Cultivo celular, criterios y tipos

CITOGENÉTICA

Semana: 5
Sesión: 1

Propósito de la Actividades de
sesión: inicio:
Interpretar y explicar los criterios y Revisión de temas de la unidad.
tipo de cultivo celular. Se realiza preguntas: ¿Para qué
sirve los cultivos celulares? y ¿Cuál
es la composición base de un cultivo
celular?
 Actividades de Cultivo celular
desarrollo:
Es un modelo de estudio in
Explicación del contenido teórico vitro realizado con unas
técnicas que permiten
de la clase. mantener al máximo las
propiedades:

Fisiológicas Bioquímicas Genéticas

Historia de los cultivos celulares

El primer investigador fue Tenían una
M. Burrows
Historia de los cultivos celulares
Wilhelm Roux (1885) que limitación inicial:
descubrió que el
cultivo células de Factores de
Los cultivos no tenían plasma era un
embrión de pollo en crecimiento
medios nutritivos nutriente esencial Factores de
solución salina durante Harrison (1907) Hayflick y
adecuados para la en los medios de crecimiento Carrel Gey et al
días. cultivo médula Eagle (1955) Moorheart
Demostró que las células embrionarias
propagación celular. cultivo, óptimos (1912) (1952)
espinal de anfibio (1961)
podían sobrevivir (en una solución para la propagación
salina)sin requerir la presencia de un de células Demostró que los Comprobó que Establecieron Realizo el primer Comprobaron
organismo. axones se las células una línea celular estudio que los
producen como podían crecer en continua de sistemático de fibroblastos
prolongaciones de cultivo. carcinoma los humanos en
las neuronas. cervical humano requerimientos cultivo mueren
que actualmente nutricionales de tras un número
conocemos las células en limitados de
como “ línea cultivo. divisiones.
celular Hela”.
 Historia de los cultivos celulares Cultivo de
órganos

M. burrows: originario En la actualidad,

Reprogramaron células
del siglo XIX estudio pueden cultivarse * Tejidos adultas en células
las variaciones y en el laboratorio: pluripotenciales
comportamiento * Órganos inducidas alcanzado
Explantes
primarios
* Células aisladas por Takahashi y
Amplia gama de células
Yamanaka en 2006. Tipos de cultivos
celulares
Demostró que las
células animales libres Cultivo
producidas dentro del celular
organismo y bajo el primario
estrés de un
experimento.

Cultivos
histotípicos y
organotípicos

Explantes primarios
Cultivo de órganos
Colocamos un
fragmento de tejido/
Colocamos el órgano órgano: interfase
en un medio de sólido liquido en
interfase líquido soporte de vidrio o
gaseoso, del cual plástico
obtendrá nutrientes y
liberará desechos.
Útil en pequeñas
cantidades de Se adhieren a la
tejido Ej. Biopsias superficie
de piel

Inconveniente:
• La proliferación celular limitada Mantener la estructura
• Se necesita un nuevo explante para características del
cada experimento tejido in vivo y En la periferia
• Difícil cuantificación diferenciar los tipos pueden migrar y
• Cantidad material que se puede celulares. proliferar
cultivar es reducida.
 Cultivo celular primario
Cultivo celular primario: cultivo en suspensión
Se obtiene a partir de
explantes primarios y
suspensiones de
celulas disgregadas Mecánica o Se recolecta en
enzimática un tubo
*Cultivos en suspensión Es el más utilizado
*Cultivos en monocapa
Hay dos tipos de
Se pierden las Eliminar el
cultivo celular
primario
uniones celulares medio de cultivo
mediante
centrifugación

Las células son capaces de Lavar con suero

Poder limitado de proliferación proliferar notablemente fisiológico antes
celular y de expansión (numero hasta que ocupan toda la
limitado de generaciones) superficie, ahí se inhibe la
de la extracción
proliferación. y purificación

Cultivo celular primario: cultivo en monocapa Cultivo celular secundario:

Es la resiembra de otro cultivo:

Las células crecen
adheridas a la pared De cultivos celulares primarias.
del frasco de cultivo.
De líneas celulares estables (células que mantiene sus características de
una forma constante y homogénea a lo largo del tiempo).
Podemos utilizar el
propio frasco para De aquellos que hayan sufrido un fenómeno de transformación (natural
o inducida).
continuar el proceso
de extracción.

Poder limitado de proliferación celular

Línea Celular
Podemos pasar la y de expansión (numero ilimitado de Estable (o
monocapa a un generaciones), inmortalización celular
Continua)
tubo.
 Cultivos histotípicos y organotípicos

Crean una estructura

Cultivos Único tipo celular:
elevada densidad
tridimensional
parecida al tejido
histotípicos celular
original

Cultivos Varios tipos celulares:

muy parecidos a los
Base de la ingeniería
organotípicos originales
de tejidos

Objetivo final; Crear tejidos “in vitro” completamente

funcionales que pueden utilizarse en injertos o trasplantes

Evolución de un cultivo celular Composición de los medios de cultivo

Cultivo Línea celular finita Línea celular
primario continua

• Nutrientes
Número total de células

Subcultivo primario
Subcultivo secundario
• Factores de crecimiento
Escala logarítmica
del número total • Otros componentes
de células crecidas

Senescencia
y muerte

Intervalo entre cultivos

Subcultivos sucesivos

Tiempo de cultivo para una

Explante Semanas en cultivo línea celular hipotética
 Composición de los medios de cultivo Dificultades en la implantación de cultivos en un
organismo vivo
Proliferación

• Nutrientes Diferenciarse en los tipos

celulares deseados
• Factores de crecimiento
• Otros componentes Sobrevivir en el receptor tras
el implante

Integrarse en el tejido
circundante

Funcionar apropiadamente
durante toda la vida del
receptor

No producir daño al receptor

Criterios a tener en cuenta en cultivos Criterios a tener en cuenta en cultivos celulares

celulares
Las células están en continua • Crecen hasta ocupar todo el área
No mezclar nunca dos cultivos diferentes. división durante el cultivo. disponible

No tener mucho tiempo fuera de estufa los

cultivos.
• Agotamiento de los nutrientes del medio.
No invadir campos. • Acumulación de células apoptóticas y/o
Esto puede generar problemas: necróticas.
• Inhibición de la división celular por contacto
Tapar rápidamente los frascos.

• De derecha a izquierda y de arriba a abajo.

Agitación del cultivo sembrado
• Nunca agitar en circulo.
• Pasar un pequeño número de estas a un nuevo
Para transferir las células
recipiente.
Cultivarse mas tiempo, si se transfiere habitualmente • Cultivos adherentes (despegar y pasar)
se evita que envejezcan (situaciones de alta densidad • Cultivos en suspensión (tomar unas pocas y resuspender en medio
celular). fresco)
 Aplicación de los cultivos celulares
Equipamiento para los cultivos celulares
Estudios del metabolismo celular

Estudios del Control del ciclo celular

Farmacología Cultivo de virus Genética

Reproducción asistida, Clonación

Toxicología Agricultura
Animales transgénicos

Diagnóstico de enfermedades (cáncer)

Biología Celular Ganadería
Obtención de anticuerpos y hormonas

Actividad intracelular Medicina

Bioquímica
Productos celulares y tisulares (Medicina
regenerativa)

Equipamiento para los cultivos celulares Ventajas de los cultivos celulares

 Desventajas de los cultivos celulares

Métodos de cultivo mas usados en citogenética Métodos de cultivo mas usados en citogenética
Diagnóstico Muestra Células Tipos de cultivo
Diagnóstico Muestra Células Tipos de cultivo
Diagnostico prenatal Vellocidades Trofoblastos Análisis directo: 15 a 2 hrs de Colcemid;
Aberraciones Sangre Linfocitos Cultivo corto: precoz (9 a 11 semanas coriales Cultivo: Tripsina (0.25% por 30 min.
cromosómicas periférica y Células en suspensión de gestación) Medio: RPMI 1640 + 20% SBF
congénitas cordón Metodología según indicación por 72 a 96 hrs., 37°C, 5% CO2
umbilical
Leucemias Médula ósea Clon Cultivo Directo 25 min:
Mosaicismos Piel Fibroblastos Cultivo largo: 15 días S. Mieloproliferativas neoplásico Medio: RPMI + 10% SBF + colcemid 10%
Aberraciones Restos de Células adheridas: previa digestión con Desordenes linfo y Temperatura ambiente
cromosómicas en abortos tripsina (0.1%) mielodisplásicos
abortos espontáneos y Medio: RPMI 1640+ 20% SBF Trasplantes de medula Cultivo 24hrs:
mortineonatos 37°C, 5% CO2 Medio: RPMI + 20% SBF + Medio condicionado
Diagnostico prenatal Liquido Amniocitos Cultivo largo: 15 días Colcemid (10ug.ml) por 3hrs.
cromosómico (15 a 17 amniótico Células adheridas Neuroblastoma, Tumores solidos Células Cultivo corto: 5 - 8 días
semanas de gestación) Medio: HAM F10, RPMI 1640 Sarcoma de Ewing, tumorales Digestión con tripsina (0.1%) y colagenasa (0.4%)
Amnio Max (Gibco) + 20% SBF. Linfomas Células adheridas y/o suspensión celular en medio
Subcultivos según crecimiento. Meningiomas, otros RPMI, TC 199, MEM, L15 + 10% SBF, 37°C, 5% CO2
37°C, 5% CO2
 Actividades de
Técnicas de cultivo de linfocitos según indicación diagnóstica cierre:
Diagnóstico Condiciones Tratamiento
• Síntesis conjunta.
Confirmar o descartar una Medio: RPMI 1640 Timidina 10-1 M por las ultimas • Se discute sobre las
aberración cromosómica Phitohemoglutinina (PHA) 24 hrs.
congénita (T21, 45X, T13, T18, 0.02% Suero Bobino Fetal aplicaciones de los cultivos
translocaciones, delecciones y (SBF) 20% celulares.
otros) Tiempo: 72 hrs, 37°C

Referencia bibliográfica y de
Metacognición imágenes
• Nussbaum, R. (2016). Thompson & Thompson, Genética en medicina. 8ª ed.
• ¿Qué aprendiste en esta clase? Barcelona. Elsevier. http://bit.ly/38a4NYS
• Cofan, M. y Col (1992). Cultivos celulares: utilidad en la investigación biomédica.
• ¿Cuáles son las dudas Med Clin (Barc) 1992; 98: 782-789.
respecto al tema desarrollado? • Pesini, C. (2019). Caracterización de un modelo in vitro de cultivo celular 3D de
• ¿Qué aportes puedes brindar neuroblastoma para el estudio de inmunoterapia con células NK. (Trabajo de grado).
Universidad de Zaragoza. https://zaguan.unizar.es/record/87457/files/TAZ-TFG-
sobre el tema desarrollado? 2019-2546.pdf
VIDEOS
Cultivo celular: https://www.youtube.com/watch?v=tTFH1ZSMsTg
Cultivos celulares en lugar de experimentación con animales (por impresión 3D) (2015):
https://www.youtube.com/watch?v=4cs0SA24Y2I
Cultivo celular: https://slideplayer.es/slide/10772557/
Simulador CELLUSIM cultivo celular: https://doi.org/10.4995/INRED2018.2018.8714
 Nuestro ADN

Metodología Actitud Resultado

Colaboración Aprendizaje Mentalidad Impacto

Significativa Experiencial Emprendedora Social

CREA IMPACTO POSITIVO Y

TRASCIENDE