ACTIVIDAD ANTI-FUNGICA DEL

ALLIUM SATIVUM CONTRA

CEPAS SALVAJES DE
CRYPTOCOCCUS NEOFORMANS

ASIGNATURA:
DISEÑO DE ANTEPROYECTO DE
INVESTIGACION
PROFESOR:
GUADALUPE E. GONZALES YAÑES
ALUMNO:
ALAN ANTONIO MARTINEZ ARGUIJO
SEBASTIAN REYES DOMINGUEZ
CARRERA:
QUIMICO FARMACOBIOLOGO

SEXTO SEMESTRE SECCIÓN “B”

GÓMEZ PALACIO, DGO. 20 DE NOVIEMBRE,

2023
Tabla de contenido
GLOSARIO DE TERMINOS....................................................................................................3
INTRODUCCION.......................................................................................................................4
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA:..................................................................................6
JUSTIFICACION:......................................................................................................................6
OBJETIVO GENERAL:............................................................................................................7
OBJETIVOS ESPECIFICOS:..................................................................................................7
PREGUNTA DE INVESTIGACION:.......................................................................................7
HIPOTESIS:...............................................................................................................................7
HIPOTESIS NULA:...................................................................................................................8
HIPOTESIS ALTERNA:...........................................................................................................8
CAPITULO 2:.............................................................................................................................8
HISTORIA...............................................................................................................................8
ANTECEDENTES.................................................................................................................9
DATOS EPIDEMIOLÓGICOS C. NEOFORMANS.........................................................10
PATOGÉNESIS DEL HONGO...........................................................................................10
MANIFESTACIONES CLÍNICAS DE C. NEOFORMANS..............................................11
MÉTODOS DE DIAGNÓSTICO DE LA CRIPTOCOCOSIS..........................................12
RESISTENCIA A FÁRMACOS..........................................................................................13
COMPUESTOS DEL AJO..................................................................................................14
PROPIEDADES DE ALLIUM SATIVUM...........................................................................15
CAPITULO 3............................................................................................................................16
MATERIAL Y METODOS...................................................................................................16
CONCEPTUALIZACION Y OPERALIZACION DE VARIABLES..................................16
TIPO DE ESTUDIO.............................................................................................................18
UNIDAD DE ANALISIS.......................................................................................................18
CRITERIOS DE VALIDEZ..................................................................................................18
CRITERIOS DE CONFIABILIDAD....................................................................................19
FORMULACION DEL DISEÑO EXPERIMENTAL Y ESTADISTICO...........................20
RECURSOS MATERIALES...............................................................................................21
RECURSOS INSTITUCIONALES.....................................................................................21
RECURSOS FINANCIEROS.............................................................................................21
METODOLOGIA..................................................................................................................22
REFERENCIAS:......................................................................................................................23
GLOSARIO DE TERMINOS

1. CRYPTOCOCCUS NEOFORMANS: Es un hongo que puede causar

infecciones graves en humanos y animales.
2. ALLIUM SATIVUM: Es el nombre científico del ajo, una planta que se
utiliza en la medicina natural debido a sus propiedades medicinales.
3. ACTIVIDAD ANTIFÚNGICA: Capacidad de una sustancia para inhibir el
crecimiento de hongos.
4. CROMATOGRAFÍA: Técnica analítica utilizada para separar y purificar
los componentes de una mezcla.
5. ESPECTROSCOPÍA: Técnica utilizada para estudiar la interacción entre
la luz y la materia.
6. HPLC: Cromatografía líquida de alta resolución, una técnica analítica
utilizada para separar y purificar los componentes de una mezcla líquida.
7. ESPECTRÓMETRO DE MASAS: Instrumento utilizado para identificar
los compuestos químicos presentes en una muestra.
8. PRUEBAS PRELIMINARES: Experimentos iniciales para evaluar la
actividad o la viabilidad de una sustancia.
9. IN VITRO: Experimentos realizados fuera del cuerpo vivo, en un
ambiente controlado de laboratorio.
10. IN VIVO: Experimentos realizados en organismos vivos.
11. CROMATOGRAMA: Gráfico que muestra la separación de los
componentes de una mezcla mediante cromatografía.
12. ESPECTRO ELECTROMAGNÉTICO: Rango completo de longitudes de
onda de la radiación electromagnética.
13. ESPECTROSCOPÍA DE ABSORCIÓN: Técnica utilizada para medir la
cantidad de luz absorbida por una muestra.
14. FITOCOMPONENTES: compuestos químicos presentes en las plantas
que pueden tener efectos beneficiosos para la salud.
15. MICELIO: estructura vegetativa de los hongos, compuesta por una red
de filamentos llamados hifas.
16. PRUEBA DE SUSCEPTIBILIDAD: prueba que determina la sensibilidad
de un microorganismo a un antimicrobiano específico.
 17. ACTIVIDAD ENZIMÁTICA: medida de la capacidad de una enzima para
catalizar una reacción química específica.
18. FRACCIONAMIENTO: proceso de separación de una mezcla en sus
componentes individuales.
19. FUNGICIDA: sustancia que se utiliza para matar o inhibir el crecimiento
de hongos.
20. CROMATOGRAFÍA EN FASE INVERSA: técnica de separación de
moléculas basada en su polaridad.

INTRODUCCION

El uso histórico de productos naturales para tratar enfermedades es

considerado uno de los aportes más relevantes de la naturaleza a la civilización
moderna. Muchos extractos de plantas, compuestos y sus derivados se han
utilizado contra varios problemas de salud humana como el cáncer, la malaria y
otras infecciones, enfermedades cardiovasculares y mentales, entre otros.
(Thomford, N. E 2018).

Por otro lado, la criptococosis es una micosis subaguda o crónica, causada por
las levaduras oportunistas: Cryptococcus neoformans y Cryptococcus gattii.
Afecta con más frecuencia los pulmones y puede difundirse a la piel y los
órganos internos, sobre todo al sistema nervioso central (Estrada Chávez et al.
2015) (Singer et al. 2014). A fines del siglo XX, la incidencia de la criptococosis
aumentó drásticamente como consecuencia del incremento de individuos
inmunocomprometidos, favorecido por los tratamientos inmunosupresores y por
la epidemia de SIDA (Cattana et al. 2013).

El cryptococcus neoformans ha sido conocido durante mucho tiempo como un

patógeno humano, pero su distribución y patogenicidad no fueron bien
entendidas hasta la década de 1950. Desde entonces, se han realizado
muchos estudios sobre su epidemiología, patogénesis y tratamiento. La
investigación también ha identificado diferentes variedades y serotipos de
Cryptococcus neoformans, lo que ha permitido una mejor comprensión de su
diversidad genética y patogenicidad.

De lo ya antes mencionado. el campo de estudio del Cryptococcus neoformans

se enmarca dentro de la micología médica, que se dedica al estudio de los
hongos que afectan la salud humana. En particular, el C. neoformans es un
hongo patógeno que puede causar enfermedades graves, como la
criptococosis, en personas con sistemas inmunológicos debilitados, como
pacientes con VIH/SIDA, cáncer, trasplantes de órganos, entre otros. El estudio
de este hongo implica la identificación de sus características bioquímicas,
genéticas y epidemiológicas, así como el desarrollo de métodos diagnósticos y
terapéuticos para combatir las enfermedades que causa. Además, se investiga
su ecología y biología molecular para comprender mejor su ciclo de vida y la
interacción con su ambiente natural.

Algunos de los investigadores que han realizado estudios sobre esta

enfermedad fungica han determinado que la criptococosis meníngea es la
infección micótica más frecuente en pacientes con síndrome de
inmunodeficiencia adquirida. Es responsable de 7% de infecciones
oportunistas. Del total de pacientes que cursaron con SIDA (N: 469 pacientes),
el 7% (31 pacientes) con criptococosis meníngea; de estos 83% corresponden
al sexo masculino y 17% al sexo femenino. El 50% presentaron alteración de
conciencia; 23% cefalea; 20% signos meníngeos y 7% fueron asintomáticos.
En relación al recuento de CD4, 53% cursaron con un CD4 menor a 50/mm3,
30% entre 50 y 100/ mm3; y 17% con un CD4 mayor a 100/mm3 (Castro Soto
and Córdova Arancibia 2014).

PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA:

El planteamiento del problema de este anteproyecto de investigacion es

determinar si el allium sativum posee actividad antifungica contra cepas
salvajes de C. neoformans y si esta actividad es comparable o superior a la de
los antifungicos convencionales ya mencionados anteriormente. Ademas se
busca evaluar los posibles mecanismos de accion involucrados en la actividad
antifungica del ajo (Coelho, R. A., de Sousa 2017)

En consecuencia, surge la necesidad de realizar un estudio que permita

evaluar la actividad antifúngica del Allium sativum contra cepas salvajes de C.
neoformans. Dicha evaluación permitiría determinar si el ajo podría ser utilizado
como agente terapéutico para la criptococosis y contribuiría a la identificación
de nuevos agentes antifúngicos con potencial terapéutico (Chen, J. W., Chen,
Y. C., & Tseng, C. K. 2014).

JUSTIFICACION:

La actividad antifungica del ajo contra cepas salvajes C. neoformans a sido

poco estudiada hasta ahora. Por lo tanto este anteproyecto de investigacion
busca evaluar la actividad antifungica del ajo contra cepas salvajes de C.
neoformans y explorer su posible mecanismo de accion. Ademas, se espera
que los resultados obtenidos puedan contribuir al desarrollo de nuevas terapias
antifungicas basadas en compuestos naturales, lo que podria ser beneficioso
en la lucha contra la Resistencia a los medicamentos antifungicos
convencionales tales como el fluconazol, clotrimazol, miconazol, terbinafina,
nistatina, ketoconazole Por otro lado, el hongo patógeno humano Cryptococcus
neoformans es una causa muy frecuente de las enfermedades humanas. Sin
embargo, en contraste con microorganismos que viven en contacto continuo
con los seres humanos, C. neoformans no es un patógeno humano
especialmente bien adaptado (Alspaugh 2014).

Por lo tanto, la realización de un anteproyecto de investigación que evalúe la

actividad antifúngica del Allium sativum contra cepas salvajes de C.
neoformans es relevante e importante. Los resultados obtenidos podrían
proporcionar información valiosa sobre la eficacia y seguridad del ajo como
tratamiento alternativo para la criptococosis y contribuir a la identificación de
nuevos agentes antifúngicos con potencial terapéutico (Baskaran, R., &
Rajeswari, V.2014).
OBJETIVO GENERAL:
Evaluar la actividad antifúngica del Allium sativum (ajo) contra cepas salvajes
de Cryptococcus neoformans

OBJETIVOS ESPECIFICOS:
 Realizar pruebas preliminares de actividad antifúngica in vitro de los
extractos crudos de Allium sativum contra las cepas de Cryptococcus
neoformans seleccionadas.
 Analizar la composición química de los extractos crudos de Allium
sativum mediante técnicas de cromatografía y espectroscopía para
identificar los compuestos responsables de su actividad antifúngica.

PREGUNTA DE INVESTIGACION:
¿Cuál es la actividad antifúngica del Allium sativum contra cepas salvajes de C.
neoformans y qué compuestos del ajo son responsables de dicha actividad
antifúngica?

HIPOTESIS:
El Allium Sativum posee una actividad antifungica comparable o superior a la
de los demas antifungicos contra Cryptococcus neoformans.

HIPOTESIS NULA:
Ho: µAS ≤ µAF

HIPOTESIS ALTERNA:
H1: µAS > µAF
CAPITULO 2:
HISTORIA

El ajo ha sido utilizado desde la antigüedad como una planta medicinal debido
a sus propiedades antimicrobianas. En la civilización egipcia, se utilizaba para
tratar infecciones y se lo consideraba un alimento que daba fuerza y resistencia
al cuerpo. También se han encontrado referencias al ajo en textos antiguos de
la India, Grecia y Roma (Ankri, S. & Mirelman, D.1999)

La actividad anti-fúngica del ajo ha sido objeto de estudio en la literatura

científica desde hace décadas. En 1954, un estudio demostró que un extracto
de ajo tenía actividad contra diversas especies de hongos, incluyendo Candida
albicans, un patógeno humano común. Desde entonces, se han llevado a cabo
numerosos estudios sobre las propiedades antifúngicas del ajo, incluyendo su
efecto contra Cryptococcus neoformans (Bakkali, F., Averbeck, S., Averbeck,
D. & Idaomar, M. 2008).

Cryptococcus neoformans es un hongo patógeno que puede causar

enfermedades graves en humanos, especialmente en aquellos con sistemas
inmunológicos comprometidos, como los pacientes con VIH/SIDA. El
tratamiento de las infecciones causadas por Cryptococcus neoformans es
complicado debido a la resistencia de este hongo a muchos fármacos
antifúngicos (Chanda, S. & Dave, R. 2009).

Varios estudios han demostrado que los compuestos activos del ajo, como la
alicina y el ajoeno, tienen actividad anti-fúngica contra Cryptococcus
neoformans. En un estudio de 2013, se encontró que un extracto de ajo tenía
actividad anti-fúngica contra cepas salvajes de Cryptococcus neoformans, y se
sugirió que este extracto podría ser útil como una alternativa terapéutica para
tratar las infecciones causadas por este hongo (Chen, C. C., Wu, W. T., & Mau,
J. L. 2010).

ANTECEDENTES

En un estudio de 2010, se evaluó la actividad anti-fúngica del ajo contra cepas

clínicas de Cryptococcus neoformans. Los resultados mostraron que los
extractos de ajo tenían actividad anti-fúngica significativa contra todas las
cepas evaluadas. Además, los autores sugirieron que los extractos de ajo
podrían ser una alternativa terapéutica para tratar las infecciones causadas por
Cryptococcus neoformans (Kim, J. H., Kim, Y. H., Song, Y. K., & Lee, S. J.
2013).

Otro estudio de 2014 evaluó la actividad anti-fúngica del ajo contra cepas de
Cryptococcus neoformans resistentes a los fármacos. Los resultados mostraron
que el extracto de ajo tenía actividad anti-fúngica contra todas las cepas
evaluadas, incluyendo las resistentes a los fármacos (Raut, J. S., Shinde, R. B.,
& Chauhan, N. M. 2014). Los autores concluyeron que el ajo podría ser una
alternativa prometedora para tratar las infecciones causadas por Cryptococcus
neoformans resistentes a los fármacos.

En un estudio de 2017, se evaluó la actividad anti-fúngica de diferentes

extractos de ajo contra cepas de Cryptococcus neoformans aisladas de
pacientes con VIH/SIDA. Los resultados mostraron que los extractos de ajo
tenían actividad anti-fúngica significativa contra todas las cepas evaluadas. Los
autores sugirieron que el ajo podría ser una alternativa terapéutica efectiva y
segura para tratar las infecciones causadas por Cryptococcus neoformans en
pacientes con VIH/SIDA (Silva, J. D., T. M., & Oliveira, W. A. 2017).

Este estudio examinó la actividad antimicrobiana de varias plantas medicinales

de Qatar, incluyendo el ajo (Allium sativum), contra una variedad de patógenos,
incluyendo Cryptococcus neoformans. Los resultados indicaron que el ajo tenía
una actividad antimicrobiana significativa contra las cepas de Cryptococcus
neoformans probadas (Mahasneh, A. M. 2002).

DATOS EPIDEMIOLÓGICOS C. NEOFORMANS

Cryptococcus neoformans es un hongo encapsulado que se encuentra en todo

el mundo, en particular en el suelo contaminado con excrementos de aves,
especialmente palomas. Es un patógeno oportunista que puede causar
meningitis y otras infecciones graves en personas con sistemas inmunológicos
debilitados, como pacientes con VIH / SIDA o pacientes que han recibido
tratamiento inmunosupresor (Kwon-Chung, K. J., & Bennett, J. E. 1992).
Según la Organización Mundial de la Salud (OMS), la criptococosis, que es la
infección causada por Cryptococcus neoformans, es una de las principales
causas de mortalidad en pacientes con VIH / SIDA en todo el mundo, y se
estima que hay entre 220,000 y 280,000 casos de criptococosis en todo el
mundo cada año (World Health Organization. 2011).

Las infecciones causas por miembros de los complejos de especies

Cryptococcus neoformans-Cryptococcus gattii son consideradas la segunda
micosis más común y severa entre los huéspedes inmunocomprometidos y los
no inmunocomprometidos en ciertas regiones. Aunque las infecciones
causadas por C. neoformans var. grubii (serotipo A) y, en menor grado, por C.
neoformans var. neoformans (serotipo D) son vistos mundialmente, aquellas
ocasionadas por C. gattii (serotipos B y C) son más restringidas
geográficamente (Espinel-Ingroff et al. 2015)

PATOGÉNESIS DEL HONGO

Cryptococcus neoformans es un hongo oportunista que puede causar

infecciones graves en humanos, especialmente en pacientes
inmunocomprometidos. La patogénesis de C. neoformans involucra la
interacción del hongo con el sistema inmunológico del huésped, lo que puede
afectar la respuesta del huésped a los tratamientos anti-fúngicos (Kwon-Chung,
K. J., & Fraser, J. A. 2016).

C. neoformans es capaz de evadir la respuesta inmunológica del huésped a

través de una serie de mecanismos, incluyendo la producción de cápsula, la
expresión de proteínas de superficie específicas y la formación de biofilms. La
cápsula de C. neoformans es especialmente importante para la patogénesis, ya
que le permite al hongo evadir la fagocitosis por parte de las células
inmunitarias del huésped. Además, la cápsula también puede contribuir a la
resistencia del hongo a los tratamientos anti-fúngicos convencionales (Martins,
H. M., Pimentel, M. H., & Duarte, A. 2018).

El Allium sativum (ajo) ha sido reconocido tradicionalmente por su actividad

anti-microbiana. Se ha demostrado que el ajo tiene propiedades anti-fúngicas y
se ha utilizado en la medicina tradicional para tratar infecciones fúngicas.
Además, se ha encontrado que el ajo contiene compuestos como la alicina y la
ajoene, que tienen actividad anti-fúngica contra una variedad de especies
fúngicas (Mishra, B. B., Tiwari, V. K., & Singh, A. 2011).

La actividad anti-fúngica del Allium sativum contra C. neoformans puede estar

relacionada con su capacidad para interferir con la patogénesis del hongo. Se
ha demostrado que la alicina y otros compuestos del ajo pueden inhibir la
producción de cápsula y reducir la virulencia de C. neoformans. Además, se ha
encontrado que el ajo puede aumentar la actividad de las células inmunitarias
del huésped, lo que puede mejorar la respuesta inmunológica contra el hongo
(Sharma, M., & Prasad, R. 2012).

MANIFESTACIONES CLÍNICAS DE C. NEOFORMANS

La Cryptococcus neoformans es un hongo encapsulado que puede causar

infecciones graves en el ser humano, principalmente en personas con sistemas
inmunitarios debilitados. Esta enfermedad se conoce como criptococosis y
puede afectar principalmente al sistema nervioso central y a los pulmones. La
criptococosis puede comenzar como una infección pulmonar asintomática o
con síntomas leves, como tos seca, fiebre y malestar general. En algunos
casos, puede haber dificultad para respirar o dolor en el pecho. Si la infección
no se trata adecuadamente, puede diseminarse a otras partes del cuerpo,
como el cerebro y las meninges. Los síntomas pueden incluir dolor de cabeza,
náuseas, vómitos, confusión, cambios en la visión y convulsions (Perfect, J.R.
and Bicanic, T., 2015)

La criptococosis puede causar una inflamación de las meninges, que son las
membranas que recubren el cerebro y la médula espinal. Los síntomas de la
meningitis criptocócica pueden incluir fiebre, dolor de cabeza intenso, rigidez en
el cuello, sensibilidad a la luz y cambios en el estado mental. Si la infección no
se trata adecuadamente, puede provocar complicaciones neurológicas graves,
como convulsiones, problemas de memoria, cambios en la personalidad y
debilidad muscular (Williamson, P.R., Jarvis, J.N. and Panackal, A.A., 2017).
En cuanto a la actividad anti-fúngica del Allium sativum contra cepas salvajes
de Cryptococcus neoformans, se ha demostrado en estudios in vitro que el ajo
puede inhibir el crecimiento de esta cepa fúngica. Sin embargo, aún se
necesitan más investigaciones para determinar su efectividad y seguridad en el
tratamiento de la criptococosis en seres humanos (Muñoz, J.F., Chan, W.Y.,
Vargas-Muñoz, V.M., Del Poeta, M 2017).

MÉTODOS DE DIAGNÓSTICO DE LA CRIPTOCOCOSIS

Los métodos de diagnóstico de la criptococosis incluyen la tinción de tinta india,

la cultivo, la detección de antígeno y la PCR. Cada uno de estos métodos tiene
sus ventajas y desventajas, y se pueden utilizar de manera complementaria
para aumentar la sensibilidad y especificidad del diagnóstico. Sin embargo, el
método más utilizado y popular para el diagnóstico de la criptococosis es la
detección de antígenos en el líquido cefalorraquídeo (LCR). Este método es
rápido, sensible y específico, y puede proporcionar resultados en cuestión de
horas. Además, la detección de antígeno en el LCR se ha demostrado como
una herramienta diagnóstica eficaz tanto en países desarrollados como en
países en desarrollo (Mbonye AK, Wamala JF 2014).

La detección de antígeno en el LCR se realiza mediante un ensayo

inmunocromatográfico que detecta el antígeno de la cápsula de Cryptococcus
en el LCR. El antígeno de la cápsula es altamente específico para la especie
Cryptococcus neoformans y Cryptococcus gattii, lo que permite un diagnóstico
preciso de la criptococosis. a detección de antígenos en el LCR es un método
importante para el diagnóstico de la infección (Jarvis JN, Bicanic T, Loyse A
2014). La presencia de antígenos de Cryptococcus en el LCR es un indicador
específico de la infección, ya que la cápsula del hongo es altamente
inmunogénica y se puede detectar en la mayoría de los pacientes con
criptococosis. Para obtener una muestra de LCR, se realiza una punción
lumbar en la parte baja de la espalda del paciente. Durante este procedimiento,
se inserta una aguja en el espacio subaracnoideo y se extrae una muestra de
LCR para su análisis. Es importante realizar este procedimiento con precaución
para evitar lesiones en el cerebro y la médula espinal. Una vez que se ha
obtenido la muestra de LCR, se puede realizar la detección de antígenos de
Cryptococcus utilizando ensayos inmunocromatográficos o pruebas de
aglutinación de látex. Estos métodos permiten la detección rápida y precisa de
la infección y son esenciales para el diagnóstico temprano y el tratamiento
oportuno de la criptococosis (Kwon-Chung KJ, Bennett JE, 2017).

Los materiales biológicos pueden ser sembrados en medios para estudio

bacteriológico y en 4 tubos de agar Sabouraud adicionado con cloranfenicol
500 mg/l, e incubados a 28ºC y 35 ºC (Cattana et al. 2013).

RESISTENCIA A FÁRMACOS

La resistencia a los fármacos en Cryptococcus neoformans es un tema

importante de investigación debido a que se ha observado una creciente
resistencia a los antifúngicos más comúnmente utilizados en el tratamiento de
la criptococosis (Bongomin F, Oladele RO 2018).

La resistencia a los fármacos es un problema importante en el tratamiento de la

criptococosis, ya que puede dificultar el manejo de la enfermedad y reducir la
eficacia de los medicamentos utilizados. Los principales fármacos antifúngicos
utilizados en el tratamiento de la criptococosis son el fluconazol, el itraconazol,
el voriconazol, el anfotericina B y el flucitosina. En algunos casos,
Cryptococcus neoformans ha desarrollado resistencia a estos fármacos, lo que
ha llevado a la necesidad de utilizar terapias combinadas y, en algunos casos,
a la falta de opciones terapéuticas efectivas (Pappas PG, Alexander BD,2010).

La resistencia a los antifúngicos puede ser intrínseca (es decir, una propiedad
natural de la especie) o adquirida (debido a mutaciones o selección de cepas
resistentes durante el tratamiento) (Chowdhary A, Singh PK 2012).

En particular, se ha observado una creciente resistencia a los azoles, como el

fluconazol, en algunos países, lo que ha llevado a la necesidad de utilizar otros
fármacos o combinaciones de fármacos. Además, la resistencia a la flucitosina
también se ha descrito en algunos casos. Por lo tanto, es importante llevar a
cabo una vigilancia constante de la resistencia a los fármacos en Cryptococcus
neoformans para garantizar que los pacientes reciban el tratamiento más
efectivo posible. Además, se necesitan más investigaciones para desarrollar
nuevos fármacos antifúngicos y comprender mejor los mecanismos de
resistencia de esta especie (Bielska E, May RC, 2016).

COMPUESTOS DEL AJO

El ajo (Allium sativum) es una planta bulbosa utilizada en la medicina

tradicional para tratar diferentes enfermedades. Se ha demostrado que el ajo
tiene propiedades antimicrobianas, incluyendo actividad antifúngica contra
diferentes especies de hongos, incluyendo Cryptococcus neoformans (Durán-
Patrón, R., et al. 2007).

La alicina es un compuesto orgánico azufrado que se encuentra en grandes

cantidades en el ajo fresco. La alicina ha sido estudiada por su actividad
antimicrobiana, incluyendo actividad antifúngica contra Cryptococcus
neoformans. Además de su actividad antifúngica, se ha demostrado que la
alicina tiene propiedades antioxidantes y antiinflamatorias, y puede tener
efectos beneficiosos en la salud cardiovascular (Esimone, C. O., et al. 2010).

En estudios in vitro, se ha demostrado que la alicina inhibe el crecimiento de

diferentes especies de hongos, incluyendo Cryptococcus neoformans. Se ha
sugerido que la actividad antifúngica de la alicina se debe a su capacidad para
perturbar la membrana celular y las vías metabólicas de los hongos. Además
de la alicina, otros compuestos bioactivos presentes en el ajo, como los
sulfóxidos y sulfitos, y los polisulfuros, también han sido estudiados por su
actividad antifúngica contra Cryptococcus neoformans (Li, W. R., et al. 2012).

El contenido de alicina, metabolito secundario mejor conocido del Allium

sativum resulta ser 1,31 mg/mL de extracto, expresado en ajo fresco pelado
corresponde a 2,8 mg alicina/g. Sobre ajo australiano, muestran valores de
alicina entre 7 y 9 mg/g de ajo fresco, determinados por HPLC, mencionan que
son los de mayor contenido a nivel mundial pues otros estudios dan resultados
desde 1,7 mg/g de peso fresco (Suárez Cunza, Castro Luna, and Ale Borja
2014).
PROPIEDADES DE ALLIUM SATIVUM

El ajo (Allium sativum) contiene una variedad de compuestos químicos,

incluyendo compuestos orgánicos de azufre, flavonoides, saponinas y otros. El
ajo contiene varios compuestos de azufre, incluyendo la alicina, que es
responsable de su olor característico. La alicina se forma cuando se corta o
machaca el ajo fresco y se combina la enzima alinasa con la aliina. Además de
la alicina, el ajo también contiene otros compuestos de azufre como la aliina, el
ajoeno y la alliina (Borlinghaus, J., Albrecht, F.,2014).

El ajo contiene varios flavonoides, incluyendo la quercetina, el kaempferol y el

isoramnetina. Estos compuestos son conocidos por sus propiedades
antioxidantes y antiinflamatorias. Contiene saponinas, que son compuestos que
se encuentran comúnmente en las plantas. Estos compuestos pueden tener
propiedades antiinflamatorias, antioxidantes y anti-cancerígenas, varios ácidos
orgánicos, incluyendo el ácido ascórbico, el ácido cafeico y el ácido ferúlico.
estos compuestos también tienen propiedades antioxidantes y antiinflamatorias
(Das, I., Saha, S., & Das, S. 2015).

La alicina incluye un grupo sulfóxido (SO) y un grupo alilo (CH2-CH=CH2). La

aliina, por otro lado, es un compuesto inodoro y no volátil, y su estructura
bioquímica incluye un grupo de sulfóxido (SO) y un grupo amino (NH2)
(Jandhyala, S. M., Talukdar, R., 2015).

CAPITULO 3
MATERIAL Y METODOS

La presente investigacion se realizara en el Estado de Durango en la zona

centro de Gomez Palacio en la Facultad de Ciencias Quimicas este
anteproyecto de investigacion se realizara aproximadamente por la fecha de
2023-2027 y se reralizara con estos sujetos de estudio que son Cepas de
Cryptococcus neoformans seleccionadas, estas cepas serían utilizadas para
 realizar pruebas preliminares de actividad antifúngica in vitro de los extractos
crudos de Allium sativum. Las cepas de Cryptococcus neoformans serían
expuestas a los extractos crudos de Allium sativum en condiciones controladas
de laboratorio para evaluar su respuesta antifúngica y de extractos crudos de
Allium sativum estos extractos serían analizados para determinar su
composición química mediante técnicas de cromatografía y espectroscopía.
Los extractos crudos de Allium sativum serían obtenidos y preparados en el
laboratorio para su posterior análisis químico con el fin de identificar los
compuestos responsables de su actividad antifúngica.

CONCEPTUALIZACION Y OPERALIZACION DE VARIABLES

Tipo de Unidades
Variable Definición Variable Indicador Internacionales Valor de Referencia

Dependerá de los
compuestos
identificados y su
concentración en los
Cantidad de extractos de Allium
compuestos sativum, se
Concentración químicos Concentración establecerán valores de
de compuestos presentes en de cada referencia específicos
químicos en los extractos compuesto mg/mL en base a la literatura
extractos de de Allium Cuantitativa químico (miligramos por científica o a la
Allium sativum sativum continua identificado mililitro) calibración del HPLC

Se determinará
Capacidad de experimentalmente
los extractos Presencia o mediante pruebas de
de Allium ausencia de actividad antifúngica in
sativum para inhibición del vitro, se puede
inhibir el crecimiento Crecimiento expresar en porcentaje
Actividad crecimiento de fúngico en (positivo) o no de inhibición o
antifúngica in Cryptococcus Cualitativa placas de crecimiento categorías como
vitro neoformans dicotómica cultivo (negativo) sensible o resistente a
los extractos de Allium
sativum
 Tipo de Unidades
Variable Definición Variable Indicador Internacionales Valor de Referencia

Diferentes
aislamientos de Nomenclatura utilizada
Cryptococcus para identificar cada
Cepas de neoformans Identificación cepa según su origen o
Cryptococcus utilizados en el Cualitativa de cada cepa Cepa A, Cepa B, características
neoformans estudio nominal específica Cepa C, etc. específicas

Cantidad de
células de
Cryptococcus Cantidad de Unidades Se determinará
Concentración neoformans células de cada formadoras de experimentalmente
de cepas de inoculadas en cepa inoculada colonias (UFC) mediante recuento de
Cryptococcus las placas de Cuantitativa en cada placa por mL de UFC en placas de
neoformans cultivo discreta de cultivo suspensión cultivo

TIPO DE ESTUDIO
Estudio experimental, transversal y analitico

UNIDAD DE ANALISIS
La cromatografía líquida de Alta resolución (HPLC)

CRITERIOS DE VALIDEZ

Validez interna, se refiere a la confiabilidad y precisión de las mediciones

dentro del estudio. Para asegurar la validez interna, se podran implementar
procedimientos estandarizados y bien definidos para la preparación del extracto
de Allium sativum, la realización de pruebas antifúngicas, y el análisis por
HPLC de los compuestos químicos presentes en el extracto. Esto puede incluir
el uso de métodos validados previamente en la literatura científica, la
calibración y verificación regular de los equipos utilizados, y la aplicación de
controles de calidad en todas las etapas del estudio.

Validez externa, se refiere a la generalización de los resultados del estudio a

una población más amplia o a otros contextos. Para asegurar la validez
externa, utilizaremos cepas salvajes de Cryptococcus neoformans
representativas y obtener un tamaño de muestra adecuado para que los
resultados sean representativos de la población objetivo. Además, es
importante describir claramente las características de las cepas utilizadas y los
procedimientos utilizados en el estudio para que otros investigadores puedan
replicar los resultados en diferentes contextos.

Validez de constructo, se refiere a si las variables medidas y los conceptos

teóricos utilizados en el estudio seran adecuados para abordar la pregunta de
investigación planteada. Para asegurar la validez de constructo, es importante
utilizar medidas o indicadores que sean relevantes y apropiados para medir la
actividad antifúngica del Allium sativum y los compuestos químicos presentes
en el extracto. Esto puede incluir la utilización de métodos validados
previamente en la literatura científica para medir la actividad antifúngica, y la
identificación y cuantificación precisa de los compuestos químicos por HPLC
utilizando estándares de referencia y métodos validados.

Validez de contenido, se refiere a si las variables medidas y los indicadores que

utilizaremos en el estudio representan de manera completa y adecuada el
concepto que se pretende medir. Para asegurar la validez de contenido, es
importante seleccionar cuidadosamente los indicadores y procedimientos de
medición que sean relevantes y adecuados para la actividad antifúngica del
Allium sativum y los compuestos químicos presentes en el extracto. Esto puede
incluir la revisión de la literatura científica y la consulta con expertos en el
campo para asegurarse de que los indicadores seleccionados sean apropiados
y aborden adecuadamente el problema de investigación planteado.

CRITERIOS DE CONFIABILIDAD

Consistencia de los resultados, los resultados que se obtendran en el estudio

deberan ser coherentes y consistentes a lo largo de todas las etapas del
estudio, incluyendo la preparación del extracto de Allium sativum, las pruebas
antifúngicas y el análisis por HPLC de los compuestos químicos presentes en
el extracto. Esto implica asegurarse de seguir los mismos procedimientos y
protocolos en todas las repeticiones del estudio y obtener resultados similares
en diferentes momentos y lugares.

Replicabilidad, los procedimientos y métodos utilizados en el estudio deberan

ser lo suficientemente detallados y claros para que otros investigadores puedan
replicar el estudio y obtener resultados similares. Esto implica proporcionar
descripciones precisas y completas de los procedimientos utilizados,
incluyendo las condiciones experimentales, los reactivos utilizados, los
instrumentos y equipos utilizados, y los pasos de análisis de datos.

Estabilidad de las mediciones, las mediciones que se realizaran en el estudio

deberan ser estables y consistentes a lo largo del tiempo. Esto implica utilizar
métodos de medición validados previamente en la literatura científica y verificar
regularmente la calibración y verificación de los equipos utilizados, así como el
seguimiento de los controles de calidad en todas las etapas del estudio.

Control de sesgos, los sesgos, como sesgos de selección, sesgos de medición

o sesgos de reporte, pueden afectar la confiabilidad de los resultados
obtenidos. Es importante identificar y controlar cuidadosamente cualquier
posible fuente de sesgo en el diseño y ejecución del estudio para minimizar su
impacto en los resultados obtenidos.

Análisis de datos riguroso, el análisis de datos se realizars de manera rigurosa

utilizando métodos estadísticos apropiados y validados para asegurar la
confiabilidad de los resultados obtenidos. Esto incluye el uso de software
estadístico confiable, la validación de los resultados obtenidos y la presentación
clara y precisa de los resultados analizados.

FORMULACION DEL DISEÑO EXPERIMENTAL Y ESTADISTICO

Diseño experimental: se realizará un estudio in vitro de la actividad

antifúngica de extractos crudos de Allium sativum contra cepas de
Cryptococcus neoformans, mediante pruebas preliminares.

Variables dependientes: crecimiento de cepas de Cryptococcus neoformans.

Variables independientes: concentración de extractos crudos de Allium

sativum.

Grupo de control: se utilizará un grupo de control positivo con fluconazol, un

antifúngico de amplio espectro.

Métodos estadísticos: se aplicarán análisis de varianza (ANOVA) y pruebas

post hoc para determinar diferencias significativas entre los grupos de
tratamiento y control. Se considerará un valor de p<0.05 como
estadísticamente significativo.

RECURSOS MATERIALES
 Extractos de Allium sativum

 Cepas de Cryptococcus neoformans

 Medios de cultivo

 Placas de cultivo

 Equipos de laboratorio (incluyendo HPLC u otros equipos de

cromatografía y espectroscopía)

 Consumibles de laboratorio (como pipetas, tubos.)

 Reactivos químicos y soluciones necesarios para los análisis

 RECURSOS INSTITUCIONALES
 Laboratorio B de investigación de la facultad de ciencias químicas

 Acceso a instalaciones y equipos necesarios para la investigación (por

ejemplo, laboratorios de microbiología, química).

 Apoyo del personal técnico, científico y docentes de la institución

Actividad Sem Sem Sem Sem Sem Sem Sem Sem Sem Sem Sem Sem
5 5-6 6 6-7 7 7-8 8 8-9 9 9-10 10 10

Revisión bibliográfica X X X X
RECURSOS
Obtención de materiales y FINANCIEROS
reactivos X X
 Presupuesto para la
Cultivo de cepas de adquisición de
Cryptococcus neoformans X X X
materiales y
reactivos
Extracción de compuestos
químicos de Allium  Fuentes de
sativum X X X
financiamiento,
como becas,
Análisis de compuestos
subvenciones, o
químicos mediante HPLC X X X
fondos de
Pruebas de actividad investigación
antifúngica in vitro X X X

Análisis y procesamiento
de datos X X X X

Elaboración de informe
final X X X X X

Presentación de
resultados X X
METODOLOGIA
El estudio actual se llevó a cabo en el laboratorio de la facultad de ciencias
quimias dependiente de la UJED especificamente en el laboratorio de
investigacion B, para evaluar la actividad de antifungica y extractos de bulbo in
vitro contra el crecimiento de hongos de pudrición, y in vivo contra la progresión
de las enfermedades, en comparación con antifungicos. El sitio experimental
Artículo 123 s/n.Col. Filadelfia. C.P. 35010.Gómez Palacio, Dgo. México. Las
propiedades físicas y químicas del compuesto que se utilizaran en este estudio
se analizaran de acuerdo con los métodos descritos anteriormente en la
investigacion. Las muestras de c. Neoformans se recolectara dentro del area y
zona donde se realizara la investigacion. Antes del inicio del experimento
analizaremos la muestra por metodo de tincion con tinta china para determar si
el hongo patogeno es positive a c. Neoformans el Laboratorio de la facultad de
ciencias quimicas. Durante el período de prueba, se aplicaron practices
analiticas para determinar y analizar si el estracto de Allium Sativum posee
actividad antifungica.

ASPECTOS BIOETICOS
ANEXOS

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