Poe-4 Hemoglobina Clorimetrica

RED DE SALUD IX CAMPERO- AIQUILE
HOSPITAL “CARMEN LOPEZ”

LABORATORIO CLINICO
PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO CODIGO : MP-POEH-

DETERMINACIÓN DE HEMOGLOBINA VERSION: O0
1 de 8 COLORIMETRICA - HUMAN Página:
1. PROPOSITO
Determinar los valores de la hemoglobina en muestras de sangre total por reacción colorimétrica de
punto final.( (cianometahemoglobina)
2. ALCANCE
 Involucra al área de Hematología
3. RESPONSABLES
 Técnico responsable del área de Toma de muestra

 Bioquímico responsable del área de Hematología
 Responsable de Laboratorio
4. DEFINICIONES
 Hemoglobina: Es una proteína conjugada que sirve para el transporte de O2 y CO2

 Policitemia: hiperproduccion de glóbulos rojos
 Hb: hemoglobina
 ul: microlitros
 EDTA: Etilendiaminotetracetico
5. DESARROLLO DEL PROCEDIMIENTO
5.1 Valor Clinico.
A través de la hemoglobina, el hematíe realiza su función transportadora de oxigeno, desde los

pulmones a los tejidos. A nivel de los pulmones, el oxigeno se fija a la hemoglobina, dando lugar a la
Redactado por: Revisado por: Aprobado por:

Dr. Brido Claros Rodríguez Dr.
Fecha: Junio 2023 Fecha: Junio 2023 Fecha:
LABORATORIO CLINICO

formación de oxihemoglobina, y de esta forma es transportado hacia los tejidos, donde el oxigeno es
liberado y la hemoglobina se transforma en hemoglobina reducida o desoxihemoglobina.
5.2 Fundamento.
La sangre se diluye con una solución de ferricianuro potásico y cianuro de potasio. La hemoglobina se oxida a
metahemoglobina (Fe3+) por el ferricianuro potásico. El cianuro de potasio a continuación convierte la
metahemoglobina a cianmetamehemoglobina estable cuya absorbancia a 540 nm es directamente
proporcional a la concentración de hemoglobina en la muestra:
K Fe (CN) KCN
Hb (Fe2+) metahemoglobina (Fe3+) Cianmetahemoglobina
5.3 Muestra
 Sangre venosa con EDTA

 Sangre capilar
5.4.Reactivos
 Reactivo de Drabkin
 Anticoagulante EDTA
 Agua destilada
 Estándar de hemoglobina
5.5 Materiales
 Tubos de hemolisis 75mm x 25 mm

LABORATORIO CLINICO

 Micro pipetas de 20 ul
 Pipetas de 5 ml
 Pro pipeta
 Para film
5.6 Equipos
 Espectrofotómetro
5.7 INSTRUCCIONES DETALLADAS
5.7.1 Preparación del reactivo
 Preparar el reactivo de trabajo mezclando frasco de RGTA y un fraco RGt B, con 450 ml de
agua destilada . Almacenar el reactivo preparado en un recipiente de vidrio oscuro y etiquetar
cuidadosamente.
 El reactivo de trabajo almacenado en la oscuridad de 15 – 25 ºC es estable por 12 meses
después de su preparación, pero no más allá de su fecha de caducidad.
5.7.2 Procedimiento
Pipetear en los tubos Macro Semi-micro

Reactivo de trabajo 5 ml 1 ml
Sangre 20 ul 5 ul
Standar 20 ul 10 ul
 Enjuagar la punta del micro pipeta 3 veces por carga y descarga con el
reactivo de trabajo , para asegurarse de que no quede resto alguno de
sangre. Seguir el mismo procedimiento para muestras control.

LABORATORIO CLINICO

 Sellar con Parafilm y mezclar bien por inversión

 Dejar en reposos por 3 minutos a temperatura ambiente para permitir la
conversión completa de la hemoglobina a Cianmetahemoglobina
 Leer la absorbancia a 540 nm de longitud de onda frente a un blanco
de reactivo. El color del complejo sobrante es estable
aproximadamente 2 horas cuando se protege de la luz.
5.7.3 Infraestructura
 Mesón de trabajo provisto de cajonería

 Lavadero con agua potable
 Iluminación Natural
 Iluminación Artificial
5.7.4 Bioseguridad
 Referirse al procedimiento del Manual de Bioseguridad
5.7.5 Interferencias
 Uso de material de vidrio sucio

 Muestras con coágulos o micro coágulos invalidan la técnica
 Una concentración alta de lípidos puede elevar falsamente el valor de hemoglobina en unos 3
g/dl, debido a la turbidez
 El torniquete aplicado por tiempo prolongado produce valores de hemoglobina falsamente
elevados
 Muestras hemolizadas pueden dar resultados falsamente elevados

LABORATORIO CLINICO

 Conservación inadecuada del reactivo en botellas de polietileno, se pierden grupos de CN con

formación exclusiva de metahemoglobina en vez de HiCN con lo que los valores de
concentración de Hb obtenidos son inferiores a los reales
 Leucocitos altos (>30.000) dan valores elevados, lo que puede corregirse, centrifugando la
solución y leyendo absorbancia del sobrenadante. La lipemia también interfiere, por lo que
puede usarse el plasma del paciente en reactivo de trabajo como blanco.
 Errores técnicos (pipetas mal calibradas, exceso de sangre en los tips
5.7.6 Calculo de resultado
 Determinar la concentración de hemoglobina utilizando el siguiente factor:
Factor
Técnica Hb 546 nm Unidades (Hb)
Macro g/dl 36,8

Semi micro g/dl 29,4
 Realizar el cálculo por multiplicación utilizando la siguiente fórmula:
Hb (g/dl) = Abs mta (Hb) x Factor
5.7.7 Valores de referencia
EDAD HOMBRES MUJERES

Primera semana de vida 17 a 21 g/dl 17 a 21 g/dl
1 semana a 2 meses 11 a 17 g/dl 11 a 17 g/dl
2 a 12 meses 11 a 15 g/dl 11 a 15 g/dl

LABORATORIO CLINICO

3 a 8 años 10 a 15 g/dl 10 a 15 g/dl

8 a 15 años 11 a 16 g/dl 11 a 16 g/dl
15 años a adulto 14 a 18 g/dl 12 a 16 g/dl
5.7.8 Validación de los resultados
 Realizar la determinación de hemoglobina por el método automatizado que debe diferir en

más o menos +/- 0,5 g/dl
 En condiciones óptimas se puede esperar un coeficiente de variación de 3%, la confiabilidad del
método manual es semejante al automatizado.
5.7.9 Interpretación de resultados
 Valores por debajo de los niveles normales de Hemoglobina se considera anemia; que puede
a su vez ser divida en distintos niveles:
Valor de Hb (g/dl) Tipo de Anemia Causas
- 7 – 10 g/dl Anemia Moderada - Hemorragia, hemolisis o como resultado

de un daño en la medula ósea que afecte
- < 7 g/dl Anemia grave la formación de hematíes
 Por el contrario la concentración de hemoglobina en sangre puede verse aumentada cuando

el intercambio de gases a través de los pulmones se halla alterada.

LABORATORIO CLINICO

5.7.10 Informe de resultados
 Expresar los resultados en gramos de hemoglobina por decilitro de sangre

 Anotar los resultados obtenidos en los registros correspondientes, corroborando cualquier
resultado u observación discordante, antes de su informe en el formato adecuado.
5.7.11 Control de calidad
 Referirse al procedimiento del Manual de Control de Calidad utilizando controles valorados

comerciales para un control de la precisión.
 El empleo de un patrón para calcular los resultados permite obtener una exactitud
independiente del sistema o instrumento empleado.
6. FORMULARIOS Y REGISTROS
 Cuaderno de registros de hematología

 Cuaderno de registro general de pacientes
 Formato de informe final de emisión de resultados
7. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
 Manual de Procedimientos técnicos de la Red Nacional de Hematología.1º edición. 2002.

Instituto Nacional de Laboratorios de Salud.
 Fundamentos y aplicaciones en Hematología. 2º edición. Editorial Panamericana. Rodak.
 Jacqueline H. Carr. , Bernadette F. Rodak. 2010. Atlas de Hematología clínica. 3a edición.

Editorial Panamericana. Buenos Aires Argentina.
8. ANEXOS

LABORATORIO CLINICO

 No aplica
9. DISTRIBUCION
 Responsable de Toma de muestra copia 1

 Responsable de área de Hematología copia 2
 Responsable de laboratorio copia 3
 Responsable de Calidad original


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 Involucra al área de Hematología

 Técnico responsable del área de Toma de muestra

 Hemoglobina: Es una proteína conjugada que sirve para el transporte de O2 y CO2

5. DESARROLLO DEL PROCEDIMIENTO

5.1 Valor Clinico.

A través de la hemoglobina, el hematíe realiza su función transportadora de oxigeno, desde los

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 Sangre venosa con EDTA

 Tubos de hemolisis 75mm x 25 mm

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5.7 INSTRUCCIONES DETALLADAS

5.7.1 Preparación del reactivo

Pipetear en los tubos Macro Semi-micro

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 Sellar con Parafilm y mezclar bien por inversión

 Mesón de trabajo provisto de cajonería

 Referirse al procedimiento del Manual de Bioseguridad

 Uso de material de vidrio sucio

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PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO CODIGO : MP-POEH-

 Conservación inadecuada del reactivo en botellas de polietileno, se pierden grupos de CN con

5.7.6 Calculo de resultado

 Determinar la concentración de hemoglobina utilizando el siguiente factor:

Macro g/dl 36,8

 Realizar el cálculo por multiplicación utilizando la siguiente fórmula:

Hb (g/dl) = Abs mta (Hb) x Factor

5.7.7 Valores de referencia

EDAD HOMBRES MUJERES

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PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO CODIGO : MP-POEH-

3 a 8 años 10 a 15 g/dl 10 a 15 g/dl

5.7.8 Validación de los resultados

 Realizar la determinación de hemoglobina por el método automatizado que debe diferir en

5.7.9 Interpretación de resultados

Valor de Hb (g/dl) Tipo de Anemia Causas

- 7 – 10 g/dl Anemia Moderada - Hemorragia, hemolisis o como resultado

 Por el contrario la concentración de hemoglobina en sangre puede verse aumentada cuando

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5.7.10 Informe de resultados

 Expresar los resultados en gramos de hemoglobina por decilitro de sangre

5.7.11 Control de calidad

 Referirse al procedimiento del Manual de Control de Calidad utilizando controles valorados

 Cuaderno de registros de hematología

 Manual de Procedimientos técnicos de la Red Nacional de Hematología.1º edición. 2002.

 Jacqueline H. Carr. , Bernadette F. Rodak. 2010. Atlas de Hematología clínica. 3a edición.

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