Compilado SC de Biologia Celular de Necroticas

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Compilado SC de Biologia Celular de Necroticas
Histología (Universidad de Buenos Aires)
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Mantenimiento y Variabilidad del Genoma

Las cadenas de ADN pueden separarse en forma reversible= desnaturalización-renaturalización:
Para tener idea de cómo se produce el proceso de replicación empezamos por un principio básico → el
principio de complementariedad de bases, este significa que tenemos un ADN nuclear que es bicatenario, por
lo que hay dos cadenas unidas por puentes de hidrógeno que son complementarias que pueden separarse
(abrirse) de diferentes maneras -Pej por temperatura dado que los puentes de hidrógenos son uniones
reversibles- sabemos que hay enzimas que con gasto de ATP pueden abrir de forma reversible estas cadenas,
proceso que se llama desnaturalización cuando se abre, y renaturalización cuando se vuelve a unir por
complementariedad de puentes de hidrógeno.
La replicación del ADN es un proceso semiconservativo (utiliza hebras parentales como molde) y la información
se preserva en el molde. Entonces, en cada una de las células se conserva una cadena <vieja= y se genera una
nueva a partir de la misma. Se puede replicar ADN in vitro (PCR)
Si bien la replicación es un proceso integral-dinámico, desde un punto de vista mecanicista puede ser dividido
en 3 grandes fases:
• Fase de Iniciación: implica el reconocimiento de la posición donde empezará la replicación en una
molécula de ADN. Orígenes de replicación: cada origen de replicación genera 2 horquillas en distintas
direcciones donde comienza el desenrollamiento.
El complejo de reconocimiento del origen (ORC) reconoce a una secuencia conservada y recluta a
proteínas adicionales incluida la MCM helicasa.
Hay numerosas proteínas que se asocian a la horquilla de replicación y conforman una maquinaria
molecular que permite llevar a cabo una secuencia ordenada de eventos.
Cuando hablamos de orígenes no nos referimos a un solo origen como puede haber en procariotas
(ADN circular y pequeño), sino que en los cromosomas eucariotas hay numerosos orígenes de
replicación, debido a que necesitamos replicar un ADN muy largo rápidamente. Si tenemos dos
orígenes de replicación vamos a disminuir el tiempo a la mitad, si tenemos tres, tres veces y así
sucesivamente. Cuantos más orígenes de replicación tengamos, más rápida va a ser la replicación de
este ADN.
La fase de iniciación requiere que una vez que se haya abierto la horquilla de replicación se reclute a
toda la maquinaria de polimerasas, helicasas y las proteínas de unión ADN simple cadena.
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• Fase de elongación: acontecimientos que ocurren en la horquilla de replicación para la polimerización
de las cadenas hijas de ADN a partir de las cadenas molde
o Cadena directora: sintetizada de forma continua en la dirección de avance de la horquilla de
replicación.
o Cadena retrasada: sintetizada de forma opuesta a la dirección de avance de la horquilla de
replicación mediante la unión de los Fragmentos de Okazaki.
• Terminación: es la fase menos comprendida del modelo, se produce cuando la molécula original ha
sido completamente replicada.
¿Qué ocurre con las histonas en este proceso? La unión es lábil y pueden desplazarse para facilitar el
movimiento de las polimerasas y el proceso de replicación.
¿Qué enzimas actúan?
• Helicasa: rompe los puentes de hidrógeno entre cadenas y hable doble hélice como una cremallera
• Topoisomerasas: eliminan las tensiones producidas por el desenrollamiento del ADN
o Topoisomerasa I: proteína que va a estar asociada al ADN doble cadena y censa cuanta
tensión se ha generado por medio de las helicasas. Una vez que se genera mucha tensión,
esta topoisomerasa puede generar un NICK o Muesca, como un corte en una sola cadena y
liberar la tensión que se ha generado, luego se vuelve a cerrar la muesca y la helicasa tiene
la posibilidad de seguir funcionando sin tanta tensión.
o Topoisomerasas II: corta ambas cadenas de ADN y requiere energía del ATP.
• SSB: son proteínas que estabilizan la cadena simple
• Primasa: es una ARN Pol que sintetiza el Primer/Cebador
• Ligasa: une los fragmentos de Okazaki
¿Cuáles son los mecanismos moleculares que permiten que el genoma se mantenga estable y fiel en la
transmisión?
Este desafío, de mantener una alta fidelidad en la transmisión del genoma, es difícil dado que el genoma
humano tiene un enorme tamaño. Uno de los factores que inciden en este alto grado de fidelidad es la
estructura misma del ADN: compuesto por dos hebras cuyas pares de bases son complementarias.
Para mantener la fidelidad de las secuencias de ADN, por un lado, tenemos esta estructura en doble cadena
complementarias y, por otro lado, los mecanismos que permiten la replicación del ADN mismo.
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Las ADN Polimerasas son las enzimas que participan de manera central en la replicación del ADN: En el caso de
procariotas son 3 tipos de ADN Pol I, II, III
I II III
Función principal Reparación y asistencia en replicación Reparación Replicación

+/- (+++)
Actividad Proofreading (exonucleasa 3’ a 5’) Si Si Si
Actividad corrimiento de muescas (exonucleasa 5’ a 3’) Si No No
Procesividad (nucleótidos agregados antes de disociarse) Baja (3-200) Alta Muy alta
(10.000) (500.000)
La polimerasa III tiene muchos <+= debido a su alta tasa de replicación, pudiendo poner muchos nucleótidos
sin despegarse. Entonces, la Pol III va a estar involucrada en hacer la hebra continua o extender muchos
nucleótidos, en tanto la I va a estar involucrada en el inicio de los fragmentos de Okazaki (pequeños
fragmentos de ADN).
En el caso de eucariotas, hay más de 14 ADN Pol en nuestro genoma y las más caracterizadas son la: α, ÿ, Ā, ¸
y·
α (alfa) ÿ (beta) Ā (gamma) · (delta) ¸ (épsilon)
Función principal Replicación (+) Reparación Replicación Replicación (+++) Replicación (+++)
del ADN ADN mitocondrial
Actividad Proofreading No No No Si Si
(exonucleasa 3’ a 5’)
Primasa asociada Si No No No No
Procesividad (nucleótidos
agregados antes de +/- +/- + ++++ +
disociarse)
Las de mayor capacidad replicativa son la Delta y la Épsilon y la de menor capacidad replicativa es la Alfa.
Por su parte, la gamma es principalmente mitocondrial. Épsilon y Delta tienen actividad correctora a
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diferencia del resto. Las ADN Pol Dependen de una Primasa asociada para iniciar el proceso de replicación, por
lo que Alfa es la única capaz de hacerlo. La Procesividad que es la cantidad de nucleótidos que pueden
agregar estas polimerasas antes de disociarse (notar la diferencia entre una y la otra).
Un elemento común que tienen estas enzimas es que utilizan como sustratos los desoxirribonucleosidos
trifosfato (ATP, CTP, TTP y GTP).
Las ADN Polimerasas son enzimas que dependen de una cadena simple de ADN como molde para polimerizar y,
por otro lado, no pueden hacer una síntesis de Novo, por lo que la polimerización implica la extensión de una
hebra previamente hibridada al molde. Estos requerimientos hacen que las ADN Pol necesiten extender un
Primer/Cebador para comenzar su síntesis. En el contexto de la replicación, los primers están compuestos de
ARN y son sintetizados por una enzima denominada Primasa (subunidad proteica asociada a la ADN Pol α). En
cambio, cuando la síntesis del ADN se produce in vitro, Pej en la técnica de PCR, los primers son de ADN. En
ambos casos los primers son necesarios para polimerizar.
Uno de los aspectos mecanísticos que hay que entender, es cuál es la razón por la que una de las dos hebras
se sintetiza de manera continua, en tanto la otra lo hace en fragmentos de Okazaki. Esta diferencia está
impuesta porque la dirección de polimerización de las ADN Pol es de 5’-3’.
El problema que se produce al final de la replicación es que debido a que para la síntesis de la cadena
retrasada se debe sintetizar un Primer que luego sea elongado por una ADN Pol que complete la secuencia,
pero al terminarse el cromosoma no hay una secuencia de bases que pueda ser utilizada como molde para
hacer el primer = el extremo 3’ no puede ser replicado. De este modo, cada ciclo de replicación implica un
acortamiento de los extremos del cromosoma (telómeros).
Una célula que tiene que dividirse no puede acortar sus telómeros, porque este es un indicador de
inestabilidad cromosómica, y que tiene que dejar de dividirse ¿Cómo compensa la célula que no se acorten los
telómeros? porque tiene una actividad telomerasa → Actividad capaz de elongar los telómeros para que
tengan una longitud correcta y no se produzcan inestabilidades. La telomerasa es una enzima, en este caso de
ARN, capaz de hacer una retrotranscripción (transcripción inversa).
En síntesis, podemos decir que este alto grado de fidelidad de replicación del ADN se debe por un lado a la
estructura (de doble cadena complementaria) y, por el otro, a la existencia de enzimas que poseen un alto
grado de fidelidad en la replicación de este.
En el caso de las células eucariotas, no hay una única ADN Pol encargada de replicar todo el genoma. El inicio
de la replicación se produce en múltiples sitios del genoma y en múltiples orígenes de replicación, por lo que
hay múltiples ADN Pol trabajando de manera simultánea.
Las ADN Pol que polimerizan la cadena continua son diferentes de las que polimerizan la retrasada: la
continua se elonga por ¸ y la discontinua por ·, principalmente.
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CLÍNICO
Algunas células tumorales que han perdido los frenos de la replicación expresan la enzima telomerasa y logran
evitar el acortamiento telomérico. La telomerasa también está presente en las células germinales.
MECANISMOS DE REPARACIÓN DEL ADN
El alto grado de fidelidad que tiene la replicación no es perfecto, sino que hay algunos errores que quedan
fijados en la replicación como mutaciones.
una mutación es un cambio en la secuencia de nucleótidos, puede ser un cambio de diferentes sentidos, una
sustitución, una inserción o una deleción (se eliminan bases). Esta lo que hace es cambiar la codificación.
Los cambios que sufre la secuencia de ADN, que de no ser reparados quedan fijados como mutaciones, pueden
ocurrir por eventos moleculares endógenos y fisiológicos. A su vez, estos eventos ante la presencia de agentes
mutagénicos químicos o físicos pueden aumentar su probabilidad.
Sabemos que si una célula acumula daño en su ADN empiezan otros mecanismos, como los de arresto de
la división celular, mecanismos de muerte celular como la apoptosis, o pueden llevar a una proliferación
anormal (como la presente en las células tumorales).
Algunos de los mecanismos de reparación están asociados al proceso de replicación misma, debido a que
algunos errores y posibles mecanismos de corrección pueden ocurrir en el mismo momento que el ADN está
siendo replicado en la fase S del ciclo celular. Hay otros mecanismos que pueden producirse en momentos
diferentes del ciclo.
Alteraciones que se producen y reparan eventualmente durante la replicación
• Lectura de prueba de la polimerasa/exonucleasa/Proofreading: una segunda actividad enzimática que
está incorporada en algunas de las ADN Pol es la actividad de lectura de prueba 3´-5´exonucleasa, es
decir, remueve nucleótidos en sentido contrario a la polimerización.
Dicha actividad, si se realiza la replicación in vitro, tiene una tasa de eficiencia: la TAG Pol no posee
lectura de prueba y comete 1 error cada 105 nucleótidos; en cambio, con la actividad de Proofreading
se eleva el grado de fidelidad a 1 error cada 107 nucleótidos = menor número de errores.
Por ejemplo, si pensamos en deformaciones en la hebra molde o procesos químicos: puede pasar que la
ADN Pol polimerice un nucleótido que no sea complementario a su molde. Si la ADN Pol posee lectura de
prueba, puede corregir este error rompiendo el enlace covalente formado y removiendo este último
nucleótido para poder polimerizar uno complementario.
La ADN Pol α no tiene actividad de Proofreading; en tanto · y ¸ si la tienen.
Alteraciones que se producen por fuera del contexto de replicación y también por agentes externos (químicos,
físicos, etc.)
Si los daños ocurren en solo una de las cadenas o en ambas se producen situaciones distintas en términos de
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los mecanismos de reparación. Cuando se produce una ruptura en solo una de las hebras del ADN la otra
puede servir como molde para restaurar la información dañada.
El conjunto de enzimas encargadas de detectar las alteraciones, remover y reparar los daños, suelen ser
distintos dependiendo si se rompe una cadena o las dos.
• Sistema de reparación en cadena simple
o Reparación por mal apareamiento de bases (REMA)
o Escisión de bases (REBA)
o Escisión de nucleótidos (REN) -muy tomado-: compuesto por un conjunto de proteínas (apróx 30) que
monitorean el genoma y pueden detectar malformaciones en la hélice provocada por la formación de
un dímero de pirimidinas. Una vez que reconocen y se unen a dichas malformaciones reclutan a otras
enzimas (endonucleasas) que van a escindir el fragmento, permitiendo así que una ADN Pol activa en
los procesos de reparación luego repare la ausencia parcial de la hebra.
Por ejemplo: La luz ultravioleta puede inducir un daño que lleva a la formación de un enlace
covalente entre dos pirimidinas (como las Timinas) adyacentes entre sí= dímeros de pirimidinas. Esto
genera una deformación local de la cadena y no pueden servir como molde para la ADN Pol. Como la
eficiencia de los mecanismos de reparación es limitada y no todos los dímeros pueden ser reparados
y algunas mutaciones quedarán fijadas.
o Remoción directa de grupos alquilos (Metil Guanin Metiltransferasa –MGMT-): hay una enzima que
reconoce grupos alquilos (modificaciones químicas que inducen agentes químicos mutagénicos) y que
impiden, al removerlos, que estos puedan ser replicados eficientemente. Si la enzima es removida y
persisten estos grupos= apoptosis.
• Sistemas de reparación en roturas de doble cadena -muy tomado-
o Reparación propensa a errores por unión de los extremos:
también llamado mecanismo de reparación por unión de
extremos no homólogos. Cuando actúa evita que las
células sigan hacia una muerte celular programada. En el
sitio de reparación suele dejar mutaciones en forma de
nucleótidos faltantes o sobrantes.
Por ejemplo, una ruptura por radiación ionizante.
o Recombinación Homóloga: la información necesaria para
reparar el daño sin errores está en una copia de ADN que
tiene alta homología (en la cromátida hermana o en el
cromosoma homólogo). Cuando actúa esta reparación, lo
hace sin la fijación de mutaciones.
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Robin Holliday fue quien propuso esta idea de recombinación homóloga estudiando a las levaduras y
viendo como algunas tenían mutaciones en proteínas específicas (proteínas REC) que impedían el
entrecruzamiento entre dos cromosomas. Estas proteínas, por lo tanto, permiten por
complementariedad de bases que exista un apareamiento entre las hebras de dos cromosomas
homólogos, produciéndose así un intercambio de información entre estos.
El mecanismo de recombinación homóloga tiene dos funciones: generar variabilidad para
reacomodar cromosomas homólogos próximos y estar involucrado en los sistemas de reparación
si se produce una ruptura de doble cadena.
¿En qué condiciones actuará cada mecanismo? Respuesta: al azar.
El conjunto de enzimas y proteínas que llegue primero al sitio dañado determinará cuál será la
reparación, además las proteínas y enzimas que forman parte de la recombinación homóloga no siempre
están expresadas en las células (solo en células en fase S y G2).
Si pensamos de manera global a los procesos de reparación del ADN estos son un mecanismo que tiende a
conservar la fidelidad de las secuencias de ADN, pero dado que su efectividad es limitada todas las células
van a conservar una tasa de 3 mutaciones por replicación. La mayoría de las mutaciones quedan en regiones
no codificantes del genoma (menos del 2% de la totalidad de las secuencias).
CLÍNICA
¿Qué ocurre en una condición donde hay individuos que poseen mutaciones que afectan la
funcionalidad/eficiencia de los sistemas de reparación? Estos individuos acumulan una tasa mayor de
mutaciones que eventualmente, afectan a genes supresores de tumores o proto-oncogenes, y pueden
aumentar la tasa de aparición de cánceres.
Una patología: Xeroderma Pigmentosa se caracteriza por mutaciones que afectan a mecanismos de
reparación por escisión de nucleótidos y tienen una alta incidencia en el cáncer de piel.
VARIABILIDAD → Proceso de mutación y reorganización del material nuclear.
Las mutaciones le brindan a nuestra especie una fuente de Variabilidad Primaria, es decir la existencia de
nuevos alelos a partir de preexistentes, y se produce gracias al mecanismo mutacional. Dicho en otras
palabras, si pensáramos que los mecanismos de replicación y reparación del ADN fuesen perfectos y la
fidelidad fuese de un 100% no habría la generación de nuevos alelos, evitando que nuestra especie pueda
adaptarse (porque los mecanismos de adaptación evolutivos dependen de la variabilidad alélica); por ende,
las mutaciones son el mecanismo primario de variabilidad genética y algunas de estas variables pueden tener
ventajas por sobre otras bajo ciertas condiciones ambientales.
Hay una segunda fuente de variabilidad en nuestro genoma, la Variabilidad Secundaria, que es producida por
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reordenamientos de las secuencias genéticas (variantes alélicas) provocados por mecanismos de
recombinación. Por ejemplo, la más importante, es la recombinación que se produce en Profase de la Meiosis I
(durante la formación de gametas).
Las enzimas que participan en la recombinación de la Profase I, reconociendo regiones homólogas entre
ambos cromosomas (materno y paterno) en particular son RecA (procariota) y la Recombinasa Eucariota
(RAD51); estas enzimas recombinasas también participan en mecanismos de reparación por Recombinación
Homóloga.
La Transposición y Recombinación Sitio Específica
Son reorganizaciones locales de genoma. Ambos tienen un impacto mucho menor y una frecuencia mucho
menor que la recombinación homóloga. El mecanismo de Transposición está dado por secuencias en el ADN con
la capacidad de movilizarse de un lado a otro= Los Transposones (esto lo retomamos en Genética). La
Recombinación Sitio Específica es un mecanismo que solo ocurre durante la diferenciación de un subgrupo de
células del sistema inmune, un ejemplo muy claro y muy prevalente de la generación de variabilidad es la
generación de anticuerpos, donde los genes que codifican para las inmunoglobulinas forman anticuerpos con
regiones N-Terminales variables, pudiéndose así generar un montón de variaciones en estas estructuras que
son las que van a ir por nuestro organismo tratando de reconocer moléculas extrañas.
SÍNTESIS
✓ La estabilidad del genoma está determinada por la estructura del ADN, la alta fidelidad de las
enzimas que participan en la replicación (ADN Pol) y por la alta eficiencia que tienen los múltiples
sistemas de reparación que actúan.
✓ Cuando los errores replicativos o daños químicos no logran ser reparados, quedan fijados como
mutaciones que a su vez son las variaciones primarias en las secuencias de nuestro genoma.
✓ Hay reordenamientos del material genético que se producen en contextos específicos en donde
participa la recombinación homóloga y aumenta la variabilidad genética secundaria.
Proteínas accesorias a la polimerasa- RPC: proteína de enganche de carga - PCNA: Antígeno nuclear de
células proliferativas. - Proteína de enganche deslizante.
Nota: no es importante conocer todas las enzimas y proteínas que
participan de los mecanismos de reparación del ADN.

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Ciclo Celular
El ciclo celular es entendido como una serie de eventos que describe el comportamiento de las células.
Hay dos aspectos centrales que caracterizan el ciclo celular, por un lado, las células en la fase S replican su
material genético y luego hay una separación del genoma en dos células hijas. Estos son los dos eventos claves
del ciclo que explican la proliferación celular, en donde estas células hijas van a contener un juego completo de
material genético.
Estas dos propiedades, de duplicación del genoma y su división en dos
células hijas, no ocurre en todas las Células que componen a un
individuo multicelular, sino que son eventos que se producen bajo
ciertas condiciones y permiten el mantenimiento del organismo
multicelular como un todo.
Si uno piensa en la replicación celular en un individuo que está
creciendo, la tasa de replicación es positiva y explica el crecimiento.
En los individuos adultos no hay una tasa de crecimiento neto, sino que
hay proliferación celular en el contexto de mantenimiento de tejidos.
Por ejemplo, en los músculos la tasa de replicación es baja y solo ante estímulos físicos como la ruptura de las
fibras, algunas células indiferenciadas llamadas células satélite (propiedades de células madre) son las que
poseen esta capacidad proliferativa; en tanto en la superficie interna del intestino la tasa de proliferación es
alta.
Estado de Quiescencia Replicativa o G0: muchas células, usualmente diferenciadas, no se encuentran
activamente replicando su genoma y dividiéndose, por lo que es un estado por fuera del ciclo celular. Es decir,
solo las células con cierto grado de indiferenciación suelen ser las que están dentro del ciclo (Células Madre).
Hay tejidos con capacidad muy baja o nula de mantenimiento, porque no tienen un conjunto de Células Madre
capaces de proliferar bajo ciertas circunstancias como daños (Pej. El Miocardio y las Neuronas). Esto tiene su
lado positivo dado que así mantiene ciertas funciones específicas como Pej. nuestra memoria, dado que esta se
basa en sinapsis de neuronas específicas y sólo puede ser mantenida si estas no son reemplazadas.
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Las Células Madre son indiferenciadas y cuando proliferan al menos 1 de sus C* hijas retienen el potencial.
¿Cuáles son las características del Ciclo Celular?

1) Secuencia temporal unívoca de procesos asociados
2) Adaptable a condiciones ambientales
3) Mantiene fidelidad del proceso en condiciones variables
4) En cada etapa ocurren eventos moleculares que facilitan el progreso a la siguiente
CONTROL DEL CICLO CELULAR EUCARIOTA

¿Qué determina que ciertas Células puedan proliferar en un momento determinado? ¿Qué señales inducen esta
proliferación? ¿Cuáles son los mecanismos que regulan la proliferación de las Células que están dentro del ciclo
celular?
Se utiliza la caja negra como una metáfora, ya que antes se podía
observar al microscopio todos los cambios que se producían en el ciclo
celular, pero no se comprendía el mecanismo interno por el cual
ocurrían.
Hartwell, Nurse y Hunt recibieron el premio nobel en medicina y
fisiología por descubrir los componentes reguladores del ciclo celular
eucariota.
Los primeros experimentos que se realizaron para comprender los mecanismos fueron de Hartwell, quien utilizó
levaduras como organismo modelo - las levaduras son eucariotas unicelulares y proliferan en estado haploide-
. Hartwell generó, por radiación, múltiples mutantes de levaduras que tenían problemas en culminar el ciclo
celular, es decir, que en algún punto del ciclo quedaban detenidos. El razonamiento de este experimento era
analizar el mutante que quedaba en un punto del ciclo, e identificar el gen mutado, para así poder hipotetizar
que dicho gen codificaba una proteína central para atravesar dicho punto del ciclo. A estos genes Hartwell los
denominó Genes CDC (cell division cycle) y todos los organismos eucariotas tenemos versiones de estos y cumplen
funciones similares.
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Hay momentos del ciclo que necesitan de la actividad de algunos estos genes para ser atravesados, y dichos
momentos fueron denominados por Hartwell como Transiciones Reguladas del Ciclo Celular, las cuales no
necesariamente coinciden con los límites de las fases.
Podemos pensar en estas transiciones como puntos o portales y que para ser atravesados es necesaria la función
de una proteína especifica.
1. La transición regulada más importante es la de <Punto de Restricción=:
es un momento ubicado en G1 a partir del cual si las Células lo
atraviesan están determinadas a replicar su genoma (Fase S) y entrar
en mitosis.
2. Transición de G2 a la fase M
3. Transición de Metafase a Anafase (cuando las cromátidas hermanas se
separan).
Los cambios que ocurren en las fases del ciclo lo hacen de manera muy rápida
y pueden producirse por una serie de modificaciones postraduccionales, es
decir, que ocurren una vez que la proteína se encuentra sintetizada por
completo.
¿Cómo es posible que estos cambios tan rápidos ocurran en rangos temporales tan cortos?
Uno de estos cambios postraduccionales son las fosforilaciones de proteínas, debido a que implican cambios
rápidos de la actividad de estas. Entonces, la capacidad de las células de fosforilar proteínas o enzimas es uno
de los mecanismos regulatorios para gestionar cambios cortos en el tiempo.
(No necesariamente el estado fosforilado es activo y el desfosforilado es inactivo, esto cambia de proteína en
proteína).
¿Qué enzimas participan en las fosforilaciones y desfosforilaciones?
A las enzimas que tienen la actividad de fosforilar proteínas, tomando el grupo fosfato del ATP e induciendo un
cambio conformacional cambiando la actividad, se las denomina Proteínas Kinasas, y a las enzimas capaces de
remover este grupo fosfato, desfosforilando, se las denomina Fosfatasas.
En la mayoría de los contextos celulares las Fosfatasas son prácticamente ubicuas, es decir que hay una enorme
cantidad de ellas y, por ende, el estado de fosforilación está regulado por la disponibilidad y actividad de las
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Kinasas.
Por lo tanto, estos rápidos cambios en el ciclo celular están catalizados por fosforilaciones de muchas proteínas
que controlan dichos procesos.
Hay una familia de proteínas Kinasas que son centrales en regular estas fosforilaciones y reciben el nombre de
Complejos Enzimáticos Cdk-ciclinas.
La subunidad Cdk (quinasa dependiente de ciclina) tiene el ciclo activo encargado de fosforilar, pero por sí
misma esta carece de actividad enzimática, y solo adquiere un estado de fosforilación activo si está unida a
una subunidad regulatoria denominada Ciclina. Es decir, la actividad Kinasa está presente en el complejo Cdk-
Ciclina y no en la Kinasa aislada.
Hay 4 subfamilias de estos Complejos Cdk-Ciclina que están activos en distintos momentos del ciclo celular:
1. Durante la fase G1 y cerca de transición a S, se activan los Complejos G1-Cdk y G1/S-Cdk.
2. Durante la fase S está activo el Complejo S-Cdk
Composición particular de Ciclinas y Cdk que conforman
3. Durante la fase M está activo el Complejo M-Cdk cada complejo (no hace falta saberlo)
Cada complejo fosforila distintos sustratos, gatillando la Complejo Cdk-ciclina Ciclina Cdk partner
serie de cambios que observamos en cada fase.
Por ejemplo, las Kinasas G1/S y S-Cdk tienen la capacidad de G1-Cdk D Cdk4, Cdk6
fosforilar las helicasas presentes en los ORI y así gatillar la G1/S-Cdk E Cdk2
apertura de los ORI. En tanto, las Kinasas M-Cdk fosforilan
múltiples sustratos como las proteínas que condensan la S-Cdk A Cdk2, Cdk1
cromatina, disgregación de membrana nuclear, rearreglo del
M-Cdk B Cdk1
citoesqueleto, etc.
El complejo M-Cdk fue descubierto independientemente por otro grupo de investigación que utilizó ovocitos de
ranas y fue llamado de otra manera = Factor Promotor de la Maduración (MPF)
Nurse logró determinar que algunos de los genes que había descubierto Hardwell, cuyas mutaciones impiden la
progresión del ciclo celular, codificaban a enzimas que tenían actividad de Kinasas.

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¿Qué determina que haya un cambio de un complejo a otro? ¿Por qué un complejo está en una fase y no en
otra?
Si los complejos Cdk estuviesen activos todo el tiempo los cambios sucederían todo el tiempo, esto quiere decir
que hay un complejo de regulación mucho más arriba que Cdk.
Hunt utilizó un modelo de embriones de erizo de mar y pudo determinar que, desde un punto de vista molecular,
el principal regulador de los complejos Cdk está dado por la disponibilidad celular de la subunidad regulatoria
de Ciclina.
Las Ciclinas sufren procesos de síntesis y degradación rápida. Por ejemplo, durante la fase G1 se sintetizan
dentro de las C* cantidades de la ciclina D que en fase S estará sujeta a una rápida degradación= la actividad
Kinasa de este complejo dejará de funcionar.
La degradación es llevada a cabo por una vía (serie de eventos moleculares) que regula la vida media de las
proteínas: Vía Ubiquitina-Proteasoma.
• La Ubiquitina es un pequeño péptido que al ser unido de manera covalente a una proteína la señaliza
y permite que sea degradada por el complejo multiproteico Proteasoma.
• El Proteasoma es una maquinaria de degradación de proteínas que no degrada a todas ellas de manera
indiferenciada sino sólo a aquellas marcadas.
Podemos pensar la Ubiquitinación como otra modificación postraduccional que ocurre por una serie de tres
eventos enzimáticos:
1. La enzima E1 se une a una Ubiquitina y la activa
2. La enzima E1 reacciona con la enzima E2 (conjugasa)
3. E2 une a la Ubiquitina a E3 quien reconoce a los sustratos
Ciclinas
Es la disponibilidad de las enzimas E3 ligasas lo que
determina que las Ciclinas sean degradadas en un momento específico.
Hay otros mecanismos adicionales que regulan la actividad de los complejos

Proteínas inhibitorias de Cdk-Ciclina: tienen la capacidad de unirse a los complejos impidiendo que fosforilen
los sustratos.
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Por lo tanto, cuando los complejos están activos y las Células empiezan a sintetizar
estas proteínas inhibitorias se le pone un freno a la actividad de estos.
Por ejemplo, las proteínas P27/ P21/P16 (llamadas así por su peso molecular).
Podemos decir que el mecanismo molecular que controla la progresión del ciclo
celular y que depende de la actividad de estos complejos tiene propiedades
autorregulatorias.
En el gráfico se pueden observar los niveles de actividad de los distintos Cdk-Ciclina característicos de cada
fase:
Al comenzar G1 la actividad de los complejos es muy baja y, a medida que el ciclo progresa, dicha actividad
aumenta porque las células comienzan a sintetizar, transcribir y traducir las ciclinas características.
Entre las cascadas de actividades, estos complejos van a terminar generando aquellas tres ligasas de Ubiquitina
que van a degradar a las mismas Ciclinas que le daban actividad, de modo que es la actividad del mismo
complejo la que va a generar su propio decaimiento en última instancia= Feedback Negativo / Retroalimentación
Negativa.
Entonces, los Complejos Cdk-Ciclina por un lado favorecen su propia actividad estimulando al principio la síntesis
de las Ciclinas propias, y por el otro estimulan a quienes las van a degradar.
Hacia el final de la mitosis hay niveles prácticamente nulos de la actividad de todos los complejos.

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PUNTOS DE CONTROL DEL CICLO CELULAR

El Ciclo Celular está sujeto a regulaciones externas y puede ser detenido por
señales, que provengan del daño del ADN o replicación incompleta del genoma,
a las cuales se las denomina Puntos de Control del Ciclo Celular, los cuales son
distintos de las transiciones reguladas antes nombradas.
Estos actúan durante ciertos periodos dentro de la célula e impiden que aquellas
que tengan daños en el genoma se repliquen.
Si en cualquier momento hay daños en el ADN, genomas incompletamente
replicados o imposibilidad de formación de los husos mitóticos (provocados por
agentes físicos, químicos, mutagénicos o propios), eventos moleculares van a
detener la progresión del ciclo celular.
Ejemplo
Detención de la proliferación por daños en el ADN: las radiaciones ionizantes producen un daño en la doble
cadena de ADN, por lo cual se activan una serie de proteínas y enzimas que van a señalizar y permitir, por un
lado, que operen los mecanismos de reparación del ADN y, por el otro, se activan un conjunto de enzimas y
proteínas que van a permitir modificar el tipo de proteínas que serán sintetizadas por las Células en ese
momento. Una de las proteínas que logran activarse como consecuencia es P53, la cual tiene un control
regulatorio muy importante respecto del ciclo celular, debido a que funciona como un factor de transcripción→
permite la síntesis/transcripción de determinados genes como P21 para que actúe como un freno para la
actividad.
P21 codifica para proteínas inhibitorias de los complejos Cdk-Ciclinas.
CONTROLES EXTRACELULARES DEL CICLO

¿Cuál es el primer evento que permite el incremento inicial de los complejos para que se active la serie
regulatoria? ¿Cómo es posible que la célula atraviese la primera transición regulada denominada Punto de
Restricción?
Los mecanismos que permiten el control extracelular del ciclo células están generados en individuos
multicelulares por señales de tipo proteico, provenientes de otras poblaciones celulares del mismo individuo.
@necroticaenfmed
Para que una Célula comience a sintetizar las Ciclinas necesarias para activar G1-Cdk, debe recibir una señal
extracelular de un tipo de moléculas denominadas Mitógenos o Factores de crecimiento (EGF, FGF, PDGF,
Eritropoyetina e Interleuquina), que son pequeños péptidos que pueden unirse a receptores en la superficie de
otras células y activar una cascada de señalización intracelular.
Dicha cascada suele estar regulada por otra cascada de fosforilaciones, las cuales conducen a la activación de
ciertos factores específicos de la transcripción que van a permitir la síntesis de proteínas que no estaban siendo
sintetizadas antes de la unión del Mitógeno. La proteína que suele sintetizarse, a partir de la activación de esta
vía de señalización gatillada por un Mitógeno, es Myc.
Myc a su vez también es un factor específico de la transcripción, por lo que va a regular la transcripción de
otros subconjuntos de genes ¿Cuáles?
• Ciclina D1: permite la actividad del complejo G1-Cdk.
La primera activación de la actividad de los complejos no depende de un reloj molecular interno, sino
que es dependiente de que otros conjuntos de células generen un Mitógeno.
• SCF: es una proteína que ubiquitina y degrada a P27 (uno de los frenos).
Como consecuencia de estos dos eventos se favorece la actividad de los complejos G1-Cdk.
A su vez, Myc transcribe a otro factor de transcripción:
• E2F: va a permitir finalmente la síntesis de las Ciclinas características de la fase G1/S-Cdk. Por ende,
Myc no solo permite el aumento inicial de los complejos G1-Cdk, sino también el de los complejos G1/S-
Cdk.
Una vez que la actividad de estos complejos está aumentada, la célula puede atravesar el Punto de Restricción
y proliferación de esta se vuelve independiente de la presencia de los mitógenos. Es decir, la acción de los
mitógenos solo es necesaria para pasar dicho punto.
Por ejemplo, si uno coloca un Mitógeno en Células de cultivo y, una vez que estas atraviesan el punto de
restricción, lo saca del medio→ las Células van a seguir proliferando.
Es importante saber que los puntos de control siguen funcionando independientemente de que el punto de
restricción haya sido superado y que no hay señales negativas que operen como freno desde el exterior.

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HIPERPROLIFERACIÓN EN EL CONTEXTO TUMORAL

Los mecanismos que regulan la proliferación del ciclo celular pueden fallar en condiciones patológicas.
Si en una célula hubiese una mutación que impida que se genere una ciclina en particular, esta célula
probablemente nunca pueda proliferar, morirá y el individuo que la porta no tendrá consecuencias.
Las alteraciones que pueden afectar el fenotipo del individuo severamente no son las que disminuyen el nivel
de proliferación de una Célula, sino que son aquellas que permiten que la Célula prolifere a pesar de las
restricciones normales.
Para entender por qué las Células logran escapar de las restricciones, se elaboró una distinción/división
conceptual de los genes en dos grandes grupos, dependiendo del efecto que estos tienen en la proliferación:
a) Proto-oncogenes: genes cuyos productos ayudan a estimular la proliferación celular y permiten que el
ciclo avance. Pej. Mitógenos, Myc, E2F, Cdks y Receptores de Mitógenos
b) Genes Supresores de Tumores: genes cuyos productos actúan como un freno e inhiben la proliferación
celular. Pej. Rb, P53 y Proteínas Inhibitorias Cdk-Ciclinas (P27, P21, P16)
Pensar en la progresión celular en función de posibles mutaciones, que se generen en proto-oncogenes o que
afecten a genes supresores, permite entender el origen de la modificación tumoral de las C*.
SÍNTESIS
1. El corazón del mecanismo molecular que permite explicar la serie de eventos que caracteriza la
progresión del ciclo celular depende de la actividad de una familia de enzimas con la actividad Kinasa:
las Cdk-ciclinas.
Las Cdk-Ciclinas están formadas por una subunidad que posee el sitio activo de fosforilación y una
subunidad regulatoria cuya disponibilidad va a ser el factor principal de regulación de estos complejos
(ciclina).
2. En los organismos multicelulares el incremento inicial de la actividad de las G1 y G1/S-Cdk depende de
señales extracelulares producidas por otras Células y no por un reloj interno (mitógenos o factores de
crecimiento).
3. La progresión del ciclo también puede ser interrumpida por frenos intracelulares, que se activan cuando
hay daños en el ADN y que gatillan una serie de activaciones de proteínas que actúan como frenos de
proliferación y son caracterizados como puntos de control del ciclo celular.
@necroticaenfmed
4. Todos los componentes que forman parte de estos complejos pueden pensarse bajo la dimensión binaria
de proteínas cuyos genes favorecen la proliferación o le ponen un freno.
PREGUNTAS
¿De dónde provienen los mitógenos?
Por ejemplo, cuando nos herimos la piel la proliferación actúa como una forma de reparación de los tejidos: las
C* cercanas a la epidermis comienzan a producir un mitógeno, en este caso el EGF (factor de crecimiento
epidérmico) y entonces, de manera local, el aumento en la concentración de este Mitógeno opera sobre
receptores presentes en C* de ese epitelio que no estaban proliferando.
No todas las Células pueden responder a este factor, sino solo aquellas que tengan receptores para EGF,
usualmente indiferenciadas.
A veces los factores de crecimiento o mitógenos también pueden tener otras actividades sobre las células y
pueden inducir otras respuestas celulares además de la proliferación, como la diferenciación en embriología.
¿Cómo se une la Ubiquitina?
La ubiquitinación está presente no solo en el ciclo celular, sino también en la degradación específica de algunas
proteínas. Por sí misma la ubiquitina no se puede unir de manera covalente a las moléculas, sino que son
agregadas por la enzima ubiquitina ligasa, quien va a reconocer aquellos sustratos a los que finalmente va a
unir a la ubiquitina.
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ALGUNOS EVENTOS CLAVES

• Entrada a G1: los Factores de Crecimiento son moléculas reconocidas por receptores que activan
cascadas de señalización intracelular controlando la transcripción de ciclinas que favorecen el pasaje
de los puntos de control en el ciclo celular.
• de G1
✓ Se unirán complejos de reconocimiento de los sitios de origen de replicación
✓ Se recluta la helicasa y se forma el complejo de pre-replicación
✓ Se expresan ciclinas de la etapa G1
• de la transición G1-S
✓ La activación de CDK4/6 permitirá la fosforilación de la proteína Rb
✓ Una vez fosforilada, esta proteína dejará de inhibir (=estimulará) la transcripción de la
siguiente ciclina en juego: la ciclina E.
• S
✓ La activación de CDK correspondientes a esta etapa conllevarán la fosforilación del complejo
de pre-replicación.
✓ Cesa la actividad del Complejo Promotor de la Anafase
✓ Se reclutan proteínas a la burbuja de replicación: topoisomerasas, RPA, primasas, ligasas.
✓ La fosforilación de proteínas del complejo de pre-replicación (libres y unidas al ADN) impiden
que puedan volver a unirse.... evitando que factores de iniciación se unan en etapas tardías
✓ Replicación del ADN
• de la transición G2-M
✓ Eventos nucleares: Fosforilación de láminas (desensamblaje de lámina nuclear), fosforilación de
nucleoporinas (desensamble de complejo de poro nuclear), fosforilación de proteínas de anclaje
de la cromatina a la membrana, fosforilación de condensinas.
✓ Eventos citoplasmáticos: Fosforilación de proteínas asociadas a microtúbulos, fosforilación de
proteínas del REG y Golgi (inhibición de tráfico vesicular, fragmentación de Golgi y REG)
→ Condensinas: hidrolizan ATP y pueden <enrollar= el ADN bajo condiciones experimentales. No
se conoce el mecanismo preciso de condensación por condensina.
@necroticaenfmed→ Cohesinas: <unen= a las cromátides hermanas a lo largo de toda su extensión
Etapas de la Mitosis
1. Profase: Condensación de los cromosomas, ensamblado del huso mitótico.
2. Prometafase: Ruptura de la envoltura nuclear y contacto entre los microtúbulos del huso y los
cromosomas (a través de los cinetocoros: movimiento activo.
3. Metafase: los cromosomas se alinean en el ecuador.
4. Metafase-anafase (es un checkpoint)
Control de la entrada de anafase y salida de la mitosis por el Complejo Promotor de la Anafase
o La unión de los microtúbulos del huso al cinetocoro permitirá la liberación de proteínas
reguladoras (cdc20) y su unión al Complejo Promotor de la Anafase (APC)
o APC actúa como ubiquitin ligasa: Permitirá la degradación de la ciclina B y de las cohesinas.
Finalizan los eventos que iniciaron
durante la mitosis
o APC también <libera= de su inhibición
a las proteínas del complejo de pre-
replicación, cuya actividad volverá a
observarse en la siguiente fase G1
5. Anafase
6. Telofase
7. Citocinesis: La inactivación de CDK1 permite
que la miosina quede fosforilada únicamente
en su sitio activador, fomentando la
citocinesis
Meiosis
Arresto en metafase II: Ciertas vías de señalización y factores intracelulares del ovocito II inhiben
específicamente a APC. Durante la activación del ovocito, la generación de ondas de calcio permitirá la
activación de proteínas que liberarán a APC.
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Regulación de la Expresión Génica 1

Los trabajos de secuenciación del genoma humano y los análisis de las secuencias permitieron determinar que
nuestro genoma tiene aproximadamente 30000 genes, de los cuales hay 21000 que codifican para proteínas y
9000 cuyo producto final es un ARN (es decir que van a transcribirse, pero no van a ser traducidos).
Si pensamos en los diferentes tipos de células que componen nuestro cuerpo, no todos los genes se están
expresando de manera simultánea en todas ellas, sino que hay una expresión diferencial de algunos genes en
determinados momentos y bajo determinadas condiciones medioambientales.
¿Cuáles son los mecanismos que determinan que para un tipo celular solo un subconjunto de genes se exprese
en un momento dado?
Los mecanismos moleculares que explican la expresión de ciertos subconjuntos del genoma en un momento dado
nos permiten explicar dos grandes tipos de fenómenos que ocurren en la biología de nuestras células:
Por un lado, la existencia de diferentes tipos celulares, cuyas diferenciaciones bioquímicas y estructurales
dependen de la expresión de estos subconjuntos del genoma. Pej. los genes que se están expresando en las
neuronas no son los mismos que se expresan en una célula hepática.
Del mismo modo, un mismo tipo celular no expresa los mismos genes en un momento que en otro donde no hay
un contexto o un estímulo. Pej. las células del epitelio glandular mamario en lactancia.
Lo que entendemos por Expresión Génica es toda una serie de pasos que van a conducir desde la información
contenida en un segmento de ADN (gen), hasta que ese gen es transcripto y eventualmente traducido a una
proteína activa.
Las investigaciones que permitieron comprender cuáles son los mecanismos que regulan la expresión génica, nos
indican que gran parte de estos están concentrados en los primeros pasos de la expresión: la regulación Pre-
transcripcional y la regulación de la Transcripción propiamente dicha.
Estos procesos son dos pasos moleculares que van a determinar si habrá o no expresión de determinado gen, es
decir si un gen comenzará o no a transcribirse.
REGULACIÓN PRETRANSCRIPCIONAL
@necroticaenfmed
Esta regulación alude fundamentalmente a los mecanismos que van a regular el grado de compactación de la
cromatina. Una de las características centrales de la regulación de la expresión génica eucariota, es que el ADN
está en formato de cromatina, es decir que está asociado fuertemente a las histonas (conjunto de proteínas)
que lo compactan en distintos niveles.
La compactación de la cromatina es uno de los mecanismos centrales que regulan la expresión génica, dado
que este grado de compactación puede permitir o no que la maquinaria transcripcional acceda a los promotores
de los genes permitiendo su transcripción. Dicho de otro modo, aquellos sectores en donde la cromatina está
altamente compactada no permitirán que la ARN Pol II (la enzima que participa en la transcripción de los genes
que codifican para proteínas) acceda a los promotores.
Por el contrario, en otra célula donde este sector de la cromatina que posee el promotor se encuentra abierta
/ menos compactada hay una accesibilidad.
Recordemos que los nucleosomas son una unidad básica de organización de la cromatina y están compuestos por 8
moléculas de proteínas, unidas entre sí, que pertenecen a la familia de las histonas (2 subunidades histonas: 2A, 2B, 3
y 4). Sobre cada nucleosoma el ADN se enrolla dando casi dos vueltas completas y la interacción molecular entre las
histonas y el ADN es uno de los determinantes del grado de compactación de la cromatina.
La afinidad entre ambos está determinada por cargas electroestáticas; las histonas tienen carga neta positiva al PH
celular y el ADN negativo.
¿Cuáles son los mecanismos que regulan la compactación de la cromatina en un determinado tipo celular?
Estos mecanismos son epigenéticos, porque son mecanismos moleculares que regulan la expresión de esas
regiones, pero sin alterar la secuencia de bases del genoma.
Hay 3 Mecanismos moleculares, algunos de ellos heredables, que proveen información regulatoria al genoma sin
alterar la secuencia de nucleótidos del ADN y van a tener un efecto en el grado de compactación de la
cromatina:
• Modificaciones Covalentes de Histonas
• Actividad de Complejos Remodeladores de la Cromatina
• Metilación del ADN
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Modificaciones Covalentes de Histonas

Implica una modificación en las proporciones de cargas que tienen las histonas, afectando su grado de afinidad
con el ADN. Dichas modificaciones ocurren en los extremos N terminales de las histonas: sectores de las proteínas
que protruyen por fuera del nucleosoma.
Las modificaciones covalentes, que pueden afectar la interacción ADN-Histona y Nucleosoma-Nucleosoma, son
la Acetilación o Metilación de Aminoácidos Lisinas en los extremos N-terminales de las histonas.
El aminoácido lisina tiene una carga neta positiva al PH celular
• Acetilación: cuando una Lisina es acetilada carece de una carga neta positiva, debido a que la
acetilación remueve la carga positiva de una histona particular. Al tener menos cargas
positivas el grado de afinidad ADN-Histonas disminuye = cromatina laxa.
• Metilación: puede ser una mono-metilación (agregado de un único grupo metilo), di-metilación
o tri-metilación. En ninguno de los casos se afecta la carga positiva de las lisinas. Debemos
pensar la metilación en relación con el efecto de la acetilación, porque ambas modificaciones
son mutuamente excluyentes; es decir, una lisina metilada no puede acetilarse.
Se interpreta a la metilación de las lisinas como un estado de protección a la acetilación. En general,
un alto grado de metilación de lisinas indica que no están acetiladas = mayor compactación.
Estas modificaciones son procesos reversibles y conocemos familias de histonas que participan en los procesos
@necroticaenfmed
de agregado y remoción de estos grupos químicos:
RESIDUO MODIFICACIÓN ENZIMAS
Lisina (K) Acetilación HAT (acetiltransferasas)

Desacetilación HDAC (desacetilasas)
Lisina (K) Metilación HMT (metiltransferasas)

Desmetilación HDM (desmetilasas)
Serina (S) Fosforilación Kinasas

Treonina (T) Desfosforilación Fosfatasas
Son las señales de estas familias de enzimas las que regularan las modificaciones covalentes y determinan si en
<X= sector habrá una mayor o menor compactación.
El código de modificaciones covalentes de histonas aporta información regulatoria a las Células y puede ser
<escrito, <borrado= y <leído= por enzimas y proteínas:
• <Escritores= epigenéticos (Writers): Enzimas que agregan modificaciones epigenéticas. Ejemplos: HMT,
HAT.
• <Borradores= epigenéticos (Erasers): Enzimas que remueven las modificaciones epigenéticas. Ejemplos:
HDM, HDAC.
• <Lectores= epigenéticos (Readers): Dominios de proteínas que poseen afinidad por las modificaciones
epigenéticas, uniéndose a ellas. Las modificaciones permiten el reclutamiento de esas proteínas a
lugares específicos del genoma. Algunos de esos lectores pueden ser, por ejemplo, complejos
remodeladores de cromatina.
Las regiones de Heterocromatina Constitutiva están asociadas a regiones génicas de secuencias repetidas
en TANDEM.
La Heterocromatina Facultativa está asociada a regiones que contienen genes que se encuentran
silenciados, dependiendo del tipo celular, respondiendo a señales del contexto celular y del ambiente.
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ACTIVIDAD DE COMPLEJOS REMODELADORES DE LA CROMATINA

Los Complejos Remodeladores son un conjunto diverso de enzimas que utilizan la ruptura del ATP para generar
un movimiento molecular que permita realizar modificaciones sobre las cromatinas.
Por ejemplo, algunos pueden desplazar a los nucleosomas unos respecto de otros y generar espacios de ADN
libres de estos; otros pueden remover completamente los nucleosomas en una porción del ADN y hacer accesibles
algunos promotores antes ocultos. Finalmente, otros pueden sustituir a los nucleosomas por variantes de ellos,
que tengan a su vez variantes de histonas, con una afinidad modificada respecto del ADN.
La actividad de estos complejos remodeladores de la cromatina pueden modificar el grado de accesibilidad a
las regiones del genoma.
Un ejemplo prominente de estos lo constituye la familia SWI / SNF (en las Células de mamíferos), que permite
remover y remodelar nucleosomas de algunas regiones del genoma.
METILACIÓN DEL ADN

A diferencia de los anteriores, esta modificación química ocurre sobre el ADN y no sobre las histonas o
nucleosomas que las componen.
La Metilación del ADN ocurre en bases de Citosina que están dentro de las Islas CpG.
El análisis de la secuenciación del genoma ha mostrado que la presencia de citocinas que están yuxtapuestas
a Guaninas (formando dinucleótidos CG), sobre una misma hebra, es una combinación que está poco
representada y es rara en el genoma.
Estas Islas se encuentran concentradas en regiones cercanas a los promotores de los genes y, de alguna manera,
son una marca molecular que indican dónde está el promotor de un gen.
Estas regiones tienen la capacidad de ser metiladas por las ADN Metiltransferasas (enzimas), pudiendo las
Citocinas ser sujetos de esta reacción química que puede agregarle un grupo metilo. Las Citocinas no siempre
son metiladas, son sustratos pasibles de serlo.
Por la complementariedad de bases del ADN: si hay en una de las hebras un dinucleótido CG, en la hebra
complementaria también lo tendremos y también la citosina será metilada.
El efecto de la metilación del ADN es el de Silenciamiento (negativo) sobre la expresión génica= si en el sector
donde está el promotor las citocinas se encuentran metiladas→ el gen no está siendo transcripto.
@necroticaenfmed
¿Cuáles son los mecanismos que explican esta asociación entre mayor grado de metilación y no expresión
génica?
El primer mecanismo: si las citocinas se encuentran metiladas, al promotor no puede acoplarse la maquinaria
basal de la transcripción.
El segundo mecanismo: se asocia con los mecanismos epigenéticos, la metilación de estas CG recluta enzimas
que tienen actividad de Desacetilasas de Histonas (HDAC), permitiendo una mayor compactación.
Los mecanismos epigenéticos no suelen actuar de forma aislada, sino combinarse entre sí:
Modificaciones en estado de cromatina abierta: citosinas no metiladas del ADN, histonas acetiladas y van a
haber actuado complejos remodeladores que removieron o desplazaron nucleosomas.
Modificaciones en estado cerrado: citosinas metiladas y actividad de enzimas que han desacetilado las histonas.
. ESTOS ACTÚAN PUNTUALMENTE EN SECTORES DEL GENOMA.

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REGULACIÓN DE LA TRANSCRIPCIÓN
Si una célula, mediante los mecanismos de regulación epigenética, ha relajado la cromatina haciendo que un
sector del genoma se vuelva accesible a la maquinaria transcripcional ¿Cuáles son los pasos posteriores?
La apertura de la cromatina y la unión de la ARN Pol II no tienen un efecto inmediato de activación de la
expresión, por ende, no garantizan que haya transcripción.
Hay pasos regulatorios adicionales mediados por proteínas y por otras regiones del genoma relativamente
cercanas al gen que se va a transcribir…
✓ Secuencias regulatorias: regiones del genoma que van a afectar la regulación.

Se clasifican en:
o Potenciadores / Enhancers: tiene un efecto positivo- aumenta la transcripción de un gen
determinado.
o Silenciadores / Silencers: tiene un efecto negativo sobre la expresión del gen.
Ambas secuencias pueden estar a distintas distancias sobre la misma molécula de ADN; pudiendo una
región funcionar como potenciador río arriba o río abajo del gen, separado por miles de pares de bases
respecto al promotor.
Los efectos de los potenciadores y silenciadores están mediados por proteínas que se unen a ellos y son
conocidas como Factores de Transcripción Específicos
o Las secuencias de regulación en Sins: secuencias que se encuentran sobre la misma molécula de ADN
@necroticaenfmed
en un rango de ~1M de pares de bases. La mayor parte de potenciadores actúan en sins.
o Las secuencias de regulación en Trans: cuando la regulación proviene de proteínas que están
codificadas en otras moléculas de ADN diferentes.
✓ Proteínas regulatorias
o Factores de transcripción basales: como la ARN Pol II, quien que genera el ARNm, no puede por sí
misma tener afinidad por los promotores de los genes, dicha afinidad está mediada por la unión
simultánea al promotor de este conjunto de proteínas denominadas Factores Basales de la
Transcripción (son 5).
o Factores de transcripción específicos: se unen y median los efectos de las secuencias regulatorias.
Pueden ser diferentes respecto a los factores de transcripción específicos de otro gen, por lo cual
hay más diversidad de ellos al contrario de los factores de transcripción basales que son siempre
los mismos 5.
o Correguladores (coactivadores o correpresores): proteínas adicionales que se unen a los factores
específicos de la transcripción y no al ADN directamente. Pueden tener diversas funciones.
¿Cómo ejercen los potenciadores y silenciadores efecto?

El efecto se produce porque las secuencias en donde están las proteínas
regulatorias se pliegan sobre sí mismas, de modo tal de poner en proximidad
espacial a las regiones regulatorias (con sus proteínas asociadas) respecto
de la maquinaria basal de la transcripción.
Dicha proximidad espacial no está dada por un contacto directo entre las
proteínas y la maquinaria basal, sino que están mediadas por un complejo
multiproteico conocido como Mediador→ está compuesto por 31
subunidades peptídicas y funciona como un corregulador general de la
transcripción.
La probabilidad de inicio de estos fenómenos de transcripción va a estar determinada por el repertorio de
factores específicos disponibles en un momento determinado.

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¿Cuáles son los mecanismos que determinan que la compactación de la cromatina ocurra en ciertos lugares del
genoma y no en otros?
Hay una Segunda Función de los Factores Específicos de la Transcripción que está vinculada con los fenómenos
de compactación de la cromatina, donde estos interactúan con la maquinaria de remodelación epigenética de
la cromatina para afectar el grado de condensación o apertura local de la misma.
Cuando el factor específico se vincula a un potenciador (hay más potenciadores que silenciadores) recluta en
ese lugar a muchas enzimas y proteínas que forman parte de los mecanismos de regulación epigenéticos.
¿Qué asociación hay entre un gen y los factores específicos de la transcripción que lo regula?
Control Combinatorio de la Transcripción
Para un gen en particular no existe un único factor específico de la transcripción, sino que lo que actúa sobre
este gen es un Control de tipo Combinatorio. Es decir, la regulación depende de un conjunto particular de
factores específicos combinados y esto hace que, a partir de un número relativamente bajo de proteínas que
funcionan como factores específicos, se puedan generar muchas combinaciones distintas que regulen muchos
genes distintos.
En otras palabras, la expresión de un gen depende de más de un solo factor específico de la transcripción, y El
control combinatorio permite generar un sistema de regulación complejo y sensible utilizando un número
relativamente bajo de proteínas regulatorias
Muchas veces los factores específicos están sujetos a modificaciones post-traduccionales…

Los factores de transcripción específicos pueden activarse (inducirse) ante señales extracelulares (Pej.
hormonas), lo que permite a las células modificar su expresión genética ante la variación de estímulos del
entorno.
Solo bajo ciertas condiciones medioambientales, como la ruptura del ADN, tendremos la variante activa de un
factor específico de la transcripción, el cual podrá completar conjuntos combinatorios de otros factores
específicos y juntos permitir la transcripción de genes.
Pej. P53 funciona como un factor específico de la transcripción
SÍNTESIS
@necroticaenfmed
✓ Diversos mecanismos de regulación epigenéticos (modificación covalente de histonas, remodeladores de
cromatina y metilación del ADN) posee efectos sobre el grado de compactación de la cromatina y
afectan, por lo tanto, la accesibilidad de la maquinaria transcripcional a una localización particular
del genoma.
✓ Los factores específicos de transcripción, mediante su unión a secuencias reguladoras específicas
(silenciadoras o potenciadoras) reclutan a los modificadores epigenéticos a ciertos lugares del genoma.
Es decir, le confieren especificidad espacial a la maquinaria de regulación epigenética.
✓ Otra de las funciones de los factores específicos de transcripción es la de interactuar, en conjunto con
otros correguladores, con el complejo de inicio de la transcripción para regular la tasa de inicio de la
transcripción en un gen determinado.

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Regulación de la Expresión Génica 11

Anteriormente analizamos los mecanismos que regulan los primeros pasos de la expresión génica y que están
concentrados en modular el grado de compactación de la cromatina, para permitir la accesibilidad de la
maquinaria de la transcripción a los promotores de genes específicos. Estos procesos nos permitieron
comprender por qué algunos tipos celulares expresan un subconjunto de genes diferentes del subconjunto de
genes que expresa otro tipo celular. Ahora vamos a concentrarnos en pasos posteriores, es decir, una vez que
ha comenzado la transcripción ¿Cuáles son los mecanismos de regulación?
CARACTERÍSTICAS DE LAS MOLÉCULAS DEL ARN

✓ A diferencia de las moléculas de ADN, las de ARN son muy lábiles/inestables y tienden a degradarse con
facilidad. Dicha facilidad de ser degradadas está asociada al hecho de que las células tienen altas
concentraciones de enzimas con actividad de ARNasas (que pueden degradar ARN) denominadas
endonucleasas y exonucleasas de ARN.
o Las exonucleasas: son más abundantes y pueden degradar a una molécula de ARN a partir de
sus extremos, pero no pueden romper o clivar por sus partes medias.
o Las endonucleasas: pueden degradar las moléculas aún sin tomarlas desde sus extremos.
La estabilidad de las moléculas de ARN es regulada a través de diversos mecanismos moleculares que
confieren protección o desprotección a los extremos frente a la acción de las exonucleasas.
✓ Las morfologías de las moléculas de ARN espontáneamente adoptan una estructura tridimensional
relativamente estable, denominada Estructura Secundaria. Gracias a esta conformación, las moléculas
de ARN pueden ser reconocidas e interactuar con diversas enzimas y proteínas de manera específica.
Distintas moléculas de ARN pueden adoptar distintas formas tridimensionales y tener interacciones con
distintos subconjuntos de proteínas. Además, pueden reconocer e interactuar específicamente con otros
ácidos nucleicos mediante la complementariedad de bases.
TIPO DE ARN (PRINCIPALES) FUNCIÓN
mARN Mensajero. Codifica proteínas
tARN Transferencia. Transfiere aminoácidos al ribosoma durante la síntesis proteica. Son
@necroticaenfmed
rARN
transcriptos por la ARN polimerasa III y su procesamiento ocurre en el nucleolo
Ribosomal. Forma parte de la estructura de los ribosomas y catalizan la síntesis de
proteínas. Se sintetizan en el nucléolo (muy tomado).
snARNs Small nuclear. Catalizan las reacciones del splicing del mARN.
snoARNs Small nucleolar. Procesan y modifican químicamente al rARN
miARN MicroARN). Regulan negativamente la traducción y estabilidad de los mARNs.
TERC Telomerase RNA component. Componente de ARN de la telomerasa
PROCESAMIENTO DEL ARNM EUCARIOTA
Referido a un conjunto de modificaciones que sufre el Transcripto Primario (producto de la transcripción por
ARN Pol II) hasta convertirse en el Transcripto Maduro= ARNm listo para ser exportado al citosol (en donde
podrá ser traducido).
En conjunto hay 3 grandes modificaciones que conforman el procesamiento; de las cuales dos de ellas van a
afectar los extremos del ARNm y tendrán como objetivo generar un recubrimiento de proteínas que los protejan.
Parecería que estos procesos son secuenciales en el tiempo, pero ocurren de manera
cotranscripcional/simultánea, por lo que a medida que la ARN Pol II genera el transcripto primario las
modificaciones se van produciendo.
Esta coexistencia en el tiempo está favorecida por el hecho de que las proteínas y enzimas que ejecutan las
reacciones postranscripsionales se encuentran asociadas a las ARN Pol II.
✓ Modificación del extremo 5’: implica el agregado de una Caperuza (Capping/CAP), formada por un
nucleótido modificado= la 7-metilguanosina→ va a tener una unión particular al extremo 5’ y que va
a favorecer la unión de un complejo proteico en dicho extremo = el complejo de unión a la caperuza
(CBC)-.
El efecto que tiene es:
• Protección del extremo 5’ a la acción de exonucleasas
• Permite la correcta exportación del transcrito, a través de los
poros nucleares, al citosol
• El inicio de la traducción, al interactuar con la subunidad
menor del ribosoma
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✓ Modificación del extremo 3’: implica el clivaje del transcripto primario

en una secuencia conocida como <secuencia de clivaje y
poliadenilación=. Una vez que el ARNm es clivado en esta secuencia se le
va a agregar, de manera independiente al molde de ADN y a través de
un conjunto de polimerasas independientes de molde, aproximadamente
200 nucleótidos de Adenina conocidos como Cola de PoliA →siendo
entonces esta cola un agregado que no está codificado en el genoma.
La Cola de PoliA tiene alta afinidad por un conjunto de proteínas
conocidas como PABPs (poly-A binding proteins), cuya función es, al
igual que CAP5’, regular la estabilidad del ARNm impidiendo que las
exonucleasas degraden el extremo 3’, la exportación al citosol y el inicio
de la traducción.
Es imprescindible para que el ARNm sea transportado al citosol y tenga la posibilidad de ser traducido, sus extremos
se encuentren intactos y correctamente procesados. Errores moleculares, en los cuales se produce una fragmentación
del ARNm, no permitirán que dicho transcrito sea exportado y traducido. Interpretamos a estos mecanismos como de
control de calidad, que evitan que se exporten y expresen fragmentos incorrectamente traducidos del genoma.
✓ Splicing: en la secuencia lineal de los genes encontramos nucleótidos que van a formar parte de los
codones que serán traducidos= Exones, y segmentos de ADN que interrumpen los sectores codificantes
y que no van a estar presentes en los ARNm maduros = Intrones/ Secuencias Intrónicas.
Los Exones poseen un tamaño de 120 nucleótidos, en tanto los Intrones suelen ser más largos y variables
en cuanto a longitud (~100-100000 nucleótidos).
Es importante que el splicing se realice con ausencia de errores, dado que si por la falla de este hubiese
un error de un único nucleótido → se tendrán consecuencias en el corrimiento del marco de lectura de
los codones durante la traducción.
¿Qué señales están presentes en los límites Exon-Intron que le permiten a la maquinaria molecular
reconocerlos?
Secuencias Consenso De Splicing: son un conjunto de nucleótidos que actúan como señales para
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señalizar a la maquinaria molecular cuáles son los límites de los Exones. Estas secuencias están en tres
regiones:
• La más cercana a 5’ es el sitio dador de splicing
• La más cercana a 3’ es el sitio aceptor de splicing.
• Un sitio intermedio dentro del intrón= sitio de
ramificación.
No todas estas secuencias consenso son idénticas entre sí, por lo que no todas serán reconocidas con
la misma eficiencia por la maquinaria que va a ejecutar el corte y empalme→ esto permite que el
proceso de splicing sea regulable.
¿Qué maquinaria ejecuta el corte y empalme?
El proceso de splicing es llevado adelante por una maquinaria molecular que utiliza ARN pequeños
nucleares (snARNs) U1, U2, U3, U4 y U5, quienes se asocian a proteínas y forman biomoléculas
denominadas Ribonucleoproteínas Pequeñas Nucleares (Snrnps).
Hay 5 Snrnps y cada una está formada por un complejo entre cada ARN pequeño nuclear U1 a U5 +
proteínas. El conjunto de los 5 Snrnps forma el Spliceosoma, que es la maquinaria molecular que va a
permitir la ejecución del splicing.
Los ARN pequeños nucleares reconocen por complementariedad de bases las secuencias de consenso de
splicing.
¿Qué reacciones lleva adelante el Spliceosoma?
Cada evento de splicing remueve un intrón, e involucra dos reacciones secuenciales conocidas como
transesterificaciones. En cada una de ellas hay una ruptura y una formación de enlaces covalentes.
1. Al comienzo, y de manera secuencial, se llevan a cabo dos reacciones de clivaje entre la unión
de los nucleótidos que forman parte de los límites
2. Se producen otras dos reacciones químicas que van a hacer que el clivaje del sitio dador se una
al punto de ramificación.
3. La última de las reacciones químicas va a implicar la unión covalente entre el exón río arriba
con el de río abajo y el desprendimiento del intrón que ha quedado en forma de lazo.
La ruptura de los enlaces químicos y la formación de los nuevos, que va a permitir este corte y empalme, son
parte de la actividad enzimática del Spliceosoma quien además puede reconocer los sitios consenso.
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SPLICING ALTERNATIVO
Cuando uno analiza la expresión génica en distintos tipos celulares puede encontrar que en muchos casos existen
variantes de una misma proteína que proviene de la expresión de un mismo gen. Por ejemplo, el Gen de
Tropomiosina.
La producción de estas Isoformas de una Proteína (proteínas levemente distintas), a partir de una misma
secuencia genómica, está dada por una variante de splicing que aumenta la capacidad codificante del genoma
y es conocido como Splicing Alternativo.
Este Splicing es muy frecuente y ocurre en más del 75% de nuestros genes.
Es importante saber que con el Splicing Alternativo no se consiguen proteínas completamente diferentes a partir
de un mismo gen, sino que se consiguen isoformas que difieren en pequeños aminoácidos.
Las variantes de splicing son usualmente tejido específicas o característicos de distintas etapas del desarrollo.
Tipos de Splicing Alternativo:
✓ Mecanismo de salteo de exones: porque alguno de los exones puede no estar presente en el ARNm
✓ Utilización de sitio consenso 5’ alternativo
✓ Utilización de sitio consenso 3’ alternativo
✓ Exones mutuamente excluyentes
✓ Retención de intrones: porque algunas de las regiones que en ciertos tejidos son interpretadas como
intrones en otros lo son como exones.
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¿Cuáles son las condiciones que permiten procesar alternativamente los transcritos?
La explicación de esta diferencia está dada en la expresión
diferencial de las proteínas en los diferentes tipos Celulares. Un
conjunto de proteínas denominadas proteínas reguladoras de
splicing actúan como proteínas reguladoras positivas o
negativas del Splicing.
a) En la regulación negativa: la presencia de un represor
(R) tejido específico impide la remoción de un intrón
(que en ausencia del represor se removería).
b) En la regulación positiva: un activador (A) tejido
específico induce la remoción de un intrón (que en
ausencia del activador no se removería).
Otras proteínas se unen al ARNm: proteínas complejos de unión a exones- EJC (se unen luego de splicing)
SECUENCIAS PRESENTES EN EL ARNM MADURO

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REGULACIÓN DE LA ESTABILIDAD DE LOS ARNm

Algunos transcritos pueden permanecer poco tiempo en el citosol antes de ser degradados; otros pueden
permanecer más de 24hs y generar así más cantidad de producto génico ¿Qué determina que algunos tengan
un alto grado de estabilidad y puedan permanecer más tiempo en el citosol?
Secuencias en 5’ UTR y 3’ UTR van a regular la estabilidad de los ARNm. Esta estabilidad se debe al hecho de
que estas secuencias pueden reclutar proteínas que protegen o inducen la degradación del transcrito.
Por ejemplo, los microARNs (~20/21 nucleótidos) son una familia de ARNs pequeños que funcionan como
reguladores post-transcripcionales, al regular la estabilidad de los ARNm. Son activados por distintas señales.
El genoma posee aproximadamente 2300 genes de diferentes microARNs
Los microARNs se unen a un complejo proteico efector = RISC, el cual tiene la actividad enzimática que va a
ejercer el rol regulatorio sobre los ARNm.
La función del microARN es guiar al complejo efector, mediante complementariedad de bases, a los extremos 3’
UTR de determinados ARNm (el microARNs se une tanto al complejo como al ARNm).
El efecto de unión RISC- ARNm diana particular va a ser negativo:
→ Detención del ARNm impidiendo que siga traduciéndose
→ Induce la ruptura del ARNm favoreciendo su degradación
Entonces, los miARNs contribuyen a la regulación fina de los niveles de expresión de ARNm específicos
REGULACIÓN DE LA TRADUCCIÓN, DE LA ESTABILIDAD Y ACTIVIDAD DE PROTEÍNAS

Aunque todos los mecanismos previos hayan conducido a que un ARNm pueda traducirse... hay mecanismos
adicionales:
• Ubiquitina-proteasoma (ya visto): mecanismo de degradación de proteínas específicas
¿En qué condiciones? el sistema de poliubiquitinación está regulado por un conjunto de enzimas
ubiquitin-ligasas, que unen la ubiquitina a sustratos específicos. El último miembro de estas ubiquitin-
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ligasas, las E3, tiene afinidad por sustratos específicos.
• Otros: una proteína puede estar inactiva y mediante una fosforilación o mediante la unión de un ligando
específico es activada.
En general las regulaciones post-traduccionales suelen tener efectos en corto plazo, a diferencia de las pre-
traduccionales.
SÍNTESIS
¿Qué aspectos están sujetos a la regulación?
• Mecanismos que regulan el nivel (cantidad) de producto génico
Regulación pre-transcripcional, regulación del inicio de la transcripción (sem3), regulación de los niveles
de ARNm mediante microARNs
• Mecanismos que regulan la actividad de un producto génico ya expresado
Regulación de la actividad de proteínas mediante modificaciones post-traduccionales.
• Mecanismos que regulan el tipo (cualidad) de producto génico
Corte y empalme alternativo de exones (Splicing Alternativo).
• Control de calidad de un producto génico
Modificaciones de los extremos 5’ y 3’ del ARNm, degradación del ARNm por secuencias de terminación
prematura, degradación de proteínas mal plegadas.
¿Cómo se produce la expresión diferencial de genes que explica el desarrollo de especializaciones distintas?
Uno podría decir que la expresión diferencial de genes que se da en tipos celulares distintos, por ejemplo, en
neuronas y células hepáticas, podría explicarse porque el conjunto de factores específicos de la transcripción
activos en una neurona son distintos de los activos en una Célula hepática, y esto hará que distintos sectores
de la cromatina, de una neurona respecto de una Célula hepática, se encuentren condensados y
descondensados.

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¿Cómo las células pueden cambiar su patrón de expresión génica ante señales medioambientales específicas?
Por ejemplo, el epitelio mamario ante una señal medioambiental como la presencia de prolactina, puede
modificar la expresión de sus genes. La actuación de la prolactina conduce a una cascada de señalización
intracelular que va a fosforilar algunas proteínas→entre ellas los factores específicos de transcripción que
hasta ese momento estaban inactivos.
Genes maestros: codifican para factores de transcripción que controlan la expresión de otros factores de
transcripción. Sus mutaciones tienen grandes efectos sobre el fenotipo.
Ejemplo: Genes HOX, que actúan en el control del desarrollo del eje anteroposterior de varios organismos
multicelulares
Antibióticos: se unen a la ARN Pol al inicio o durante la elongación impidiendo la transcripción del ADN de la
bacteria procariota.
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Técnicas
En un trabajo científico se utilizan modelos experimentales y se obtienen resultados particulares que pueden
generalizarse. El equipo de salud resuelve un caso clínico individual utilizando conocimientos generales obtenidos
mediante dichos trabajos científicos.
Los modelos experimentales son organismos, unicelulares o multicelulares, que se utilizan para estudiar funciones
de determinados procesos y/o moléculas, cuyos resultados sirven de base para ver si dichos procesos se producirán
en organismos más complejos (como el nuestro).
Los estudios científicos pueden realizarse en 3 entornos básicos:
✓ In vivo: animal completo sometido a experimento. Resultados más transferibles en relación con la fisiología
real, pero tienen mayores variables que influyen.
✓ In vitro: separando a las células del resto del organismo, por ejemplo, en cultivos celulares. Permiten aislar
las variables, pero se aleja de la condición fisiológica.
✓ Libres de Células: componentes celulares aislados, Pej. una organela. Permiten aislar aún más las variables,
pero también se aleja aún más de lo que sucede en situaciones fisiológicas.
Estudios médicos: el equipo de salud puede solicitar estudios cuyos resultados informen sobre localización y/ o
cuantificación de proteínas y/o ácidos nucleicos. Estos estudios pueden tener fines diagnósticos o predictivos sobre
la evolución del paciente y también sirven para orientar el tratamiento a seguir.
TÉCNICAS QUE ESTUDIAN A LAS PROTEÍNAS
Tanto de los modelos experimentales como de los pacientes se obtienen muestras:
a. Conservando su estructura: son estudiadas mediante técnicas histológicas o
inmunohistoquímica/inmunofluorescencia. Por ejemplo, en biopsias, elementos formes de sangre o células en
cultivo
b. Sin conservar la estructura: son estudiados mediante fraccionamiento subcelular, estudios bioquímicos o
por WesternBlot. Por ejemplo, el Plasma, tejido homogeneizado
Tanto la técnica inmunohistoquímica como el Inmunoblot/WesternBlot se basan en la reacción antígeno-anticuerpo.
✓ Antígeno: es toda molécula o microorganismo que produce una respuesta inmune al ser introducido en un
cuerpo.
✓ Anticuerpos: poseen dos cadenas pesadas y dos livianas. Tiene una parte constante y una variable, la
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segunda se modifica dependiendo de cuál sea el antígeno que se une; la primera tiene que ver con la
especie que produce ese anticuerpo.
¿Cómo se obtienen los anticuerpos para ser utilizados en inmunohistoquímica o WesternBlot?
Por ejemplo, se desea estudiar la ubicación de la
Laminina en un tejido:
1. Se inyecta laminina humana en un conejo
2. Esta es reconocida como extraña por los
linfocitos B, porque la laminina funciona como
un antígeno.
3. Hay distintas partes de la laminina que van a
activar distintos clones de linfocitos B y estos
van a dar plasmocitos que van a secretar
anticuerpos.
4. Luego, puedo obtener plasma del conejo y
purificar los Anticuerpos Policlonales.
Los anticuerpos policlonales son anticuerpos derivados de diferentes líneas de linfocitos B, que en conjunto
reconocen distintos Epitopes de un antígeno. Los Epítopes son determinantes antigénicos que activan las distintas
poblaciones de linfocitos.
¿Cómo puedo producir Anticuerpos Monoclonales?
1. Se inyecta el antígeno en un ratón
2. Aíslo los clones de linfocitos y los cultivo en distintas
Placas de Petri = en cada placa tengo un clon que tiene
como receptor un anticuerpo específico para un
determinante antigénico.
3. Luego fusiono cada clon en cultivo con células tumorales
para obtener un hibridoma inmortal que produce muchos
anticuerpos monoclonales.
Los anticuerpos monoclonales se pueden producir a partir de una
sola línea de linfocitos B y sólo reconocen un Epítope del antígeno.
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INMUNOHISTOQUÍMICA
¿Cómo utilizo estos anticuerpos en la inmunohistoquímica/inmunofluorescencia?
La inmunohistoquímica es la localización de un componente químico y proteínas específicos en el tejido o en las
células, basada en la reacción antígeno-anticuerpo. También puede servir para cuantificar a las células que
expresan dicho componente. Es una técnica histológica que tiene especificidad química.
1. Tomo una muestra de tejido y la fijo
2. Agrego el anticuerpo policlonal o monoclonal para que reconozca y se una al antígeno que quiero detectar
3. Agrego una sustancia que tenga color, un fluorocromo (en este caso se llama Inmunofluorescencia) o una
sustancia electróndensa para poder observar la muestra en un microscopio óptico, electrónico o de
fluorescencia.
En la inmunohistoquímica directa el anticuerpo se une al antígeno y yo al verlo se
dónde está dicho antígeno.
En la inmunohistoquímica indirecta (la más habitual) se introduce el anticuerpo, pero
sin marcarlo y a su vez se introducen otros anticuerpos marcados (producidos en
otros animales) que reaccionan y se unen al anticuerpo sin marcar= puedo ver la
ubicación del antígeno a través del fluorocromo que tiene el anticuerpo secundario.
La ventaja que tiene usar la indirecta es que al unirse más de un anticuerpo al
primero, la señal es más amplia y que con un solo anticuerpo secundario puedo ver
muchos anticuerpos primarios.
FRACCIONAMIENTO SUBCELULAR
Es el procedimiento por el cual se pueden separar los distintos componentes de las células de un tejido. Tienen como
objetivo obtener fracciones puras o enriquecidas de un determinado componente celular para poder así estudiarlos
de manera aislada.
1. Ruptura mecánica= Homogenato
2. Someto al homogenato a una centrifugación diferencial y
obtengo un Pellet de algunos componentes (núcleos), en tanto
el resto queda en el Sobrenadante
3. Tomo el sobrenadante y lo someto a otra centrifugación (a
mayor velocidad y más tiempo) = Pellet de componentes que
antes no habían precipitado ahora si lo hacen (mitocondrias,
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lisosomas, peroxisomas) y el resto en el sobrenadante.
4. Tomo el sobrenadante y hago una última centrifugación (aún más veloz y más tiempo): obtengo el Pellet
(microsomas) y en el sobrenadante queda el citosol y ribosomas.
Puedo utilizar alguno de estos fraccionamientos o el homogenato para realizar la técnica de WesternBlot.
¿Cómo sé que tengo la fracción que pretendía?
Utilizando enzimas específicas de cada organela y generando una reacción bioquímica enzimática u observar la
morfología de la fracción, a través de microscopía electrónica.
WESTERNBLOT= INMUNOBLOT
Permite determinar los niveles de expresión de una proteína específica en una fracción subcelular u homogenato.
Al igual que en la inmunohistoquímica, se busca detectar proteínas específicas a través de la reacción antígeno-
anticuerpo, y determinar los niveles cuantitativos de expresión de este. En esta técnica se trabaja sobre una
muestra que no conservó su estructura (plasma, fracción u homogenato).
No voy a tener información de la distribución dentro del tejido ya que lo destruí.
¿Cuál es el fundamento de WesternBlot?
1. Las proteínas que obtengo -de las fracciones u homogenato- las colocó con un detergente de carga
negativa, de modo que las proteínas adquieran dicha carga, en el extremo superior de una membrana/gel.
2. A este gel lo pongo en un medio acuoso y lo someto a una corriente eléctrica.
3. Las proteínas van a migrar a lo largo del gel a la parte inferior, que tiene carga positiva.
4. Las voy a divisar como bandas y, dado que no todas migran a la misma velocidad, algunas estarán más
arriba y otras más abajo.
El gel es como un filtro que tiene orificios; mientras más grande sea la proteína va a atravesarlo más lento
y viceversa= quedando las proteínas más grandes más arriba y las más pequeñas más abajo.
5. Blotting o transferencia: se pasan las proteínas del gel, por corriente eléctrica, a otro material que permita
que se realice la reacción antígeno-anticuerpo (pej. una membrana de nitrocelulosa).
6. Sobre la membrana de nitrocelulosa agrego los anticuerpos primarios, quienes se van a unir a la banda
donde está la proteína. Luego agrego los anticuerpos secundarios marcados para así visualizar:
✓ En qué banda se expresó, dependiendo de la banda marcada
✓ Qué cantidad de proteína (antígeno) se expresó, dependiendo del grosor de la banda
✓ Qué peso molecular tiene, por la ubicación de la banda con respecto a los marcadores de peso
molecular
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Solo puedo saber en qué lugar de la célula se expresa una proteína (localización subcelular) utilizando esta técnica
sí antes utilice como material de partida un fraccionamiento subcelular.
La Inmunohistoquímica es más útil para tener información respecto a la distribución, en tanto que
TÉCNICAS DE AMPLIFICACIÓN
WesternBlot O CLONACIÓN
lo es para obtener informaciónDEsobre
ÁCIDOS NUCLEICOSy cantidad
la presencia IN VITRO de una proteína en una
determinada muestra.
TÉCNICAS DE AMPLIFICACIÓN O CLONACIÓN DE ÁCIDOS NUCLEICOS IN VITRO

PCR DE PUNTO FINAL
Permite la amplificación de un fragmento de ADN en una reacción in vitro. Con la aplicación de esta técnica pueden
generarse millones de copias del fragmento de ADN amplificado, a partir de un número muy bajo de copias iniciales.
Permite generar un diagnóstico temprano de algunas enfermedades. Es un aumento del sector/segmento específico
del ADN que quiero obtener. La PCR es específica.
¿Qué necesito?
ADN primer específico (de la secuencia de nucleótidos que queremos reproducir), ADN-TAQ polimerasa (con
característica termoestable) el magnesio cataliza la estabilidad de la reacción y cofactor de la TAC termocicladores
(máquinas), ADN molde (ARN no porque se desnaturaliza por la temperatura), Buffer porque otorga condiciones
salinas para el funcionamiento de la enzima y Dinucleótidos
¿Cómo funciona?
Coloco la molécula de ADN en la Termocicladora (bloque que puede calentarse y enfriarse rápidamente) a
temperatura normal. Selecciono un primer de ADN específico para la secuencia de nucleótidos donde quiero que la
ADN-TAQ polimerasa comience a sintetizar la cadena complementaria. Etapas:
1. Desnaturalización: elevo la temperatura a 95°, se desnaturaliza la molécula de ADN separando sus puentes
de hidrógeno por helicasas
2. Hibridación: bajó a 55 o 65, los cebadores se unen al molde, la ADN-TAQ extiende los cebadores.
3. Elongación o extensión: elevo la temperatura a 72°, trabaja la ADN-TAQ polimerasa y sintetiza la cadena
complementaria; No habrá fragmentos de Okasaki ni cadena retrasada.
4. Unión: llevo la temperatura a 65° para que se unan los puentes de hidrógeno de las hebras
semiconservativas.
Repito el ciclo la cantidad de veces que considere necesario para obtener una muestra amplificada de la parte del
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genoma que codifica la proteína dañina.
Uno de los errores que se pueden dar es que, como la TAQ polimerasa no tiene capacidad de corrección (exonucleasa)
que realiza la Doble Lectura, puede haber un nucleótido mal; también puede haber contaminación in vitro que
modifique los resultados.
Electroforesis de ADN: habitualmente los resultados de una reacción de PCR se visualizan (se hacen visibles) al usar
electroforesis en gel de agarosa.
La electroforesis en gel es una técnica utilizada para separar fragmentos de ADN según su tamaño
1. Las muestras de ADN se cargan en pozos (ranuras) en un extremo de un gel y se aplica una corriente
eléctrica para arrastrarlas a través del gel.
2. Los fragmentos tienen carga negativa, por lo que se mueven hacia el electrodo positivo. Puesto que todos
los fragmentos de ADN tienen la misma cantidad de carga por masa, los fragmentos pequeños atraviesan
el gel más rápido que los grandes.
3. Cuando un gel se tiñe con un pigmento que se une al ADN, los fragmentos de ADN pueden verse como
bandas, las cuales representan un grupo de fragmentos de ADN del mismo tamaño. Para visualizar, se expone
a luz UV que me permite ver las bandas y se compara con los marcadores.
Típicamente se incluye un estándar o marcador de peso molecular, para que pueda determinarse el tamaño de los
fragmentos en la muestra de PCR.
Si hay replicación de ADN quiere decir que en la sangre teníamos la secuencia de nucleótidos que codificaba para
la bacteria y esta se expresará con sus pares de bases, generando un peso más elevado de la muestra de ADN
original. A su vez, la enfermedad puede expresarse en cromosomas homólogos; se puede ver entonces si la proteína
está en la secuencia de uno, de dos o de ningún cromosoma.
Pruebas anteriores:
• Control negativo: no se debería ver banda, siempre se usa una sustancia que es seguro que no va a dar
positivo. Pej. reacción de PCR en ausencia de ADN molde= no habrá amplificación del gen mutado.
• Control positivo: uso una muestra de la bacteria donde si o si habrá replicación del ADN molde.
Paciente a y c positivos: vemos banda a la misma altura del positivo
Paciente b negativo: no debemos ver banda porque no hay amplificación. Si no hay mucha cantidad no se ve.
PCR multiplex: en un mismo tubo se coloca un set de primers para detectar varios genes.
Detección de mutaciones: una persona que presenta una banda más abajo presenta la deleción.
Usos: detección de agente patógeno e identificación de especie del agente patógeno.

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QPCR-RT (CUANTITATIVA CON RETROTRANSCRIPCIÓN)

Etapa I: Retrotranscripción
La técnica de PCR cuantitativa con retrotranscripción (RT-qPCR) permite cuantificar moléculas de ARN. Usualmente,
la técnica comienza con la extracción de ARN de una muestra y su retrotranscripción (transcripción inversa) a
moléculas de ADN complementario (cADN: contienen secuencias solo de exones ya que derivan de ARNm maduro).
La retrotranscripción se realiza utilizando una enzima (ADN pol) recombinante de origen viral. Permite generar la
síntesis de ADN bicatenario a partir de un molde de ARN monocatenario. Todas las enzimas transcriptasas reversas
tienen un dominio donde se produce la síntesis (capacidad de ADN polimerasa) y otro dominio donde una enzima,
asociada de carácter Nucleasa (ARNasa), degradan la hebra de ARNm que usamos de molde, una vez sintetizada.
Luego va a dejar la hebra complementaria de ADN original para sintetizar a partir de ella. Este tipo de enzimas no
poseen capacidad correctora de exonucleasa. Un ejemplo de enzima con esta función de retrotranscripción IN VIVO
es la telomerasa, dado que esta enzima tiene un molde de ARN que le permite extender los telómeros.
Etapa II: PCR cuantitativa
Lo primero que necesitamos es un primer específico que marque la secuencia de ARNm que se desea amplificar y
cuantificar. Estos primer pueden ser generales, es decir que se van a unir a todas las colas POLI-A de los ARNm que
tengamos en la muestra de tejido (Ej: primer poli-T); o podemos usar Primers específicos con secuencias de
nucleótidos complementarias a los ARNm que queremos pasar a ADN.
Luego necesitamos lo típico de la PCR normal para realizar la técnica (incluyendo su enzima, la TAq-polimerasa).
Te permite ver los resultados de los ciclos en tiempo real, observo en cada momento cómo se van amplificando la
señal y si hay producto. Se puede comparar la cantidad de sustrato inicial; a diferencia de la de punto final que se
observan productos después de que termina. La PCR punto final solo dice si está infectado o no y si hay amplificación
o no.
Se marca con un colorante (fluorocromos o clorofonos) que se agrega al tubo desde el inicio de la reacción y se
introduce en él ARN. El colorante (SYBR), reportero de que la amplificación ocurre, adquiere fluorescencia cuando
se asocia al ADN de doble cadena = es un INTERCALANTE, por eso cuando aumenta la cantidad de ADN veo
fluorescencia. Diferentes colorantes específicos para diferentes genes determinarán cual se manifiesta primero y
tras varios ciclos determinará la proporción con los demás genes.
• Si no hay fluorescencia: el ARN está ausente en la muestra ya que los primers no se unen al ADNc. Al principio
no hay fluorescencia porque la máquina no detecta los niveles tan bajos de fluorescencia, en cambio cuando
se acumula producto se comienza a observar.
• Si aumenta la fluorescencia: es porque aumenta la producción. Cuanto menor cantidad de ARN inicial, más
tarda en llegar al crecimiento exponencial: así comparo productos iniciales.
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• La finalización es casi igual, es decir con la misma cantidad de productos ya que, aunque deje PCRcorriendo
los sustratos son limitantes, hay saturación de sustratos del PCR. Se saturan enzimas, primers o nucleótidos.
• Análisis de resultado: n° de copias de ADNc amplificado= n° de ADNc original= cantidad de ARNm muestra
original
• Se utiliza para estudiar carga viral de retrovirus HIV. Carga viral: n° de copias de ARNm/ ml de plasma
Para determinar carga viral: busco ARN virus que se transcribe a partir de ADN integrado (es ARNm a partir de
ADNc que se forma en la C* huésped del ARN viral original)
¿Qué beneficio tiene usar esta técnica? esta técnica nos permite estudiar en tiempo real, debido a que agregamos
una proteína fluorescente que marca los ADN; a diferencia de la PCR de punto final donde necesitamos de la
electroforesis para sacar conclusiones en base a su gel.
Estos marcadores pueden ser:
a. No específicos: se intercalan en la doble hebra de ADN y, si solo si se adhiere a él, bajo una luz se puede emitir
una fluorescencia propia. El problema es que no solo se puede unir a la doble cadena de ADN, sino que también
se pueden unir a dímeros de primers, y no será bueno para nuestras conclusiones.
b. Específicos: tienen la característica que presentan una secuencia de ADN específica e hibridan de manera
exacta a una secuencia de nucleótidos que deseamos que la TAQ-polimerasa replique. Cuando pasa la enzima
TAQ-polimerasa duplicadora por sobre el primer específico, lo degrada y al degradarse libera el clorófono
(emana color) dándonos la pauta de que la secuencia de nucleótidos que buscábamos (posiblemente
generadora de una proteína <maliciosa= se encuentra o no en nuestra secuencia de ADN.
A diferencia de PCR de punto final no se necesita de la electroforesis y su respectivo gel para obtener los primeros
resultados a evaluar.
A la hora de evaluar: la relación entre <mayor fluorescencia, mayor cantidad de producto (fluorescencia) en menor
cantidad de tiempo=. Al hacerlo hay que tener en cuenta:
• A partir del 10mo ciclo la maquinaria captadora de Fluorescencia va a dar datos porque con un o dos
replicaciones de ADN lo que emanen los clorófono / fluorófonos no será suficiente para captarse.
• A los 30 ciclos (aproximadamente) disminuye la capacidad de la TAQ-POLIMERASA y deja de actuar. Además,
hay una disminución de substratos como primers, magnesio, bases nitrogenadas, clorófono, etc. A diferencia
de PCR no necesita electroforesis.
A diferencia de la PCR, la PCR cuantitativa permite discriminar finamente las cantidades distintas de un transcrito
que uno tiene en las muestras.
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TÉCNICAS DE RECOMBINACIÓN DEL ADN

Las Enzimas de Restricción son endonucleasas, de origen bacteriano, que cortan el ADN en doble cadena
reconociendo secuencias específicas de 6 a 10 nucleótidos. Pueden cortarlo creando extremos romos o creando
extremos con una cadena simple, segmentos de ADN monocatenarios, que pueden volver a unirse por
complementariedad de bases= bordes pegajosos.
Si se cortan secuencias específicas de dos moléculas de ADN de distinto origen con una
misma endonucleasa (creando bordes pegajosos) y las coloco en un tubo de ensayo=
espontáneamente, por complementariedad de bases, los extremos (las bases de cada
hebra) de estas moléculas se unirán entre sí. Luego se unirán por una ligasa, de manera
covalente, las bases no complementarias de la misma hebra.
Entonces, el empleo de las enzimas de restricción más la ligasa permiten obtener una
molécula de ADN conformada por dos moléculas distintas= Molécula Recombinante o
Molécula Híbrida.
Si yo quiero amplificar una porción de ADN sin utilizar PCR, debo introducirlo/insertarlo
(inserto) en un elemento de ADN con capacidad autorreplicante (vector) que lo
amplifique de forma autónoma, formando una molécula de ADN recombinante o híbrida. Pej:
1. Inserto el gen de la insulina (inserto) en un plásmido (vector), quién tiene secuencias promotoras que
permiten la expresión de un gen dentro de él, = se forma una molécula híbrida.
2. Introduzco, por un proceso llamado transformación, el plásmido en una bacteria
3. Cultivo la bacteria
4. La bacteria prolifera y el plásmido aumenta en número junto al número de la insulina insertada.
5. Purifico el ADN y me quedan muchas copias del vector con su inserto.
Los Vectores de expresión: permiten que se exprese el inserto de interés (Pej. insulina, factor VIII de la
coagulación, Vacunas) y sirven como herramienta terapéutica.
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Hay distintos tipos de vectores: plásmidos, virus, cromosomas artificiales de bacterias y de levaduras. Los
cromosomas artificiales de levadura sirven de vectores para grandes segmentos/insertos de ADN.
Utilidad de los vectores:
• Si queremos saber la localización de una proteína en un tejido o célula, y no tenemos anticuerpos buenos
que lo detecten, una posibilidad para reemplazar la inmunohistoquímica es utilizar las técnicas de
recombinación del ADN
Los insertos son híbridos en los cuales se fusiona el gen codificante de la proteína de interés con el gen
codificante de una proteína que se pueda identificar (tag).
• Si queremos saber la función de la proteína: puedo introducir un inserto que tenga una mutación y
compararlo con uno normal. Al mutar el inserto y comparar puedo observar la función que falla (= se
anula) y por ende saber cuál es la función que cumple la proteína el normal.
Las técnicas de recombinación también permiten
modificar el genoma de una célula de forma directa.
Entonces, si yo tengo un gen normal lo puedo:
A) Reemplazarlo por otro gen (replacement)
B) Cambiarlo por una porción inactiva (knockout)
C) Incluir un gen adicional.
A través de la modificación del genoma con la técnica
de recombinación, al obtener Células madre tempranas
pluripotenciales o totipotentes de un blastocisto, puedo crear animales transgénicos que tengan esa modificación
y la transmitan a la descendencia. Los animales transgénicos no necesariamente presentan cambios patológicos.
METODOLOGÍAS PARA ESTUDIAR LA FUNCIÓN DE LOS GENES
Hay dos tipos de manipulaciones génicas que permiten inducir la función del gen
a. Estrategia de aumento de la expresión: ver qué pasa con la sobreexpresión de un gen. SI hay alguna
alteración en la C* o el animal. Es una manipulación de ganancia de función.
b. Estrategia de disminución o eliminación de la expresión: elimino o disminuyo la expresión y veo que
alteración produce. Es una manipulación de pérdida de función.

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Puedo regular el nivel de expresión modificando los promotores:

a. Introduzco un vector con un productor ubicuo que se exprese mucho, entonces la Célula donde introduje
este vector va a expresar gran cantidad de inserto.
b. Introduzco un gen que codifique para un ARN de interferencia e inhibir la expresión.
Los ARN de interferencia utilizan la maquinaria proteica y un mecanismo análogo a los microARNs para
silenciar ARNm endógenos.
→ Cuando modifico el genoma y produzco una pérdida de función= knockout
→ Cuando modifico y produzco una disminución de función= knockdown
Dentro de las moléculas híbridas se pueden introducir genes exógenos que permitan identificar a la C*: el gen que
codifica para una proteína (cuya localización celular quiere estudiarse) se fusiona con el gen que codifica para
una proteína fluorescente; y posteriormente, la localización de la proteína fluorescente muestra la ubicación de la
proteína. Por ejemplo, introduzco a una Célula un vector con una proteína fluorescente verde (GFP), la cual es de
medusa, y así puedo reconocer su ubicación en dicha Célula y tejidos.
A su vez también me permite ver si mutaciones en determinados componentes del genoma alteran la distribución
o ver la localización en el entorno de la modificación del gen para ver si produce una mutación funcional y
localizar las Células que están expresando el gen modificado.
CRISPR/CAS
Es una metodología de alteración del genoma que se utiliza experimentalmente y que simplifica la producción de
animales con modificaciones genéticas ¿En qué consiste?
Hay un conjunto de enzimas, entre ellas Cas 9, que tienen la capacidad de cortar el ADN en doble cadena en
aquellas zonas que son guiadas por ARN. Esos ARN pertenecen al sistema CRISPR
El sistema crispar es un conjunto de genes que se transcriben dando origen a ARN pequeños en bacterias, que se
unen a su vez a otras porciones de ADN y permiten la unión de las proteínas Cas 9 para que corten esas porciones
de ADN.
En general, el sistema CRISPR/Cas es un sistema de protección de las bacterias contra los virus, es decir, en
general esos ARN que se expresan en el sistema suelen ser complementarios a genomas exógenos como los de los
virus y permiten que la enzima cas9 destruya a los agentes exógenos.
Los científicos han empezado a emplear este sistema para modificar el genoma de animales de experimentación o
de células en cultivo ¿Cómo?
1. Se introduce en la célula ARN de la familia CRISPR para que se unan a las porciones del ADN que nos
interesan. Por ejemplo, si queremos saber la función de un gen, podemos sintetizar ARN que se dirijan a la
zona de ese gen. También se introduce la proteína Cas 9 para que corte el sitio.
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2. Al cortar en doble cadena, se va a iniciar un proceso de reparación del ADN
a. Si no hacemos nada más, predominantemente la reparación va a ser por unión de los extremos no homólogos,
con lo cual se va a producir una pérdida de función de este gen
b. Si además introduzco en la célula una porción de ADN homóloga a la porción que corte (pero con una
mutación), el mecanismo de reparación por recombinación homóloga va a poder utilizar este molde para
reparar el ADN.
Si la porción de ADN homóloga tiene una mutación, puedo ver qué consecuencias tiene en el animal
haber introducido esta mutación y puedo estudiar la función de este gen.
En ambos casos puedo estudiar la función del gen a través de
a. Un knockout: porque estoy eliminando la función
b. Un knockin: cuando produzco una mutación y veo cuál es la consecuencia
Entonces, la técnica de CRISPR7Cas ha facilitado en forma muy significativa la producción de animales
transgénicos, debido a que yo puedo producir un Knockout o Knockin en un blastocisto y obtener una
descendencia que exprese este cambio del genoma. Si el cambio del genoma está en las células germinales, lo
puede transferir a la descendencia, es decir, obtengo un animal transgénico.
Esta técnica es la más sencilla y la que se utiliza más para modificar el genoma.

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Dinámica y compartimentalización de las membranas

biológicas
El interior de las células está compartimentalizado por un montón de organelas membranosas.
Si todas las proteínas comienzan su síntesis en el citosol ¿Cómo es posible que existan proteínas que tengan
localización específica dentro de las Células? ¿Qué mecanismos moleculares permiten que esa proteína adquiera
dicha localización?
La señal que permite la localización de las proteínas es una secuencia de aminoácidos contenida en la estructura
primaria de ellas, denominadas Secuencias Señal o Topogénicas (topo=localización génica=generadora de), cuya
existencia es necesaria y suficiente para localizar la proteína.
La localización, a pesar de estar mediada y permitida por las secuencias señal, en una última instancia está
controlada a nivel del genoma nuclear, porque las secuencias de aminoácidos provienen de la traducción de un
ARNm.
Para determinar las secuencias señal los experimentos consistían en mutar o eliminar secuencias hasta lograr que
las proteínas no lleguen a los compartimientos.
La primera señal descubierta fue la de importación desde el citosol hacia la luz del Retículo Endoplásmico (RE).
Dependiendo de cuál es el destino final y la ruta que toma cada proteína, se utilizan 3 diferentes mecanismos de
transporte → A Través de Compuertas, Transmembrana y Vesicular.
TRANSPORTE A TRAVÉS DE COMPUERTAS

Es característico del intercambio de proteínas entre el citosol y el núcleo.
a. Importación Nuclear: cuando se da el ingreso de una proteína desde el citosol al núcleo
b. Exportación Nuclear: cuando hay un pasaje de una proteína del núcleo al citosol.
La envoltura nuclear limita el acceso de factores transcripcionales desde el citosol al
núcleo.
El pasaje es bidireccional y va a ocurrir a través de una compuerta→un pasadizo que
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va a conectar citosol-núcleo. El pasadizo, en términos microatómicos, van a ser los poros
que forman parte de la membrana nuclear y crean una continuidad entre el espacio
citosólico y el interior núcleo.
A través de los poros nucleares los iones y moléculas pequeñas difunden de manera libre
por difusión simple; sin embargo, por su tamaño los poros forman una barrera de difusión
a aquellas proteínas que superen los 40 kilodalton (kDa). Hay mecanismos moleculares
específicos que van a regular el pasaje de los componentes de mayor tamaño a través
de los poros nucleares.
Los poros están revestidos por una familia de proteínas denominadas Nucleoporinas.
Las Nucleoporinas revisten los bordes de los poros y caracterizan su lado citosólico y nuclear. Mediante una
interacción entre las Nucleoporinas y las proteínas de mayor tamaño se va a permitir el transporte a través de la
compuerta tanto para la importación como para la exportación.
¿Cómo se conecta el transporte a través del poro con la existencia de secuencias señal en las proteínas?
Las proteínas denominadas Proteínas Cargo, contienen en su estructura primaria un tracto de aminoácidos
denominados Señal de Localización Nuclear (NLS)
Dicha señal será de Importación Nuclear para aquellas proteínas que serán importadas, y de Exportación Nuclear
para las que serán exportadas. Las proteínas con estas señales son reconocidas por receptores específicos que se
encuentran tanto en el núcleo como en el citosol:
• Importina: proteína receptora para las proteínas que tienen señal de importación
nuclear
• Exportina: proteína receptora para las proteínas que tienen señal de exportación
nuclear.
En algunos casos el reconocimiento no es directo, debido a que la proteína puede carecer
de secuencia señal e interactuar con una segunda proteína que sí tenga dicha secuencia y
que actúe como un adaptador.
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Ya sea de manera directa o indirecta, las proteínas van a interactuar con sus receptores específicos y, en conjunto,
con las Nucleoporinas. Mediante interacciones de alta afinidad entre las Importinas/Exportinas y Nucleoporinas se
va a mediar el transporte.
Ciclo de entrada y salida a través del poro

Las proteínas de la familia Ran van a interactuar con los receptores dando direccionalidad al transporte
1. La GTPasa llamada Ran le da direccionalidad al transporte a través del poro nuclear. Ran se une a las
proteínas que deben ser direccionadas hacia el núcleo o fuera de él.
2. Si Ran está unida a GDP en el citoplasma puede asociarse al poro nuclear y dirige a las proteínas hacia el
núcleo.
3. Si Ran está unida a GTP dentro del núcleo puede asociarse al poro y se dirige a las proteínas hacia el
citoplasma.
4. Cuando Ran-GDP entra al núcleo, otra proteína, Ran-GEF (factor intercambiador de guanosina) la reconoce
y le cambia el GDP por un GTP. Ahora Ran puede salir.
5. Cuando Ran-GTP sale al citoplasma. Otra proteína Ran-GAP (activador de GTPasa) le saca un fosfato al GTP
de Ran y lo transforma de nuevo en Ran-GDP, ahora puede entrar de nuevo al núcleo.
Una proteína con señal nuclear reconoce a Ran-GDP en el citoplasma, Ran la ayuda a entrar y cuando Ran-GEF le
cambia GDP por GTP en el núcleo, esa proteína se disocia de Ran. Queda en el núcleo.
Una proteína que sale del núcleo reconoce a Ran-GTP en el núcleo, Ran la ayuda a salir al citoplasma y cuando
Ran-GAP corta el fosfato de GTP en el citoplasma esa proteína se disocia de Ran. Queda en el citoplasma.
Por ejemplo, el ARNm no usa sistema Ran-GTP sino que usa un sistema de transportinas que ayudan a pasar en
forma lineal al ARN interactuando con ciertas nucleoporinas. Por otro lado, miRNA y tRNA salen por exportina y
sistema Ran-GTP.
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Dato: la membrana nuclear es continua con el Retículo endoplásmico
LA VÍA SECRETORA es un proceso que involucra dos tipos de transporte: Transmembrana y Vesicular
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TRANSPORTE TRANSMEMBRANA
Característico de proteínas que comienzan su síntesis en el citosol y son direccionadas hacia el interior del Retículo
Endoplásmico (RE) o hacia su membrana.
Este transporte es UNIDIRECCIONAL (desde el citosol hacia el RE) y está mediado por una Secuencia Señal de
aminoácidos hidrofóbicos, ubicada cerca del extremo N-Terminal de la proteína.
1. Cuando una proteína comienza su síntesis en el citosol, a partir del ribosoma emerge un péptido que tiene
la secuencia señal
2. La secuencia señal es reconocida por un receptor específico denominada Partícula de Reconocimiento de
Señal (SRP).
SRP es una Ribonucleoproteína, es decir, una molécula formada por un complejo de proteínas + ARN
pequeños.
3. El efecto que tiene la interacción de SRP con la proteína que está siendo traducida es la detención de la
traducción misma= la traducción queda arrestada.
4. El complejo formado por el Ribosoma + Péptido naciente + SRP difunde por la célula hasta chocar con la
membrana del RE.
5. Sobre la membrana hay receptores para SRP que van a permitir el reanudamiento de la traducción.
6. A través de proteínas adicionales, como translocadores, la traducción va a continuar al inyectar el péptido
que está siendo traducido a la membrana del Retículo.
Por eso, este transporte permite la introducción de un péptido a través de la membrana del RE.
7. Proteínas adicionales harán que algunas proteínas:
a. Se incorporen totalmente a la luz del RE y sean solubles.
b. Queden ancladas en la membrana de este.
Si comparamos SRP con las importinas/exportinas: las importinas/exportinas reconocen proteínas completamente
sintetizadas; en cambio, SRP reconoce el péptido que aún está siendo traducido.
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Dato: no es que hay dos tipos diferentes de ribosomas, sino que su ubicación depende de si el péptido que traducen
tiene la señal o no.
TRANSPORTE VESICULAR
Consiste en el transporte de vesículas que brotan desde un compartimento dador a uno de destino.
Entre el Retículo y el aparato de Golgi→ el RE es el compartimento dador y una cisterna de Golgi es el
compartimento de destino.
El aparato de Golgi tiene una estructura polarizada. Los sacos/cisternas que se encuentran mirando hacia el RE se
los denomina Cara Cis del Golgi, y las cisternas en el extremo opuesto son denominadas Cara Trans.
Los componentes proteicos de las cisternas son diferentes dependiendo de en qué cara se encuentran.
Hay un intercambio de vesículas entre Retículo-Golgi y dentro de este último entre las distintas cisternas.
Flujo/ Transporte Anterógrado (de adentro hacia afuera): las vesículas brotan del RE→ se unen a la red Cis→ pasan
por las cisternas medias→terminan en las cisternas Trans
Flujo/ Transporte Retrógrado: las vesículas van desde la red Trans al RE.
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Cubierta Proteica
¿Cuál es el proceso por el cual se forman las vesículas membranosas?
Las vesículas dentro de las células tienen un recubrimiento proteico que favorece la deformación local de la
membrana para generar el brote vesicular.
Las proteínas que recubren pueden interactuar unas con otras y formar un complejo que adopte espontáneamente
una forma esferoidal. Dicho autoensamblaje puede darse en distintos parches membranosos y arrastrar consigo
componentes membranosos→ esto se da a través de interacciones con proteínas de la membrana.
Una vez formada la vesícula los componentes proteicos se desensamblan y la dejan libre.
¿Cómo se seleccionan las moléculas que serán transportadas en las vesículas?

La cubierta proteica también contribuye a la selección de las moléculas que van a transportar las vesículas. ¿Cómo?
A través de una interacción entre los componentes del revestimiento vesicular con receptores transmembrana
específicos, los cuales van a interactuar con proteínas particulares. De este modo, dado que estos componentes van
a reclutar a algunos receptores y no a otros, van a enriquecer el contenido de las vesículas con aquellas proteínas
que tengan afinidad por estos receptores.
Hay 3 grandes familias de recubrimientos proteicos que participan en distintos segmentos o tramos de las rutas de
transporte vesicular:
a. COP I (COATOMERO I): en el transporte retrógrado,
desde Golgi al RE.
b. COP II: vesículas que brotan desde el RE y van a
fusionarse con la red Cis.
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c. CLATRINA: vesículas que van a brotar de la red trans y
formar los lisosomas.
Estás refieren a subunidades proteicas diferentes entre sí, pero

que tienen algunas características en común que pueden,
incluso in-vitro, autoensamblarse en estructuras esféricas.
¿Cuáles son los mecanismos que determinan la especificidad de reconocimiento de una organela que va a actuar
como el destino de la vesícula?
En este reconocimiento participan diversos tipos de proteínas:
Una de estas familias son proteínas de la familia Rab.
Las Rab también son GTP asas: proteínas que pueden unirse al GTP y modificar su función al hidrolizarlo (=GDP).
Existen muchas familias de proteínas Rab, y cada una de ellas está compuesta de dos clases de componentes:
• Un componente presente en la vesícula que será transportada
• Un componente, complementario al anterior, que va a estar presente en la membrana del compartimento de
destino.
Una vesícula sólo podrá anclarse a una membrana para luego fusionarse a ella, si existe una complementariedad
entre esos dos componentes de la familia Rab.
Está distribución previa y asimétrica de componentes Rab en las vesículas y membranas, va a permitir que solo
ciertas vesículas se fusionen con ciertas membranas de destino.
Por ejemplo, para que una vesícula que tiene un componente Rab 5 se ancle a membranas, estás deben tener el
componente complementario también perteneciente a la familia Rab 5.
Fusión efectiva:
Hay distintos componentes proteicos que participan en un proceso y en otro: Rab para el anclaje y las proteínas
SNARE para mediar la fusión.
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De manera análoga, las proteínas de la familia SNARE tienen un componente que va a estar en la vesícula= el
componente V-SNARE y un componente en la membrana de destino (o Target) = el componente T-SNARE.
También hay distintas subfamilias de SNARE, por lo que dentro de una familia particular una V-SNARE particular
reconocerá a un tipo particular de T-SNARE. Solo cuando se dé el reconocimiento habrá interacción y se permitirá
la fusión.
¿Cuáles son los destinos particulares de las proteínas que van a salir de la red Trans de Golgi?
Dentro de Golgi muchas de las proteínas sufren modificaciones post-traduccionales.
Muchas proteínas son N-Glicosiladas en el RE.
Dicha N-Glicosilación puede sufrir modificaciones en los residuos específicos de oligosacáridos que los conforman,
en su tránsito por Golgi. Es decir, hay un segundo tipo de glicosilación que algunas proteínas pueden sufrir dentro
del aparato de Golgi que es una O-Glicosilación.
Uno de los destinos de las vesículas que brotan de la red Trans es fusionarse con la membrana plasmática, y de este
modo:
✓ Las proteínas que formaban parte de las membranas de las vesículas ahora formarán parte de la membrana
plasmática
✓ Los contenidos solubles del interior de las vesículas van a ser secretados al exterior celular.
Para que una proteína pase a la membrana celular debe llegar a través de una ruta secretora:
1. Durante su síntesis tuvo un péptido señal que permitió que, mientras era traducida, sea incorporada a la
membrana del Retículo
2. Mediante transporte vesicular pasa a través de Golgi
3. Mediante transporte vesicular va desde la red trans a la membrana plasmática.
Esta secreción de vesículas que surgen de la red trans puede ser:
a. Constitutiva: a medida que las vesículas se producen se fusionan directamente con la membrana plasmática
b. Regulada: las vesículas se acumulan y ante señales específicas se produce la fusión
Pej. En las Neuronas los Neurotransmisores, y en Glándulas exocrinas del páncreas.
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Hay un tercer destino posible de las vesículas que brotan de la red Trans de Golgi= los LISOSOMAS.
✓ Son organelas membranosas que se caracterizan por ser un <pequeño sistema
digestivo= dentro de las células.
✓ Contienen en su interior un alto repertorio de enzimas degradativas, por lo que
los componentes que ingresen serán degradados a sus subunidades mínimas
(pej. Las Proteínas serán degradadas a Aminoácidos).
✓ Al conjunto de enzimas degradativas en los lisosomas se las conoce como
HIDROLASAS ÁCIDAS, cuya actividad óptima es de un PH 5; es decir, el interior
de los lisosomas tiene un PH mucho más ácido que el PH neutro del citosol (PH
7).
✓ La acidez en el interior de los lisosomas ha evolucionado para proteger a las
células de las hidrolasas ácidas. El PH5 se da por una bomba de protones que
va a bombear activamente protones dando una alta concentración de ellos y
un PH muy ácido.
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¿Cuál es el origen de los materiales que serán degradados?

Hay distintas rutas que van a llevar materiales de degradación hacia los lisosomas.
a. Aquellas Células que hacen Fagocitosis: los contenidos
del Fagosoma (Pej. en el caso del sistema inmune va a
contener bacterias) van a ser fusionadas a los
lisosomas y los componentes degradativos de estos
van a degradar, por ejemplo, a la bacteria contenida
en el fagosoma.
b. En las Células que hacen endocitosis: aquellos
componentes endocitados van a fusionarse con los
lisosomas y se va a producir la degradación.
c. La autofagia: es un proceso de mantenimiento de la
Célula en la que organelas envejecidas son rodeadas
por una estructura membranosa denominada
Autofagosoma. Los autofagosomas se fusionan con los
lisosomas.
¿Cuál es el origen de las hidrolasas ácidas? Estas son componentes que provienen de la ruta secretora.
Comienzan su síntesis en el citosol y tienen un péptido señal que permite su introducción a la luz del Retículo. Luego
viajan hacia la red Cis del Golgi, pasan hacia los compartimientos Trans y de allí migran en forma de vesículas hacia
los lisosomas.
La secuencia señal lo que le permite a la hidrolasa es interactuar con una proteína que va a modificar uno de los
oligosacáridos que ha adquirido a lo largo de la vía secretora. Así como en otros contextos la señal es el tracto de
aminoácidos mismo, en este caso la molécula que va a actuar como señal es un oligosacárido modificado. El
oligosacárido es modificado de manera tal que en uno de sus residuos de Manosa va a haber una fosforilación
específica, por eso la señal se conoce como Señal De Manosa-6-Fosfato (M6P).
¿Qué determina que en algunas proteínas ese oligosacárido se modifique de este modo?
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Una señal presente en la misma proteína que va a determinar la interacción con la proteína modificadora del
oligosacárido.
En este caso la localización no se va a dar por un receptor que interactúe con la secuencia señal, sino que el
receptor va a reconocer la modificación de un oligosacárido dentro de la proteína. El receptor que reconoce la
señal M6P va a ser reclutado específicamente por un recubrimiento proteico de Clatrina. Recordemos que el
recubrimiento de Clatrina es característico de vesículas que brotan de la red trans y cuyo destino final son los
lisosomas.
¿Una proteína puede tener múltiples señales?
Una proteína puede tener múltiples señales, aquellas proteínas que son completamente incorporadas a la luz del
Retículo, para ser liberados deben tener una señal específica que permita que una peptidasa clive el vestido que la
mantenía anclada a la membrana. Por otro, lado hay proteínas que tienen varios pasos transmembrana y también
tiene múltiples señales de incorporación a la membrana. dependiendo de cuántas veces esa proteína atraviesa la
membrana o si esa proteína va a ser soluble en el lumen del Retículo endoplásmico va a tener distintos tipos de
señales.
MECANISMOS DE LOCALIZACIÓN E IMPORTACIÓN MITOCONDRIAL

Las proteínas que son localizadas en mitocondrias son sintetizadas en ribosomas libres.
El transporte específico de proteínas hacia las mitocondrias se da de una manera postraduccional, es decir culminan
esas proteínas su síntesis en el citosol y son transportadas hacia las mitocondrias en donde hay complejos
específicos de reconocimientos que son los transportes complejos TIN y TON de transporte de mitocondrial.
1. Las proteínas que se dirigen a la matriz mitocondrial son traducidas principalmente en ribosomas libres y
son reconocidas por chaperonas (HSP- 70 citosólicas) que la mantienen desplegada y la presentan a los
translocadores mitocondriales.
2. Para llegar a la matriz atraviesan los translocadores externos (TOM) presentes en la membrana externa de
la mitocondria y los translocadores de la membrana interna (TIM).
3. Una vez en la matriz la proteína es reconocida por chaperonas mitocondriales HSP-70 mitocondrial y HSP60
que le determinan su plegamiento a una estructura terciaria con función.
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SÍNTESIS
La localización está determinada por señales intrínsecas; es decir, que están presentes en estructura primaria de
la proteína y que muchos casos actúan como una secuencia señal que puede interactuar con distintos tipos de
componentes celulares para inducir esa localización.
Los mecanismos particulares de transporte pueden distinguirse en tres grandes clases:
a. Transporte a través de compuertas: se caracteriza por el transporte entre citosol y el núcleo a través de
los complejos del poro nuclear. Mediado por receptores de señales de importación y exportación nuclear.
b. Transporte a través de membranas: desde el citosol hacia la luz del Retículo endoplásmico. Ocurre de manera
co-traduccional involucra un péptido señal, reconocido por una partícula de reconocimiento de la señal,
que a transporta al ribosoma a que continúe su traducción a través de la membrana del Retículo.
c. Transporte vesicular: se caracteriza por qué la producción de las vesículas y la Selección del contenido iba
a estar mediada por un recubrimiento proteico particular, que dependiendo cual sea el subsegmento de la
ruta en la que ocurriera, van a participar o familias de la proteína de Clatrina, COP II o COP II. La
especificidad de transporte, es decir que una vesícula se fusiona a un compartimiento de destino y no a
otro, depende de dos grandes familias de proteínas: las proteínas Rab y las proteínas Snare; a su vez cada
una de estas sus familias de proteínas tiene componentes tanto en la vesícula como en la membrana de
destino, que tienen una reacción de complementariedad específica que le va a dar este reconocimiento.
ENFERMEDADES
✓ Defectos en la degradación de proteínas y/o componentes de la célula en los lisosomas
Son responsables de más de 30 enfermedades congénitas humanas diferentes, que se denominan
enfermedades de depósito lisosómico.
La enfermedad se produce por acumulación del sustrato. El depósito de las moléculas no degradadas produce
disfunción celular en los tejidos y órganos y visceromegalia. La mayoría de estas enfermedades se deben a
deficiencias en una única enzima de direccionamiento de proteínas hacia los lisosomas.
Por ejemplo, el Síndrome de Hurler (iduronato sulfatasa): se debe a una deficiencia en la enzima que cataliza
el primer paso en el marcaje de las enzimas lisosómicas con Manosa 6-fosfato en el aparato de Golgi. El
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resultado es una alteración generalizada en la incorporación de las enzimas lisosómicas a los lisosomas.
✓ Problemas en el direccionamiento de proteínas de membrana
Fibrosis Quística: es un ejemplo recurrente en nuestra materia en la cual el anormal funcionamiento de un
canal de cloro induce la enfermedad.
Existen diferentes tipos de mutaciones en el gen de la fibrosis quística que llevan a enfermedad. Un tipo de
mutaciones (Tipo II) involucra modificaciones en la proteína que impiden su plegamiento y correcto pasaje
por el Retículo endoplasmático rugoso. La misma se acumula en RER y no es presentada en la membrana
plasmática donde cumple su función.
✓ Parkinson y su relación con Mitofagia
La etiología del Parkinson es variada, sin embargo, existe una asociación directa entre anomalías
mitocondriales y la inducción de muerte celular de neuronas dopaminérgicas en la enfermedad. Diferentes
reportes sugieren que proteínas encargadas de señalizar la mitocondria para su degradación y recuperación
mediante el proceso de mitofagia (Parkina/PINKI) están alterados durante el curso de la enfermedad.
FUNCIONES DE LAS DISTINTAS ORGANELAS

Envoltura nuclear
• La existencia de un núcleo es la principal característica que diferencia a una célula eucariota de una
procariota.
• La presencia de una doble membrana delimitando al núcleo permite la aparición de mecanismos de
regulación de la expresión génica que no ocurren en procariotas.
• Los ARNs eucariotas sufren un proceso de maduración en el núcleo antes de ser transportados al citosol
para su traducción o función.
• La envoltura nuclear limita el acceso de factores transcripcionales desde el citosol al núcleo.
REG
• Síntesis y modificaciones de proteínas de membrana, lisosomales y de exportación (N-Glicosilación (Asp) y
formación de proteínas GPI).
• Agregado a la N–Asparagina de la proteína un oligosacárido formado por 14 monosacáridos
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• Participar en el plegamiento de la proteína

• Controlar el plegamiento proteico. Determinar si la proteína está correctamente plegada.
Golgi
• Procesamiento y glicosilación de proteínas (N- y O-glycosylation).
• Distribución y exportación de proteínas (Ej. Manosa-6-fosfato <Man-6P=).
• Síntesis del fosfolípido esfingomielina y de glicolípidos.
REL
• En el REL se sintetizan nuevos fosfolípidos (Cara citosólica de
la membrana del REL) síntesis de fosfatidilcolina
• En la cara externa del REL a partir de los ácidos grasos y el
glicerol-fosfato por reacciones enzimáticas: se generan los
lípidos de membrana fosfatidilcolina que a su vez pueden ser
modificados.
• Glucogenólisis
• Detoxificación de compuestos liposolubles.
• Síntesis de Lípidos (fosfolípidos y colesterol)
• Síntesis de hormonas esteroides (sintetizadas a partir del
colesterol)
• Reservorio de Ca2+ intracelular
TRANSPORTE PASIVO no requiere gasto de energía. Es el desplazamiento de moléculas de una región de mayor
concentración a una de menor:
DIFUSIÓN SIMPLE: si puede difundir a través de la bicapa o de canales abiertos. Se produce gracias al gradiente
de concentración y a favor de este.
DIFUSIÓN FACILITADA: si para atravesar la membrana se requiere de un transportador (Carrier) o de un canal. Los
Carriers y canales son proteínas integrales. Es un transporte a favor del gradiente de concentración.
TRANSPORTE ACTIVO requiere de energía. Ocurre en contra del gradiente de concentración
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POR BOMBAS: ocurre a través de bombas = proteínas integrales con doble función de enzimas y canales
EN MASA:
- ENDOCITOSIS
Entrada de material extracelular en vesículas formadas a partir de la membrana plasmática.
Fagocitosis: Entrada de partículas grandes, como bacterias a la célula
Pinocitosis: Entrada de fluidos o moléculas al interior de una célula mediante vesículas pequeñas.
Los endosomas son considerados parte del sistema de endomembranas.
Endocitosis en fase fluida: Entrada no selectiva de fluidos extracelulares durante la endocitosis producida
por invaginación de la membrana plasmática.
Endocitosis mediada por receptor: Entrada selectiva de macromoléculas que se unen a receptores de la
superficie celular, las moléculas se concentran en depresiones revestidas por clatrina. Clatrina sirve de
canasta para la formación rápida de invaginaciones de la membrana plasmática.
Hay dos tipos de endosomas:
Tardíos: se produce la digestión celular, cuando maduran van a formar lisosomas
Tempranos: estructuras que distribuyen vesículas, importantes en la distribución de vesículas en células
polarizadas.
- EXOCITOSIS: salida del material intracelular
AUTOFAGIA
Consiste en el recambio gradual de los propios componentes de la célula. Es una función presente en todas las
células, es crítica durante los procesos de apoptosis o muerte celular programada. Separado en:
• Macroautofagia: La carga es secuestrada dentro de una vesícula citosólica, de doble membrana un
autofagosoma.
• Microautofagia: Secuestro de componentes citosólicos directamente por los lisosomas por medio de
invaginaciones de la membrana.
• Autofagia mediada por chaperonas: translocación de proteínas no plegadas a través de la membrana
lisosomal por la acción de chaperonas citosólicas y lisosomales Hsc 70 y el receptor integral de membrana.
No hay formación de vesículas y fusión de membranas.
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Dinámica del citoesqueleto y de las membranas

celulares
¿Cómo está formado el citoesqueleto?
Por tres conjuntos de filamentos:
• Microtúbulos: se forman a partir del Organizador Microtubular, del Centrosoma. Son estructuras tubulares
de 25nm de diámetro, formados por una unidad beta y alfa tubulina (se organizan en 13 protofilamentos
que forman la pared del microtúbulo) que le confieren una organización polarizada.
• Filamentos de actina: distribuidos por toda la célula; más concentrados en la parte periférica.
• Filamentos intermedios
Tanto los microtúbulos, los filamentos de actina y la mayoría de los filamentos intermedios se encuentran en un
compartimiento celular→ el Citosol. Un único tipo de filamentos intermedios se encuentran en el núcleo.
Estos tres conjuntos de filamentos tienen un comportamiento común:
• Se forman a partir de monómeros que se polimerizan. Hay un equilibrio entre los monómeros y los filamentos
donde estos se han polimerizado.
• Los monómeros están formados por las subunidades: alfa y beta tubulina, que se disponen unidas y
confieren una estructura polar.
• Son polímeros de subunidades proteicas unidas por interacciones no covalentes. Es decir, están formados
por muchos protofilamentos.
• Las subunidades se ensamblan y desensamblan espontáneamente en soluciones acuosas.
DINÁMICAS
DINÁMICA DE LOS MICROTÚBULOS
La polimerización y la despolimerización de los microtúbulos es un fenómeno dinámico que depende de la unión a
GTP, debido a que la hidrólisis de GTP tiende a desorganizarlo.
El extremo del microtúbulo está formado por alfa y beta tubulinas con GTP = se mantiene polimerizado y favorece
el crecimiento. Ante una hidrólisis rápida del GTP los microtúbulos se desorganizan y rápidamente desaparecen =
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inestabilidad dinámica.
Los microtúbulos se organizan a partir de Centrosomas: centros de nucleación que favorecen la polimerización de
la tubulina. Tienen dos centriolos y una atmósfera rica en proteínas; dentro de la atmósfera la gamma tubulina
cumple un papel fundamental en la nucleación, porque permite el crecimiento de microtúbulos.
Los microtúbulos tienen una mayor estabilidad durante el periodo de interfase. La estabilidad depende de la
asociación a proteínas denominadas Proteínas Asociadas a los Microtúbulos.
Pej. La Ketamina produce la destrucción de los microtúbulos, en tanto Capping (Cap) favorece su estabilización.
Va a haber una distribución asimétrica de los componentes de la célula y una estructura diferencial
Dentro de las proteínas asociadas a los microtúbulos hay Proteínas Motoras que hidrolizan ATP y convierten la
energía química en energía mecánica, permitiéndoles deslizarse a lo largo de los microtúbulos (como si los
microtúbulos fueran las vías de un tren). Hay dos familias de proteínas motoras:
• Las Kinesinas: caminan hacia el extremo + del microtúbulo, es decir, se alejan del centrosoma
• Las Dineínas: se acercan al centrosoma (extremo -).
Estas moléculas tienen una importancia fundamental debido a que permiten el transporte de vesículas a lo largo
de los microtúbulos y, además, permiten que las organelas tengan una localización diferencial a lo largo de la célula
(fundamental para el mantenimiento de la polaridad celular).
Entonces, todas las organelas que se encuentran en la parte
más periférica de la célula son transportadas por las kinesinas
hacia el extremo positivo de los microtúbulos; mientras que
aquellas que se encuentran más cercanos al núcleo y el
centrosoma, es decir, más cercano al polo negativo, son
transportados por las dineínas.
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DINÁMICA DE LOS FILAMENTOS DE ACTINA

Los filamentos de actina están compuestos por unidades de Actina
globular que se unen a ATP y tienden a polimerizarse y
despolimerizarse cuando lo hidroliza a ADP.
La velocidad de polimerización depende de la concentración de
subunidades libres.
La hidrólisis de nucleótidos difosfato regula las constantes de
asociación y disociación.
Los filamentos de actina, al igual que los microtúbulos, tienen proteínas asociadas que capturan las subunidades e
impiden que estás polimericen→ favoreciendo así la despolimerización.
• Profilina: favorece la polimerización
• Tropomiosina: estabiliza los filamentos de actina
Formina: permite la polimerización
• Arg ⅔: es un complejo importante porque permite la nucleación y la formación de ramificaciones de los
filamentos de actina
• Cap: estabilizan los filamentos en el extremo +
• Tropomodulina: estabilizan los filamentos en el extremo -
Hay otras proteínas, en la parte inferior, que son muy importantes para establecer relaciones entre distintos
filamentos de actina= da una distinta estructura tridimensional a las estructuras formadas por dichos filamentos.
Los filamentos de actina también tienen polaridad. Cuando hablamos de extremo + y - nos referimos al extremo que
se polimeriza más fácil (-) y al que se despolimeriza más fácil (+).
Los filamentos de actina también tienen Proteínas Motoras asociadas de la familia de las Miosinas:
• De tipo I: pueden caminar sobre la actina y moverla a lo largo de la membrana plasmática.
• De tipo II: al unirse entre haces antiparalelos de actina, movilizan los filamentos acercandolos= contracción
muscular.
• De tipo III: camina sobre la actina transportando vesículas.
La Miosina hidroliza ATP, convierte la energía química en mecánica y camina sobre los filamentos de actina.
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Hay distintos tipos de miosina, algunas permiten el deslizamiento de los filamentos de actina entre sí y otros su
relación con componentes membranosos.
DINÁMICA DE LOS FILAMENTOS INTERMEDIOS

Los Filamentos Intermedio son particularmente abundantes en células que están
sometidas a grandes tensiones mecánicas, por ejemplo, en epitelios. De esta manera,
defectos en la integración de los filamentos intermedios pueden generar
alteraciones selectivas de algunos tejidos específicos.
Están formados por un grupo muy heterogéneo de filamentos→ que no están en todas las células, a diferencia de
los microtúbulos y filamentos de actina. Pej. Las Queratinas están en los epitelios y los Neurofilamentos en las
Neuronas.
Hay un grupo aparte→ las Láminas Nucleares: se encuentran en el núcleo y regulan la organización de la envoltura
nuclear.
A diferencia de los microtúbulos y de los filamentos de actina, están formados por unidades filamentosas y no por
unidades globulares. Las unidades filamentosas se unen formando dímeros y estos a su vez se unen, de forma opuesta
y paralela, formando 8 tetrámeros= los filamentos intermedios no tienen polaridad.
Los tetrámeros constituyen la unidad del filamento intermedio y se ponen de extremo a extremo formando una
cuerda de gran elasticidad.
Los filamentos intermedios tampoco tienen proteínas asociadas ni proteínas motoras relacionadas. Participan en
procesos de resistencia mecánica de la célula, en tanto que los filamentos de actina y los microtúbulos son menos
resistentes y participan en fenómenos dinámicos.
Otra gran diferencia con los filamentos de actina y microtúbulos es que estos se encuentran en todas las células,
mientras que los filamentos intermedios no.
Mientras que en los microtúbulos y filamentos de actina la asociación lateral se hace a través de proteínas
asociadas… la relación lateral entre los distintos filamentos intermedios se establece por Zonas Laterales Amino y
Carboxilo Terminal, de las proteínas que permiten que se relacionan entre sí.
¿Cómo participan estas moléculas en la formación y el mantenimiento de la polaridad celular?
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POLARIDAD CELULAR
Usaremos como ejemplos dos tipos celulares: Células del epitelio y células mesenquimáticas.
¿Qué es la polaridad celular?
Se refiere a que las células tienen componentes estructurales y bioquímicos
organizados en forma diferencial.
• En el epitelio (pej. del intestino): la membrana apical tiene
microvellosidades y la membrana basolateral tiene otras
especializaciones de membrana. Además, la organización del
citoesqueleto es asimétrica. Esta polaridad es de tipo estable y
perdurable.
• En las células mesenquimáticas: hay una polaridad de tipo transitoria,
dado que la estructura del fibroblasto puede variar, debido a que
depende si está migrando o no.
Entonces, tanto en los epitelios como en las células mesenquimáticas se puede observar una polaridad y los
componentes del citoesqueleto son fundamentales en su mantenimiento.
¿Cómo se origina la polaridad celular?

La adquisición de polaridad celular son eventos que
requieren de un ordenamiento interno de componentes de la
célula, dictados por eventos intrínsecos (propios de la célula)
y extrínsecos (extracelulares) que son detectados y
organizados para obtener polaridad.
LOS DETERMINANTES DE LA POLARIDAD CELULAR son moléculas
(ARN o Proteínas) que si se encuentran organizadas en forma
asimétrica cuando la célula se divide → las hijas van a tener
una composición macromolecular distinta.
Esta polarización puede surgir como consecuencia de señales
que se reciben en un sector de la célula y no en otro. Las
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células madre pueden dividirse de forma simétrica dando dos
células semejantes o en forma asimétrica dando dos células
distintas.
a) En respuesta a una señal externa la célula se polariza por segregación de las moléculas determinantes del
destino celular
b) Las células madre que contactan con un nicho de células madre orientan el huso mitótico originando dos
células diferentes.
ESTABLECIMIENTO DE LA POLARIDAD EN LAS CÉLULAS EPITELIALES

El establecimiento de polaridad de las células epiteliales depende de su adhesión con células vecinas. Dicha adhesión
puede hacer que se forme un Complejo de Unión que regule en forma positiva la expresión de determinadas
moléculas en la zona apical y en la zona basolateral.
Es decir, la formación de Uniones de Anclaje regula la ubicación de las moléculas e inicia la diferenciación de ambas
zonas de la membrana, además, también lleva a una redistribución del citoesqueleto y a una composición diferencial
de los componentes que forman parte de la membrana apical y de la basolateral.
La composición diferencial es mantenida por un tipo especial de uniones llamadas Uniones Estrechas.
Las Uniones Estrechas impiden que las moléculas pasen entre las células, y que proteínas de la membrana apical
pasen a la zona basolateral y viceversa; manteniendo así la polaridad de la membrana plasmática.
Sabemos que a partir del aparato de Golgi se forman vesículas que, por exocitosis, pueden aportar su membrana a
la membrana plasmática, y esto implica que el destino de las vesículas que van a la membrana apical sea distinto
al de las vesículas que van a la basolateral. Las vesículas que van a la membrana apical tienen señales que les
permite unirse sólo con esa membrana y viceversa. Es decir, el aparato de Golgi también participa en mantener la
polaridad.
Mediante un proceso llamado Transcitosis hay tránsito de vesículas de la parte apical a la basolateral y viceversa.
Este proceso está regulado por los Endosomas Tempranos, que permiten que vesículas de la membrana apical
vuelvan a esta (reciclaje).
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Hay uniones que permiten anclar el citoesqueleto de una célula al citoesqueleto de otra:
• Uniones de adherencia: relaciona los componentes del citoesqueleto de actina de ambas células.
• Desmosomas: relaciona los componentes de filamentos intermedios de ambas células.
Y hay moléculas que participan en las distintas uniones:
• Cadherinas: participan en las uniones adherentes
• Desmocolinas: participan en la formación de los desmosomas
• Ocludinas y Claudinas: participan en la formación de las uniones estrechas
También hay canales formados por conexinas que forman Uniones Nexus que permiten el pasaje de moléculas
pequeñas entre las células.
Para poder modelar la polaridad celular se necesita de la estabilización de microtúbulos = genera protrusiones o
cambios en la célula.
¿Qué rol cumplen los filamentos intermedios?
En el epitelio los filamentos intermedios cumplen una función mecánica de mantención de la estructura. De esta
manera, defectos en la integración de los filamentos intermedios pueden generar alteraciones selectivas de algunos
tejidos.
MIGRACIÓN CELULAR Tomamos de ejemplo los neutrófilos.

1. Tenemos un neutrófilo que circula por la sangre y no tiene polaridad morfológica evidente.
Por su parte, el endotelio tiene moléculas que impiden la adhesión para así facilitar la fluidez de la sangre.
2. Ante la aparición de un proceso inflamatorio hay señales intercelulares que influyen sobre la función del
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endotelio y hacen que éste exprese Selectinas y otras moléculas de adhesión.
3. La expresión de estas moléculas va a permitir que el neutrófilo se una débilmente, rolle sobre la molécula
de adhesión y active las Integrinas → las cuales permiten una adhesión más estable.
4. Las integrinas se van a unir con otras proteínas de adhesión de la familia CAM en el endotelio
5. El neutrófilo deja de rolar y se produce la extravasación (migración del neutrófilo entre las células
endoteliales).
Las integrinas están unidas a focos de adhesión donde los filamentos de actina,
en forma antiparalela, se encuentran organizados; esto permite que la unión sea
fuerte, dado que están ancladas al citoesqueleto de actina.
Se produce una polaridad transitoria del neutrófilo (diapédesis) y un frente de
avance.
1. En el frente de avance se produce la protrusión con polimerización de
actina
2. En la parte posterior se produce retracción con la acción de la miosina
sobre los filamentos de actina
3. Mientras va avanzando se adhiere a la matriz extracelular, en dicha
adhesión participan las integrinas unidas al citoesqueleto de actina
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La membrana plasmática aumenta en el centro de avance por la exocitosis y disminuye en la zona de retracción
por endocitosis.
El fenómeno de señalización que se produce debe ser localizado, y una forma mediante la cual se focaliza la
señalización en el citoesqueleto del frente de avance es a través de Las Balsas Lipídicas.
Las Balsas Lipídicas son zonas de la membrana plasmática de menor fluidez, dado que tienen más esfingolípidos y
colesterol. Se llaman Balsas porque se mueven sobre el resto de la membrana (que es más fluida) y allí se concentran
proteínas que participan en el proceso de señalización.
Las principales moléculas de adhesión son:

• Cadherinas E: son dímeros de moléculas de glicoproteínas de
membrana que permiten la adhesión entre dos células vecinas
(por ejemplo, entre dos células epiteliales) formando las
uniones adherentes. Homofilas
• CAM (molécula de adhesión celular): permite la adhesión
entre células vecinas transitorias. Homofilas
• Integrinas: permiten la adhesión entre la célula y la matriz
extracelular estable. Heterofilas
También pueden unirse en forma heterofila a las proteínas
CAM.
• Selectinas P: glicoproteínas que se unen a hidratos de
carbono de otras membranas transitoriamente.
En el ejemplo del neutrófilo:

1. El endotelio expresa Selectina
2. La Selectina se une a los hidratos de carbono del neutrófilo
3. El neutrófilo empieza a rolar y expresa integrinas
4. Las integrinas se adhieren establemente a proteínas CAM que están en el endotelio = esta adhesión más
estable le permite al neutrófilo dejar de rolar.
Entonces, la adhesión intercelular y la adhesión de la célula con la matriz extracelular es un fenómeno fundamental
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que participa en el establecimiento y mantención de la polaridad celular, y mantenimiento de los epitelios.
Las proteínas de adhesión son transportadas al endotelio por el Transporte Vesicular.
Para que se produzca la migración: la célula debe degradar la matriz extracelular y debe secretar
Metaloproteasas→enzimas que degradan la matriz extracelular y participan en la disminución de la adhesión.
DIVISIÓN CELULAR ¿Cómo participa el citoesqueleto en la división celular?

Prometafase: hay un cambio en las láminas nucleares que se encuentran formando una red debajo de la envoltura
nuclear, dado que por su fosforilación→ la envoltura se desorganiza.
Los fenómenos por los cuales los cromosomas se dirigen a la línea ecuatorial durante la prometafase son:
✓ La polimerización y despolimerización de los microtúbulos: la despolimerización tiende a acercar los
cromosomas hacia el extremo del centrosoma y la polimerización a alejarlos.
✓ Los microtúbulos están unidos al cinetocoro por proteínas motoras: la Dineína va a caminar hacia el extremo
negativo y se va a unir al cinetocoro, por lo que cuando hay despolimerización va a llevar a la cromátides
al extremo del centrosoma (negativo); las Kinesinas hacen lo contrario.
Anafase: el huso mitótico es formado por los microtúbulos. En la organización del huso mitótico participa un cambio
en la dinámica de los microtúbulos.
Los microtúbulos se hacen más inestables que en la interfase y forman el huso mitótico.
La desorganización de la envoltura nuclear permite la relación de los cromosomas con los componentes
microtubulares del huso mitótico. Los microtúbulos se relacionan con los cromosomas por su extremo positivo.
Durante la Anafase los cromosomas son tirados hacia ambos polos. La despolimerización de los microtúbulos más la
dineína hacen que la cromátida se dirija hacia un polo por acortamiento. Se agranda el huso mitótico por acción
de la dineína y por deslizamiento de los microtúbulos polares por kinesina.
Telofase: un anillo contráctil es formado por filamentos de actina en relación con Miosina tipo II.
Citocinesis: se forma una organización de haces antiparalelos de actina en el medio del cual se organiza la miosina.
La miosina desliza los filamentos de actina entre sí, cierra el cinturón y permite la separación de las células.
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CILIOS
Los componentes del citoesqueleto pueden formar estructuras macromoleculares como los Cilios.
Los cilios son evaginaciones de la membrana que tienen un citoesqueleto conformado por microtúbulos.
Constan de 9 pares de microtúbulos periféricos, y 1 par central. Los microtúbulos están
unidos por Conexinas (proteínas nexinas que se unen entre sí).
Dineína Ciliar: una Proteína Motora Especial que permite el movimiento entre los
microtúbulos y, por lo tanto, el movimiento de las cilias.
Los Cilios se forman a partir de los Cuerpos Basales: centros organizadores (~a los
centriolos), que se disponen abajo de la membrana plasmática y permiten la
polimerización de los microtúbulos que forman el Axonema.
El Axonema: es el esqueleto de los cilios, tiene 9 pares periféricos y 1 par central. El
extremo + está en el extremo distal del Cilio y el - en el cuerpo basal.
El cuerpo basal proviene de los centriolos que no forman parte de los centrosomas.
¿Cómo se produce el movimiento ciliar?

Los Cilios Secundarios tienen movilidad debido a que poseen función motora -al deslizar una sustancia sobre la
superficie célula-.
La Dineína 2 tiende a caminar sobre el microtúbulo vecino hacia la parte -.
Si los microtúbulos no estuviesen unidos por el Axonema se deslizarían uno sobre otro, pero como sí lo están: el
movimiento que realiza la Dineína 2 hace que, en lugar de deslizarse uno sobre otro, los microtúbulos se curven
(curvando el cilio) = Movimiento Ciliar.
Los Cilios Primarios (uno por célula): tienen un axonema formado por 9 pares de microtúbulos y no tiene un par
central. Estos cilios no tienen función motora, tienen función sensorial.
@necroticaenfmed
A lo largo de los cilios primarios y secundarios hay transporte vesicular, el cual se realiza a través de kinesinas que
van del extremo - al extremo + de los microtúbulos; porque a medida que el Cilio crece debe agregarse membrana.
Entonces, podemos decir que la polimerización de los microtúbulos permite el crecimiento de los Cilios Primarios y
Secundarios.
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Bioenergética
ENERGÍA METABÓLICA
La energía metabólica es la energía que obtienen todos los seres vivos a partir de la energía química contenida
en los alimentos o nutrientes.
Los organismos transforman la energía química contenida en los enlaces químicos de los alimentos en energía
útil para la célula.
MITOCONDRIAS
✓ Son organelas compuestas por dos bicapas lipídicas formadas por una membrana mitocondrial:
o Externa: tiene un alto número de proteínas que funcionan como poros acuosos permeables. Es
altamente permeable.
o Interna: es más amplia en superficie y se encuentra
replegada al interior de la mitocondria, formando
una serie de crestas. Tiene una composición
bioquímica diferente a la externa, dado que su
proporción de proteínas es mucho más alta, posee
distintas clases de fosfolípidos y es altamente
impermeable.
✓ Hay espacios funcionales dentro de las mitocondrias:
o Espacio Intermembranoso: entre la membrana interna y externa.
o Espacio Matriz Mitocondrial: en el interior de la membrana interna, es más amplio.
✓ Son movidas en el interior de las células por proteínas motoras adosadas a su superficie, que permiten
que las mitocondrias se desplacen a través de los microtúbulos.
✓ Sufren muchos procesos de fisión y fusión, es decir, muchas mitocondrias se funden entre sí y también
se separan.
✓ Teoría endosimbiótica: esta teoría señala que las mitocondrias provienen de bacterias aeróbicas que
se introdujeron en el interior de las células eucariotas primitivas.
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Una prueba que sustenta esta teoría es que en el interior de las mitocondrias hay ADN mitocondrial, el
cual tiene una estructura similar a los genomas bacterianos (circular, no núcleo).
El genoma mitocondrial humano codifica para 37 genes, de los cuales 13 codifican para cadenas
polipeptídicas que van a formar parte de proteínas dentro de la cadena de transporte de e-.
Esos 13 péptidos son transcritos y traducidos en el interior de la Matriz Mitocondrial.
✓ Las Mitocondrias NO son una entidad independiente, debido a que hay muchas proteínas distintas que
forman parte de la estructura mitocondrial. Son un sistema mixto, dado que los componentes que las
forman van a estar codificados, en parte minoritaria, por el genoma mitocondrial y, en parte
mayoritaria, por el genoma nuclear.
✓ Funciones:
o Bioenergética: permiten la síntesis de ATP celular
o Reservorio intracelular de calcio
o Señalización intracelular durante la apoptosis: conduce a algunos de los tipos de apoptosis
o Participa en la esteroideogénesis: participan en la biosíntesis de las hormonas derivadas del
colesterol (Pej. estrógeno y testosterona). La síntesis de dichas hormonas comprende un camino
biosintético, el cual comienza en las mitocondrias y luego pasa al REL para continuar. Entonces,
algunas reacciones de la producción de hormonas esteroideas se dan en las membranas de la
mitocondria. La función puede cambiar y ser más preponderante en algunos tipos celulares
específicos.
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BIOENERGÉTICA: SÍNTESIS DE ATP CELULAR

Algunos conceptos previos...
• Reacciones químicas:
o Espontáneas: son aquellas que no necesitan energía para poder producirse, dado que se producen
liberando energía al medio. La energía contenida en los enlaces covalentes es liberada al ambiente
celular. A→ B + C
Pej. Todas las reacciones del catabolismo, degradación de moléculas y producción de aminoácidos libres
a partir de un péptido.
o No espontáneas: necesitan energía para poder producirse. Generan nuevos enlaces químicas para lo
que necesitan tomar la energía. Las células realizan muchas reacciones No espontáneas. D + E → F
Pej. Las reacciones de biosíntesis o del anabolismo.
¿Cómo hacen las células para generar reacciones no espontáneas?

La solución celular es acoplar reacciones, es decir, producir de manera simultánea una reacción que libere
energía, y dicha energía sea utilizada de manera paralela por una reacción no espontánea.
Dicho de otro modo, el acoplamiento de reacciones químicas cuando una reacción
espontánea se produce en el mismo momento de una no espontánea→permite que la
energía liberada por una de las reacciones sea utilizada en la otra.
Esta reacción de liberación de energía espontánea dentro de las células es la hidrólisis del ATP, es decir, la
ruptura de un enlace covalente de alta energía entre un grupo fosfato.
A medida que las células van realizando reacciones no espontáneas, los niveles de ATP dentro de ellas van
disminuyendo.
¿Cómo se recuperan los niveles de ATP a partir de ADP y fosfato?
Las reacciones que ocurren para regenerar el ATP van a ser las Reacciones de óxido-reducción, las cuales se
producen de manera simultánea
Es la reacción por la cual una molécula pierde electrones (e-) mientras que otra molécula los gana. La molécula
que pierde e- se ha oxidado y la molécula que los gana se ha reducido.
Este pasaje de e- de una molécula a otra, es una reacción que puede ocurrir de
manera espontánea cuando el potencial de reducción de la molécula que acepta
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los e- es mayor que el potencial de reducción de la molécula que los libera.
Cada molécula, por su propia estructura, tiene distintos grados de afinidad por
los e-→ mientras menor sea la afinidad más fácil será que los libere.
Potencial de Reducción: magnitud por la cual se cuantificar químicamente la afinidad por los e -. Mayor
Potencial = Mayor Afinidad.
Las reacciones dentro de las células están catalizadas por enzimas, quienes por su estructura peptídica son
pobres aceptores de e- y, por lo tanto, tienen una capacidad limitada para catalizar las reacciones Oxido-
Reducción.
Para poder catalizar las enzimas reciben ayuda de moléculas auxiliares orgánicas denominadas Coenzimas, las
cuales actúan como receptoras temporarias de e-
• Coenzima NAD +: existe en una forma oxidada y, al aceptar 2e- de algún otro sustrato, puede
transformarse en una variante reducida = NADH (no tiene una carga neta negativa porque en el medio
hay protones y se protona por 1 de ellos)
• FAD (forma oxidada): es una molécula orgánica que en su estado basal es neutra y cuando acepta 2e -
de algún sustrato queda con dos cargas negativas qué son neutralizadas por dos protones= FADH2
(forma reducida).
CATABOLISMO DE HIDRATOS DE CARBONO
¿Cuáles son los caminos enzimáticos y bioquímicos que van
a conducir a la producción de ATP celular?
El Catabolismo de los Hidratos de Carbono es cuando las
células utilizan glúcidos como fuente de energía. La
energía estará contenida en los enlaces covalentes
carbono-carbono de esa molécula.
Para obtener energía de los hidratos de carbono →un
conjunto de 10 reacciones ocurren en el citosol= Glucólisis.
La Glucólisis se genera a partir de la Glucosa de 6 Carbonos
(C)→ 2 Piruvatos de 3C.
Los e- que han salido de la ruptura de esos enlaces
covalentes son almacenados en las formas reducidas de Coenzimas.

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Fosforilación a Nivel de Sustrato

Es una reacción en donde se utiliza en forma directa la energía, liberada por la ruptura de los enlaces covalentes,
y se genera una molécula de ATP a partir de ADP + Fosfato. Sin embargo, la formación de ATP de este modo es
un proceso bioquímicamente ineficiente dado que se disipa mucha energía en forma de calor.
Por ende, la forma de obtención de ATP en la glucólisis es una producción pobre desde un punto de vista de la
eficiencia.
¿Qué ocurre con la energía contenida en los enlaces covalentes del piruvato y en las coenzimas reducidas?
El próximo paso del Catabolismo de los Hidratos de Carbono, va a ocurrir dentro de las Mitocondrias.
1. Un Piruvato 3C ingresa a la Matriz Mitocondrial a través de transportadores (que están en la membrana
mitocondrial externa e interna).
2. En el interior de la Matriz Mitocondrial el Piruvato pierde uno de sus átomos de carbono (es liberado
en forma de CO2) = Piruvato 2C, y nuevamente se va a generar una coenzima reducida que va a absorber
los e- que surjan de la ruptura de ese enlace covalente.
3. Los 2C restantes se fusionaron con la Coenzima A, quien tiene un rol
fundamental en el metabolismo de las Células.
4. La Coenzima A permite formar un enlace de alta energía con los 2C
del Piruvato (grupo acetilo) = Acetil CoA.
Y, como no hay ninguna enzima que pueda utilizar al grupo acetilo aislado como sustrato, se llevarán a cabo
otras reacciones...
CICLO DE KREBS (no hay que saber los pasos o nombres de enzimas del ciclo, solo comprender qué sentido tiene en la producción de ATP)
El Acetil CoA va a ser el primer sustrato de un conjunto de reacciones que van a tener como objetivo final:
permitir que las enzimas rompan los enlaces covalentes que le quedan al grupo acetilo y liberan la energía
contenida en forma de e-, que serán almacenados por las enzimas NADH y FADH2.
1. Se une Acetil CoA (2C) a Oxalacetato (4C) = Ácido Cítrico (6C)
El Oxalacetato es una molécula presente en la matriz mitocondrial
2. El Ácido Cítrico es un sustrato posible para enzimas celulares, quienes irán clivando los enlaces
@necroticaenfmed
covalentes= liberando el carbono en forma de CO2 y generando coenzimas reducidas que van a tomar
los e-.
3. En la última reacción se regenera el Oxalacetato.
El resultado final es que se van a ir acumulando, en la matriz mitocondrial, niveles de coenzimas reducidas.
CATABOLISMO DE LOS ÁCIDOS GRASOS

¿Qué ocurre cuando el nutriente que se utiliza como fuente de energía no es un Hidrato de Carbono, sino un
Lípido?
Los lípidos más frecuentemente utilizados en el catabolismo son los ácidos grasos.
Los ácidos grasos provienen usualmente de los triacilgliceroles que consumimos de grasas y aceites. Cada una
de las moléculas de los ácidos grasos que componen a los triglicéridos tiene un número de uniones covalentes
carbono-carbono mucho más alto que el número de enlaces covalentes de una molécula de hidratos de carbono,
por lo cual los ácidos grasos son una reserva superior de energía.
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¿Cómo se obtiene energía a partir de ellos?

Los ácidos grasos ingresan por difusión a la matriz mitocondrial y allí van a sufrir una serie de 4 reacciones
bioquímicas conocidas como B-Oxidación.
La B-Oxidación implica asociar al ácido graso a una Coenzima A y en una serie de 4 reacciones generar una
ruptura de este para así obtener Acetil CoA.
Por cada vuelta que da este ciclo el ácido graso termina siendo reducido en dos carbonos. Un ácido graso con
20 átomos de carbono podrá generar 10 moléculas de acetil-CoA a medida que el ciclo se repita.
Si comparamos cuántas moléculas de acetil-CoA forma un hidrato de carbono (2), no sólo se generan más
moléculas de acetil-coa desde el ácido graso, sino también más enzimas reducidas.
El destino del acetil-CoA va a ser el Ciclo de Krebs y por esto decimos que el Ciclo de Krebs es un punto de unión
de vías bioquímicas diferentes.
Las enzimas que catalizan la B-Oxidación también están presentes en otras organelas celulares como los
peroxisomas; pero el acetil-coa que se producen los peroxisomas no es utilizado en el Ciclo de Krebs. La B-
Oxidación Peroxisomal no tiene un fin bioenergético.
TEORÍA QUIMIOSMÓTICA
¿Cómo se relacionan las coenzimas reducidas con la producción de ATP?
En la Membrana Mitocondrial Interna se produce la Reacción de Cadena de Transporte de Electrones y
Fosforilación Oxidativa.
La Cadena de Transporte De Electrones

Está formada por Complejos de Proteínas / Complejos Respiratorios y por Cofactores que van a participar de
reacciones óxido-reducción, teniendo entonces mayor potencial de reducción que las coenzimas reducidas.
1. Complejo Mitocondrial 1: tiene mayor potencial de reducción que NADH.
Cuando NADH, que está difundiendo por la matriz mitocondrial, choca espontáneamente contra el
Complejo 1 → se oxida liberando sus e- y pasándoselos al Complejo 1.
2. Complejo Mitocondrial 2: tiene mayor potencial de reducción que el Complejo 1.
Va a haber una transferencia espontánea de e- desde el complejo 1 hacia el 2.
3. Luego hacia el 3 y del 3 hacia 4
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4. Complejo 4: en este complejo el oxígeno molecular (O2) es el último aceptor de los e-. Luego,
combinándose con protones del medio (H+)→ se transforman en moléculas de agua (H2O).
En ausencia de oxígeno llegaría un momento en que todos los complejos quedarían saturados de
electrones y todas las coenzimas quedarán en su estado reducido→ esto haría que no queden más
moléculas oxidadas de las coenzimas que puedan participar de las reacciones = estas se detendrían y
se impediría así la síntesis de ATP.
Venenos respiratorios: de manera irreversible bloquean algunos complejos respiratorios

• Rotenona: en algunos fertilizantes, se une al complejo 1.
• Cianuro: es compuestos químicos que se une al complejo 4.
¿Qué ocurre con la energía liberada en cada una de estas reacciones Óxido-Reducción?
Los Complejos tienen la capacidad de actuar como bombas= la energía es utilizada para bombear protones (P+)
en contra del gradiente de concentración, es decir, desde la matriz hacia el espacio intermembrana.
Las coenzimas reducidas van a ir oxidándose→ los e- a medida que pasan por los complejos irán liberando
energía mediante las reacciones espontáneas→ la energía va a ser acumulada en la formación de un gradiente
de P+ (que no pueden regresar por la alta impermeabilidad de la membrana interna).
Generación Del Gradiente Electroquímico
El gradiente de P+ es:
• Osmótico: porque hay una mayor concentración de moléculas de un lado al otro
• Eléctrico: porque no sólo se produce una tendencia de las moléculas a equilibrar su gradiente de
concentración, sino también hay una tendencia de estas equilibrar el gradiente eléctrico.
Fosforilación Oxidativa
¿Cómo se disipa el gradiente?
En la membrana mitocondrial interna el único lugar por donde el gradiente de P + puede retornar a la matriz
mitocondrial es a través de un Complejo Enzimático denominado ATPsintasa.
El pasaje de P+ a través de la ATPsintasa permite que esta enzima utilice la energía, liberada por la disipación
del gradiente, para fosforilar ATP a partir de ADP + Fosfato.
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La relación que hay entre la reacción óxido-reducción y la fosforilación no es directa, sino que se da por la
generación de un gradiente de protones formado por la energía liberada por las reacciones de óxido-reducción
(a través de la actividad de los complejos respiratorios), que luego es utilizada por la ATP sintasa.
Por último, hay transportadores en la membrana mitocondrial interna y en la externa para que el ATP producido
pueda ser transportado al Citosol y a otros Compartimientos Celulares.
¿Qué ocurriría si los protones enviados por los complejos respiratorios pudieran atravesar la membrana
mitocondrial interna sin pasar por la ATP sintasa? ¿Qué pasaría si la membrana mitocondrial interna fuese
permeable a los protones?
Nunca se acumularía un gradiente en el espacio intermembrana, sino que los protones espontáneamente
volverían a la matriz a favor de su gradiente de concentración= la energía de la cadena de transporte de
electrones se liberaría en forma de calor.
Este fenómeno de permeabilidad de la membrana interna se puede dar bajo ciertas condiciones, como Pej.
ciertos agentes químicos, ácidos débiles liposolubles como el Dinitrofenol, pueden actuar como
permeabilizadores de membrana y se los conoce como Agentes Desacoplantes.
Algo característico de la intoxicación por desacoplantes es el aumento en la temperatura corporal.
La grasa parda también puede generar proteínas qué desacoplen la cadena de transporte de electrones y
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generar calor bajo ciertas condiciones fisiológicas. Por esto, la desacloplación no es necesariamente patológica.
PEROXISOMAS
Son vesículas muy pequeñas que están formadas por una membrana y contienen enzimas oxidativas
relacionadas con el metabolismo del agua oxigenada o peróxido de hidrógeno (HO). Esta molécula es un
poderoso oxidante que resulta tóxico para la célula y es, a la vez, un producto natural de la degradación de
ciertas moléculas orgánicas.
Los peroxisomas contienen enzimas, peroxidasas, que son capaces de utilizar el oxígeno molecular (0) como
medio para captar hidrógeno del metabolismo de ciertos sustratos orgánicos, formando agua oxigenada:
El agua oxigenada se produce en los peroxisomas por la acción de ciertas enzimas, y como un paso final de
algunos procesos catabólicos.
Otra enzima propia de los peroxisomas es la catalasa, que destruye el peróxido de hidrógeno:
Esta enzima es capaz de utilizar el H20, para oxidar, por ejemplo, alcoholes y otras sustancias tóxicas. incluyendo
varias drogas. En el hígado y en el riñón, que están interpuestos en la circulación sanguínea y actúan como
"filtros de esa sangre, estas reacciones son muy importantes. Además, la catalasa elimina. en parte, el H2O, que
se acumula.
Otra enzima presente en los peroxisomas es la urato-oxidasa, que está normalmente muy concentrada y forma
casi un cristal (nucleoide cristalino).
En los peroxisomas, al igual que en las mitocondrias de los animales, se degradan los ácidos grasos por beta-
oxidación. Pero en las células vegetales, la beta-oxidación ocurre únicamente en los peroxisomas y no en las
mitocondrias. En los vegetales hay peroxisomas típicos de las hojas y otros típicos de las se millas. En los de las
hojas se oxida un producto de la fotosíntesis, lo que se conoce como fotorrespiración. Los de las semillas,
denominados glioxisomas porque en ellos se desarrolla el ciclo del ácido glioxílico, son capaces de transformar
los ácidos grasos de los lípidos en azúcares, lo que ocurre cuando la plántula comienza a crecer. Los animales
no somos capaces de hacerlo ya que no poseemos glioxisomas ni las enzimas correspondientes.

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SÍNTESIS
✓ Las proteínas mitocondriales tienen un origen doble, dado que hay
solo un pequeño grupo de proteínas (sólo 13 péptidos) que son
codificados por el ADN mitocondrial y solo algunas de estas proteínas
están en los complejos respiratorios. El resto de los complejos
respiratorios, enzimas de la matriz mitocondrial y de la membrana
mitocondrial interna, están formados por más de 1000 clases de
proteínas codificadas por el ADN nuclear→ estas, una vez que
termina su traducción, son incorporadas a la mitocondria gracias a
la presencia de péptidos señales específicos.
✓ Para comprender la generación de ATP debemos saber que hay una

oxidación progresiva de sustratos, los cuales son utilizados como
fuente de energía
✓ El NADH y FAD2 van a ser generados en distintos pasos del proceso, pero
fundamentalmente durante el Ciclo de Krebs; y luego estos iban a liberar
su energía en otra serie de reacciones de óxido de reducción que se
daba a nivel de la cadena de transporte electrones→ en donde estos
electrones pasan a través de los complejos respiratorios para ser
finalmente depositados en aquella molécula que tiene el mayor
potencial de reducción de todos = el oxígeno molecular.
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Integración de células en tejidos

Los tejidos del cuerpo humano se organizan de una manera específica formando órganos, aparatos y
sistemas.
En los tejidos hay células que se renuevan y otras que mueren, sin embargo, se mantiene una estabilidad
estructural. Hay cinco factores que permiten, a pesar de los cambios dinámicos que se producen, que este
tejido mantenga dicha estabilidad: Comunicación celular, Adhesión diferencial o selectiva, Síntesis-
interacción y Remodelación de Matrices Extracelulares, Memoria celular y Nicho celular.
COMUNICACIÓN CELULAR Y ADHESIÓN DIFERENCIAL O SELECTIVA

Las moléculas de adhesión cumplen un rol fundamental y debemos tener en cuenta el tipo de relación que
tienen con otras:
❖ Cadherinas: forman dímeros y se asocian con dímeros
semejantes; dicha unión depende de la presencia de
Calcio.
❖ CAM: forman uniones entre monómeros que no
dependen del calcio. En general son uniones
intercelulares de tipo homofilicas. Median uniones
menos estables que las cadherinas.
Las Cadherinas y las CAM median interacciones célula-
célula y tienen una interacción homofílica, es decir que
sólo interaccionan con moléculas del mismo tipo.
❖ Integrinas: median relaciones heterofilas entre un tipo de ellas y una fibronectina principalmente
(macromolécula de la matriz extracelular) o moléculas de tipo CAM. Estas son las principales moléculas
de adhesión entre células y componentes de la matriz extracelular (uniones estables). En algunos
casos median uniones intercelulares con la familia CAM (son uniones transitorias muy débiles).
❖ Selectinas: se adhieren a glicoproteínas o proteoglicanos. Median interacciones heterofilicas con
otras células a través de su unión con componentes glucídicos. Son uniones transitorias (más
transitorias que Integrinas-CAM).
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APLICADO A TEJIDOS EPITELIALES
Si consideramos un tejido epitelial cilíndrico simple, cada célula tiene una membrana plasmática que separa
dos compartimientos: celular y el extracelular (luz/espacio externo al cuerpo).
La membrana plasmática, a su vez, se puede dividir en otros dos compartimentos:
❖ Compartimento apical: da a la luz
❖ Compartimento basolateral: se apoya y adhiere sobre la membrana basal o sobre la lámina basal.
La membrana basal es parte de la matriz extracelular y tiene dos componentes: la lámina basal y la
reticular (pero en algunos tejidos no se apoya en la membrana basal y si en la lámina basal)
Las moléculas de adhesión son proteínas de transmembrana que tienen un componente intercelular y se
relacionan con la célula vecina por su dominio extracelular.
Las moléculas de adhesión participan de uniones intercelulares en los epitelios que se pueden clasificar en:
❖ Uniones de Anclaje: permiten anclar una célula a la otra y relacionar sus
citoesqueletos a través de moléculas de adhesión. Estás uniones también se
observan en la relación epitelio-tejido conectivo, en la cual se relaciona el
citoesqueleto con los componentes de la matriz extracelular.
Se pueden clasificar en dos grandes grupos, según estén asociadas a los
filamentos de actina o a los filamentos intermedios:
• Uniones adherentes: filamentos de actina.
• Desmosomas/hemidesmosomas: filamentos intermedios.
En general estas uniones tienen como moléculas de adhesión: a las
cadherinas (sí relacionan dos Células entre sí) y a las integrinas (si
relacionan la Célula con la matriz extracelular)
❖ Uniones de Comunicación/Gap/Nexus: forman canales que atraviesan las

membranas de las 2 Células y permiten el pasaje de moléculas pequeñas=
permiten acoplar el funcionamiento de dos células vecinas.
Las conexinas son las unidades que forman los canales (un hemicanal en una membrana y un
hemicanal en la otra se unen).
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❖ Uniones Ocluyentes/Herméticas: unen en forma fija/estable ambas membranas

celulares e impiden el pasaje de moléculas entre las células. Hacen posible que se
separe el compartimiento luminar del compartimiento tisular (basal) = los
componentes que están en la luz no pueden pasar entre las células.
Las proteínas que forman parte de las uniones herméticas, y se relacionan con
los filamentos de actina, son: Claudinas y Ocludinas.
❖ Uniones de retransmisión de señal: su función es fundamentalmente de

señalización, se la describe en el tejido nervioso y en el linfático. Estás uniones
tienen un terminal sináptico, una porción presináptica y una postsináptica;
unidas por moléculas de adhesión que se relacionan entre sí por señales
liberadas por exocitosis.
Entre la presinapsis y postsinapsis hay un espacio completo por matriz
extracelular.
¿Cómo se mantienen unidas entre sí estas células?

→ La célula con la matriz extracelular: por integrinas.
→ Las células entre sí: por cadherinas y por moléculas N-CAM.
→ Se relacionan con el citoesqueleto de ambas células: a través de proteínas acopladoras. Siempre la
relación de moléculas de adhesión con el citoesqueleto es a través de proteínas acopladoras.
Cuando hablamos de unión intercelular hablamos de que estas tienen componentes que pertenecen a las
células y componentes intercelulares (que están por fuera de ellas) en los dominios extracelulares.
¿Cómo están formadas este tipo de uniones en el epitelio?

UNIONES DE ANCLAJE
Célula-célula: las proteínas de adhesión se relacionan entre sí y a su vez con componentes del citoesqueleto
por moléculas acopladoras. La tolerancia a la atracción es dada al citoesqueleto por las moléculas de
adhesión que los relacionan entre sí.
Célula-matriz: la molécula de adhesión se relaciona con proteínas o glicoproteínas de la matriz extracelular,
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que cumplen una función estructural como el citoesqueleto.
La tolerancia a la tracción del tejido conectivo reside en proteínas de tipo fibrilar como el colágeno.
LAS CADHERINAS MEDIAN PROCESOS DE ADHESIÓN

Tipos de cadherinas: clásicas (participan en las uniones de anclaje adherentes) y
no clásicas (participan de los desmosomas). Median uniones intercelulares, aunque
no haya especializaciones de membrana visualizadas en el microscopio. Pej.
• las E-cadherinas: en el epitelio.
• las N-cadherinas: en el sistema nervioso. No se reconocen al microscopio
óptico.
Una mutación con pérdida de función de cadherinas, integrinas o de proteínas que
acoplan a las cadherinas y a las integrinas con los filamentos intermedios, van a
disminuir la resistencia de los epitelios= ante pequeños traumatismos se van a
producir ampollas entre la lámina basal y epitelio.
FENÓMENO DE ADHESIÓN Y DESADHESIÓN

En la transición epitelio mesenquimática: las células organizadas en forma de
epitelio, por señales extracelulares, cambian su comportamiento al disminuir su
adhesión con las células vecinas y con la matriz extracelular, dado que se
endocitan la cadherina-e y la integrina.
Cambia la dinámica y la expresión de moléculas de adhesión.
Los Complejos de Unión están formados por: las uniones herméticas, de anclaje,
adherentes y los desmosomas.
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SÍNTESIS, INTERACCIÓN Y REMODELACIONES DE MATRICES EXTRACELULARES

¿Cuáles son los principales componentes de las matrices extracelulares y cómo están organizados?
Desde un punto de vista bioquímico decimos que la matriz extracelular está compuesta por electrolitos, agua
y por macromoléculas.
Dentro de las macromoléculas tenemos:
• Proteínas estructurales: proteínas que forman las fibras (colágenos, elastina, fibrilina, entactina y
elastina). Es fundamental el colágeno tipo IV.
• Proteínas especializadas:
o Enzimas metaloproteinasas (remodelan la matriz extracelular): por secreción de estas se
degrada parcialmente la matriz extracelular y las Células se mueven; por lo que la matriz no
es estable.
o Factores de crecimiento
o Fibronectina (principal molécula de adhesión): es una molécula de adhesión que forma parte
de la matriz extracelular y permite la adhesión de otros componentes de la matriz misma y de
la célula (a través de la integrina).
• Proteoglicanos: decorina, versicano y perlecano.
• Glicosaminoglicanos: ácido hialurónico y condroitín sulfato.
Los proteoglicanos y glicosaminoglicanos permiten que la matriz extracelular retenga electrolitos,
agua y factores de crecimiento.
La membrana basal: es una especialización de la matriz extracelular y está formada por distintos
componentes que permiten la adhesión de la célula a la matriz a través de las integrinas.
Todos esos componentes son fundamentales para:
• Darle soporte y resistencia mecánica al tejido
• Para interactuar con las Células: la fibronectina al relacionarse con los componentes envía señales
intracelulares y modifica la conducta de las Células.
Es decir, la matriz extracelular es un espacio de integración-comunicación que puede informar a las células,
mantener o cambiar su comportamiento; pudiendo darles por ejemplo una señal de síntesis de proteínas
metaloproteasas que la degraden.
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Además, es una estructura dinámica con distintos grados de dinamismo y da soporte al cuerpo.
MEMORIA CELULAR
La memoria celular es importante para la mantención de los tejidos. Mantiene los patrones de expresión
génica, debido a que hay una preservación de la identidad celular en las C* hijas.
Ejemplos:
a. Cuando el ADN se duplica se puede transferir al ADN de la hija el patrón de metilación y acetilación.
b. Los hepatocitos generan hepatocitos y no fibroblastos
Los circuitos de retroalimentación positiva: hacen que las
células hijas recuerden, aunque ya no esté, una señal
transitoria que activó la expresión de un gen= el Gen se
sigue expresando, aunque la señal desaparezca, en las
células hijas = mantienen identidad.
Mecanismo de memoria en Cis: actúa sobre el mismo
cromosoma.
Mecanismo de acción en Trans: se puede expresar en un
cromosoma y actuar sobre ese mismo o sobre otro.
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NICHOS CELULARES
El nicho celular es el microambiente, en el tejido conectivo, al que se encuentran expuestas las Células.
Componentes del nicho: matriz extracelular, células del tejido conectivo, factores solubles.
Son zonas específicas, dentro de los tejidos adultos, donde se conservan y mantienen las células
troncales/madre.
¿Qué son las células madre?

Son Células indiferenciadas capaces de replicarse dando Células hijas idénticas a ellas (autorrenovación), y/o
generar nuevos tipos celulares con un potencial más restringido (estado de mayor determinación que llevará
a una diferenciación celular).
La presencia de nichos celulares, y por ende de células madre (multipotentes), son importantes para mantener
la estructura y la identidad de los tejidos y de los órganos formados por estos.
CONCLUSIÓN
La mayoría de las células de los organismos pluricelulares se organizan en estructuras cooperativas (tejidos).
La organización en tejidos supera el aspecto mecánico y aunque los tejidos presentan procesos de renovación
celular, mantienen su identidad específica. Los distintos componentes tisulares están coordinados entre sí.
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Señalización Celular
Las Células constantemente están recibiendo señales químicas provenientes de otras poblaciones celulares,
dentro del mismo organismo, y de moléculas externas que se incorporan del medio ambiente.
La interacción de una Célula de un individuo multicelular con otras del mismo individuo es tal que si esta no
recibe constantemente señales químicas de sus vecinas, no es capaz de sobrevivir y ejecuta apoptosis.
Los fenómenos de señalización intercelular están mediados por señales químicas: Hormonas, Factores de
crecimiento, Neurotransmisores, Morfógenos, Citoquinas, Molécula de adhesión celular de la matriz
extracelular y Fármacos (exógenos)
Modos de señalización
Toma como criterio la localización de la población celular que emite la señal química en relación con la
población celular que tendrá receptores para responder a esa señal.
Siguiendo dicho criterio, los fenómenos de señalización pueden subclasificarse en varios tipos:
• Endocrina: la población celular que emite la señal (Pej. una hormona) está distante de la población
celular receptora; la señal química viaja a través del torrente sanguíneo.
• Paracrina y Autocrina: hay una cercanía espacial entre la población celular que emite la señal
química y la población celular que es receptora.
En el caso de la señalización Paracrina: los tipos celulares que emiten o reciben las señales son
distintos.
En el caso de la señalización Autocrina: el tipo celular que emite la señal es el mismo tipo celular que
posee receptores para la misma.
• Sináptica: implica una cercanía particular entre la célula emisora y la célula receptora. Esta
señalización se produce entre neuronas o entre una neurona y una célula efectora diferente (Pej.
Célula muscular).
• Dependiente de Contacto/ Yuxtacrina: también
requiere la proximidad entre las células que emiten la
señal y aquellas que la reciben, pero en este caso la
molécula señal no es soluble, sino que está anclada en
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la membrana de la célula que la emite. El receptor de
la célula que recibe la señal se contacta directamente
sobre la superficie de la célula que la emite= esta
señalización depende de un contacto intercelular.
También puede ocurrir que la señal no esté anclada a
la célula, sino que esté anclada a la matriz extracelular.
Otro criterio de clasificación general se basa en la relación existente entre la naturaleza química de las
moléculas que actúan como señales y la localización de sus receptores.
a. Cuando la señal es de tipo polar, hidrofílica o peptídica, y no puede atravesar libremente las bicapas
lipídicas sus receptores están ubicados en la superficie celular -anclados a la membrana-.
Pej. Hormonas peptídicas, moléculas pequeñas con carga eléctrica, etc.
b. Cuando las moléculas señales son pequeñas e hidrofóbicas, pueden atravesar por difusión simple la
bicapa lipídica de las células, y sus receptores se encuentran intracelularmente en el citosol o dentro
del núcleo. Pej. Hormonas esteroideas (derivadas del colesterol).
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VÍA DE SEÑALIZACIÓN
El tipo de receptor de membrana existente va a determinar cuál es la vía de señalización que se seguirá.
Hay tres clases de receptores de membrana:
a. Acoplados a canales iónicos
b. Acoplados a proteínas G
c. Acoplados a enzimas (con actividad enzimática intrínseca)
Vía
1. Molécula Señalizadora
2. La unión de la molécula señalizadora a su receptor (en la
célula blanco) es uno de los primeros eventos de la
señalización.
3. Esta unión activa un conjunto de proteínas intracelulares
que van a transmitir la señal.
4. Esta cascada de señalización intracelular va a conducir
a la modificación de la actividad de un subgrupo de
proteínas, las Proteínas Efectoras, cuya modificación va
a explicar los cambios que va a sufrir la célula como
consecuencia de haber recibido dicha señal.
5. Respuesta Celular:
a. Modificación de la expresión génica: usualmente las proteínas efectoras son factores específicos de
la transcripción, proteínas coactivadores o correpresores que van a afectar la expresión génica.
b. Modificación de la morfología: las células pueden pasar de tener por ejemplo un fenotipo de tipo
epitelial a mesenquimático migratorio; en estos casos son proteínas del citoesqueleto las efectoras
que han modificado su actividad en función de haber recibido la señal.
c. Modificación del estado metabólico: se modifican enzimas del metabolismo.
En muchos casos las respuestas son múltiples y no hay un único tipo de proteínas efectoras que son afectadas
por estos procesos.
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EJEMPLOS ESPECÍFICOS (no hay que conocerlos por sí mismos, sino que nos ayudan a entender los conceptos).
SEÑALIZACIÓN EN LA UNIÓN NEUROMUSCULAR
Es una unión de tipo sináptica entre una motoneurona - que posee su soma es la médula espinal- y una fibra
muscular esquelética. La contracción de la Célula muscular es la respuesta de la célula Diana o Blanco ante un
fenómeno de señalización que va a provenir de la neurona con la cual hizo sinapsis.
¿Cuál es la molécula que actúa como molécula señal?
Es un neurotransmisor denominado acetilcolina, una molécula cargada positivamente = hidrofílica= incapaz
de atravesar la bicapa lipídica por difusión simple.
La acetilcolina actúa también en otros tipos de sinapsis, pero no todos los receptores que encontramos para
esta son del mismo tipo:
a. Receptores muscarínicos: receptores de acetilcolina que están acoplados a proteínas G.
b. Receptores nicotínicos: receptores de acetilcolina que están acoplados a canales iónicos. La unión de la
acetilcolina al canal iónico produce una modificación en la estructura tridimensional de este que
permite su apertura, aumentando su permeabilidad y permitiendo el pasaje de iones sodio.
¿Si el mensaje no está en la acetilcolina, este dependerá del tipo de receptor? La respuesta es NO
En los fenómenos biológicos la respuesta que va a producir una célula no está totalmente en la molécula señal
ni en su receptor, sino que depende de todo el conjunto de proteínas previas expresadas en ese subtipo
celular.
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Los fenómenos de señalización biológica a diferencia de los fenómenos de señalización de la teoría de la

comunicación
Muchas veces en la teoría de la comunicación el mensaje está contenido en la misma señal, pero aquí el
mensaje de la acetilcolina es respondido de manera diversa por los distintos tipos celulares (las fibras
musculares se contraen, las células de las glándulas salivales secretan saliva y la célula del marcapasos
cardíaco disminuyan su frecuencia de disparo).
Situaciones patológicas
Hay serpientes que poseen en su veneno una toxina llamada Bungarotoxina, la cual
actúa como antagonista de los receptores nicotínicos. Siendo el efecto de este
veneno la parálisis muscular local.
Definición de antagonista: Es un ligando que puede unirse a un receptor específico
pero que lo bloquea.
¿Cómo funciona la unión neuromuscular?

Las neuronas que inervan a las fibras musculares contienen vesículas con acetilcolina
1. Una vez que una señal sináptica arriba al terminal del axón, se liberan las vesículas con acetilcolina
en la hendidura sináptica→ un pequeño espacio de separación entre el axón de la motoneurona y la
fibra muscular
2. Una vez que la acetilcolina se pega a su receptor nicotínico, este se abre y permite el ingreso de iones
de sodio.
3. Esto va a generar un fenómeno de señalización intracelular.
4. Dado el ingreso de iones de sodio a la Célula, se va a dar la despolarización de la membrana de la
fibra muscular, desencadenando la liberación intracelular de iones de calcio (almacenados dentro del
REL de las fibras musculares).
5. La liberación de calcio intracelular va a afectar a los sarcómeros, quienes van a permitir el
desplazamiento de una proteína sobre otra, y va a conducir a la contracción de la fibra muscular.
REMODELACIÓN ÓSEA
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En los huesos hay células denominadas Osteoblastos que sintetizan y secretan los componentes de la matriz
extracelular, los cuales luego van a mineralizarse.
En contraposición, están los Osteoclastos que tienen como función la resorción ósea (degradan la matriz
extracelular) para la liberación de minerales.
En conjunto los osteoblastos y los osteoclastos se contraponen y regulan el equilibrio óseo y la concentración
de calcio en sangre = calcemia.
Muchas células utilizan el calcio intracelularmente como una molécula mediadora de los procesos de
señalización.
Regulación de la calcemia (concentración de cationes de calcio en el torrente sanguíneo)

La disminución de la concentración de calcio en sangre, denominada hipocalcemia, estimula la producción de
PTH (parathormona) en la glándula paratiroides.
El fenómeno de señalización es de tipo endocrino, porque las células que poseen el
receptor de la parathormona están distantes de la célula paratiroides.
Los osteoblastos son las células que poseen receptores para la parathormona.
Dado que esta es peptídica no puede atravesar libremente la bicapa lipídica y
tendrá receptores asociados a la membrana plasmática.
El Receptor para la parathormona se encuentra acoplado a Proteína G.
¿Cómo funcionan los receptores acoplados a proteína G?

Muchas moléculas señalizadoras y fármacos actúan sobre estos receptores asociados a proteínas G y son MUY
importantes. Estos receptores se caracterizan por tener 7 pasos de membrana
La proteína G se encuentra anclada al sector citosólico de la membrana plasmática y está compuesta por 3
subunidades distintas (alfa, beta y gamma).
La subunidad Alfa está unida a GDP bajo condiciones basales, donde la proteína G está inactiva. La protrína G
puede activarse cuándo entra en contacto con un receptor que está unido a su ligando.
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Cuando la PTH se una a su receptor podrá inducir la activación de la proteína G a la que está asociado, dicha
activación implicará un cambio conformacional de la subunidad alfa= permite el intercambio de su GDP por
un GTP.
Bajo la condición activa la subunidad alfa puede tener distintos efectos intracelulares, y en función de dichos
efectos podemos hablar de Receptores de Proteína G estimulatorios o inhibitorios.
Estimulatorio
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Permite activar a una enzima de membrana, denominada Adenilato
Ciclasa, que incrementa las concentraciones intracelulares de cAMP
(cíclico).
El cAMP (segundo mensajero) puede regular la actividad proteínas, entre
ellas una kinasa: PKA, que puede fosforilar múltiples proteínas efectoras
que van a modificar el fenotipo (expresión génica) de la célula: CREB.
Uno de los genes que comienzan a transcribirse y expresarse es RANK
Ligando.
cAMP→ PKA→ CREB→ RANKL
Los segundos mensajeros permiten la amplificación de la señal y, por ende,

una respuesta más robusta y rápida.
Sistema RANK Ligando

RANK Ligando es una proteína secretada por los Osteoblastos que se une a receptores que están en la
superficie de las C* vecinas (precursoras de Osteoclastos inactivos).
La señal es Rank ligando y es del tipo paracrina.
El efecto fenotípico final es de favorecer la diferenciación de las Células precursoras a la variante activa del
osteoclasto.
Los osteoclastos degradan la matriz extracelular= habrá una liberación de calcio al torrente sanguíneo.
Fenómeno De Señalización Que Va A Tener Un Efecto Opuesto

Los estrógenos (hidrofóbicos) son una hormona esteroidea que actúa sobre los Osteoblastos, induciendo en
estos la expresión de OPG.
Es una señalización del tipo autocrina, dado que los osteoblastos producen el Estradiol (el estrógeno) y, a su
vez, poseen sus receptores.
El estradiol es una hormona lipídica, derivada del colesterol, que puede atravesar las membranas biológicas.
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1. El receptor intracelular se encuentra unido a una proteína chaperona en estado inactivo.

2. Cuando ingresa la señal, y se une al receptor, se produce un cambio conformacional en
este→disminuyendo su afinidad por la chaperona = separación.
3. Una vez separados, se dimerizan y exponen una señal de localización nuclear (antes bloqueada por la
chaperona).
4. La señal de localización nuclear se une a importinas e ingresa al núcleo.
5. Los receptores unidos a sus ligandos funcionan como factores específicos de la transcripción y, una
vez que ingresan al núcleo, pueden regular los genes de la Célula.
6. Las moléculas de estradiol van a permitir la transcripción del gen OPG en los osteoblastos y, una vez
sintetizado por estos, OPG puede unirse y bloquear RANK ligando= disminuirá la activación de los
osteoclastos y generará producción ósea.
PROLIFERACIÓN DE QUERATINOCITOS LUEGO DE UNA HERIDA

Cuando se produce una herida en la epidermis el fenómeno de cicatrización involucra la proliferación de un
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grupo de células de esta, los queratinocitos, que van a replicarse activamente cerrando la Barrera
Epidérmica.
¿Cómo es posible?
Como consecuencia de la herida y de la activación de muchas células del sistema inmune, muchas células
comienzan a secretar en los alrededores de esta un mitógeno→ el factor de crecimiento epidérmico (EGF) -
peptídico-. El EGF actúa sobre los queratinocitos para inducir su proliferación.
Los receptores de membrana sobre los que actúan los mitógenos están asociados a enzimas.
La familia más importante y abundante de receptores de mitógenos son denominados Tirosina Quinasa. Estos
receptores activan la capacidad de fosforilar sustratos, cuando están activos, y dicha fosforilación ocurre
sobre residuos de los aminoácidos tirosina.
Muchos mitógenos son diméricos y se encuentran de a pares, pudiendo inducir la dimerización y activación de
sus receptores de membrana. La activación conduce a una autofosforilación y transfosforilación de estas
subunidades de receptores, que va a conducir a la modificación de la actividad de un conjunto de proteínas
intracelulares.
1. EGF se une al receptor Tirosina Quinasa, que se fosforila en su cara intracelular
2. Se activa una familia de enzimas cuya actividad está regulada por GDP o GTP→ la Familia Ras.
3. Ras (activa): permite la activación de muchas proteínas intracelulares, entre ellas las enzimas
quinasas: MAP QUINASAS.
Esta familia está compuesta por una serie secuencial de sustratos que se fosforilan en cascada (uno
detrás de otro).
4. Luego de la cascada se fosforilan Proteínas Efectoras que van a ser responsables de los efectos de la
señalización= Erk
5. Erk: va a fosforilar a diversos sustratos y los genes que se transcriben en respuesta son genes ciclinas
y CDK.
Estos productos génicos conducirán que las células crucen el punto de restricción y comiencen a
ingresar al ciclo celular para proliferar.
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Paralelamente se activa una segunda vía que va a conducir a la Supervivencia Celular

3. Ras: activa la enzima PI 3-quinasa (Factor de crecimiento-tirosina quinasa- PI 3- quinasa)
4. PI 3-quinasa fosforila en su cara citosólica: Fosfatidilinositol.
5. El Fosfatidilinositol actúa como una molécula de señalización cuyo objetivo es producir la fosforilación y
activación de un sustrato intracelular= Akt.
6. Akt: inactiva por fosforilación proteínas apoptóticas.
Es decir, los factores de crecimiento/mitógenos son tanto para inducir la mitosis como para la supervivencia
de la célula.
VÍA EPHRINA/EPH
Es una vía dependiente de contacto, porque la molécula
que actúa como señal está anclada a la matriz
extracelular o a otra célula.
En el caso de esta vía de señalización: la señal es una
molécula de Ephrina y su receptor es Eph.
La unión del ligando con el receptor genera una cascada
de señalización intracelular del lado de la célula que
tiene el receptor y también en la célula que posee la
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señal = vía de señalización retrógrada. Es decir, la señal
no solo produce efectos en la célula receptora sino
también en la emisora.
Las modificaciones que se producen en ambas células van a modificar el citoesqueleto de estas, de modo tal
de alejarlas una respecto de la otra= suelen ser señales repulsivas.
Pej. La inervación de las extremidades durante el desarrollo embrionario.
DATO
Las Balsas lipídicas: son zonas especializadas de la membrana plasmática que poseen una composición
diferencial de fosfolípidos y proteínas. Tienen un menor grado de fluidez que el resto de la membrana y esto
permite que las proteínas en estas Balsas lipídicas tengan un mayor grado de estabilidad. Los receptores de
señales con proteínas, que van a activarse en función de la unión ligando receptor, suelen estar enriquecidos
en las Balsas lipídicas.
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Diferenciación Celular
Es un proceso de adquisición de características fenotípicas asociadas a la especialización celular. Implica una
expresión diferencial del genoma. Es progresiva y en su último estadio, la diferenciación terminal, se logra un estado
estabilizado, en general sin capacidad proliferativa.
Hay 200 tipos de células que están mediadas por la expresión genética diferencial a partir de un mismo repertorio
genético nuclear, la célula huevo. (Con la excepción de los linfocitos B)
El proceso de diferenciación celular no solamente se produce durante el desarrollo embrionario, sino que también hay
procesos de diferenciación celular en el organismo adulto. Son todos los fenómenos que corresponden a diferentes
niveles de organización (celular, tisular, orgánico o de sistemas)
A nivel celular hablamos de los comportamientos celulares que explican la aparición progresiva de diferentes tipos
celulares, los cuales podemos reconocer por las características bioquímicas, morfológicas y funcionales de esas células.
¿Cuáles son los mecanismos que permiten que ciertos genes se expresen en un tipo celular y no en otro? ¿Qué procesos
están involucrados en la decisión del destino celular?
Hay proteínas que son específicas de distintos tejidos de distintas células, por ejemplo, los melanocitos expresan
melanina; los acinos pancreáticos sintetizan y secretan insulina; las células del nodo primitivo secretan moléculas como
Noggin. Esto está mediado por la expresión génica diferencial a partir del mismo genoma, es decir, nuestras células
tienen el mismo genoma y son distintas porque existe una expresión génica diferencial.
Hay un conjunto de genes que se expresan comúnmente en todos los tipos celulares, y se denominan Genes Constitutivos
o Housekeeping. Por ejemplo, componentes del citoesqueleto como actina y tubulina se expresan en todas las células.
Estos genes son necesarios para la sobrevida y para llevar a cabo el metabolismo de todas las células.
REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA A NIVEL MOLECULAR
Los fenómenos moleculares que subyacen a la diferenciación y la respuesta a las señales ambientales involucran la
expresión diferencial del genoma en la célula a diferenciarse. Es decir, las células varían la regulación de su expresión
génica como respuesta a señales ambientales. Cuando hablamos de señales ambientales nos referimos a las señales
que emiten otras células que forman parte de ese mismo organismo.
En el proceso de diferenciación celular debemos tener en cuenta la comunicación entre las células, y a la respuesta
de la regulación de la expresión génica que esas células tienen como consecuencia de recibir esas señales ambientales.
Rol de factores de transcripción en la diferenciación → Puede haber regulación positiva o de refuerzo del gen que
se quiere expresar y al mismo tiempo se silencia la expresión de otro gen, por regulación negativa= puede armarse
una red en la que si se expresan unos se expresan los otros.
@necroticaenfmed
Los miARN también juegan un rol importante en la diferenciación→ disminuyendo la expresión selectiva de ARNm.
COMPROMISO
Es la restricción del potencial evolutivo. La <elección= de diferenciarse en un grupo celular y no en otro = dejar de
lado la totipotencialidad.
La restricción es progresiva, porque a medida que se determine pierde pluripotencia y hay diferentes
determinaciones a lo largo del tiempo.
El mantenimiento del estado diferenciado es tan significativo como la regulación de la expresión.
Para que las células estén comprometidas a un fenotipo en particular, la expresión génica diferencial debe ser
mantenida.
Cuando una célula diferenciada se divide, las células hijas heredan su patrón de metilación por metiltransferasas de
mantenimiento.
Etapas del compromiso:
1. Especificación celular: esta etapa señala que el compromiso es lábil. La especificación se dará según las
células del entorno. No es totipotente y si es especificada, ya que en un cultivo siempre darán el mismo tipo
celular.
2. Determinación celular: por más que coloque la célula en otra parte= donde es sometida a otro tipo de
señales, la determinación no será modificada. Reduce la potencia evolutiva. Para saber si la célula está
determinada o no se realizan experimentos de trasplante.
En las células diferenciadas hay regiones silenciadas del genoma que están asociadas a la hipermetilación
de las secuencias
PUNTOS DE REGULACIÓN DE GENOMA
Un mecanismo central es la regulación de los genes que van a transcribirse o no. Por ejemplo, Enhancers o
Silenciadores unidos de manera directa a una región regulatoria del ADN.
Una vez unidos a ciertos sectores del ADN, los factores específicos de la transcripción reclutan una maquinaria
proteica/enzimática que van a remodelar la cromatina:
a. Desplazando nucleosomas, abriendo la cromatina y dándole la posibilidad a la maquinaria transcripcional de
ingresar
b. Llamando a modificadores de histonas (acetilación/metilación) para aumentar/disminuir la accesibilidad de
la maquinaria replicadora
c. Interactuar de manera directa con el complejo de transcripción, interactuando con la ARN polimerasa.
Se llamará regulación combinatoria porque un gen determinado se expresará o no debido a un grupo de factores de
transcripción específicos unidos a este (no solo uno).
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DETERMINACIÓN
La presencia en la célula de un único factor específico de transcripción no me dirá a qué célula se va a determinar.
Este factor actúa con otros que son necesarios para la determinación esperada. Causas:
a. Interacción dependiente de contacto: interacción de dos tipos celulares o de dos Células distintas.
b. Gradientes de morfógeno: sustancia secretada desde un grupo de células al medio, a partir de la cual se
establece un gradiente de concentración en el ambiente. Este gradiente regula la expresión génica
diferencial en las células estableciendo un patrón de diferenciación. Tiene un rango de efecto que depende
de su concentración. Este morfógeno será secretado por una región llamada zona polarizante.
c. Regulaciones postranscripcionales: microARNs.
CÉLULAS MADRE
Son las células precursoras durante el desarrollo embrionario y mantenimiento de tejidos en adultos.
En relación con el concepto de célula madre y su capacidad de generar diversos tipos celulares
a través de sucesivas divisiones, aparece el concepto de potencialidad evolutiva. La Potencialidad evolutiva se
define al conjunto de todas las formas posibles de evolución que podría exhibir una población celular a partir de un
cierto estado del desarrollo; alude entonces a todas las diversas formas de expresión del programa de desarrollo que
la población celular tiene habilitada.
Las células más diferenciadas fenotípicamente no tienen potencialidad evolutiva, lo opuesto a lo que se llama célula
madre (poco fenotipo y mucha potencialidad). Las Células Madre:
• Son mitóticamente activas
• Pueden generar al menos una célula hija con la misma potencia evolutiva al dividirse: ciertos ARNm tienen una
localización citoplasmática asimétrica y al dividirse el citoplasma quedarán solo en una célula. Estos pueden
generar factores específicos de determinación. Otra opción es que las células madre estén ubicados en un
nicho, que tiene moléculas que por señales yuxtácrinas mantienen las características de las células madre.
• Ser pluripotenciales (no necesariamente totipotenciales).
• Fenotipo indiferenciado
Totipotencialidad: es la capacidad de una célula de originar todos los tipos celulares y generar sistemas de
referencia para la organización corporal de un individuo completo. En los mamíferos, la célula huevo y las
blastómeras (hasta el estadio de ocho células-E8c) poseen la capacidad de originar todos los tipos celulares.
Pluripotencialidad: es la capacidad de ciertas células que poseen grados diferentes de restricción de linaje que,
introducidas en un sistema en desarrollo, pueden integrarse al mismo y originar una amplia gama de tipos celulares.
Ejemplo: células del macizo celular interno
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TERAPIA CON CÉLULAS MADRE
Las células madre se pueden sacar del MCI a través del cordón umbilical del feto. Se colocan para que prosperen en
tejidos dañados. Pongo el núcleo de Célula somática en Células oocito sin núcleo.
GENERAR CÉLULAS MADRE
El fenotipo de las células madre depende de 24 factores de transcripción específicos.
Mediante un vector se insertó 1 por 1 en células diferenciadas (fibroblastos) para lograr que este tenga
características de pluripotenciabilidad.
Los factores que dieron positivos de los 24 fueron 4 (Sox2, Oct3/4, etc.) y al descubrirlos se pudieron generar células
madre inducidas (IPS).
Estos 4 factores también permiten expresar factores de transcripción para telomerasas.
DIFERENCIACIÓN EN NIVELES DE ORGANIZACIÓN SUPRACELULAR
INFORMACION POSICIONAL
La diferenciación celular o citodiferenciación como mecanismo puede explicar el modo que las células se especializan
para conformar por ejemplo células de músculo estriado versus células del tejido óseo (osteoblastos); sin embargo,
siguiendo con un ejemplo, en una mano hay grupos de células que conforman hueso y músculo, pero para cada dedo
la organización que tiene los huesos y los músculos es diferente (tanto que distinguimos a cada dedo)
La información posicional no explica la citodiferenciación sino de qué modo las células interpretan información para
organizarse en el espacio
Las células podrían tener su posición especificada mediante varios mecanismos. El más simple se basa en el gradiente
de un morfógeno
Morfógeno: molécula soluble capaz de cambiar comportamientos celulares se llama morfógeno, y un morfógeno puede
especificar más de un tipo de célula mediante la formación de un gradiente de concentración.
PATTERNING
<La esencia del concepto de patterning se advierte cuando se comparan entidades biológicas integradas con los
mismos tipos y subtipos celulares, los mismos tejidos, etc., pero que son diferentes debido a que los tejidos y células
que los componen tienen distintas proporciones, distintos números y distintas disposiciones espaciales. Compárense los
dedos de la mano entre sí, compárense manos y pies o, mejor, compárense los mismos elementos anatómicos del lado
derecho con los del lado izquierdo y se advertirá que la citodiferenciación no explica dichas diferencias. Con el objeto
de identificar, analizar y realizar la experimentación apropiada para explicar dichas diferencias espaciales se utiliza
la noción de patterning <
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Biología Tumoral y Muerte Celular

Hay dos clases de muerte celular que pueden distinguirse desde el punto de vista del fenotipo que adquieren las
Células durante el proceso
✓ Necrótica: se da cuando las células son sometidas a un estímulo nocivo de alta intensidad.
En la necrosis hay una ruptura de la membrana plasmática, por un aumento del volumen en las células= el
contenido citoplasmático es liberado hacia el medio extracelular= se activan células inmunitarias que activan
procesos inflamatorios. La inflamación del tejido circundante es una de las características centrales de la
necrosis. Se puede dar, por ejemplo, por la privación de oxígeno o temperaturas extremas.
✓ Apoptótica: se da por el mismo tipo de estímulo, pero de menor intensidad. Por ejemplo, por la disminución de
oxígeno (hipoxia) o aumento de temperatura no extrema.
En la apoptosis hay una disminución de volumen celular y no hay una ruptura de la membrana plasmática. Se
da una modificación y una fragmentación de los contenidos celulares en el interior de la célula, quien se
subdivide en una serie de restos denominados Cuerpos Apoptóticos→ pequeños cuerpos circunscriptos por
membrana. No hay un proceso de inflamación dado que los cuerpos apoptóticos suelen ser degradados por
células con actividad fagocitaria.
NECROSIS APOPTOSIS
VOLUMEN CELULAR Aumento Reducción
MEMBRANA PLASMÁTICA Ruptura Intacta (cambios en la organización
molecular)
CONTENIDO CELULAR Digestión enzimática (liberación al Intacto (liberación dentro de cuerpos
exterior) apoptóticos)
INFLAMACIÓN ADYACENTE Presente Ausente
CONTEXTO Patológico Frecuentemente fisiológico, puede ser
patológico ante ciertas formas de
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APOPTOSIS
daño celular
No sólo ocurre ante un estímulo nocivo de baja intensidad, sino también puede producirse en condiciones fisiológicas
no patológicos→ como parte del programa genético de algunas células. Por ejemplo, durante el desarrollo
embrionario las células que forman parte de los dígitos sufren apoptosis para permitir la separación de los dedos.
Para que una célula desarrolle la muerte celular programada debe desencadenar la actividad de una familia de
proteasas denominadas Caspasas, que son sintetizadas y están presentes en todas las células en forma de
precursores inactivos= Procaspasas. Todas nuestras células tienen estas Procaspasas en su citosol.
Estímulos específicos permiten que las Procaspasas se activen a su forma madura, mediante la remoción de un
pequeño péptido asociado a ellas.
¿Qué ocurre cuando pasan a su forma activa (caspasas)?

La forma activa implica que pueden reconocer sustratos y degradarlos, es decir, producir un proceso de proteólisis.
Los mamíferos contienen familias de al menos 7 caspasas, clasificadas como iniciadores o efectores, las cuales
funcionan en cascada para generar los eventos de la apoptosis.
a. Caspasas Iniciadoras: son las primeras que se activan durante la Apoptosis. Entre sus sustratos tienen a las
Caspasas Efectoras, que al clivarlas son transformadas en caspasas activas.
b. Caspasas efectoras: cuando se encuentran activas degradan un montón de sustratos celulares que le van
a conferir a la célula el fenotipo particular de la apoptosis.
Proteínas que pueden ser degradadas por las Caspasas efectoras:
• Inhibidor de Nucleasas: las nucleasas tienen como sustrato al ADN y pueden fragmentarlo cuando
están en forma activa. Si las caspasas degradan al inhibidor de nucleasas= se va a liberar la
actividad de las nucleasas y la fragmentación del ADN.
• Proteínas de la Lámina Nuclear: mantienen la estructura del núcleo. Al ser degradadas= se observa
morfológicamente la fragmentación nuclear.
• Proteínas del citoesqueleto: al ser degradadas producen protusiones en la membrana plasmática.
• Proteínas que mantienen la estructura de las organelas membranosas.
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Una vez que se activan las Caspasas el proceso de muerte celular es irreversible, debido a que no hay un proceso
regulatorio las detenga.
La irreversibilidad de este proceso está asociada a que las caspasas tienen como sustratos a proteínas que
mantienen la estructura de las células y también a otras Procaspasas, induciendo su actividad= feedback positivo.
¿Cuáles son los mecanismos que permiten llegar a la activación de las Caspasas?
Hay dos vías de señalización distintas que pueden confluir en la activación de las caspasas: la vía extrínseca y la
vía intrínseca de la apoptosis. Ambas vías no se activan al mismo tiempo y la más frecuente es la Vía Intrínseca.
LA VÍA EXTRÍNSECA
Se caracteriza porque el estímulo apoptótico va a depender de la activación de una serie de receptores de muerte
celular en la superficie de la célula. Hay distintas familias de receptores de membrana que pueden cumplir esta
función de receptores de muerte. Por ejemplo, ante una infección viral, con la maduración de los linfocitos T, etc.
Ejemplo: Infección viral
Los receptores no siempre están presentes en la superficie de la célula.
Las células que son infectadas por un virus modifican la expresión de sus genes para expresar un subconjunto
particular de proteínas, entre ellas están los receptores denominados de tipo Fas. ¿Cuál es el ligando de estos? Es
@necroticaenfmed
la molécula Fas ligando, presente en la superficie de linfocitos T.
Los linfocitos t se unen mediante Fas ligando a los receptores de muerte de tipo Fas, y permiten la activación de
una cascada de señalización que va a culminar con la activación de las Caspasas.
LA VÍA INTRÍNSECA / VÍA MITOCONDRIAL

Distintos estímulos pueden conducir a la liberación al citosol del Citocromo C, una proteína presente en el espacio
intermembrana de la mitocondria. Este Citocromo C también tiene una función en la cadena de transporte de e-
mitocondrial al transferir los e- desde el complejo 3 al 4.
Cuando las moléculas Citocromo C se liberan desde la mitocondria hacia el citosol, interactúan con otro conjunto
de proteínas citosólicas, permitiendo la formación de un complejo multiproteico denominado Apoptosoma, que
conduce a la activación de las Caspasas.
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¿Cuáles son los estímulos proapoptóticos?

a. La disminución de la señalización de supervivencia por parte de los receptores.
b. Hipoxia: disminución de la concentración de oxígeno
c. Aumento de temperatura: por fiebres muy altas
d. Estrés proteotóxico: acumulación de proteínas mal plegadas
e. Formación de especies reactivas del oxígeno
¿Cuáles son los procesos regulatorios intracelulares que permiten determinar que el Citocromo C se libere o no de
la mitocondria?
Muchas veces los estímulos y su efecto están mediados por la regulación de una familia de proteínas, denominada
Bcl-2, qué va a competir para permitir o inhibir la liberación del Citocromo C.
Bcl-2 es una proteína dentro de la Familia Bcl-2 (se agrupó a las proteínas con parecido estructural a Bcl-2 en una
familia con el mismo nombre).
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Algunos miembros de esta familia tienen actividad que favorece la apoptosis= miembros proapoptóticos, en tanto
que otros miembros de la misma familia tienen como actividad inhibir la apoptosis= miembros antiapoptóticos.
¿Cómo funcionan?
En un contexto celular donde no ocurre la apoptosis: hay una predominancia de la actividad de los miembros
antiapoptóticos respecto de los proapoptóticos. Cuando el equilibrio se invierte= se produce la liberación de
Citocromo C al citosol, porque se acumulan muchas proteínas proapoptóticas que forman poros en la membrana
mitocondrial externa. Los poros sirven como pasadizos para que el Citocromo C y otras proteínas se liberen.
Las proteínas pro y antiapoptóticas pueden formar Heterodímeros, lo que va a impedir que se forme un poro
funcional y, por ende, va a mantenerse el Citocromo C dentro de la mitocondria.
Esta regulación se da previo a la activación de las caspasas.
Esta familia de proteínas reguladoras no es la única...hay otras como las proteínas y IAPs.
Señales de Supervivencia
En la vía PI 3-quinasa: se activaba Akt, una proteína quinasa que puede fosforilar distintos sustratos, entre ellos
las proteínas proapoptóticas de la familia Bcl-2, que cuando son fosforilados por Akt pasan a un estado inactivo.
Esta vía de señalización nos permite entender cómo la señal mitogénica puede hacer que las células no hagan
apoptosis, dado que van a mantener activa a la proteína Akt.
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BIOLOGÍA TUMORAL: ASPECTO DE LOS TUMORES / NEOPLASIAS

Para que estemos ante un tumor maligno deben darse dos aspectos fundamentales:
1. Fenotipo de hiperproliferación: multiplicación de células que superan los
controles del ciclo celular. Sin embargo, la hiperproliferación no es
suficiente como para que un tumor sea considerado de tipo maligno.
2. Las Células pueden invadir el tejido circundante formando metástasis
eventualmente.
Características de Células Cancerosas= "Holdmarks"
• Puede multiplicarse independientemente de las señales mitogénicas que reciben y superan el punto de
restricción con la presencia o no de mitógenos.
• Los puntos de control y freno del ciclo celular, que suprimen la proliferación, no están funcionales.
• Los estímulos que inducen la apoptosis no logran inducirla= son resistentes al fenómeno de muerte celular
programada.
• Poseen la propiedad de inmortalidad replicativa: las células normales se dividen un determinado número
de veces y luego son incapaces de hacerlo dada la senescencia celular, asociada a un acortamiento de los
telómeros.
¿Cómo logran adquirir estas características?
Las células tumorales han acumulado mutaciones en diversos genes específicos. Una Célula puede ir acumulando
mutaciones a lo largo de sus replicaciones. Se ha explicado la generación de un tumor como un fenómeno de
microevolución, en donde una célula que acumula mutaciones será aquella que deje mayor descendencia.
Podemos clasificar a los genes cuyas mutaciones permiten la hiperproliferación en dos clases:
a. Protooncogenes: genes cuyos productos ayudan a estimular la proliferación celular.
Por ejemplo, receptores de mitógenos, Cdks, Myc.
b. Genes Supresores de Tumores: genes cuyos productos ayudan a inhibir la proliferación celular. Por ejemplo,
P53, proteínas inhibidoras de cd ciclinas (p27 y p21), proteínas de los sistemas de reparación del ADN.
Es importante entender que están en todas las células y cumplen funciones fisiológicas de regulación en todas ellas.
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Existen dos caminos de mutación hacia la proliferación celular incontrolada:
1. Puede ocurrir que un protooncogén mute de modo tal que se vuelva hiperactivo e hiperestimule la
proliferación= Oncogén.
Las mutaciones que transforman los protooncogenes en oncogenes pueden afectar a:
• La secuencia codificante: dando proteínas mutadas hiperactivas.
• Las secuencias regulatorias: afectan el nivel de la expresión.
Proteínas codificadas por protooncogenes pueden tener mutaciones que conducen a su hiperactividad y, por
ende, favorecer el fenotipo de hiperproliferación. En general todos los genes que codifican la vía de
señalización de las señales mitogénicas gatilladas por los factores de crecimiento, están codificadas por
protooncogenes. Los factores de crecimiento mitógenos ejercen su función uniéndose a receptores de
membrana del tipo Tirosina-Kinasa y esa unión puede activar una vía de señalización intercelular en donde
estaban involucradas las proteínas RAS, que terminaban activando factores de transcripción como Myc.
Imaginemos que existe una mutación en una célula de la proteína RAS que sea activa independientemente de
que haya la unión de un mitógeno a su receptor y, por ende, bajo esas condiciones decimos que RAS tiene una
mutación que transformó al Protooncogén RAS en un oncogén.
Por ejemplo, Myc:
✓ Estimula la síntesis de Ciclina E/ Cdk2: la hiperactivación de Myc favorece que una célula atraviese el
punto de restricción
✓ Inhibe a P21: va a estimular el atravesamiento del punto de restricción, no sólo porque estimula la síntesis
de ciclina y CDK, sino también porque disminuye la síntesis del inhibidor de estos complejos.
✓ Induce la expresión del gen de la telomerasa: la telomerasa es una ribonucleoproteína que permite
extender la longitud de los telómeros. La hiperactivación de Myc permite explicar que las células tumorales,
con una mutación de hiperactivación de Myc, no tengan senescencia celular.
✓ Inhibe la E-cadherina: la célula para tener un fenotipo invasivo tiene que romper las uniones con sus
vecinas para generar un fenotipo mesenquimático con capacidad invasiva. La de E-cadherina permite la
formación de uniones adherentes entre las células y, al ser inhibida, se favorece el desarrollo de ese
fenotipo
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✓ La hiperactivación de Myc también puede conducir al desarrollo de la vía apoptótica: esto resulta
paradójico...pero nos ayuda a entender como una única mutación, por más que en principio contribuya a
la hiperproliferación, no suele ser suficiente como para dotar a las células tumorales de sus características.
2. Puede ocurrir que un gen supresor de tumores se inactive. Por ejemplo, una mutación de p53
Radiación ionizante, rayos UV, señales de hiperproliferación e hipoxia activan a p53. Cuando p53 se
activa…
✓ Se acumula dentro de las células y funciona como un factor específico de la transcripción= permite que
las células expresen muchos genes como genes que reparan el ADN y P21. P21 inhibe a la CDK-ciclina
poniendo un freno al avance del ciclo celular y también es un gen supresor de tumores, pero a nivel
jerárquico p53 tiene una regulación superior.
✓ Permite la transcripción de proteínas proapoptóticas
✓ Induce la senescencia celular
A P53 se lo conoce como el guardián del genoma y las consecuencias de que haya perdido su función es
que la célula no tendrá los frenos y seguirá progresando.
Más frecuentemente se ha encontrado mutado en cánceres humanos (50% de los casos).
¿Por qué las proteínas de la reparación del ADN encajan bajo la definición de genes supresores de tumores (si no
están vinculadas a la proliferación)?
Los cambios prestacionales al no ser corregidos suelen ser fijados como mutaciones luego de una división celular. Si
una célula tiene mutaciones de estas proteínas: la tasa de mutaciones que acumule va a aumentar y, eventualmente,
aumentarán las chances de que esas mutaciones afecten finalmente a un protooncogén o a otro gen supresor de
tumores.
El tipo de mutación particular que transforma un protooncogén en oncogén es diferente respecto de la mutación
que afecta a los genes supresores de tumores. En el caso del protooncogén: este debe sufrir una mutación de
ganancia de función, que haga que el producto mutado tenga un mayor grado de actividad o mayor grado de
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expresión respecto de su variante no mutada. Por el contrario, las mutaciones de genes supresores de tumores que
conducen a la hiperproliferación tienen un sentido funcional inverso, son mutaciones que van a conducir a una
pérdida de función.
ADQUISICIÓN DEL FENOTIPO INVASIVO

Esta adquisición requiere de nuevas mutaciones (además de las que afectan la proliferación)
• Necesitan de angiogénesis.
• Disminuir la adhesión: activando la transición epitelio-mesenquimática.
• Necesitan de mutaciones que le permitan la supervivencia en el torrente sanguíneo y linfático.
Dato: No todas las células de nuestro cuerpo expresan los mismos genes supresores de tumores. Esto permite explicar
porque ante una mutación de un determinado gen se desarrollan tumores en algunos tipos celulares, pero no en
otros.

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Histología (Universidad de Buenos Aires)

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Mantenimiento y Variabilidad del Genoma

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Función principal Reparación y asistencia en replicación Reparación Replicación

Actividad Proofreading (exonucleasa 3’ a 5’) Si Si Si

Actividad corrimiento de muescas (exonucleasa 5’ a 3’) Si No No

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¿Cuáles son las características del Ciclo Celular?

CONTROL DEL CICLO CELULAR EUCARIOTA

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Hay otros mecanismos adicionales que regulan la actividad de los complejos

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PUNTOS DE CONTROL DEL CICLO CELULAR

CONTROLES EXTRACELULARES DEL CICLO

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HIPERPROLIFERACIÓN EN EL CONTEXTO TUMORAL

ALGUNOS EVENTOS CLAVES

@necroticaenfmed→ Cohesinas: <unen= a las cromátides hermanas a lo largo de toda su extensión

Regulación de la Expresión Génica 1

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Modificaciones Covalentes de Histonas

Lisina (K) Acetilación HAT (acetiltransferasas)

Lisina (K) Metilación HMT (metiltransferasas)

Serina (S) Fosforilación Kinasas

ACTIVIDAD DE COMPLEJOS REMODELADORES DE LA CROMATINA

METILACIÓN DEL ADN

. ESTOS ACTÚAN PUNTUALMENTE EN SECTORES DEL GENOMA.

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✓ Secuencias regulatorias: regiones del genoma que van a afectar la regulación.

¿Cómo ejercen los potenciadores y silenciadores efecto?

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Muchas veces los factores específicos están sujetos a modificaciones post-traduccionales…

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Regulación de la Expresión Génica 11

CARACTERÍSTICAS DE LAS MOLÉCULAS DEL ARN

✓ Modificación del extremo 3’: implica el clivaje del transcripto primario

SECUENCIAS PRESENTES EN EL ARNM MADURO

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REGULACIÓN DE LA ESTABILIDAD DE LOS ARNm

REGULACIÓN DE LA TRADUCCIÓN, DE LA ESTABILIDAD Y ACTIVIDAD DE PROTEÍNAS

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TÉCNICAS DE AMPLIFICACIÓN O CLONACIÓN DE ÁCIDOS NUCLEICOS IN VITRO

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QPCR-RT (CUANTITATIVA CON RETROTRANSCRIPCIÓN)

TÉCNICAS DE RECOMBINACIÓN DEL ADN

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Puedo regular el nivel de expresión modificando los promotores:

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Dinámica y compartimentalización de las membranas

TRANSPORTE A TRAVÉS DE COMPUERTAS

Ciclo de entrada y salida a través del poro

Dato: la membrana nuclear es continua con el Retículo endoplásmico

¿Cómo se seleccionan las moléculas que serán transportadas en las vesículas?

Estás refieren a subunidades proteicas diferentes entre sí, pero