PREPARACION DE MEDIOS DE

CULTIVO

LIC. Félix Ovidio García Campos

 ¿QUE ES UN MEDIO CULTIVO?
• Un medio de cultivo es un compuesto que consta
de un gel o una solución que cuenta con los
nutrientes necesarios para permitir, en
condiciones favorables de pH y temperatura, el
crecimiento de microorganismos.
• Generalmente se presentan desecados en forma
de polvo fino o granular antes de ser preparados;
ya preparados pueden encontrarse en estado
sólido, semisólido o líquido.
Según lo que se quiera hacer crecer,
el medio requerirá unas u otras
condiciones.
1- Disponibilidad de nutrientes adecuados

2- Consistencia adecuada del medio

3- Presencia (o ausencia) de oxígeno y otros gases

4- Condiciones adecuadas de humedad

5- pH

6- Temperatura
Clasificación de medios de cultivo
bacteriológico

1.- Estado físico o consistencia.

2.-por su origen.

3.- Por su uso

 1.- Estado físico o consistencia
A.- Medios líquidos. No poseen agar en su composición.
Ej: TSC, selenito etc.

B.- Medios sólidos: llevan un agente solidificante (Agar)

que es un polisacárido acídico producido por ciertas
algas rojas que gelifica por debajo de 45° C. Se usa a
una concentración del 1,5%. Ej: TSA, AMCC etc.

C.- Medios semisólidos: poseen agar a una concentración

del 0.3-0.5 % de agar. Ej. Agar Movilidad
 2.- Por su origen
• Naturales: son los preparados a partir de sustancias
naturales de origen animal o vegetal como ser extractos de
tejidos o infusiones y cuya composición química no se
conoce exactamente.

• Sintéticos: son los medios que contienen una composición

química definida cualitativamente y cuantitativamente. Se
utilizan para obtener resultados reproducibles.

• Semisinteticos: son los sintéticos a los que se les añaden

factores de crecimiento bajo una forma de un extracto
orgánico complejo, como por ejemplo extracto de levadura
 3. Por su uso
• Medios comunes o aislamiento primario: Son aquellos que poseen
los componentes mínimos para que pueda producirse el
crecimiento de bacterias que no necesiten requerimientos
especiales. El medio más conocido de este grupo es el agar nutritivo
o agar común, que resulta de la adición de agar al caldo nutritivo.
Otros representantes de este grupo son el agar tripticasa de soja, el
agar Columbia, etc.

• Medios de enriquecimiento: Son aquellos que, además de las

sustancias nutritivas normales, incorporan una serie de
factores indispensables para el crecimiento de microorganismos
exigentes. Este enriquecimiento se hace por adición de sangre u
otros productos biológicos (sangre, suero, leche, huevo, bilis, etc.)
que aportan dichos factores. En ocasiones es posible añadir
suplementos artificiales a los medios para producir un
enriquecimiento del mismo (p. ej. Polivitex, Isovitalex, etc.)
 3. Por su uso
• Medios selectivos: Son medios utilizados para favorecer el crecimiento de
ciertas bacterias contenidas en una población polimicrobiana. El
fundamento de estos medios consiste en facilitar nutricionalmente el
crecimiento de una población microbiana específica. Un ejemplo de medio
selectivo es el caldo selenito, que se utiliza para favorecer el crecimiento
de salmonellas y frenar el del resto de enterobacterias.

• Medios inhibidores: Cuando las sustancias añadidas a un medio selectivo

impiden totalmente el crecimiento de una población microbiana, se
denomina inhibidor. Los medios inhibidores podrían considerarse como
una variante más restrictiva de los medios selectivos. Los medios
inhibidores se consiguen habitualmente por adición de sustancias
antimicrobianas o de cualquier otra que inhiba completamente el
desarrollo de una población determinada. Un medio inhibidor es el
MacConkey que permite el crecimiento de los gérmenes Gram negativos e
impide el crecimiento de los Gram positivos.
 3. Por su uso
Medios diferenciales: Se utilizan para poner en evidencia
características bioquímicas que ayuden a diferenciar géneros o
especies. La adición de un azúcar fermentable o un sustrato
metabolizable se utilizan para este fin. El medio MacConkey es un
medio diferencial porque permite distinguir los gérmenes que
fermentan la lactosa de aquellos que no lo hacen. También lo son el
C.L.E.D. (lactosa +/lactosa -), el agar sangre (tipo de hemólisis), el SS
(que es doblemente diferencial), etc.

Medios de conservación: Se utilizan para conservar una cepa que,

por diversas razones nos interese mantener. Fundamentalmente se
utilizan como controles de calidad de las pruebas y reactivos
utilizados en el Laboratorio de Microbiología.
EJ: Cistina tripteina agar CTA, TSA.
 3. Por su uso
Medios de identificación: Son aquellos
destinados a comprobar alguna cualidad
especifica de una bacteria que pueda
servirnos para reconocer su identidad.
Estos deben poseer los elementos necesarios
para asegurar el crecimiento asi como el
sustrato especifico a ser identificado.
Ej.: IMVIC, medios cromogénicos.
 3. Por su uso
• Medios de transporte: Son aquellos utilizados cuando
la muestra clínica no puede ser inoculada
inmediatamente. mantener la viabilidad de todos los
organismos presentes en la muestra sin alterar su
concentración.

• Falta de carbono, nitrógeno, y factores de crecimiento

orgánico con el fin de evitar la multiplicación
microbiana.

• Se deberá seguir la indicación del fabricante para su

utilización así como también la muestra a utilizar y el
agente a aislar.
 MEDIOS DE CULTIVO REQUERIDOS EN
LOS RTA PARA LABORATORIOS NIVEL 2
• Agar sangre 5% sangre de • Agar bilis esculina
carnero • Caldo Selenito
• Agar MacConkey • Caldo Tioglicolato
• Agares para • TSC
enteropatógenos: S-S, HK • IMVIC
• Agar Mueller Hinton • Urea
• Agar Chocolate • Medios de transporte
suplementado
 Agar sangre 5% sangre de carnero
• El agar sangre es un medio de cultivo sólido enriquecido, diferencial
pero no selectivo. Es utilizado para la recuperación y crecimiento de
una gran variedad de microorganismos provenientes de muestras
clínicas o para subcultivos.

• El agar base utilizado para la preparación del agar sangre puede ser
muy amplio. Entre ellos se tienen: agar nutriente, agar infusión
cerebro corazón, agar soya tripticasa, agar Müeller Hinton, agar
Thayer Martin, agar Columbia, agar Brucella.

• Así mismo, el agar sangre es un medio diferencial, ya que permite

distinguir 3 tipos de bacterias: los beta-hemolíticos, alfa –
hemolíticos y gamma-hemolíticos.
 Beta-hemolisis
• Los beta-hemolíticos son aquellos que tienen
la capacidad de lisar o romper completamente
los glóbulos rojos, formando un halo claro
alrededor de las colonias, por tanto producen
ó ß –hemólisis y los microorganismos son
llamados ß-hemolíticos.
• Ejemplos de bacterias ß-hemolíticos
son Streptococcus pyogenes y Streptococcus
agalactiae.
Beta-hemolisis
Beta-hemolisis
 Alfa –hemolíticos
• Los alfa-hemolíticos son los que realizan una
hemólisis parcial, donde la hemoglobina es
oxidada a metahemoglobina, generándose
una coloración verdosa alrededor de las
colonias.

• Ejemplo de bacterias α – hemolíticos

son Streptococcus
pneumoniae y Streptococcus del
grupo viridans.
Alfa –hemolíticos
 Gamma-hemolisis
• Las bacterias denominadas gamma-
hemolíticas o no hemolíticas. Estas crecen
sobre el agar sin generar cambios sobre el
mismo, efecto conocido como γ –hemólisis, y
los microorganismo son γ –hemolíticos.

• Ejemplo de bacterias γ –hemolíticos: algunas

cepas de Streptococcus bovis y Enterococcus
faecalis.
Gamma-hemolisis
F. oleaje
 Preparación
• Pesar y disolver
• Se pesa la cantidad que indique el agar base escogido y se
disuelve en la cantidad de agua correspondiente, luego se
calienta a fuego moderado y se mezcla con movimientos
rotativos hasta llevar a ebullición.

• Esterilizar
• Una vez disuelto, esterilizar en autoclave a 121°C con 15 lbs
de presión por 15 minutos.

• Agregado de la sangre
• Al salir del autoclave se dejar enfriar hasta que la temperatura
oscile a 50 °C; es una temperatura que la piel humana
soporta y a la vez el agar aun no se ha solidificado.
 Preparación
• Agregado de la sangre
• Para ello, se toca con la mano y si el calor es tolerable, es la
temperatura ideal para agregar la cantidad de sangre
desfibrinada correspondiente (50 ml por cada litro de agar).
Mezclar suavemente para homogenizar, posteriormente
servir en placas de Petri estériles dentro de una campana
de flujo laminar o frente al mechero de Bunsen.

• Dejar solidificar y guardar en un de forma invertida y

refrigerar en nevera a 2-8°C hasta su uso.

• El paso del agregado de la sangre es crucial.

Agar MacConkey
 Agar MacConkey
• Es un medio selectivo que permite el aislamiento
exclusivo de bacilos Gram negativos y además
permite distinguir entre bacilos fermentadores y
no fermentadores de la lactosa, lo que lo hace un
medio diferencial.
• Permite el aislamiento de
Enterobacteriaceae, Pseudomonas
sp, Acinetobacter sp, Alcalígenes sp,
Chromobacterium violaceum, Stenotrophomonas
maltophilia, Aeromonas sp, etc.
 Agar MacConkey

• El agar MacConkey contiene sales biliares y cristal violeta.

• Estos elementos se encargan de inhibir el crecimiento de

bacterias Gram positivas y algunos bacilos Gram negativos
exigentes. A su vez favorece el desarrollo de los bacilos
Gram negativos que no son afectados por estas sustancias.
Por ello es un medio selectivo.

• La lactosa es el punto clave para que el medio sea un medio

diferencial, pues los microorganismos que poseen la
capacidad para fermentar la lactosa desarrollaran colonias
rosadas fuertes.
Agar MacConkey
 Agar MacConkey
• Algunas bacterias pueden fermentar la lactosa lentamente o
débilmente, desarrollando colonias color rosado pálido y siguen
siendo lactosa positiva.

• Las que no fermentan la lactosa utilizan las peptonas como fuente

de energía, produciendo amoníaco, alcalinizando el medio. Por ello
las colonias que se originan son incoloras o transparentes.

• La fermentación de la lactosa genera la producción de ácidos

mixtos. Los mismos acidifican el medio a un pH por debajo de 6,8.
• Esto hace que el indicador de pH vire hacia a una tonalidad rosada
intenso. La intensidad del color puede variar dependiendo el pH
final.
Agar MacConkey
 Preparación

• Se pesa la cantidad que indique el fabricante y se disuelve en la

cantidad de agua correspondiente, luego se calienta a fuego
moderado y se mezcla con movimientos rotativos hasta llevar a
ebullición.

• Luego se coloca en el autoclave y se esteriliza a 121°C con 15 lbs

de presión por 15 minutos. Culminado el tiempo, se saca del
autoclave y se deja enfriar hasta alcanzar una temperatura de 45°C,
para posteriormente servir en placas de Petri estériles dentro de
una campana de flujo laminar o frente al mechero de Bunsen.

• Dejar solidificar y guardar en un de forma invertida y refrigerar en

nevera a 2-8°C hasta su uso.
Agar Hektoen
 Agar Hektoen
• El medio está compuesto por proteosa peptona, extracto
de levadura, sales biliares, lactosa, sacarosa, salicina,
tiosulfato de sodio, cloruro de sodio, citrato de hierro,
citrato de amonio, azul de bromotimol, fucsina ácida y
agar. Esta formulación permite diferenciar los géneros
Shigella y Salmonella del resto de las bacterias capaces de
crecer en este medio.

• Todas las bacterias capaces de crecer en este medio que no

pertenezcan al género Salmonella y Shigella desarrollarán
colonias de color salmón o naranja a excepción del género
Proteus. Esto se debe a la fermentación de uno o varios de
los carbohidratos presentes, lo cual acidifica el medio, lo
que hace virar al indicador de pH.
Agar Hektoen
• Por su parte, el género Shigella y Salmonella no son capaces de
fermentar a ninguno de los carbohidratos presentes, utilizando
únicamente a las peptonas como fuente de energía, lo que
alcaliniza el medio y por ello sus colonias son verde-azuladas.

• También en este medio se pueden distinguir las bacterias capaces

de formar sulfuro de hidrógeno. El tiosulfato de sodio actúa como
fuente de sulfuro mientras que el citrato de hierro es el agente
revelador. Ambos compuestos hacen posible la formación de un
precipitado negro de sulfuro de hierro que evidencia la reacción.

• El precipitado negro en el centro de la colonia con un halo

transparente alrededor da un aspecto de ojo de pescado. Esta
característica sugiere la presencia del género Salmonella.
Agar Hektoen
 Preparación HK
• Pesar y disolver de acuerdo a las instrucciones
del fabricante.
• Calentar hasta llevar a ebullición.
• No autoclavar.
• Verter en mono o biplato según la necesidad
de cada laboratorio.
• Guardar de 2-8°C
 Control de calidad
• Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella
enteritidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC
12022 y Shigella sonnei ATCC 25931.

• Los resultados esperados son los siguientes:

Salmonella typhimurium y Salmonella enteritidis
deben desarrollar colonias color verde – azuladas
con o sin centro negro. En tanto que las especies
de Shigella crecerán como colonias color verde –
azuladas.
 Control de calidad
• También se pueden incluir cepas de Escherichia coli
ATCC 29212, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae
ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 y
Staphylococcus aureus ATCC 25923.
• En estos casos las características observadas son las
siguientes: E. coli y K. pneumoniae desarrollarán en
este medio colonias color salmón a naranja, con un
precipitado del mismo color alrededor. En tanto
que, Proteus desarrollará colonias azul-verdoso con o
sin centro negro.
• Mientras que S. aureus y E. faecalis deben ser inhibidos
 Agar Salmonella Shiguella
• El agar SS tiene una composición compleja; está constituido por
extracto de carne, peptona, lactosa, sales biliares, citrato de sodio,
tiosulfato de sodio, citrato férrico, agar, rojo neutro, verde brillante
y agua destilada. Dada su gran selectividad se pueden sembrar
muestras con abundante flora mixta.

• El género Salmonella es muy resistente a las sales biliares, tanto

que son capaces de vivir en la vesícula biliar de algunos pacientes
portadores que expulsan la bacteria constantemente por las heces.
• Las cepas de Salmonella typhi normalmente son planas incoloras
con un punto negro en el centro de la misma. Diferenciar de
Proteus

• Por otra parte, las colonias del género Shigella son planas incoloras
sin ennegrecimiento.
 Preparación S-S
• Pesar y disolver de acuerdo a las instrucciones
del fabricante.
• Calentar hasta llevar a ebullición.
• No autoclavar.
• Verter en mono o biplato según la necesidad
de cada laboratorio.
• Guardar de 2-8°C
 Control de calidad
• Escherichia coli —————————-colonias convexas
rosadas.

• Enterobacter y Klebsiella—————— colonias grandes

y mucoides rojas o
rosadas.

• Shigella flexneri —————————-colonias planas

trasparentes o incoloras.

• Salmonella typhimurium —————— colonias incoloras

con centro negro.

• Enterococcus faecalis———————- inhibición total.

 Agar TCBS
• Las siglas TCBS significan tiosulfato citrato bilis
sacarosa. A este agar también se le conoce con el
nombre de medio selectivo para Vibrios

• Su alta selectividad viene dada por el agregado de

citrato de sodio y bilis de buey; ambos son agentes
inhibidores que además proporcionan un pH alcalino al
medio, restringiendo el crecimiento de la flora
acompañante y favoreciendo el crecimiento de V.
cholerae, entre otras especies. Cabe destacar que
Vibrio cholerae es muy sensible a la acidez.
 Agar TCBS
• La sacarosa es el azúcar fermentable que junto a los indicadores de
pH azul de bromotimol y azul de timol le dan el carácter diferencial
al medio. Por tal motivo, con este medio es posible diferenciar las
cepas fermentadoras de sacarosa de las no fermentadoras.

• Las colonias de las cepas fermentadoras de sacarosa se desarrollan

de color amarillo y harán virar el medio de verde a amarillo por la
producción de ácidos. Las no fermentadoras crecen traslúcidas y el
medio queda del color original (verde).

• Así mismo, este medio contiene tiosulfato de sodio como fuente de

azufre y citrato férrico como agente revelador. Ambos evidencian a
las bacterias capaces de producir sulfuro de hidrógeno (gas
incoloro). El H2S se forma a partir del tiosulfato y posteriormente al
reaccionar con el citrato férrico se forma un precipitado negro
visible.
 Agar TCBS
• Las muestras de heces si no pueden ser sembradas
inmediatamente en el medio selectivo, deben
trasportarse en el medio de Cary Blair.
• Para aumentar la sensibilidad del cultivo, las heces
pueden ser pasadas por agua peptonada a pH 8,4
como medio de enriquecimiento durante 8 horas
máximo, de allí se subcultiva al medio TCBS.
• También hay que tener en cuenta que algunas cepas de
Vibrios pueden causar septicemias en pacientes
inmunosuprimidos, por tanto pueden aislarse de
hemocultivos.
 Agar TCBS
• Las colonias presuntivas de Vibrio cholerae son de
tamaño mediano, lisas, opacas, de bordes delgados y
de color amarillas debido a que fermentan la sacarosa.

• De forma similar crecen las especies de V. alginolyticus,

V. fluvialis, V. hareyi, V. cincinnatiensis, V. furnissii, V.
metschnikovii y algunos V. vulnificus.

• Otras especies de Vibrios clínicamente importantes

como V. parahaemolyticus no fermentan la sacarosa,
desarrollándose como colonias verde oliva.
 Preparación TCBS
• Pesar y disolver de acuerdo a las instrucciones
del fabricante.
• Calentar hasta llevar a ebullición.
• No autoclavar.
• Verter en mono o biplato según la necesidad
de cada laboratorio.
• Guardar de 2-8°C
Agar Chocolate
 Agar Chocolate
• Es un medio de cultivo sólido, enriquecido, no selectivo
y no diferencial. Es utilizado principalmente para el
aislamiento de microorganismos exigentes desde el
punto de vista nutricional.

• Su utilidad aumenta especialmente en el sembrado de

muestras que normalmente son estériles, como LCR y
líquido articular. Aunque también se incluye dentro de
los medios escogidos para siembras de muestras
polimicrobianas, pero en estos casos es necesario la
adición de antibióticos que inhiban la flora
concomitante.
 Agar Chocolate
• Este medio posee un color marrón característico
muy parecido al chocolate, de allí su nombre.

• La preparación es muy similar a la del agar

sangre, solo que en este caso la sangre debe ser
calentada con la finalidad de que los glóbulos
rojos se rompan.

• Su preparación, al igual que el agar sangre, es

muy delicada, pues es fácilmente contaminable.
 Agar Chocolate
• La hemólisis de los glóbulos rojos proporcionan al
medio factor X (hemina) y factor V (NAD) es
suministrado a travez del suplemento comercial,
necesarios para el crecimiento de algunos
microorganismos, como el género
Haemophilus. También es muy útil para el aislamiento
de Neisserias sp.

• Al igual que el agar sangre, se puede usar como agar

base diferentes medios dependiendo de la necesidad.
Entre los medios utilizados se encuentran infusión
cerebro corazón y agar soja tripticasa, aunque los más
recomendados son agar Columbia, Müeller Hinton,
agar GC y agar Thayer Martin.
 Agar Chocolate
• Algunas variantes de agar chocolate incluyen un
suplemento enriquecido disponible
comercialmente llamado Isovitalex, Vitox o
Polivitex.

• Estos suplementos contienen vitamina B12, L-

glutamina, adenina, clorhidrato de guanina, ácido
p-aminobenzoico, nicotinamida adenina
dinucleótido (NAD), pirofosfato de tiamina,
nitrato férrico, clorhidrato de tiamina,
hidrocloruro de cisteína, L-cistina y glucosa.
 Preparación A. Cho
• Pesar y disolver: Se procede a pesar la cantidad necesaria y se
disuelve con el agua de acuerdo a la especificación del fabricante.

• Se calienta a fuego moderado y se va mezclando suavemente con

movimientos rotatorios hasta disolver completamente el medio
deshidratado, dejando hervir por 1 minuto.

• Esterilizar en el autoclave para esterilizar el medio a 121°C con 15

lbs de presión por 15 minutos.

• Agregado de la sangre: Al salir del autoclave se deja reposar hasta

que la temperatura del medio esté aproximadamente entre 55 a
70°C para colocar la sangre y mezclar hasta que el medio se torne
color marrón.
 Preparación A. Cho
Si utilizamos Hb liofilizada el vol total del medio
se dividirá en dos partes:
Ej: prepararemos 1000 mL de agar Chocolate
1. 500 mL se destinaran a la cocción de la base.
2. Los otros 500 mL serán para disolver los
cristales de hemoglobina.
Esterilizar por separado, terminado el ciclo
incorporar sln de Hb estéril a la base a 70°C
 Preparación A. Cho
• Si se va a agregar suplementos, este es el
momento de hacerlo ± 50-55°C.
Posteriormente mezclar y servir a cada placa
de Petri estéril.
• Evitar en lo posible la formación de burbujas
en la adición de la sangre o solución de
hemoglobina y al añadir el suplemento.
 Control de calidad
• Es importante que la sangre se coloque a la temperatura
indicada, pues es la ideal para lisar los glóbulos rojos y a la
vez mantener el factor V que es termosensible.

• No deben quedar burbujas sobre la superficie del agar. De

cada lote de 100 placas se debe incubar una o dos placas
en la estufa a 37°C durante 24 horas para comprobar su
esterilidad.

• Se deben tener en el laboratorio cepas bacterianas

controles para evaluar la eficacia del medio recién
preparado para el crecimiento de los principales
microorganismos exigentes de importancia clínica.
 Control de calidad
• Haemophilus influenzae ATCC 10211 De bueno
a excelente
• Neisseria gonorrhoeae ATCC 43069 De
aceptable a excelente
• Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 De
bueno a excelente
Streptococcus pneumoniae
Neisseria gonorrhoeae
Agar Müeller Hinton
 Agar Müeller Hinton
• Originalmente fue creado por John Howard Müeller
y Jane Hinton para aislar bacterias exigentes desde el
punto de vista nutricional, como Neisseria
gonorrhoeae y Neisseria meningitidis.

• Debido a sus características resultó ser ideal para el

estudio de la susceptibilidad a los antibióticos,
proporcionando resultados confiables y reproducibles.

• Müeller Hinton es el medio de cultivo aceptado por la

CLSI y EUCAST, para la ejecución de la prueba de
susceptibilidad antimicrobiana por el método de
difusión en disco de Kirby y Bauer.
 Agar Müeller Hinton
• La concentración del inóculo
• La concentración y conservación de los discos de
antibióticos
• La colocación del número adecuado de discos
sobre el agar
• La distancia entre un disco y otro
• La colocación estratégica de ciertos antibióticos
• La atmósfera, la temperatura y el tiempo de
incubación.
 Preparación MH
• Pesar de acuerdo a las instrucciones del fabricante.
• Llevar al autoclave para esterilizar a 121°C con 15 lbs de
presión por 15 minutos. Al sacar del autoclave, verter 25 a
30 ml en placas de Petri estériles de 10 cm de diámetro.

• Las placas deben quedar con un grosor promedio de 4 mm

(ideal), siendo permitido un rango de 3.5-4.5 mm.
• Si se desea preparar agar sangre usando como base agar
Müeller Hinton, se vierte 5% de sangre de cordero estéril y
desfibrinada antes de servir en las placas.
• El pH final del medio debe quedar entre 7,2 a 7,4.
• Invertir y guardar en nevera, hasta su uso. Dejar que la
placa tome temperatura ambiente antes de usar.
Agar Müeller Hinton
 Control de calidad MH
• Para saber si el medio contiene la cantidad adecuada de
timina, se debe sembrar una cepa de Enterococcus faecalis
ATCC 29212 y probar la susceptibilidad a trimetoprim
sulfametoxazol (SXT), el mismo debe dar un halo igual o > a
20 mm para que sea satisfactorio.

• Los niveles de calcio y magnesio se controlan analizando las

materias primas y suplementando con fuentes de calcio y/o
magnesio según se requiera para producir los diámetros de
zona correctos contra disco de Gen 10 y Pseudomonas
aeruginosa ATCC 27853. 16-21 mm aceptables.

• Medición de profundidad.
 Causas de error
• -Un pH del medio por debajo al indicado (ácido) produce
halos más pequeños en los aminoglucósidos y macrólidos
(riesgo de falsa resistencia), y halos más grandes en la
penicilina, tetraciclina y novobiocina (riesgo de falsa
sensibilidad).

• -Si el pH se encuentra por encima del indicado (alcalino) se

invierten los efectos descritos anteriormente.

• -Los medios con concentraciones de timina y timidina

elevadas influyen reduciendo significativamente los halos
de inhibición de las sulfonamidas y el trimetoprim.

• -Altas concentraciones de calcio y magnesio producen

falsas resistencia de los aminoglucósidos, polimixina B y
tetraciclinas frente a cepas de Pseudomonas aeruginosa.
 Causas de error
• -Bajas concentraciones de calcio y magnesio
producen falsas sensibilidades de los
aminoglucósidos, polimixina B y tetraciclinas
frente a cepas de Pseudomonas aeruginosa.

• -La presencia de zinc afecta los resultados de los

discos de carbapenems (imipenem, meropenem y
ertapenem).

• -El grosor del medio por debajo de 3 mm produce

resultados de falsa sensibilidad, mientras que un
grosor por encima de 5 producirá falsa
resistencia.
Caldo selenito
 Caldo Selenito
• El caldo selenito es un medio de cultivo líquido selectivo.
Fue diseñado por Leifson para el enriquecimiento de
muestras en donde se sospecha la presencia de bacterias
enteropatógenas del género Salmonella.

• La composición química que posee favorece la

recuperación de estos microorganismos y a su vez inhibe el
crecimiento de otros.

• En el medio de cultivo, la peptona aporta los nutrientes

necesarios para el adecuado desarrollo bacteriano, la
lactosa es el hidrato de carbono fermentable, el selenito de
sodio inhibe la flora Gram positiva y la mayoría de la flora
entérica excepto Salmonella spp y Shiguella. durante las
primeras 8-12 horas de incubación.
 Caldo Selenito
• Cuando el Selenito impide el crecimiento de
las bacterias que son inhibidas se genera
alcalinidad, pero esta alcalinidad a su vez
reduce la actividad tóxica del Selenito,
produciéndose un crecimiento excesivo de
bacterias acompañantes. Por ello la Lactosa al
ser fermentada genera acidez y permite
mantener el pH neutro o ligeramente ácido. El
Fosfato ayuda a mantener estable el pH.
 Preparación C. Selenito
• Pesar y disolver de acuerdo a las indicaciones
del fabricante.
• Calentar brevemente para terminar de
disolver.
• No esterilizar en autoclave.
• Servir asépticamente 10 o 15 ml en tubos de
ensayo estériles.
 CONTROL DE CALIDAD
• A continuación se indican los resultados obtenidos de
crecimiento en MacConkey Agar, después de 18 a 24 horas de
incubación a 35ºC, previo enriquecimiento en Selenito Broth
durante 12 horas a 35 ºC.
Caldo Tioglicolato
 Caldo Tioglicolato
• Este medio posee un bajo potencial de oxidación –
reducción, por ello no es recomendable para el
desarrollo de bacterias aerobias estrictas, pero es ideal
para recuperar bacterias aeróbicas facultativas,
anaerobias estrictas y microaerófilas poco exigentes.

• Caldo con una pequeña cantidad de agar; esto hace

que posea un bajo potencial de oxido-reducción,
debido a que frena la entrada de oxígeno, de tal
manera que el oxígeno va disminuyendo a medida que
se profundiza hacia el interior del tubo.
 Caldo Tioglicolato
• Ideal para el desarrollo de bacterias aerobias
facultativas, microaerofilas y anaerobias
estrictas, estas 2 últimas sin necesidad de
incubar bajo estas condiciones.
• El mismo medio regula la cantidad de oxígeno
dentro del medio, estando ausente en el
fondo del tubo y en cantidad suficiente en la
superficie.
 Preparación C. Tioglicolato
• Pesar y disolver según las indicaciones del fabricante.
• Llevar a una fuente de calor y agitar frecuentemente
hasta que se disuelva completamente.
• Verter el medio en tubos de ensayos y autoclavar a
121°C con 15 lbs por 15 minutos. Dejar enfriar antes de
usar. Revisar el inserto de la casa comercial para su
conservación. Algunas recomiendan guardar a
temperatura ambiente en lugar oscuro, y otras en
nevera protegidos de la luz.
 Recomendaciones
• -En ocasiones se puede observar que la superficie del caldo
tioglicolato con indicador se torna de color rosado; esto se debe a la
oxidación del medio. Si el color rosado abarca un 30% o más del
total del caldo se puede calentar en baño maría por 5 minutos,
enfriarse nuevamente y utilizarse.

• Esto eliminará el oxígeno absorbido, volviendo el medio a su color

original. Este procedimiento solo se puede realizar una vez.

• -Para mejorar el crecimiento de bacterias aerobias se debe incubar

con la tapa ligeramente floja. Sin embargo, es preferible utilizar
para este fin un caldo de infusión cerebro corazón o caldo soya
tripticasa para el buen desarrollo de los aerobios estrictos.
Tripticasa Soya Caldo
 Tripticasa Soya Caldo
• El caldo soya tripticasa es un medio de cultivo líquido,
muy nutritivo y no selectivo.
• Es capaz de reproducir las bacterias patógenas
clínicamente importantes, incluyendo las que son
exigentes desde el punto de vista nutricional y
bacterias anaerobias. Algunos hongos oportunistas y
contaminantes también pueden desarrollarse en este
medio.
• Económico.
• Fácil de preparar.
• Si se le adiciona 6,5% de cloruro sódico puede ser
utilizado para el crecimiento de Enterococcus y otros
Streptococcus del Grupo D.
 Preparación TSC
• Pesar y disolver de acuerdo al fabricante.
• La mezcla posteriormente se lleva a una fuente
de calor para ayudar a la disolución del medio. Se
debe agitar frecuentemente hasta llevar a
ebullición.
• Una vez disuelto se distribuye en tubos del
tamaño adecuado según se necesite.
Posteriormente, se esterilizan los tubos con el
medio en el autoclave a 121°C con 15 lbs. de
presión por 15 minutos.
 MEDIOS DE CULTIVO REQUERIDOS EN
LOS RTA PARA LABORATORIOS NIVEL 2
• Agar sangre 5% sangre de • Agar bilis esculina
carnero • Caldo Selenito
• Agar MacConkey • Caldo Tioglicolato
• Agares para • TSC
enteropatógenos: S-S, HK • IMVIC
• Agar Chocolate • Urea
suplementado • Medios de transporte
• Agar Mueller Hinton
 Agar TSI
• Prueba bioquímica para orientar la identificación inicial de
los bacilos Gram negativos, evidencia la fermentación de
los azúcares presentes glucosa, lactosa y sacarosa, y la
producción de sulfuro de hidrógeno y gas.

• El pH del medio preparado está equilibrado a 7,3 y el

indicador de pH (rojo de fenol) vira a amarillo por debajo
de 6,8. Esto quiere decir que pequeñas cantidades de
ácidos producidos por la fermentación de los azúcares
harán virar el medio de color rojo-naranja a amarillo.

• Si no ocurre fermentación habrá alcalinización del medio

por el uso de las peptonas, virando de rojo-naranja a rojo
fuerte.
 Agar TSI
• La interpretación de la prueba divide a los microorganismos
en 3 categorías: no fermentadores de glucosa, no
fermentadores de lactosa y fermentadores de
lactosa/sacarosa.

• Cabe destacar que la cantidad de glucosa en el medio es

limitada, mientras que la concentración de lactosa y
sacarosa es 10 veces mayor.

• Las bacterias de la Familia Enterobacteriaceae y otros

microorganismos fermentadores de glucosa comenzarán a
fermentar este azúcar por ser el carbohidrato más simple
para obtener energía.
 Microorganismos no fermentadores de glucosa

• Glucosa monosacáridos; Sacarosa y Lactosa Disacáridos.

• Aquí no se forman ácidos, pero existe formación de aminas

en el bisel por la utilización de las peptonas.

• En este caso el bisel vira a un rojo más fuerte y el fondo del

tubo puede quedar sin cambio o puede alcalinizarse
también, quedando todo el tubo rojo.

• Interpretación: K/K significa bisel alcalino / fondo alcalino.

• Este resultado indica que el microorganismo no pertenece

a la Familia Enterobacteriaceae.
 Microorganismos no fermentadores
de lactosa/sacarosa
• La bacteria consumirá toda la glucosa presente al cabo
de 6 a 8 horas aproximadamente, siendo capaz de
acidificar tanto el bisel como el taco; es decir, el agar
habrá virado completamente a amarillo. Pero al
agotarse la glucosa y ante la imposibilidad de utilizar la
lactosa y la sacarosa, la bacteria comenzará el
metabolismo de las proteínas.

• Esta reacción necesita oxígeno, por ello la degradación

de las peptonas se da en la superficie (bisel). Las aminas
producidas alcalinizan el bisel virando de color amarillo
a rojo. Esta reacción es evidenciada a las 18 a 24 horas
de incubación.

• Interpretación: K/A significa bisel alcalino y taco ácido.

 -Microorganismos fermentadores de
lactosa/sacarosa

• Después de que la mínima cantidad de glucosa

presente en el medio se agota y si la bacteria es
capaz de desdoblar la lactosa o la sacarosa, se
seguirán produciendo ácidos, y al cabo de 18 a 24
horas todo el tubo –bisel y taco- continuarán
amarillos.

• Cabe destacar que la utilización de la glucosa se

realiza de dos maneras: una en forma aerobia en
el bisel del tubo, y la otra de forma anaerobia en
el fondo del tubo.

• Interpretación: A/A significa bisel ácido/ fondo

ácido. Puede presentar gas o no.
 Producción de gas

• Algunos microorganismos son capaces de

producir gas durante la fermentación de los
azúcares. El gas se evidencia en el tubo por la
presión que este ejerce dentro del agar. La
presión origina la formación de burbujas o el
desplazamiento del agar. En ocasiones la
formación de gas puede fracturar al medio.
• Es importante que al momento de sembrar el
medio TSI, la punción se haga limpiamente por el
centro del agar hasta llegar al fondo.
 Producción de sulfuro de hidrógeno

• Las bacterias capaces de producir sulfuro de

hidrógeno (gas incoloro), toman el azufre del
tiosulfato de sodio presente en el medio.
• Una vez formado el H2S reacciona con el
sulfato ferroso de amonio, produciendo
sulfuro de hierro (precipitado negro
claramente visible).
• La producción de H2S se reporta como positiva
(+) o negativa (-).
Producción de sulfuro de hidrógeno
Agar Bilis Esculina
 Agar Bilis Esculina
• El agar bilis esculina es un medio de cultivo sólido selectivo y
diferencial. Es utilizado para determinar la capacidad que posee un
microorganismo de crecer en un medio que contiene bilis y además
descomponer el glucósido esculina en esculetina y glucosa.

• La prueba se basa en demostrar si la bacteria es capaz de hidrolizar

a la esculina, si esto ocurre la esculetina reacciona con el hierro
presente en el medio, formando un compuesto marrón oscuro, casi
negro, el citrato férrico actúa como un revelador de la reacción.
Esta característica hace que el agar bilis esculina sea un medio
diferencial.

• Por su parte, la bilis es un inhibidor que impide el crecimiento de

algunos microorganismos, por ello, este medio se considera
selectivo.
Agar Bilis Esculina
 Preparación A.B.E.
• Se pesa la cantidad que indique el fabricante y se disuelve en la
cantidad de agua correspondiente, luego se calienta a fuego
moderado y se mezcla con movimientos rotativos hasta llevar a
ebullición.

• Distribuir 5 ml en tubos de ensayo con tapa de rosca.

• Luego se coloca en el autoclave y se esteriliza a 121°C con 15 lbs

de presión por 15 minutos.

• Sacar del autoclave e inclinar los tubos sobre un soporte, de

manera que solidifique el agar en un amplio pico de flauta.

• Conservar en nevera hasta su uso. Llevar a temperatura ambiente

antes de sembrar.
 Control de calidad
• Para evaluar la calidad del medio se debe
disponer de una cepa de Enterococcus faecalis
ATCC 29212 como control positivo y una cepa
de Streptocococus pyogenes 19615 o E. coli
ATCC 25922 como control negativo.
MIO
 Indol
• La tripteína es una fuente de triptófano para evidenciar la presencia
de la enzima triptofanasa, que degrada el triptófano por una
desaminación reductiva liberando indol, ácido pirúvico, amoníaco y
energía.

• El indol es incoloro, por tanto su presencia se revela al agregar cinco

gotas del reactivo de Ehrlich o de Kovacs, ambos con p-
dimetilaminobenzaldehído.

• El grupo aldehído de este compuesto reacciona con el indol,

generando un producto de color rojo fucsia en forma de anillo en la
superficie del agar.

• Cualquier vestigio de color se debe considerar como una prueba

positiva. La prueba debe leerse inmediatamente, pues pasado el
tiempo el color se degrada.
 Ornitina
• Si la bacteria produce la enzima ornitina descarboxilasa, esta podrá
actuar una vez que el medio haya sido acidificado por la
fermentación de la glucosa.

• La enzima ornitina descarboxilasa actúa sobre el grupo carboxilo del

aminoácido produciendo una amina llamada putresina que
alcaliniza nuevamente el medio.

• Esta prueba debe leerse después de 24 horas de incubación, pues si

se intenta leer antes se puede malinterpretar la prueba con un falso
negativo.

• Hay que recordar que la primera reacción que ocurre es la

fermentación de la glucosa, por lo que el medio se torna de color
amarillo en una fase inicial (primeras 10 a 12 horas). Si
posteriormente ocurre la descarboxilación de la ornitina, el medio
virará a morado.
 Movilidad
• La capacidad de la bacteria de moverse se evidenciará
si se observa un medio turbio o si hay una línea gruesa
de crecimiento que se expande alrededor de la
inoculación inicial.

• Una prueba de motilidad negativa se evidenciará al

observar una línea delgada de crecimiento, y todo
alrededor estará sin crecimiento.

• Es importante que la motilidad se lea antes de revelar

el indol, ya que el agregado del reactivo enturbia todo
el medio.
 Preparacion MIO
• Se pesa la cantidad que indique el fabricante y se disuelve
en la cantidad de agua correspondiente, luego se calienta a
fuego moderado y se mezcla con movimientos rotativos
hasta llevar a ebullición.

• Distribuir 5 ml en tubos de ensayo con tapa de rosca.

• Luego se coloca en el autoclave y se esteriliza a 121°C con

15 lbs de presión por 15 minutos.

• Dejar enfriar verticalmente.

• Guardar en refrigeración hasta su uso.

 Control de Calidad
• Las cepas que pueden utilizarse son Escherichia
coli, Morganella morganii, Klebsiella
pneumoniae, Klebsiella aerogenes y Proteus
mirabilis.

• Los resultados esperados son E. coli y M.

morganii. Dan M: +, I: + y O: +.

• Klebsiella pneumoniae da todo negativo (M:-, I:-,

O:-). Proteus mirabilis y Enterobacter aerogenes
dan M:+ I:- y O: +.
Caldo VP-RM
 Caldo VP-RM
• Las pruebas se realizan en el medio de cultivo líquido
llamado rojo de metilo–Voges Proskauer, mejor
conocido con las siglas RM/VP.

• El ácido pirúvico es un punto medio en el metabolismo

de la glucosa y a partir de allí cada microorganismo
puede tomar diferentes vías. Algunos formarán ácidos
mixtos, tales como ácido láctico, ácido acético, ácido
fórmico y ácido succínico (vía acido mixta), y otros
formaran productos neutros como el 2,3-butanediol
(vía butilenglicolica).
 VP
• Revela la capacidad del microorganismo de formar acetil
metil carbinol (acetoína), producto intermediario del 2,3-
butanediol en condiciones de aerobiosis.

• 2 reactivos utilizados. Alfa naftol y KOH 40%

• El α-naftol es un catalizador que aumentará la intensidad

del color de la reacción, lo que hace a la prueba más
sensible.

• El hidróxido de potasio o de sodio se encarga de absorber

el CO2 y de reaccionar con las peptonas. Esta reacción
origina la formación de un color rosado-salmón, claramente
visible después de agitar muy bien el tubo.
 VP
• Para que la coloración se produzca instantáneamente se
deben mezclar cantidades correctas de diacetilo, peptona y
α-naftol. Si esto no ocurre se deja reposar el tubo durante
15 minutos antes de interpretar.

• Generalmente la prueba da positiva después de 2 a 5

minutos, cuando se puede observar un color rosado débil.
Si se deja en reposo durante 30 min a 1 hora la intensidad
del color será máxima (rojo intenso).

• Una prueba negativa se pondrá en evidencia cuando el

caldo quede de color amarillo. Después de 1 hora, si la
prueba es negativa, se puede formar un color cobrizo
producto de la reacción del hidróxido de potasio sobre el α-
naftol.
 VP
• Separar una alícuota de 1 mL en un tubo y
realizar el revelado de la siguiente manera:
coloque 12 gotas (0,6 mL) del reactivo Alfa
naftol y 4 gotas (0,2 ml) de KOH 40%. Mezcle
para airear y deje reposar por 5 – 10 minutos
antes de interpretar. Sin embargo, si la prueba
aún está negativa deje reposar y observe el
tubo al cabo de 30 minutos a 1 hora.
 Control de Calidad
• Para probar la calidad del medio preparado se
pueden usar cepas controles, entre ellas
Escherichia coli ATCC 25922, Klebsiella
pneumoniae ATCC 700603, Proteus mirabilis ATCC
43071, Salmonella typhimurium y Enterobacter
cloacae ATCC 13047

• Los resultados esperados son reacciones Voges-

Proskauer positivas únicamente para K.
pneumoniae y E. cloacae. El resto dan reacciones
negativas.
 RM
• El rojo de metilo detecta los cambios de pH del medio. El indicador
de pH rojo de metilo es por sí solo ácido, y su color es rojo.

• Este indicador de pH se mantendrá rojo por debajo de pH 4.2,

mientras que por encima de 6.3 virará a amarillo, en tanto que en el
rango intermedio produce diversas tonalidades de anaranjado.

• Si al agregar las gotas y mezclar el indicador se queda de color rojo,

la prueba es positiva. Esto quiere decir que se produjo la formación
de ácidos por la vía de los ácidos mixtos.
• Si por el contrario el color se desvanece y queda del mismo color
del medio, la prueba es negativa, indicando que se produjeron otros
compuesto que alcalinizan el medio.
RM
 Preparación caldo VP-RM
• Pesar y disolver según especificaciones del
fabricante.

• Calentar para disolver completamente.

• Servir 3 a 4 ml en tubos y esterilizar en

autoclave a 121°C con 15 Lbs. de presión por
15 minutos.
 Control de Calidad
• Para probar la calidad del medio preparado se
pueden usar cepas controles, entre ellas
Escherichia coli ATCC 25922, Klebsiella
pneumoniae ATCC 700603, Proteus mirabilis ATCC
43071, Salmonella typhimurium y Enterobacter
cloacae ATCC 13047

• Los resultados esperados son reacciones

negativas para K. pneumoniae y E. cloacae. El
resto dan reacciones positivas.
Citrato de Simmons
 Citrato
• El catabolismo del citrato por parte de las bacterias
comprende un mecanismo enzimático sin la intervención
de la coenzima A. Esta enzima se conoce con el nombre de
citricasa (citrato oxalacetato-liasa) o citrato desmolasa. La
reacción requiere la presencia de un catión bivalente, que
en ese caso es suministrado por el magnesio.

• La reacción genera oxaloacetato y piruvato, que luego dan

origen a ácidos orgánicos en medio de un pH alcalino
formado por la utilización de la fuente de nitrógeno. Estos
ácidos orgánicos son usados como fuente de carbono
generando carbonatos y bicarbonatos, alcalinizando aun
más el medio.
 Citrato
• Si el medio queda del color original (verde) y no hay crecimiento
visible, la prueba es negativa, pero si el medio cambia a color azul,
indica la presencia de productos alcalinos, que es detectado por el
indicador de pH. En este caso la prueba es positiva.

• Por otra parte, si se observa crecimiento de la bacteria en el medio,

pero no hay cambio de color, también la prueba debe considerarse
positiva, ya que si hay crecimiento quiere decir que la bacteria fue
capaz de utilizar el citrato como fuente de carbono, aunque no haya
un cambio del pH inmediato.

• Si existe duda en la interpretación del color final, se puede

comparar con un tubo de citrato no inoculado
 Preparación
Citrato de Simmons
• Se pesa la cantidad que indique el fabricante y se disuelve en la
cantidad de agua correspondiente, luego se calienta a fuego
moderado y se mezcla con movimientos rotativos hasta llevar a
ebullición.

• Distribuir 5 ml en tubos de ensayo con tapa de rosca.

• Luego se coloca en el autoclave y se esteriliza a 121°C con 15 lbs

de presión por 15 minutos.

• Sacar del autoclave e inclinar los tubos sobre un soporte, de

manera que solidifique el agar en un amplio pico de flauta.

• Conservar en nevera hasta su uso. Llevar a temperatura ambiente

antes de sembrar.
 Cuidados en inoculación
• Es importante que la prueba del citrato sea la primera en
inocularse, para evitar el arrastre de proteínas o
carbohidratos de otro medio.
• Bajo esta circunstancia es posible obtener un falso positivo,
debido a que cualquiera de estas sustancias que se
introduzcan por error será metabolizada y provocará un
cambio del pH.
• Otra manera de evitar el arrastre de sustancias es quemar
bien el asa y tomar nuevo inoculo entre una prueba y otra.
• También se debe tener cuidado al tocar la colonia para
realizar el inoculo, pues debe evitarse arrastrar parte del
agar del cultivo del cual provienen las bacterias, debido a lo
anteriormente explicado.
 Control de Calidad
• Para probar la calidad del medio preparado se
pueden usar cepas controles, por EJ:

• Escherichia coli ATCC 25922 negativa.

• Klebsiella pneumoniae ATCC 13883 positiva.
Caldo Urea
 Caldo Urea
• La ureasa es una enzima microbiana que se
produce de manera constitutiva, es decir, es
sintetizada independientemente de estar o no
presente el sustrato sobre el que actúa.
• La enzima ureasa hidroliza la urea para formar
anhídrido carbónico, agua y dos moléculas de
amoníaco. Estos compuestos reaccionan para
formar el producto final llamado carbonato de
amonio.
 Urea
• El medio originalmente es de color amarillo-
anaranjado y una reacción positiva hará virar el
color del medio a rosado-fucsia. La intensidad del
color es directamente proporcional a la cantidad
de amonio producido.

• Una reacción negativa dejará el medio del color

original a excepción de las levaduras, que pueden
dar un rosado pálido con el medio agar urea de
Christensen.
 Preparación caldo urea
• Pesar y disolver según especificaciones del fabricante.

• Calentar para disolver completamente.

• Esterilizar en autoclave a 121°C con 15 Lbs. de presión por

15 minutos.

• Dejar reposar hasta que alcance una temperatura de 50°C y

agregar la urea anteriormente preparada de forma
aséptica.

• Verter 4 a 5 ml en tubos estériles

 Control de calidad
• Control positivo Proteus mirabilis ATCC 43071,
Klebsiella pneumoniae ATCC 7006003.

• Control negativo Escherichia coli ATCC 25922

Medios de Transporte
Medios de Transporte
Bacteriológicos
 Cary Blair
• El medio Cary Blair es un agar semisólido, utilizado para el
transporte y conservación de muestras biológicas que
alberguen patógenos intestinales, microorganismos lábiles
y anaerobios.

• Como todo medio de transporte su función es mantener la

muestra en condiciones óptimas hasta que sea cultivada.

• Los microorganismos patógenos presentes, así como la

microbiota acompañante deben mantenerse viables, pero
sin aumentar su población.

• El medio Cary Blair es el resultado del cambio de

formulación del medio de transporte Stuart.
 Cary Blair
• El medio Cary Blair no contiene sustancias
nutritivas, ya que la función de un medio de
transporte es mantener la muestra sin que la
misma sufra modificaciones en cuanto a la
humedad y la carga microbiana; es decir, evita la
deshidratación de la muestra conservando la
viabilidad y la cantidad de los microorganismos
presentes.
• El pH ligeramente alcalino evita la muerte de los
microorganismos por acidez, especialmente los
Vibrios son muy sensibles a los ácidos.
• Enteropatógenos del género Shigella y Salmonella
hasta por 49 días después de tomada la muestra.
• Por su parte, Vibrio cholerae, otro patógeno
intestinal de importancia, es capaz de sobrevivir
por 22 días, mientras que Yersinia pestis puede
ser recuperada después de 75 días.
• Sin embargo, a pesar de la durabilidad
transportar al laboratorio lo más rápido posible.
 Amies
• El medio de AMIES es una modificación del medio de Cary Blair, que
a su vez lo es del de Stuart. Básicamente, cambia el glicerofosfato
por un fosfato inorgánico y el azul de metileno por carbón vegetal.

• Neisseria sp. Haemophilus sp. Trichomonas vaginalis,

Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumoniae ,Shigella
flexneri, Salmonella typhi, Brucella abortus, Enterobacterias Etc.

• Algunos microorganismos pueden resistir en el medio durante tres

o más días, sin embargo, es conveniente que la muestra llegue al
laboratorio antes de las 24 horas.

• Se presentan dos variantes: con o sin carbón incluido en el medio.

• La presencia de carbón en el medio neutraliza inhibidores y toxinas

bacterianas, y mejora el ratio de recuperación de Neisseria,
gonorrhoeae y Vibrio cholerae.
 Control de calidad de medios
de cultivo
• - Los medios de cultivos deshidratados son higroscópicos y la
absorción de agua del exterior, así como la formación de agua
dentro del frasco favorecen el crecimiento bacteriano, éstos deben
almacenarse siempre en lugares frescos, a temperatura ambiente y
protegidos contra la humedad y la luz.

• - Se debe mantener un registro de cada frasco de medio de cultivo

deshidratado, con el nombre del producto, nombre y número
telefónico de la casa proveedora, número de control del frasco,
fecha de recibo, fecha de expiración, número de lote y fecha en que
se abrió el frasco.

• - El grado de disolución de un medio deshidratado depende en gran

medida del procedimiento empleado en la rehidratación, se
recomienda utilizar agua recién destilada o completamente
desmineralizada y un erlenmeyer con capacidad del doble del
medio que se quiere preparar.
 Control de calidad de medios
de cultivo
• - Cuando se va a esterilizar, debe asegurarse en seguir las
instrucciones de tiempo, presión y temperatura para una obtención
de medios de cultivo óptimos. Una temperatura de 121°C, presión
de 15 libras y un tiempo de esterilización de 15 minutos, son
suficientes para la mayoría de los medios.

• - El medio esterilizado debe ser enfriado a una temperatura de 45-

60°C en un baño Maria, para evitar el agua de condensación. Al ser
vertidos en las placas Petri, evitar la formación de burbujas y
coágulos.

• - El medio de cultivo reconstituido tiene una vida útil limitada. Si no

se emplea de inmediato, debe almacenarse a una temperatura de
4°C para garantizar su utilidad durante un período de tiempo.
 Control de calidad de medios
de cultivo
• - Los medios almacenados en refrigeración, cuando pasan a
temperatura ambiente tienden a formar agua de condensación en
la superficie, se recomienda poner las placas Petri en la incubadora
a una temperatura de 35°C por 2 horas, colocándolos con el fondo
hacia arriba para obtener una superficie seca.

• - Cada lote preparado de medio de cultivo se prueba antes de su

uso rutinario, por eficiencia o calidad mediante la inoculación de
microorganismos, puede utilizarse para ello cepas bacterianas
domésticas o cepas control comerciales (ATCC).

• - Rotular todos los medios preparados, tanto en placas Petri como

en tubos, indicando además, la fecha de preparación y expiración.
 Control de calidad de medios
de cultivo

• - pH
• - Esterilidad
• - Capacidad de crecimiento
• -Reacción/Funcionabilidad
 Criterios de observación
• - Rajadura de la placa o envase.
• - Rajadura en la superficie del medio
• - Variaciones en el volumen del medio
• - Hemólisis
• - Cristales en el medio
• - Presencia de burbujas
• - Presencia de coágulos
• - Cambio de color normal
• - Contaminación evidente
 Sangre de carnero
• En el caso de la sangre de carnero para la preparación
del agar sangre, es importante cada vez que se reciba
un nuevo lote, revisar su apariencia:
• Presencia de coágulos
• Hemólisis
• Número de lote
• Fecha de recibo
• Expiración
• Determinación de hemoglobina, la cual debe medir
entre los 13.0 - 15.0 g/dl
• Comprobar su esterilidad.
 FALLAS Y CAUSAS
EN LA PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO

• Turbidez o precipitación :
• Mala calidad del agua.
• Sobrecalentamiento.
• pH incorrecto.
• Solución incompleta.
• Oscurecimiento :
• Sobrecalentamiento.
• Solución incompleta.
• Alteración del pH.
 FALLAS Y CAUSAS
EN LA PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO
• Gel blando :
• Bajo porcentaje de agar en el medio.
• Errores en la pesada del medio deshidratado o en los
suplementos.
• Sobrecalentamiento.
• Mala homogenización del medio.
• Exceso de agua.
• Crecimiento bacteriano pobre :
• Exceso de calentamiento.
• Substancias inhibidoras en el agua o en el recipiente.
• Alteración en el pH.
 FALLAS Y CAUSAS EN LA
PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO

Valor de pH incorrecto
• Medir el pH por encima de los 25°C.
• Sobrecalentamiento en la esterilización, vuelta a
fundir o calentamiento prolongado a 50°C.
• Solución incompleta del medio.
• Mala calidad del agua.
• Recipiente mal lavado o con residuos químicos.
• Mala conservación del medio deshidratado o
vencido.
 Referencias
• García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Microbiología clínica práctica.
Universidad de Cadiz, 2da edición. Servicio de Publicaciones UCA.
• Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnóstico
Microbiológico. (5ta ed.). Argentina
• «Agar sangre.» Wikipedia, La enciclopedia libre. 10 dic 2018, 14:55 UTC. 27 dic
2018, 01: 49 es.wikipedia.org.
• Editorial Panamericana S.A.
• https://www.lifeder.com
• https://www.atcc.org/Products/Collections/Microbiology_Collections/Bacteria/Qu
ality_Control_Strains.aspx
• https://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_5a2843836ddd8
.pdf
• https://www.bd.com/resource.aspx?IDX=8774
• Laboratorios BD. BBL Motility Indole Ornithine (MIO) Medium. 2007. Disponible
en: bd.com
• Laboratorios Himedia. Methyl Red Indicator. Disponible en: himedialabs.com
• Laboratorios Conda Pronadisa. Medio Cary Blair. Disponible en: condalab.com