa más ampliamente utilizada, puede obtenerse a
partir del cultivo de la bacteria Bacillus subtilis. Actualmente, además de proteasas, también
se han introducido amilasas, lipasas y celulasas en el campo de los detergentes.

Características de las proteasas utilizadas en los detergentes:

-Que tenga una alta actividad

-Baja especificidad: que actúen sobre el mayor número posible de enlaces peptídicos
independientemente de los residuos de aminoácidos que intervengan.
-Que se mantengan activas durante largos periodos de tiempo bajo las condiciones de lavado:
 Estables a altas temperaturas (hasta 70 grados).
 Resistencia a la desnaturalización por detergentes no iónicos.
 Alta actividad a pH alcalino (pH8-11).
 Sin requerimientos de iones metálicos para su actividad catabólica.
 Resistencia a los agentes oxidantes (hipoclorito y perborato).

o Subtilisina
La subtilisina fue descubierta en Bacillus subtilis y se produce como metabolito secundario durante
la formación de la espora ante el agotamiento de nutrientes. Sin embargo, a nivel industrial su
producción se hace a partir de Bacillus licheniformis. Un uso importante es en detergentes ya que
las manchas de los tejidos se degradan con mayor facilidad al usar esta enzima proteolítica. Son
una familia de enzimas proteolíticos (serina proteasa) secretadas durante la esporulación de
Bacillus. La subtilisina cumple con todas las características mencionadas anteriormente.

Propiedades de la subtilisina de Bacillus Licheniformis:

1. Baja especificidad de sustrato.
2. pH óptimo 9
3. Rápidamente convierte las proteínas en una mezcla de péptidos solubles en H2O.
4. Termoestable
5. Activa en presencia de detergentes no iónicos y aniónicos.
6. Estable en asociación con agentes aquelantes y perborato.
7. Muy sensible a la oxidación por perócxido de hidrógeno (H2O2) generado por el uso de
perborato sódico que incluyen algunos detergentes.
Sin embargo, por ingeniería genética, se ha modificado el residuo de metionina 222 de la proteína,
el cual reaccionaba con el peróxido de hidrógeno (H2O2) y la inactivaba, por una alanina 222
(Ala222) consiguiendo así mantener una alta actividad de la enzima en presencia de perborato.

 Pectinasas

Las pectinas son polímeros del ácido galacturónico

con enlaces alpha (1-4). Presentan metilaciones en
formas de grupo hidroxilo, en mayor o menor grado,
generalmente en el carbono número 6 en los
productos vegetales.
Las pectinasas son enzimas que degradan estas
pectinas rompiendo distintos enlaces dependiendo
de su especificidad. Por un lado, las pectin esterasas
liberan el grupo metoxilo y generan metanol en la
reacción. Por otro lado, las poligalacturonidasas son
hidrolasas que rompen en enlace glicosídico alpha 1-
4 liberando dos unidades de ácido galacturónico.
Ejemplos: pectinhidrolasas y pectinliasas.

Las pectinasas proceden de cultivos de hongos como Aspergillus y Rhizopus.

Su principal uso es en la producción industrial de zumos de frutas y vino. Al prensar la fruta y
vegetales para la obtención de jugo, las pectinas de alto peso molecular reducen la producción. Se
pica la fruta y se añaden pectinasas para degradar las pectinas de larga cadena. También en la
producción de mostos para vinos. Se reduce la viscosidad del zumo obteniendo así un zumo más
líquido que facilita la filtración y se obtienen cantidades mayores.
También tiene uso en la alimentación de los bebés donde las pectinasas maceran las frutas y
vegetales para hacerlos más suaves y fáciles para comer.

4. Enzimas microbianas de extremófilos

Un grupo muy interesante de enzimas son aquellas derivadas de microorganismos extremófilos.

No todas las reacciones enzimáticas útiles para la industria ocurren a temperatura moderada, pH
neutro o a bajas concentraciones de sal. Una estrategia interesante ha sido llevar a cabo
prospecciones sobre microorganismos extremófilos. Estos microorganismos para poder sobrevivir
en estos ambientes deben tener enzimas adaptadas a funcionar bajo condiciones extremas:

 Altas temperaturas (termófilos), bajas temperaturas (psicrófilos).

 pH muy básico (alcalófilos), pH muy ácido (acidófilos).
 Zonas de alta concentración de sal (halófilos).
 Altas presiones (barófilos o piezófilos).

 Microorganismos termófilos marinos como fuentes de enzimas

Se han obtenido el mayor número de enzimas útiles para la industria de microorganismos

termófilos. Tanto arqueas como bacterias para resistir estas condiciones extremas presentan una
serie de adaptaciones para mantener sus funciones m una alta expresión de chaperonas, grandes
cantidades de ácidos grasos saturados para la estabilidad de las membranas, DNA superenrollado
positivo y poliaminas para estabilizar el ADN.
Las proteínas en general se ven beneficiadas por la presencia de esas chaperonas, además en sus
secuencias de aminoácidos presentan un mayor número de residuos de cisteína y serina que son
más termoestables, también de glicina que aporta una mayor flexibilidad y un mayor número de
puentes de hidrogeno y sulfuro e interacciones hidrofóbicas que hace a las proteínas más
compactas y les permite mantener su estructura de manera más estable.
Estas características les permiten funcionar y tener óptimos de actividad a temperaturas por
encima de lo normal y le otorgan propiedades como resistencia a solventes orgánicos,
detergentes, compuestos desnaturalizantes y cambios de pH. Toda una serie de características
muy atractivas para la industria.
Ejemplos:
-La arquea Pyrococcus presenta
proteasas que resiste
temperaturas hasta los 100
grados.
-Bacterias bacillus presenta
proteasas que aguantan
temperaturas de más de 50 grados
durante casi una hora.

Thermus aquaticus, denominada también Thermophilus aquaticus, es una bacteria termófila que
vive en la proximidad de manantiales de agua caliente a temperaturas comprendidas entre 50 y 80
grados, gracias a que sus enzimas resisten tales condiciones. Su temperatura óptima oscila entre
72-75 grados. Debido a esa termorresistencia, la enzima que Thermus aquaticus emplea para
replicar su ADN, llamada ADN polimerasa Taq, se utiliza con frecuencia en las reacciones de PCR.

 Enzimas microbianas de extremófilos halófilos

El hombre ha hecho uso de estos microorganismos desde hace miles de años sin saberlo (minas de
sal, alimentación). El principal interés industrial de los halófilos recae en los compuestos que
producen. Son un grupo poco explotado.
Están presentes en ambientes hipersalinos, necesitan ambientes con una alta concentración de
sal, requieren concentraciones entre 2-6 molar de cloruro sódico lo que equivale a soluciones de
hasta el 36% de esta sal.
Un ejemplo es halobacterio una arquea que vive en el mar muerto.

 Son una fuente de solutos compatibles que son moléculas que se acumulan en altas
concentraciones intracelularmente sin afectar al metabolismo y permiten que las
proteínas puedan seguir funcionando sin modificaciones o adaptaciones especiales.
Algunos ejemplos: colina, aminoácidos como la prolina o ácido glutámico.
 Producción de la bacteriorrodopsina, con una estructura similar a la rodopsina encontrada
en los ojos de mamíferos, capaz de capturar la energía luminasa sin necesidad de
clorofila.
 Producción de halocinas: un tipo especial de bacteriocinas producidas por arqueas
halófilas.

En general, son un grupo de microorganismos poco explotados pero algunos de los compuestos
aislados tienen interés en varias industrias como la farmacéutica, química, tecnológica,
alimentación y
cosmética.
 5. Producción microbiana de combustibles

Actualmente la mayor parte de la energía usada

para industrias la obtenemos de la quema de
recursos fósiles. Los biocombustibles son aquellos combustibles (productos energéticos) que se
obtienen de la biomasa (residuos vegetales, animales, industria agrícola y residuos urbanos).
Ejemplo: biodiesel y bioetanol. Los biocombustibles se obtienen principalmente de compuestos
orgánicos de base celulósica, aunque también pueden
obtenerse de lípidos microbianos.
  BIOCOMBUSTIBLES: BIOETANOL
El bioetanol puede usarse como combustible y como materia prima para la producción de otros
compuestos industriales. Químicamente se obtiene a partir del etileno, pero también a partir de
biomasa (bioetanol). En el caso de los vehículos modificados son aquellos cuyo combustible
presenta un 25% de etanol.

La fuente principal del bioetanol son productos vegetales ricos en azúcares ya que se obtiene por
fermentación. Si presenta azucares simples (como la caña de azúcar) puede emplearse
directamente para la fermentación en cambio los azucares complejos (almidón) tendrán que sufrir
un paso previo de hidrolisis para liberar esos azúcares.

Tras la fermentación biológica se mejora la concentración por destilación hasta obtener un

producto que alcanza una pureza en torno al 92%. Le pueden seguir procesos de deshidratación
para mejorarse hasta obtener un bioetanol de pureza cercana al 100%.

Este bioetanol se mezcla hoy en día con la gasolina para sustituir al MTBE, un aditivo que mejora la
oxigenación y combustión de gasolina pero que a su vez es tóxico.
Producción de bioetanol:

o Etapa 1: conversión de biomasa en azúcares fermentables

La materia prima de origen son productos como el azúcar de caña o al remolacha rico en azucares
simples u otros como cereales o tubérculos como la patata. También se pueden emplear
materiales de partida más complejos como productos celulósicos, de madera, residuos agrícolas o
el líquido sulfítico, un producto rico en celulosa derivado del procesado e la madera. Todas estas
materias primas son tratadas para descomponerlas en sus componentes glucídicos más simples
incluyendo un paso de hidrolisis enzimática.

Un aspecto negativo sobre la producción de bioetanol es que ya que la fuente principal son
vegetales que también se emplean en la alimentación indirectamente se ha incrementado el
precio de estos productos a nivel mundial.

o Etapa 2: conversión de azúcar en alcohol (fermentación)

Esta estapa es llevada a cabo por diferentes microorganismos como
levaduras (Saccharomyces cerevisise y Kluyveromyces fragilis) y bacterias
(Zymomonas movilis).

 Se produce una fermentación alcohólica clásica donde el azúcar en

forma de glucosa entra en la vía glucolítica hasta obtener piruvato el
cuál es transformado en acetaldehído y por acción de un alcohol
deshidrogenasa se obtiene el etanol. Lo ideal es emplear una
fermentación en cultivo continuo de modo que se pueda ir retirando
el etanol del birreactor para que no resulte tóxico ni inhiba el
crecimiento del microorganismo.
  En el caso de Zymomonas (bacteria) usa una ruta alternativa a la glucolisis, la ruta de
Entner-Doudoroff:
 Pueden crecer en medio mínimo sin requerimientos y en anaerobiosis lo que evita tener
que controlar la aireación del cultivo y a temperaturas de entre 38-40 grados.
 Como sustratos utiliza glucosa, fructosa y sacarosa.
 Pueden crecer en soluciones con 40% de glucosa.
 Toleran hasta el 16% de etanol debido a la abundancia de ácidos grasos monoinsaturados
y hopanoides como el diplopterol que disminuye la fluidez de sus membranas.

o Etapa 3: Recuperación del producto (para su uso como combustible): se realiza la

recuperación del etanol:
1. Separación de la masa celular por centrifugado o por sedimentación.
2. Destilación: aplicación de calor y condensación de vapor para eliminar el exceso de
agua e incrementar su concentración.
3. Deshidratación: deshidratación de alcoholes es el proceso químico que consiste en la
transformación de un alcohol para poder ser un alqueno.
4. Desnaturalización: adicción de aditivos.
5. Procesos económicamente costosos.
 BIOCOMBUSTIBLES: BIODIESEL
Una alternativa es la producción de biodiesel: un combustible renovable derivado de aceites
animales, vegetales o microbianos.

Actualmente su producción requiere

de la adicción de algún tipo de alcohol
y para la reacción es necesario un
catalizador (un ácido o una base).
También pude producirse mediante
procesos enzimáticos. Como producto
de la reacción se obtiene biodiesel que
puede usarse por sí solo o mezclado
con el gasóleo. Se genera también un subproducto: la glicerina. Existen microorganismos
(bacterias, levaduras y hongos) capaces de producir grandes cantidades de aceites microbianos a
partir de diferentes fuentes de carbono, por lo que podrían emplearse como una alternativa a la
industria química del biodisel.

o En el caso de la producción enzimática de

biodiesel, los aceites vegetales (girasol,
soja, colza, palma, aceite de cocina usado)
se mezclan con metanol y por su paso a
través de un reactor que contiene lipasas
inmovilizadas se obtendría el biodiesel. Las
enzimas que llevan a cabo la reacción de
transesterificación pueden ser de origen
microbiano como las producidas por
Candida antartica (enzimas inmóviles) de
manera que, aunque no se usen
directamente los microorganismos, sí que
pueden emplearse sus productos para el proceso.

o En la producción química se requiere un catalizador químico: bases como el hidroxilo

sódico o potásico y ácidos como el sulfúrico o clorhídrico. Se obtiene así un Alquil éster
(biodiesel) y glicerol. Esta producción química se lleva a cabo en fermentaciones tipo Batch
discontinuas a temperaturas en torno a los 55ºC. El aceite se mezcla con metanol y un
catalizador (en continua
agitación). Finalmente,
se deja reposar para que se
separen las fases: la
glicerina iría al fondo y
los metilésteres (biodiesel)
quedaría en la parte
superior para su
purificación.
6. Uso de nanopartículas en microbiología.

El uso aplicado de las nanopartículas implica su conjugación o asociación con otras partículas
(ligandos, anticuerpos…). Las NPs suelen ser partículas de naturaleza metálica: óxidos de hierro,
plata, oro… Además, tienen diversas aplicaciones como la de antimicrobianos.

Nanopartículas Antimicrobianas

Se ha comprobado que ciertos nanomateriales presentan actividad frente a microorganismos

patógenos: nanoantibióticos. Son nanomateriales que muestran una actividad antimicrobiana o
que elevan la efectividad y seguridad de los antibióticos. Las nonapartículas metálicas son un buen
ejemplo de nanoantibióticos. No obstante, su efectividad todavía está por demostrar.

Las NPs metálicas pueden dañar las membranas bacterianas a través de la posible liberación de
iones metálicos de plata, zinc o titanio. Al tener carga positiva tendrían afinidad por las
membranas bacterianas dañándolas o incluso penetrando en su interior y dañando otros
elementos celulares o provocar la formación de ROS en la célula pudiendo producir daños a nivel
del ADN para dar el ciclo celular etc. Todavía queda mucho por estudiar sobre el tema y sobre su
efectividad aplicada.

La mayoría de los trabajos evalúan su eficacia in vitro mediante el cálculo de la concentración

mínima inhibitoria (CMI: detiene el crecimiento) y la concentración mínima bactericida (CMB:
muerte del microrganismo).

En una serie de tubos se añade un medio de cultivo, un inoculo bacteriano (en todos los tubos el
mismo volumen) y una solución de nanopartículas en concentraciones crecientes. Tras la
incubación, el primer tubo en el que ya no se observe crecimiento (turbidez en el tubo) será la CMI
que podrá corresponderse o no con la CMB (lo comprobaremos por microscopia o transfiriendo un
inoculo de esos tubos en crecimiento a otros tubos que contengan el mismo medio de cultivo
fresco sin la solución de nanopartículas y evaluar de nuevo el crecimiento microbiano). Si no hay
crecimiento, la CMI coincide con la CMB. Si existen tubos en los que se recupera ese crecimiento la
CMI es diferente a la CMB.