TEMA 12
TEMA 12
TEMA 12
2. REPLICACIÓN SEMICONSERVATIVA
un grupo distinto de enzimas toma el control y empieza la replicación. La acción tiene lugar en
los extremos de la burbuja de replicación en una estructura llamada horquilla de replicación,
que es una región en forma de Y donde la doble hélice de ADN parental se divide en dos
hebras simples que después se copian.
Una enzima llamada helicasa cataliza la ruptura de los enlaces de hidrógeno entre los
desoxirribonucleótidos. Esta reacción hace que se separen las dos hebras de ADN.
Unas proteínas llamadas proteínas de unión al ADN monocatenario (SSBP) se unen a las
hebras separadas y les impiden que vuelvan a formar una doble hélice. Algunas de estas
proteínas reconocen determinadas secuencias que son los orígenes de replicación (genes ori).
Las SSB junto con la helicasa abren la doble hélice y hacen que ambas hebras puedan copiarse.
El mecanismo para la replicación implica la acción de unas enzimas clave que son las DNA
polimerasas, que actúan leyendo cada cadena molde en dirección 3'⟶5' e incorporando los
desoxirribonucleótidos de forma que la cadena nueva sintetizada crece en sentido 5'⟶3' a
partir de un cebador. Esto implica que una cadena de DNA (hebra conductora o adelantada) se
sintetiza continuamente, en dirección 5’⟶3’ por la acción de la DNA polimerasa, mientras que
la otra (hebra retardada), que también se sintetiza en dirección 5’⟶3’, se hace de atrás hacia
delante de forma discontinua, generando los conocidos fragmentos de Okazaki, que
posteriormente han de ser ligados.
La ADN polimerasa III solo sintetiza en dirección 5’→3’. Y para empezar la síntesis requiere un
extremo 3’ y una plantilla de hebra simple. La plantilla de la hebra simple determina que
desoxirribonucleótido será el siguiente en añadirse, mientras que un cebador (compuesto por
unos pocos nucleótidos unidos a la plantilla) proporciona un grupo hidroxilo 3’ libre que puede
unirse a un dNTP para formar un enlace fosfodiéster.
Cebador: Es una secuencia corta de ácido nucleico que contiene un grupo 3'hidroxilo libre que
forma pares de bases complementarios a una hebra molde y actúa como punto de inicio para
la adición de nucleótidos con el fin de copiar la hebra molde.
Una vez se añade el cebador, a una plantilla de hebra simple, el ADN polimerasa III empieza a
trabajar en dirección 5’→3’ y añade desoxirribonucleótidos para completar la cadena
complementaria.
Antes de comenzar la síntesis de ADN una enzima llamada primasa debe sintetizar un
fragmento corto de ácido nucleico (ARN) que actúa como un cebador para la ADN polimerasa.
La primasa es un tipo de ARN polimerasa, una enzima que cataliza la polimerización de
ribonucleótidos en ARN. Al contrario que las ADN polimerasa, la primasa y otras ARN
polimerasas no requieren un cebador.
3 C.L.A
La ADN polimerasa no puede sintetizar en dirección 3’→5’, por lo que la primasa sintetiza un
corto fragmento de ARN que actúa como cebador. La ADN polimerasa III trabaja en la dirección
5’→3’ sintetizando el primer fragmento de Okazaki de la hebra retrasada. La primasa y la ADN
polimerasa III sintetizan otro fragmento de Okazaki. La ADN polimerasa I elimina los
ribonucleótidos del cebador, los reemplaza con desoxirribonucleótidos en dirección 5’→3’. Por
último, una enzima llamada ADN ligasa cataliza la formación de enlaces 3',5'-fosfodiéster para
unir fragmentos de DNA. Como los fragmentos de Okazaki se sintetizan por separado y se unen
después, a esta hebra también se le llama discontinua.
Otras enzimas necesarias para el proceso de replicación, además de las DNA polimerasas son:
o DNA ligasas. Son enzimas capaces de efectuar enlaces 3',5'-fosfodiéster para unir fragmentos
de DNA. o Helicasas, girasas, topoisomerasas. Las helicasas abren la doble hélice, y las girasas
y topoisomerasas deshacen los enlaces topológicos formados al abrir la doble hélice. o SSB.
Son proteínas que estabilizan al DNA monocatenario formado al abrir la doble hélice para que
pueda actuar como molde e iniciarse la replicación. Algunas de estas proteínas reconocen
determinadas secuencias, que son los orígenes de replicación (genes ori). o Primasa. Proteína
que sintetiza los cebadores para que puedan actuar las DNA polimerasas. Se trata de una RNA
polimerasa.
Las principales enzimas implicadas en la biosíntesis del DNA son las DNA polimerasas, que son
las enzimas responsables de la unión de los distintos nucleótidos, originando polinucleótidos:
(DNA)n + dNTP ⟶ (DNA)n+1 + PPi
En E.coli se han aislado distintas DNA polimerasas denominadas I, II y III, con distintas
funciones. La DNA polimerasa I, descubierta por el premio Nobel Arthur Kornberg, es
característica porque posee además una actividad 5'⟶3' exonucleasa necesaria para eliminar
los cebadores de RNA e irlos sustituyéndolos paulatinamente por trozos de DNA de manera
que la hebra retardada quede finalmente completada a falta de la unión de los fragmentos
correspondientes que quedarían por la DNA ligasa. La actividad exonucleasa 5'⟶3' de la DNA
polimerasa I puede eliminarse por proteólisis, originando lo que se denomina el fragmento
Klenow de esta polimerasa que es equivalente a las otras DNA polimerasas.
Las moléculas de DNA circular de bacterias y arqueas pueden sintetizarse mediante las
enzimas presentadas anteriormente. Esto sucede también con la mayoría de las moléculas de
DNA lineales de los cromosomas eucariotas, a excepción de sus extremos que requiere una
enzima especial: la telomerasa. Las DNA polimerasas son incapaces de añadir DNA cerca del
final del cromosoma, por la necesidad estricta que tienen de un cebador. Como resultado tras
la replicación del DNA suele quedar un pequeño trocito de DNA de cadena sencilla en el
extremo 3' de la cadena retardada, que termina siendo degradado, lo que provoca un
acortamiento del cromosoma (50 a 100 nucleótidos) cada vez que el DNA se replica.
¿En qué momento del ciclo celular de una célula eucariota se efectúa la replicación?
¿Por qué una hebra (llamada conductora) del DNA naciente se sintetiza de manera continua,
mientras que la otra hebra (llamada retardada) se hace de manera discontinua en fragmentos?
Una cadena de DNA se sintetiza continuamente, en dirección 5’→ 3’ por la acción de la DNA
polimerasa, que específicamente funciona en esta dirección, leyendo la cadena molde en
sentido 3' 5', lo que se corresponde con la llamada hebra conductora. La otra cadena de DNA
resultante de la replicación se corresponde con la que se llama hebra retardada y se tiene
también que sintetizar en dirección 5’→ 3’, pero se tiene que ir haciendo en el sentido opuesto
a la cadena anterior, conforme se va abriendo la doble hélice del DNA, por lo que se sintetiza
de forma discontinua, como fragmentos de Okazaki, que posteriormente son ligados gracias a
la acción de la DNA ligasa.
La DNA polimerasa necesita, para desarrollar su actividad, una cadena molde de DNA y un
cebador, que es un pequeño oligonucleótido de RNA, unido a la cadena molde. La primasa es
la enzima que cataliza la síntesis del cebador. Al ser la primasa una RNA polimerasa, esta
enzima puede funcionar en ausencia de la pequeña zona de doble cadena definida por el
cebador y la cadena a replicar.