Agar Macconkey Sorbitol (CT Smac) : Detección de Escherichia Coli O157
Agar Macconkey Sorbitol (CT Smac) : Detección de Escherichia Coli O157
Agar Macconkey Sorbitol (CT Smac) : Detección de Escherichia Coli O157
FICHA TÉCNICA
AGAR MACCONKEY SORBITOL (CTSMAC)
DETECCIÓN DE ESCHERICHIA COLI O157
1 USO PREVISTO
El agar MacConkey Sorbitol (CTSMAC) es un medio selectivo utilizado para el aislamiento y la diferenciación de Escherichia coli O157 en
agua, leche, productos de carne vacuna y otras preparaciones alimenticias.
2 HISTORIA
El serotipo O157 de Escherichia coli es un serotipo patógeno, identificado por primera vez en 1982 como el agente responsable de la colitis
hemorrágica. Los alimentos de origen animal son la principal fuente de contaminación humana. El tejido de res y cerdo, las aves de corral
y ciertos productos lácteos no pasteurizados han sido implicados en toxiinfecciones relacionadas con Escherichia coli O157. Este
microorganismo también se ha aislado de patatas, sidra de manzana y agua del grifo.
En 1985, Farmer et Davis confirmaron el trabajo de Wells et al. (1983), al demostrar que el serotipo O157 se caracteriza por su incapacidad
para fermentar sorbitol, mientras que más del 80% de las cepas de E. coli son sorbitolpositivas. En 1986, March & Ratnam reforzó el
interés por el uso del agar MacConkeySorbitol para la detección de Escherichia coli O157. En 1991, Chapman introdujo la cefixima para
inhibir Proteus. En 1993, Zadik combinó la acción del telurito de potasio con la de la cefixima. La adición de estos componentes al agar
aumenta la frecuencia de detección de colonias O157 al eliminar un amplio espectro de la microflora secundaria que puede estar presente
en la muestra.
3 PRINCIPIOS
La triptona y el digerido péptico de carne favorecen el crecimiento de Escherichia coli O157.
Los microorganismos sorbitol negativos (sobre todo O157) producen colonias transparentes.
Los microorganismos sorbitol positivos se detectan cuando las colonias se vuelven rojas (bajo la acción del rojo neutro).
La microflora secundaria es inhibida por la asociación entre las sales biliares, el cristal violeta, la cefixima y el telurito de potasio.
Algunas cepas de Escherichia coli O157 son positivas para sorbitol y no se detectarán directamente.
4 COMPOSICIÓN TÍPICA
La composición se puede ajustar para obtener un rendimiento óptimo.
Para 1 litro de medio:
Triptona .................................................. .................................................... .................. 17,0 g Digerido
péptico de Carne ....................... .................................................... ......................... 3,0 g D
Sorbitol ................. .................................................... ............................................... 10,0 g Sales biliares
n°3 ........................................... .................................................... ................... 1,5 g Cloruro de
sodio ......................... .................................................... .............................. 5,0 g Rojo
neutro............ .................................................... ............................................. 30, 0 mg Cristal
violeta.................................................... .................................................... .............. 1,0 mg
Cefixima .............................. ............................. .................................................... .... 0,05 mg Telurito de
potasio....................................... .................................................... ........... 2,5 mg Agar
bacteriológico................................ .................................................... .................. 13,5g
pH de los medios listos para usar a 25 °C: 7,1 ± 0,2.
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Para 50 g de medio base deshidratado BK147
Para un vial de suplemento BS037
Triptona .................................................. .............................17,0 g Digerido (Qs 500 mL)
péptico de carne ............ ..........................................................3,0 g D
sorbitol .............................................. .............................10,0 g Sales biliares Cefixima ............................................. 0,025 mg
n°3 .......... .................................................... ............1,5 g Cloruro de Telurito potásico ............ ...... 1,25 miligramos
sodio ............................... ..................................5,0 g Rojo
neutro ....... .................................................... .............30,0 mg Cristal
violeta ............................... .............................................1,0 mg Agar
bacteriológico .... .................................................... .....13,5g
5 PREPARACIÓN
• Disolver 50,0 g de medio de base deshidratada (BK147) en 1 litro de agua destilada o Reconstitución :
agua desmineralizada. •
50,0 g/L
Lentamente llevar a ebullición, revolviendo hasta su completa disolución. •
Divida en alícuotas de 100 ml (por vial). • Esterilizar en autoclave a 121 °C Esterilización :
durante 15 minutos. • Enfriar y mantener el medio en estado fundido a 15 min a 121 °C
4447 °C. • Reconstituir el suplemento selectivo (BS037) con 5 mL de agua
estéril. • Agitar el matraz o vórtice para obtener la disolución completa, todo el tiempo
evitando la formación de espuma. Suplemento preparación 5 mL
agua estéril
• Agregue asépticamente 1 ml del suplemento selectivo reconstituido (BS037) por vial de 100 ml de medio
base. • Mezclar bien. • Verter en placas de Petri estériles y dejar solidificar sobre una superficie fría.
Añadir a la base:
1mL/100mL
6 INSTRUCCIONES DE USO
• Seque las placas en una incubadora, con las cubiertas parcialmente Inoculación :
retiradas. • Después del enriquecimiento en caldo de triptona de soja modificado con novobiocina (BK150) En la superficie
y después de la separación inmunomagnética, inocular las placas y esparcir los microbilletes. •
Incubar a 37 °C durante 18 a 24 horas. Incubación :
18 h a 24 h a 37 °C
7 RESULTADOS
Escherichia coli O157 forma colonias lisas y transparentes que pueden presentar un halo anaranjado de alcalinización.
Como la especificidad de los medios no es total, las colonias sospechosas deben someterse a pruebas de aglutinación serológica en portaobjetos
con la ayuda de antisueros específicos O157.
Ver ANEXO 1: SOPORTE FOTOGRÁFICO.
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8 CONTROL DE CALIDAD
Medios de base deshidratados: polvo beigerosado, fluido y homogéneo.
Suplemento selectivo : gránulo blanco que, después de la reconstitución, proporciona una solución transparente y límpida.
Medios preparados: agar rojovioleta
Respuesta típica del cultivo después de 21 horas de incubación a 37 °C (NF EN ISO 11133):
9 ALMACENAMIENTO / VIDA ÚTIL
Medios base deshidratados: 230 °C.
CefiximaTelurito Suplemento selectivo: 28 °C.
Las fechas de caducidad se indican en las etiquetas.
Suplemento reconstituido (*) : 30 días a 28 °C.
Medios base preparados en viales (*): 180 días a 28 °C.
Medios completos preparados en placas (*) : 30 días a 28 °C.
(*) Valor de referencia determinado en condiciones estándar de preparación, siguiendo las instrucciones del fabricante.
10 EMBALAJE
Medios base deshidratados (sin cefixima ni telurito potásico) : botella de 500
g .................................. .................................................... .................................................... ...........BK147HA
CefiximaTelurito Suplemento selectivo : 10 viales qsp
500 mL ....................................... .................................................... .................................................... ..BS03708
11 BIBLIOGRAFÍA
Wells, JG, BR Davis, IK Wachsmuth, LW Riley, RS Remis, R. Sokolow y GK Morris. 1983. Investigación de laboratorio de brotes de colitis hemorrágica
asociados con un serotipo raro de Escherichia coli . J. Clin. Microbiol. 18 : 512520.
Farmer, JJ III y BR Davis. 1985. Medio de fermentación de antisuerosorbitol H7: un medio de detección de un solo tubo para detectar Escherichia coli
O157:H7 asociado con colitis hemorrágica. J. Clin. Microbiol. 22 : 620625.
March, SB y S. Ratnam. 1986. Medio SorbitolMacConkey para la detección de Escherichia coli O157 : H7 asociado con colitis hemorrágica.
J. Clin. Microbiol. 23 : 869872.
Chapman, PA, CA Siddons, PM Zadik y L. Jewes. 1991. Un medio selectivo mejorado para el aislamiento de Escherichia coli O157. J.Med. Microbiol.
35 : 107110.
Zadik, PM, PA Chapman y CA Siddons. 1993. Uso de telurito para la selección de Escherichia coli O157 verocitotoxigénica. J.Med. Microbiol. 39 :
155158.
NF EN ISO 16654. Julio 2001. Microbiología de los alimentos. Método horizontal para la detección de Escherichia coli O157.
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12 INFORMACIÓN ADICIONAL
La información proporcionada en las etiquetas prevalece sobre las formulaciones o instrucciones descritas en este documento y son
susceptibles de modificación en cualquier momento, sin previo aviso.
Código del documento : CT SMAC _ENv6
Fecha de creación : 0052016
12003 A
Octualizado :
rigen de la
revisión : Actualización general.
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ANEXO 1 : SOPORTE FOTOGRÁFICO
Agar MacCONKEY Sorbitol (CTSMAC)
Detección de Escherichia coli O157.
Resultados :
Crecimiento obtenido después de 24 horas de incubación a 37 °C.
Escherichia coli O157
Colonia característica:
Lisa, transparente, puede
tener un halo anaranjado
de alcalinización.
Nota : Las colonias se colorean ligeramente artificialmente por la absorción de los colorantes presentes en la formulación del medio.
Las colonias de E. coli nonO157:H7 son rojas y de mucho mayor tamaño.
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