Análisis Instrumental

Fotometría visible

Autores
Christian Andrés Asprilla Mosquera
Beatriz Elena Reinosa Telles

Fecha
12/03/2021

Universidad Tecnológica de Pereira

Facultad de Tecnología
Escuela de Química
Objetivos
 Reconocimiento de los diferentes modelos de espectrofotómetros y de sus
partes externas e internas, distinguir los componentes básicos de un
espectrofotómetro y su función.
 Calibrar y manejar correctamente el espectrofotómetro.
 Estudiar algunas características técnicas del instrumento.
 Definir las condiciones instrumentales óptimas para hacer un análisis
fotométrico. Estudiar el comportamiento de una sustancia en relación con la
Ley de Beer. Analizar cualitativa y cuantitativamente diferentes sustancias
por medio de curvas espectrales y gráficas de calibración.
 Aplicar la técnica fotométrica en la región del visible en el control de calidad
y procesos.

Marco Teórico
Absorción de Radiaciones
Dependiendo de su complejidad, una sustancia puede llegar a una infinidad de
estados energéticos, pero todos ellos son cuantificados. Las energías de las
radiaciones electromagnéticas también son cuantificadas. Por lo tanto, cada
sustancia puede absorber ciertas radiaciones y otras no. La absortividad
específica a y la absortividad molar E son factores que indican la capacidad de
una sustancia para absorber una radiación determinada y junto con su curva
espectral son parámetros utilizados como referencia para la identidad de un
compuesto.
Transmitancia y Absorbancia
Una radiación tendrá un 100% de transmitancia (T) si al pasar a través de una
sustancia sale inalterada, su intensidad, es decir, no es absorbida por la sustancia.
Si la radiación es absorbida parcialmente, la transmitancia será inferior al 100%. Si
escogemos una radiación que puede ser absorbida por la sustancia en estudio, el
porcentaje trasmitido disminuye en proporción logarítmica con la cantidad de
sustancia presente. Como esta disminución es logarítmica se introduce por
conveniencia práctica al término
Absorbancia (A): A = - LogT; o A = 2 - Log%T
Las escalas del sistema de lectura vienen graduadas en porcentajes de
transmitancia (%T) o en (A). Transmitancia 100% equivale a Absorbancia cero.
0% Transmitancia corresponde a Absorbancia infinita.

Ley de Beer y parámetros de control

La ley de Beer establece que si a través de una solución con concentración C en
una especie absorbente contenida en una celda de espesor b, pasa una
radiación monocromática que es absorbida por la especie, se cumple relación A =
abC, siendo A (la absorbancia) y a (absortividad especifica); o sea, que la
magnitud de la absorbancia es proporcional al poder absorbente, al espesor de la
celda y a la concentración, b se expresa en cm y C en g/L o mg/mL, la
absorbancia A también es igual a ËbC (A = ËbC), siendo Ë la absortividad molar
(Ë = a*pm) donde pm = (peso molecular) de la sustancia, cuando se utiliza esta
expresión matemática C se expresa en moles por (Moles/L).
Un análisis matemático del error de medida debido a las limitaciones
instrumentales (luz no estrictamente monocromática, ruido o inestabilidad
electrónica, imprecisiones en el ajuste del equipo, etc.), lleva a concluir que el
error de medida es mínimo cuando la absorbancia es de 0.4343, que corresponde
a o 36.8% de transmitancia. El error fotométrico no aumenta mucho si se trabaja
en condiciones que dan entre 15 y 70% de transmitancia (absorbancias 0.8 a 0.15
aproximadamente). Es claro que el error fotométrico es sólo uno de los factores
del error total en una determinación.
En la práctica, para ajustarse a los rangos de absorbancia o transmitancia dados,
se debe trabajar dentro de un rango apropiado de concentraciones (A = abC),
aunque también se podría cambiar el espesor de la celda, o variar la absortividad
específica a. La absortividad específica se puede variar, utilizando otra radiación
que la sustancia absorba más, o menos, según se requiera. También se puede
variar llevando la sustancia a un estado químico que presente un mayor, o menor
poder absorbente; esta última opción implica generalmente cambiar también la
radiación por una apropiada al nuevo estado de la sustancia.
Blanco Fotométrico
Cuando vamos a determinar el poder absorbente de una sustancia, esta se
encuentra generalmente dentro de un medio formado por el solvente, los reactivos
agregados u otras sustancias que la acompañan, todo lo cual puede llegar a
interferir un poco la medida. Para corregir esos fenómenos, es necesario disponer
de una base de comparación, que es una solución que contiene las sustancias
que pueden causar interferencia, todos los reactivos adicionados, pero no contiene
la especie absorbente que se va a estudiar. A esta solución se le denomina
blanco fotométrico

Espectrofotómetro
Es un equipo diseñado para medir el % de T, la A o directamente la concentración
C, también puede trazar la curva espectral y la gráfica de calibración. Pueden
clasificarse en análogos y digitales, manuales, semiautomáticos, automáticos,
automatizados e inteligentes; pueden cubrir varias regiones del espectro
electromagnético, según su diseño puede ser de haz sencillo, doble haz o haz
dividido.

ESPECTROFOTOMÉTRO ANÁLOGO ESPECTROFOTOMÉTRO DIGITAL

ESPECTROFOTOMÉTRO SEMIAUTOMATICO ESPECTROFOTOMÉTRO INTELIGENTE

Los equipos de doble haz dividen el haz de radiaciones en dos; un haz pasa por
el blanco fotométrico y el otro por la muestra, de modo que hacen los ajustes
automáticamente; dan mayor precisión y son útiles para trazar espectros, o sea
gráficas de transmitancia o de absorbancia contra longitud de onda de la
radiación, lo cual facilita los análisis. Hay espectrofotómetros para cada región del
espectro (ultravioleta, visible o infrarrojo). Constan de las mismas partes
esenciales, pero difieren en que cada parte debe tener las características
apropiadas para la región correspondiente

Partes de un Espectrofotómetro
a. La fuente de Radiaciones: El material emisor varía, por ejemplo: gas
hidrógeno, deuterio o xenón para el ultravioleta, filamento de tungsteno, o
tungsteno halógeno o xenón para el visible, aleación de níquel y cromo, o
cuerpos incandescentes de Nernst o un Globar para el infrarrojo; existen
fuentes (láser) de muchos otros materiales para las distintas regiones. Una
buena fuente debe emitir todas las radiaciones de su región con intensidad
suficiente y uniforme. En la realidad las fuentes emiten unas radiaciones
con mayor intensidad que otras.

b. Sistema selector de una radiación de longitud de onda específica:

Puede ser un filtro de absorción, de interferencia, de difracción, o un
sistema monocromador. Los filtros absorben o interfieren casi todas las
radiaciones del haz y dejan pasar selectivamente ciertos rangos estrechos
de longitud de onda; se requiere un filtro diferente para cada longitud de
onda que se desee seleccionar. Un sistema monocromador es más
complejo y costoso, pero permite seleccionar rangos de longitud de onda
más estrechos y además, cualquier rango de interés. Por tanto, los
monocromadores dan anchos de banda más estrechos, o sea que la
radiación es mejor seleccionada. Un monocromador en sí, no logra
seleccionar radiaciones realmente monocromáticas; es decir, de una sola
longitud de onda (λ).

c. Las celdas: Son los recipientes dentro de los cuales se coloca la sustancia
a analizar. El material de la celda debe ser transparente a las radiaciones
de la región espectral en que se usa o sea, que no debe absorber dichas
radiaciones. Para el ultravioleta el cuarzo o sílice fundida, Para el visible
se usa el vidrio, el cuarzo, Plásticos (metacrilato10); para el infrarrojo
las celdas son de cristal de haluros alcalinos o de plásticos especiales.
Aunque a veces se usan tubos de ensayo cilíndricos, idealmente las
paredes de la celda deben ser planas, y colocadas en forma que el rayo
incida perpendicularmente sobre ellas. Además, estas paredes deben
 conservarse perfectamente pulidas y limpias. Cuando en la ley de Beer se
habla del espesor de la celda, no se refiere al espesor de la pared, sino al
espesor de la capa de solución que es atravesada por el rayo, o sea la
distancia interna entre las paredes de la celda.

d. Sistema Detector - Amplificador y de Lectura: El detector es un

dispositivo sobre el cual incide la radiación y produce una señal eléctrica de
magnitud proporcional a la intensidad de la radiación. La señal electrónica
producida pasa generalmente a un sistema de amplificación. La señal
amplificada acciona el sistema de lectura que puede ser análogo o digital.
Cada región del espectro requiere de un detector adecuado, por ejemplo,
un fototubo para el ultravioleta, una celda fotovoltaica para el visible, una
Termocupla o un bolómetro para el infrarrojo, diodos de silicio o un arreglo
de diodos para el ultravioleta/visible/IR cercano; estos detectores deben de
ser de un material sensible apropiado.

Ajustes generales
Las operaciones que se indican, algunos equipos las hacen en forma automática
(digitales), en otras se hace manualmente (análogos); hay que seguir
estrictamente las instrucciones del manejo del equipo. En términos generales esas
operaciones de ajuste son:
a. Alinear la Lámpara o Fuente: (Para que el rayo siga exactamente la
trayectoria óptica del monocromador, pase por la celda y llegue al detector.
Este ajuste se hace cada vez que se instale una lámpara nueva).
b. Ajuste del cero mecánico: (Se realiza en instrumentos análogos, con el
equipo completamente apagado).
c. Ajuste del cero % de Transmitancia:(Se bloquea con el obturador el paso
del rayo de luz para que no llegue al detector y se ajusta el sistema
electrónico hasta que la lectura del instrumento indique cero % de
transmitancia).
d. Ajuste del selector de radiaciones: (Se lleva a seleccionar la longitud de
onda (λ) que la sustancia absorbe).
e. Ajuste del 100% de Transmitancia (T): (Se coloca una celda con el
blanco fotométrico, se abre paso al rayo y se ajusta el sistema
amplificador hasta que el sistema de lectura indique 100% de
transmitancia).
f. Medición de la Transmitancia (T): (Se coloca la misma celda, u otra celda
estrictamente equivalente, con la sustancia a analizar. Se lee directamente
el porcentaje de Transmitancia, la absorbancia o la concentración, si el
equipo ha sido calibrado con el patrón o los patrones de referencia).
Instrucciones de manejo
El equipo debe instalarse en un lugar limpio, seguro y no expuesto a la luz intensa,
al calor o la humedad. Debe conectarse al voltaje apropiado. Cuando se use debe
tenerse cuidado especial en el control de la amplificación, porque puede dañarse
el galvanómetro de lectura, si se trata de un equipo análogo. En muchos modelos
una vez encendido el equipo es necesario darle un periodo de calentamiento
(unos 5 minutos), para que la lámpara y el circuito electrónico adquieran la
temperatura óptima de funcionamiento, en algunos equipos la falta de
calentamiento se manifiesta en dificultad para ajustar el 0 eléctrico y 100% de T.

Observación del Espectro Visible

Por la rendija de salida del monocromador se pueden observar los colores del
espectro a medida que gira la perilla selectora de longitud de onda entre 350 y 800
nm. En algunos modelos es necesario retirar el porta-celdas aflojando los tornillos
que lo unen al equipo. La rendija de salida quedará visible. Abra el obturador del
rayo, Coloque sobre la rendija el filtro apropiado o un papel blanco traslúcido y
observe la luz. Antes de volver a colocar el porta-celdas reduzca la amplificación
para proteger el galvanómetro.

Estudio de la Respuesta Relativa Total

La respuesta del instrumento depende del rango espectral para el cual ha sido
diseñado y la intensidad con que cada radiación es emitida por la lámpara y de la
sensibilidad del detector para cada radiación. Procediendo de la siguiente forma:
a. Variando la longitud de onda cada 20 nm, dentro del rango espectral que
cubre el espectrofotómetro, mida el %T.
b. Grafique %T Vs λ.
 c. Observando la gráfica determine la λ en las cuales se presenta el mayor
%T, estas son las radiaciones que emite con mayor intensidad la fuente y
a las cuales responde mejor el detector. Es de aclarar, que algunos
modelos de espectrofotómetros digitales, amplifican la señal en cada λ,
llevándola a un máximo de %T que normalmente es 100 %T, resultando al
graficar una línea horizontal en lugar de una curva que sería lo esperado.
La gráfica de la respuesta relativa total del espectrofotómetro nos permite
diagnosticar el estado de funcionamiento del equipo al confrontarlos con los
datos dados por el fabricante.

Verificación de la calibración del espectrofotómetro

a. Realice un barrido espectral a una solución de cloruro de cobalto 0.25 molar,
utilizando como blanco fotométrico agua destilada, construya la gráfica A vs
longitud de onda, si el máximo de absorción se presenta a 510 nm, el
espectrofotómetro se encuentra ópticamente calibrado.
b. Para verificar la exactitud fotométrica y tener calibraciones más confiables se
obtiene experimentalmente la curva de calibración para el bicromato de
potasio y se compara con la curva teórica.

Curva espectral de absorción de una solución de

bicromato de potasio preparada disolviendo 120 mg de
K2Cr2O7 en 1 L de H2SO4 0.01 N, comparada con un
blanco fotométrico de una solución de H 2SO4 0.01 N en
cubetas de 1 cm de espesor.
Celdas
Las celdas o cubetas para colocar la sustancia en la trayectoria óptica del rayo,
entran a formar parte del instrumento. El descuido en su manejo o el uso
inapropiado origina frecuentes errores de medición.

Celdas Equivalentes
Cuando se usan varias celdas en un estudio o medición, deben ser todas
estrictamente equivalentes, es decir, tener igual espesor, la misma transparencia
(transmitancia), o se debe tener un factor de corrección respecto de aquella usada
con el blanco fotométrico. La razón de no equivalencia de las celdas pueden ser
pequeñas diferencias en la geometría de ellas o pequeñas suciedades adheridas.

Para Celdas propias del Instrumento:

 Lave bien las celdas; coloque en ellas agua destilada, seleccione una λ
cualquiera entre 400 y 700 nm, ubique en el porta celdas una celda y tome
como referencia un %T, coloque seguidamente las demás celdas
observando el %T si dan igual (%T) las celdas son equivalentes, si no,
normalmente es por suciedad lávelas de nuevo cuidadosamente y repita el
ejercicio seleccionando las que dan igual. Sí realizado el procedimiento
anterior no logra obtener un mínimo de 2 celdas equivalentes, obtenga el
factor de corrección de la siguiente manera: En las celdas bien lavadas,
coloque la solución de trabajo.

 Seleccione la radiación (λ) indicada para el análisis.

 Coloque una celda en el instrumento: Generalmente la celda tiene una

señal para que se ubique siempre en la misma posición. Si no hay señal
hágala. Ajuste la amplificación hasta que el instrumento de lectura indique
70% T.

 Sin mover los ajustes del instrumento, ponga sucesivamente las otras
celdas, teniendo en cuenta la señal de ubicación. Tome las lecturas. La
celda que indique mayor valor destínela para colocar el blanco fotométrico
en trabajos posteriores; hágale una señal de identificación en un lugar
donde no interfiera luego el paso del rayo. Con relación a dicha celda
calcule un factor de corrección para las demás, así: Sea Ar la absorbancia
para la celda de referencia y Ac1, Ac2.... Acn Las absorbancias con las otras
celdas.

F1 = Ar / Ac1 F2 = Ar / Ac2 ; etc.

 En mediciones posteriores obtenga la absorbancia real multiplicando la
absorbancia leída por el factor respectivo de la celda usada.

Tubos de Ensayo Como Celdas

Mediante un procedimiento sencillo se pueden seleccionar convenientemente los
tubos a ser utilizados. Se toman varios tubos de ensayo preferiblemente del
mismo fabricante para obtener igual calidad del vidrio, normalmente tubos de 10
mm de diámetro interno y longitud según el porta-celdas del instrumento.
 Se deposite en cada tubo 5 ó 10 ml de agua medidos exactamente.

 Se escogen los que tengan diámetro más parecido, o sea aquellos en los
cuales el agua llegue a igual nivel. Se Mide la altura de agua, con la cual
se puede calcular el diámetro interno (espesor de celda), aplicando la
fórmula del volumen del cilindro V = πr 2h, se rota la posición de los tubos y
donde se obtiene el mayor % de T se hace una señal la cual debe coincidir
con otra en el equipo, para ubicarla siempre en la misma posición de
máxima transmisión de la luz.

 Seguir el procedimiento de las celdas equivalentes.

Cuidados y Limpieza De Las Celdas.

 No se deben rayar las caras transparentes por donde pasará el rayo,
observe el porta-celdas del instrumento para tener cuidado al introducir la
celda; no se deben lavar con ácidos calientes, álcalis, ni con agentes que
puedan atacar las superficies; no se deben frotar con papeles ni objetos
ásperos.
 Se deben conservar rigurosamente limpias por dentro y por fuera. Lo mejor
es lavarlas tan pronto se termine el trabajo, ya que pueden adherirse
películas de agentes coloreados difíciles de quitar.
 Use solución de jabón suave y enjuague varias veces con agua destilada o
des ionizada. Puede usarse alcohol, ácido sulfúrico diluido o tiosulfato de
sodio cuando sea necesario.
 Cuando coloque sustancias a analizar, evite llenar totalmente la celda,
elimine pequeñas burbujas de aire atrapadas y seque completamente las
superficies externas con una tela o papel suave. Las celdas desechables
de (plásticos) metacrilato son atacadas por los solventes orgánicos y
algunos compuestos inorgánicos, deben ser usadas con la debida
precaución.
Análisis fotométrico.
Análisis Cualitativo
 Los Factores fotométricos para la identificación de una sustancia, son: el
espectro de absorción, curva espectral o barrido de exploración de la
sustancia, ya que cada sustancia presenta uno o varios máximos de
absorción característicos. Otro factor cualitativo es la absortividad
específica o la absortividad molar (E=a x pm) que presenta la sustancia
para una radiación definida, se determina a partir de la ley de Beer.

Estudio de Máximos de absorción (Curva Espectral)

Cada sustancia absorbe más unas radiaciones que otras. La curva espectral es
la representación gráfica de la absorbancia (o de la transmitancia) en función de
la longitud de onda (λ). Para obtener bien la curva se recomienda que en los
puntos de máxima absorción, las lecturas de absorbancia no excedan de 0.8 de
A (transmitancia no menor del 15%). El valor de la absorbancia depende del
espesor de la celda utilizada y de la concentración de la sustancia. De un
instrumento a otro depende además del ancho de banda que proporcione el
monocromador. Una vez definidos el espesor de la celda y el equipo, sólo resta
definir la concentración apropiada, la cual será menor mientras mayor sea el poder
absorbente de la sustancia. Un ensayo preliminar se puede hacer rápidamente,
sin precisar mucho los ajustes y las lecturas así:
a. En el visible con celda de 1 cm el color no debe ser muy intenso; la
solución P1 cumple esta condición. Si la solución no está preparada,
prepárela, llene una celda con la sustancia y otra equivalente con el
blanco.

b. Ajuste el cero del instrumento.

c. Para proteger el instrumento de lectura reduzca la amplificación antes de

mover el selector de longitud de onda si el equipo es análogo (paso a) del
Estudio de la Respuesta Relativa.
 d. Tenga en cuenta el rango de trajo del fotómetro según sus características
técnicas. Ponga una longitud de onda (empiece en un extremo del rango a
estudiar).

e. Juste el 100 de T con el blanco fotométrico apropiado. Si el equipo es de

doble haz ponga el blanco en ambos haces para correr la línea base.

f. Coloque la sustancia (solución P1); lea y anote el porcentaje de

transmitancia o directamente la absorbancia (si es de doble haz deje el
blanco en el haz de referencia y coloque la muestra en el haz de medida).

g. Repita los pasos b, c, d, e y f, para diferentes longitudes de onda, cada 25

nm. (Un equipo de doble haz hace los pasos b, c, e y f automáticamente).

Lecturas definidas: Si la máxima absorbancia observada está entre 0.8 y 0.15 (15
a 70% T) repita el procedimiento con precisión, leyendo cada 20 nm en general,
pero cada 10 nm entre el dato anterior y el posterior a aquel en que haya
observado un máximo de absorción. Si la máxima absorbancia observada en el
ensayo preliminar se sale del rango, cambie la concentración por una apropiada
aplicando la ley de Beer para calcularla así: CX = 0,7XCP/Ap
Llene la tabla de datos (4.10.4) del formato guía 4.10 construya la gráfica A Vs λ,
determine el o los máximos de absorción, compare los máximos o el espectro con
los espectros (4.10.5) dados en el formato guía 4.10 e identifique la sustancia de
la solución P1.

Análisis Cuantitativo
Si la sustancia cumple la ley de Beer, se halla la Concentración C, conociendo la
absortividad a, el espesor de la celda b y midiendo la absorbancia A, o más
fácilmente, comparando la absorbancia A x de la muestra con la absorbancia A p de
un patrón de concentración conocida Cp medidas en la celda de igual espesor. CX
= CP x A x / Ap
Las lecturas AX y Ap deben quedar dentro del rango 0.15 a 0.8. Si la muestra es
muy concentrada, o muy diluida (AX mayor de 0.8 o menor de o.15) será necesario
diluir o concentrar la solución).
Un criterio para hallar el factor de dilución (Fd) es dividir el valor de la absorbancia
obtenido (A) por 0.43 que es el valor donde se obtiene el menor error fotométrico
(Fd=A/0.43), y el valor resultante se puede redondear a una cifra exacta para
facilitar los cálculos del volumen; Fd=Vf/Vi, siendo Vf= volumen final y Vi= volumen
inicial, el volumen final se puede fijar convenientemente y despejarse el volumen
inicial (Vi=Vf/Fd ). Para calcular el factor de concentración (Fc), se divide 0.43 por
el valor de la absorbancia obtenido (A), (Fc=0.43/A). El valor resultante se puede
redondear a una cifra exacta para facilitar los cálculos del volumen; Fc=Vf/Vi,
siendo Vf= volumen final (el cual es menor que el volumen inicial) y Vi= volumen
inicial el cual es mayor que el volumen final. El volumen final se pude fijar
convenientemente y despejarse el volumen inicial.
Cuando es necesario diluir o concentrar una muestra, la concentración real (Cr) del
compuesto o analito, será igual a la concentración obtenida (C) multiplicada por el
factor de dilución o concentración (Cr=C X Fd o Cr=C X Fc), Cuando la sustancia
no cumple la ley de Beer o no sabe si la cumple, es necesario trazar una gráfica
de calibración de A Vs C, usando varias soluciones patrón.

Cuantificación de una Sustancia Absorbente

Una vez confirmada la identidad de la solución problema P1, prepare una
solución de concentración conocida. Con base en el estudio del o los máximos
de absorción, seleccione el más apropiado y determine su absorbancia con el
mismo blanco fotométrico. Realice los cálculos matemáticos, para determinar el
volumen de solución P1 de concentración conocida requerido para preparar 25 mL
de cada uno de una serie de patrones, para cubrir el rango donde se obtiene el
menor error fotométrico de 0.2 a 0.8 de A. Como la absorbancia es proporcional
a la concentración, para visualizar mejor el comportamiento de la ley de Beer, se
recomienda preparar patrones para los cuales teóricamente se espera múltiplos de
la (A). Así: 0.2 - 0.4 - 0.6 - 0.8 o valores alrededor de ellos. Construya una tabla
con los datos calculados, llene la tabla de datos 4.10.6.1 del formato guía para
toma de datos 4.10.
Prepare los patrones haciendo una buena medición y aforo de volúmenes, utilice
el material volumétrico adecuado. Haciendo uso correcto del espectrofotómetro y
usando el blanco adecuado mida la absorbancia de cada patrón y de la solución
de concentración desconocida P1. Estas son las absorbancias reales de los
patrones y la solución problema P1.
 Si la solución problema es muy concentrada o muy diluida, deberá diluirla o
concentrarla, calculando el factor de dilución o de concentración según los
criterios considerados en la parte del Análisis Cuantitativo para obtener
una lectura dentro del rango de los patrones.

 Los espectrofotómetros genesys 5, genesys 10, Shimadzu UV-1700,

Evolution 60, evolution 201 tienen el programa curva de calibración y
determinación de incógnitas con el cual se construye la gráfica y se
determina la concentración de la muestra problema como también algunos
parámetros estadísticos.
  Si no dispone de alguno de estos espectrofotómetros, En el informe
construya la curva de calibración de absorbancia en función de la
concentración, por medio de la gráfica deducir la concentración
desconocida de la solución problema P1.

 Observar la gráfica y deducir si se cumple o no la ley de Beer. La cumple

cuando resulta una línea recta que pasa por el origen de las coordenadas.

Aplicación de la fotometría visible en el análisis químico

El análisis cuantitativo representa la mayor aplicación de los métodos fotométricos,
muchos análisis fotométricos cuantitativos pueden llevarse a cabo en la región
visible. Las excepciones principales son los sistemas totalmente orgánicos,
las sales de metales alcalinos que ordinariamente pueden analizarse solo en
las regiones ultravioleta o la infrarroja. Muchos procedimientos fotométricos de
absorción poseen la ventaja de tener una extrema sensibilidad, detectando
concentraciones de sustancias tan pequeñas como 0.001 ppm, y en los análisis
cuantitativos realizados en el nivel de 0.1 mg/L o 0.1 ppm, es posible tener una
precisión de aproximadamente 1%
En condiciones ideales, la sustancia de interés debe absorber en una región
espectral que esté libre de absorción por otros constituyentes de la muestra. Una
longitud de onda en esta región, puede entonces seleccionarse para el análisis, si
es accesible al equipo fotométrico con que se cuenta. Si la condición ideal no
puede satisfacerse, debe realizarse una operación química preliminar que puede
incluir:
a. Formación de complejos (para dar una especie intensamente absorbente).
b. La separación química mediante un método para la precipitación o
extracción de la sustancia buscada.
c. La conversión de ésta a un estado de oxidación diferente o una nueva
forma.
Si no existe ninguna interferencia, el análisis más exacto y sencillo puede llevarse
a cabo haciendo mediciones fotométricas en la longitud de onda del máximo de
una banda de absorción. Esta será la longitud de onda en la que exista el mayor
cambio de la absorbancia con la concentración.

Equipos Materiales y Reactivos

 1 espectrofotómetro. Varias  1 beaker de 250 mL.
celdas (Vidrio, plástico) para el  10 matraces aforados de 25
espectrofotómetro. mL.
 2 beaker de 100 mL.  1 matraz aforado de 50 mL.
  1 matraz aforado de 100 mL.  Solución problema (P1) para
 1 matraz aforado de 250 mL. su identificación y
 1 pipetas volumétrica de 5 mL. cuantificación.
 1 pipeta volumétrica de 10 mL.  Problema (P2) muestra de un
 1 pipeta graduada de 10 mL. acero para determinarle el
 1 probeta de 50 mL. contenido de Mn.
 1 bureta de 25 mL graduación  Un estándar de acero cuyo
1/20 mL contenido de Mn sea conocido.
 1 vidrio de reloj 100 mm de  Permanganato de potasio de
diámetro. peso molecular 158.04 y 99%
 1 frasco lavador. de pureza, ácido nítrico 1:3,
 1 espátula acanalada Peroxidisulfato amónico,
sulfato sódico, ácido fosfórico
 Solución coloreada para medir
concentrado, peryodato de
su % de transmitancia y
potasio, ácido clorhídrico
absorbancia en los diferentes
concentrado, Ácido sulfúrico
modelos de
0.5 molar.
espectrofotómetros.

Determinación Fotométrica de Manganeso en un Acero.

Procedimiento
Tratamiento simultaneo de la muestra y el estándar:
Se describe el tratamiento de la muestra el cual también se debe hacer
simultáneamente al estándar de acero de contenido de Mn conocido y certificado.
 Se Pesa exactamente una muestra de acero entre 0.20 a 0.25 g. Se
Transfiere la muestra a un beaker de 250 mL. En la vitrina de gases, se
Adicionan 25 mL de ácido nítrico diluido (1:3), se cubre el vaso con un
vidrio de reloj, se hierve lentamente hasta que la mezcla se disuelva o
hasta que quede solo una pequeña cantidad de residuo carbonoso, (se
filtra si es necesario lavando el residuo) se adiciona agua destilada o des
ionizada para compensar las pérdidas por evaporación.

 Se hierve durante 1 o más minutos, se retira la muestra del calor y se

añaden en varias etapas cerca de 0.5 g de persulfato amónico, hervir
suavemente durante 10 minutos más para oxidar los compuestos de
carbono, si se forma un color purpuroso de permanganato de potasio o un
precipitado oscuro de dióxido de manganeso, se añaden unos granitos de
sulfato sódico para reducir estos compuestos y después hervir de 3 a 5
minutos más, diluir con unos 25 mL de agua destilada o des ionizada,
añadir 5 mL de ácido fosfórico concentrado, y unos 0.2 gramos de
 peryodato potásico para asegurar la oxidación completa del Mn; calentar a
ebullición hasta la aparición de un color púrpura persistente.

 Enfriar la disolución y transferirla cuantitativamente a un matraz aforado de

100 mL, diluir hasta el enrace con agua destilada o des ionizada y agitar
para homogenizar.

 Se Preparan los blancos fotométricos tanto de la muestra como del

estándar, tomando 25 mL de la disolución anterior en un beaker de 100
mL, se añaden varias gotas de ácido clorhídrico concentrado (usar vitrina
de gases), calentando si es necesario, para reducir el permanganato y
decolorar la solución, la cual debe ser incolora como el agua y se utiliza
para ajustar el cero de A, al medir la A de la muestra y la A del estándar.

 Mida la absorbancia de la muestra y del estándar, si alguna es mayor de

0.8 o si cae en una zona de la gráfica que no es lineal, se hace una
disolución. Si la absorbancia de alguna (muestra o estándar) da menor de
0.15, podrían obtenerse resultados más exactos tanto para la muestra
como para el estándar pesando una mayor cantidad, o aforando a un
volumen más pequeño.

Preparación de patrones:
 Calcular cuántos gramos de permanganato de potasio de peso molecular
158.04 g y 99% de pureza se requieren pesar para preparar 100 mL de una
solución, cuya concentración en Mn sea de 50 mg/L o 50 ppm.

 Prepare técnicamente la solución, usando como solvente agua destilada o

des ionizada.

 Calcular cuántos mL de la solución anterior se deben tomar para preparar

25 mL de cada patrón cuyas concentraciones sean de 2.0 – 8.0 – 14.0 –
20.0 y 26.0 mg/L (ppm) en Mn.

 Prepare técnicamente los patrones usando como solvente agua destilada o

des ionizada.

 Calibre el equipo siguiendo las instrucciones generales o las propias del

espectrofotómetro asignado, use agua destilada o des ionizada para ajustar
el 100% de o cero de. g.

 Mida la absorbancia de cada patrón a 526 nm utilizando como blanco agua

destilada o des ionizada.
 Verifique la correlación de los datos de absorbancia obtenidos.

 Construya la gráfica de calibración. Analice la correlación de los datos de A

Vs C, para verificar si cumple la Ley de Beer.

 Mida la absorbancia a la muestra problema y al estándar utilizando los

blancos fotométricos tratados para cada uno.

 Determine las concentraciones de la muestra y el estándar

 Haga los cálculos necesarios para determinar el % de Mn en la muestra de
acero y en el estándar, calcule el % de error con relación al dato real de Mn
en el estándar; para esta determinación analítica se admite un % de error
de ± 2%.

Calculo De Patrones
Preguntas
 ¿Qué factores afectaron las medidas de la A?
Los factores que afectan la absorbancia están directamente relacionados
con las propiedades intrínsecas del analito, con su concentración y con la
longitud de la trayectoria del haz de radiación al atravesar la muestra.
 ¿Qué factores afectan la medida de la absortividad molar o específica?
La absortividad específica se puede variar, utilizando otra radiación que la
sustancia absorba más, o menos, según se requiera. También se puede
variar llevando la sustancia a un estado químico que presente un mayor o
menor poder absorbente; esta última opción implica generalmente cambiar
también la radiación por una apropiada al nuevo estado de la sustancia.
 ¿Cómo puede determinar la confianza en los resultados analíticos
obtenidos?
Para determinar una alta confiabilidad en los resultados analíticos obtenidos
voy a tener en cuenta los criterios o parámetros del control de calidad como
lo son la precisión, la exactitud, el sesgo, la sensibilidad, el límite de
detección, el límite de cuantificación, la linealidad y el coeficiente de
variación.
 ¿Cómo puede adaptar la técnica fotométrica en la región del visible
para el control de calidad y controlar algunos procesos industriales?
Hoy en día, varias compañías fabrican espectrómetros y con serie de
producción cada vez más grande, otra ventaja de estos nuevos
espectrómetros es que ha salido del laboratorio y pueden utilizarse para
control de calidad en instalaciones de campo o en grandes plantas
industriales con el objetivo de controlar el color o la composición química de
un producto terminado.
 ¿Consultar en qué consisten las sondas y los sensores fotométricos y
cuál es su utilidad?
Los sensores fotométricos se utilizan para medir los niveles de iluminación para la
visión humana. Pueden ser utilizados en una variedad de entornos como
estadios deportivos, oficinas, museos, hospitales y más.
Las sondas fotométricas se utilizan para numerosas tareas de valoración,
como la determinación automatizada de iones metálicos con AEDT, la
 indicación fotométrica por medio de un indicador cromático es la mejor
solución

Aplicación:
DETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN DE HIERRO EN UNA
TABLETA VITAMÍNICA
OBJETIVO GENERAL
 Aplicar la técnica fotométrica para determinar la concentración de hierro
contenido en una tableta vitamínica.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS
 Aplicar las buenas prácticas de laboratorio.
 Aplicar normas de seguridad para el trabajo en el laboratorio.
 Calibrar y manejar correctamente el fotómetro.
 Realizar los cálculos estequiométricos para la preparación de los patrones
 Medir la absorbancia de la muestra y de los patrones de concentraciones
conocidas.
 Analizar los resultados obtenidos, para determinar su confiabilidad y
reportarlos

Materiales y Reactivos
 Espectrofotómetro Genesys 20  2 Matraces aforados de 100
 Estufa mL
 1 Beaker de 100 mL  Carbón Activado
 Sulfato Ferroso Amoniacal  4 Matraces aforados de 25 mL
 1 Equipo de destilación al  1 Barra de agitación de vidrio
vació  1 Probeta
 Ácido Clorhídrico 6 M  1 Celda de vidrio
 1 Pipeta graduada de 5 mL  1 Vidrio reloj
 Hidroquinona (0.5g/50mL)  1 Espátula
 1 Pipeta volumétrica de 5 mL  1 Cronometro
 o-Fenantrolina  Papel filtro banda roja
 1 Pipeta volumétrica de 10 mL 
(0.125g, 5 ml metanol/45 mL)

Procedimiento
Caracterización de la muestra:
  Nombre común:
 Fecha de vencimiento:
 Laboratorio fabricante:
 Lote:
Tratamiento de la muestra
1. Se pesa el contenido de la tableta vitamínica en un beaker de 100 mL, se
registra su peso.

2. Se adiciona 25 ml de ácido clorhídrico 6 M con la probeta, en el beaker que

contiene la muestra.
3. Se pone a calentar la muestra (en campana de extracción) agitando hasta
disolución total.

4. Se adiciona aproximadamente 0.05 g de carbón activado.

5. Se filtra la solución en un matraz aforado de 100 mL limpio y seco, se lava

el filtro con pequeñas porciones de agua destilada hasta completar la
transferencia cuantitativa, se afora.

6. Tres minutos antes de la medición, Se toman 5 ml de la muestra, se le

adicionan 2 ml de hidroquinona y 3 ml de o-Fenantrolina y aforar en un
matraz de 100 mL.

Nota: La hidroquinona es inestable se debe preparar antes de su

utilización.

Preparación de Patrones
1. Se calcula el peso necesario de Sulfato Ferroso Amoniacal (Sal de Mohr)
((NH4)2 Fe+2 (SO4)2 6H2O) teniendo en cuenta su peso molecular y su
porcentaje en pureza, para preparar 100 mL de una solución madre con
una concentración de 30 ppm en Fe.

2. Preparar la solución madre utilizando el material volumétrico adecuado.

Nombre común Fecha de vencimiento Laboratorio fabricante lote.

3. Se calculan los volúmenes requeridos de la solución de 30 ppm Fe para

preparar 25 mL de cada uno de los patrones cuyas concentraciones sean
de 2.0, 3.0, 4.0, 5.0 ppm.
 4. Se procede a la preparación de los patrones técnicamente utilizando
material volumétrico adecuado.

5. Tres minutos antes de la medición, Se le adiciona a cada patrón 2 ml de

hidroquinona y 3 ml de o-Fenantrolina y se afora.

Preparación del blanco

 Se adiciona agua destilada en un matraz de 25 ml, 2 ml de
hidroquinona y 3 ml de o-Fenantrolina y se afora.

Calculo De Patrones
Verificación del máximo de absorción
1. Se toma 2.5 mL de la solución madre en un matraz de 25 mL, se adiciona
2 ml de hidroquinona y 3 ml de o-Fenantrolina y se afora.

2. Se mide la absorción del patrón desde una longitud de onda (λ) de 450
hasta 550 nm, en intervalos de 10 nm.

3. Ajustando el cero de absorbancia en cada longitud de onda (λ) con el

blanco.

4. Se selecciona la longitud de onda donde se encuentre mayor la

absorbancia.

Nota: Los patrones y la muestra se deben medir al mismo tiempo después

de la mezcla de los reactivos colorantes, Ya que la hidroquinona al mezclarla
con la o-Fenantrolina es inestable.

Medición
1. A la longitud de onda seleccionada (510 nm), se ajusta en el fotómetro el
cero de A.

2. Cada patrón y la muestra se deben medir tres minutos después de la

adición de los reactivos, Medir el tiempo con ayuda de un cronometro.

3. Medir la absorbancia de los patrones y la muestra.

4. Llenar la tabla de datos.

5. Si la absorbancia de la muestra se sale del rango de los patrones realizar
la respectiva dilución y tener en cuenta el factor de dilución para calcular la
concentración del Fe en la muestra.

6. Analizar la correlación de patrones, es decir el cambio proporcional de la

absorbancia por el aumento de concentración. De ser necesario hacer las
respectivas correcciones en la preparación o medición de patrones.