Informe 7 - Microbiología General

Práctica # 7: Curva de crecimiento
Presentado por:
Equipo 6
Laura Nataly Romero Fraile - lromerofr@unal.edu.co
Marilyn Vanessa Rizo Peñaranda - mrizo@unal.edu.co
Microbiología general
Grupo 2
Presentado a:
Ph.D. Martha Raquel Fontanilla Duque
Laura Daniela Bonilla Velásquez
Margelly Andrea Bastidas Pardo
Universidad Nacional de Colombia

Facultad de Ciencias, Departamento de Farmacia
Bogotá D.C., Colombia
2022 - 2
Curva de crecimiento
Jueves, 06 de Octubre de 2022
2022 - 2
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Índice
Resumen 1
Abstract 1
Introducción 1
Objetivos 2
Marco teórico 2
Parte experimental 5
Materiales 5
Procedimiento 6
Resultados y discusión 7
Cuestionario 10
Conclusiones 22
Anexos 23
Bibliografía 24
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Resumen
En este informe se evalúan las etapas de crecimiento de E. coli en medio de cultivo líquido y
se estudia el conteo de unidades formadoras de colonia utilizando la técnica de dispersión en
plato; también se analizan las variaciones de pH respecto al tiempo de vida del cultivo y el
número estimado de microorganismos presentes utilizando la absorbancia.
Palabras clave: Unidades formadoras de colonia, curva de crecimiento, conteo de bacterias.
Abstract
In this report, the growth stages of E. coli in liquid culture medium are evaluated and the
count of colony-forming units is studied using the plate dispersion technique; pH variations
are also analyzed with respect to the life time of the culture and the estimated number of
microorganisms present using the absorbance.
Keywords: Colony forming units, growth curve, bacteria count.
Introducción
E. coli es una bacteria Gram negativa caracterizada por su corto tiempo de generación
(aproximadamente 20 minutos), que generalmente se encuentra en el intestino de los
organismos de sangre caliente; en esta práctica se evalúa su crecimiento en un medio líquido
que posteriormente se diluye para realizar un conteo estimado de UFC; esto se realiza con el
objetivo de estudiar cada una de las fases de vida bacteriana, iniciando con la fracción lag
donde se adapta al medio, luego, entra en la fase de crecimiento exponencial donde duplica el
tamaño poblacional, después, una fase estacionaria donde se empieza a agotar los nutrientes
y la bacteria detiene la división celular, y, finalmente, la fase de muerte programada.
Este laboratorio permite comparar los resultados experimentales de las curvas de crecimiento
con las establecidas en la literatura y notar que cuentan con sus diferencias, hecho que
proporciona las bases para cuestionar los factores que influyen en el desarrollo y crecimiento
de bacterias, así como el número de las mismas presentes en un área determinada.
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Objetivos
● Analizar y estudiar las fases de crecimiento de E. coli en un medio de cultivo líquido
y plantear los factores que influyen en su desarrollo.
● Realizar un conteo de UFC en placas sembradas previamente con la técnica de
dispersión.
Marco teórico
El proceso típico para la reproducción bacteriana es la fisión binaria, esta se diferencia de la

mitosis en eucariotas porque en la mitosis se busca sustituir las células antiguas por las
nuevas; y en la fisión binaria se agregan más microorganismo a la población hasta crecer de
manera exponencial o hasta que agoten los nutrientes del medio (Fisión Binaria Bacteriana
(Artículo), n.d.)
Las células bacterianas generalmente tienen un solo cromosoma circular que yace en el
nucleoide; las enzimas de replicación comienzan a copiar el ADN en un punto en el
cromosoma llamado origen de replicación (ORI), a medida que la replicación continúa, los
dos orígenes o extremos (5’ a 3’) se mueven hacia los extremos opuestos de la célula y tiran
del resto del cromosoma junto con ellos. La célula también se alarga y aporta a la separación
de los cromosomas recién formados, este proceso continúa hasta que se copia el cromosoma
entero y las enzimas de replicación se encuentran en el lado opuesto; una vez que los
cromosomas se han movido a los extremos opuestos y despejado el centro de la célula, puede
ocurrir la división del citoplasma. En este punto, la membrana se hunde formando un septo o
nueva pared de división en el centro de la célula; por último, el septo se divide y las dos
células se separan para continuar sus vidas como bacterias individuales (Fisión Binaria
Bacteriana (Artículo), n.d.)
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Figura 1. Pasos de la fisión binaria en bacterias.

Fuente. (Fisión Binaria Bacteriana (Artículo), n.d.).
La reproducción no se realiza infinitamente, sino que depende de condiciones externas como

temperatura, presión, nutrientes y pH adecuados, es por esto, que las bacterias experimentan
distintas fases a lo largo de su vida, siendo estas:
En primer lugar, la fase de adaptación al medio o fase lag donde se producen las enzimas
necesarias para el posterior crecimiento, en esta fracción no hay incremento en el número de
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células, pero hay gran actividad metabólica, aumento en el tamaño individual de las células,
en el contenido proteico, ADN y peso seco de las células (Reproducción Y Crecimiento
Microbiano, n.d.).
Luego, la fase logarítmica o exponencial, donde el microorganismo crece exponencialmente,
es decir, que cada vez que pasa un tiempo de generación la población se duplica. Bajo
condiciones apropiadas la velocidad de crecimiento es máxima. Los tiempos de generación
varían ampliamente entre los microorganismos, algunos crecen rápidamente y presentan
tiempos de generación de unos 30 minutos y otros tienen tiempos de generación de varias
horas o incluso días, específicamente para E. coli son alrededor de 20 minutos (Reproducción
Y Crecimiento Microbiano, n.d.).
Posteriormente, viene la fase estacionaria, que se presenta en cultivos sembrados en
recipientes cerrados donde las limitaciones del crecimiento ocurren ya sea por agotamiento de
algún nutriente esencial, por acumulación de productos tóxicos, porque se alcance un número
de células elevado para el espacio disponible o por una combinación de las causas anteriores
(Reproducción Y Crecimiento Microbiano, n.d.).
Por último, entra la fase de muerte programada si la incubación continúa después de que una
población microbiana alcanza la fase estacionaria; las células pueden seguir vivas y continuar
metabolizando, pero va a comenzar una disminución progresiva en el número de células
viables y cuando esto ocurre se dice que la población ha entrado en fase de muerte
(Reproducción Y Crecimiento Microbiano, n.d.).
Figura 2. Curva teórica de crecimiento microbiano.

Fuente. (Labster Theory, 2021).
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Para el conteo de UFC existen diversas técnicas, pero en este caso se recurrió al conteo
directo empleando un contador de colonias donde se posicionaron las placas y se marcaron
una a una las colonias observables y separables a simple vista, este método permite
cuantificar las células viables; se define como célula viable, aquella que es capaz de dividirse
y forma una progenie. En este procedimiento se realizan diluciones seriadas de la muestra y
se inoculan pequeños volúmenes conocidos, de cada una de las diluciones, en placas de Petri
conteniendo un medio sólido adecuado estéril y se extiende con una varilla de vidrio (método
de siembra en placa por extensión o diseminación), luego se incuban en las condiciones
óptimas hasta que aparezcan las colonias correspondientes. Se asume que cada colonia
proviene de la división sucesiva de una sola célula, conociendo el volumen sembrado y la
dilución de la cual proviene y contando el número de colonias en la placa correspondiente se
puede calcular el número de células viables en la muestra. Debido a que es difícil saber si una
sola bacteria dio origen a una colonia, se expresa usualmente el número de células viables
como unidades formadoras de colonias (UFC), se seleccionan solo las placas que tengan
menos de 300 colonias (Reproducción Y Crecimiento Microbiano, n.d.).
Figura 3. Técnica de siembra por extensión.

Fuente. (MANUAL DE LABORATORIO DE TÉCNICAS MICROBIOLÓGICAS - PDF
Descargar Libre, 2011).
Parte experimental
Materiales
● Matraz Erlenmeyer de 500 mL. ● Tubos 16×150 tapa rosca.
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● Tubos 13×100. ● Agitador.

● Pipetas de 1 mL. ● Contador de colonias.
● Agar BHI. ● Incubadora.
● Asa Drigalsky. ● Pipeteador.
● Espectrofotómetro.
Procedimiento
En primer lugar, se inocularon 10 mL del cultivo primario de E. coli en el matraz donde se

tenían 90 mL del cultivo líquido. Se dejó unos minutos en el agitador a 150 rpm a 37°C y se
incubó a esta misma temperatura. El tiempo correspondiente para el equipo de trabajo fue T 3,
es decir, las diluciones 10-4, 10-5, 10-6, 10-7, 10-8, 10-9, estas se llevaron al espectrofotómetro
para medir su absorbancia.
Se tomó una alícuota de 3 mL para realizar la siembra por extensión en Agar BHI y se dejó
por dos días en incubación; una vez transcurrido el tiempo, se realizó el recuento de UFC en
el contador de colonias.
Figura 4. Proceso de conteo de UFC en placa.

Fuente. Autores del informe.
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Resultados y discusión
Los datos se agruparon y organizaron en tablas incluyendo la información de todos los
estudiantes de la asignatura:
Tabla 1. Datos obtenidos de la práctica.

Tiempo Absorbancia 540 UFC/mL Log10 UFC/mL

nm
T0 0,010 55.000.000 7,74036269
T1 0,013 1.015.000.000 9,00646604
T2 0,034 1.210.000.000 9,08278537
T3 0,029 350.000.000 8,54406804
T4 0,036 47.000.000.000 10,6720979
T5 0,034 43.500.000.000 10,6384893
T6 0,026 2.100.000.000 9,32221929
T7 0,025 Incontable Incontable
NOTA: La absorbancia presentada corresponde a la dilución 10-1 en todos los tiempos.

La fórmula empleada para hallar UFC/mL es:
¿ colonias × factor de dilución

UFC /mL=
mL de lamuestra
Siendo el número de colonias la cantidad obtenida del conteo; el factor de dilución el inverso
de la dilución (por ejemplo, si la dilación es 10 -4 el factor de dilución será 104), y, los mL de
la muestra el inóculo correspondiente a 0,2 mL.
En primer lugar, se tiene la gráfica de Log 10 UFC/mL vs. Tiempo (Figura 5) donde se
evidencia el comportamiento de la población de E. coli como un microorganismo de
crecimiento rápido, cumpliendo con la literatura donde se plantea que su tiempo de
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generación es muy corto (alrededor de 20 minutos); sin embargo, no se logra observar la fase
lag en la gráfica probablemente porque la bacteria se adaptó rápidamente al medio en el que
fue sembrada o el tiempo de diferencia entre la toma de muestra por cada grupo de trabajo
fue muy corto, esta tambien podria ser la razón por la que no se evidencia de manera
detallada la fase exponencial aunque sí se puede distinguir crecimiento continuo desde T 1
hasta T5 con una ligera variación en T4. Por su parte, la fase estacionaria podría entreverse
entre T5 y T6 al hallar una curva casi paralela al eje x, y, por último, se puede intuir la fase de
muerte desde T6 en adelante debido a la pendiente negativa que presenta.
La ecuación polinómica de grado 6 que mejor se ajusta a la curva es:
y=0,0342 x 6−0,8087 x 5 +7,4526 x 4−33,842 x 3+78,625 x 2−86,59 x +42,869
Con R2 = 1.
Figura 5. Gráfica de Log10 UFC/mL vs. Tiempo.

La siguiente gráfica se refiere a Gráfica de absorbancia 10-1 vs. Tiempo (Figura 6) que se
fundamenta en la relación de la biomasa bacteriana con una magnitud física llamada
absorbancia de luz. Para estas determinaciones se utiliza un espectrofotómetro, en el cual la
luz atraviesa un tubo conteniendo el cultivo bacteriano; el cambio entre la intensidad de luz
que incide en el cultivo (Io) y la transmitida (I) se registra en el espectrofotómetro como
absorbancia (A) o densidad óptica (D.O.), valor derivado del log del cociente entre Io y la de
la luz transmitida por la suspensión:
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I0
A=log
I
A medida que la concentración celular aumenta, el cultivo se hace más turbio y se reduce la
cantidad de luz transmitida que alcanza la célula fotoeléctrica. Esta reducción de la intensidad
de luz transmitida es consecuencia de la difracción de la luz por parte de las células. Sin
embargo, la absorbancia no es una medida directa del número de células (Capítulo 5:
Caracterización Microbiológica, n.d.).
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y=9E-05 x −0,0024 x + 0,0259 x −0,139 x + 0,3834 x −0,4932 x +0,2351
Con R2 = 0,9547.
Figura 6. Gráfica de absorbancia 10-1 vs. Tiempo.

Finalmente, en la Figura 7 se observa la gráfica de pH. vs. Tiempo donde se evidencia el

descenso de este valor a medida que la población crece y eventualmente muere; el pH óptimo
de crecimiento de E. coli es 7,2 aunque algunas cepas son capaces de proliferar en alimentos
ácidos, incluso en pH de 4,4 (Álvarez Blanco, 2019).
El rango de los datos fue [7,07 ; 7,47] y en promedio, el pH obtenido fue 7,31, un valor
ligeramente mayor al de la literatura.
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y=−0,0008 x 6 +0,0217 x 5−0,24 x 4 +1,3257 x3 −3,7932 x 2 +¿
5,1686 x+ 4,8975
Con R2 = 0,9932.
Figura 7. Gráfica de pH vs. Tiempo.

Cuestionario
1. ¿Cuáles son las rutas bioquímicas de obtención de energía de las bacterias aerobias y
anaerobias?
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Figura 8. Diferenciación de distintos procesos de digestión que puede llevar

una bacteria aerobia o anaerobia.
Fuente. [8]
Rutas bioquímicas de obtención de energía de las bacterias anaerobias

Las bacterias anaerobias cuentan con un metabolismo que genera su energía a partir de
sustancias que carecen de oxígeno, lo hacen usualmente a través de procesos de
fermentación, aunque en ocasiones, como en caso de bacterias que se encuentran en grietas
hidrotermales marinas a grandes profundidades, lo hacen mediante reacciones que emplean
compuestos químicos inorgánicos.[1]
- Procesos metabólicos de las bacterias anaerobias
El proceso fermentativo de las bacterias anaerobias comprende una serie de procesos, que
interactúan entre sí, en una serie de reacciones metabólicas en carencia de oxígeno,
haciendo parte importante de los ciclos biogeoquímicos del carbono, nitrógeno y azufre,
entre otros, estos procesos metabólicos se han divido en 3 etapas principales: 1) hidrólisis y
fermentación, 2) acetogénesis y 3) metanogénesis; la primera etapa involucra la hidrólisis
de sólidos insolubles, es decir partículas orgánicas como celulosa o hemicelulosa, o coloides
orgánicos (proteínas), en compuestos solubles simples que pueden ser absorbidos a
través de la pared celular, para que posteriormente, dichas moléculas hidrolizadas sean
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catalizadas por bacterias fermentativas en alcoholes y ácidos grasos, teniendo como

resultado, la producción de hidrógeno y dióxido de carbono. Luego, durante la
acetogénesis, se produce ácido acético a través de la oxidación de ácidos grasos de cadena
corta o alcoholes o a través de la reducción del CO 2, usando hidrógeno como donador de
electrones para la reacción. El último paso que corresponde a la metanogénesis, que es
llevada a cabo por arqueas, las cuales obtienen su energía de la conversión de un número
restringido de sustratos a metano.[1]
La digestión anaeróbica es una fermentación microbiana en ausencia parcial o total de
oxígeno que da lugar a una mezcla de gases, en los cuales principalmente se encuentra el
metano y el dióxido de carbono. Los procesos en donde las bacterias anaerobias hacen
degradación se llevan a cabo en ausencia de oxígeno. Los microorganismos trabajan
en serie o grupo para degradar la materia orgánica a través de etapas sucesivas, cada una
desencadenando la siguiente. Los microorganismos anaerobios de importancia clínica
obtienen principalmente su energía mediante la utilización de las vías fermentativas,
en donde los compuestos orgánicos como los ácidos y alcoholes, entre otros, sirven
básicamente como aceptores finales de electrones.[1]
Bacterias sulfato reductoras

Las bacterias sulfato reductoras son organismos anaerobios que pueden utilizar
los sulfatos como aceptores finales en la respiración, reduciéndolo sin asimilarlo. Son
comunes en entornos anaeróbicos en los que ayudan en la degradación de la materia
orgánica.[1]
Hidrólisis
La hidrólisis es la descomposición biológica de polímeros orgánicos en moléculas más
pequeñas como monómeros y dímeros, capaces de atravesar la membrana celular, lo cual se
lleva a cabo por medio de enzimas hidrolasas, que son capaces de solubilizar la materia
orgánica y romper enlaces específicos con ayuda de agua para poder ser utilizadas. [1] La
degradación anaerobia principalmente se da en polímeros como celulosa y hemicelulosa,
con la participación de enzimas celulasas.[1]
Dentro de las bacterias anaerobias, que participan en las fases de hidrólisis y
acidogénesis, se encuentran Peptostreptococcus, Propionibacterium, Bacteroides,
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Micrococcus y Clostridium que interactúan con algunas bacterias de la familia

Enterobacteriaceae.[1]
Fermentación anaerobia
La fermentación anaeróbica incluye un complejo número de microorganismos con
diferentes características y capacidades, durante el proceso de producción del metabolito
los productos finales son sustancias orgánicas, por ejemplo, ácido láctico, ácido
propiónico, ácido acético, butanol, etanol y acetona. En los procesos anaerobios los
microorganismos producen mucho menos energía que en los aerobios, y para suplir sus
necesidades de energía metabolizan una mayor cantidad de azúcares y por consiguiente
elaboran una mayor cantidad de metabolitos.[1]
En esta etapa, la fermentación como paso siguiente a la hidrólisis, el material orgánico
soluble es transformado en acetato, ácidos grasos de cadena corta, alcoholes, hidrógeno y
dióxido de carbono. Las bacterias anaeróbicas fermentativas utilizan rutas catabólicas de
polisacáridos, aminoácidos y glicerol para la producción de glucosa, la cual puede ser
utilizada en las rutas de fermentación alcohólica, láctica y acética. Como resultado de esta
fermentación se obtienen alcoholes y ácidos grasos.[1]
Algunos tipos de fermentación
- Fermentación alcohólica.
Es un proceso biológico que se lleva a cabo en ausencia de O 2, originado por la actividad
de algunos microorganismos. Produce etanol a partir de glucosa, aunque otras bacterias
también producen alcohol, elaborado por otras vías. La fermentación alcohólica es un proceso
biológico de fermentación en plena ausencia de aire (O 2), originado por la actividad de
algunos microorganismos que procesan los hidratos de carbono (por regla general
azúcares de tipo hexosa: como por ejemplo la glucosa, la fructosa, la sacarosa para obtener
como productos finales: un alcohol en forma de etanol, dióxido de carbono (CO 2) en forma
de gas y unas moléculas de ATP que consumen los propios microorganismos en su
metabolismo celular energético anaeróbico.[1]
- Fermentación heteroláctica.
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En esta fermentación, su producto final, no es exclusivamente el ácido láctico como

lo es la fermentación homoláctica. En este tipo de fermentación se pueden producir otros
productos finales como ácido acético y ácido fórmico generados por bacterias del género
Bifidobacterium. Las bifidobacterias son un grupo predominante de la microflora del
colon que puede representar hasta el 25% del número total de bacterias presentes. Debido
a su naturaleza heterofermentativa, las bifidobacterias pueden producir ácido láctico y
etanol, así como varios ácidos grasos de cadena corta tales como ácido acético y ácido
fórmico.[1]
- Fermentación acetona–butanol.
Es una variación de la fermentación ácido mixta, en la que también se forman butanol,
etanol, acetona e isopropanol, esta es una característica de algunas especies del género
Clostridium. La ruta metabólica para la producción de acetona-butanol-etanol está dada
en dos diferentes fases, pero que tienen ciertas características de la fermentación que son
nombradas comúnmente como fases de acidogénesis y solventogenesis. La primera fase
está comprendida por la formación de ácido acético, butírico y ATP durante el crecimiento
exponencial de las células. A esta fase le sigue otra donde el crecimiento va a ser
estacionario, es en esta parte del proceso en que la solventogenesis toma lugar, los ácidos son
asimilados, y la acetona-butanol-etanol aparece como metabolitos secundarios.[1]
- Fermentación propiónica.
Los productos principales de este tipo de fermentación son ácido propiónico, ácido
acético, ácido succínico y dióxido de carbono, como se muestra en la Figura 5. Es
característica de las bacterias del género Propionibacterium, Veillonella y Clostridium
propionicum, que pueden producir ácido propiónico utilizando el ácido láctico como
sustrato, y algunas también a partir de polialcoholes, aminoácidos y otros ácidos orgánicos
distintos al ácido láctico. Los mecanismos de la fermentación propiónica de las hexosas se
hace de dos maneras:[1]
Hexosas → ácido láctico → ácido propiónico
Hexosas → ácido pirúvico → ácido propiónico
Acetogénesis
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Esta es una fase en la cual se aceleran los procesos metabólicos bacterianos, con
transformación enzimática o hidrólisis, de lípidos, polisacáridos, proteínas y ácidos
nucleicos, en otros compuestos que serán utilizados como fuentes de energía y cómo
transformación a carbono celular.[1]
En la acetogénesis, los ácidos grasos volátiles se convierten en ácido acético, dióxido
de carbono e hidrógeno. El ácido acético es producido por dos diferentes mecanismos:
acetogénesis por hidrogenación, en la cual se produce acetato como producto final de la
reducción de dióxido de carbono más hidrógeno y la acetogénesis por deshidrogenación
en donde las bacterias son inhibidas por pocas cantidades de oxígeno (O2) y por lo
tanto solo sobreviven en asociaciones con microorganismos que consumen hidrógeno como
las bacterias homoacetogénicas (fermentación láctica) y bacterias sulfato reductoras.[8]
Dentro de los géneros más sobresalientes de las bacterias homoacetogénicas se
encuentran Clostridium aceticum, Clostridium formicoaceticum y Acetobacterium
woodii.[1]
Metanogénesis
La metanogénesis es la etapa final de la digestión anaerobia. La formación de metano se da a
partir de dos rutas principales, la primera, es la acetoclás-tica en la cual los
microorganismos crecen principalmente en su sustrato (acetato) y la segunda, es la
hidrogeno trófica en donde los microorganismos crecen en sustratos como hidrógeno y
dióxido de carbono. Su metabolismo se caracteriza por integrar las vías biosintéticas y
bioenergéticas para la producción de ATP, además en ausencia de hidrógeno, se oxidan
compuestos para la obtención de electrones.[1]
Rutas bioquímicas de obtención de energía de las bacterias aerobias

Respiración aeróbica
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Figura 9. Rutas bioquímicas en bacterias aerobias.

Fuente. [2]
Durante la respiración, el aceptor final de electrones es el compuesto que recibe e- al final de

la cadena transportadora de electrones. Las bacterias aerobias respiran O2, las aerobias
respiran utilizando otros compuestos y las bacterias facultativas pueden usar O 2 u otros
compuestos.[2]
La glucolisis es un proceso para obtener energía, la hacen bacterias aerobias, anaerobias y

facultativas; consiste en la ruptura de glucosa (un azúcar con 6 carbonos) en piruvato (2
moléculas con 3 carbonos) para obtener energía quitándole e- y formando 2 moléculas de
ATP y dos de NADH+H.[2]
La enzima piruvato deshidrogenasa, combina piruvato con coenzima-A formando NADH,
CO2 y acetil coenzima A (acetil-CoA) que se aprovecha en el Ciclo de Krebs que es una serie
de reacciones en las que participan 6 enzimas que oxidan acetil-CoA y la convierten en
dióxido de carbono, 3 NADH +3H y otras moléculas. Los e- atrapados en los NADH y los
protones (H+) producidos anteriormente se utilizan en la fosforilación oxidativa y en la
fuerza protón motriz, que son otras formas celulares de obtener energía. Los e- pasan por una
serie de reacciones conocida como cadena transportadora de electrones, que en el caso de la
respiración aerobia, está integrada por: deshidrogenasa, quinonas, citocromos y oxidasa
terminal que pasan los e- al O2. Simultáneamente se bombean H+ hacia fuera de la célula; tal
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como el agua acumulada en una presa genera energía al pasar por compuertas; los H+
acumulados producen energía (en forma de ATP) a su paso por la ATP-sintasa hacia adentro
de la bacteria.[2]
2. ¿Qué es un microorganismo indicador de calidad y cuáles son los más comunes?

Los microorganismos indicadores son organismos, o sus productos metabólicos, cuya
presencia en los alimentos se utiliza para evaluar el proceso de fabricación y la calidad del
alimento o determinar la vida útil del mismo, como está especificado en el capítulo 1 del
Decreto N° 315/ 994.[3]
Los microorganismos indicadores advierten un manejo inadecuado o contaminación que
incrementan el riesgo de presencia de microorganismos patógenos en alimentos. La calidad
microbiológica de los alimentos influye en la conservación, vida útil, sobre todo porque los
microorganismos presentes en ellos, pueden ser causantes de enfermedades transmitidas por
alimentos.[3]
Los principales microorganismos indicadores que son determinados en el Laboratorio de
Bromatología son: indicadores de condiciones de manejo o de eficiencia de proceso:
mesófilos aerobios, hongos y levaduras, coliformes totales y Staphylococcus aureus.
Indicadores de “contaminación fecal”: coliformes fecales, E. coli, enterococos, clostridios
sulfito reductores. [3]
3. Realice un paralelo entre eucariotas y procariotas respecto al empleo de rutas

metabólicas por parte de cada uno de éstos microorganismos y especifique en
qué tipo de compartimientos se realizan cada una de ellas?
Aunque las células eucariotas demuestran una diversidad increíble en su forma, comparten
las características fundamentales de su organización celular, arriba resumidas, y una gran
catálisis homogénea en lo relativo a su bioquímica (composición), y metabolismo, que
contrasta con la inmensa heterogeneidad que en este terreno presentan los procariontes
(bacteria en sentido amplio). [4]
Las células eucariotas contienen en principio mitocondrias, orgánulos que habrían adquirido
por endosimbiosis de ciertas bacterias primitivas, lo que les dota de la capacidad de
desarrollar un metabolismo aerobio. Sin embargo, en algunas eucariotas del reino protistas las
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mitocondrias han desaparecido secundariamente en el curso de la evolución, en general

derivando a otros orgánulos, como los hidrogenosomas.[4]
Metabolismo de procariotas
Aspectos importantes:
Algunos procariontes son fotótrofos, porque obtienen su energía del sol. Otros son
quimiótrofos, y obtienen su energía de compuestos químicos. Algunos procariontes son
autótrofos, fijan carbono a partir de CO2. Otros son heterótrofos, obtienen carbono de
compuestos orgánicos hechos por otros organismos. Los procariotas pueden tener un
metabolismo aerobio (que requiere oxígeno) o anaerobio (que no necesita oxígeno), y
algunos de ellos pueden cambiar de una modalidad a otra. Algunos procariontes tienen
enzimas especiales y rutas que les permiten metabolizar compuestos que contienen nitrógeno
o azufre. Los procariontes juegan papeles esenciales en los ciclos de nutrientes en los
ecosistemas.[5]
Figura 10. Clasificación de los procariontes según su metabolismo

Fuente. [6]
Respiración aerobia y anaerobia
Otro aspecto metabólico en el que los procariotas se diferencian y en el que son mucho más
diversos, es su necesidad de oxígeno. Algunos lo necesitan, otros no, y algunos otros pueden
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utilizarlo o no, según su disponibilidad. Los procariontes que necesitan O 2 para llevar a cabo
su metabolismo se llaman aerobios estrictos. Los procariontes que no toleran el O 2 y solo
pueden llevar a cabo metabolismo anaeróbico se llaman anaerobios estrictos. C. botulinum, la
bacteria que provoca el botulismo (una forma de intoxicación por alimentos) cuando crece en
los alimentos enlatados, es un ejemplo de anaerobio estricto. Los anaerobios facultativos usan
el metabolismo aerobio cuando O2 está presente, pero cambian al metabolismo anaerobio si
está ausente. Las bacterias que producen las infecciones por estafilococos y estreptococos son
ejemplos de anaerobios facultativos.[5]
Metabolismo de eucariotas
En algún punto de la evolución, la célula eucariota formó una simbiosis con una bacteria
primitiva, con resultados tan favorables, que ambos seres se fusionaron. Las bacterias
integradas por endosimbiosis a la célula eucariota, pasaron a llamarse mitocondrias. Estos
organelos son los que permiten que la célula tenga un metabolismo aerobio, proveyendo
de energía al metabolismo celular. Algunas células eucariotas realizan fotosíntesis, gracias
a que poseen organelos llamados cloroplastos. Los cloroplastos también habrían surgido
por la endosimbiosis de la célula con las cianobacterias. Si bien existe una gran variedad
de células eucariotas, todas poseen algunos aspectos en común, sobre todo desde el punto
de vista de la organización de núcleo, membrana, organelos, metabolismo etc. En este
sentido, la diferencia es muy marcada si se compara con las células procariotas, donde
existen grandes diferencias entre cada una de ellas.[7]
El catabolismo aerobio está formado por varias rutas metabólicas que conducen
finalmente a la obtención de moléculas de ATP que podrán utilizarse en otros procesos
que requieren aporte energético, como son las rutas del anabolismo. La energía que no se
almacena se disipa en forma de calor. La glucosa y los ácidos grasos que entran en la
célula son degradados, mediante la glucólisis y la β -oxidación respectivamente, a acetil-
CoA. Las proteínas se descomponen en sus aminoácidos constituyentes, formando
diferentes intermediarios. Finalmente, todos ellos entran en el ciclo de Krebs y la cadena
respiratoria, produciendo CO2, H2O y ATP. Las reacciones catabólicas son convergentes ,
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es decir, de moléculas muy diferentes se obtienen unas pocas sustancias sencillas cómo
ácido láctico, urea, CO2, etc.[8]
4. ¿En qué consisten los mecanismos de represión enzimática?

La represión enzimática es el modo por el cual las moléculas represoras impiden la síntesis de
una enzima. En muchos casos, el producto final de una cadena de síntesis (p. ej., un
aminoácido) actúa como un correpresor de retroalimentación al combinarse con una proteína
intracelular aporrepresora. , para que este complejo sea capaz de bloquear la función de un
operador. Como resultado, se evita que toda la operación se transcriba en ARNm y se
suprime la expresión de todas las enzimas necesarias para la síntesis de la enzima del
producto final.[11]
5. ¿En qué consisten los mecanismos de inhibición enzimática?
Figura 11. Inhibición enzimática.

Fuente. [10]
Existen una serie de sustancias, llamadas inhibidores, que inhiben o anulan la acción de los
enzimas sin ser transformados por ellos. Su estudio resulta de gran utilidad a la hora de
comprender los mecanismos de catálisis, la especificidad de las enzimas y otros aspectos de
la actividad enzimática. La inhibición enzimática puede ser irreversible o reversible, esta
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última comprende a su vez tres tipos: inhibición competitiva, acompetitiva y no competitiva.

[9]
Inhibición irreversible
Algunos inhibidores se combinan de modo permanente con el enzima uniéndose

covalentemente a algún grupo funcional esencial para la catálisis con lo que el enzima queda
inactivado irreversiblemente. El estudio de este tipo de inhibidores ha resultado de gran
utilidad para identificar los grupos funcionales esenciales para la catálisis en aquellos
enzimas a los que inactivan. Este tipo de inhibición se conoce también como envenenamiento
del enzima.[9]
Por ejemplo algunos compuestos organofosforados tóxicos llamados venenos nerviosos, que
se utilizan como insecticidas, actúan inhibiendo irreversiblemente al enzima
acetilcolinesterasa, la cual interviene en la actividad del sistema nervioso. Se sabe que estos
compuestos organofosforados inactivan a la enzima formando un enlace éster fosfórico con el
grupo hidroxilo de un determinado resto del aminoácido serina, lo que demuestra que ese
grupo funcional es esencial para la catálisis.[9]
Inhibición reversible
Los inhibidores reversibles se combinan transitoriamente con el enzima, de manera parecida

a como lo hacen los propios sustratos. Algunos inhibidores reversibles no se combinan con el
enzima libre sino con el complejo enzima-sustrato. Se distinguen tres tipos de inhibición
reversible:[9]
● Inhibición competitiva: El inhibidor es una molécula que presenta un cierto

parecido estructural con el sustrato, de manera que puede competir con él por
acceder al centro activo, pero que no posee ningún enlace susceptible de ser
atacado por el enzima . El inhibidor forma con el enzima libre un complejo
enzima-inhibidor de características cinéticas análogas a las del complejo enzima-
sustrato, pero que, lógicamente, no puede descomponerse a continuación para dar
lugar al enzima libre y a los productos.[9]
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● Inhibición incompetitiva: El inhibidor no se combina con el enzima libre ni afecta

a su unión al sustrato, sino que lo hace con el complejo enzima-sustrato dando
lugar a un complejo inactivo enzima-sustrato-inhibidor, que no se descompone
posteriormente para dar lugar a los productos. El inhibidor se coloca próximo al
centro activo situado de tal manera que impide físicamente la salida de los
productos.[9]
● Inhibición no competitiva: El inhibidor puede combinarse con el enzima libre o

bien con el complejo enzima sustrato, interfiriendo en la acción de ambos. Los
inhibidores no competitivos se unen a un lugar del enzima diferente del centro
activo provocando una alteración que dificulta bien la formación del complejo
enzima-sustrato o bien la descomposición de éste para dar lugar a los productos.
La unión con el inhibidor produce dos formas inactivas: los complejos EI y ESI,
ninguna de las cuales puede descomponerse para dar lugar a los productos y a la
enzima libre.[9]
Aunque podría pensarse que los distintos tipos de inhibición estudiados pueden desempeñar
algún papel en la regulación de la actividad enzimática, todo parece indicar que no es así; la
regulación de la actividad enzimática se lleva a cabo mediante mecanismos que no se ajustan
a ninguno de los modelos de inhibición estudiados y que se describirán en el próximo
apartado. El interés del estudio de la inhibición enzimática reside más en su utilidad para
comprender la estructura, mecanismos catalíticos y especificidad de los enzimas, que en una
importancia biológica real.[9]
Conclusiones
Las bacterias son microorganismos que se encuentran en prácticamente todos los espacios
que habita el ser humano, por lo que es de vital importancia conocer sus mecanismos de
supervivencia y etapas de vida; en este último aspecto entra a colación la curva de
crecimiento y los factores que pueden llevar a sus vacaciones comparado con el
comportamiento estandarizado, en esta práctica, estos factores externos fueron el tiempo de
incubación, y la falta de práctica a la hora de ejecutar las diluciones.
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No obstante, los resultados fueron claros y permitieron establecer correlaciones con la curva
patrón, identificando claramente las fases, siendo estas: desde T 1 hasta T5 fase exponencial,
entre T5 y T6 fase estacionaria, y, desde T6 en adelante la fase de muerte.
Por otro lado, se confirmó que el tiempo de generación para E. coli es muy corto, debido a
que en múltiples cultivos sólidos fue imposible contar las colonias debido a que su valor
ascendía a más de 300 UFC, lo que supone una constante fisión binaria de sus células.
Anexos
Figura 12. Cultivos sólidos de cada dilución.

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Bibliografía
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Práctica # 7: Curva de crecimiento

Universidad Nacional de Colombia

El proceso típico para la reproducción bacteriana es la fisión binaria, esta se diferencia de la

Figura 1. Pasos de la fisión binaria en bacterias.

La reproducción no se realiza infinitamente, sino que depende de condiciones externas como

Figura 2. Curva teórica de crecimiento microbiano.

Figura 3. Técnica de siembra por extensión.

● Matraz Erlenmeyer de 500 mL. ● Tubos 16×150 tapa rosca.

● Tubos 13×100. ● Agitador.

En primer lugar, se inocularon 10 mL del cultivo primario de E. coli en el matraz donde se

Figura 4. Proceso de conteo de UFC en placa.

Tabla 1. Datos obtenidos de la práctica.

Tiempo Absorbancia 540 UFC/mL Log10 UFC/mL

T0 0,010 55.000.000 7,74036269

T1 0,013 1.015.000.000 9,00646604

T2 0,034 1.210.000.000 9,08278537

T3 0,029 350.000.000 8,54406804

T4 0,036 47.000.000.000 10,6720979

T5 0,034 43.500.000.000 10,6384893

T6 0,026 2.100.000.000 9,32221929

T7 0,025 Incontable Incontable

NOTA: La absorbancia presentada corresponde a la dilución 10-1 en todos los tiempos.

¿ colonias × factor de dilución

Figura 5. Gráfica de Log10 UFC/mL vs. Tiempo.

Figura 6. Gráfica de absorbancia 10-1 vs. Tiempo.

Finalmente, en la Figura 7 se observa la gráfica de pH. vs. Tiempo donde se evidencia el

La ecuación polinómica de grado 6 que mejor se ajusta a la curva es:

Figura 7. Gráfica de pH vs. Tiempo.

Figura 8. Diferenciación de distintos procesos de digestión que puede llevar

Rutas bioquímicas de obtención de energía de las bacterias anaerobias

catalizadas por bacterias fermentativas en alcoholes y ácidos grasos, teniendo como

Bacterias sulfato reductoras

Micrococcus y Clostridium que interactúan con algunas bacterias de la familia

En esta fermentación, su producto final, no es exclusivamente el ácido láctico como

Hexosas → ácido pirúvico → ácido propiónico

Rutas bioquímicas de obtención de energía de las bacterias aerobias

Figura 9. Rutas bioquímicas en bacterias aerobias.

Durante la respiración, el aceptor final de electrones es el compuesto que recibe e- al final de

La glucolisis es un proceso para obtener energía, la hacen bacterias aerobias, anaerobias y

2. ¿Qué es un microorganismo indicador de calidad y cuáles son los más comunes?

3. Realice un paralelo entre eucariotas y procariotas respecto al empleo de rutas

mitocondrias han desaparecido secundariamente en el curso de la evolución, en general

Figura 10. Clasificación de los procariontes según su metabolismo

4. ¿En qué consisten los mecanismos de represión enzimática?

5. ¿En qué consisten los mecanismos de inhibición enzimática?

Figura 11. Inhibición enzimática.

última comprende a su vez tres tipos: inhibición competitiva, acompetitiva y no competitiva.

Algunos inhibidores se combinan de modo permanente con el enzima uniéndose

Los inhibidores reversibles se combinan transitoriamente con el enzima, de manera parecida

● Inhibición competitiva: El inhibidor es una molécula que presenta un cierto

● Inhibición incompetitiva: El inhibidor no se combina con el enzima libre ni afecta

● Inhibición no competitiva: El inhibidor puede combinarse con el enzima libre o

Figura 12. Cultivos sólidos de cada dilución.

(2018, September 6). INHIBICIÓN ENZIMÁTICA – Instituto CBQ. Instituto CBQ.

Álvarez Blanco, C. (2019, Junio 11). PARÁMETROS CINÉTICOS DE

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