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TESIS
QUE PARA OBTENER EL TITULO DE
P R E S E N T A:
Tesis realizada por LORENA MARGARITA PEDRAZA OLIVARES bajo la dirección del
comité revisor indicado, aprobado por el mismo y aceptada como requisito parcial para
obtener el grado de MAESTRA EN CIENCIAS AGROPECUARIAS Y DESARROOLLO
RURAL
Codirector: _____________________________
Revisor: _____________________________
Revisor: ____________________________
Revisor: _____________________________
i
DEDICATORIA
A dios
A mi madre
Por qué se han encargado de hacer de mí una persona de bien, porque gracias a sus
desvelos, trabajos, confianza y amor, llegó hoy a una de mis metas importantes de mi
vida.
A mis hermanos
Juana, Ma. Luisa, Hilario Pedraza Olivares; Por poder contar con su tiempo, apoyo,
sus consejos y creer en mí, en mi camino en la vida.
ii
AGRADECIMIENTOS
Al Dr. Dagoberto Guillen Sánchez, director de tesis, por el compartir sus conocimientos,
pero en especial por su valiosa amistad.
Al Dr. Irán Alía Tejacal, por su gran aportación de sus correcciones en los errores
cometidos en la edición del presente trabajo.
Al Comité Revisor: Dr. Víctor López Martinez, Dr. Porfirio Juárez López. Por sus
correcciones en este trabajo de investigación, sus aportaciones y sugerencias respecto a
su área de conocimientos.
A la M.C. Alyn Sosa Palacios, por su apoyo en el Laboratorio del campo experimental
de la facultad de ciencias agropecuarias – UAEM.
En general a mis nuevos compañeros que conocí en esta etapa de mi vida; Lety Lira,
Adabella, Conde, Issac, Alejandro Rubio, de verdad muchas gracias por su amistad y
brindarme parte de sus experiencias y conocimientos.
A los Productores de calabacita en General que aportaron sus cultivos para la evaluación
de calidad de sus frutos.
iii
ÍNDICE
Pág.
Índice de figuras………………………………………………………………………... vii
Índice de cuadros………………………………………………………………………. ix
Resumen…………………………………………………………………………………. 1
Abstrac……………………………………………………………………………………. 2
I. INTRODUCCION………………………………………………………………….…. 03
iv
3.2.3.4 Squash Mosaic Virus (SqMV)…………………………………………….…… 15
3.2.3.5 Watermelon Mosaic Virus (WMV)…………………………………………. 15
3.3 Factores de precosecha afectan la calidad postcosecha………………………. 15
3.4 Índices de calidad……………………………………..………………………..…… 16
IV MATERIALES Y METODOS………………………………………………………... 17
4.1 Material vegetal en estudio…………………………………………………...…… 17
4.2 Colecta del material vegetal………………………………………………..….…… 17
4.3 Aislamiento y purificación de aislamiento fungosos…………………………….. 19
4.3.1 Siembra directa…………………………………….……………………….…… 20
4.3.2 Cámaras húmedas………………………………...……………………….…… 20
4.4 Identificación morfológica…………………...……………………………….…… 20
4.5 Extracción de ADN e identificación molecular de patógenos………………… 21
4.6 Pruebas de patogenicidad……………………………………………..…….…… 22
4.7 Pruebas de efectividad de fungicidas in vitro….……………………………….. 22
4.8 Análisis de datos…………………………………………………………..….…… 23
4.9 Calidad postcosecha……………………………………….…………………….. 24
4.9.1 Pérdida de Peso……………………………………….……………………...… 25
4.9.2 Determinación de Color………………………………………….………….…… 25
4.9.3 Firmeza…………………………………….…………………………….……...… 25
4.9.4 Apariencia…………………………………………….….……………………...… 25
4.9.5 Producción de CO2 y etileno …………………………………………………… 26
4.9.6 Sólidos Solubles (sst) …………………………………….……………………... 26
4.9.7 pH………………………………………………………...……………………...… 26
4.9.8 Acidez titulable……………………………………….….……………………...… 27
4.9. 9 Análisis de datos…………………………………….………………………....… 27
V. RESULTADOS Y DISCUSIONES……….……………...……………………….. 26
5.1 Aislamiento de enfermedades fungosas………………………………………..… 29
5.1.1 Pudrición por Fusarium ……………………………………………………....... 29
5.1.2 Antracnosis causada por Colletotrichum…………………….......………..….. 30
5.1.3 Pudrición por Phythopthora…………………………...………………...…...… 31
5.1.4 Pudrición morena Botritys cinerea…………………………………………….. 32
5.1.5 Alternaria spp. ………………………………………………………...………… 33
v
5.2 Pruebas de patogenicidad ………………………………………………………. 34
5.3 Identificación molecular………………………………………………………....... 34
5.4 Control químico in vitro de fungicidas………………...………….…………...… 36
5.5 Calidad postcosecha de los híbridos Adela y Terminator…………………….. 38
5.5.1 Pérdida de Peso…..……………..……………………...……………………..... 38
5.5.2 Color………………………………………………………...…………………….. 40
5.5.3 Firmeza………………………………………………………...…………………. 42
5.5.4 Apariencia……………………………………………......……………………….. 43
5.5.5 CO2……………………………………………......………………………………. 44
5.5.6 Etileno………………………………………………………...…………………... 44
5.5.7 Solidos Solubles Totales (ºBrix) ……….……………...……………………..... 45
5.5.8 pH………………………………………………………...……………………...... 46
5.5.9 Acidez titulable………………………………………………………...………….. 47
VI. CONCLUISONES………………………………………………………...………… 49
VII. LITERATURA CITADA ……………………………………………………….... 50
vi
Índice de figuras
Pág.
Figura 1. Síntomas de frutos enfermos observadas durante la selección y
recolección de los frutos de los Híbridos Adela y Terminator en
temporal y de lluvia; a) Amarillamiento de fruto en desarrollo, b)
Pudrición de la corona, c) Pudrición Grisácea, d) Pudrición Negra, e)
Pudrición en Pedúnculo, f) Pudriciones con presencia de micelio
blanco……………………………………………………………………… 28
Figura 2. Síntoma de pudrición blanca algodonosa causada por Fusarium
equiseti: a) Pudrición blanca en fruto postcosecha b) Cepa en PDA
de Fusarium equiseti crecimiento blanco algodonoso y c)
Macronidios……………………………………………………………. 30
Figura 3. Síntomas de antracnosis en frutos de calabacita: a) Fruto en
campo temporada con síntomas de antracnosis, b) Cepa del hongo
Colletotrichum, c) Conidios de Colletotrichum
spp………………………………………………………………………… 31
Figura 4. Patógeno Phytophthora: a) Pudrición acuosa, b) Cepa de
Phytophthora en PDA, c) Esporangios de 33
Phytophthora………………………………………………………………
vii
Figura 8. Efectividad de los fungicidas utilizados para el control in vitro de
Colletotrichum spp……………………………………………………… 36
Figura 11. Pérdida de peso de los dos híbridos en los dos ciclos de
producción agrícolas en Tlayacapan, Morelos……………………… 39
Figura 12. Color de los frutos de calabacita en dos hibridos y dos ciclos de
producción en Tlayacapan, Morelos. a) Luminosidad, b) 41
cromaticidad y c) Angulo de matiz (ºHue)………………………………
viii
Índice de cuadros
Pág.
ix
ENFERMEDADES Y CALIDAD POSCOSECHA DE CALABACITA (Cucurbita pepo L.)
EN TEMPORAL Y RIEGO EN LOS ALTOS DE MORELOS
Resumen
1
POSCOSECHA DISEASES AND QUALITY OF CALABACITA (Cucúrbita pepo L.) IN
TEMPORARY AND IRRIGATION IN THE ALTOS DE MORELOS
Abstract
2
I. INTRODUCCION
Según datos de la FAO 2016 y SIAP 2018, se tiene el registro de los plaguicidas que
en los últimos años se han utilizado en la agricultura mexicana se tiene un promedio 42,
233 toneladas de fungicidas. Pero debido a la falta de monitoreo no se tienen cifras de las
concentraciones utilizadas. Por lo que evidencia el uso indiscriminado de agroquímicos
por falta se asesorías técnicas en campo.
4
II. OBJETIVOS E HIPOTESIS
2.2 Hipótesis
5
III. REVISION DE LITERATURA
El género Cucurbita es uno de los más importantes, cuenta con 27 especies. Las
especies de este género forman el grupo conocido como calabazas, de las cuales cinco
han sido domesticadas: C. pepo L. (calabaza de india), C. ficifolia Bouché (chilacayote),
C. moschata (Duchesne ex Lam.) Duchesne ex Poiret (calabaza de castilla); C. maxima
Duchesne ex Lam (calabaza kabosha) y C. argyrosperma Huber (calabaza pipiana), son
importantes desde el punto de vista económico, nutricional y cultural tanto a nivel nacional
como mundial. Las partes alimenticias van desde los frutos inmaduros, maduros, semillas,
flores y algunas partes vegetativas. Además del uso alimenticio, las calabazas se pueden
emplear con fines industriales, comerciales, medicinales y tradicionales como recipientes
para artesanía (Lira-Saade, 1995; Villanueva, 2007).
6
3.2 Enfermedades del cultivo de calabaza
Como cualquier otro cultivo, las calabazas son afectadas por plagas y enfermedades
que disminuyen su rendimiento y calidad de los frutos. Por lo general todas las
cucurbitáceas son afectadas por las mismas enfermedades, las cuales pueden ser
causadas por hongos, bacterias o virus. Estas enfermedades pueden afectar las plantas
en diferentes etapas de su desarrollo y la expresión de los síntomas dependerá de varios
factores, entre ellos la susceptibilidad del cultivo, la edad de la planta y las condiciones
ambientales prevalecientes.
No todos los frutos de calabacita que son cosechadas en un predio llegarán a ser
consumidas, esto se debe a que algunas de estas sufren daños físicos y térmicos,
deterioro y pudrición durante las etapas de manejo que se efectúa previo al consumo.
Este tipo de pérdidas podría reducirse en una forma considerable si se realiza un manejo
adecuado durante y después de la cosecha. Se recomienda cosechar frutos en etapa
idónea de madurez; manejar frutos cosechados con mucho cuidado durante todo el
proceso hasta el consumidor final; realizar prácticas de tipo sanitario para reducir la
incidencia de patógenos que se encuentren en los frutos. Al igual almacenar los frutos de
calabacita bajo condiciones favorables. Y por último considerar el tiempo en que los frutos
son cosechados, almacenados hasta el momento de consumo. El tiempo de cosecha a
consumo es importante ya que es un factor de riesgo que implica perdidas tanto de las
características que debe tener un fruto en fresco, como el tiempo que transcurre en el
almacenamiento y este último afecta la apariencia ya qué los frutos pueden sufrir daños,
deterioro y pudrición (Beale et al., 2001).
7
de las hojas más viejas se pueden observar manchas irregulares de color ámbar a
marrón, que en ocasiones pueden estar rodeadas por un halo amarillo. Eventualmente
las manchas se agrandan hasta que ocurre marchitez total de las hojas. En el tallo
principal los síntomas comienzan en el área de la corona y se manifiestan como estrías
de color verde que se extienden a lo largo del mismo; estas estrías con el tiempo se
tornan marrón oscuro. A medida que se desarrolla la enfermedad estas lesiones rodean
por completo el tallo, estrangulándolo y evitando así el flujo normal de agua y nutrientes,
como consecuencia las hojas se marchitan. En asociación a estas lesiones podría estar
presente un exudado gomoso color ámbar y los picnidios, que son las estructuras de
reproducción del hongo. Ambos síntomas son característicos de esta enfermedad. Este
hongo también puede afectar los frutos causando la enfermedad que se conoce como
pudrición negra. Este patógeno se puede transmitir por semilla y puede sobrevivir en
tallos enfermos y en residuos de cosecha en el suelo por cuatro a cinco años. La
humedad alta y las temperaturas cerca de 26.6 °C son factores importantes para el
desarrollo de esta enfermedad, siendo la humedad lo más importante. El hongo se
dispersa por el viento, la lluvia o a través del rocío. Se necesita de la presencia de agua
libre para la germinación de las esporas (Rosa, 1998).
3.2.1.4 Antracnosis
Esta enfermedad, causada por el hongo Colletotrichum orbiculare (Berk & Mont.) Arx
(sin. C. lagenarium (Pass.) Ellis & Halst.) (estado sexual: Glomerella lagenarium F.
Stevens), no es muy común en la calabaza. Los síntomas iniciales que se observan en
9
las hojas de la calabaza son manchas de apariencia acuosa, circulares y amarillas, las
cuales al aumentar de tamaño se oscurecen y se tornan marrón. Por lo general la parte
central de la lesión se seca, se adelgaza, adquiere un aspecto quebradizo y se desprende
dejando huecos irregulares. En los peciolos y tallos las lesiones son superficiales,
amarillas y alargadas. Estas pueden unirse formando lesiones de mayor tamaño. Este
patógeno puede sobrevivir en las semillas de los frutos infectados, los residuos de
cosecha y en plantas hospederas. Se disemina por el viento, la lluvia, los instrumentos de
labranza y los trabajadores. El desarrollo de esta enfermedad se favorece con
temperaturas moderadas y un ambiente húmedo y lluvioso (Alahakoon et al.,1996; Lu et
al., 2000).
Esta enfermedad, causada por el hongo Alternaria cucumerina (Ellis & Everh.) Elliott,
afecta a la mayoría de las cucurbitáceas. Afecta principalmente las hojas y
ocasionalmente produce manchas en los frutos. En las hojas, se observan lesiones de
10
color café obscuro, pequeñas y de forma circular. En ocasiones está presente un halo
clorótico o verde claro. Al principio las lesiones son acuosas, luego aumentan de tamaño
formando grandes áreas necróticas de forma circular con anillos concéntricos obscuros
dentro de las manchas. Eventualmente se afecta toda la hoja y ocurre la defoliación, lo
cual expone los frutos al sol ocasionándole escaldadura. Este hongo puede sobrevivir de
uno a dos años en residuos de cosechas, malezas y otros cultivos. El patógeno se
disemina por el viento y por el salpicado de las gotas de lluvia, por los trabajadores e
implementos de trabajo. Esta enfermedad se favorece con el aumento de humedad en las
hojas y las temperaturas moderadas (Rosa, 2012).
Esta enfermedad puede ser causada por diferentes especies de Phytophthora. Los
síntomas iniciales son manchas de apariencia acuosa con leves depresiones. El lado de la
fruta en contacto con el suelo se afecta primero, extendiéndose gradualmente los síntomas
y el daño a la parte superior. Bajo condiciones de humedad este hongo produce una masa
de micelio blanco de apariencia húmeda, que contiene los esporangios de Phytophthora, el
cual puede cubrir toda la fruta afectada ocasionando pudrición blanda. Eventualmente la
fruta colapsa. Frutas cosechadas aparentemente sanas pueden presentar síntomas
durante el transporte y almacenamiento. Este patógeno sobrevive en residuos de cosecha
y en el suelo por dos años o más. Se puede diseminar por insectos, obreros y maquinarias
agrícolas (Lim, 2010).
Esta enfermedad, ocasionada por varias especies del hongo del género Fusarium,
no es muy común en la fruta de calabaza. Los síntomas varían de acuerdo a la especie
de hongo que infecte la fruta. Las lesiones pueden presentarse en cualquier parte del
fruto, pero son más frecuentes en el extremo proximal (área cercana entre el pedúnculo
“stemend” y el fruto) y en el área de la fruta en contacto con el suelo. El tejido afectado
11
muestra una pudrición firme y de apariencia corchosa o esponjosa; en condiciones
húmedas, es cubierto por una masa de esporas de color blanco a rosado. La lesión
puede ser superficial o extenderse hasta la cavidad de las semillas. No se necesita de la
presencia de heridas para que ocurra la infección ya que bajo condiciones de humedad el
hongo puede penetrar directamente. Sin embargo, la presencia de heridas facilita la
entrada del hongo. El crecimiento óptimo de este hongo es entre 21.6° y 28.8 °C. La
fruta puede infectarse si el cuchillo con que se cosecha toca el suelo o algún tejido
infectado. La semilla puede ser portadora de la enfermedad (Rosa, 2003, Smith, 2007).
Esta enfermedad es causada por Botrytis spp. En cada uno de los cultivos y bajo
condiciones de humedad relativa alta, la pudrición gris puede afectar a los frutos en
general. Además de que esta enfermedad no solo se produce en campo, si no que afecta
a los productos en poscosecha, comenzando como una infección latente en el cultivo y
posteriormente desarrollándose durante la recolección, transporte y almacenamiento
(Rosa et al., 2013).
Los síntomas iniciales producidos por Pseudomonas syringae van Hall pv.
lachrymans (Smith and Bryan) son pequeñas manchas de apariencia acuosa en las hojas.
A medida que la lesión se va expandiendo se delimita por las nervaduras de la hoja, lo que
le confiere apariencia angular. Las manchas están rodeadas por un halo amarillo. Según
12
se desarrolla la enfermedad, las zonas infectadas se tornan color gris, se agrietan y
generalmente se desprenden del tejido sano dejando grandes agujeros irregulares. En
frutos se observan manchas circulares diminutas de apariencia acuosa que no se
distinguen fácilmente cuando el centro de la lesión se hunde. A medida que avanza la
enfermedad, en las primeras infecciones, se desarrollan lesiones color marrón en la
cáscara de la fruta. Los frutos infectados en el campo en etapas tempranas se deforman y
curvean. Con frecuencia, las lesiones exudan una sustancia viscosa que luego se seca.
Las lesiones adquieren una tonalidad blanca y se agrietan permitiendo que otros
organismos penetren, los cuales, junto a la infección inicial, causan pudrición blanda. Las
lesiones y el exudado bacteriano también pueden desarrollarse en los peciolos y tallos.
Esta bacteria puede ser portada en la semilla. La infección ocurre durante la germinación.
La bacteria puede persistir hasta por dos años y medio en los residuos de cosecha y en
las hojas secas. Es diseminada por el salpicado de la lluvia, el rocío, los insectos, los
trabajadores y la maquinaria agrícola. La enfermedad puede alcanzar proporciones
epidémicas durante los períodos húmedos (Hsieh et al., 2006; Rosa, 2012).
El follaje de las plantas infectadas por este virus muestra mosaicos verdes,
deformación, enrizado, ampollas y distorsión. Las hojas apicales frecuentemente son
estrechas y en ocasiones pueden reducirse a solo la vena central. Los frutos se deforman,
muestran mosaicos y cambios en color. Este virus causa enanismo severo en las plantas.
Los áfidos son los principales transmisores de este virus, entre ellos Aphis gossypii Glover
y Myzus persicae (Sulzer). También puede ser transmitido mecánicamente por el personal
y el equipo de campo (Zitter et al., 2004).
El follaje infectado por este virus presenta distorsión severa, mosaicos amarillos,
ampollas verdes oscuro, necrosis, deformación y reducción en la lámina de la hoja. Este
virus ocasiona enanismo severo en la planta; los entrenudos del tallo son bien cortos. Los
frutos de las calabazas desarrollan protuberancias, resultando en una prominente
deformación. Este virus es transmitido por un gran número de especies de áfidos, entre
ellos Aphis gossypii Glover, A. citricola Patch. y Myzus persicae (Sulzer). También puede
ser transmitido mecánicamente por el personal y el equipo de campo. No se transmiten a
través de la semilla, aunque existe evidencia circunstancial que indica que el ZYMV
puede ser transmitido por semilla y puede diseminarse por los cuchillos utilizados durante
la cosecha. Algunas malezas y otras cucurbitáceas son hospederas de este virus (Conti et
al., 2000).
Los síntomas más severos causados por este virus se observan en calabaza y en
algunos cultivares de melón. Los primeros síntomas en las plantas afectadas aparecen
14
en las hojas más jóvenes. Estas hojas se curvan hacia abajo y eventualmente presentan
áreas de mosaico amarillo, distorsión, arrugamiento y reducción del tamaño. Los
entrenudos de las plantas infectadas se acortan causando enanismo severo. Los frutos se
deforman, presentando verrugas, moteados y reducción drástica en el tamaño. En los
frutos severamente infectados no hay producción de semillas. Este virus tiene un amplio
rango de hospedantes y es transmitido principalmente por los áfidos, incluyendo el pulgón
verde, Myzus persicae (Sulzer). Además, es transmitido mecánicamente (Zitter y Murphy,
2009; Fisher, 2013).
Las plantas infectadas por este virus presentan enrizamiento, amarillamiento con
áreas verdes entre las venas de las hojas, deformación y moteado. Este virus causa
enanismo en las plantas infectadas; en los frutos se observa moteado y deformación.
Puede ser transmitido por la semilla infectada, por medio de algunos escarabajos
(Acalyma spp. y Diabrotica spp.), y mecánicamente por los trabajadores (Zitter et al., 2004;
Persley et al., 2010; Lecoq y Desbiez, 2012).
Este virus anteriormente se conocía como WMV-2. Cuando este virus está presente
las hojas muestran varios grados de distorsión, mosaicos verdes, moteados, anillos
cloróticos, una prominente rugosidad y las venas adquieren una tonalidad verde oscuro.
Los frutos no son muy afectados. Este virus es transmitido por diferentes especies de
áfidos, entre las que se encuentran Aphis gossypii Glover, A. spiraecola Patch, Myzus
persicae (Sulzer) y Toxoptera citricida (Kirkaldy) y sobrevive en leguminosas silvestres y
otras plantas de las Malvaceae y Chenopodiaceae. Se transmite fácilmente de forma
mecánica pero no se transmite en la semilla (Zitter et al., 2004).
15
3.3 Factores de precosecha que afectan la calidad postcosecha
16
IV. MATERIALES Y METODOS
17
Xalostoc, para su análisis. Al mismo tiempo se colectaron frutos sanos y se llevaron al
laboratorio de Producción Agrícola de la Facultad de Ciencias Agropecuarias de la
Universidad Autónoma del Estado de Morelos (UAEM) para las pruebas de calidad
postcosecha. se evaluó pérdida de peso, respiración, etileno, sólidos totales, acidez
titulable, pH, color y textura cada 48 Horas.
18
Calabacita tipo zucchini verde
grisáceo, frutos uniformes, de
forma cilíndrica y lisa, con
Hibrido
lenticelas muy finas y cicatriz
Terminator floral reducida, con hábito de
crecimiento semiabierto que
facilita la cosecha manual y
alta productividad de frutos.
Presenta alta resistencia a los
virus que comúnmente
afectan el rendimiento de la
planta, brindando un ahorro
en costos para el control de
enfermedades; por esta
razón, Terminator se adapta a
las principales zonas
productoras.
Fuente: Seminis (https://www.seminis.mx/product/terminator/221).
El material colectado en campo antes de procesarlo se lavó muy bien con agua
corriente, para eliminar todos los restos de tierra presentes, una vez lavado el material, se
procedió a preparar el área en de trabajo, en donde se realizó el aislamiento: la campana
de flujo laminar se limpió con alcohol al 70%, se utilizaron 3 cajas Petri estériles para el
lavado del material vegetativo, sanitas estériles y agua bidestilada. El aislamiento de
hongos fitopatógenos fue mediante dos métodos:
19
4.3.1 Siembra directa
Los frutos previamente limpios y secos se colocaron en cámaras húmedas (en platos
de unicel se colocarán sanitas y se humedecieron con agua destilada estéril y se
colocaron los frutos y se colocaron en bolsas de polietileno transparentes para dar las
condiciones de humedad relativa). Se dejaron el tiempo necesario hasta que hubo
crecimiento micelial de hongos. Posteriormente se procedió a aislar y separar de acuerdo
a las características de crecimiento y color de la colonia.
20
4.5 Extracción de ADN e identificación molecular de patógenos
La extracción del ADN genómico se realizó de acuerdo con el método del bromuro
de cetil-trimetil-amonio (CTAB). De cada aislado se raspó la superficie usando una
espátula de acero inoxidable estéril, el micelio se depositó en un mortero estéril, se le
agregó nitrógeno líquido y se maceró con un pistilo y se transfirió a un tubo de
microcentrifuga de 1.5 mL con 500 µL de solución buffer Dellaporta, se mezcló con vórtex
por 10 s y se incubó por una hora a 65 °C. Se agregan 700 µL de Cloroformo-alcohol
isoamílico (24:1 v/v) posteriormente se pasó por vórtex por 10 s y se centrifugó
(Centrifuge 5810 R Eppendorf) a 13 000 rpm durante 10 minutos. Con una micropipeta, el
sobrenadante se transfirió a un tubo nuevo de microcentrifuga de 1.5 mL y se agregó 700
µL de isopropanol. Los tubos se mezclaron por inversión de cuatro a cinco veces y se
almacenaron a -20 °C durante 10 minutos, luego se centrifugó a 13 000 rpm durante 10
minutos, para sedimentar el DNA y desechar el sobrenadante. Se agregó a cada tubo 500
µL de etanol al 70 %, se centrifugó a 13 000 rpm por 5 minutos y se desechó de nuevo el
sobrenadante. En papel absorbente se colocan los tubos hacia abajo para escurrir el
etanol, posteriormente cuando la pastilla estuvo seca se agregó 100 µL de agua estéril
libre de DNAsa y RNAsa. La calidad y concentración del ADN se cuantificó con un
espectrofotómetro Nanodrop Lite (Thermo Scientific ®, EE.UU.), Finalmente el DNA se
almacenó a -20°C para su uso posterior.
21
4.6 Pruebas de patogenicidad
9 Oxicloruro de
Cupravit
Sales Contacto 0.6g 0.05g 0.004g
23
Cobre Inorgánicas
Folpet (Tricloro
10 Mercaptano Contacto 0.46g 0.031g 0.015g
Metil) Folpan 80 WD
11 Clorotalonil Trevanil Cloronitrilos Contacto 0.796g 0.531g 0.256g
12 Benomil Benomil 50 WP Benzimidazol Sistémico 0.112g 0.075g 0.037g
13 Alisina / Ajo/Cebolla Orgánico Sistémico 10mL 7.5mL 5mL
cepaenos
14 Difeconazol Score 250 EC Triazol Sistémico 1µL 0.12µL 0.08µL
15 Nbelyax Exodusmax Contacto 0.75µL 0.375µL 0.25µL
16 Flavonoides Albahaca Orgánico Sistémico 10mL 7.5mL 5mL
Dt - Dx
ET = -------------- x 100
Dt.
ET=Eficacia de tratamiento
Dt=Diámetro en el testigo
Dx=Diámetro en cada tratamiento
24
de los frutos fueron dejados a temperatura ambiente. Las pruebas se realizaron en un
diseño completamente al azar.
Para esta variable se tomaron 10 frutos de los dos híbridos, a los cuales se les dio
seguimiento de su peso cada 48 horas durante seis días. Se utilizó una balanza digital
(Ohaus). Para determinar la pérdida de peso se utilizó la formula siguiente:
4.9.3 Firmeza
4.9.4 Apariencia
La apariencia externa de cada fruto se evalúo con una escala visual donde
1=excelente, 2= Aceptable y 3= mala. El producto clasificado se designa por su tamaño y
grado de calidad.
25
4.9.5 Producción de CO2 y etileno
4.9.7 pH
Se pesó 1 gramo del fruto de calabacita ya picada en una balanza digital “OHAUS”, se le
adicionaron 10 mL de agua destilada con un pH de 7.0, la muestra se licuo y se filtró con
papel filtro de poro cerrado en un vaso de precipitado de 20 mL. Una vez ya filtrada la
muestra se tomó una alícuota de 5 mL y se pusieron en un vaso de 10 mL para colocarlo
en el titulador automático, previamente calibrado con soluciones buffer de pH de 4 y 7. El
pH obtenido se expresó directamente en unidades de iones de Hidrogeno.
26
4.9.8 Acidez titulable
Donde A= acidez
27
V. RESULTADOS Y DISCUSIONES
a) b) c)
d) e) f)
28
5.1 Aislamiento de enfermedades fungosas
La pudrición blanca algodonosa en ambos híbridos fue causada por Fusarium sp,
este hongo causa pudriciones tanto en precosecha como es postcosecha (Figura 2). El
hongo aislado en PDA mostró micelio aéreo abundante, inicialmente blanco y cambiaba a
rosado o café con forme pasaba el tiempo. Se observaron macroconidios largos y
delgados, falcados que presentaban de 4 a 6 septos, la célula apical elongada, filiforme y
curvada (Figura 2). La célula basal en forma de pie, de 29.85-62 x 3-4 μm. Se observaron
clamidosporas globosas o subglobosas de pared gruesa, formado grupos, cadenas o
solitarias lo que nos indicó que el agente causal de esta enfermedad se trataba de
Fusarium equiseti. Estas características nos ayudaron a diferenciar de los géneros de F.
oxysporum, F. compactum, la cual se distingue por producir macroconidios más robustos
y produce pigmentos cafés en el medio de cultivo y F. scirpi la cual produce microconidios
abundantes en polifiálides (Leslie y Summerell, 2006).
29
de la fresa en la región de los altos de Morelos, parcelas que se rotan con el cultivo de
calabacita en los diferentes ciclos de cultivo.
30
a b c
Las dimensiones de los esporangios fueron de longitud por ancho 50.85 x 23. 55
µm, lo cual se asemejan a P. capsici, y que coincide con lo reportado por Ibarra et al.
(2015), quienes caracterizaron a Phytophthora capsici como patógeno de especies
hortícolas presentes en la zona Noreste de la provincia de Buenos Aires, Argentina.
31
Figura 4 . Daños y características de Phytophthora capsici: a) Pudrición blanda en fruto, b)
Cepa en medio PDA, c) Esporangios alimonados.
32
aa b c
a b c
33
5.2 Pruebas de patogenicidad
Las inoculaciones de los hongos aislados Phythopthora sp., Fusarium equiseti,
Colletotrichum sp., Alternaria sp., y Botritys sp., en los 140 frutos inoculados causaron la
infección y síntomas similares a los observados en los frutos colectados en campo y
conforme avanzo la enfermedad se presentó crecimiento micelial. Los reaislamientos
correspondieron a los patógenos inoculados. Esto indica que los patógenos aislados son
los agentes causales de las pudriciones en frutos de calabacita de los híbridos Adela y
Terminator en los altos de Morelos (Figura 7).
Cuadro 3. Similitud de las secuencias amplificadas de las regiones EF1-alpha y rpb2 del
ADN ribosomal con las depositadas en el GeneBank del aislamiento de Fusarium
obtenidos de los híbridos de calabacita Adela y Terminator en los Altos de Morelos.
34
En México hay un reporte de F. equiseti en el cultivo de piñón (Jatropha curcas) en
el año 2012, causando necrosamiento y muerte descendente en los tallos (Herrera-Parra
35
5.4 Evaluación in vitro de fungicidas
4).
100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
Tratamientos
Para el control de Alternaria sp. los productos con los que se obtuvo una eficiencia
del 100% fueron Procloraz (con las dosis 0.375 µL, 0.187 µL y 0.125 µL) y manzate (con
las dosis 0.4, 0.3 y 0.2 g). Sin embargo, Difeconazol en sus dosis de 1, 0.12 y 0.08 µL se
obtuvo una inhibición del 94 al 95% (Figura 9). A pesar que los productos biológicos no
36
presentaron eficacias superiores al 80%, destacó ajo/cebolla/pimienta con 67.54% a dosis
de 10 mL (Cuadro 4).
Tratamientos
Figura 9. Efectividad de fungicidas uti lizados para el control in vitro de Alternaria sp.
37
95.85 100 100 100
92.11
100 85.45
80.12
74.54 78.59
80
50.12
60 44.25 47.91 42.35
33.97 35.34
40
20
0
0
Tratamientos
Figura 10 . Efectividad de los fungicidas utilizados para el control in vitro de Fusarium
equiseti.
Los resultados indicaron que la pérdida de peso difiere entre genotipos y ciclo de
producción debido a que el genotipo Terminator registró los valores más altos. En el ciclo
de temporal el hibrido Terminator en el segundo día perdió 8% de su peso y en riego
8.6%, en el día cuatro perdió 15.7%. Mientras que el Hibrido Adela perdió menos peso
con 4.9 y 7.9 en el día dos en temporal y riego respetivamente. En promedio la pérdida
de peso en temporal es de 4% y 2.45% para Terminator y Adela por día respectivamente
(Figura 11). Mientras que en riego es de 9.1% para Terminator y 8.8% para Adela. Esto
se debe a las temperaturas que se presentaron en las dos temporadas, siendo en la
temporada de riego las temperaturas más altas y por lo tanto hay mayor pérdida de peso.
Lo anterior concuerda con lo reportado por Muy et al (2000), quienes señalan que la
reducción de la transpiración por altas HR y baja temperatura permite mantener por
38
mayor tiempo el agua y la calidad de turgencia en el producto, reportando este
comportamiento para frutos de pepino. Similar a lo observado en calabacita.
TEMPORAL RIEGO
16 16
14 14
12 12
10 10
8 8
6 6
4 4
2 2
0 0
1 2 3 1 2 3 4
DIAS DÍAS
Adela Terminator Adela Terminator
Figura 11. Pérdida de peso en frutos de calabacita de dos híbridos en los dos ciclos de
producción en Tlayacapan Morelos.
39
5.5.2 Color
Angulo de matiz (°Hue). Para esta variable no hubo diferencia debido a que los frutos
de los dos híbridos son del mismo color. Terminator presentó un mayor ángulo de matiz
con ángulo de 103.95° hacia el color verde, contra °Hue=101.93 en Adela en temporal
(Figura12c). Durante el almacenamiento el ángulo de matiz se redujo ligeramente sin
síntomas de amarillamiento en los frutos verdes.
40
Tlayacapan, Morelos. a) Luminosidad, b) cromaticidad y c) Angulo de matiz (ºHue).
41
5.5.3 Firmeza
En general los 2 híbridos de calabacita mostraron una variación mínima en firmeza
en temporal, pero en Terminator se notó más la disminución. El genotipo Adela mantuvo
su firmeza en el ciclo de Temporada, posiblemente se debe a que las temperaturas
ambientales no son tan altas. Sin embargo, el comportamiento en el ciclo de riego desde
el día cero las variantes de los resultados fueron estadísticamente significativas, aunque
su coeficiente de variación se mantuvo en el mismo valor; el hibrido Adela disminuyo su
porcentaje de firmeza hasta en un 15% con respecto al día uno. La diferencia de firmeza
entre Terminator y Adela fue de 6.08% al cuarto día en el ciclo de riego (Figura 13).
TEMPORAL RIEGO
22.00
25.00
19.00 20.00
15.00
16.00
1 2 3 10.00
DIAS 1 2 3 4
DIAS
Adela Terminator
Adela Terminator
Figura 13. Firmeza de frutos de dos híbridos de calabacita en dos ciclos de producción en
factor Tlayacapan, Morelos.
42
5.5.4 Apariencia
La apariencia de los frutos en los dos híbridos no presentó diferencias. Los frutos
deben reunir las características externas ideales para ser comercializados, durante su
vida de anaquel sufren algunos cambios en el caso de frutos climatéricos por lo que el
color y su apariencia juegan un papel muy importante en postcosecha, almacenamiento y
comercialización para que agraden al consumidor final (Warr et al., 1983). Esta es la
primera impresión que debe cumplir cualquier fruto por los que se evalúan de acuerdo a
una escala Hedónica visual (prueba afectiva) que permite anticipar la aceptabilidad que
estos tendrán, hace referencia en la elección de los frutos de calabaza; por tanto, es
importante que los frutos tengan una apariencia, color, tamaño uniformidad y firmeza,
esta debe ser la más aceptada posible, el hecho de darle una buena apariencia proviene
desde el manejo adecuado en campo al hacer la cosecha. De acuerdo con los datos
obtenidos de las variedades los frutos de calabacita en los 2 ciclos de producción de
calabacita, el segundo día fue el mejor resultado en este tiene una apariencia aceptada y
para ambas variedades los valores se establecieron del 1 – 3 donde el 1 = excelente, 2 =
bueno, 3 = rechazo (Figura 14).
TEMPORAL RIEGO
3
2.8
2.6
2.3
2.2
1.8
1.8
1.4 1.3
1 0.8
1 2 3 4
1 2 3
días
días
Adelita Terminator Adelita Terminator
Figura 14. Apariencia de frutos en dos híbridos de calabacita en dos ciclos de temporal en
Tlayacapan, Morelos.
43
5.5.5 Producción de CO2
Para esta variable al determinar los resultados y hacer la comparación de medias
respectivamente se determinó que el hibrido Adela presentó valores muy bajos con
respecto a Terminator, con valores de 1.2 y 0.4 % de emisión de CO 2 en los ciclos de
temporal y riego respectivamente.
TEMPORAL RIEGO
1.3 0.6
0.5
1.25
0.4
1.2
0.3
1.15
0.2
1.1 0.1
1.05 0
1 2 3 1 2 3 4
días
días
Adela Terminator
Adela Terminator
44
En el ciclo de riego los frutos tuvieron un comportamiento completamente diferente
y en este caso el hibrido Terminator comenzó con un alza en el primer día de la
evaluación con 0.3 y al transcurso del tiempo disminuyo la emisión de este gas; por otro
lado, el hibrido Adela desde el día cero la cantidad de emisión de Etileno fue nula y
conforme transcurrió el tiempo se mantuvo con cantidades bajas, inferiores a 0.005
(Figura 16).
TEMPORAL RIEGO
0.03
0.05 0.048398
0.025
836
0.04 0.02
0.032559
0.03 69 0.015
0.02 0.01
0.01 0.005
0 0 0 0
1 2 3 1 2 3 4
días
días
Adelita Terminator Adela Terminator
Figura 16. Producción de etileno en frutos de dos híbridos de calabacita en dos ciclos
de producción en Tlayacapan, Morelos.
TEMPORAL RIEGO
0.65 0.6
0.6 0.55
0.5
0.55 0.45
0.4
0.5 0.35
0.3
0.45
0.25
0.4 0.2
1 2 3 1 2 3 4
días días
Figura 1 7 . Dinámica de los sólidos solubles totales ( °Brix) en frutos de dos híbridos de
calabacita en dos ciclos de producción en Tlayacapan, Morelos.
5.5.8 pH
Los frutos de calabacita que se mantuvieron en el laboratorio a temperatura
ambiente, en el ciclo de lluvias no presentaron diferencias significativas entre variedades
y ciclos de producción. En la figura 18 se puede observar que los valores de pH tienden
a disminuir con forme avanza el tiempo, esto indica que los frutos tienden a hacerse más
ácidos y por lo tanto se muestra un incremento de los sólidos disueltos (Azucares,
ácidos) y se le puede atribuir a la perdida de agua que está contenida en los frutos; otro
de los factores que puede influir es el estrés hídrico de los frutos y pudo inducir una
hidrolisis de polisacáridos a la conversión de azucares y así aumentar los SST.
46
RIEGO
TEMPORAL
5.4
6 5.374
5.8 5.3 5.298
5.6
5.2 5.204
5.4 5.177
5.2 5.1237 5.108
5.1 5.089
5
1 2 3 5 5.005
días 1 2 días 3 4
Adela Terminator Adela Terminator
Figura 18. Acidez ( pH) en frutos de dos híbridos de calabacitaen dos ciclos de producción
en Tlayacapan, Morelos.
LLUVIAS RIEGO
0.35 0.33
0.3
0.28
0.25
0.23
0.2
1 2 3 0.18
días 1 2 días 3 4
Adelita Terminator Adela Terminator
Figura 19. Acidez titulable en frutos de dos híbridos de calabacitaproducidos en dos ciclos
en Tlayacapan, Morelos.
47
Cuadro 4. Medias de las variables de calidad de 50 frutos de calabacita Adela y Terminator colectadas en temporal y riego en
los altos de Morelos.
48
VI. CONCLUSIONES
Los productos que tuvieron una efectividad al inhibir el 100% del crecimiento
de F. equiseti fueron Tiabendazol, Carbendazin, para Alternaria spp. Procloraz
y Mancozeb y para Colletotrichum spp. Benomil, manzate, colorotalonil y
oxicloruro de cobre.
49
VIII. LITERATURA CITADA
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