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Materiales
Balanza granataria Incubadora Licuadora Espátulas Baño de agua Tubos de cultivo Cajas Petri Pipetas Probetas Varillas de vidrio con ángulo recto Agar Baird Parker Solución de telurio de potasio Emulsión de yema de huevo Agua peptonada Solución reguladora de fosfatos Solución salina 0.85% Aceite de parafina o aceite mineral Plasma de conejo o humano con EDTA Peróxido de hidrogeno al 3% Reactivos de tinción de gram Procedimiento - Tomar 25g o mL a frascos de dilución con 225mL de solución regulador de fosfato o agua peptonada amortiguadora - Homogenizar por 1min o 2 en licuadora - Preparar diluciones 10-2 y 10-3 - Transferir 0.1mL de las ultimas dos diluciones por duplicado a cajas de agar Bird Parker - Cuidadosamente distribuir el inoculo tan pronto sea posible sobre la superficie del agar con varillas estériles de vidrio en ángulo recto utilizando una por cada placa - Mantener las placas con las tapas hacia arriba hasta que el inoculo sea absorbido totalmente por el agar - Invertir las placas e inocular por 44 a 48 hrs a 36 grados C más menos 1 grado - Buscar colonias con m0rfologia colonial típica: colonias negras, circulares, brillantes, convexas, lisas, de diámetro de 1 mm a 2 y muestran una zona opaca Prueba confirmatoria - Realizar un frotis teñido con gran con cada una de las placas y observar morfología Prueba de coagulasa - Del total de colonias representativo de ser S.aureus tomar un número representativo de ellas y sembrar la en tubos con 0.5ml del medio de cultivo infusión cerebro corazón - Incubar a 35 mas menos un grado - Después del período de incubación adicionar a cada uno de los tubos sembrados 0.5 mL de plasma humano o conejo e incubar a 35°C en baño María - Checar los cultivos cada hora para observar la formación de un coágulo hasta cumplir 6 horas - Si en este tiempo no hay formación de coágulo, dejar los cultivos 24 horas y revisar la formación de coágulo Prueba de catalasa - En un portaobjetos colocar una gota de peróxido de hidrogeno al 3% homogenizando con una colonia - Observar la formación de burbujas Utilización anaerobia del manitol - Inocular un tubo con caldo para la fermentación adicionado de manitol al 0.5% con abundante inoculo - Cubrir el caldo con una capa de aceite de parafina o aceite mineral de al menos 25mm - Inocular hasta 5 días a 36 más menos 1 grado Resultados Placa seleccionada 10-2 duplicado con un conteo de 991 colonias 2 biomasas Prueba confirmatoria 10-3
10-3 duplicado 10-2
10-2 duplicado Prueba de coagulasa Coagulasa negativa Prueba de catalasa
catalasa negativa Utilización anaerobia del manitol Utilización anaerobia del manitol negativa
Expectativa teórica (información no actualizada)
Prueba confirmatoria cocos gram positivos en forma de racimo
