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Incrustación de plástico para

microscopía de luz 8
Neil M. Mano
durante la década de 1950 proporcionó mejores resultados y

Introducción
estimuló el desarrollo de la microscopía electrónica.Nunn
(1970) y Glauert (1987) discutir las propiedades de los
La cera de parafina es un medio de inclusión
medios de inclusión adecuados para estudios
adecuado para la mayoría de los tejidos, ya que
ultraestructurales.
combina la idoneidad del soporte del tejido con la
facilidad de corte en un micrótomo estándar. Los
espesores de sección de aproximadamente 5! M son
Implantes y tejidos duros
satisfactorios para la mayoría de los propósitos de
diagnóstico, aunque con habilidad y experiencia se
En tejidos extremadamente duros como el hueso no
pueden producir secciones más delgadas. Sin
descalcificado, especialmente cuando la muestra es grande
embargo, hay tres áreas principales en las que la cera
y / o cuando hay un hueso cortical denso, la diferencia de
de parafina es un medio de inclusión inadecuado para
dureza entre el tejido y el medio en el que está incrustado
los estudios de microscopía óptica. En primer lugar, es
puede ser tan grande que la sección es excepcionalmente
posible que no ofrezca suficiente soporte para
difícil. dando como resultado que solo se obtengan
algunos tejidos. En segundo lugar, no permite cortar
secciones fragmentadas de mala calidad. Por lo tanto, el uso
secciones muy delgadas (estos dos factores están
de un medio de inclusión más duro, como un plástico, puede
interrelacionados). En tercer lugar, se destruyen
permitir cortar secciones superiores, en comparación con el
sustancias lábiles como las enzimas. En estas
uso de cera de parafina. Esto se puede lograr en forma de
circunstancias, el uso de plástico en lugar de cera de
sección utilizando un micrótomo motorizado o como una
parafina puede proporcionar preparaciones
rodaja que luego se muele hasta el espesor requerido. Esta
histológicas superiores. Este capítulo se centrará
última (conocida como sección de tierra) requiere equipos y
principalmente en el uso de técnicas plásticas para
procedimientos especializados que son diferentes de los que
microscopía óptica,
se utilizan para la microtomía convencional. Las secciones
rectificadas son útiles si está presente material inorgánico,
Estudios ultraestructurales como un stent (implante vascular), o el tejido es un diente,
ya que son prácticamente imposibles de seccionar por
En el desarrollo temprano de la microscopía electrónica, medios tradicionales. Estas aplicaciones se analizan con más
se utilizaron ceras de éster extremadamente duras con detalle en el Capítulo 16.
un éxito limitado. No eran adecuados para estudios

ultraestructurales porque no ofrecían suficiente soporte
para secciones ultradelgadas (aproximadamente 30-80
nm) y porque no podían resistir el haz de electrones de Microscopía óptica de alta resolución.
alta energía que atraviesa la sección dentro del
microscopio electrónico (ver Capítulo 22). ). La Se ha apreciado desde hace mucho tiempo que cuando un
introducción de medios de inclusión de plástico / resina diagnóstico y pronóstico precisos pueden depender de la
© 2013 Elsevier Ltd

140 8 Incrustación de plástico para microscopía óptica
detección de algún cambio histológico o citológico sutil,

Medios de incrustación de plástico
las secciones más delgadas que los habituales 5! m
facilitan en gran medida un examen preciso. Los dos
ejemplos más conocidos son para la biopsia renal y la Los plásticos se clasifican según su composición química en
interpretación de tejido hematopoyético, donde la epoxi, poliéster o acrílico. El cambio en el estado físico de un
reducción del grosor de la sección de parafina a medio de inclusión de líquido a sólido se llama
aproximadamente 2! M ha conducido a un diagnóstico polimerización y se produce al unir moléculas para producir
más fácil y preciso mediante la detección de anomalías una macromolécula compleja formada por unidades
histológicas menores que se oscurecen en secciones más repetidas. La macromolécula, denominada polímero
gruesas. La experiencia ha demostrado que incluso (derivada de la palabra griegaescuela politécnica que
secciones más delgadas, combinadas con ópticas de alta significa 'muchos' y mer que significa 'parte'), se sintetiza a
calidad, proporcionarán una evaluación más precisa partir de moléculas simples llamadas monómeros ('parte
mediante microscopía óptica de anomalías histológicas única'). Se requieren varios ingredientes para producir un
menores en la biopsia renal. Desafortunadamente, plástico adecuado como medio de inclusión para material
incluso con la mayor habilidad y experiencia, ha sido biológico y posterior examen histológico. Algunos de estos
extremadamente difícil (hasta hace poco con las ceras ingredientes pueden presentar problemas potenciales de
disponibles) producir secciones de buena calidad más salud y seguridad, y es importante que todos los productos
delgadas de aproximadamente 3! M. Como resultado, las químicos utilizados en la formulación de plásticos se
posibilidades de microscopía óptica de alta resolución manipulen de acuerdo con los requisitos de seguridad
han sido limitadas, y aunque hoy en día se pueden locales y legales. Las reacciones químicas entre los diversos
producir secciones ligeramente más delgadas con ceras y ingredientes en los kits de inclusión de plástico, incluido el
microtomos superiores, los artefactos producidos en las proceso de polimerización, son complejas y más similares a
secciones de cera limitan las posibles mejoras los datos que se encuentran en la industria de los polímeros.
morfológicas. Estos artefactos suelen ser menos obvios si Sin embargo, dado que es útil comprender el papel
se emplea un plástico como medio de inclusión. fundamental de componentes particulares, a continuación
Los patólogos con experiencia en el uso de la se analiza un esquema.
microscopía electrónica saben desde hace mucho

tiempo el aumento de la cantidad de detalle Plásticos epoxi
citológico detectable en secciones de tejido de
0,5-1! M incrustadas en plástico producidas antes Varios plásticos epoxi han encontrado su aplicación más
del corte ultradelgado para estudios amplia como medio de incrustación para estudios
ultraestructurales. Fue la comprensión del valor ultraestructurales, porque el plástico polimerizado es lo
diagnóstico de la microscopía óptica de alta suficientemente duro como para permitir el corte de
resolución en la identificación de ciertas secciones tan delgadas como 30-40 nm, y es estable en un
características nucleares y citoplasmáticas, que haz de electrones. Los esquemas de inclusión para las
generalmente están oscurecidas en secciones más diferentes resinas epoxi utilizadas en microscopía
gruesas, lo que llevó a un interés en la incrustación electrónica se dan en el Capítulo 22, y aquí solo se da un
plástica para usos específicos en histopatología breve resumen de sus propiedades y usos. Los plásticos
diagnóstica. En la práctica, las secciones de tejido epoxi derivan su nombre del grupo activo a través del cual
distintas de las de una biopsia renal se cortan con polimerizan (Figura 8.1).
frecuencia a 2-3! M (denominadas secciones
semifinas), para combinar una resolución
R CH CH2
satisfactoria con suficiente intensidad de tinción y
contraste. A medida que se han desarrollado O
aplicaciones y procedimientos histológicos, Figura 8.1 El grupo epóxido activo en todos los plásticos epoxi.
Medios de incrustación de plástico 141
Los grupos epóxido u oxirano se pueden unir a un Los plásticos (Epon) tienen una viscosidad más baja, pero a
número casi infinito de estructuras químicas en menudo se venden como mezclas de isómeros, y se debe tener
conformaciones simples o multifuncionales. En microscopía cuidado al elegir la fracción de isómeros más adecuada. Los
se utilizan tres tipos de plástico epoxi: los basados en plásticos a base de dióxido de ciclohexeno (Spurr) se pueden
bisfenol A (Araldita), glicerol (Epon) o dióxido de ciclohexeno obtener puros e infiltrarse más rápidamente, teniendo una
(Spurr). Los nombres entre paréntesis son los de uso común viscosidad baja (7 centipoises a 25 ° C). La infiltración a
por parte de los microscopistas y no transmiten ninguna temperaturas más altas es más rápida, aunque pueden
información estructural. formarse aglomerados que anulan cualquier aumento en el
Los plásticos de incrustación epoxi son una mezcla coeficiente de difusión.
cuidadosamente equilibrada de plástico epoxi, Las propiedades físicas de los plásticos epoxi se ven
catalizador y acelerador, y cada componente tiene una considerablemente afectadas por su velocidad de polimerización. En
influencia directa en las propiedades físicas y mecánicas la industria, las mismas formulaciones que se utilizan en microscopía
del plástico curado. El sistema catalizador utilizado es del se curan a temperaturas superiores a 150 ° C durante varios días,
tipo anhídrido / amina y provoca el curado de la resina mientras que los bloques de tejido a 60 ° C se curan
mediante la formación de reticulaciones de éster. El considerablemente de forma insuficiente. El curado rápido durante 1
catalizador de anhídrido puede ser un anhídrido alifático hora a 120 ° C produce un gran número de enlaces cruzados, pero
de cadena larga, por ejemplo, anhídrido dodecenil bloques duros y frágiles; 18 horas a 60 ° C dan como resultado
succínico (DDSA), o un anhídrido de anillo aromático bloques más duros que son más adecuados para el corte y la
condensado, por ejemplo, anhídrido metil nádico (MNA). microscopía posterior. Es necesario tener cuidado para proporcionar
Los anhídridos de cadena larga actúan como una sección con el nivel adecuado de reticulación para permitir la
plastificantes internos que hacen que los bloques sean tinción más tarde. Puede usarse metóxido de sodio para reducir la
más flexibles y generalmente resistentes, mientras que el densidad de reticulación del plástico curado mediante la
MNA es una molécula rígida que da como resultado la transesterificación de las reticulaciones de éster. Esto permite que el
rigidez y el endurecimiento de los bloques curados. plástico se expanda más en solventes y mejora el acceso al tejido en
Ambos catalizadores aumentan la hidrofobicidad del busca de manchas y anticuerpos.
plástico, La estabilidad en un haz de electrones surge de dos factores
Las aminas utilizadas como aceleradores son mono o principales. Tanto los grupos aromáticos como los insaturados
polifuncionales. Como las aminas forman aductos con pueden estabilizar los radicales formados por el impacto de los
grupos epóxido, el uso de aminas polifuncionales, por electrones, ya sea dentro del anillo aromático o a lo largo de una
ejemplo, dimetilaminometilfenol (DMP 30), puede dar como cadena alifática insaturada, evitando así la fisión y despolimerización
resultado la formación de estructuras tridimensionales, que de la cadena. Se induce una mayor estabilidad mediante enlaces
son lentas para difundirse y, por tanto, para infiltrarse cruzados que minimizan los efectos de cualquier despolimerización
lentamente en el tejido. Por tanto, las aminas que se produzca al evitar la fluencia.
monofuncionales, etanolamina y bencil dimetil amina Los plásticos epoxi tienen algunas desventajas: son
(BDMA), son más propicias para tiempos de infiltración más hidrófobos y la oxidación posterior por peróxido para
rápidos. El único otro aditivo común en las mezclas de corregir esto puede producir daño tisular. Tanto los grupos
plásticos epoxi es el ftalato de dibutilo (DBP), que está epóxido como los anhídridos pueden reaccionar en
presente como plastificante externo para ablandar los condiciones suaves con las proteínas, lo que puede reducir
bloques, especialmente en las formulaciones de 'Araldite'. la antigenicidad del tejido incrustado y, además, puede
La velocidad a la que cada plástico epoxi se infiltra en causar sensibilización en los trabajadores que los absorben
el tejido depende de la densidad del tejido y del tamaño por contacto con la piel o inhalación. Los componentes de
de las moléculas que se difunden. La infiltración de muchos plásticos epoxi son tóxicos y se sabe que uno, el
Araldite es lenta, en parte debido a la formación de dióxido de vinilciclohexano (VCD), es cancerígeno. Por lo
aductos de amina, pero también porque el plástico epoxi tanto, siempre se deben usar guantes al manipular estos
en sí es una molécula grande. El epoxi a base de glicerol plásticos, y se deben instalar instalaciones adecuadas.
estar previsto para la eliminación de los vapores químicos y En ocasiones en las que se requiere microscopía óptica
la eliminación de desechos tóxicos (Causton 1981). de alta resolución, es preferible utilizar secciones de
plástico acrílico debido a su posible manejo más fácil y la
calidad de tinción lograda, aunque algunas técnicas
Cortar y teñir secciones de epoxi para
como la inmunohistoquímica (como se comenta más
microscopía óptica
adelante) han presentado desafíos difíciles.
El corte y la tinción de secciones ultrafinas para microscopía
electrónica se analizan en detalle en el capítulo 22. No es
Plásticos de poliéster
posible obtener secciones satisfactorias con un espesor de
0,5-1! M en un micrótomo estándar utilizando una cuchilla
Estos plásticos se introdujeron originalmente para
de acero, por lo que las secciones semifinas se producen
microscopía electrónica a mediados de la década de 1950,
utilizando un cuchillo de vidrio o de diamante, y cortar en un
pero pronto fueron reemplazados por epóxidos superiores
microtomo motorizado. Utilizando tiras de vidrio y equipos
con fines ultraestructurales. Hoy en día rara vez se utilizan
especializados, se pueden preparar dos tipos de cuchillos
para microscopía, aunqueMawhinney y Ellis (1983)han
para vidrio: el cuchillo Latta-Hartmann de forma triangular
informado sobre el uso de incrustación de hueso no
más común o el cuchillo Ralph, que tiene un filo más largo.
calcificado para estudios de microscopía óptica.
Para un observador experimentado en su

interpretación, hay pocas dudas de que para la Plásticos acrílicos
microscopía óptica de alta resolución, el azul de
toluidina es la tinción más útil e informativa aplicada a Los plásticos acrílicos utilizados para microscopía son
secciones de tejido incrustadas en un plástico epoxi. Si ésteres de ácido acrílico (CH2·· CH · COOH) o más
el tinte se calienta y se usa a un pH alcalino alto, comúnmente ácido metacrílico (CH ·· C (CH3) · COOH), y a
penetra fácilmente en el plástico y tiñe varios menudo se denominan acrilatos y metacrilatos,
componentes del tejido con un color azul de respectivamente. Se utilizan ampliamente para microscopía
diferentes tonos e intensidades, sin una tinción óptica, pero algunas se han formulado para que se pueda
apreciable del medio de inclusión. La intensidad de realizar microscopía electrónica, ya sea de forma adicional o
tinción de los componentes tisulares por el azul de exclusiva. Se pueden idear numerosas mezclas para producir
toluidina refleja en gran medida su densidad plásticos que brinden una amplia gama de propiedades y, en
electrónica, y las apariencias ultraestructurales en la consecuencia, existe una diversa gama de usos potenciales.
microscopía electrónica posterior pueden predecirse El metacrilato de butilo, metilo y glicol (este último es
en parte por las apariencias a nivel de microscopía químicamente el monómero metacrilato de 2-hidroxietilo o
óptica. Para aquellos que prefieren tintes HEMA) se introdujeron todos para microscopía electrónica,
policromáticos, se pueden usar varias formulaciones, pero ahora rara vez se utilizan (a menos que sea un
por ejemplo, Paragon, que se asemejan a la tinción componente de una mezcla) porque el plástico se
H&E.Janes 1979), pero los resultados no siempre son interrumpe en el haz de electrones. . Sin embargo, se ha
fiables. Otro tipo de pretratamiento consiste en oxidar logrado un mayor éxito en la producción y tinción de
el tejido fijado con osmio sin grabar (Bourne y St John secciones semifinas para microscopía óptica de alta
1978) para que las soluciones acuosas se puedan teñir resolución.
de forma más uniforme. Los acrílicos convencionales se curan mediante complejas
Algunos informes han descrito la aplicación de reacciones en cadena de radicales libres. Los productos químicos
inmunohistoquímica a secciones de epoxi para estudios de intermedios formados tienen un número incompleto de electrones.
microscopía óptica después del tratamiento con etóxido / El monómero está expuesto a una fuente de radicales, generalmente
metóxido de sodio (Giddings y col. mil novecientos ochenta y producidos por la descomposición de un catalizador como el
dos; McCluggage y col. 1995; Krenacs y col. 2005), pero esta peróxido de benzoílo. Esto se descompone para producir radicales
práctica rara vez se utiliza. En general, para la mayoría de fenil (benzoil-peroxi) que se transfieren al
Medios de incrustación de plástico 143
doble enlace del monómero acrílico, y que luego se 2-butoxietanol, 2-isopropoxietanol, polietilenglicol
rompe para convertirse a su vez en un radical. Esto ahora 200/400 y ftalato de dibutilo. Algunas mezclas acrílicas
actúa como un sitio activo, atrayendo y uniendo otro requieren una pequeña cantidad de reticulante para
monómero repitiendo el proceso de apertura del doble estabilizar la matriz del plástico contra el daño físico
enlace carbono-carbono y formando un enlace covalente. causado por el haz de electrones (plásticos Lowicryl) o las
De esta manera, se forma un polímero uniendo unidades soluciones de tinción (Technovit 8100). Un ejemplo de un
monoméricas para producir una cadena alifática larga. agente de reticulación es el dimetacrilato de etilenglicol
Finalmente, para completar el polímero, un radical fenilo difuncional, que proporciona reticulaciones hidrófilas
en lugar de otra molécula de monómero se une al sitio flexibles. A diferencia de los epóxidos, la viscosidad de los
activo para bloquear y terminar reacciones posteriores. acrílicos es baja y, por lo tanto, son posibles tiempos de
Tanto el oxígeno como la acetona previenen la unión de infiltración cortos, aunque el tamaño y la naturaleza del
radicales y, por lo tanto, deben evitarse durante el tejido, junto con la temperatura de procesamiento e
proceso de curado. incrustación, afectarán los tiempos requeridos.
Los radicales se pueden producir espontáneamente por la Poli (metacrilato de 2-hidroxietilo) 'metacrilato de
luz o el calor, por lo que los plásticos acrílicos y sus glicol' (GMA) ha demostrado ser un medio de inclusión
monómeros deben almacenarse en botellas oscuras en un popular para microscopía óptica, ya que es extremadamente
lugar fresco. Los acrílicos contienen unas pocas partes por hidrófilo, lo que permite aplicar muchos métodos de tinción
millón de hidroquinona para evitar la polimerización tintóreos, pero lo suficientemente resistente cuando se
prematura, y para la mayoría de las aplicaciones, esto puede deshidrata para seccionar bien en la mayoría microtomos.
permanecer al preparar las mezclas de incrustación. El Se han informado varias mezclas, con el resultado de que
peróxido de benzoílo es la fuente más común de radicales, algunas pueden prepararse a partir de los ingredientes o
ya que se degrada a 50-60 ° C, pero la adición de una amina comprarse como un kit comercial, pero muchas se basan en
aromática terciaria, p. Ej.norte,norte-dimetilanilina o dimetil la receta publicada porRuddell (1967). Aunque todas las
pag-toluidina, puede hacer que el peróxido se descomponga mezclas contienen el monómero HEMA, la proporción y
en radicales a 0 ° C, por lo que el plástico se puede curar a variedad de este y otros ingredientes pueden ser diferentes,
temperatura baja o ambiente. El peróxido de benzoilo seco lo que da lugar a características diferentes entre varios kits.
es explosivo y, por lo tanto, se suministra humedecido con El monómero puede estar contaminado con ácido
agua o como una pasta mezclada con ftalato de dibutilo o metacrílico, lo que puede resultar en algunas manchas de
como partículas plastificadas. En algunas mezclas, es fondo, pero esto se puede reducir comprando HEMA de baja
necesario eliminar el agua y se debe tener cuidado de secar acidez o un kit patentado de alta calidad como JB4, JB4 Plus
las alícuotas lejos de la luz solar directa o del calor. El (Polysciences Inc., EE. UU.), Technovit 7100 o Technovit 8100
azobisisobutironitrilo y Perkadox 16 son otros catalizadores (Kulzer, Alemania). En la actualidad, el metacrilato de butilo
que se han utilizado, pero el más popular es el peróxido de rara vez se usa para cualquier propósito histológico, a
benzoilo. Los fotocatalizadores sensibles a la luz como el menos que sea un ingrediente en una mezcla acrílica, por
bencilo y el benjuí (varios tipos) se utilizan para la ejemplo, Unicryl (British BioCell International, Reino Unido),
polimerización de acrílicos a temperaturas bajo cero ya que ha demostrado ser poco confiable y produce un
utilizando luz de longitud de onda corta. considerable artefacto tisular durante la polimerización.
Además del monómero y el catalizador, a menudo son
necesarios otros ingredientes en los plásticos acrílicos. Una También se encuentran disponibles resinas aromáticas
amina estimulará la polimerización para que proceda a una de polihidroxidimetacrilato (Histocryl, LR White y LR Gold
velocidad más rápida y, en consecuencia, estos productos de London Resin Company, Reino Unido). Histocryl está
químicos se denominan activadores o, más comúnmente, diseñado para microscopía óptica, pero LR White y LR
aceleradores. Otros activadores incluyen ácido sulfínico y Gold se pueden utilizar tanto para microscopía óptica
algunos barbitúricos. Para mejorar las cualidades de corte como electrónica, ya que combinan la hidrofilia con la
de los bloques acrílicos, a menudo se agregan suavizantes o estabilidad del haz de electrones. LR White se puede
plastificantes a la mezcla. Ejemplos son polimerizar mediante la adición de dimetil
pag-toluidina, mientras que LR Gold se cura mediante la útil para algunos estudios de microscopía electrónica. Algunos de
adición de bencilo y la exposición a una lámpara estos plásticos, como los Lowicryls, se han desarrollado
halógena de cuarzo específicamente para la incrustación principalmente solo para microscopía electrónica (Carlemalm y col.
a temperatura bajo cero. Otros plásticos acrílicos curados mil novecientos ochenta y dos; Acetarin y col. 1986), mientras que LR
a baja temperatura incluyen Lowicryl HM20, HM23 White y Unicryl (Scala y col. 1992) se puede utilizar para cualquier
(hidrofóbico) y K4M, K4M Plus, K11M (hidrofílico) y Unicryl propósito. Sin embargo, por diversas razones técnicas, no todos los
(anteriormente llamado Bioacryl). Los Lowicryls se plásticos de doble propósito son prácticos para los estudios de
pueden curar mediante la adición de un fotocatalizador microscopía de luz de alta resolución de rutina.
de benjuí expuesto a luz ultravioleta. Aunque en algunos Los plásticos hidrófilos como GMA y LR White permiten
casos estos plásticos se pueden emplear para estudios teñir el tejido sin quitar el medio de inclusión y, por lo
de microscopía óptica, en realidad están pensados y son tanto, se han vuelto populares para el uso rutinario. Se
más adecuados para la microscopía electrónica. Lowicryl pueden aplicar muchas técnicas de tinción "simples",
K4M Plus es un producto epoxi-acrilato curable por luz pero algunas pueden requerir modificaciones o
que combina la polimerización rápida de un acrílico con presentar dificultades especiales a las que se utilizan en
la alta resistencia de un epoxi. Se han comercializado las secciones de parafina. Todos los medios acrílicos
varios kits de incrustación de plástico con diferentes hidrófilos son insolubles y, en consecuencia, todas las
nombres (especialmente la gama Technovit), lo que ha manchas se producen con el plástico.en el lugar. Esto
causado confusión (Mano 1995a), y hay una introducción puede causar problemas de dos maneras, ya sea porque
constante de nuevos kits patentados, cada uno con el medio en sí se mancha, lo que puede afectar la
afirmaciones que sugieren su idoneidad para estudios apariencia final, o porque la matriz actúa como una
específicos, lo que a menudo dificulta al científico saber barrera física para moléculas particulares. El ejemplo más
cuál elegir. Actualmente, muchos de estos kits están obvio de lo último es la dificultad que tienen las
disponibles en TABB, Reino Unido y / o Polysciences, EE. moléculas grandes para penetrar en la matriz plástica
UU. durante la tinción inmunohistoquímica. El uso alternativo
Durante muchos años, el metacrilato de metilo (MMA) de MMA hidrófobo sin la adición de agentes reticulantes
se ha utilizado ampliamente debido a su dureza como como medio de incrustación permite que el plástico se
medio de inclusión ideal para huesos no calcificados, disuelva, y para ciertas técnicas esta es una propiedad
otros tejidos duros y tejidos con stents o implantes, y extremadamente útil. Sin embargo, los plásticos
nuevamente existen kits patentados como Technovit hidrófobos como Lowicryl HM20 y HM23 que contienen
9100, (Kulzer) OsteoBed (Polysciences) y Acrylosin (Dorn agentes de reticulación son insolubles.
& Hart Microedge Inc.) para estos fines. Sin embargo, Los plásticos acrílicos se pueden polimerizar de
mediante el uso del monómero MMA en mezclas diferentes formas mediante el uso de un acelerador
especialmente diseñadas y de formas específicas, se ha químico, calor o luz. El método óptimo depende de
demostrado que es posible la tinción tintórea e varios factores, incluido el estudio requerido y la
inmunohistoquímica en secciones semifinas para practicidad del método elegido. La polimerización
microscopía óptica de alta resolución. también se puede inducir a baja temperatura, y con
algunos plásticos Lowicryl, el procesamiento y la
incrustación se pueden lograr a temperaturas de
Aplicaciones de las secciones acrílicas hasta "70 ° C. K4M es el más popular y se dice a" 35 ° C
para mejorar la preservación ultraestructural y la
El desarrollo de medios de inclusión de plástico acrílico inmunohistoquímica. tinción.
generalmente se ha visto estimulado por el requisito de una
aplicación específica. La mayoría de las aplicaciones son para Tinción tintórea
microscopía óptica, pero a medida que ha aumentado la
comprensión de la formulación de acrílicos, también se han Los acrílicos se han vuelto populares para microscopía de luz de
introducido varios plásticos que también pueden ser alta resolución principalmente debido a la facilidad con
Aplicaciones de las secciones acrílicas 145
qué secciones se pueden teñir. Se puede lograr una

tinción excelente en el tejido incrustado en cualquiera de
las diversas mezclas / kits de GMA y otros acrílicos como
LRWhite, aunque el plástico no se pueda quitar. Se
pueden aplicar numerosos (pero no todos) métodos de
tinción histológica de rutina, incluidos H&E, PAS, van
Gieson, azul alciano, Perls, métodos elásticos, Giemsa y
técnicas de plata para reticulina. Pueden ser necesarias
modificaciones de los métodos estándar para cortes de
parafina y, debido a que las resinas London (Histocryl, LR
White y LR Gold) se suavizan con alcohol con la
posibilidad de pérdida de sección del portaobjetos,
soluciones de tinción alcohólicas como las que se usan en
elásticos. deben evitarse los métodos. En consecuencia,
incluso la tinción con hematoxilina en las resinas London
debe ser progresiva para evitar la diferenciación con
alcohol ácido, mientras que la tinción regresiva en GMA
es (con cuidado) posible. El medio de inclusión de plástico
(especialmente GMA) también puede mancharse, pero en
Figura 8.2 Sección de yeyuno fijada en calcio formal e incrustada en
algunas técnicas esto puede reducirse mediante varios
metacrilato de glicol (JB4) que muestra actividad fosfatasa ácida
procedimientos de lavado. hidrolítica en los macrófagos (lámina propia) y lisozimas en las
Un enfoque alternativo es usar MMA donde el plástico se vellosidades usando pararosanilina de hexazonio. Original
puede quitar fácilmente antes de teñir, usando aumento # 325. (Reproducido con permiso de Hand, NM, 1999. Embebido de
plástico para microscopía óptica. Una guía para el histotecnólogo.Muestra de
procedimientos y soluciones similares pero con tiempos un
tecnología. Histotecnología No. HT-6. 29-35. © Sociedad Estadounidense de
poco más prolongados que los que se usan habitualmente Patólogos Clínicos.)
para desparafinar secciones de parafina. Está fuera del

alcance de este capítulo describir en detalle numerosos
métodos de tinción en diferentes acrílicos, pero en general, condiciones pueden localizarse varias enzimas
los mejores resultados se obtienen utilizando un método (principalmente hidrolíticas), incluidas las ilustradas en
publicado previamente o uno recomendado por otros Figuras 8.2 y 8.3. La fijación, el procesamiento y la
histólogos. Cabe señalar que la tinción tintórea de tejido polimerización generalmente se llevan a cabo a 4 ° C, y las
incrustado en MMA es posible (donde no se ha agregado un secciones se secan en un cubreobjetos o portaobjetos a
reticulante) sin quitar el plástico, y esto a menudo es útil temperatura ambiente durante la noche (en lugar de a 60 °
para secciones de MMA de hueso no descalcificado C) antes de realizar la tinción histoquímica enzimática.
preparadas como se describe en el Capítulo 16. Sin Se ha recomendado una variedad de fijadores de aldehídos,
embargo, esto El tipo de procedimiento no es adecuado pero en la experiencia de este autor, 10% de calcio formal
para los cortes semifinos descritos en este capítulo para recomendado por Dawson (1972) ha tenido éxito. La tinción
microscopía óptica de alta resolución. mejorada se puede lograr aún más si el tejido se lava
posteriormente a 4 ° C en una solución tamponada de sacarosa
Histoquímica enzimática al 3%.Mano (1988) también ha demostrado que la actividad
enzimática también puede verse afectada durante el
La capacidad de procesar, incrustar y polimerizar algunos procesamiento, la infiltración, la incrustación y la polimerización
plásticos acrílicos a baja temperatura permite conservar y, por lo tanto, para lograr los mejores resultados, primero
y demostrar varias enzimas en cortes de tejido. Muchas deben determinarse los efectos de estas etapas sobre una
enzimas se destruyen mediante la fijación y el enzima en particular. La polimerización se lleva a cabo
procesamiento de rutina, pero bajo control normalmente a 4 ° C utilizando un producto químico.
Figura 8.3 Sección de músculo cortado transversalmente fijado en Figura 8.4 Sección de riñón no fijado incrustado en LR Gold que ha sido
calcio formal e incrustado en metacrilato de glicol (JB4), que fotopolimerizado, mostrando actividad succinato deshidrogenasa en
muestra tinción oxidativa NADH diaforasa en mitocondrias usando mitocondrias usando tetra-nitro azul tetrazolio (TNBT).
metil-tiazolildifenil tetrazolio (MTT).
acelerador, pero para los métodos que utilizan ha sido la enzima oxidativa succinato deshidrogenasa
temperaturas bajo cero se ha empleado un exceso de (Figura 8.4). Otras enzimas que se han demostrado en
catalizador o un fotocatalizador. tejido fijo incluyen fosfatasa ácida, adenosina
Se prefiere el uso de GMA para estudios histoquímicos trifosfatasa (membrana), fosfatasa alcalina,
de enzimas, ya que este acrílico es probablemente el más cloroacetato esterasa, dipeptidil (amino) peptidasa IV,
fácil de manipular y produce los mejores resultados. Se lactasa, lactato deshidrogenasa, leucina
han descrito varias investigaciones histoquímicas de aminopeptidasa, $ -galactosidasa, glucosa-6-fosfato,
enzimas utilizando varias técnicas diferentes en tejido fosfato deshidrogenasa, $ -glucuronidasa,% -glutamil
incrustado en plástico, incluida la identificación de tipos transpeptidasa, NADH, $ -naftil acetato, esterasa no
de células (Beckstead 1983), nefrotoxicidad por específica, 5 $ -nucleotidasa, peroxidasa y sacarasa.
cefaloridina en ratas (Bennett 1982) y evaluación de Después de una tinción satisfactoria, se debe tener
malabsorción en yeyuno (Mano 1987). cuidado para garantizar que no se produzcan
Un desarrollo posterior descrito por Thompson y pérdidas y difusión de enzimas durante los
Germain (1983) empleó el procesamiento de tejido fresco procedimientos de lavado y montaje.
(no fijado) estabilizado con polivinilpirrolidina (PM 44.000)
a "25 ° C e incrustado en LR Gold. La polimerización se Inmunohistoquímica
indujo irradiando el plástico que contiene el
fotocatalizador bencilo con luz azul de una lámpara Durante los últimos 30 años, se han publicado numerosos
halógena de cuarzo. Este procedimiento especializado informes que describen la aplicación de inmunohistoquímica
ofrece el potencial para demostrar enzimas, incluidas a secciones de tejido incrustadas en acrílico, incluso con un
aquellas que son sensibles a la fijación, pero en realidad kit de GMA desarrollado específicamente para este uso
la única enzima adicional demostrada para aquellas que (ImmunoBed de Polysciences Inc., EE. UU.). Sin embargo, la
sobreviven a una fijación leve tinción inmunohistoquímica todavía
Aplicaciones de las secciones acrílicas 147
sigue siendo un tema controvertido porque los microscopía. En este contexto, se desarrolló un concepto
resultados han sido principalmente idiosincrásicos y alternativo que emplea un plástico basado en MMA (
decepcionantes, lo que ha llevado a muchos laboratorios Hand y col. 1989; Hand y Morrell 1990). El tejido puede
a abandonar este tipo de investigación con fines fijarse en formalina en condiciones de rutina y luego
diagnósticos. La confusión adicional se ha agravado por procesarse e incrustarse a temperatura ambiente. El
la amplia variedad de plásticos y técnicas defendidas, plástico se polimeriza utilizando un acelerador químico,
pero una causa principal de inmunotinción poco p. Ej.N, N-dimetilanilina, aunque se han utilizado con
confiable es que muchos de los acrílicos son insolubles éxito otras aminas. El procedimiento de incrustación es
en su forma polimerizada. Aunque sería una explicación similar al que se usa para los bloques GMA utilizando un
demasiado simplista implicar que todos los problemas se sistema de bandeja de moldeo abierto dentro de un
deben a la insolubilidad del polímero involucrado, no hay desecador de vidrio. La principal diferencia con otros
duda de que la presencia del medio de inclusión puede acrílicos es que el plástico polimerizado es soluble y, por
presentar dificultades formidables (Gerrits 1988). lo tanto, se puede eliminar antes de la tinción, lo que es
Numerosos trabajos basados en las publicaciones particularmente ventajoso para la tinción
clásicas deBeckstead (1985) y Casey y col. (1988)han inmunohistoquímica. La tinción tintórea de rutina es
intentado crear condiciones suaves fijando, procesando y obviamente posible, aunque el procedimiento
luego polimerizando el plástico a baja temperatura en un probablemente no sea adecuado para la localización de
intento de proteger los antígenos sensibles y producir una muchas enzimas. Hasta la fecha, se han demostrado con
matriz 'más suelta' que sería más propicia para permitir que éxito más de 100 anticuerpos con excelentes resultados,
los grandes reactivos inmunológicos penetren hasta los incluidos los ilustrados enFiguras 8.5– 8.7. Más adelante
sitios de los antígenos . Desafortunadamente, esto no en este capítulo se comentan más detalles relacionados
siempre es fácil de controlar, y la reticulación adicional con la tinción inmunohistoquímica en secciones de MMA.
puede continuar después de la "polimerización" para
producir una superpolimerización que inhibirá el acceso de
los reactivos a los antígenos. Además, se ha reconocido
desde hace mucho tiempo que los antígenos tisulares
pueden ser alterados químicamente por los reactivos en el
medio de inclusión de plástico (Takamiya y col. 1980). Una
nueva aplicación más reciente de inmunotinción usando
procedimientos especializados con GMA ha sido descrita por
Howat y col. (2005)para micromatrices de tejidos.
También se ha sugerido una variedad de protocolos de
tinción complejos y sofisticados que utilizan
tetrahidrocloruro de 3,3'-diaminobencidina (DAB) como
cromógeno. Un procedimiento particular recomendado
porNewman y col. (1983)para LR White usó una técnica
de mejora, donde la DAB se intensificó usando un
método de oro-sulfuro-plata para detectar la reactividad
inmunohistoquímica. Se sugiere el uso de cromógenos y
anticuerpos de pequeño peso molecular como el
aminoetilcarbazol (AEC) para mejorar la inmunotinción
con ImmunoBed (Polysciences).
Aunque la inmunohistoquímica es posible en todos los
Figura 8.5 Sección de pituitaria fijada con formalina incluida en
plásticos acrílicos, los procedimientos no rutinarios requeridos, metacrilato de metilo que muestra la localización de la hormona
junto con los resultados con frecuencia deficientes, no fomentan adrenocorticotropina (ACTH) con tinción de inmunoperoxidasa.
este tipo de examen histológico para la luz. Cromógeno 3,3 $ -diaminobencidina tetrahidrocloruro (DAB).
Figura 8.6 Sección de tumor de ovario fijado con formalina incrustado en Figura 8.7 Sección de ganglio linfático fijado con formalina incrustado en
metacrilato de metilo que muestra tinción con inmunoperoxidasa de metacrilato de metilo que muestra tinción de inmunoperoxidasa de
citoqueratina 7 después del pretratamiento con antígeno de microondas linfocitos T con anti-CD3 después del pretratamiento con digestión con
recuperación. Cromógeno DAB. (Reproducido con autorización de Hand, NM, Blythe, tripsina y posterior recuperación de antígeno inducida por calor usando un
D., Jackson, P., 1996. Desenmascaramiento de antígenos mediante calentamiento por olla a presión. Cromógeno DAB. (Reproducido con autorización de Hand, NM,
microondas en tejido fijado con formalina incrustado en metacrilato de metilo. Revista de 1999. Embebido de plástico para microscopía óptica. Una guía para el
patología celular 1, 31-37. © Greenwich Medical Media Ltd, Londres.) histotecnólogo.Muestra de tecnología. Histotecnología No. HT-6. 29–35. © Sociedad
Estadounidense de Patólogos Clínicos.)
En el lugar hibridación
Solución b
Solo se han descrito algunos métodos para en el lugar
Polietilenglicol 400norte, 15 partes
hibridación en varias secciones de plástico utilizando NORTE-dimetilanilina 1 parte
técnicas isotópicas o no isotópicas. Estudios deChurch Fijación
y col. (1997, 1998)y Doverty (2005, 2007), ambos Fije los tejidos en formalina, por ejemplo, solución salina formal,
usando métodos no isotópicos en secciones de MMA, formalina tamponada neutra o paraformaldehído tamponado.
han demostrado Medias ARNm del gen en tejido de
Procesamiento e incrustación
pollo y ARNm kappa (&) y lambda (') en trépano de
1. Si es necesario, enjuague el tejido en un tampón apropiado
médula ósea, respectivamente.
durante 15 minutos.
2. Deshidratar con etanol al 70%, 90% y 100%. Para un

Horarios de procesamiento de plástico acrílico bloque promedio de 10 # 5 # 2 mm, use dos
cambios de 15 minutos en cada solución.
3. Infiltrar en dos cambios de solución a, cada uno durante 1
Programa de procesamiento e inclusión del metacrilato de hora.
glicol utilizando ingredientes (Ruddell 1967) 4. Incrustar en la siguiente mezcla:
Solución a Solución a 42 piezas
Metacrilato de 2-hidroxietil (glicol) 80 ml Solución b 1 parte
2-butoxietanol 16 ml 5. Polimerice a temperatura ambiente, colocando el molde

Peróxido de benzoilo seco 0,27 g en agua fría para disipar el calor generado por
Horarios de procesamiento de plástico acrílico 149
la reacción exotérmica. La polimerización debe peróxido de benzoilo plastificado (C) en 100 ml de solución A o
completarse en 2 a 4 horas. equivalente, hasta que el sólido esté completamente disuelto). La
mayoría de los tejidos requieren una infiltración de al menos 3
Notas
horas, según la naturaleza y el tamaño del tejido. Los tejidos
una. Las muestras solo deben procesarse bajo una
duros y densos, como el hueso, se infiltran mejor durante la
campana de humos con extracción.
noche a 4 ° C.
B. El procesamiento se logra mejor si las muestras se agitan
4. Incrustar en medio de inclusión nuevo (añadir 1 ml de
continuamente en un mezclador de rodillos.
solución B a 25 ml de solución A recién catalizada o
C. Las alícuotas pequeñas de peróxido de benzoílo deben secarse
equivalente) a temperatura ambiente en un molde. El
cuidadosamente lejos del calor directo y la luz solar, ya que es
tiempo necesario para la polimerización completa varía con
potencialmente explosivo. Debe ser completamente
la temperatura, el oxígeno atmosférico, etc., pero a
disuelto en la solución infiltrante y esto puede
temperatura ambiente (22 ° C) puede llevar de 1 a 2 horas.
tardar hasta 30 minutos.
Para las investigaciones histoquímicas de enzimas, se
D. Varios sistemas de moldeo de bloques están disponibles obtendrán mejores resultados utilizando soluciones
comercialmente, pero el sistema de bandeja de moldeo de preenfriadas en todo momento, con procesamiento e
polipropileno abierto permite que el tejido se adhiera incrustación a 4 ° C. En estas circunstancias, la polimerización
directamente a un talón de bloque (Polysciences Inc., EE. puede tardar de 6 a 12 horas.
UU.). Para lograr una buena polimerización, el molde debe
Notas
colocarse dentro de un desecador de vidrio y excluirse el
oxígeno llenando la cámara con nitrógeno libre de oxígeno. Consulte las notas a, b, c, d, eyf del programa GMA anterior. Los
A continuación, se sella la cámara. tejidos se pueden tomar directamente en varios cambios de la

solución A recién catalizada del tampón, omitiendo los alcoholes,
pero puede ser necesario extender el tiempo de esta
mi. Las mezclas de plástico acrílico se preparan mejor en la
deshidratación parcial con al menos tres cambios. Este
cantidad requerida, preferiblemente usando un vial de
procedimiento puede producir mejores resultados con algunos
vidrio grande con tapa. Es recomendable medir las
métodos enzimáticos y los lípidos también se retienen mejor.
cantidades por volumen.
F. Cualquier solución de desecho que contenga componentes
plásticos debe manipularse y desecharse de acuerdo con los
requisitos locales y legales.
Programa de procesamiento e incrustación modificado para el

medio de incrustación JB4
Programa de procesamiento e inclusión estándar para el medio
de inclusión JB4 Este programa en particular es especialmente útil para trépanos
de médula ósea hematológicos para proporcionar un medio de
El medio de inclusión JB4 se suministra como un kit, que
soporte más firme.
comprende dos soluciones madre (A y B) y peróxido de benzoílo
plastificado (C) por separado. La solución A es el medio de Fijación
infiltración / incrustación y la solución B es el acelerador.
Fije los tejidos en formalina, por ejemplo, solución salina formal,
formalina tamponada neutra o paraformaldehído tamponado.
Fijación Procesamiento e incrustación

Cualquiera, preferiblemente formalina o paraformaldehído. 1. Si es necesario, enjuague el tejido en un tampón apropiado
durante 15 minutos.
Procesamiento e incrustación 2. Deshidrate con etanol al 70%, 90% y 100%
1. Si es necesario, enjuague el tejido en un tampón apropiado usando dos cambios en cada solución de 30
durante 15 minutos. minutos.
2. Deshidrate con etanol al 70%, 90% y 100% como 3. Infiltrar tejido en dos cambios de solución catalizada A
se describe en el programa GMA anterior. recién preparada (preparada mezclando 120 mg de
3. Infiltrar tejido en dos cambios de solución catalizada A peróxido de benzoilo plastificado en 9 ml de solución
recién preparada (preparada mezclando 1,25 g de A y 1 ml de monómero de metacrilato de metilo hasta
el sólido se disuelve completamente) durante 1 hora, Notas

seguido de una infiltración durante la noche a temperatura una. Las alícuotas de peróxido de benzoilo deben secarse
ambiente. cuidadosamente lejos del calor directo y la luz solar, ya que
4. Incrustar en medio de inclusión preenfriado (10 ml de es potencialmente explosivo. Es importante que no haya
solución A catalizada y 450! L de solución B de JB4) a agua antes de disolver el catalizador (2 minutos) en la
temperatura ambiente en un molde. El tiempo necesario solución infiltrante.
para la polimerización completa varía con la temperatura, B. Consulte también las notas a, b, d, eyf del programa
el oxígeno atmosférico, etc., pero a temperatura ambiente anterior de GMA.
(22 ° C) puede ser de 1 a 2 horas.
Notas
Consulte las notas a, b, c, d, e y f del programa GMA
anterior.
Programa de procesamiento e inclusión estándar para LR
White
LR White generalmente se suministra como una solución

premezclada que incluye catalizador en tres grados (duro,
medio y blando) para igualar lo más posible la dureza del
tejido que se procesa. (Para evitar la polimerización
Programa de procesamiento e inclusión del
espontánea en climas cálidos, es posible comprar el
metacrilato de metilo
monómero y el catalizador por separado). También se
Este esquema se puede utilizar para tinciones suministra un frasco gotero que contiene acelerador.
tintóreas e inmunohistoquímicas de rutina, aunque se
han publicado otros esquemas y mezclas. Se debe
tener cuidado al manipular MMA, ya que tiene un olor Fijación
acre y es inflamable. Fijar tejidos en formalina o paraformaldehído.
Solución de infiltración Procesamiento e incrustación

Monómero de metacrilato de metilo (sin lavar) 15 ml 1. Si es necesario, enjuague el tejido en un tampón apropiado
Ftalato de dibutilo 5 ml durante 15 minutos.
Peróxido de benzoilo seco 1g 2. Deshidratar con etanol al 70%, 90% y 100%, usando dos
cambios de cada solución durante 15 minutos para un
Fijación
bloque de 12 # 10 # 3 mm.
Fije los tejidos en formalina, por ejemplo, formalina al 10%, solución salina
3. Infiltrar con LR White, tres cambios de 60 minutos cada uno o
formal al 10% o calcio formal al 10%, entre 24 y 48 horas.
dejar durante la noche, según la naturaleza y el tamaño del
Procesamiento e incrustación bloque de tejido. Los tejidos duros como los huesos y los
1. Deshidratar con etanol al 50%, 70% y 90%. Para un dientes se benefician de la infiltración por vacío durante el
bloque promedio de 10 # 5 # 2 mm, use cambios último cambio de resina.
de 1 hora en cada solución. 4. Polimerice usando curado en "calor" o "frío" (acelerador). Para
2. Deshidratación completa mediante dos cambios de etanol al "curar con calor", coloque los moldes en una incubadora
100%, cada uno durante 1 hora. entre 55 ° C y 60 ° C durante 20-24 horas. Para el curado "en
3. Infiltrar en dos cambios de solución de infiltración, cada uno frío", agregue 1 gota de acelerador por cada 10 ml de resina;
durante 1 hora. la polimerización debe ocurrir en 15-20 minutos.
4. Infiltrar en un cambio adicional de solución de infiltración durante la

noche. Notas
5. Incrustar en alícuotas de 10 ml de solución de infiltración a una. Cuando se cura por 'calor', es importante limitar el
las que se agreguen 125! L de N, N-Se añade dimetilanilina. contacto del oxígeno con la resina mientras
La polimerización ocurrirá en 3-4 horas. D. Blythe ocurre la polimerización. La forma más conveniente de
(comunicación personal) recomienda 250! L de lograrlo es utilizar cápsulas de gelatina para piezas pequeñas
N, N-dimetilanilina para trépano de médula ósea, de tejido, o los sistemas comerciales de trozos de bloques y
donde la polimerización se logra en 1,5 a 2 horas. bandejas de moldeo para piezas más grandes.
Horarios de procesamiento de plástico acrílico 151
página 133, entonces esto es menos probable. El uso de

Alternativamente, se puede utilizar un entorno
nitrogenado.
portaobjetos Superfrost Plus (sin adhesivo) para muestras
B. El procesamiento se logra mejor si las muestras se agitan

de hueso ha resultado satisfactorio (D. Blythe, comunicación
continuamente en un mezclador de rodillos. personal).
C. Las alícuotas pequeñas de peróxido de benzoilo deben secarse con
cuidado, lejos del calor directo y la luz solar, ya que es
potencialmente explosivo. Debe ser completamente
Tinción de secciones de plástico acrílico
disuelto en la solución infiltrante y esto puede
tardar hasta 30 minutos.
D. El tiempo y la temperatura de polimerización son
Como se describió anteriormente, las secciones de GMA y LR
fundamentales para el carácter físico del bloque final. El White se tiñen con la matriz plástica presente. LR White se
aumento de temperatura o tiempo producirá bloques suaviza con alcohol, por lo que después de completar la
altamente reticulados que son quebradizos y pueden ser tinción se recomienda secar las secciones y secarlas en una
difíciles de teñir. placa caliente a 60 ° C durante unos minutos antes de
sumergirlas en xileno y montarlas. Las secciones de MMA
requieren que se elimine el medio de inclusión de plástico
antes de la tinción, y esto se puede lograr fácilmente
sumergiendo los portaobjetos en xileno durante 10 a 20
Cortar secciones de plástico acrílico minutos a 37 ° C. Se pueden utilizar numerosos protocolos
de H&E, pero los siguientes han demostrado ser
Se pueden cortar secciones semifinas de GMA, MMA y LR White con un grosor
satisfactorios para GMA y LR White. Para las secciones de
de 2 a 3! M con una cuchilla de acero en un micrótomo estándar, pero se
MMA, se prefiere la tinción de 30 minutos en hematoxilina y
obtendrán secciones semifinas de mejor calidad con una cuchilla de vidrio en
5 minutos en eosina tamponada al 1%, pero las secciones
un microtomo motorizado . Tanto el cuchillo Latta-Hartmann triangular como el
deben lavarse rápidamente en agua y etanol ya que la
Ralph de filo más largo son adecuados, pero la elección depende
eosina se elimina rápidamente.
principalmente del tamaño del molde / bloque. Para la mayoría de los
propósitos de rutina, las secciones de 2 a 3 µm son satisfactorias y pueden
recogerse con un par de pinzas finas. Las secciones de GMA se aplanarán
inmediatamente al entrar en contacto con el agua a temperatura ambiente, y si
se usa un baño de agua, las secciones se pueden recoger en portaobjetos

Método de hematoxilina y eosina
similares a las secciones de parafina. Con la mezcla de MMA descrita, será
1. Tiñe con hematoxilina de alumbre de Harris o Gill durante
necesario calentar el baño de agua a 65–70 ° C para que estas secciones se
10 a 20 minutos.
aplanen. Las secciones de LR White se hacen flotar en alcohol al 70% o acetona
2. Lavar con agua del grifo.
al 30-40% en una placa calefactora a 60 ° C. Es aconsejable que todas las
3. Si es necesario, diferencie en alcohol ácido al 1% durante
secciones acrílicas se recojan en portaobjetos sin grasa que hayan sido
2-3 segundos.
recubiertos con un adhesivo como 2% APES y se dejen escurrir antes de secar
4. Azul en agua del grifo.
en una placa caliente a 60 ° C durante al menos 30 minutos. Muchos
5. Lavar con agua durante 15 minutos.
histotecnólogos han comentado que las secciones de MMA, especialmente
6. Teñir en eosina acuosa al 1% filtrada en cloruro de calcio al
cuando se usan para trépanos de médula ósea sin calcificar, se desprenden del
1% durante 3 minutos.
portaobjetos. Si bien esto es cierto con muchas formulaciones de MMA, si la
7. Lavar con agua del grifo durante 30 segundos.
receta descrita en la serie de artículos a mano y en el programa de
8. Secar.
procesamiento en desprenderse de la diapositiva. Si bien esto es cierto con
9. Enjuague con etanol durante 20 segundos.
muchas formulaciones de MMA, si la receta descrita en la serie de artículos a
10. Enjuague con xileno.
mano y en el programa de procesamiento en desprenderse de la diapositiva. Si
11. Montar en DPX.
bien esto es cierto con muchas formulaciones de MMA, si la receta descrita en
Nota
la serie de artículos a mano y en el programa de procesamiento en
Omita los pasos 3 y 9 para LR White.
Tinción inmunohistoquímica en técnica de intensificación. Aunque el procedimiento se

secciones de MMA diseñó originalmente para cortes en parafina y es útil
cuando ciertos anticuerpos producen solo una señal
Las secciones se pueden teñir con un protocolo y un débil utilizando una técnica convencional, también se
procedimiento que sigue de cerca el que se usa para las ha aplicado con éxito al tejido incluido en MMA (
secciones de parafina, utilizando una técnica de Jackson y col. 1996).
inmunoperoxidasa de rutina, como la técnica sensible del Los protocolos y técnicas descritos anteriormente
tipo avidina-biotina y los procedimientos pueden producir una excelente tinción
inmunohistoquímicos basados en polímeros. El DAB se inmunohistoquímica y se han utilizado de forma
puede utilizar como cromógeno y no se requiere rutinaria, especialmente en trépanos de médula ósea
intensificación para la visualización. Las incubaciones se hematológicos no calcificados (Blythe y col. 1997) y
llevan a cabo a temperatura ambiente y esencialmente los folículos pilosos (Randall y Foster 2007).
reactivos y los tiempos de las diversas etapas son los
habituales, aunque la tinción óptima de algunos antígenos
puede requerir cambios en el pretratamiento y / o dilución
Programa de procesamiento e inclusión de Lowicryl K4M
del anticuerpo. Además de la aplicación de una amplia gama (Al-Nawab y Davies 1989)
de anticuerpos policlonales y monoclonales, los anticuerpos
Se ha utilizado el siguiente programa en una biopsia renal con
monoclonales de conejo también han tenido éxito aguja en la que luego se cortaron secciones de 2 µm y 90 nm
recientemente (L. Doverty, comunicación personal). Para para estudios de microscopía óptica y microscopía electrónica,
evitar resultados deficientes o erróneos, es importante respectivamente.
durante la tinción que las secciones no se sequen, lo que Fijación
ocurre más rápido que para las secciones de parafina. Paraformaldehído al 4% durante 2 horas a
Al igual que con las secciones de parafina, uno de los temperatura ambiente.
aspectos más problemáticos de la inmunotinción es el uso
Deshidración
de pretratamiento. La digestión enzimática con tripsina se
1. Metanol al 50% a "20ºC durante 30 minutos.
ha utilizado para algunos antígenos, pero la introducción de
2. 80% de metanol a "20 ° C durante 60 minutos.
procedimientos mediados por calor, utilizando un horno
3. Metanol al 90% a "20ºC durante 60 minutos.
microondas (Hand y col. 1996) o una olla a presión (Mano e
Infiltración
Iglesia 1998) con solución de citrato de sodio ha ayudado
4. 1 parte de metanol y 1 parte de Lowicryl K4M a "20 ° C
significativamente a mejorar y estandarizar la tinción. Sin
durante 30 minutos.
embargo, algunos detalles del procedimiento preciso
5. 1 parte de metanol y 2 partes de Lowicryl K4M a "20 ° C
pueden diferir de los de las secciones de parafina y, para
durante 60 minutos.
algunos antígenos, puede ser necesaria una combinación de
6. 100% Lowicryl K4M a "20 ° C durante 60 minutos.
tratamientos previos para lograr los mejores resultados. El
7. 100% Lowicryl K4M a "20 ° C durante la noche.
pretratamiento mediado por calor también recupera mejor
Polimerización
la antigenicidad en el material de archivo (Hand y col. 1996).
Incruste el tejido en Lowicryl K4M fresco en cápsulas de
Para obtener más detalles, se recomienda al lector que
gelatina y fotopolimerice a 35 ° C durante la noche utilizando
consulte varios artículos (Mano 1995b; Blythe y col. 1997;
irradiación ultravioleta indirecta (difusa) de una lámpara
Mano e Iglesia 1997), aunque un desarrollo de los estudios fluorescente Philips TLAD 15 W / 05 (pico de longitud de onda a
de Blythe et al. ahora ha llevado al pretratamiento utilizando 360 nm). Las cápsulas se suspenden en baños de etanol con
reactivos de detección de cocción a presión y basados en sus polos inferiores sumergidos en alcohol para disipar
polímeros (D. Blythe, comunicaciones personales). cualquier acumulación de calor durante el proceso de
En los últimos años se ha introducido en la polimerización, y luego se retiran e irradian a temperatura

ambiente durante 1 a 2 días más para mejorar las propiedades
inmunohistoquímica un procedimiento de amplificación
de corte.
basado en tiramida, lo que ha dado lugar a una
Futuro de la incrustación de plástico acrílico 153
Referencias
Futuro de la incrustación de plástico acrílico
Acetarin, J.-D., Carlemalm, E., Villiger, W., 1986.

A medida que el diagnóstico histológico se vuelve Desarrollos de nuevas resinas Lowicryl para
cada vez más exigente con el uso cada vez mayor de incrustar muestras biológicas a temperaturas aún
técnicas sofisticadas, también se ha avanzado la más bajas. Journal of Microscopy 143, 81–88.
tecnología de los procedimientos de inclusión de
Al-Nawab, MD, Davies, DR, 1989. Light y
plástico. Constantemente se desarrollan nuevos
demostración microscópica electrónica del depósito de
medios de incrustación y se reconoce que la
inmunoglobulina extracelular en el tejido renal. Revista de
flexibilidad de los acrílicos a veces puede proporcionar
patología clínica 42, 1104-1108.
el medio de incrustación más adecuado para una
Beckstead, JH, 1983. La evaluación de la linfa
investigación en particular. Muchas aplicaciones son
nodos, utilizando secciones de plástico e histoquímica
para microscopía óptica de alta resolución, pero
enzimática. Revista Estadounidense de Patología
algunas pueden usarse para microscopía electrónica.
Clínica 80, 131-139.
Estudios como los reportados porBowdler y col. (1989)
y Al-Nawab y Davies (1989) han combinado Beckstead, JH, 1985. Localización óptima de antígenos en
microscopía óptica y microscopía electrónica en la tejidos humanos utilizando secciones incrustadas en
misma biopsia usando LR White y Lowicryl K4M, plástico fijadas con aldehído. Revista de histoquímica y
respectivamente, demostrando así comparaciones citoquímica 33, 954–958.
directas entre las técnicas inmunohistoquímicas en Bennett, R., 1982. El uso de histoquímicos
microscopía óptica con aquellas a nivel de microscopía técnicas en secciones de riñón de metacrilato de 1
electrónica. La reciente introducción de Lowicryl K4M micra en el estudio de cefaloridina
Plus combina propiedades acrílicas y epoxi, pero aún nefrotoxicidad. En: Bach, PH, Bonner, FW,
no se ha evaluado completamente. Bridges, JW, Locks, EA (Eds.), Nefrotoxicidad:
Se han formulado plásticos acrílicos especiales para el evaluación y patogénesis. John Wiley, Chichester.
procesamiento a baja temperatura y la incrustación de tejidos,
especialmente para microscopía electrónica, ya que se sabe que
Blythe, D., Hand, NM, Jackson, P., et al., 1997. El
las temperaturas superiores a 50 ° C promueven la
uso de resina de metacrilato de metilo para la inclusión de
desnaturalización de las proteínas, provocando la pérdida de la
biopsias de trépano de médula ósea. Revista de patología
actividad enzimática y la reducción de la antigenicidad. Se han
clínica 50, 45–49.
utilizado tres procedimientos de incrustación a baja
Bourne, CAJ, St John, DJB, 1978. Aplicación de
temperatura con plásticos Lowicryl: sustitución por congelación,
Tinciones histoquímicas e histológicas de cortes
secado por congelación y descenso progresivo de la
epoxi: pretratamiento con permanganato de
temperatura (PLT). Ahora hay disponibles máquinas de
potasio y ácido oxálico. Ciencias de laboratorio
procesamiento que pueden acortar y estandarizar los tiempos
médico 35, 397–398.
de procesamiento y reducir las ocasiones en las que es
necesario manipular tejido. Bowdler, AL, Griffiths, DFR, Newman, GR, 1989.
Este capítulo se ha centrado principalmente en el uso de El análisis morfológico e inmunocitoquímico de
secciones acrílicas semifinas para microscopía óptica de alta biopsias renales por microscopía óptica y electrónica
resolución donde se ha aplicado una amplia gama de utilizando un único método de procesamiento.
técnicas. Es cuestionable cómo los futuros medios de Histochemical Journal 21, 393–402.
inclusión de plástico y sus técnicas impactan en la práctica Carlemalm, E., Garavito, RM, Villiger, W., 1982.
histológica de rutina, pero para algunos procedimientos Desarrollo de resinas para microscopía electrónica y
especializados, el uso de medios de inclusión de plástico análisis de incrustación a baja temperatura. Journal
sigue siendo necesario y / o beneficioso. of Microscopy 126, 123-143.
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Cómo funcionan las tinciones histológicas 9
Richard W. Horobin
Introducción Una teoría general de la tinción.
Todos los métodos de tinción histológica, desde la tinción ¿Por qué se llevan las manchas a los tejidos?
con ácido hasta la impregnación con plata, se basan en los
La captación de tinción a menudo se debe a afinidades entre el
mismos principios fisicoquímicos, como se describirá en este
tinte o el tejido reactivo. En la bibliografía sobre tinción
capítulo. Se proporcionan ejemplos de varias de las áreas de
histológica, decir que un componente de tejido tiene una alta
aplicación discutidas en este libro. Se enfatizan los métodos
afinidad por un colorante puede significar simplemente que, en
que utilizan colorantes, por lo que al final del capítulo se
las condiciones de uso, el componente se tiñe intensamente. Sin
proporciona información básica sobre los colorantes.
embargo, la afinidad también se usa para describir aquellas
También se adjunta una guía de resolución de problemas
fuerzas atractivas que se cree que unen el tinte al tejido.
genérica.
Las preguntas clave a tener en cuenta al intentar
Los químicos físicos usan el término afinidad en el
comprender las tinciones histológicas son las siguientes:
primer sentido, y aquí se adopta su uso. Entonces, en
una. Por qué alguna ¿Se manchan los componentes del tejido?
este capítulo, la afinidad describe la tendencia de una
B. ¿Por qué los componentes manchados permanecer ¿manchado?
mancha a transferirse de la solución a una sección. La
C. Por qué son todos componentes no manchados? magnitud de la afinidad depende de cada factor que
Las respuestas suelen ser complejas, lo que refleja la favorezca u obstaculice este movimiento. Deben
naturaleza multifásica del proceso de tinción, en el que las tenerse en cuenta las interacciones tinte-tejido, tinte-
células sólidas y los tejidos interactúan con soluciones de solvente y tinte-tinte, al igual que las interacciones
reactivos de tinción. Así, la histoquímica enzimática no es solvente-solvente. Este enfoque supone inicialmente
"meramente" bioquímica, ni el procedimiento de ácido que la tinción continúa hasta que se alcanza el
peryódico-Schiff (PAS) es meramente química orgánica, ni la equilibrio, pero en la práctica esto a menudo no se
inmunotinción es meramente inmunoquímica. Además de la logra. Además, la absorción de colorantes y reactivos
bioquímica, la química y la inmunoquímica, dichos métodos suele ser de varios pasos, tanto en el espacio como en
de tinción también están influenciados por la captación el tiempo. Un reactivo puede entrar inicialmente en
selectiva de reactivos en los tejidos y las pérdidas selectivas los tejidos debido a, digamos, atracciones
de productos y / o reactivos de los tejidos. Tales captaciones culombóticas. Una vez dentro, puede formar enlaces
y pérdidas dependen tanto de factores de afinidad como de covalentes con algunos grupos de tejidos.
tasa. Nota de nomenclatura:tinciónSiempre implica el
etiquetado visual de alguna entidad biológica adjuntando, o Varias contribuciones a la afinidad del tejido de tinción se
depositando en su vecindad, un marcador de color o forma describen en Cuadro 9.1, y se analizan a continuación. Los
característicos. losMancha es el marcador, o el reactivo procesos prácticos de tinción comúnmente involucran varios de
utilizado para generar el marcador. estos factores.

158 9 Cómo funcionan las tinciones histológicas
Cuadro 9.1 Factores que contribuyen a las afinidades entre el tinte y el tejido
Interacciones Ejemplos prácticos donde el factor es importante
Interacciones reactivo-tejido
Atracciones Coulombic Colorantes ácidos y básicos y otros reactivos iónicos, incluidas las sales
Las fuerzas de van der Waals inorgánicas Más importante con moléculas grandes como las manchas de fibras
elásticas y productos de reacción final como bisformazan en la histoquímica de
Enlaces de hidrógeno enzimas Tinción de glucógeno por ácido carmínico y colágeno por rojo de Sirio
Unión covalente Métodos como el Feulgen nucleal, PAS y mercurio naranja para tioles
Interacciones solvente-
solventeEl efecto hidrofóbico Sistemas de tinción que utilizan soluciones acuosas de colorantes u otros reactivos
orgánicos; sustratos de enzimas, por ejemplo
Interacciones reactivo-reactivo Tinción metacromática con tintes básicos, pigmentos inorgánicos en histoquímica
de enzimas Gomoritype, impregnación de plata
Interacciones reactivo-tejido
Las fuerzas de der Waals suelen ser más críticas cuando
Atracciones Coulombic, que también se han denominado los tejidos o tintes contienen tales restos.
enlaces salinos o enlaces electrostáticos, son interacciones En consecuencia, las proteínas ricas en residuos de
ampliamente discutidas entre reactivo y tejido. Estos surgen tirosina y triptófano, y los ácidos nucleicos con sus bases
de atracciones electrostáticas de iones diferentes, por heterocíclicas, favorecen los atractivos de van der Waals, al
ejemplo, los cationes coloreados de colorantes básicos y igual que los grandes sistemas aromáticos de tinciones
estructuras tisulares ricas en aniones como ADN fosfatado o como los colorantes bisazo y las sales de bistetrazolio, los
mucosustancias sulfatadas (Lyon 1991; Prentø 2009). En la colorantes halogenados (como la rosa de Bengala y la
práctica, la cantidad de ión colorante que se une a un floxina). , y sustratos enzimáticos a base de naftilo e indoxilo
sustrato de tejido depende no solo de los signos de carga con conjugación extendida (Horobin y Bennion 1973). Por
del tinte y el tejido, sino también de su magnitud, de la ejemplo, las atracciones de van der Waals contribuyen
cantidad de electrolito no colorante presente en el baño de sustancialmente a la afinidad del tejido teñido al teñir fibras
tinte y de la capacidad del tejido. sustrato para hincharse o elásticas, ricas en residuos aromáticos de desmosina e
encogerseScott 1973; Bennion y Horobin 1974; Goldstein y isodesmosina, con ácido poliaromático y tintes básicos como
Horobin 1974b; Horobin y Goldstein 1974). el rojo Congo y la orceína.
Tales fenómenos son importantes para todos los reactivos Enlaces de hidrógeno es una atracción de tejido colorante que
iónicos, no solo para los colorantes, un ejemplo son los aniones surge cuando un átomo de hidrógeno se encuentra entre dos
peryodato utilizados como oxidantes en el procedimiento de átomos electronegativos (por ejemplo, oxígeno o nitrógeno),
ácido periódico-Schiff (Scott y Harbinson 1968). Incluso los aunque está unido covalentemente solo a uno. El agua tiene
sustratos tisulares inicialmente no cargados adquieren carácter enlaces de hidrógeno extensivamente a sí misma, formando los
iónico después de unirse a los reactivos iónicos, por ejemplo, grupos importantes para el efecto hidrofóbico que se analiza a
tinción con glucógeno mediante el procedimiento PAS y con continuación, y también a otras moléculas con grupos de enlace
carmín de Best. de hidrógeno, como muchos tintes y componentes de tejidos.
Las fuerzas de van der Waals incluyen atracciones Como hay muchas más moléculas de agua presentes que el
intermoleculares tales como dipolo-dipolo, dipolo inducido por tinte, los enlaces de hidrógeno no suelen ser importantes para
dipolo y fuerzas de dispersión. Estos ocurren entre todos los la afinidad del tejido teñido cuando se utilizan disolventes
reactivos y sustratos de tejido, pero dado que las moléculas con acuosos. Una excepción surge cuando el sustrato favorece
sistemas electrónicos ampliamente deslocalizados tienden a particularmente la unión de hidrógeno, como es el caso de las
tener dipolos más grandes y son más polarizables, van fibras de tejido conectivo (Prentø
Una teoría general de la tinción. 159
2007). En soluciones total o parcialmente no acuosas, el por tintes de Sudán. Cuando estos tintes hidrófobos
enlace de hidrógeno también puede ser significativo, como se aplican a partir de soluciones sustancialmente
con la tinción carmín de Best para glucógeno (Horobin y acuosas, el efecto hidrófobo será una contribución
Murgatroyd 1970). importante a la afinidad. Cabe señalar que el efecto
Unión covalente también se produce entre el tejido y la hidrofóbico a veces se denomina enlace hidrofóbico,
tinción, enlaces que pueden considerarse simplemente aunque no se trata de enlaces especiales (solo enlaces
como otra fuente de afinidad entre el tejido y la tinción. Los de hidrógeno agua-agua y, a veces, atracciones de van
métodos reactivos prácticos, por ejemplo, el procedimiento der Waals del tejido de tinción).
nuclear de Feulgen y el ácido periódico-Schiff, se describen Algunos procedimientos de tinción que involucran tintes
en otra parte de este volumen. Los enlaces covalentes de Sudán usan solventes en los que el agua está ausente o
polares entre iones metálicos y tintes "mordientes" son un es solo un componente menor. Aquí la segunda ley de la
caso especial. La unión del tinte al tejido debido a tales termodinámica: la tendencia de un sistema a cambiar
uniones se ha denominadomordaz pero es de estado espontáneamente para maximizar su desorden (es decir,
incierto. Las propiedades de tinción características de los paraentropía aumentar como se describe en los textos de
tintes mordientes pueden tener otras causas, o al menos termodinámica química) - puede invocarse nuevamente.
adicionales. Por ejemplo, a diferencia de la mayoría de los Tinte disperso a través de la grasay El solvente constituye un
tintes catiónicos utilizados como tintes biológicos, los tintes sistema más desordenado que el tinte restringido a una sola
catiónicos de complejos metálicos suelen ser marcadamente fase. En consecuencia, el tinte se dispersa y se produce la
hidrófilos (Bettinger y Zimmermann 1991) y, en tinción. Por supuesto, tales aumentos en la entropía que
consecuencia, resisten la extracción en líquidos de involucran sustrato y colorante ocurren en todos los tipos de
deshidratación alcohólica (Marshall y Horobin 1973). sistemas de tinción.
Interacciones solvente-solvente Interacciones mancha-mancha
Una contribución importante a la afinidad del tejido Las interacciones colorante-colorante también pueden
teñido cuando se utilizan reactivos orgánicos o contribuir a la afinidad. Las moléculas de colorante tienden a
colorantes en solución acuosa es la efecto hidrofóbico. atraerse entre sí, formando agregados. Incluso en soluciones
Ésta es la tendencia de las agrupaciones hidrófobas diluidas, y especialmente en soluciones acuosas donde el efecto
(como las cadenas laterales de proteínas de leucina y hidrófobo es importante, a menudo están presentes dímeros o
valina; o las agrupaciones de bifenilo y naftilo de agregados más grandes de iones colorantes. Las atracciones de
sustratos y colorantes enzimáticos) a unirse, aunque van der Waals (ver arriba) entre moléculas de colorante serán
inicialmente estén dispersas en un entorno acuoso. El importantes tanto en soluciones acuosas como no acuosas. La
proceso ocurre porque el agua es un líquido muy agregación del tinte aumenta con la concentración, por ejemplo,
estructurado. Muchas moléculas de agua se mantienen cuando se acumulan altas concentraciones de tinte en las
unidas por enlaces de hidrógeno (ver más arriba) en secciones de tejido. Con colorantes básicos (catiónicos) esto
grupos transitorios, cuya formación se ve favorecida por ocurre en sustratos de alta densidad de carga negativa, por
la presencia de grupos hidrófobos. Los procesos que ejemplo, polisacáridos sulfatados en gránulos de mastocitos, un
rompen los cúmulos en moléculas de agua individuales sitio clásico paratinción metacromática por colorantes como el
ocurren espontáneamente, porque estos eventos azul de toluidina. Este fenómeno se produce porque los
aumentan la entropía del sistema. En consecuencia, se agregados de tinte tienen propiedades espectrales diferentes a
favorece termodinámicamente la eliminación de los las del tinte monomérico. Que las interacciones colorante-
grupos hidrófobos estabilizadores de agrupaciones del colorante contribuyen a la afinidad en las secciones de tejido fue
contacto con el agua, poniéndolos en contacto entre sí. demostrado cuantitativamente porGoldstein (1962).
Tanford 2004). El efecto se vuelve más importante a Otros ejemplos de interacciones mancha-mancha
medida que el sustrato y el reactivo se vuelven más que contribuyen a la afinidad incluyen nanocristales y
hidrófobos, como ocurre con la tinción de grasas. microcristales metálicos generados por oro o plata.
impregnación, precipitados de sulfuro metálico formados en la Para ilustrar estos puntos, considere algunas manchas
histoquímica enzimática de tipo Gomori, y el complejo de comunes.
transferencia de carga de azur-eosina púrpura producido Los pigmentos como el azul de Prusia generado en el método
durante la tinción Romanowsky-Giemsa de núcleos celulares ( de Perls para el hierro y el sulfuro de plomo producido en la
Horobin 2011). histoquímica enzimática de estilo Gomori son prácticamente
insolubles en disolventes estándar. Esto también es válido para
Algunas posibilidades inusuales los microcristales de plata y oro producidos por impregnación
de metales. Algunos pigmentos orgánicos son menos
Algunas manchas no son absorbidas por sus tejidos objetivo. satisfactorios. Por tanto, los colorantes azoicos, formazanos e
Entinción negativa las formas de las estructuras se describen índigos sustituidos producidos como productos de reacción
delimitándolas o llenándolas con una mancha. Los ejemplos finales en la histoquímica enzimática tienen baja solubilidad en
incluyen la visualización de microorganismos individuales agua, pero pueden disolverse en medios hidrófobos como
usando nigrosina y la demostración de los canalículos de la alcoholes, xileno y poliestireno. En tales casos, se utilizan medios
matriz ósea usando picrotionina. de montaje hidrófilos y la tinción de elementos tisulares ricos en
A veces, las manchas se incorporan a las criaturas vivas, de lípidos debe considerarse como un posible artefacto.
manera que reflejan la composición bioquímica y las actividades
fisiológicas de la célula u organismo vivo. Tradicionalmente Las solubilidades de formazanos y azoides a veces se
denominadotinción vital o tinción supravital, esto ahora se reducen por en el lugar conversión a complejos metálicos.
describe generalmente como el uso de sondas fluorescentes. Otras tinciones rutinarias de complejos metálicos son los
Durante los últimos 20 años esta metodología ha complejos de aluminio, cromo y hierro de la hemateína y el
experimentado un renacimiento; para obtener una descripción complejo de cromo de la galocianina. Estos tintes de
general reciente, consulteCelis (2006). complejos metálicos no se eliminan fácilmente de los tejidos
mediante los fluidos de procesamiento de rutina o los
Solubilidad, una propiedad relacionada
medios de montaje (ver más arriba).
Esto contrasta con los tintes básicos (catiónicos) de rutina,
Una propiedad poco discutida, pero importante, de los tintes
como el violeta cristal o el azul de metileno, que se disuelven
es su solubilidad. Por ejemplo, al teñir grasa con tintes de
rápida y libremente en los alcoholes inferiores. Los tintes
Sudán, un límite superior de intensidad de tinción se
ácidos (aniónicos) habituales, como la eosina Y o el naranja
establece por la solubilidad de los tintes en la sustancia
G, son a menudo menos solubles en alcoholes, al igual que
objetivo, y también está influenciado por la solubilidad en el
los tintes básicos hidrófilos con grandes sistemas
solvente del baño de tinción. La solubilidad también
aromáticos, como el azul alcián. Los tintes no iónicos, como
interviene en la retención del tinte después de la tinción: ver
las manchas de grasa de Sudán, son solubles en agentes
más abajo. La solubilidad de un reactivo de tinción tiene
deshidratantes y disolventes aclaradores comunes y en
causas complejas. En pocas palabras, cuanto más fuertes
aditivos de resina. Nota: las estructuras de los colorantes
son las interacciones reactivo-reactivo, menor es la
básicos hidrófilos y lipófilos ejemplares se muestran en
solubilidad. Para una discusión general de la solubilidad,
Figura 9.1.
véanse textos fisicoquímicos como el deLetcher (2007).
Por lo tanto, las secciones teñidas con tintes básicos de rutina
deben deshidratarse rápidamente a través de los alcoholes, o
¿Por qué se retiene la mancha en el tejido mediante el uso de disolventes no alcohólicos, o mediante
después de retirarla del baño de tinción? secado al aire, mientras que la deshidratación es menos crítica
con los tintes ácidos. Las secciones teñidas con tintes ácidos o
Esto ocurre porque las manchas tienen una afinidad muy alta básicos generalmente se montan en medios no acuosos para
por los elementos tisulares y / o una baja afinidad por los fluidos evitar la extracción del tinte. Alternativamente, los tintes pueden
de procesamiento y los medios de montaje, o al menos se inmovilizarse, por ejemplo, mediante la formación de
disuelven en estos últimos materiales muy lentamente. compuestos de coordinación de metales, fosfotungstatos o
Números y afinidades de los sitios de unión.

Azul alciano 8G
CH3 CH3 Ambos factores influyen en la tinción. Sin embargo, en ausencia

de una investigación cuantitativa, no se pueden distinguir
CH3 +norte +norte CH3
fácilmente, por lo que aquí se analizarán como un efecto único.
CSCH2 CH2CAROLINA DEL SUR
Las afinidades del tejido de tinción y el número de sitios de

CH3 norte
norte
norte CH3
unión presentes en los tejidos pueden variar de forma
CH3 norte norte
CH3 independiente.
norte Cu norte
norte norte Los tintes de Sudán se pueden usar como ejemplo. Estos
CH3 CH3
norte
tienen una alta afinidad por las grasas pero una baja
CH3 norte norte CH3 afinidad por las proteínas hidratadas circundantes.
CSCH2
Alternativamente, se pueden considerar sistemas de tinción
CH2CAROLINA DEL SUR
+norte +norte
CH3 CH3
en los que se forman enlaces covalentes. Los reactivos dan
CH3 CH3 productos coloreados solo con una gama limitada de
agrupaciones químicas de tejidos. Por tanto, la secuencia del
Cristal violeta CH3 CH3 reactivo de hidrólisis ácida-Schiff de la técnica nucleal de
Feulgen da derivados rojos solo con ADN.
norte
La comprensión de los sistemas de tinción a menudo requiere

la consideración de patrones de afinidades. Con los pares
tradicionales de colorante ácido-colorante básico (H&E,
Papanicolaou y Romanowsky), los colorantes ácidos cargados
CH3 CH3
norte norte+
negativamente tienen altas afinidades por las estructuras
tisulares que llevan cargas catiónicas (proteínas, en condiciones
CH3 CH3
ácidas). Sin embargo, tienen bajas afinidades por las estructuras
portadoras de cargas negativas (las ricas en glicosaminoglicanos
Teñir Peso iónico Registro P sulfatados o en ácidos nucleicos fosfatados), siendo lo contrario
el caso de los colorantes básicos. Esto produce patrones de
Azul alciano 8G 1380 - 9,7
tinción de dos tonos en los que el citoplasma contrasta con el
Cristal violeta 372 + 1,9
material nuclear.
Las condiciones prácticas de tinción maximizan las afinidades
Figura 9.1 Fórmulas estructurales de dos tintes básicos ampliamente
utilizados, más descripciones numéricas de algunas de sus propiedades selectivas. Los colorantes básicos se aplican a partir de
fisicoquímicas. soluciones neutras o ácidas, ya que, en condiciones alcalinas, las
proteínas tienen una carga negativa general y, por lo tanto,
también pueden unirse a los colorantes básicos. Las afinidades
complejos de yodo. Los tintes no iónicos deben montarse en
también se ven influidas por la variación de la concentración de
medios acuosos.
sal inorgánica presente. Las diversas hematoxilinas de aluminio,
por ejemplo, difieren sustancialmente a este respecto. La
¿Por qué las manchas no se absorben en todas metodología de concentración crítica de electrolitos (Scott 1973)
las partes del tejido? y varios otros procedimientos empíricos se basan en el control
del contenido de electrolitos. Sin embargo, la tinción que
Esta cuestión de selectividad es fundamental para la distingue dos estructuras sigue siendo posible incluso cuando
histoquímica, e incluso los métodos de supervisión rutinarios las afinidades del tejido de tinción y el número de sitios de unión
como la hematoxilina y eosina (H&E), las tinciones de a tinción son los mismos. Esto se debe a que la velocidad de
Papanicolaou y Romanowsky-Giemsa distinguen los núcleos del absorción del reactivo, o la velocidad de la reacción posterior, o
citoplasma. Por tanto, debemos descubrir qué factores la velocidad de pérdida de reactivo o producto, puede no ser la
controlan tales selectividades. misma en las dos estructuras.
Tasas de absorción de reactivo Los iones se unen de forma no selectiva a muchos grupos de
tejidos. Posteriormente, el tejido se trata con un revelador
Se puede controlar la velocidad de los métodos de teñido
capaz de reducir los cationes de plata a metal plateado. La
progresivo, por ejemplo, el teñido con mucina usando azul
velocidad de reacción con este agente reductor es crítica. Si
alcián o hierro coloidal. La selectividad requiere periodos cortos
la velocidad es demasiado rápida, debido a la alta
de teñido durante los cuales solo las mucinas de tinción rápida
concentración o alta reactividad del reactivo, los granos de
adquieren color (Goldstein 1962, Goldstein y Horobin 1974a). Si
plata se depositan de forma no selectiva por todo el tejido. Si
la tinción es prolongada, también se pueden teñir materiales
la reducción es demasiado lenta, no se produce tinción
basófilos adicionales, como núcleos y citoplasmas ricos en ARN.
porque la mayoría de los iones de plata se difunden en el
Los colorantes usados de esta manera son a menudo de gran
disolvente antes de reducirse. La tinción selectiva ocurre
tamaño y, por lo tanto, se difunden lentamente, maximizando el
cuando los iones de plata se difunden rápidamente del
control posible a través de efectos de tasa diferencial.
fondo y se retienen en entidades menos permeables (p. Ej.,
Fibras nerviosas, nucléolos, glóbulos rojos) donde luego se
reducen (Peters 1955a, 1955b).
Tasa de reacción Estos métodos de velocidad controlada están plagados de una
amplia gama de artefactos técnicos. De hecho, cualquier factor que
La tinción selectiva con reactivos reactivos, que produce
afecte la tasa de pérdida de reactivo (por ejemplo, variación en el
derivados coloreados, puede depender del diferencial tasas
grosor de la sección, temperatura, agitación de la solución de
de reacción. Por ejemplo, el ácido periódico puede oxidar
reactivo, presencia de cavidades en el tejido) puede alterar el
una variedad de sustratos presentes en los tejidos. Sin
resultado de la tinción.
embargo, en aplicaciones histoquímicas del procedimiento
de ácido periódico-Schiff, el tiempo de oxidación corto limita
Metacromasia y fenómenos relacionados
la coloración posterior a agrupaciones de polisacáridos de
1,2-diol de reacción rápida. La histoquímica enzimática Incluso cuando ni la afinidad ni la velocidad controlan el patrón
proporciona más ejemplos de la selectividad que controla la de tinción, todavía se puede obtener una coloración selectiva.
velocidad de reacción. Cuando se incuba a un pH bajo, la Por ejemplo, los tintes básicos como el azul de metileno y el azul
hidrólisis de un fosfato orgánico es rápida en los tejidos que de toluidina son absorbidos por una variedad de sustratos
contienen fosfatasas ácidas, mientras que en las estructuras basófilos en los tejidos. La cromatina se tiñe
que contienen fosfatasas alcalinas, con un pH óptimo más ortocromáticamente de azul, pero la matriz del cartílago, los
alto, las velocidades de hidrólisis son lentas. gránulos de los mastocitos y las mucinas se tiñen de un púrpura
rojizo metacromático (revisado porPearse 1968) debido a la
Tasa de pérdida de reactivo formación de agregados de tinte en estos sitios ricos en
polianiónicos.
Diferenciación o tinción regresiva implica pérdidas selectivas
de tinción de los tejidos. Muchos métodos de teñido
¿Cuáles son los efectos sobre la tinción de la
aprovechan este fenómeno, por ejemplo, la tinción de las
estrías musculares con hierro-hematoxilina y de las vainas modificación tisular previa?
de mielina con luxol fast blue. En tales procedimientos, una

Las modificaciones incluyen la fijación, cuyos efectos sobre la
tinción inicial no selectiva va seguida de una extracción en
tinción son accidentales, así como técnicas de bloqueo y
un disolvente. El tinte se pierde primero de las estructuras
extracción destinadas a alterar los patrones de tinción. Las
permeables como las fibras de colágeno. Las estructuras
modificaciones debidas a la incrustación de resina se analizan
relativamente impermeables, como las bandas musculares A
por separado a continuación.
y Z, y las vainas de mielina, retienen la tinción durante más
tiempo.
Efectos de la fijación
El control de la tasa de pérdida de reactivo es fundamental en una
metodología muy diferente, a saber, la tinción con plata de las fibras La fijación se lleva a cabo para evitar pérdidas de componentes
nerviosas. Durante un paso de impregnación, la plata tisulares en soluciones de procesamiento y tinción.
y reducir los cambios morfológicos post mortem del tejido. Sin embargo, la realidad puede ser más compleja que la
La fijación convierte los componentes solubles del tejido en expectativa, de varias formas.
derivados insolubles, resistentes a la autólisis o al ataque de Por tanto, el bloqueo puede ser incompleto, como ocurre con
bacterias y hongos. Para una descripción general de la el reactivo de ácido nitroso de van Slyke utilizado para convertir
fijación, consulte el Capítulo 4; aquí solo se discuten las los grupos amino tisulares que provocan la acidofilia en grupos
influencias sobre la tinción. hidroxilo no ionizantes. Sin embargo, la eficacia de este reactivo
A menudo, una sustancia determinada es retenida en depende del tejido y del fijador, y puede confundir a un
diferentes grados por diferentes agentes fijadores, y nada trabajador de laboratorio que no sea crítico. Se producen
puede teñirse que no se retenga. Por ejemplo, muchos efectos análogos con los procedimientos de extracción
lípidos se conservan bien después de la fijación en tetróxido histoquímica. Por tanto, la eliminación del ARN de los ribosomas
de osmio o dicromatos, se conservan mal después de la por la ARNasa también depende del fijador y no se produce
formalina y se extraen activamente durante la fijación con fácilmente después de la fijación con formalina.
alcohol o acetona. Por lo tanto, la tinción de lípidos después También se producen modificaciones tisulares inesperadas
de la fijación alcohólica es ineficaz. debido a procedimientos de bloqueo y extracción, eliminando
Sin embargo, aunque la retención de una sustancia es sustancias adicionales a las previstas. Cuando se utilizan ácidos
necesaria, la mera retención puede ser insuficiente para la tricloroacético o perclórico para extraer ácidos nucleicos,
demostración histoquímica posterior. Por ejemplo, aunque también pueden producirse pérdidas de polisacáridos y algunas
el glutaraldehído a menudo retiene más proteínas que otros proteínas. Surgen problemas análogos durante las extracciones
agentes fijadores, su uso en inmunotinción e histoquímica enzimáticas cuando están presentes trazas de impurezas
enzimática (y la mayoría de los antígenos y todas las enzimas enzimáticas. Los polisacáridos también se pueden perder por
son proteínas) es limitado. Las mismas reacciones químicas solvolisis química durante la 'metilación' de los ácidos tisulares
que insolubilizan las proteínas también modifican la por el HCl metanólico, y el ADN y el ARN se extraen mediante el
actividad hapténica y enzimática. El alcohol y la acetona, por anhídrido acético-piridina utilizado para bloquear las histonas
otro lado, aunque son pobres para retener proteínas en los nucleares. De hecho, el material se puede extraer colocando
tejidos, también lo son para destruir la actividad de soluciones, especialmente si son ácidas o alcalinas o cuando los
cualquier antígeno o enzima retenido. Por tanto, tanto la tejidos están mal fijados.
retención como la reactividad de las sustancias afectan a la Además de estos efectos químicos limitados, todos estos
tinción y ambas pueden depender del fijador. procedimientos modifican las propiedades físicas de una
sección de tejido, como su permeabilidad. Después de la
La fijación tiene influencias más sutiles en los patrones de exposición a agentes inflamatorios o proteasas, los tejidos
tinción, de los cuales, los tintes ácidos y básicos proporcionan pueden teñirse más rápidamente: por ejemplo, los núcleos
ejemplos instructivos. Como se muestraCantante (1952), dicha pueden teñirse con azul alcián y los citoplasmas con el tinte
tinción generalmente se ve reforzada por la desnaturalización "colágeno" de una tinción tricrómica.
de proteínas producida por los fijadores. Además, el equilibrio
entre acidofilia y basofilia de un tejido también se ve afectado.
Por lo tanto, la formalina y el tetróxido de osmio generalmente ¿Cuáles son los efectos de la geometría de la muestra sobre
reducen la acidofilia tisular, mientras que las soluciones ácidas la tinción?
de dicromato generalmente aumentan la acidofilia tisular (Baker
1958). Aquí, "muestra" significa el material biológico que está
realmente en contacto con la solución de tinción, como una
sección desparafinada, un frotis cervical o un toque de
Efectos del bloqueo y extracción histoquímicos
ganglio linfático. Al mirar una pantalla o un microscopio, es
Tales procesos subyacen a ciertos procedimientos de fácil olvidar que una muestra tiene grosor, no solo ancho y
control. Los componentes del tejido se modifican de forma ancho. A muchas personas les cuesta creer que las
que se eliminen las manchas. En consecuencia, cualquier diferencias de grosor de unos pocos! Mo menos influyan en
tinción posterior indica una falta de especificidad de tinción. los patrones de tinción. Sin embargo, disperso
las células preparadas mediante frotis a menudo se tiñen de manera tinciones, las células situadas en el centro pueden ser
diferente a las células del mismo tipo cortadas de un bloque de sobreteñidas por el tinte más pequeño presente, como se ilustra
tejido, y las secciones delgadas se tiñen de manera diferente a las por Boon y Drijver (láminas 6.4 y 24.4; 1986).
gruesas. De hecho, las secciones con perfiles superficiales El perfil de una sección también está influenciado por la
irregulares se tiñerán de manera diferente al mismo material fijación. Los fijadores coagulantes como el líquido de Carnoy
biológico cortado en secciones con superficies lisas. tienden a romper células y tejidos, dando lugar a muestras más
dispersas, mientras que los fijadores como la formalina dan
Influencias geométricas simples formas más integrales. Para una ilustración directa de esto, vea
Horobin (Figura 14, 1982). En consecuencia, si una tinción de
En igualdad de condiciones, las muestras delgadas se tiñen más
tricrómico de velocidad controlada da lugar al equilibrio de color
rápido que las gruesas; las muestras con superficies irregulares
correcto cuando se aplica a tejido fijado con formalina, tenderá a
se tiñen más rápido que las lisas; y las muestras dispersas se
mostrar una tinción excesiva por la tinción de fibra de colágeno
tiñen más rápido que las losas uniformes. En un procedimiento
(generalmente el tinte más grande) si se aplica sin modificar el
de tinción determinado, por lo tanto, las muestras dispersas,
material fijado en Carnoy. líquido.
como frotis o frotis, requieren tiempos de tinción más cortos
que las secciones de células similares cortadas de un tejido
El tamaño de las estructuras biológicas en relación con el espesor
sólido. Además, las criosecciones (que suelen tener superficies
de la sección también puede ser significativo. Considere los gránulos
irregulares) suelen teñirse más rápido que las secciones de
de secreción con diámetros mucho más grandes o mucho más
parafina más lisas. Cabe señalar que las secciones de resina
pequeños que el grosor de la sección. Todos los gránulos grandes se
suelen tener perfiles más suaves (ver más abajo).
cortarán en rodajas, con su contenido expuesto en una superficie de
En sistemas con mecanismos de tinción de velocidad
la sección, mientras que algunos gránulos pequeños estarán
controlada, tales efectos pueden interferir con la selectividad.
intactos, encerrados dentro de la sección. Esto influirá en gran
Algunas tinciones tricrómicas requieren tiempos de tinción más
medida en la accesibilidad para tinciones más grandes: por ejemplo,
cortos con criosecciones que con secciones de parafina; de lo
inmunotinción en la que las tinciones son macromoleculares. Por lo
contrario, las criosecciones se tiñen en exceso por el colorante
tanto, los "dos tipos de gránulos de secreción" informados en varios
de mayor peso iónico.
estudios de inmunotinción pueden representar gránulos intactos
frente a gránulos cortados. Estos efectos pueden ser aún más
Efectos más complejos de la geometría de la muestra
pronunciados en las secciones de resina: ver más abajo.
Las geometrías más complejas pueden originarse en las

estructuras biológicas o pueden surgir durante la preparación La complejidad geométrica también surge del hinchamiento
de la muestra. Las últimas, las geometrías de artefactos, se de los componentes celulares y tisulares en los disolventes de
consideran en primer lugar. tinción. Los materiales ricos en glicosaminoglicanos (por
Una modificación bien conocida de la geometría de la ejemplo, moco y matriz de cartílago) se hinchan notablemente
sección inducida por la microtomía es la vibración. Esto en soluciones acuosas; y las fibras de colágeno se hinchan
da como resultado secciones que contienen tiras alternas enormemente en los extremos de pH. La hinchazón puede
gruesas y finas. Las posibles consecuencias de la tinción aumentar las tasas de tinción de estas estructuras, en
incluyen la aparición de tiras alternas de tinción fuerte y comparación con el material no hinchado. Esto probablemente
débil o, con algunos tricromes, tiras alternas de color contribuye a la alta selectividad del azul alcián acuoso por las
variable. mucinas, ya que la tinción nuclear suele estar ausente después
También surgen geometrías complejas en las de cortos tiempos de tinción; ya la alta selectividad de las
preparaciones de frotis. Por ejemplo, los frotis de epitelios a tinciones picro-tricrómicas fuertemente ácidas para las fibras de
menudo contienen grupos multicelulares de células, así colágeno. Dado que el alcohol no induce tal hinchazón, estos
como dispersiones monocelulares. Las células en el centro efectos pueden explicar parcialmente los cambios en la tinción
de tales grupos son menos accesibles a las tinciones que las cuando se usa un tinte en solución alcohólica en lugar de
células periféricas. En consecuencia, en métodos de acuosa. Luxol fast blue, por ejemplo, tiñe la mielina
velocidad controlada como Papanicolaou y Romanowsky selectivamente de una solución acuosa, pero de
las soluciones alcohólicas dan una tinción selectiva de las fibras de Resinas como aglutinantes de manchas
colágeno. Estos efectos suelen ser más marcados en las secciones de

Las resinas pueden unir las manchas por sí mismas. Por
resina, como se indica más adelante.
ejemplo, el monómero de metacrilato de glicol a veces se
contamina con ácido metacrílico, lo que da como resultado
¿Cuáles son los efectos de la incrustación de resina la formación de resinas de metacrilato de glicol carboxiladas.
en la tinción? Tal resina aniónica puede producir una fuerte basofilia de
fondo, que no ocurre cuando se usa el monómero puro. Sin
Normalmente, la incrustación de resina implica la infiltración de embargo, la tinción de fondo debido a la unión de colorantes
material biológico con un monómero reactivo, más lipofílicos, como aldehído fucsina o verde de Janus, al
comúnmente un acrilato o epóxido. La polimerización posterior metacrilato de glicol es inevitable porque la resina en sí es
produce un bloque de resina que encierra la muestra. Las algo lipofílica, a pesar de que el monómero de resina es
secciones cortadas de tales bloques se denominan secciones de miscible en agua (Horobin y col. 1992). Además de los
resina o plástico. La presencia de resina, además del material artefactos de fondo, la unión entre tinción y resina puede
biológico, durante el proceso de tinción da lugar a cambios en el producir artefactos de tinción negativos, ya que la cantidad
patrón de tinción. Si la resina se elimina antes de la tinción, de reactivo que alcanza el objetivo de tinción biológica
como suele hacerse con las secciones de metacrilato de metilo, puede reducirse mediante la unión a la resina. Un ejemplo
los patrones de tinción se parecen mucho a los de las secciones es la tinción histoquímica de enzimas débiles que se observa
de parafina, por lo que no se comentan aquí. Las muestras con ciertos sustratos de enzimas lipofílicas.
también se pueden incrustar en un polímero preformado, El metacrilato de glicol, el componente principal de
normalmente nitrocelulosa (es decir, celoidina). Estas secciones muchos kits de incrustación de resinas microscópicas de luz,
se tiñen de forma rutinaria con el polímero presente y se exhibe otro artefacto de unión al tinte, a saber, la unión
comportan de manera muy similar a las secciones de resina. "irreversible" de ciertos tintes. Esto surge con tintes de
tamaño moderado, por ejemplo, hematoxilina de aluminio o
eosina. Estos pueden entrar en la resina y modificar la
Resinas como excluyentes de manchas estructura del polímero, haciéndolo menos permeable. Este
efecto antiplastificante atrapa el colorante, aunque en
Como las secciones de resina contienen tanto material biológico
ocasiones puede eliminarse diferenciando en disolventes
como resina, la penetración de los reactivos de tinción suele ser más
con acción plastificante, como el etanol.
lenta que en la parafina o las criosecciones. Si aumenta la
reticulación de la resina, las tasas de penetración del tinte
Cómo influye la química de tinción en los patrones de tinción
descienden aún más.
La incrustación de resina a menudo tiene efectos más Con reactivos pequeños, que se difunden rápidamente a
complicados que una mera reducción en la tasa de tinción. La través de resinas, los métodos de tinción desarrollados para
resina generalmente se infiltra en las muestras biológicas de secciones de parafina o criostato pueden usarse sin
manera desigual, con estructuras densas o hidrófilas poco modificaciones. Cuando se trabaja con medios de inclusión
infiltradas. Esto se debe a que incluso los sistemas de resinas de metacrilato de glicol de rutina, 'pequeño' significa <550
"miscibles en agua" o "de baja viscosidad" utilizan monómeros daltons (Da) e incluye sustancias tan comunes como el azul
que son ligeramente lipofílicos y bastante viscosos. Las de metileno, el fosfato de naftilo y el reactivo de Schiff. Por el
consecuencias de la infiltración desigual de resina son contrario, los reactivos grandes pueden excluirse totalmente
complejas. Por ejemplo, en las muestras incluidas en metacrilato de la resina, restringiendo la tinción a estructuras sin resina.
de glicol, las estructuras como los gránulos de secreción densos Cuando se utilizan resinas de metacrilato de glicol, los
suelen estar poco infiltrados, por lo que pueden estar libres de reactivos 'grandes' son aquellos con tamaños> 1000 Da, e
resina y mancharse fácilmente. Si el citoplasma circundante se incluyen azul alcián, rojo Sirius y anticuerpos marcados.
infiltra mejor con resina, los gránulos pueden, en consecuencia,
resaltar más clara y nítidamente que en las secciones de La posibilidad de que las manchas se unan a los
parafina. medios de inclusión lipofílicos, lo que resulta en ambos
y artefactos de tinción negativa, se señaló se han adoptado para mejorar la sensibilidad a la tinción. Sin
anteriormente. Tales problemas ocurren solo con embargo, estas variaciones también pueden reducir la cantidad
reactivos lipofílicos (Horobin y col. 1992). Cuando se de resina en una sección y, por lo tanto, reducir la exclusión de
usa resina de metacrilato de glicol, 'lipofílico' implica manchas.
reactivos cuyo log P> 1 (ver más abajo para una Las propiedades de la propia resina también influyen en
explicación de este parámetro). Los ejemplos incluyen los procesos de tinción, mencionándose ya el carácter iónico,
eosina, que debe diferenciarse con alcohol, y aldehído la reticulación y la lipofilia. El arrastre de plastificantes y
fucsina de Gomori, que no puede diferenciarse catalizadores de polimerización al bloque de resina es otro
satisfactoriamente. factor. Las variaciones en la cantidad y el tipo de plastificante
Al considerar tanto el tamaño como la hidrofilicidad influyen en la permeabilidad de la resina a las manchas. La
y la lipofilia, se pueden especificar pautas para teñir presencia de un catalizador de polimerización básico da
muestras en resinas miscibles en agua como como resultado la unión de reactivos de tinción aniónicos
metacrilato de glicol: (por ejemplo, tintes ácidos) a la resina a pH bajo, cuando la
base está protonada y es así catiónica.
• Las pequeñas tinciones hidrófilas, por ejemplo, azul de metileno y
reactivo de Schiff, se comportan de manera muy parecida a como lo
hacen en parafina o criosecciones, aunque tiñen un poco más
lentamente.
Algunas propiedades colorantes
• Manchas de tamaño moderado y / o lipofilia,
por ejemplo, eosina Y y hematoxilina de aluminio, a
Algunas influencias generales de la química del colorante
menudo se tiñen más lentamente en resina. También
en la tinción
colorean la resina, y para eliminar este fondo es
necesario diferenciarlo con disolventes plastificantes
Cuando se describen las características fisicoquímicas de
como el etanol.
los tintes que influyen en la afinidad del tinte-tejido y las
• Las manchas lipofílicas, por ejemplo, aldehído
tasas de tinción utilizando parámetros numéricos, se
fucsina de Gomori, dan una coloración fuerte de la
pueden demostrar correlaciones sistemáticas entre la
resina, que puede resultar difícil de eliminar sin
química del tinte y los resultados de la tinción. Los
una decoloración generalizada de los tejidos.
parámetros fisicoquímicos incluyen carga eléctrica;
tamaño total (representado por peso iónico o molecular);
• La tinción de los tejidos mediante grandes tinciones y carácter hidrófilo / lipófilo (modelado por el valor log P,
hidrófilas (p. Ej., Azul alcián, rojo Sirius o un anticuerpo es decir, el logaritmo del coeficiente de reparto octanol-
marcado) se limita a las estructuras poco infiltradas con agua). Para apreciar las ventajas de los parámetros
resina. numéricos, inspeccioneFigura 9.1, donde la información
química relativa a dos tintes básicos ampliamente
utilizados se presenta en dos modos, gráfico y numérico.
Cómo influye la química de la resina en los patrones de tinción
Se considera que la aparición de altas temperaturas dentro de los Al considerar los tamaños relativos de los tintes, la
bloques de tejido durante la inclusión provoca una pérdida de información proporcionada gráficamente por las fórmulas
antigenicidad y actividad enzimática. En consecuencia, se utiliza la estructurales es satisfactoria. Se puede ver que el azul alcián es
incrustación a baja temperatura para aumentar la sensibilidad de los un tinte mucho más grande que el violeta cristal. El hecho de
métodos inmunohistoquímicos e histoquímicos enzimáticos con que el patrón de tinción del azul alcián depende en gran medida
tejidos incrustados en resina. También es probable que los del tiempo de tinción (Goldstein y Horobin 1974a) no es, por
disolventes y reactivos orgánicos utilizados para la deshidratación, tanto, sorprendente. Sin embargo, el carácter relativo hidrófilo /
infiltración y polimerización provoquen un aumento de la lipófilo de los dos tintes no puede evaluarse fácilmente
desnaturalización de las proteínas. Por lo tanto, deshidratación mediante la inspección visual de las fórmulas, mientras que los
parcial y tiempos de infiltración cortos. valores de log P de los dos tintes son claramente muy
Algunas propiedades colorantes 167
diferente. Los valores negativos implican hidrofilicidad y es comprar lotes de tinte certificados por el Comisión de
los valores positivos implican lipofilicidad. De acuerdo Manchas Biológicas. Estos han sido probados en elComisión
con este concepto, las secciones teñidas con azul alcián laboratorio y cumplió con los criterios de pureza y eficacia de
se deshidratan a través de los alcoholes sin eliminar el tinción. Asombrosamente,Comisión Los tintes certificados
tinte, pero el violeta cristal se pierde fácilmente en los no son, en promedio, más caros que los tintes no
alcoholes. certificados. (Para ver un ejemplo de los beneficios de los
Por lo general, se necesitan varias propiedades del tinte para tintes certificados, consulteHenwood 2003.) Otro consejo
predecir el rendimiento de una tinción. Como una discusión práctico es comprobar si los problemas de tinción se deben
detallada es inapropiada, simplemente tenga en cuenta que las a manchas impuras reteniendo muestras de lotes de tinte
correlaciones cuantitativas de tinción de estructura basadas en eficaces. Ante un patrón de tinción inesperado, se puede
tales parámetros de estructura pueden iluminar diversos teñir una muestra con el tinte eficaz. Si esto da una
problemas en histotecnología, desde los efectos de fijación en la coloración satisfactoria, puede haber problemas debido a la
tinción de fosfolípidos (Horobin 1989), a través de los impureza del tinte.
mecanismos de tinción de los tricromes (Horobin y Flemming ¿Qué se puede hacer con los lotes de tintes impuros?
1988) para evaluar los efectos de la incrustación de resina en los Pocos tienen los recursos o la inclinación para participar en
procedimientos de tinción histoquímica (Horobin y col. 1992). el análisis o la purificación. El consejo más útil es comprar
Para obtener descripciones generales, consulteHorobin (2004, otro lote de tinte, preferiblementeComisión de Manchas
2010a). De hecho, estas correlaciones también han demostrado Biológicas certificado. Si el análisis o la purificación resultan
ser aplicables a la tinción vital mediante sondas fluorescentes; necesarios, existe una extensa literatura, a la que se puede
para resúmenes de los cuales verHorobin (2001, 2010b). acceder para colorantes individuales a través de las
monografías de la décima edición deTinciones biológicas de
Conn's (Horobin y Kiernan 2002), o más generalmente a
Efectos de las impurezas del tinte sobre la tinción. través de un artículo de revisión anterior del presente autor (
Horobin 1969).
Casi todos los tintes utilizados como tintes son impuros, lo
que ha provocado muchas investigaciones experimentales y
editoriales polémicas. Pero, ¿qué se entiende por tinte Nomenclatura de tinte
"impuro"?
Un lote de tinte se considera impuro si no contiene el Los nombres de los tintes individuales y los términos utilizados
compuesto mencionado en la etiqueta o si contiene cantidades para describir las propiedades de los tintes a veces son
sustanciales de otras sustancias coloreadas además del tinte inconsistentes y a menudo confusos. Como los colorantes son
mencionado. Alternativamente, un lote impuro puede contener moléculas complejas, casi todos tienen nombres triviales que no
muy poco colorante, siendo la mayor parte del contenido sal describen explícitamente sus estructuras. La mayoría de los
inorgánica. Los tintes que son puros cuando se compran pueden tintes biológicos se fabricaron por primera vez como tintes
descomponerse en el almacenamiento, o después de textiles, cuando cada fabricante le dio al tinte su propio nombre
convertirse en una solución de tinción, o incluso durante la comercial. Por lo tanto, un biólogo puede decir 'Use azul Congo',
tinción en sí. Las impurezas influyen en la tinción de dos formas. a lo que sus colegas responden 'Pero no tenemos ninguno de
Primero, pueden alterar la intensidad de la tinción. ese'. Y, sin embargo, lo han hecho, pero en sus estantes está
Normalmente, las manchas se reducen, pero muy etiquetado como azul tripán. Peor aún es el exceso de sufijos. A
ocasionalmente las impurezas dan como resultado un color más veces, estos son simplemente florituras de la pluma de un
intenso. En segundo lugar, las impurezas pueden cambiar los redactor, por lo que las pironinas G e Y son sinónimos. A veces,
patrones de tinción, la naturaleza y los mecanismos de tales los sufijos indican el contenido de colorante, y un producto
efectos dependiendo del tipo de impureza, el procedimiento de estándar puede etiquetarse como 'A 100', mientras que un
tinción particular y el sustrato del tejido. grado que contiene un contenido más alto de colorante se
Lamentablemente, no existe una forma sencilla de identificar y, denomina 'A 150' o simplemente 'A extra'. A veces, sin embargo,
por tanto, evitar estos productos impuros. Un consejo práctico los sufijos indican sustancia química sustancial
Cuadro 9.2 Algunos términos descriptivos utilizados para clasificar los colorantes utilizados como tintes biológicos
Categorías de términos Ejemplos de términos (y de tintes)
Describiendo los orígenes de un tinte Natural (hematoxilina y carmín), sintético o anilina (casi
cualquier otro)
Describir las propiedades fisicoquímicas de un tinte. Fluorescente (naranja de acridina), leuco (azul de metileno
leuco), metacromático (azul de toluidina), neutro
(azureosinato)
Dar algún tipo de descripción de la estructura Azo (naranja G), complejo metálico (complejos de
del tinte. aluminio o hierro de hemateína), xanteno (pironina Y)
Describir el uso del tinte en la tinción biológica. Grasa (aceite rojo O), sonda fluorescente (YOYO-1), mucina
(azul alcián)
Describir el uso del tinte en el teñido de textiles. Ácido (eosina), básico (safranina), directo (rojo Congo)
Describiendo el supuesto modo de acción del Mordiente (alumbre de cromo galocianina), reactivo (naranja
tinte. mercurio)
diferencias: por ejemplo, las rodaminas B y 6G, respectivamente, complejo de metal, aunque no es un tinte mordiente, de cobre
describen tintes zwiteriónicos y catiónicos. con ftalocianina, sustituido por grupos de tioguanidinio, y se
Para reducir la confusión, los usuarios de tintes industriales utiliza habitualmente como mancha de mucina.
establecieron el Indice de color (Sociedad de Tintoreros y
Coloristas 1999). Los tintes reciben números de código únicos: el
Indice de color, o CI, números y códigos. Por lo tanto, las eosinas Evitación de problemas y resolución de problemas
G, WG e Y se identifican como un solo colorante, CI 45380, Acid
Red 87, mientras que la eosina B es un colorante químicamente Evitar problemas y reconocer y corregir errores son
diferente, CI 45400, Acid Red 91. preocupaciones perennes del laboratorio. Las estrategias
Los tintes sintetizados para la tinción biológica se denominan típicas se describen a continuación, y se ha reunido
igualmente idiosincráticamente. Un ejemplo tradicional es el información detallada para varias docenas de tinciones
aldehído fucsina de Gomori y uno reciente YOYO-1. Dado que de histopatología de rutina y especiales en forma de
estos productos no son de importancia industrial, la mayoría no monografía (Horobin y Bancroft 1998).
tieneIndice de color entrada. En tales casos, el desconcertado
debe leer detenidamenteTinciones biológicas de Conn's (ver
Estrategias para evitar problemas: minimizar
Lillie 1977 y Horobin y Kiernan 2002 para la novena y décima
la necesidad de solucionar problemas
ediciones, respectivamente).
Varios términos utilizados para clasificar los colorantes se dan
Problemas relacionados con los procedimientos de tinción
en Cuadro 9.2, y los comentarios sobre puntos a veces confusos
en la literatura histoquímica siguen aquí.Ácido y básico los • Los tintes utilizados deben ser compatibles con el medio
colorantes no son ácidos y bases, sino sales, cuyas especies de fijación y de inclusión. Ejemplo de caso: las secciones
coloreadas son aniónicas y catiónicas, respectivamente. Neutral de resina miscibles en agua no permiten la tinción
los tintes no son no iónicos, sino sales en las que tanto el anión selectiva de fibras elásticas con aldehído fucsina.
como el catión son tintes. Manchas vitales, utilizados para teñir
células vivas, hoy en día a menudo se llaman Floridasondas • Utilice un protocolo de tinción de rutina,
fluorescentes o biosensores. Finalmente, tenga en cuenta que preferiblemente estandarizado. Propina: consulte la
todos los tintes pueden tener descriptores múltiples. Así, el azul lista de dichos protocolos al final de Horobin y
alcián 8G es unbásico sintético tinte, estructuralmente un Bancroft (1998).
Evitación de problemas y resolución de problemas 169
• Utilice controles para detectar problemas de forma proactiva, • Y siempre hay otro ¡problemas! Ejemplos de casos: pérdida de
no solo para investigar errores de forma retrospectiva. secciones de los portaobjetos en el método de plata con
Propina: conserve muestras de lotes efectivos de tinte para hexamina de Grocott para hongos, debido al
usar cuando sospeche que la pureza del tinte es inadecuada. sobrecalentamiento; y depósitos negros en portaobjetos y
secciones en el procedimiento de Von Kossa, debido a material
• Considere si tiene las habilidades y los conocimientos de vidrio contaminado.
necesarios o, en caso contrario, ¿hay un mentor disponible? Una vez que se ha detectado un error y se ha
Propina: muchas manchas de plata son complicadas; esperar identificado una causa plausible, se puede buscar
problemas con su uso. una solución. A veces esto es sencillo. Quizás las
situaciones más complicadas surgen al teñir
Problemas relacionados con los reactivos de tinción
muestras preparadas en otro laboratorio.
Nuevamente, enHorobin y Bancroft (1998).
• Obtenga tintes y reactivos confiables. Propina:
usarComisión de Manchas Biológicas tintes
certificados, ya que son en promedio menos
impuros y no más caros.
• Asegúrese de que las manchas sigan siendo confiables. Consejos: almacene
Referencias
el reactivo de Schiff en un recipiente hermético; almacene las soluciones de
tinte en recipientes a prueba de luz.

Baker, JR, 1958. Principios de biología
microtecnia. Methuen, Londres.
Bennion, PJ, Horobin, RW, 1974. Algunos efectos de
Señales para reconocer errores: antes de
sales de tinción: el uso del equilibrio de Donnan para
que los errores puedan rectificarse, deben
describir la tinción de secciones de tejido con tintes
notarse ácidos y básicos. Histoquímica 39, 71–82.
• El tinte o la solución de tinte no son los esperados en

Bettinger, CH, Zimmermann, HW, 1991. Nuevo
términos de color, solubilidad o estabilidad. Ejemplo de
investigaciones sobre complejos de hematoxilina,
caso: algunas muestras de azul alcián se disuelven, pero
hemateína y hemateína-aluminio. 2. Complejos de
luego precipitan de la solución en una hora o menos.
hemateinaluminio y tinción de hemalum.
Histochemistry 96, 215-228.
• Las estructuras esperadas se tiñen, pero solo débilmente.
Boon, ME, Drijver, JA, 1986. Citológico de rutina
Ejemplo de caso: la tinción inesperadamente débil de calcio
Técnicas de tinción: antecedentes teóricos y
por rojo de alizarina S resulta de la extracción de iones de
prácticos. Macmillan, Londres.
calcio tisular en fijadores acuosos.
Celis, JF (Ed.), 2006. Biología celular: un laboratorio
• El color de la tinción es inesperado. Ejemplo de caso: la
manual, vol 1, tercera ed. Elsevier, Amsterdam.
tinción excesivamente roja observada con el tricrómico
de Gomori puede deberse a soluciones de tinción Chayen, J., Bitensky, L., 1991. Práctica
insuficientemente ácidas. histoquímica, segunda ed. Wiley, Chichester.
• Manchas de estructuras inesperadas. Ejemplo de caso: el Goldstein, DJ, 1962. Correlación del tamaño del tinte
material granular teñido por el procedimiento nucleal de partícula y densidad del sustrato, con especial
Feulgen puede ser depósitos de carbonato. referencia a la tinción de mucina. Stain Technology 37,
• La naturaleza de la tinción es inusual. Ejemplo de caso: si la 79–93.
tinción diferencial de organismos Gram positivos y Goldstein, DJ, Horobin, RW, 1974a. Factores de tasa en
negativos es pobre, la preparación puede ser demasiado tinción con azul alcián. Histochemical Journal 6,
espesa. 157-174.
Goldstein, DJ, Horobin, RW, 1974b. Superficie Horobin, RW, 2011. Cómo se tiñe Romanowsky
tinción del cartílago con azul alcián, con referencia al trabajo y por qué siguen siendo valiosos, incluido un
papel de los agregados microscópicos en mecanismo de tinción universal propuesto por
tinción histológica. Histochemical Journal 6, Romanowsky y un esquema racional de resolución de
175-184. problemas. Biotech Histochem 86, 36–51.
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Edimburgo.
Pocos relatos de tinción histológica consideran la unidad
Peters, A., 1955a. Experimentos sobre el mecanismo de
fisicoquímica subyacente a la diversidad técnica de las
tinción de plata. 1. Impregnación. Revista trimestral de
diversas tecnologías de tinción. Hay muchos protocolos
ciencia microscópica 96, 84-102.
publicados pero escasez de reseñas y resúmenes críticos.
Peters, A., 1955b. Experimentos sobre el mecanismo de
Así, textos enciclopédicos como el presente y ejemplos
tinción de plata. 2. Desarrollo. Revista trimestral de anteriores como los deLillie (1965), Pearse (1968), y
ciencia microscópica 96, 103-115. Sheehan y Hrapchak (1987) resumir una cantidad notable
Prentø, P., 2007. El papel estructural de la glicina y de información y proporcionar bibliografías extensas.
prolina en la tinción de la fibra del tejido conectivo Algunos manuales de tinción también se propusieron
con tintes de enlace de hidrógeno. Biotecnología e integrar los antecedentes teóricos con la información del
histoquímica 82, 170-173. procedimiento, p. Ej.Chayen y Bitensky (1991) y Kiernan
Prentø, P., 2009. Tinción de macromoléculas. (2007). Algunos autores han intentado proporcionar
Biotecnología e histoquímica 84, descripciones fisicoquímicas modernas de los métodos
139-158. de tinción en su conjunto; por ejemploHorobin (1982,
1988), Horobin y Bancroft (1998),Lyon (1991), y Prentø
Scott, JE, 1973. Afinidad, competencia y especificidad
(2009). También se pueden recomendar algunas obras
interacciones en la bioquímica e histoquímica de
clásicas: leerBaker (1958) por su temprano relato
polielectrolitos. Transacciones de la sociedad
integrador y su elegante inglés; leerLillie (1965) por su
bioquímica 1, 787–806.
experiencia personal ganada con esfuerzo y su visión
Scott, JE, Harbinson, J., 1968. Oxidación periódica de histórica; y luego leerMann (1902) asombrarnos de por
polisacáridos ácidos. Inhibición por el campo qué tardamos tanto en seguir sus investigaciones
electrostático del sustrato. Histochemie 14, 215-220. experimentales. Finalmente, aquellos que deseen
aprender más sobre colorantes tienen disponibles varios
Sheehan, DC, Hrapchak, BB, 1987. Teoría y textos modernos. El libro escrito por Zollinger (2003),
práctica de la histotecnología, segunda ed. Battelle inusualmente, incluye una sección que considera
Press, Columbus, OH. explícitamente las manchas biológicas y las tinciones.
Las hematoxilinas y eosina 10
John D. Bancroft • Christopher Layton
Las eosinas son colorantes de xanteno y los siguientes

Introducción
tipos se pueden obtener fácilmente comercialmente: eosina
Y (eosina amarillenta, eosina soluble en agua) CI No. 45380
La tinción con hematoxilina y eosina (H&E) es la tinción
(CI Acid Red 87); etil eosina (eosina S, eosina soluble en
histológica más utilizada. Su popularidad se basa en su
alcoholes) CI No. 45386 (CI Solvent Red 45); eosina B (eosina
simplicidad comparativa y su capacidad para demostrar
azulada, eritrosina B) CI No. 45400 (CI Acid Red 91).
claramente una enorme cantidad de estructuras de tejidos
diferentes. La hematoxilina se puede preparar de
De estos, la eosina Y es el más utilizado y, a pesar de su sinónimo, también
numerosas formas y tiene una amplia aplicabilidad a tejidos
es satisfactoriamente soluble en alcohol; a veces se vende como "soluble en
de diferentes sitios. Esencialmente, el componente
agua y alcohol". Como colorante citoplásmico, generalmente se usa como una
hematoxilina tiñe los núcleos celulares de azul-negro,
solución al 0.5 o 1.0% en agua destilada, con un cristal de timol agregado para
mostrando buenos detalles intranucleares, mientras que la
inhibir el crecimiento de hongos. Se dice que la adición de un poco de ácido
eosina tiñe el citoplasma celular y la mayoría de las fibras del
acético (0,5 ml a 1000 ml de tinción) agudiza la tinción. La diferenciación de la
tejido conectivo en diferentes tonos e intensidades de rosa,
tinción con eosina se produce en el subsiguiente lavado con agua del grifo, y se
naranja y rojo. Si bien los instrumentos de tinción
produce una pequeña diferenciación adicional durante la deshidratación a
automatizados y las soluciones de hematoxilina y eosina
través de los alcoholes. La intensidad de la tinción con eosina y el grado de
preparadas comercialmente se utilizan con mayor frecuencia
diferenciación requerido depende en gran medida del gusto individual.
en los laboratorios de hoy para la tinción de rutina, Los
Microfotografías adecuadas de H & Los tejidos teñidos con E son más fáciles de
estudiantes de técnicas histológicas deben tener un
obtener cuando la tinción con eosina es intensa y la diferenciación leve (se
conocimiento básico de los tintes y las técnicas de
recomienda al menos el doble del tiempo de tinción habitual). En la actualidad,
preparación con el fin de solucionar problemas y / o
la eosina y la eosina B rara vez se utilizan, aunque algunos métodos antiguos
modificar procedimientos para uso especializado. Cabe
especifican su uso: por ejemplo, la tinción de Harris para los cuerpos de Negri.
señalar que la hematoxilina tiene usos adicionales más allá
Se han sugerido tintes rojos alternativos como sustitutos de la eosina, como
de la combinación de hematoxilina y eosina.
floxina, escarlata de Biebrich, etc .; sin embargo, aunque estos sustitutos a
menudo dan un color rojo más intenso a los tejidos, rara vez son tan
susceptibles de diferenciación sutil como la eosina y generalmente son menos
Eosina valiosos. tales como floxina, escarlata de Biebrich, etc .; sin embargo, aunque
estos sustitutos a menudo dan un color rojo más intenso a los tejidos, rara vez
La eosina es el colorante más adecuado para combinar son tan susceptibles de diferenciación sutil como la eosina y generalmente son
con una hematoxilina de alumbre para demostrar la menos valiosos. tales como floxina, escarlata de Biebrich, etc .; sin embargo,
arquitectura histológica general de un tejido. Su valor aunque estos sustitutos a menudo dan un color rojo más intenso a los tejidos,
particular es su capacidad, con una diferenciación rara vez son tan susceptibles de diferenciación sutil como la eosina y
adecuada, para distinguir entre el citoplasma de generalmente son menos valiosos.
diferentes tipos de células y entre los diferentes tipos de En determinadas circunstancias, la tinción con eosina es
fibras y matrices de tejido conjuntivo, tiñéndolos en intensa y se pueden experimentar dificultades para obtener
diferentes tonos de rojo y rosa. una diferenciación adecuada; esto puede ocurrir después

174 10 Las hematoxilinas y eosina
fijación mercúrica. La sobrediferenciación de la eosina puede la hematoxilina a hemateína casi instantáneamente, por lo
continuar hasta que solo los glóbulos rojos y los gránulos del que estas soluciones de hematoxilina están listas para su
polimorfo de eosinófilos se tiñen de rojo. En ocasiones, se uso inmediatamente después de la preparación. En general,
utiliza para facilitar la localización e identificación de tienen una vida útil más corta que las hematoxilinas
eosinófilos. La combinación de eosina Y y floxina B (10 ml de oxidadas naturalmente, probablemente porque el proceso
floxina B al 1%, 100 ml de eosina Y al 1%, 780 ml de alcohol de oxidación continuo en el aire y la luz eventualmente
al 95%, 4 ml de ácido acético glacial) produce una tinción destruye gran parte de la hemateína, convirtiéndola en un
citoplasmática, que demuestra de manera más dramática compuesto incoloro. La hemateína es aniónica, tiene poca
varios componentes tisulares. El músculo se diferencia afinidad por el tejido y es inadecuada como tinción nuclear
claramente del colágeno y los glóbulos rojos se tiñen de rojo sin la presencia de un mordiente. El catión mordiente / metal
brillante. De acuerdo aLuna (1992), el contenido de tinte de confiere una carga neta positiva al complejo colorante-
eosina debe ser del 88% y no contener sulfato de sodio (a mordiente y le permite unirse a sitios de tejido aniónico,
veces se usa como relleno). Cuando se usa este tinte en como la cromatina nuclear. El tipo de mordiente utilizado
solución, se forma un precipitado granular fino y la tinción influye fuertemente en el tipo de componentes tisulares
del citoplasma será pobre. teñidos y en su color final. Los mordientes más útiles para la
hematoxilina son las sales de aluminio, hierro y tungsteno,
aunque ocasionalmente se utilizan soluciones de
Hematoxilina hematoxilina que utilizan plomo como mordiente (por
ejemplo, en la demostración de células argirófilas). La
La hematoxilina se extrae del duramen ('logwood') del mayoría de los mordientes se incorporan a las soluciones de
árbol Hematoxylon campechianumque se originó en el tinción con hematoxilina, aunque ciertas tinciones con
estado mexicano de Campeche, pero que ahora se cultiva hematoxilina requieren que la sección de tejido se trate
principalmente en las Indias Occidentales. La previamente con el mordiente antes de la tinción; como la
hematoxilina se extrae del palo de palo con agua caliente hematoxilina férrica de Heidenhain. Las soluciones de
y luego se precipita de la solución acuosa con urea hematoxilina se pueden clasificar arbitrariamente según el
(véanse las ediciones anteriores). La hematoxilina en sí mordiente que se utilice:
no es una mancha. El principal producto de oxidación es • hematoxilinas de alumbre
la hemateína, un tinte natural responsable de las • hematoxilinas de hierro
propiedades del color. La hemateína se puede producir a
• hematoxilinas de tungsteno
partir de hematoxilina de dos formas.
• hematoxilinas de molibdeno
• hematoxilinas de plomo
Oxidación natural ('maduración') por exposición a la • hematoxilina sin mordiente.
luz y al aire.
Este es un proceso lento, que a veces tarda de 3 a 4 meses,

Hematoxilinas de alumbre
pero la solución resultante parece conservar su capacidad
de tinción durante mucho tiempo. Las soluciones de
Este grupo comprende la mayoría de los que se utilizan
hematoxilina de Ehrlich y Delafield son ejemplos de
habitualmente en la tinción con hematoxilina y eosina y
hematoxilinas maduradas naturalmente.
producen una buena tinción nuclear. El mordiente es aluminio,
generalmente en forma de 'alumbre de potasio' (sulfato de
Oxidación química aluminio y potasio) o 'alumbre de amonio' (sulfato de aluminio
y amonio). Todos tiñen los núcleos de un color rojo, que se
Los ejemplos son yodato de sodio (por ejemplo, hematoxilina de convierte en el conocido azul negro cuando la sección se lava en
Mayer) u óxido de mercurio (por ejemplo, hematoxilina de una solución alcalina débil. El agua del grifo suele ser lo
Harris). El uso de agentes oxidantes químicos convierte suficientemente alcalina para
Hematoxilinas de alumbre 175
producen este cambio de color, pero ocasionalmente son

usando 50 mg por cada gramo de hematoxilina; esto
necesarias soluciones alcalinas como carbonato de litio inevitablemente acortará la vida útil de la mancha en el banco. Por
saturado, amoniaco al 0,05% en agua destilada o un definición, esta variante oxidada químicamente no es una
sustituto de agua del grifo de Scott (véase el Apéndice III). verdadera hematoxilina de Ehrlich y no tendrá la misma
Este procedimiento se conoce como "azul". longevidad que la hematoxilina de Ehrlich oxidada naturalmente.
Las hematoxilinas de alumbre se pueden utilizar Siempre se debe filtrar antes de usar.
regresivamente, lo que significa que la sección se tiñe en

exceso y luego se diferencia en alcohol ácido, seguido de La hematoxilina de Ehrlich, al ser una solución de
'azul', o progresivamente, es decir, teñido durante un tiempo hematoxilina fuerte, tiñe los núcleos de manera intensa y nítida,
predeterminado para teñir los núcleos adecuadamente pero y las secciones teñidas se desvanecen mucho más lentamente
dejar el tejido de fondo relativamente sin teñir. Los tiempos que las teñidas con otras hematoxilinas de alumbre. Es
para la tinción con hematoxilina y para una diferenciación particularmente útil para teñir secciones de tejidos que han
satisfactoria variarán según el tipo y la edad de la estado expuestos al ácido. Es adecuado para tejidos que han
hematoxilina de alumbre utilizada, el tipo de tejido y la sido sometidos a descalcificación ácida o, lo que es más valioso,
preferencia personal del patólogo. Para la tinción rutinaria tejidos que han estado almacenados durante un largo período
de tejidos con hematoxilina y eosina, las hematoxilinas más en fijadores de formalina que se han ido acidificando
utilizadas son las de Ehrlich, Mayer, Harris, Gill, Cole y gradualmente durante el período de almacenamiento, o en
Delafield. Ocasionalmente se usa hematoxilina de Carazzi, fijadores ácidos como el fijador de Bouin. La hematoxilina de
particularmente para cortes congelados urgentes. Ehrlich no es ideal para cortes congelados.
Hematoxilina de Delafield (Delafield 1885)
Hematoxilina de Ehrlich (Ehrlich 1886) Delafield, una hematoxilina de alumbre madurada naturalmente, tiene
una longevidad similar a la hematoxilina de Ehrlich.
Ésta es una hematoxilina de alumbre de maduración natural que
tarda unos 2 meses en madurar; el tiempo de maduración se Preparación de la solución
puede acortar un poco colocando la botella destapada en un
Hematoxilina 4g
lugar cálido y soleado, como una ventana, y es más corto en
95% de alcohol 125 ml
verano que en invierno. Una vez madurada satisfactoriamente,
Alumbre de amonio acuoso saturado 400 ml
esta solución de hematoxilina durará a granel durante años y
(15 g / 100 ml)
conserva su capacidad de tinción en un frasco de Coplin durante
Glicerina 100 ml
algunos meses. De Ehrlich La hematoxilina se disuelve en 25 ml de alcohol,
La hematoxilina, además de ser una excelente tinción y luego se agrega a la solución de alumbre. Esta mezcla se deja
nuclear, también tiñe las mucinas, incluida la reposar a la luz y al aire durante 5 días, luego se filtra y se le
mucopolisacáridos de cartílago; se recomienda para añade la glicerina y otros 100 ml de alcohol al 95%. La mancha
la tinción de huesos y cartílagos (Capítulo 16). se deja reposar expuesta a la luz y al aire durante
Preparación de la solución aproximadamente 3 a 4 meses o hasta que tenga un color

suficientemente oscuro, luego se filtra y se almacena. Filtrar
Hematoxilina 2g
antes de usar.
Alcohol absoluto 100 ml
Glicerina 100 ml
Agua destilada 100 ml Hematoxilina de Mayer (Mayer 1903)
Ácido acético glacial 10 ml
Esta hematoxilina de alumbre se madura químicamente con yodato
Alumbre de potasio 15 g aprox.
de sodio. Puede usarse como colorante regresivo como cualquier
La hematoxilina se disuelve en el alcohol y se agregan los otros hematoxilina de alumbre. Sin embargo, también es útil como tinción
productos químicos. Se agrega glicerina para ralentizar el proceso progresiva, particularmente en situaciones donde se necesita una
de oxidación y prolongar la vida útil de la hematoxilina. La contratinción nuclear para enfatizar un componente citoplasmático
maduración natural a la luz del sol tarda aproximadamente 2 que ha sido
meses, pero en una emergencia la mancha se puede madurar demostrado, por una mancha especial, y donde la
químicamente mediante la adición de yodato de sodio. diferenciación ácido-alcohol podría destruir o decolorar
el componente citoplasmático teñido. Se utiliza como Preparación de la solución

contratinción nuclear en la demostración de glucógeno, en Hematoxilina 2,5 g
varias técnicas de histoquímica enzimática y en muchas Alcohol absoluto 25 ml
otras. El tinte se aplica durante un tiempo breve Alumbre de potasio 50 gramos
(generalmente de 5 a 10 minutos), hasta que los núcleos se Agua destilada 500 ml

tiñen y luego se 'azula' sin ninguna Óxido de mercurio 1,25 g o
diferenciación. Yodato de sodio 0,5 g
Preparación de la solución
La hematoxilina se disuelve en el alcohol absoluto y luego
Hematoxilina 1g
Agua destilada 1000 ml se agrega al alumbre, previamente disuelto en el agua
Alumbre de potasio o amonio 50 gramos

destilada tibia en un matraz de 2 litros. La mezcla se lleva
Yodato de sodio 0,2 g rápidamente a ebullición y luego se añade lenta y
Ácido cítrico 1g cuidadosamente el óxido de mercurio o el yodato de sodio.

Hidrato de cloral SLR 50 gramos o
Sumergir el matraz en agua fría o en un fregadero que
Hidrato de cloral AR 30 g contenga hielo picado enfría rápidamente la mancha.
Cuando la solución está fría, se agrega el ácido acético y el
La hematoxilina, el alumbre de potasio y el yodato de sodio
tinte está listo para su uso inmediato. El ácido acético glacial
se disuelven en el agua destilada calentando y agitando, o
es opcional, pero su inclusión proporciona una tinción más
dejando reposar a temperatura ambiente durante la noche. Se
precisa y selectiva de los núcleos.
añaden el hidrato de cloral y el ácido cítrico y la mezcla se hierve
durante 5 minutos, luego se enfría y se filtra. Si se usa un grado
AR de hidrato de cloral de mayor pureza, la cantidad puede
reducirse, como se muestra arriba. La mancha está lista para Como ocurre con la mayoría de las hematoxilinas de alumbre
usarse inmediatamente. Filtrar antes de usar.
maduradas químicamente, la calidad de la tinción nuclear
comienza a deteriorarse después de unos meses. Este deterioro
está marcado por la formación de un precipitado en la mancha
Hematoxilina de Harris (Harris 1900) almacenada. En esta etapa, la mancha debe filtrarse antes de su
Esta hematoxilina de alumbre se maduraba químicamente uso y es posible que sea necesario aumentar el tiempo de
tradicionalmente con óxido de mercurio. Como el óxido de mercurio tinción. Para obtener los mejores resultados, es aconsejable
es altamente tóxico, no respeta el medio ambiente y tiene efectos preparar un nuevo lote de tinte cada mes, aunque esto puede
perjudiciales y corrosivos a largo plazo en algunas máquinas de no ser económico a menos que solo se preparen pequeñas
tinción automatizadas, el yodato de sodio o potasio se utiliza con
cantidades cada vez.
frecuencia como sustituto de la oxidación. Harris es una
hematoxilina de uso general útil y proporciona una tinción nuclear
particularmente clara, por lo que se ha utilizado, como tinción Hematoxilina de Cole (Cole 1943)
progresiva, en la citología exfoliativa diagnóstica. En la práctica Se trata de una hematoxilina de alumbre madurada artificialmente con
histológica de rutina, generalmente se usa de manera regresiva, una solución alcohólica de yodo.
pero puede ser útil cuando se usa de manera progresiva. Cuando se
usa hematoxilina de Harris como colorante progresivo, un enjuague
con ácido acético y alcohol proporciona un método más controlable Hematoxilina 1,5 g
para eliminar el exceso de colorante de los componentes del tejido y Alumbre de potasio acuosa saturada de 700 ml
del portaobjetos de vidrio. El tradicional ácido clorhídrico-alcohol yodo al 1% en alcohol al 95% 50 ml
actúa de forma rápida y Agua destilada 250 ml
La hematoxilina se disuelve en agua destilada tibia y se mezcla
indiscriminadamente, es más difícil de controlar y puede resultar con la solución de yodo. Se agrega la solución de alumbre y la mezcla
en una mancha nuclear leve. Una solución de ácido acético al se lleva a ebullición, luego se enfría rápidamente y se filtra. La
5-10%, en alcohol al 70-95%, separa las moléculas de colorante solución está lista para su uso inmediato, pero es posible que deba
del citoplasma / nucleoplasma mientras mantiene intactos los filtrarse después del almacenamiento, por la misma razón que se
complejos de ácidos nucleicos (Feldman y Dapson 1985). describió anteriormente para la hematoxilina de Harris. Filtrar antes
de usar.
Hematoxilinas de alumbre 177
Hematoxilina de Carazzi (Carazzi 1911) El tinte se puede usar inmediatamente, proporciona una
Carazzi es una hematoxilina de alumbre que se madura mejor intensidad si se deja madurar durante 1 semana en
químicamente con yodato de potasio. una incubadora a 37 ° C. Cabe señalar que la popularidad de
la solución de Gill la ha convertido en una de las fórmulas de
mayor éxito comercial.
Hematoxilina 5g
Glicerol 100 ml
Alumbre de potasio 25 g Se pueden usar concentraciones de hematoxilina dobles o
Agua destilada 400 ml
triples, según se prefiera. Estos generalmente se conocen
Yodato de potasio 0,1 g
como I de Gill (normal), II de Gill (doble) y III de Gill (triple),
La hematoxilina se disuelve en el glicerol y el alumbre se
siendo el Gill III el más concentrado. La hematoxilina de Gill
disuelve en la mayor parte del agua durante la noche. La
se usa con más frecuencia para la tinción H&E de rutina que
solución de alumbre se agrega lentamente a la solución de
hematoxilina, mezclando bien después de cada adición. El la hematoxilina de Mayer y es más estable que la
yodato de potasio se disuelve en el resto del agua con un hematoxilina de Harris, ya que la autooxidación se inhibe en
calentamiento suave y luego se agrega a la mezcla de la medida en que no ocurren cambios mensurables durante
hematoxilina-alumbre-glicerol. La solución de tinción final se muchos meses. Las desventajas asociadas con la
mezcla bien y luego está lista para su uso inmediato; permanece hematoxilina de Gill incluyen la tinción del adhesivo de
utilizable durante unos 6 meses. Se debe tener cuidado al
gelatina e incluso el vidrio mismo. Parte del moco también
preparar la hematoxilina para evitar la sobreoxidación; es más
puede teñirse de forma oscura, en comparación con el de
seguro si no se usa calor para disolver los reactivos. Filtrar antes
de usar. Harris, donde el moco generalmente permanece sin teñir y
el vidrio generalmente no atrae la mancha.Feldman y
Dapson (1987) teorizó que el mordiente de sulfato de
aluminio es el responsable. Ciertos sitios cargados en el
Al igual que la hematoxilina de Mayer, la hematoxilina de Carazzi
tejido, en el adhesivo y en el vidrio quedan enmascarados
se puede utilizar como contratinción nuclear progresiva con un
por el mordiente de Harris, dejándolos no disponibles para
tiempo de tinción corto, seguido de una coloración azulada en
la tinción. El sistema mordiente de Gill no logra hacer eso, y
agua del grifo. Es particularmente adecuado, ya que es una
los sitios atraen el complejo tinte-mordiente.
tinción nuclear pálida y precisa y no tiñe ninguno de los
componentes citoplasmáticos.
Hematoxilina de Gill (Gill y col. 1974modificado) Tiempos de tinción con hematoxilinas de alumbre
No es posible dar más que una guía aproximada de los
Hematoxilina 2g
Yodato de sodio 0,2 g tiempos de tinción adecuados con hematoxilinas de alumbre
Sulfato de aluminio 17,6 g porque el tiempo variará de acuerdo con los siguientes
Agua destilada 750 ml factores:
Etilenglicol (etanodiol) 250 ml
1. Tipo de hematoxilina utilizada, por ejemplo, 20 a 45
minutos de Ehrlich, 10 a 20 minutos de Mayer.
El agua destilada y el etilenglicol se mezclan y luego se
2. Edad de la mancha. A medida que la mancha envejece, será
agrega y se disuelve la hematoxilina. El etilenglicol es un
excelente solvente para la hematoxilina y previene la necesario aumentar el tiempo de tinción.
formación de precipitados superficiales (Carson 1997). Se 3. Intensidad de uso del tinte. Una hematoxilina muy usada
agrega yodato de sodio para la oxidación, y luego se agrega perderá su poder de tinción más rápidamente y serán
y se disuelve el mordiente de sulfato de aluminio. necesarios tiempos de tinción más prolongados.
Finalmente, se agrega el ácido acético glacial y se agita
durante 1 hora. La solución se filtra antes de su uso. Carson
informó que, aunque el 4. Si la tinción se usa de manera progresiva o regresiva,
por ejemplo, se usa hematoxilina de Mayer
hematoxilina como la hematoxilina de Weigert (ver más

Cuadro 10.1 Tiempos de tinción con hematoxilinas de alumbre
abajo), que es resistente al efecto del ácido pícrico. Una
Cole 20–45 min alternativa adecuada, y ahora más popular, es la
Delafield 15-20 min combinación de una solución de tinción de azul celestina
Ehrlich (progresivo) 20–45 min con una hematoxilina de alumbre. El azul de celestina es
Mayer (progresivo) 10-20 min resistente a los efectos del ácido, y la sal férrica en la
solución de azul de celestina preparada refuerza el
Mayer's (regresivo) 5 a 10 min
enlace entre el núcleo y la hematoxilina de alumbre para
Harris (progresivo en citología) 4-30 s
proporcionar una fuerte tinción nuclear que es
Harris (regresivo) 5 a 15 min razonablemente resistente al ácido.
Carazzi (progresivo) 1-2 min
Carazzi (regresivo) 45 s Procedimiento de hematoxilina con azul de celestina y alumbre
Carazzi (secciones congeladas, ver texto) 1 minuto

Solución de azul de celestina
Celestina azul B 2,5 g

Gill's I (regresivo) 5 a 15 min
Sulfato de amonio férrico 25 g
Glicerina 70 ml
progresivamente de 5 a 10 minutos, usado regresivamente de 10 Agua destilada 500 ml
a 20 minutos. El sulfato de amonio férrico se disuelve en el agua
destilada fría con agitación, se agrega el azul de celestina a
5. Pretratamiento de tejidos o cortes, por ejemplo, tiempo
esta solución y la mezcla se hierve durante unos minutos.
en solución fijadora o descalcificadora ácida, o si se
Después de enfriar, la mancha se filtra y se agrega glicerina.
trata de cortes en parafina o congelados.
La tinción final debe poder utilizarse durante más de 5
6. Post-tratamiento de las secciones, por ejemplo, subsiguientes meses. Filtrar antes de usar.
tinciones ácidas como van Gieson.
Método
7. Preferencia personal. 1. Desparafinar las secciones, rehidratar a través de grados
Los tiempos dados en Cuadro 10.1 son solo una indicación general descendentes de alcohol y llevar al agua.
de un rango adecuado para cada tipo de mancha; el momento 2. Teñir en solución de azul celestina durante 5 minutos.
óptimo debe determinarse mediante ensayo y error. Salvo que se 3. Enjuague con agua destilada.
indique lo contrario, estas cifras se refieren a secciones de parafina 4. Teñir en una hematoxilina de alumbre (por ejemplo, Mayer's o
normalmente fijadas. Como regla general, los tiempos deben Cole's) durante 5 minutos.
acortarse considerablemente para las secciones congeladas y 5. Lavar con agua hasta que esté azul.
aumentarse para los tejidos descalcificados y los que han estado 6. Continúe con la técnica de tinción requerida.
almacenados durante mucho tiempo en formalina no tamponada.
Procedimientos de tinción de rutina usando

hematoxilinas de alumbre
Desventajas de las hematoxilinas de alumbre
La principal desventaja de las tinciones nucleares de Tinción con hematoxilina y eosina para cortes en parafina
hematoxilina de alumbre es su sensibilidad a cualquier Método

solución de tinción ácida aplicada posteriormente. Los 1. Desparafinar las secciones, rehidratar mediante grados
ejemplos más comunes están en Van Gieson y otras descendentes de alcohol al agua.
tinciones tricrómicas. La aplicación de la mezcla de fucsina 2. Elimine los pigmentos de fijación si es necesario.
3. Teñir con una hematoxilina de alumbre de su elección durante un

de ácido pícrico en la tinción de van Gieson elimina la mayor
tiempo adecuado.
parte de la hematoxilina de modo que los núcleos son
4. Lávese bien con agua corriente del grifo hasta que las secciones
apenas perceptibles. En este caso, se puede lograr una
estén "azules" durante 5 minutos o menos.
tinción nuclear satisfactoria utilizando un
Procedimientos de tinción de rutina con hematoxilinas de alumbre 179
La mayoría de los laboratorios utilizan tintes

5. Diferenciar en alcohol ácido al 1% (HCl al 1% en alcohol al
70%) durante 5 a 10 segundos
comerciales y cada uno considerará que su
6. Lávese bien con agua del grifo hasta que las secciones vuelvan a
modificación de la técnica original es la óptima. Sin
estar 'azules' (10 a 15 minutos), o embargo, el resultado debe conservar la calidad
7. Azul sumergiéndolo en una solución alcalina (por ejemplo, agua con transparente de la tinción citoplasmática y la
amoníaco), seguido de un lavado con agua del grifo de 5 minutos. cromatina nuclear debe distinguirse fácilmente.
8. Teñir con eosina Y al 1% durante 10 minutos.
9. Lávese con agua corriente del grifo durante 1 a 5 minutos.

Fórmula de Papanicolaou
10. Deshidratar con alcoholes, aclarar y montar.
Hematoxilina de Harris
Resultados
Naranja G 6
Núcleos azul negro
Alcohol Naranja G acuoso 50 ml
Citoplasma diferentes tonos de rosa rosa
al 10% 950 ml
Fibras musculares intenso / rojo
Ácido fosfotúngstico 0-15 g
las células rojas de la sangre rojo naranja
Fibrina Rosa profundo EA 50
0,04 M verde claro SF 10 ml
Notas
0,3 M eosina Y 20 ml
Tenga en cuenta que las estructuras y sustancias distintas de los
Ácido fosfotúngstico 2g
núcleos pueden ser hematoxifílicas en diversos grados. Los ejemplos
Alcohol 750 ml
incluyen hifas de hongos, que son levemente
Metanol 250 ml
depósitos hematoxifílicos y de calcio, que a menudo son de color negro
azulado profundo.
Filtra todas las manchas antes de usar.
Tinción rápida de hematoxilina y eosina para

cortes congelados urgentes
Método de tinción de Papanicolaou
1. Congele un bloque de tejido adecuado en un portabrocas.
2. Corte las secciones del criostato con un grosor de 3 a 6! M. 1. Retire el fijador de polietilenglicol en alcohol
3. Fije la sección en formalina tamponada neutra al 10% a
al 50%, 2 minutos.
temperatura ambiente durante 20 segundos. 2. Hidratarse en 95% de alcohol, 2 minutos y 70% de
4. Enjuague con agua del grifo.

alcohol, 2 minutos.
3. Enjuague con agua, 1 minuto.
5. Teñir con hematoxilina de Carazzi de doble concentración durante 1
minuto. 4. Tinción con hematoxilina de Harris, 5 minutos.
6. Lávese bien con agua del grifo durante 10 a 20 segundos. 5. Enjuague con agua, 2 minutos.
7. Teñir en eosina acuosa al 1% durante 10 segundos. 6. Diferenciar en ácido clorhídrico acuoso al 0,5%, 10
segundos aprox.
7. Enjuague con agua, 2 minutos.
9. Deshidratar, aclarar y montar.
8. 'Azul 'en el sustituto del agua del grifo de Scott, 2 minutos.
9. Enjuague con agua, 2 minutos.

10. Deshidratar, 70% de alcohol durante 2 minutos.
Tinción de Papanicolaou para
11. Deshidratar, 95% de alcohol, 2 minutos.
preparaciones citológicas
12. Deshidratar, 95% de alcohol, 2 minutos.
13. Mancha en OG 6, 2 minutos.
La tinción universal para preparaciones citológicas es la
14. Enjuague con alcohol al 95%, 2 minutos.
tinción de Papanicolaou. La hematoxilina de Harris es la
15. Enjuague con alcohol al 95%, 2 minutos.
tinción nuclear óptima y la combinación de OG 6 y EA 50
dieciséis. Teñir en EA 50, 3 minutos.
da una gama sutil de tonos verdes, azules y rosados al
17. Enjuague con alcohol al 95%, 1 minuto.
citoplasma celular.
Los tiempos de tinción se pueden ajustar para adaptarse a las Hematoxilina de Weigert (Weigert 1904)
preferencias personales de una mancha más oscura o más pálida.
Las alternativas al sustituto del agua del grifo de Scott incluyen agua Se trata de una hematoxilina de hierro en la que se utiliza
amoniacal al 0,1% o una solución acuosa débil de carbonato de litio. cloruro férrico como mordiente / oxidante. Las soluciones de
hierro y hematoxilina se preparan por separado y se
Resultados mezclan inmediatamente antes de su uso. Se preparan de la
Los núcleos deben aparecer Citoplasma azul negro siguiente manera.

(escamoso no queratinizante azul verde
células)
Células queratinizantes rosa / naranja

Hematoxilina férrica de Weigert
Nota Preparación de soluciones

Cambia las manchas con frecuencia. una. Solución de hematoxilina
Hematoxilina 1g
Esto se deja madurar de forma natural durante 4 semanas antes de su
uso.
Hematoxilinas de hierro B. Solución de hierro

Cloruro férrico acuoso al 30% (anhidro) 4 ml
En estas soluciones de hematoxilina, las sales de hierro se Ácido clorhídrico (concentrado) Agua 1 ml
utilizan como agente oxidante y como mordiente. Las sales destilada 95 ml
de hierro más comúnmente utilizadas son el cloruro férrico y Esta solución se filtra y se agrega a un volumen igual de la
solución de hematoxilina inmediatamente antes de usar el tinte.
el sulfato de amonio férrico, y las hematoxilinas de hierro
La mezcla debe ser de un color violeta-negro y debe desecharse
más comunes son:
si es marrón. El uso principal de la hematoxilina de Weigert es
• Hematoxilina de Weigert como tinción nuclear en técnicas en las que se deben aplicar
• Hematoxilina de Heidenhain soluciones de tinción ácidas a las secciones posteriormente (por
ejemplo, tinción de van Gieson). Es habitual un tiempo de tinción
• Hematoxilina de Loyez para mielina
de 15 a 30 minutos. En esta función, la hematoxilina de Weigert
• Hematoxilina de Verhöeff para fibras de elastina.
ha sido reemplazada en gran medida por el procedimiento de
La sobreoxidación de la hematoxilina es un problema con hematoxilina azul de celestina-alumbre más conveniente. Sigue
estas tinciones, por lo que es habitual preparar soluciones siendo una tinción útil, con eosina, para los tejidos del SNC. Para
el purista que prefiere una contratinción nuclear negra con
separadas de mordiente / oxidante y hematoxilina y
técnica de van Gieson, la técnica de hemateína ferrosa de
mezclarlas inmediatamente antes de su uso (p. Ej., En
Deslizadores (1969) es satisfactorio.
hematoxilina de Weigert) o utilizarlas consecutivamente (p.
Ej., Hematoxilinas de Heidenhain y Loyez) . Debido a la fuerte
capacidad oxidante de la solución que contiene sales de
hierro, a menudo se usa como fluido diferenciador posterior
después de la tinción con hematoxilina, así como como Hematoxilina de Heidenhain
fluido mordiente antes de ella.
Las hematoxilinas de hierro son capaces de demostrar (Heidenhain 1896)
una gama mucho más amplia de estructuras tisulares que Esta hematoxilina de hierro utiliza sulfato de amonio
las hematoxilinas de alumbre, pero las técnicas consumen férrico como oxidante / mordiente, y la misma solución
más tiempo y normalmente incorporan una etapa de se utiliza como fluido diferenciador. La solución de hierro
diferenciación que necesita un control microscópico para su se usa primero y luego la sección se trata con la solución
precisión. El uso de métodos basados en hematoxilina de de hematoxilina hasta que se tiñe en exceso y luego se
hierro para la identificación específica de fosfolípidos se diferencia con la solución de hierro bajo control
analiza brevemente en el Apéndice II. microscópico.
Hematoxilinas de hierro 181
La hematoxilina de Heidenhain se puede utilizar para

controlados microscópicamente hasta que se demuestre
demostrar muchas estructuras según el grado de claramente la estructura deseada (ver Nota b).
diferenciación. Después de la tinción, todos los 7. Lavar con agua corriente del grifo durante 10 minutos.
componentes son de color negro o gris oscuro. La tinción de 8. Deshidratar, aclarar y montar.
hematoxilina se elimina progresivamente de diferentes
Resultados
estructuras de tejido a diferentes velocidades utilizando la
Mitocondrias, estrías musculares, mielina, cromatina,
solución de alumbre de hierro. Pueden demostrarse
etc., gris-negro.
mitocondrias, estrías musculares, cromatina nuclear y
Notas
mielina; el color negro desaparece primero de las
una. El tiempo necesario en el mordiente y el tinte variará según
mitocondrias, luego de las estrías musculares y luego de la
el fijador utilizado; para la mayoría de los propósitos, 1 hora
cromatina nuclear. La diferenciación más prolongada
en cada solución es satisfactoria, pero los tejidos fijados en
eliminará la mancha de casi todas las estructuras, aunque
soluciones de dicromato necesitan más tiempo. Los
los glóbulos rojos y la queratina retienen la mancha por más siguientes tiempos son una guía aproximada. Tejidos fijados
tiempo. Se puede lograr una diferenciación más fácilmente en soluciones de formalina, sublimado formal, Susa, Bouin y
controlable si la solución de alumbre de hierro de Carnoy, 1 hora. Tejidos fijados en Helly's o Zenker's, 3 horas.
diferenciación se diluye con un volumen igual de agua Tejidos fijados en osmio
destilada o una solución alcohólica de ácido pícrico. tetróxido y líquido de Fleming, hasta 24 horas.
B. La diferenciación es difícil de juzgar, los autores recomiendan
sumergir el portaobjetos dentro y fuera del alumbre de
hierro al 5% hasta que el fondo del portaobjetos sea claro,
Hematoxilina férrica de Heidenhain luego verificarlo microscópicamente. Si la diferenciación
Preparación de soluciones avanza más allá del final deseado, la sección se puede
una. Solución de hematoxilina retener en la solución de hematoxilina durante el mismo
Hematoxilina 0,5 g período de tiempo e intentar la diferenciación nuevamente.
Agua destilada 90 ml C. Las contratinciones citoplasmáticas rara vez son
necesarias, aunque pueden usarse para acentuar la
La hematoxilina se disuelve en el alcohol y luego se
cromatina nuclear, particularmente en la demostración
agrega el agua. La solución se deja madurar de forma
de cromosomas o mitosis. La eosina acuosa o la naranja
natural durante 4 semanas antes de su uso.
G es satisfactoria.
B. Solución de hierro (5% de alumbre de
D. Las secciones teñidas con hematoxilina de hierro de Heidenhain
hierro)Sulfato de amonio férrico Agua 5g son resistentes a la decoloración solo si la sección se lava bien
destilada 100 ml después de la etapa de diferenciación para eliminar todos los
Es importante que solo se utilicen los cristales violetas rastros de alumbre de hierro.
claros de sulfato de amonio férrico.
Método
1. Desparafinar las secciones, rehidratar mediante grados Hematoxilina de Loyez
descendentes de alcohol al agua.
2. Mordiente en solución de hierro (5% de alumbre de hierro) durante 1 hora

(Loyez 1910)
(ver Nota a). Esta hematoxilina de hierro utiliza sulfato de amonio férrico
3. Enjuague con agua destilada. como mordiente. Las soluciones de mordiente y hematoxilina se
4. Teñir en solución de hematoxilina de Heidenhain durante utilizan de forma consecutiva, y la diferenciación se realiza
1 hora (ver Nota a). mediante el diferenciador de Weigert (bórax y ferricianuro de
5. Lavar con agua corriente del grifo. potasio). Se usa para demostrar mielina y se puede aplicar a
6. Diferenciar en la solución de hierro (5% de alumbre de hierro), o la
secciones de parafina, congeladas o nitrocelulósicas. Dos
solución de hierro diluida con un volumen igual de agua
métodos son similares al de Loyez. La tinción de mielina de
destilada. Alterne un enjuague en diferenciador con un enjuague
Heidenhain (que no debe confundirse con la hematoxilina
en agua del grifo. El grado de diferenciación es
férrica de Heidenhain)
es esencialmente la técnica de Loyez, pero la selección juiciosa de preparación, el fijador utilizado y la estructura del tejido que
del tiempo de tinción elimina la necesidad de diferenciación por se va a demostrar. La tinción es más precisa después de que la
separado. La segunda variante es la técnica corta de Weil en la sección se haya tratado con una solución de dicromato ácido y
que el mordiente y el tinte se mezclan antes de su uso, en lugar después de un procedimiento de blanqueo de Mallory (que
de usarse consecutivamente. Ambas técnicas son más cortas también ayuda a la tinción diferencial).
que las de Loyez.
Solución técnica de tinción PTAH con hemateína

Hematoxilina de Verhöeff (Shum y Hon 1969)
Solución A
(Verhöeff 1908) Hemateina 0,8 g
Esta hematoxilina de hierro se usa para demostrar fibras Agua destilada 1 ml
Triturar 0,8 g de hemateína hasta obtener una pasta con 1 ml
elásticas. Se incluye cloruro férrico en la solución de tinción
agua destilada. (La pasta debe ser marrón chocolate.
de hematoxilina, junto con yodo de Lugol, y se usa cloruro
Los colores más claros suelen ser indicativos de un
férrico acuoso al 2% como diferenciador. Las fibras elásticas
lote inadecuado de hemateína y deben desecharse).
gruesas se tiñen de negro.
Otros métodos de elastina pueden teñir fibras más finas,
Solución B
pero para el alto contraste requerido para la
Ácido fosfotúngstico 0,9 g
fotomicrografía, la tinción negra intensa producida por
Agua destilada 9 ml
Verhöeff es ideal. Verhöeff también se usa para teñir fibras
Mezclar la solución A y la solución B, llevar a ebullición,
de elastina como parte del pentacromo de Movat.
enfriar y filtrar.
Método
1. Desparafín, rehidrata a través de grados descendentes de
Hematoxilinas de tungsteno
alcohol al agua.
2. Trate con permanganato ácido (ver más abajo) durante
Sólo existe una hematoxilina de tungsteno ampliamente 5 minutos.
utilizada, aunque existen muchas variantes en la técnica 3. Enjuague con agua del grifo.
original de hematoxilina del ácido fosfotúngstico de 4. Blanqueador con ácido oxálico acuoso al 5%.
Mallory (PTAH). Mallory (1897, 1900) hematoxilina 5. Lávese bien con agua del grifo.
combinada con ácido fosfotúngstico acuoso al 1%, este 6. Teñir en solución de PTAH durante 12 a 24 horas a
último actuando como mordiente. Es posible preparar temperatura ambiente.
una solución de tinción usando hemateína en lugar de 7. Lavar con agua destilada.
hematoxilina; el proceso de oxidación es innecesario y la 8. Deshidratar rápidamente, aclarar y montar.
solución de tinción se puede utilizar inmediatamente, La solución se puede utilizar a 56 ° C durante varias
pero su actividad es comparativamente breve. La horas, pero la tinción durante más tiempo a temperatura
hematoxilina se puede oxidar químicamente usando una ambiente da resultados más precisos y preferibles.
solución de permanganato de potasio; de nuevo, la

solución se puede utilizar en 24 horas. El método de
preparación más satisfactorio, aunque requiere mucho
tiempo, es permitir la maduración natural de la solución Solución de PTAH, químicamente oxidada con
permanganato de potasio
de hematoxilina de tungsteno a la luz y al aire. La
solución de PTAH producida puede tardar algunos meses Solución
en madurar, pero seguirá siendo útil durante muchos Hematoxilina 0,5 g
años. Su uso es aplicable tanto al material del SNC como Ácido fosfotúngstico 10 g
a la estructura general de los tejidos, y a los tejidos
Permanganato de potasio acuoso al 0,25% 25 ml
fijados en cualquiera de los fijadores estándar.
Hematoxilinas de molibdeno 183
La hematoxilina se disuelve en 100 ml de agua destilada y el Notas

ácido fosfotúngstico en los 400 ml restantes; se mezclan las dos El tratamiento con dicromato ácido (posterior al cromado) puede
soluciones y se agrega la solución de permanganato de potasio. omitirse si la fijación se ha realizado mediante un fijador que
La tinción se puede usar al día siguiente, pero la actividad de contiene cromato.
tinción máxima no se alcanza hasta después de 7 días. La
La deshidratación debe ser rápida ya que el agua y el
oxidación continua de la hematoxilina significa que esta
alcohol pueden eliminar parte de la mancha. Si las secciones
mancha tiene una vida comparativamente corta.
son demasiado azules, se puede lograr cierto grado de
diferenciación durante la deshidratación. La deshidratación
puede comenzar con alcohol al 95% y las secciones del SNC
pueden necesitar un lavado a fondo con alcohol al 95%
Solución de PTAH, oxidada naturalmente
durante varios minutos para eliminar el exceso de mancha
Preparación de soluciones
roja. Es posible que sea necesario modificar los tiempos en
una. Solución de dicromato ácido
dicromato, permanganato y tinción según la naturaleza del
HCl al 10% en alcohol absoluto 12 ml tejido y la característica a ser
Dicromato de potasio acuoso al 3% 36 ml demostrado
B. Solución de permanganato ácido
Permanganato de potasio acuoso al 0,5% Ácido 50 ml
sulfúrico al 3% 2,5 ml
C. Solución de tinción
Hematoxilinas de molibdeno
Hematoxilina 0,5 g
Ácido fosfotúngstico 5g
Agua destilada 500 ml Las soluciones de hematoxilina que utilizan ácido
Los sólidos se disuelven en porciones separadas del agua molibdico como mordiente son raras, y la única técnica
destilada y luego se mezclan como en las recetas anteriores. Se que ganó alguna aceptación fue la Thomas (1941) técnica
deja que la mancha madure de forma natural en un frasco sin que fue mencionada por McManus y Mowry (1964).
tapón en un lugar cálido y luminoso durante varios meses. Recomiendan el método para la demostración de
colágeno y reticulina gruesa; aunque existen técnicas
Método más valiosas y ampliamente aceptadas para estas fibras
1. Desparafín, rehidrata a través de grados descendentes de de tejido conectivo, el método de Thomas también tiñe
alcohol al agua. los gránulos de células de argentafina y puede tener un
2. Colocar en una solución de dicromato ácido durante 30 minutos. uso potencial para este propósito.
4. Trate con una solución de permanganato ácido durante 1

minuto. Tinción de hematoxilina con ácido fosfomolíbdico (Thomas 1941)
Preparación de soluciones
6. Blanqueador en ácido oxálico al 1%.
una. Solución de hematoxilina
Hematoxilina 2,5 g
8. Teñir en el tinte PTAH de Mallory durante la noche. Dioxano 49 ml
9. Deshidratar a través de grados ascendentes de alcohol, Peróxido de hidrógeno 1 ml
aclarar y montar. B. Solución de ácido fosfomolíbdico
Resultados Ácido fosfomolíbdico 16,5 g
Estrías musculares, neuroglia, azul oscuro Agua destilada 44 ml
fibras, fibrina y amebas Dietilenglicol 11 ml
Núcleos, cilios, glóbulos rojos azul La solución de ácido fosfomolíbdico se filtra y se añaden 50
Mielina azul más claro ml del filtrado a la solución de hematoxilina. La solución
Colágeno, osteoide, cartílago, rojo pardusco profundo resultante, que debe ser de color violeta oscuro, se deja
fibras elásticas reposar durante 24 horas antes de su uso.
Citoplasma marrón rosado pálido
ahora ha sido reemplazado por técnicas que son más

Método
específicas. La base de los métodos de Mallory es la
1. Desparafín, rehidrata a través de grados descendentes de
alcohol al agua.
capacidad de la hematoxilina no madura para formar lagos
2. Teñir con hematoxilina de ácido fosfomolíbdico durante 2

de color negro azulado con estos metales. Los métodos
minutos. vienen dados porLillie y Fulmer (1976).
3. Lavar con agua destilada. Un último método de hematoxilina es digno de mención.
4. Deje caer alcohol picroacético (consulte la Nota a) en la La técnica de Weigert-Pal discutida en ediciones anteriores
sección y luego lávelo inmediatamente con agua destilada. de este libro, para la demostración de mielina, es un método
de hematoxilina en el que el bloque de tejido se mordaza en
5. Enjuagar con agua del grifo, deshidratar al 95% y una solución de cromato antes de incrustarlo y seccionarlo.
alcohol absoluto, aclarar y montar. A menudo se realiza un mordiente adicional de la sección en
Resultados una solución de acetato de cobre antes de aplicar la
Colágeno y reticulina gruesa violeta a negro hematoxilina. Es probable que el mordiente principal sea un
Células de argentafina negro compuesto de cromo. Los usos de las tinciones de
Núcleos azul pálido hematoxilina se resumen brevemente enCuadro 10.2.
Celdas de Paneth naranja
Notas
una. El alcohol picroacético (ácido pícrico 0,5 g, ácido acético
glacial 0,5 ml, alcohol al 70% 100 ml) actúa como Control de calidad en la tinción H&E de rutina
diferenciador; esto se puede omitir.
B. Los tejidos fijados en dicromato no dan buenos
El diagnóstico preciso depende de que un patólogo o
resultados.
citólogo examine los portaobjetos de microscopio teñidos,
generalmente secciones de parafina H&E, ya que la tinción
H&E se realizó a granel mediante una máquina de tinción
automática. La necesidad de uniformidad en la tinción es
Hematoxilinas de plomo vital para evitar una interpretación histológica difícil. En
general, las máquinas de tinción automatizadas permiten
Las soluciones de hematoxilina que incorporan sales de una tinción, diferenciación y deshidratación precisas y
plomo se han utilizado recientemente en la demostración de consistentes ajustando los tiempos de cada paso. Sin
los gránulos en las células endocrinas del tracto digestivo y embargo, la variabilidad en las tinciones puede requerir un
otras regiones. La aplicación diagnóstica más práctica es la ajuste de los tiempos de tinción. En las máquinas de tinción,
identificación de células endocrinas en algunos tumores, los problemas suelen estar asociados con la tinción con
pero también se utiliza en procedimientos de investigación hematoxilina en lugar de con eosina. La variación en el
como en la localización de células secretoras de gastrina en número de lote de la hematoxilina, el cambio de proveedor y
el estómago (Beltrami y col. 1975). Ha sido reemplazado en las diferencias de pH son las variables más comunes. Una
gran medida por la inmunohistoquímica. persona diferente que siga las mismas instrucciones de
preparación también puede resultar en una mancha como la
hematoxilina que tiene propiedades de tinción ligeramente
Hematoxilina sin mordiente diferentes cada vez que se prepara. La edad de la mancha y
el grado de uso también afectarán las propiedades de
Se han utilizado soluciones de hematoxilina recién tinción. Se debe verificar la eficacia de los lotes nuevos de
preparadas, utilizadas sin mordiente, para demostrar colorante frente a lotes actuales o anteriores, y los tiempos
varios minerales en secciones de tejido. Mallory (1938) de coloración deben ajustarse para dar uniformidad.
describió un método para el plomo, y luego publicó un También es importante darse cuenta de que otros factores,
método similar capaz de demostrar hierro y cobre ( como la fijación, las variaciones en los programas de
Mallory y Parker 1939); estos métodos tienen procesamiento, el espesor de la sección,
Secciones difíciles 185
Cuadro 10.2 Los usos de las tinciones de hematoxilina
Hematoxilina Aplicaciones Oxidante Mordaz

Ehrlich Tinción nuclear utilizada con eosina. Natural Alumbre
Mancha algunas mucinas
Delafield Tinción nuclear utilizada con eosina Natural Alumbre
Mayer Tinción nuclear utilizada con Yoduro de sodio Alumbre
eosina. Contratinción nuclear
Harris Tinción nuclear utilizada con eosina Óxido de mercurio Alumbre
Col Tinción nuclear utilizada con eosina Yodo Alumbre
Carazzi Tinción nuclear utilizada con eosina Yodato de potasio Alumbre
(utilizada con secciones congeladas)
Branquia Tinción nuclear utilizada con eosina Yodato de sodio Alumbre
Weigert Tinción nuclear utilizada con tintes Natural Planchar
ácidos.
Heidenhain Detalle intranuclear, estrías Natural Planchar
musculares
Verhöeff Fibras elásticas Natural Planchar
Loyez Mielina Natural Planchar
Mallory PTAH Fibrina, estrías musculares, fibras Natural Tungsteno

gliales
Thomas Colágeno, gránulos de células Hidrógeno Molibdeno

endocrinas peróxido
Solcia Gránulos de células endocrinas Sin oxidante Dirigir
Mallory Hierro, cobre, plomo Sin oxidante Sin mordaz

Weigert-Pal Mielina (en preparación en bloque) Sin oxidante Cromo-
cobre
y temperaturas excesivas de la placa calefactora, pueden agravar el problema. Esto puede ocurrir, particularmente en
provocar variaciones en la tinción. los países tropicales, porque los tejidos pueden fijarse en un
fijador de formalina no neutro, sin tampón y de mala calidad
que se deteriora con el calor y se vuelve progresivamente
Secciones difíciles más ácido. El principal problema es conseguir una tinción
nuclear adecuada con hematoxilina sin teñir también el
Ya se ha mencionado el problema de utilizar hematoxilina citoplasma; este fenómeno da un color púrpura
como contratinción nuclear cuando se van a utilizar otros uniformemente fangoso a la sección terminada después de
tintes ácidos (por ejemplo, van Gieson). Un problema similar que se ha aplicado eosina.
ocurre cuando se intenta teñir secciones de parafina cuando Hay dos formas principales en las que se pueden
el tejido se ha fijado durante mucho tiempo en un fijador de obtener secciones de H&E aceptables para el diagnóstico
formalina que gradualmente se ha vuelto más ácido. Tejidos en estas circunstancias. Uno es el uso de la secuencia de
y / o bloques de cera de parafina enviados desde países con hematoxilina celestine bluealum y el otro es el uso de
climas cálidos una hematoxilina de hierro como la de Weigert.
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Revista de métodos de laboratorio microscópicos
estructuras collagènes et réticulaires: I'hématoxyline
aplicados 3, 777.
phos-phomolybdique au dioxane. Técnica de
Heidenhain, M., 1896. Noch einmal über die coloración. Comptes Rendus des Séances de la
Darstellung der Centralkörper durch Eisenhämatoxylin Société de Biologie et de ses Filiales 135, 935.
nebst einigen allgemeinen Bemerkungen über die
Hämatoxylinfarben. Zeitschrift für wissenschaftliche.
Verhöeff, FH, 1908. Algunos nuevos métodos de tinción de
Mikroskopie und für mikroskopische Technik 13, 186.
amplia aplicabilidad. Incluye una tinción diferencial
rápida para tejido elástico. Revista de la Asociación
Lillie, RD, Fulmer, HM, 1976. Histopatológico Médica Estadounidense 50, 876.
histoquímica técnica y práctica, cuarta ed. Weigert, K., 1904. Eine kleine Verbesserung der
McGraw-Hill, Nueva York. Método de Hämatoxilina de van-Gieson. Zeitschrift für
Loyez, M., 1910. Coloración de fibras nerviosas par wissenschaftliche Mikroskopie und für
la méthode à l'hématoxyline au fer après inclusión mikroskopische Technik 21, 1.
Conectivo y mesenquimal 11
tejidos con sus manchas
John D. Bancroft • Christopher Layton
sustancia. La proporción de células a sustancia

Introducción
intercelular varía de un tipo de tejido conectivo a otro, al
igual que la función principal del tejido conectivo. Por
El tejido conectivo es uno de los cuatro tipos de tejido que se
ejemplo, el hueso tiene solo unas pocas células en una
encuentran en todo el cuerpo. El término 'conectar' proviene
sustancia intercelular rígida, generalmente densa, y su
de la palabra latina 'conectere ' que significa 'atar'. Su
función principal es la de proporcionar fuerza y soporte.
función principal es la de conectarse y brindar apoyo a otros
Los tipos de células de tejido conjuntivo pueden incluir
tejidos del cuerpo. Durante el desarrollo embrionario, el
entidades tales como fibroblastos, mastocitos, histiocitos,
ectodermo y el endodermo están divididos por una capa
células adiposas, células reticulares, osteoblastos y
germinal llamada mesodermo, genéricamente conocida
osteocitos, condroblastos y condrocitos, células
como mesénquima. Esto viene de las palabras griegas '
sanguíneas y células formadoras de sangre. Parte del
mesos ' que significa medio y 'enchyma ' es decir, infusión.
tejido conjuntivo tiene poca sustancia y se compone
Es a partir del mesénquima que se desarrollan los tejidos
principalmente de células cuyas funciones no son las de
conectivos.
producción de sustancia intercelular, como el tejido
En casi cualquier tipo de tejido conectivo hay tres
adiposo. Dado que no conectan ni sostienen los otros
elementos: las células, las fibras y la sustancia
tejidos corporales, se incluyen bajo los tejidos conectivos,
fundamental amorfa. La identificación de las células
ya que probablemente derivan de la misma célula madre.
puede basarse en su aparición en los tejidos areolares
La célula madre de toda la serie es la célula mesénquima
y sueltos que pueden considerarse el principal
embrionaria, que rara vez se encuentra en adultos.
material de "empaquetado" en el adulto. Esto también
La sustancia intercelular suele estar compuesta tanto de
se puede considerar como un prototipo del tejido
elementos amorfos (mucopolisacáridos sulfatados y no
conectivo. Los tejidos conectivos se dividen en los
sulfatados) como de elementos formados (colágeno, fibras
siguientes grupos:
reticulares y fibras elásticas). Estas son las partes no vivas de
• Tejido conectivo propiamente dicho: incluye laxo los tejidos conectivos. La naturaleza de la sustancia
o areolar, denso, regular y adiposo irregular, intercelular varía según su función. Puede ser
reticular extremadamente duro y denso, en el hueso cortical o blando
• Cartílago - elástico hialino y fibrocartílago como en el cordón umbilical. Sus apariencias microscópicas
• Hueso: esponjoso o esponjoso y denso o también son variables, algunas fibrilares, mientras que otras
cortical son completamente homogéneas. Las sustancias
• Sangre intercelulares se pueden clasificar fácilmente en dos grupos
• Formador de sangre: hematopoyético. principales por su apariencia microscópica:
El tejido conectivo generalmente consiste en una porción • tipos formados o fibrosos

celular en un marco circundante de una estructura no celular. • tipos amorfos o gel
188 11 Tejidos conectivos y mesenquimales con sus tinciones
debido a la falta de interferencia de la sustancia

Intercelular formado o fibroso
fundamental interfibrilar. Sin embargo, la presencia de
sustancias una forma parcialmente procesada de precolágeno de
Tipo III, pN colágeno III (es decir, colágeno III con un
Un defecto frecuente entre los histólogos es hablar de aminoterminal), ayuda a regular el diámetro de las
colágeno, reticulina y elastina, cuando en realidad se fibrillas formadas por el colágeno de Tipo I, formando
refieren a fibras colágenas, fibras reticulares y fibras copolímeros con las fibrillas. El colágeno pN III inhibe la
elásticas. Los primeros términos se relacionan con el velocidad a la que el colágeno de tipo I se ensambla en
compuesto proteico que predomina en la fibra en fibrillas y también disminuye la cantidad de colágeno de
particular y no deben usarse para describir la fibra del tipo I que se incorpora a las fibrillas.
tejido conectivo en sí.
Tipo II
Fibras colagénicas Este colágeno se encuentra en el cartílago hialino y elástico y es

producido por la actividad de los condroblastos. Las fibras son
Estos son los más frecuentes de todos los tipos fibrosos de
delgadas y están compuestas por fibrillas dispuestas en una red
sustancia intercelular y se encuentran en grandes
con copiosas cantidades de proteoglicanos. El colágeno de tipo
cantidades en la mayoría de los sitios del cuerpo. Pueden
II no suele ser fácilmente visible mediante métodos
presentarse como fibras individuales, como en los tejidos
microscópicos de luz. Las fibras de tipo II que se encuentran en
areolares sueltos, dispuestas en un sistema de tejido
el cartílago articular son más gruesas y se asemejan,
abierto, o como grandes haces de fibras agrupadas para
ultraestructuralmente, a las fibras de tipo I. Las bandas cruzadas
formar estructuras de gran resistencia a la tracción, como un
del colágeno tipo II son menos evidentes debido al efecto de
tendón. Las fibras colágenas individuales nunca se
enmascaramiento del abundante material interfibrilar. El
ramifican, aunque algunos haces de fibras se ramifican con
tratamiento con hialuronidasa puede desenmascarar las fibras
frecuencia. Cuando se ven con luz polarizada, son
de tipo II para hacerlas accesibles para la evaluación
fuertemente birrefringentes, pero carecen de dicroísmo.
inmunohistoquímica.
Tipos de colágeno
Tipo III
Se han caracterizado y descrito cuatro tipos principales Este colágeno se encuentra solo en aquellos tejidos que
de colágeno y varios tipos menores. La producción de los también contienen colágeno de Tipo I (por ejemplo,
diferentes tipos está bajo control genético, cada uno de pulmón, hígado, bazo, riñón, etc.). Las fibras
los cuales refleja ligeras variaciones en la composición de clásicamente conocidas como 'fibras reticulares'
la cadena! -. Todos muestran el mismo contenido contienen colágeno tipo III. Los estudios
característico de aminoácidos. ultraestructurales de las fibras reticulares revelan fibrillas
poco compactas rodeadas de abundante material
Tipo i
interfibrilar rico en carbohidratos. La argirofilia de las
Este colágeno forma las fibras de colágeno gruesas que se fibras reticulares se debe al contenido de proteoglicanos
han demostrado histológicamente y forman la mayor parte de las fibras y no depende de las proteínas de las propias
del colágeno del cuerpo. Este tipo representa la mayor parte fibrillas. El colágeno de tipo III parece proporcionar una
de la matriz orgánica de bases, pero también es una cantidad limitada de apoyo, pero también permite cierta
proteína estructural importante en el pulmón. Aparece bajo motilidad y la fácil difusión e intercambio de metabolitos.
el microscopio electrónico como haces de fibrillas gruesas y En algunas referencias, el colágeno de tipo III a menudo
compactas (75 nm de diámetro) con poca sustancia se denomina "colágeno fetal". Sin embargo, este término
interfibrilar. Las fibrillas muestran la característica es engañoso ya que el colágeno de tipo III constituye una
periodicidad axial de 64 nm (Figura 11.1). Se cree que la proporción significativa del colágeno presente en los
prominencia de las 'bandas cruzadas' en el colágeno tipo I es adultos.
Sustancias intercelulares formadas o fibrosas 189
Figura 11.1 Micrografía electrónica de colágeno humano que muestra bandas cruzadas transversales.
del mismo sitio (por ejemplo, el 60% del colágeno de la piel fetal es células, células endoteliales y algunas células epiteliales.
de tipo III, en comparación con sólo el 20% de la piel de un adulto). Permanece en estrecho contacto con la superficie celular y
se presume que participa en la unión de las células a las
Tipo IV estructuras adyacentes y en el mantenimiento de la
integridad del tejido. El colágeno de tipo VI es una variante
Este colágeno se ha caracterizado en estructuras
rica en disulfuro que se ha identificado en las zonas límite
identificadas morfológicamente como membranas basales.
donde las fibras de colágeno intersticiales (tipos I y II) están
En general, se acepta que el colágeno de tipo IV no forma
unidas a elementos no colágenos.
fibras o fibrillas visibles en el examen con microscopio
óptico. La microscopía electrónica revela una organización
Reacciones de tinción del colágeno
aleatoria de finas fibrillas que forman una estructura similar
a un fieltro en todas las membranas basales. El colágeno El colágeno de tipo I se tiñe fuertemente con tintes ácidos,
tipo IV está estrechamente asociado con cantidades debido a la afinidad de los grupos catiónicos de las proteínas
significativas de complejos de carbohidratos, lo que explica por los grupos reactivos aniónicos de los tintes ácidos. El
la fuerte reacción de las membranas basales al método de colágeno puede demostrarse más selectivamente mediante
ácido periódico-Schiff. soluciones compuestas de colorantes ácidos (por ejemplo, van
Gieson) o mediante combinaciones secuenciales de colorantes
Tipos V y VI
ácidos (por ejemplo, tricrómico de Masson, MSB de Lendrum,
El colágeno tipo V es producido en pequeñas cantidades por etc.). Los diferentes tipos de colágeno pueden diferenciarse
una amplia gama de células, incluido el tejido conectivo. inmunohistoquímicamente.
Fibras reticulares Los anticuerpos dirigidos contra colágenos de Tipo I y Tipo

III, sus correspondientes aminopéptidos y decorina (PG-II)
Estas son las fibras finas y delicadas que se encuentran revelaron que en este órgano las fibrillas de reticulina
conectadas a las fibras de colágeno más gruesas y consisten en híbridos de colágenos de Tipo I y Tipo III. La
fuertes (fibras de Tipo I). Proporcionan la mayor parte del microscopía inmunoelectrónica doble muestra que las
marco de soporte de los órganos más celulares (por fibrillas de 20 a 25 nm consisten principalmente en colágeno
ejemplo, bazo, hígado, ganglios linfáticos, etc.), donde se de tipo I, mientras que las fibrillas más grandes, de 30 a 35
organizan en una red tridimensional para proporcionar nm, marcan simultáneamente los colágenos de tipo I y de
un sistema de soporte celular individual (Figura 11.2). En tipo III. La mayoría de las fibrillas de más de 40 nm de
el examen con microscopio óptico, las fibras reticulares diámetro marcan el colágeno tipo III. Las fibras reticulares
son débilmente birrefringentes, y la reacción débil se pueden demostrarse claramente, en cortes de parafina,
atribuye a su falta de tamaño físico y al efecto de utilizando una de las muchas técnicas de impregnación con
enmascaramiento de la sustancia interfibrilar. Se ve que plata de tipo argirófilo disponibles o, en cortes congelados,
se ramifican con frecuencia y parecen indistintos en las mediante la técnica de ácido periódico-Schiff. Ambos
preparaciones teñidas con H & E. Las características de métodos de demostración dependen de los grupos reactivos
las fibras de reticulina en la corteza renal humana se han presentes en la matriz de carbohidratos y no de los
estudiado utilizando medios inmunohistoquímicos. elementos fibrilares de la fibra.
Figura 11.2 Patrón de fibras reticulares en hígado normal por Gordon y dulces (1936) método de impregnación de plata.
Sustancias intercelulares formadas o fibrosas 191
Fibras elásticas isodesmosina, son los compuestos de reticulación

implicados. Los polipéptidos se transportan fuera de los
Las fibras del sistema elástico (es decir, oxitalan, elaunina y fibroblastos o de las células del músculo liso y la
fibras elásticas) tienen, respectivamente, una estructura reticulación se produce en los espacios extracelulares.
fibrilar, amorfa o mixta. Las fibras elásticas se pueden La proteína microfibrilar de fibra elástica tiene un
encontrar en todo el cuerpo, pero están especialmente contenido de aminoácidos que es bastante distinto,
asociadas con los sistemas respiratorio, circulatorio y bioquímicamente, del de la proteína elastina. Es
tegumentario. Su apariencia bajo el microscopio óptico particularmente rico en aminoácidos, que faltan o están
puede variar considerablemente según la ubicación, desde presentes solo en pequeñas cantidades en elastina. El
fibras finas y únicas, como en la dermis superior, hasta contenido de cisteína en EFMP es alto, lo que refleja la
estructuras en forma de membrana ("láminas elásticas presencia de numerosos enlaces disulfuro que serán
internas y externas") en las arterias grandes. En la última importantes cuando se consideren más adelante las
situación, las membranas elásticas están interrumpidas por propiedades de tinción de las fibras elásticas. Asociados
diminutos agujeros llamados fenestrae (latín 'fenestra ' - con EFMP hay una serie de complejos de carbohidratos,
ventana) que permiten la difusión de materiales a través de denominados 'glicoproteínas estructurales' (Cleary y
la membrana que de otro modo sería impermeable. Un Gibson 1983); la importancia de estos en la tinción de
examen reciente con microscopio electrónico de alta fibras elásticas también se considerará más adelante.
resolución ha demostrado que las fibras elásticas constan de Para una descripción más detallada de la composición de
dos componentes bastante distintos. Existe una sustancia las fibras elásticas y la bioquímica, se debe hacer
amorfa que, bioquímicamente, es compatible con la proteína referencia al trabajo deCleary y Gibson (1983), Uitto
elastina, y también un segundo componente, que muestra (1979), o Bailey (1978). Las fibras elásticas son acidófilas,
una periodicidad de 4-13 nm, que es de naturaleza congofílicas y refráctiles. Después de la oxidación, son
microfibrilar, y se ha denominado proteína microfibrilar de bastante basófilos debido a la formación de grupos de
fibra elástica (EFMP). Estas microfibrillas, a veces también ácido sulfónico a partir de los enlaces disulfuro del EFMP.
llamadas microfibrillas asociadas a elastina (EAMF), son Las fibras jóvenes con un alto contenido de EFMP
estructuras ubicuas de tejido conectivo que se cree que muestran una reacción de ácido periódico-Schiff positiva.
proporcionan resistencia a la tracción y flexibilidad a Se pueden ver en secciones rutinarias teñidas con H & E,
numerosos tejidos. También pueden actuar como un pero, para estudios más exigentes, se encuentran
andamio para la deposición de elastina. disponibles numerosas técnicas más selectivas. Estos
pueden ser relativamente simples, por ejemplo, el
Cuando se ve en sección transversal, se ve que el método de orceína Taenzer-Unna, o más largos y
núcleo central de la fibra elástica está compuesto por la complejos, por ejemplo, métodos de resorcina-fucsina de
proteína amorfa elastina, rodeada por un anillo o banda Weigert. Con el aumento de la edad de las fibras
de EFMP. Las proporciones de los dos componentes elásticas, se observan cambios físicos y bioquímicos.
parecen cambiar con la edad de la fibra (y Estos pueden incluir división y fragmentación, alteración
probablemente también con la edad del sujeto). En fibras de la proporción de EFMP a elastina y aumentos en los
jóvenes, la fracción dominante es la proteína niveles de ácidos glutámico y aspártico y calcio. Estos
microfibrilar. En las fibras más viejas, la proteína amorfa cambios son fácilmente visibles en la piel del sujeto, que
representa más del 90% del contenido de fibra. La unidad se arruga y se "suelta". Un problema más grave ocurre
molecular básica de elastina es un polipéptido lineal con con la pérdida de elasticidad de las arterias elásticas.
un peso molecular de aproximadamente 72 kilodaltons
(kDa). Esta subunidad se ha denominado "elastina
Fibras de oxitalan
soluble" o "tropoelastina". Uno de los rasgos
característicos de las fibras elásticas es la presencia de Las fibras de oxitalan fueron descritas por primera vez
reticulación que une las cadenas polipeptídicas en una por Fullmer y Lillie (1958) en membranas periodontales.
red de fibras. Desmosina y su isómero, Más recientemente se han demostrado en una amplia
variedad de tejidos, tanto normales como anormales ( fibras, a las fibras finas de oxitalan en los aspectos
Alexander y Garner 1977; Cleary y Gibson 1983; más superficiales de la dermis papilar.
Goldfischer y col. 1983). En el examen con microscopio
óptico, las fibras de oxitalan pueden distinguirse de las Membranas basales
fibras elásticas maduras por su falta de tinción con
soluciones de aldehído fucsina, a menos que hayan sido Las membranas basales se encuentran en todo el cuerpo
previamente oxidadas por permanganato de potasio, como una matriz elástica, que separa los tejidos
ácido perfórmico o ácido peracético. También se ha conectivos de las células epiteliales, endoteliales o
informado que permanecen sin teñir después de la mesoteliales, células musculares, células grasas y tejidos
hematoxilina de Verhöeff, con o sin oxidación previa. nerviosos. Dan soporte a las células epiteliales de las
Tras el examen con microscopio electrónico por varios superficies mucosas, glándulas y varias otras estructuras,
trabajadores, se ha sugerido que las fibras de oxitalan por ejemplo, los túbulos renales. También dan soporte a
son similares, si no idénticas, a las fibras EFMP. Parecen las células endoteliales que recubren los vasos
estar compuestos por unidades microfibrilares, de 7 a 20 sanguíneos, capilares, etc. La membrana basal no es
nm de diámetro, con una periodicidad de 12 a 17 nm. Su homogénea, sino que se divide en tres zonas o capas:
periodicidad se hace más notoria mediante el • lámina rara (o lámina lúcida)
pretratamiento con rojo de rutenio. Por su morfología, • lámina densa (lámina basal)
localización y propiedades de tinción, parece posible que
• lámina reticularis.
las fibras de oxitalan puedan representar una forma
inmadura de tejido elástico. También ha sido sugerido La lámina rara (lúcida) está adyacente a las células
porGoldfischer y col. (1983)que las microfibrillas y las superficiales y está compuesta principalmente por
fibras de oxitalan pueden tener un papel más allá del de complejos de carbohidratos. Esta capa es aparentemente
la elastogénesis y pueden involucrar mecanismos de continua con el glucocáliz de las células superficiales y se
'anclaje' entre fibras de colágeno, células estromales, ha sugerido que la lámina rara es producida por las
paredes capilares linfáticas, fibras elásticas maduras, células superficiales y no por las células del tejido
células musculares, etc. conjuntivo subyacentes. La lámina densa está compuesta
por un fieltro de microfibrillas que se han identificado
Fibras de elaunina inmunohistoquímicamente como predominantemente
colágeno de tipo IV con una menor cantidad de colágeno
Gawlik (1965) describió por primera vez las fibras de
de tipo V. El colágeno tipo IV se asocia con cantidades
elaunina; el término 'elaunin ' se deriva del griego
relativamente grandes de glicoproteínas estructurales,
"estiro". A diferencia de las fibras de oxitalan, las fibras
principalmente laminina y fibronectina, y pequeñas
de elaunina se tiñen con orceína, aldehído fucsina y
cantidades de proteoglicanos, principalmente heparán
resorcina-fucsina sin oxidación previa, pero no se tiñen
sulfato (Junqueira y Montes 1983; Laurie y Leblond 1983).
con hematoxilina de Verhöeff.
La lámina reticularis se ve como una capa que contiene
elementos fibrosos, que son continuos con las fibras de
Clasificación de tipos de fibras
tejido conectivo subyacentes.
A menudo se sugiere que los mecanismos de los tintes El grosor de la membrana basal varía de un sitio
utilizados para clasificar las fibras de elaunina y oxitalan son a otro; la mayoría están en el rango de 15 a 50 nm.
demasiado empíricos, que los términos 'elaunina' y 'oxitalan' La membrana basal glomerular (MBG) es
carecen de significado estructural o funcional, y que los tres particularmente gruesa, hasta 350 nm en un adulto
tipos de fibras, oxitalan, elaunina y elástica. , corresponden a sano. El aspecto ultraestructural del GBM también
etapas consecutivas de elastogénesis normal. Se ha difiere del de otras membranas basales, en que la
demostrado que existe una continuidad entre las fibras lámina densa central está bordeada a ambos lados
elásticas maduras y gruesas en la profundidad de la dermis, por una lámina rara. La secuencia de los elementos
a través de la elaunina intermedia. ultraestructurales en el GBM es de la luz capilar
Método de microondas de metenamina plata 193
hacia afuera: célula endotelial, lámina rara asociada al

Soluciones
endotelio, lámina densa, lámina rara asociada al epitelio,
Stock de plata metenamina
célula epitelial (podocito). En las secciones H & Estained
Metenamina acuosa al 3% 400 ml
de la mayoría de los tejidos, las membranas basales son Nitrato de plata, acuoso al 5% 20 ml
difíciles de distinguir; en el glomérulo, son más notorias, Conservar refrigerado a 4 ° C.
particularmente en trastornos como la nefropatía
Solución de bórax (borato de sodio) al 5%
membranosa o la diabetes, donde pueden estar
Solución de trabajo de metenamina plata
marcadamente engrosados. Para un examen más crítico,
Stock de metenamina plata Agua destilada 25 ml
se encuentran disponibles varias técnicas. Como
25 ml
resultado de su contenido de carbohidratos, las 5% de bórax (borato de sodio) 2 ml
membranas son fuertemente positivas por la reacción de
Solución de ácido periódico al 1%
ácido periódico-Schiff y por cualquier otra técnica de
Solución de cloruro de oro al 0,2%1%
demostración de dehído oxidacional, por ejemplo, plata
de cloruro de oro 1 ml
metenamina, Gridley, Bauer-Feulgen, etc. En secciones Agua destilada 49 ml
por los métodos MSB o Azan tricrómico, la membrana
Solución común de color verde
basal se tiñe intensamente por la molécula más grande,
claroVerde claro SF (amarillento) 1g
el tinte ácido.
Método de microondas de metenamina plata Solución verde claro de trabajo
Solución madre de color verde claro 10 ml
Este método delinea las membranas basales Agua destilada 50 ml
glomerulares. La plata metenamina demuestra el
componente de carbohidratos de las membranas basales Método
al oxidar los carbohidratos a aldehídos. Los iones de 1. Desparafinar las secciones y rehidratar en agua
destilada.
plata del complejo metenamina-plata se unen primero a
2. Coloque las secciones en una solución de ácido periódico al 1%
los componentes de carbohidratos de la membrana basal
durante 15 minutos a temperatura ambiente.
y luego se reducen a plata metálica visible por los grupos
3. Enjuague con agua destilada.
aldehído. La tonificación se realiza con cloruro de oro y la
4. Coloque los portaobjetos (cinco) en un frasco Coplin de plástico
plata no reducida se elimina con tiosulfato de sodio. Se
que contenga 50 ml de solución de trabajo de metenamina.
recomienda el uso de un horno microondas para el Coloque sin apretar el tapón de rosca y colóquelo en el horno de
método y la técnica debe seguirse exactamente para microondas, y coloque un frasco Coplin de plástico sin cerrar
obtener resultados óptimos. El método siguiente es para que contenga exactamente 50 ml (medidos) de agua destilada
cinco diapositivas. Nota: si no tiene cinco diapositivas, en el horno. Cocine en el microondas a máxima potencia
incluya diapositivas en blanco pero no use más de cinco. durante exactamente 70 segundos (consulte la Nota 2). Retire
ambos frascos del horno, mezcle la solución con una pipeta
Pasteur de plástico y deje reposar. Compruebe los portaobjetos
con frecuencia hasta lograr la intensidad de tinción deseada.
Esto llevará aproximadamente de 15 a 20 minutos.
Método de microondas ácido-metenamina plata periódica

5. Enjuague los portaobjetos en agua destilada calentada.
para membranas de sótano (Brinn 1983; Carson 1997)
6. Tono de secciones en cloruro de oro al 0.02% durante 30
Fijador
segundos.
Se prefiere formalina tamponada neutra al 10%. No se
7. Enjuague los portaobjetos en agua destilada.
recomiendan los fijadores que contienen mercurio.
8. Trate las secciones con tiosulfato de sodio al 2% durante 1
Secciones minuto.
Corte de tejido procesado con parafina a 2 "m. 9. Lavar con agua del grifo.
10. Contratinción en la solución verde claro de trabajo Fibroblastos

para, 11/2 minutos.
11. Deshidratar con dos cambios cada uno de 95% y El fibroblasto es la célula responsable de la
alcohol absoluto. producción de las fibras colágenas, y
12. Limpiar con xileno y montar con resina sintética. probablemente también la sustancia intercelular
Resultados
amorfa, que une las fibras. Muchos autores se
Membrana basal negro
refieren a la célula secretora activa joven como
Fondo verde fibroblasto y reservan el término fibrocito para la
Si no se utiliza un horno de microondas, sustituya las
etapa de desarrollo no secretora más antigua. Las
siguientes soluciones y tiempos de tinción: dos etapas se pueden distinguir fácilmente
examinando las células. En el fibroblasto activo en
Solución de plata de metenamina
forma de huso, el núcleo contiene un nucléolo
Solución madre de metenamina plata 50 ml
prominente y está rodeado por abundante
Bórax, 5% 5 ml
citoplasma ligeramente basófilo; el fibrocito de
Precaliente la solución y tiñe los portaobjetos a 56–60 ° C durante
forma fusiforme, aún más delgado, tiene un núcleo
40–90 minutos.
aplanado ovoide con escasa cromatina y sin
Solución de cloruro de oro al 0,2%
nucleolo, y el citoplasma es difícil de distinguir.
Cloruro de oro, solución al 1% 10 ml
Notas
una. Se puede obtener una tinción más nítida de la
membrana basal y menos tinción de fondo con el uso
Células grasas
del horno de microondas para técnicas de plata.
B. La temperatura es crítica y debe estar justo por debajo de la
ebullición, o aproximadamente 95 ° C, inmediatamente Entre las células que se diferencian de la célula
después de sacarla del horno. Cada horno debe calibrarse mesenquimatosa, las células grasas son excepcionales
para el tiempo necesario para alcanzar la temperatura porque su función principal no es la de producción de
correcta. sustancias intercelulares o de mecanismos de defensa, sino
C. Esta es una mancha difícil de realizar correctamente. La la de almacenamiento. El primer signo de desarrollo de una
membrana basal glomerular debe aparecer como una línea
célula adiposa es la acumulación dentro de su citoplasma de
negra continua. Detener la impregnación de plata
pequeñas gotas de material lipídico. Estos aumentan
demasiado pronto resultará en una tinción irregular o
gradualmente de tamaño hasta que la célula pierde su
interrumpida. La aplicación de demasiada contratinción
enmascarará la mancha plateada y disminuirá el contraste. forma anterior y aparece como un objeto hinchado con el
núcleo forzado hacia un lado.
Tejidos conectivos
Células del tejido conectivo
Las características físicas de las células y las sustancias
intercelulares varían considerablemente y se pueden
Los tejidos conectivos consisten en un marco no vivo en el
dividir en grupos, según la proporción de células a
que las células funcionan y viven. El componente celular es
sustancia intercelular, y los tipos de células y sustancia
un aspecto importante de este grupo de tejidos. La célula
intercelular:
madre de toda la serie de tejidos conectivos es la célula
mesenquimatosa indiferenciada. A partir de esto se
• tejido areolar
desarrollan muchas células variadas, cada una con su • tejido adiposo
función diferente. • tejido conjuntivo mixoide

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Incrustación de plástico para

durante la década de 1950 proporcionó mejores resultados y

se utilizaron ceras de éster extremadamente duras con detalle en el Capítulo 16.

un éxito limitado. No eran adecuados para estudios

© 2013 Elsevier Ltd

detección de algún cambio histológico o citológico sutil,

aproximadamente 2! M ha conducido a un diagnóstico polimerización y se produce al unir moléculas para producir

delgadas de aproximadamente 3! M. Como resultado, las químicos utilizados en la formulación de plásticos se

se emplea un plástico como medio de inclusión. fundamental de componentes particulares, a continuación

Los patólogos con experiencia en el uso de la se analiza un esquema.

microscopía electrónica saben desde hace mucho

Para un observador experimentado en su

qué secciones se pueden teñir. Se puede lograr una

para desparafinar secciones de parafina. Está fuera del

2. Deshidratar con etanol al 70%, 90% y 100%. Para un

2-butoxietanol 16 ml 5. Polimerice a temperatura ambiente, colocando el molde

A continuación, se sella la cámara. tejidos se pueden tomar directamente en varios cambios de la

Programa de procesamiento e incrustación modificado para el

Fijación Procesamiento e incrustación

el sólido se disuelve completamente) durante 1 hora, Notas

LR White generalmente se suministra como una solución

Solución de infiltración Procesamiento e incrustación

durante 1 hora. la polimerización debe ocurrir en 15-20 minutos.

4. Infiltrar en un cambio adicional de solución de infiltración durante la

página 133, entonces esto es menos probable. El uso de

B. El procesamiento se logra mejor si las muestras se agitan

propósitos de rutina, las secciones de 2 a 3 µm son satisfactorias y pueden

recogerse con un par de pinzas finas. Las secciones de GMA se aplanarán

inmediatamente al entrar en contacto con el agua a temperatura ambiente, y si

se usa un baño de agua, las secciones se pueden recoger en portaobjetos

Tinción inmunohistoquímica en técnica de intensificación. Aunque el procedimiento se

En los últimos años se ha introducido en la polimerización, y luego se retiran e irradian a temperatura

Acetarin, J.-D., Carlemalm, E., Villiger, W., 1986.

Introducción Una teoría general de la tinción.

© 2013 Elsevier Ltd

Interacciones Ejemplos prácticos donde el factor es importante

Interacciones solvente-solvente Interacciones mancha-mancha

Números y afinidades de los sitios de unión.

CH3 CH3 Ambos factores influyen en la tinción. Sin embargo, en ausencia

Las afinidades del tejido de tinción y el número de sitios de

La comprensión de los sistemas de tinción a menudo requiere

de mielina con luxol fast blue. En tales procedimientos, una

Las geometrías más complejas pueden originarse en las

colágeno. Estos efectos suelen ser más marcados en las secciones de

reactivo de Schiff, se comportan de manera muy parecida a como lo

hacen en parafina o criosecciones, aunque tiñen un poco más

Categorías de términos Ejemplos de términos (y de tintes)

• Considere si tiene las habilidades y los conocimientos de vidrio contaminado.

tinte en recipientes a prueba de luz.

• El tinte o la solución de tinte no son los esperados en

• La naturaleza de la tinción es inusual. Ejemplo de caso: si la 79–93.

Histotechnology 27, 23-28. tejidos incluidos en metacrilato de glicol. Journal of

Lyon, H., 1991. Teoría y estrategia de Revista Internacional de Citología 1, 211-255.

Pearse, AGE, 1968. Histoquímica, teoría y

Las eosinas son colorantes de xanteno y los siguientes

susceptibles de diferenciación sutil como la eosina y generalmente son menos

adecuada, para distinguir entre el citoplasma de generalmente son menos valiosos.

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Este es un proceso lento, que a veces tarda de 3 a 4 meses,