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    Protéines: (Selon La Méthode de Biuret)

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    110307 f

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    1.10307.

    0500
    Protéines (selon la méthode de Biuret)

    Art. 1.10307.0500 Protéines (selon la méthode de Biuret)


    Solution réactionnelle pour env. 250 dosages

    Domaines de mesure
    Domaine de mesure 1 : 1 - 10 g/l
    Domaine de mesure 2 : 0,5 - 5,0 g/l

    Méthode de dosage
    Dans une solution alcaline de sulfate de cuivre et contenant du tartrate (réactif de Biuret), les protéines
    forment un complexe coloré bleu-violacé. L’extinction des solutions à mesurer est mesurée normale-
    ment 546 nm. La teneur en protéines des échantillons est dosée par calibration à l’aide de solutions
    protéiniques standard.1-3

    Présentation, conservation et stabilité


    Un flacon contient 500 ml de solution du Biuret et suffit à 250 dosages.
    La solution est utilisable au moins 12 mois à température ambiante. Conservée au réfrigérateur entre
    + 2 et + 8 °C, elle est utilisable pendant au moins 2 ans.

    Préparation d’échantillon
    Les échantillons doivent être limpides et ne pas avoir de couleur propre. Centrifuger ou filtrer les
    échantillons troubles. Pour les échantillons colorés et les échantillons ayant une teneur en
    protéines plus faible (< 0,5 g/l), il est recommandé de précipiter les protéines par addition d’une
    solution d’acide trichloracétique et les reprendre ensuite dans un (faible) volume d’eau bidistillée.
    Préparation de la solution d’acide trichloracétique (solution TCA): dissoudre prudemment 5 g d’acide
    trichloracétique (art. 100807) dans 10 ml d’eau bidistillée (solution à 50 % poids/volume).
    Exécution : Pour la précipitation, ajouter 0,2 ml de solution TCA à 50 % (poids/volume) pour 1 ml
    d’échantillon, mélanger et centrifuger. Jeter le surnageant et dissoudre le précipité avec un volume
    défini d’eau bidistillée (éventuellement inférieur). Cet échantillon sert pour l’essai.

    Quantité estimée de protéines dans


    l’échantillon (g/l)
    < 0,5 Précipitation TCA
    0,5 - 5,0 Domaine de mesure 2
    1 - 10 Domaine de mesure 1
    > 10 Dilution

    Préparation de solutions étalon


    La calibration peut être effectuée en principe avec toutes les préparations protéiniques homogènes et
    autant que possible pures. Comme substance de référence, on emploie habituellement de l’albumine
    provenant de sérum bovin (BSA). Pour préparer les solutions étalon, dissoudre dans un ballon jaugé
    autant que possible 1 g exactement d’albumine provenant de sérum bovin (art. 112018) dans 100 ml
    d’eau bidistillée. Cette solution mère (10 g/l) peut encore progressivement être diluer:

    Domaine de mesure 1 (1 - 10 g/l)


    Solutions étalon (g/l) 1 2 4 6 8 10
    Solution mère de protéines (ml) 1 2 4 6 8 10
    (10 g/l de BSA)
    Eau bidistillée (ml) 9 8 6 4 2 -

    Domaine de mesure 2 (0,5 - 5,0 g/l)


    Solutions étalon (g/l) 0,5 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0
    Solution mère de protéines (ml) 0,5 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0
    (10 g/l de BSA)
    Eau bidistillée (ml) 9,5 9,0 8,0 7,0 6,0 5,0

    Les solutions étalon peuvent être stockées en fractions aliquotes pendant env. 6 mois à -20 °C.
    Réalisation des dosages
    Les mesures sont réalisées de préférence dans des cuves jetables en matière plastique (épaisseur de
    la couche 1 cm) à 546 nm. Le calibrage à zéro du photomètre peut s’effectuer soit contre l’air, soit
    contre l’eau.

    Schéma de pipettage Echantillon ou Valeur à blanc


    Domaine de mesure 1 (1 -10 g/l) solution étalon des réactifs
    Echantillon / solution étalon 0,5 ml -
    Eau bidistillée - 0,5 ml
    Solution réactionnelle de Biuret 2,0 ml 2,0 ml
    Mélanger soigneusement et incuber 30 minutes à la température ambiante. Puis mesurer les extinc-
    tions à 546 nm.

    Schéma de pipettage Echantillon ou Valeur à blanc


    Domaine de mesure 2 (0,5 - 5,0 g/l) solution étalon des réactifs
    Echantillon / solution étalon 1,0 ml -
    Eau bidistillée - 1,0 ml
    Solution réactionnelle de Biuret 2,0 ml 2,0 ml
    Mélanger soigneusement et incuber 30 minutes à la température ambiante. Puis mesurer les extinc-
    tions à 546 nm.

    Calcul
    Calculer les différences d’extinction DE = ESolution étalon - EValeur à blanc et DE = EEchantillon - EValeur à blanc.
    Pour établir une courbe de calibration, les différences DE sont rapportées contre les concentrations
    standard de protéines correspondantes. Le dosage de la teneur en protéines d’échantillons inconnus
    s’effectue soit graphiquement à partir de la courbe de calibration établie, soit calculé par la pente des
    droites établie. [Pour quelques protéines importantes, les pentes ont été réunies en tableau (« facteurs
    de Biuret »)4.]
    Remarque : Si l’échantillon a été dilué avant la mesure, le résultat doit encore être multiplié par le
    facteur f de dilution correspondant.

    Perturbations
    Bien que peu de substances perturbent la méthode du Biuret, en font partie quelques substances qui
    sont employées fréquemment dans la chimie des protéines, comme p. ex. le sulfate d’ammonium, le tris,
    la glycérine et le saccharose5. En présence de ces substances, effectuer une précipitation TCA avant le
    dosage. Les lipides peuvent aussi perturber par leur turbidité. Une addition d’un maximum de 3% de
    désoxycholate de sodium peut rendre service.

    Informations de commande - réactifs

    Art. Désignation Présentation


    110307 Protéines 500 ml
    (selon la méthode de Biuret)
    Solution réactionnelle
    pour env. 250 dosages
    100807 Acide trichloracétique pour analyses EMSURE® ACS 100 g, 250 g
    112018 Albumine Fraction V 25 g, 100 g

    Nous proposons aussi une deuxième solution réactionnelle prête à l’emploi pour le dosage des
    protéines :

    Art. Désignation Présentation


    110306 Protéines 500 ml
    (selon la méthode de Bradford)
    Solution réactionnelle
    pour env. 200 dosages

    Réferences
     resze, G.-B.; in: Meth. Enz. Anal, (Bergmeyer, H. U., u. Graßl, M., eds.), Vol. 2, 86–88 3rd ed., Verlag
    1. K
    Chemie, Weinheim (1983)
    2. Doumas, B. T., et al.; Clin. Chem. 27, 1642–1650 und 1651–1654 (1981)
    3. Amtl. Sammlung von Untersuchungsverfahren nach § 35 LMBG: L 06.00–23 (Mai 1986), L 07.00 36 (Mai
    1986) und L 08.00–28 (Mai 1986)
    4. Beisenherz, G., et al.; Z. Naturf. 8b, 555-577 (1953)
    5. Thorne, C. J. R.; in: Techniques in Protein and Enzyme Biochemistry (Kornberg, H. L., et al. eds.), Pt. 1,
    B 104, 1-18, Elsevier-North Holland, Amsterdam (1978)

    Status: Avril 2019


    Merck KGaA, 64271 Darmstadt, Germany,
    Tel. +49(0)6151 72-2440
    www.analytical-test-kits.com
    EMD Millipore Corporation, 400 Summit Drive
    Burlington MA 01803, USA, Tel. +1-978-715-4321
    Sigma-Aldrich Canada Co. or Millipore (Canada) Ltd.
    2149 Winston Park, Dr. Oakville, Ontario, L6H 6J8
    Phone: +1 800-565-1400

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