Facult pluridisciplinaire de Nador CHROMATOGHRAPHIE CHAP III CONCEPTS THEORIQUES

ABAILAL

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I/ MODLE DES PLATEAUX THORIQUES

Vers 1950, MARTIN et SYNGE ont tent de justifier la forme des pics de chromatographie, en assimilant une colonne de chromatographie une colonne distiller constitue de plateaux thoriques . Au niveau de chaque plateau, l'quilibre est ralis entre les deux phases. Il y a change de matire horizontalement, jusqu' ce que Kd = [A]stat / [A]mob soit atteint. Il n'y a pas d'change ve rtical.

En fait cet tat d'quilibre ne peut jamais tre atteint en prsence d'une phase mobile en mouvement continu. La thorie des plateaux est de plus en plus remplace par la thorie cintique.

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1: Notion de plateaux thoriques

Les plateaux de la colonne sont un concept thorique pour la mesure de lefficacit de la colonne, soit en tablissant le nombre de plateaux dune colonne, N (plus il y a de plateaux, mieux cest), ou la hauteur dun plateau (la hauteur quivalent un plateau thorique, HEPT), (plus la hauteur est petite, mieux cest).

HEPT = L/N
Une colonne de N plateaux thoriques est une colonne divise en N petits disques cylindriques successifs. On admet que la phase mobile progresse non pas de faon continue, mais par sauts successifs d'un plateau thorique l'autre. Dans chaque plateau thorique, on observe une rtention du solut S, du fait de l'quilibre de ce produit entre la phase mobile et la phase stationnaire. Le nombre de plateaux thoriques rellement contenus dans une colonne peut tre trouv en examinant le pic chromatographique aprs llution. les pics de chromatographie ont une forme gaussienne et la variance 2 est relie au nombre de plateaux thoriques N et au temps de rtention tR par la relation:

N 2 = (tR)2
N augmente donc avec le temps de rtention et diminue si la largeur des pics () augmente. une bonne colonne de chromatographie qui conduit des pics fins ( petit) pour des temps de rtention (tR) levs, est donc caractrise par un nombre de plateaux thoriques N lev.

N 2 = (tR)2 N = ( tR /)2
Et puisque = 4 N =16 ( tR / )
2

N =5,54 ( tR / )2

Utilisant la hauteur hp et l'aire A du pic

2: Notion de hauteur de plateau effectif

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Pour exprimer l'efficacit d'une colonne de longueur L et de N plateaux thoriques, on dfinit la hauteur H quivalent un plateau thorique (HEPT): H = L/N Ce paramtre varie entre 10 et 0,01 mm. Le tableau suivant montre le pouvoir de sparation des chromatographies les plus utilises :

Type de chromatographies CPG (colonne remplie de 2m ) CPG (colonne capillaire de 25m) CPL classique de 50 cm HPLC de 10cm

Nombre de plateaux thoriques N 2000 100000 100 5000

N/par mtre de colonne 1000 4000 200 50000

H (HETP) en mm 1 0,25 5 0,02

Nombre de plateaux thoriques effectifs, ou efficacit relle:

Neff = t'R2 / 2

Ce nombre correspond au nombre dquilibres successifs qu rencontre un solut. + N grand, + la colonne est efficace et + le pic est fin. Hauteur de plateau effectif: Hauteur de plateau rduite:

Heff=L / Neff h=H/dp= L/(N.dp)

dp= diamtre moyen des particules sphriques des colonnes; des colonnes ayant mme L/dp ont des efficacits ou performances semblables. II/ THORIE DYNAMIQUE DE LA CHROMATOGRAPHIE

1:Equation de Van Deemter (1956)

On peut considrer dans le cas de dveloppement dune volution dune petite quantit de composer que ltalement du pic, au fur et mesure de sa progression dans la colonne de chromatographie, est d trois origines indpendantes : la rsistance au transfert de matire dans chacune des phases ; la dispersion des molcules par diffusion lexistence de chemins multiples dus au remplissage.

Lquation de VAN DDEMTER relie les diffrentes causes dlargissement des pics la vitesse de la phase mobile et la hauteur quivalente un plateau thorique (efficacit).Cette quation est de la forme :
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O u est la vitesse moyenne de la phase mobile. A, B, et C sont trois facteurs qui contribuent llargissement des pics ; ils sont expliqus ci-dessous. a) Diffusion dEddy ou diffusion turbulente. (Terme A)

A = 2.dp (m) = facteur de diffusion d'Eddy = terme de diffusion turbulente

= cte concernant la rgularit du remplissage (voisin de 1) dp = diamtre moyen des particules. A gd si dp gd. Suivant la taille et la forme des particules, ils existent pour la phase mobile, plusieurs trajets possibles, cette particularit contribue l'largissement des pics.

Le chemin parcouru par la molcule 2 est suprieur celui de la molcule 1. 1 arrive en B avant 2. Le trajet dpend du diamtre des particules qui remplissent la colonne.

La phase mobile progresse dans la colonne remplie de phase stationnaire. Les molcules de solut prendront diffrents chemins au hasard travers les particules contenues dans la phase stationnaire. Puisque les diffrents chemins emprunts seront de longueurs variables, cela occasionnera un largissement du pic chromatographique. Plus les particules sont petites et plus le remplissage est homogne, plus l'efficacit de la colonne augmente. plus A petit et plus lefficacit de la colonne augmente. La contribution de A est nulle pour une colonne capillaire de chromatographie en phase gazeuse.
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b) Diffusion longitudinale. (Terme B) B/u : terme de diffusion molculaire longitudinale

B/u = 2. DM

B = terme lie a la diffusion molculaire longitudinale (en cm2.s1). = cte sans dimension lie l'espace entre les particules de remplissage. = 0,6 pour les colonnes remplies et 1,0 pour les colonnes capillaires. DM = coefficient de diffusion du solut dans la phase mobile (en cm2.s1). Il est 5 fois + gd en CPG qu'en CPL. B/u traduit la dispersion du solut cause de la diffusion du solut dans la colonne. Les molcules de solut diffusent des rgions les plus concentres vers les plus dilues. Elles se dispersent dans toutes les directions, d'autant plus que le dbit est faible. L'efficacit
d'une colonne augmente avec la vitesse de la P.M.

Par exemple, dans un flux liquide, les molcules au centre du flux progressent plus vite que celles qui sont sur les bords au contact des particules. Comme le terme DM est environ 5 fois plus grand en CPG qu'en CPL, il en rsulte que la contribution de la diffusion longitudinale est presque ngligeable en HPLC. En CLHP, une forte pression est exerce sur la phase mobile, ce qui permet d'obtenir des dbits convenables avec des microparticules de 2 5 m de diamtre. De bonnes sparations sont ainsi obtenues en CLHP. c) Rsistance au transfert de masse.(Terme C)

Cu = (CS + CM) u
CS = terme de transfert de masse dans la phase stationnaire; est proportionnel df 2/ DS df = paisseur moyenne de la couche de S dpose sur les particules du support solide. DS = coefficient de diffusion du solut dans la S CM = terme de transfert de masse dans la phase mobile; est proportionnel dp 2/ DM dp = diamtre des particules de remplissage. DM = coefficient de diffusion du solut dans la phase mobile.
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Ce terme Cu reprsente la rsistance au transfert du solut entre les phases mobiles et stationnaires, cette rsistance empche l'tablissement de l'quilibre entre S(m) et S(s). Ce phnomne est du par exemple au fait que certaines molcules stagnent dans les pores de la phase stationnaire. Le terme C est proportionnel (dp2/DM), les colonnes les plus efficaces seront celles rgulirement remplies et bien tasses o le diamtre dp est le plus faible possible. Il est aussi prfrable d'utiliser un solvant de faible viscosit pour minimiser C. Llargissement longitudinal du pic provient du dplacement des molcules dans des directions parallles a lcoulement. Llargissement du au transfert de masse provient de la diffusion dans une direction perpendiculaire a lcoulement.

III/ Courbe de Van Deemter

La reprsentation graphique de l'quation H = A + B / U + C.U est appele courbe de Van Deemter .Elle illustre la relation entre la hauteur du plateau thorique versus la vitesse moyenne linaire de la phase mobile :

Courbe de van Deemter d'une colonne de chromatographie. Les points sont les donnes exprimentales. Les courbes inferieures reprsentent les termes A, B/u et Cu.

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La courbe de van Deemter est une hyperbole. Il existe un minimum de H=L/N. Il correspond une efficacit maximale de la colonne, pour une vitesse u optimale (ou un dbit optimal) et pour un nbre de plateaux thoriques N maximal. Des courbes comme celles-ci sont dune grande utilit pour dterminer la vitesse optimale de flux de la phase mobile.

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Exercice d'application 1
Soit une courbe de V.D. exprimentale, obtenue en HPLC, [ Int .Lab 30, 20 (2000)]; en ordonne est reporte la hauteur de plateau rduite h = H/dp (o dp = 5 mm est le diamtre des particules. On considre deux points particuliers A et B sur cette courbe.

1- Au point A (dbit = 1 ml/mn, U = 0,65 mm/s et h = 2), calculer le temps mort et le temps d'analyse. 2- Mme question au point B (dbit = 2,75 ml/mn, U = 1,7 mm/s et h = 2,5). 3- Calculer la perte d'efficacit de la colonne entre A et B (NB/NA ). Conclusion

Exercice d'application2
Le chromatogramme de la nicotine a t obtenu dans les conditions suivante : Conditions CPG. Colonne remplie 10% Carbowax 20M/2% KOH sur 80/100 Chromosorb W AW 6' (183cm) x 2mm ID . Dbit de la phase mobile: 20mL/min. Inj.:1L Four: 200C. Temps de rtention de la nicotine = 3,20 mn. Four: 180C. Temps de rtention de la nicotine = 6,60 mn

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Questions : 1- Calculer la vitesse linaire (en cm/sec) de la phase mobile dans la colonne. 2- En dduire le temps mort de cette analyse. 3-Calculer le temps de rtention de la nicotine 160C. 4- Peut-on luer la nicotine en 1 mn, sachant que la temprature limite dutilisation de la colonne et de 250C ? 5-Le pic de la nicotine a une largeur mi-hauteur de 10 sec. Calculez N et H.

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