Rapport de stage de fin d’étude

Filière : Qualité dans les bioindustries

Réalisé par

CHATAR HAYTAM

Sous le thème

Analyse des résidus de pesticides dans le thé vert avec

chromatographie couplée à la spectrométrie de masse
GC-MS/MS et LC-MS/MS

Soutenu le21/07/2023, devant le jury :

Dr M’hammed CHAOUI ROQAI……………… Président

Dr Karima ELKARRACH ………………………Encadrante

Dr Mohammed BELAMRI……………………Examinateur

Année Universitaire : 2022/2023

 Dedicace

Je dédie mon travail à ma famille avec tous mes sentiments de respect, d'amour,
de gratitude et de reconnaissance pour tous les sacrifices déployés pour m'élever
dignement et assurer mon éducation dans les meilleures conditions. à mes amis
pour leurs encouragements et leurs soutiens.

À celui qui m'a indiqué la bonne voie en me rappelant que la volonté fait
toujours les grands hommes... À mon père.

À celle qui a attendu avec patience les fruits de sa bonne éducation... À ma

mère.

À tous mes amis et tous ceux qui me sont chers... Que Dieu vous garde

Merci à vous !
 REMERCIEMENTs

Avant tout, je tiens à exprimer ma profonde gratitude envers Allah, le Tout-Puissant, pour sa
guidance, sa miséricorde et ses bénédictions tout au long de cette étude. Je suis reconnaissant
pour l'opportunité qui m'a été donnée de mener à bien ce projet, ainsi que pour les ressources
et les soutiens qu'Il a placés sur mon chemin. Sa grâce infinie a été une source d'inspiration et
de force tout au long de ce parcours. Que ma reconnaissance Lui soit adressée, car tout
accomplissement découle de Sa volonté. Alhamdulillah.

Je souhaite exprimer ma sincère gratitude envers Dr M’hammed CHAOUI ROQAI, le

Directeur général de l’établissement pour son dévouement, son professionnalisme et son
engagement tout au long le cycle de Master. Ainsi que Mme JAOUHARI pour son
leadership inspirant et sa vision qui a créé un environnement propice à l'apprentissage et à
l'épanouissement des étudiants.

Je tiens à remercier Dr BELAMRI Mohammed et Dr EL KARRACH Karima pour leurs

conseils avisés, leur encadrement et leur disponibilité tout au long de cette recherche.

Je tiens également à exprimer ma gratitude envers toutes les personnes qui ont contribué à la
réalisation de cette étude sur l'analyse des résidus de pesticides. Mr ELGHAZI Mustapha
responsable de secteur de résidus de pesticides, ainsi que le groupe inclus. Mr AMIN et Mr
IMAD responsable analyse chromatographique. Mme NAJAT responsable qualité et enfin
Mme NEZHA et Mme NAJIA responsables d’analyses et extraction des échantillons. Je les
remercie pour leur soutien et leur collaboration qui ont été d'une importance capitale pour
mener à bien ce projet.
 Table des matieres :

Chapitre 1 : Présentation de l’organisme d’accueil.......................................................................3

I. Missions de laboratoire :........................................................................................................4
II. Les domaines d’interventions de LOARC :............................................................................5
III. Moyens................................................................................................................................6
1. Ressource humaines :.........................................................................................................6
2. Equipements :.....................................................................................................................6
5. Contrôles de qualité :..........................................................................................................8
6. Collaboration et accréditation :..........................................................................................8
IV. Organigramme de LOARC................................................................................................9
V. Taches des sections :.............................................................................................................10
Chapitre 2 : Revue bibliographique............................................................................................12
I. Généralités sur le thé :..........................................................................................................12
II. Thé et pesticides :.................................................................................................................12
III. Impacts des pesticides sur la santé :..................................................................................12
IV. Pesticides et végétaux :......................................................................................................13
V. Classification des pesticides :................................................................................................14
VI. Méthodes normalisées et standardisées pour le dosage des pesticides et les végétaux :....15
1. A l’échelle internationale :................................................................................................15
2. A l’échelle nationale :........................................................................................................16
VII. Réglementation :...............................................................................................................16
VIII. Résidus de pesticides :.......................................................................................................18
1. Généralités :......................................................................................................................18
2. Effets de la contaminations de l’environnement par les résidus de pesticides :................19
1. Analyse instrumentale : Chromatographie couplée à la spectrométrie de masse en
tandem ....................................................................................................................................20
a) Principe de GC-MS/MS....................................................................................................20
b) Principe de LC-MS/MS :..................................................................................................23
Chapitre 3 : Partie expérimentale................................................................................................20
I. Méthodologie........................................................................................................................20
1. Echantillonnage :..............................................................................................................20
II. Méthodes d’analyses :...........................................................................................................21
2. Méthode d’extraction dans le thé vert :..........................................................................24
1.1. Préparation de l’échantillon :.......................................................................................24
 1.2. Extraction :...................................................................................................................24
1.3. Séparation des phases :.................................................................................................24
1.4. Purification :.................................................................................................................24
1.5. Evaporation :................................................................................................................24
1.6. Purification finale :.......................................................................................................24
Chapitre 4 : Résultats et discussions...........................................................................................26
1. Résultats obtenus :............................................................................................................27
a. 1er Cas :..............................................................................................................................27
b. 2ème Cas :...........................................................................................................................34
Conclusion...............................................................................................................................43
Références bibliographiques..................................................................................................44
Annexes....................................................................................................................................45
 Liste des abréviations :

LOARC : Laboratoire Officiel d’Analyses et de recherches Chimiques Casablanca

CPG : Chromatographie en Phase gazeuse

D.R.A : Direction de la Recherche Agronomique

ECD : Détecteur à capture d’électrons

FID : Détecteur à ionisation de flamme

HPLC : Chromatophraphie en Phase Liquide à Haute Performance

NPD : Détecteur thermoïoniq

LMR : Limites maximales des résidus

CRM : Matériaux de références certifiés

PNA : procédures normalisées d'analyse

CAC : Commission du Codex Alimentarius

OMS : l'Organisation mondiale de la santé

FAO : Organisation des Nations unies pour l'alimentation et l'agriculture

ONSSA : l'office Nationale de la Sécurité Sanitaire des Aliments

AIEA : l'Agence internationale de l'énergie atomique

 Liste des figures :

Figure 1 : Organigramme de LOARC....................................................................................9

Figure 2 : Différents types de thé...........................................................................................12
Figure 3: Causes des résidus de pesticides............................................................................18
Figure 4 : Mode d'exposition de l'homme et des milieux aux pesticides............................18
Figure 5: Schéma simplifié de la méthode QUECHERS.....................................................23
Figure 6:Appareil GC-MS/MS..............................................................................................27
Figure 7: Schéma simplifié d'un appareil GC-MS/MS.......................................................28
Figure 8 : Schéma simplifié de la chromatographie en phase liquide................................29
Figure 9 : Détecteur spctrométrie de masse.........................................................................30
Figure 10 : Schéma simplifié de détecteur de spctrométrie de masse................................30
Figure 11 : Chromatogramme et résultat de thé vert..........................................................33
Figure 12 : Courbe d'étalonnage de Triphenyl-phosphate.................................................34
Figure 13 : Courbe d'étalonnage de bromophos-methyl.....................................................35
Figure 14 : Courbe détalonnage de bifenthrin.....................................................................37
Figure 15 : 2ème analyse de thé vert.....................................................................................41
Figure 16 : Courbe d'etalonnage TPP...................................................................................42
Figure 17 : Courbe d'étalonnage BM....................................................................................43
Figure 18 : Schéma simplifié de la thecnique d'extraction PLE.........................................47
Figure 19 : Schéma technique d'extraction par ultrason UAE...........................................48
 INTRODUCTION

Le Laboratoire Officiel d'Analyse et de Recherches Chimiques (LOARC), organisme d’État

qui est sous tutelle du Ministère de l’Agriculture et des pêches Maritimes, joue un rôle crucial
dans le contrôle de la qualité des produits alimentaires afin de garantir la conformité aux
réglementations en vigueur et de protéger la santé du consommateur.

L’utilisation de pesticides est fréquente sur les cultures végétales et comporte des risques
potentiels pour la sécurité alimentaire.

D’autre part, pour protéger les cultures de thé contre des menaces telles que les ravageurs, les
maladies ou les mauvaises herbes, les agriculteurs utilisent des pesticides. Ce sont des
substances chimiques utilisées pour contrôler les insectes, les maladies et les mauvaises
herbes qui peuvent endommager les cultures. Cependant, lorsqu'ils sont utilisés de manière
excessive ou incorrecte, ces substances peuvent laisser des résidus sur les feuilles de thé.

Malheureusement, ces résidus ne sont pas toujours éliminés par notre organisme et peuvent
présenter des risques pour la santé humaine, notamment des effets toxiques à court et à long
terme. Par conséquent, il est essentiel de surveiller et de contrôler les résidus de pesticides
dans les aliments pour garantir leur sécurité. Le thé reste une boisson populaire et largement
consommée au Maroc et dans plusieurs pays du monde.

Ainsi, mon travail de stage va se focaliser sur l’analyse des résidus de pesticides dans le thé
vert, pour cela nous allons rechercher s’il y a une présence de pesticides dans des échantillons
de thé vert par méthode de la chromatographie couplée à la spectrométrie de masse.

1
Chapitre 1 : Présentation de l’organisme d’accueil

2
 Chapitre 1 : Présentation de l’organisme d’accueil

Le laboratoire Officiel d’Analyses et de Recherche chimiques de Casablanca

(L.O.A.R.C) est une institution créer en 1914 chargée par le contrôle des
marchandises. Ce contrôle est organisé dans les pays, ayant atteint un certain niveau
de développement, pour assurer la protection de la santé du consommateur et la
transparence de la transition commerciale. L’importance et la sensibilité du sujet en
font donc un domaine exclusif du pouvoir publics. Vu la prépondérance des denrées
alimentaires dans le domaine de contrôle, L.O.A.R.C fut placé de sa création sous
tutelle du ministère de l’agriculture (il en est de même dans la majorité des pays).
Après l’indépendance du Maroc, LOARC s’est vu attribuer le rôle de service rattaché
aux diverses structures du ministère ; d’abord à l’ancienne direction de la recherche
agronomique (D.R.A) ; puis la direction de la protection des végétaux, des contrôles
techniques et de la répression des Fraudes. Après un long processus entamé en 1979 le
L.O.A.R.C fut érigé en établissement public, doté de personnalité morale et
d’autonomie financière, par la loi 22/82 promulguée par le dahir n°1.83.179 du 9
moharrem 1405 (05 octobre 1984). Les organes de la gestion du L.O.A.R.C sont
définis par le décret n° 2.84.31 du rabbi II 1405.

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 Chapitre 1 : Présentation de l’organisme d’accueil

I. Missions de laboratoire :

La loi22/82 défini les prérogatives du L.O.A.R.C et étend le champ de ses activités

 Au contrôle de la qualité marchande des produits agricoles, des denrées
alimentaires des fertilisants et des pesticides.
 Au contrôle des marchandises pour le compte de l’administration des douanes.
 A la participation, à la demande de l’état, a toute étude et recherche chimique
nécessaire au développement de l’agriculture et de l’élevage.
 A la réalisation des juridictions, d’opération d’expertises en matière d’analyse
chimique et physicochimique conformément aux textes législatifs à cet effet.
 A l’exécution; à la demande de l’état, de personnes morales de droit public ou
de particulier; d’analyse et d’expertise de tout produit et marchandises.
 A la participation et à l’élaboration de la législation et de la réglementation en
matière de répression des Fraudes et des falsifications.

LOARC accueille également d’autres missions tels que :

 Analyse de conformité : Le laboratoire peut effectuer des analyses pour

vérifier si les produits chimiques, les échantillons alimentaires, les
médicaments ou d'autres substances répondent aux critères de qualité, de
sécurité et de conformité établis par les réglementations nationales ou
internationales.
 Contrôle de la qualité : Le laboratoire peut être chargé de surveiller la qualité
des produits chimiques, des aliments, des médicaments, des cosmétiques ou
d'autres produits commerciaux pour s'assurer qu'ils ne contiennent pas de
substances nocives, de contaminants ou de niveaux inacceptables de certains
composants.
 Recherche et développement : Le laboratoire peut mener des recherches pour
développer de nouvelles méthodes d'analyse, étudier les propriétés chimiques
des substances, ou contribuer à l'avancement des connaissances dans le
domaine de la chimie analytique.

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 Chapitre 1 : Présentation de l’organisme d’accueil

II. Domaines d’interventions de LOARC :

 Analyse des produits alimentaires :

LOARC peut réaliser des analyses chimiques sur les denrées alimentaires pour
évaluer leur conformité aux normes de sécurité alimentaire, détecter la présence de
contaminants tels que les résidus de pesticides, les métaux lourds ou les additifs
alimentaires non autorisés, et évaluer la qualité nutritionnelle des aliments.

 Contrôle des médicaments :

 Contrôle des produits chimiques :

 Analyse environnementale :

 Contrôle des cosmétiques :

 Analyse des matériaux et des échantillons industriels :

Le laboratoire peut réaliser des analyses chimiques sur divers matériaux et échantillons
industriels, tels que les produits pétroliers, les plastiques, les métaux, les revêtements, les
adhésifs, etc., pour évaluer leur composition chimique, leur pureté ou leurs caractéristiques
spécifiques.
Le laboratoire traite plus de 25000 échantillons annuellement, représentant plus de 120
produits différents appartenant aux familles suivantes :
 Laits et produits laitiers ;
 Céréales et produits céréaliers ;
 Cafés, thé et infusions ;
 Epices et condiments ;
 Sucres et produits sucrés ;
 Boissons non alcoolisées ;
 Additifs alimentaires ;
 Boissons alcoolisées ;
 Matières grasses ;
 Conserves animales ;
 Formulation de pesticides ;
 Produits agricoles ;

5
 Chapitre 1 : Présentation de l’organisme d’accueil

 Produits industriels.

III. Moyens

1. Ressource humaines :
Le laboratoire est composé d'une équipe de professionnels qualifiés tels que des chimistes, des
techniciens de laboratoire et d'autres experts spécialisés dans différents domaines de la chimie
analytique. L’effectif est composé de 91 personnes répartis comme suit :

 22 cadres (ingénieurs et universitaires)

 49 techniciens
 28 autres (agents d’exécutions)

Ces personnes sont responsables de la réalisation des analyses, de l'interprétation des résultats
et de la gestion des opérations du laboratoire.

2. Equipements :
LOARC dispose généralement d'installations appropriées comprenant des laboratoires équipés
pour mener des analyses chimiques, .ils sont sophistiqués et adaptés à chaque type d’analyse :

 Equipement de chromatographie

 Equipement de spectroscopie

 Equipement d’optique

 Equipement d’analyse électrochimique

 Equipement d’analyse électro phorétique

 Equipement de mesure de la radioactivité.

 Equipement courant du laboratoire.

6
 Chapitre 1 : Présentation de l’organisme d’accueil

3. Méthodologies et protocoles d’analyses :

LOARC utilise des méthodes et des protocoles d'analyse standardisés pour garantir la
précision, la fiabilité et la reproductibilité des résultats. Ces méthodes peuvent être basées sur
des références nationales ou internationales, telles que les normes de l'Organisation
internationale de normalisation (ISO), les méthodes de la pharmacopée, les protocoles
d'analyse environnementale

 Chromatographie en phase liquide (HPLC) :

Cette méthode est utilisée pour séparer, identifier et quantifier les composés présents dans un
échantillon liquide. Elle est largement utilisée dans l'analyse des produits pharmaceutiques,
des aliments, des boissons, des produits chimiques industriels, etc.

 Chromatographie en phase gazeuse (GC) :

La GC est utilisée pour séparer et analyser les composés volatils et semi-volatils présents
dans un échantillon gazeux ou liquide. Cela inclut l'analyse des gaz d'échappement, des
solvants, des résidus de pesticides, des huiles essentielles, etc.

 Spectrométrie de masse (MS) :

La spectrométrie de masse est une technique utilisée pour identifier et quantifier les composés
chimiques en mesurant la masse et la charge des ions formés à partir d'un échantillon. Elle est
souvent couplée à d'autres techniques d'analyse, telles que la chromatographie en phase
liquide ou gazeuse, pour des analyses plus précises.

 Réactifs d'identification :
 Réactifs de complexation :

4. Contrôles de qualité :

LOARC met en place des programmes de contrôle de qualité internes pour s'assurer de la
validité et de la précision des analyses réalisées. Cela peut inclure l'utilisation de matériaux de
référence certifiés, des analyses en double, des mesures de précision et de justesse, ainsi que
la participation à des programmes d'évaluation externe de la qualité.

 Participation à des programmes d'essais inter laboratoires :

 Utilisation de matériaux de référence certifiés (CRM) :

7
 Chapitre 1 : Présentation de l’organisme d’accueil

 Contrôles de blanc et de bruit de fond :

 Contrôles de la précision et de la justesse :
 Mise en place de procédures normalisées d'analyse (PNA) :
 Formation continue du personnel :

5. Collaboration et accréditation :

LOARC peut travailler en collaboration avec d'autres organismes, universités, partenaires

industriels ou agences réglementaires pour partager des connaissances, des ressources et des
bonnes pratiques. Certains laboratoires peuvent également rechercher l'accréditation auprès
d'organismes reconnus pour démontrer leur compétence et leur conformité aux normes de
qualité.

IV. Organigramme de LOARC

Figure 1 : Organigramme de LOARC

V. Tâche des sections :

8
 Chapitre 1 : Présentation de l’organisme d’accueil

Section 1 : Section laits et produits laitiers, céréales et dérivés, légumineuses et levures.

Section 2 : Section café, thés, stimulants, épices et condiments

Section 3 : Section sucres et produits sucrés, boissons non alcoolisées et boissons alimentaires

Section 4 : Section boissons alcoolisés.

Section 5 : Section matières grasses.

Section 6 : Section conserves animales et végétales.

Section 7 : Section pesticides formulations.

Section 8 : Section résidus de pesticides.

Section 9 : Section agricole

9
Chapitre 2 : Revue bibliographique

11
 Chapitre 2 : Revue bibliographique

I. Généralités sur le thé :

Le thé est une boisson populaire et largement consommée à travers le monde. Il est fabriqué à
partir des feuilles de la plante Camellia sinensis, originaire de la région asiatique. Le thé est
apprécié pour sa saveur, ses propriétés stimulantes et ses bienfaits pour la santé.

Il existe plusieurs types de thé, qui diffèrent par leur méthode de fabrication et de traitement
des feuilles. Les principaux types de thé sont le thé vert, le thé noir, le thé oolong et le thé
blanc. Chacun de ces types a ses caractéristiques distinctes en termes de goût, de couleur et de
teneur en caféine.

Figure 2 : Différents types de thé

II. Thé et pesticides :

Afin de protéger les cultures de thé contre des menaces telles que les ravageurs, les maladies
ou les mauvaises herbes, les agriculteurs utilisent des pesticides, ce sont des substances
chimiques utilisées pour contrôler les insectes, les maladies et les mauvaises herbes qui
peuvent endommager les cultures. Cependant, lorsqu'ils sont utilisés de manière excessive ou
incorrecte, les pesticides peuvent laisser des résidus sur les feuilles de thé.

III. Impacts des pesticides sur la santé :

 Toxicité aiguë : Certains pesticides peuvent causer des effets toxiques immédiats s'ils
sont présents à des niveaux élevés. Cela peut inclure des symptômes tels que nausées,
vomissements, maux de tête, étourdissements et problèmes respiratoires.

 Toxicité à long terme : L'exposition régulière à des résidus de pesticides dans le thé
peut entraîner des effets à long terme sur la santé. Certains pesticides sont considérés
comme des perturbateurs endocriniens, ce qui signifie qu'ils peuvent interférer avec le

12
 Chapitre 2 : Revue bibliographique

fonctionnement normal du système hormonal et être associés à des problèmes de

fertilité, de développement et de santé reproductive.

 Risques pour le système nerveux : Certains pesticides organophosphorés et

carbamates sont connus pour avoir des effets néfastes sur le système nerveux. Ils
peuvent entraîner des symptômes tels que des tremblements, des problèmes de
coordination, des maux de tête, des troubles du sommeil et des troubles cognitifs.

 Risques de cancer : Certains pesticides ont été classés comme cancérigènes probables
ou possibles pour l'homme. Une exposition prolongée à ces substances chimiques peut
augmenter le risque de développer certains types de cancer, tels que le cancer de la
vessie, le cancer du sein, le cancer du foie et le cancer du poumon.

 Effets sur le système immunitaire : Certains pesticides peuvent affaiblir le système

immunitaire, rendant les individus plus susceptibles aux infections et aux maladies.

 Problèmes de fertilité et de reproduction : Certains pesticides ont été liés à des

problèmes de fertilité, à des déséquilibres hormonaux et à des anomalies du
développement. Ils peuvent interférer avec le fonctionnement normal du système
endocrinien, perturbant ainsi la reproduction et la santé reproductive.

IV. Pesticides et végétaux :

Les pesticides sont des substances chimiques utilisées pour lutter contre les ravageurs, les
maladies et les mauvaises herbes dans l'agriculture et la protection des végétaux. Cependant,
leur utilisation soulève des préoccupations quant à leurs effets sur les végétaux eux-mêmes.
Voici quelques points clés sur la relation entre les pesticides et les végétaux :

 Effets sur la croissance des végétaux : Certains pesticides peuvent avoir des effets
négatifs sur la croissance des végétaux, en particulier lorsqu'ils sont utilisés à des doses
élevées ou de manière inappropriée. Ils peuvent entraîner un ralentissement de la
croissance, des modifications de la morphologie des plantes, des dommages aux
racines et à la structure des tissus végétaux.
 Toxicité directe : Certains pesticides peuvent être toxiques pour les végétaux eux-
mêmes. Par exemple, les herbicides non sélectifs peuvent endommager ou tuer les
plantes ciblées ainsi que les plantes non ciblées à proximité. Cela peut entraîner une
réduction de la biodiversité végétale et avoir des conséquences sur les écosystèmes.

13
 Chapitre 2 : Revue bibliographique

 Résidus de pesticides dans les produits alimentaires : L'utilisation de pesticides

peut entraîner la présence de résidus dans les produits alimentaires d'origine végétale,
tels que les fruits, les légumes et les céréales. Bien que les résidus de pesticides dans
les aliments soient réglementés pour garantir la sécurité alimentaire, des
préoccupations persistent quant à leur impact potentiel sur la santé humaine.
 Effets sur l'écosystème : Les pesticides peuvent également avoir un impact sur
l'écosystème dans lequel les végétaux se trouvent. Ils peuvent tuer les insectes
bénéfiques, perturber les chaînes alimentaires et contaminer les sols et les ressources
en eau, ce qui peut avoir des conséquences néfastes sur les plantes et les autres
organismes.

V. Classification des pesticides :

Les pesticides disponibles actuellement sur le marché sont caractérisés par une variété de
structures chimiques, de groupes fonctionnels, et d’activités rendant leur classification assez
complexe, d’une manière générale, les substances actives composant les pesticides peuvent
être classées selon deux critères déterminants donc deux systèmes de classification, le premier
concerne la nature de l’espèce à combattre et le second concerne la nature chimique de cette
même substance active. (Voir annexe 1)

Tableau 1: Classification des pesticides

14
 Chapitre 2 : Revue bibliographique

VI. Méthodes normalisés et standardisés pour le dosage des pesticides et les

végétaux :

1. A l’échelle internationale :
À l'échelle internationale, il existe des normes et des méthodes normalisées pour le dosage des
pesticides dans les végétaux. Voici quelques organismes internationaux qui jouent un rôle clé
dans l'élaboration de ces normes :

Organisation internationale de normalisation (ISO) : L'ISO a développé plusieurs normes

relatives aux méthodes d'analyse des résidus de pesticides dans les produits alimentaires, y
compris les végétaux. Par exemple, l'ISO 17025 spécifie les exigences générales pour la
compétence des laboratoires d'essais et d'étalonnages, tandis que l'ISO 5725 fournit des
directives sur l'évaluation de la précision et de la justesse des méthodes d'analyse.

Commission du Codex Alimentarius (CAC) : Le Codex Alimentarius est un organisme

conjoint de l'Organisation mondiale de la santé (OMS) et de l'Organisation des Nations unies
pour l'alimentation et l'agriculture (FAO). La CAC établit des normes alimentaires
internationales, y compris des limites maximales de résidus (LMR) de pesticides dans les
aliments, y compris les végétaux. Ces normes sont utilisées comme références par de
nombreux pays pour réglementer les résidus de pesticides dans les aliments.

Organisation des Nations unies pour l'alimentation et l'agriculture (FAO) : La FAO

publie des directives et des manuels techniques pour le dosage des pesticides dans les
végétaux. Elle collabore également avec d'autres organisations internationales, telles que
l'Agence internationale de l'énergie atomique (AIEA), pour développer des méthodes
d'analyse des résidus de pesticides.

2. A l’échelle nationale :
Au Maroc, l'office Nationale de la Sécurité Sanitaire des Aliments (ONSSA) est l'organisme
responsable de la réglementation des pesticides et de la sécurité alimentaire. L'ONSSA
collabore avec d'autres organismes nationaux et internationaux pour établir des normes et des
méthodes d'analyse spécifiques pour le dosage des pesticides dans les végétaux. Voici
quelques éléments clés concernant le dosage des pesticides au Maroc :

Normes et réglementations : Le Maroc a adopté des normes et des réglementations

spécifiques pour les résidus de pesticides dans les aliments, y compris les végétaux. Ces

15
 Chapitre 2 : Revue bibliographique

normes sont généralement basées sur les recommandations du Codex Alimentarius et tiennent
compte des conditions et des besoins nationaux.

Laboratoires d'analyse : Au Maroc, il existe des laboratoires d'analyse accrédités et certifiés

par l'ONSSA qui effectuent des tests de résidus de pesticides dans les végétaux. Ces
laboratoires suivent les méthodes d'analyse spécifiées par l'ONSSA et sont responsables de la
détection et de la quantification des résidus de pesticides dans les échantillons végétaux.

Surveillance et contrôle : L'ONSSA est responsable de la surveillance et du contrôle des

résidus de pesticides dans les aliments, y compris les végétaux, sur le marché marocain. Cela
implique des inspections régulières, des prélèvements d'échantillons et des analyses pour
s'assurer que les limites maximales de résidus (LMR) de pesticides sont respectées.

VII. Réglementation :

Au Maroc, l'utilisation des pesticides est réglementée par l'Office National de Sécurité
Sanitaire des Produits Alimentaires (ONSSA). L'ONSSA est l'autorité nationale chargée de la
sécurité alimentaire et de la réglementation des produits agricoles.

Le Maroc a établi une liste de pesticides autorisés pour une utilisation agricole. Ces pesticides
ont été évalués et jugés conformes aux normes réglementaires en matière de sécurité,
d'efficacité et de gestion des risques. Les agriculteurs sont tenus de respecter les limites
maximales de résidus (LMR) établies pour chaque pesticide autorisé, afin de garantir que les
produits agricoles, y compris le thé, ne dépassent pas les seuils considérés comme sûrs pour la
consommation humaine.

En ce qui concerne les pesticides interdits, le Maroc a interdit certains pesticides considérés
comme dangereux pour la santé humaine et l'environnement. Les raisons de l'interdiction
peuvent inclure la toxicité élevée, les effets nocifs sur la santé, la résistance des ravageurs, les
problèmes environnementaux ou le non-respect des normes réglementaires.

 Endosulfan : C'est un insecticide organochloré à large spectre qui a été interdit au

Maroc en raison de ses effets toxiques sur la santé humaine et l'environnement. Il est
connu pour sa persistance dans l'environnement et sa toxicité pour les organismes
aquatiques.

16
 Chapitre 2 : Revue bibliographique

 Aldicarbe : C'est un insecticide utilisé pour le contrôle des insectes ravageurs dans
l'agriculture. Il a été interdit au Maroc en raison de ses effets néfastes sur la santé
humaine, notamment des problèmes neurologiques et des risques d'intoxication aiguë.

 Parathion : C'est un insecticide organophosphoré qui a été interdit au Maroc en raison

de sa toxicité élevée pour les humains et les animaux. Il est connu pour ses effets
neurotoxiques et peut être dangereux pour les travailleurs agricoles lorsqu'il est utilisé
sans précautions appropriées.

 DDT (dichlorodiphényltrichloroéthane) : Bien que le DDT ait été largement utilisé

dans le passé, il est maintenant interdit dans la plupart des pays, y compris au Maroc,
en raison de sa persistance dans l'environnement et de son impact négatif sur la faune
et la santé humaine. Le DDT est un insecticide organochloré qui a été lié à des
problèmes de santé, tels que des troubles endocriniens et des effets cancérigènes
potentiels.

 …..

VIII. Résidus de pesticides :

1. Généralités :
Un résidu de pesticide représente toute substance (dérivé, métabolite ou impureté) présente
dans les aliments par suite de l’utilisation d’un pesticide.

L'accumulation de résidus de pesticides est en fonction de :

✓ L’espèce cultivée

✓ La dose d'utilisation du produit

✓ La fréquence des traitements

✓ Les conditions climatiques.

Ces résidus sont les plus souvent présents à de faibles concentrations, souvent inférieures à
une partie analysée par million ou ppm (mg de produit analysé par kg de nourriture)

17
 Chapitre 2 : Revue bibliographique

Figure 3: Causes des résidus de pesticides

2. Effets de la contamination de l’environnement par les résidus de pesticides :

Figure 4 : Mode d'exposition de l'homme et des milieux aux pesticides

18
 Chapitre 2 : Revue bibliographique

Que sont le Bromophose-methyl et le Triphenyl-phosphate ?

 Le bromophos-méthyl est un insecticide organophosphoré principalement utilisé pour

le contrôle des insectes dans les cultures de légumes, les céréales, les fruits et les
plantes ornementales.

Dans le cadre d'une analyse par LC-MS/MS, le bromophos-méthyl peut être détecté et
quantifié en utilisant des méthodes spécifiques. Des échantillons de thé vert seraient
préparés, extraits et analysés par chromatographie liquide (LC) pour séparer le
composé cible, puis par spectrométrie de masse en tandem (MS/MS) pour
l'identification et la quantification précise du bromophos-méthyl.

 Lorsqu'il s'agit de l'analyse du triphénylphosphate, la technique GC-MS/MS

(chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie de masse en tandem)
peut être utilisée pour sa détection et sa quantification.
Après la séparation par GC, les composés, y compris le triphénylphosphate, sont
ionisés et fragmentés dans le spectromètre de masse. Les ions fragmentés sont ensuite
analysés dans le deuxième analyseur de masse pour obtenir des spectres de masse en
tandem.

Son rôle :

On ajoute un traceur (dans notre cas le bromopos-methyl et le triphenyl-phosphate)

pour évaluer le processus d’analyse. Autrement dit, si la quantité de traceur ajouté à
l’échantillon au début de l’extrait (10 ppm) est récupéré à la fin du processus , cela
veut dire que le processus est bon .

19
 Chapitre 2 : Revue bibliographique

IX.
1. Analyse instrumentale : Chromatographie couplée à la spectrométrie de masse
en tandem.
Avant l'analyse chromatographique, les échantillons obtenus après le processus QuEChERS
doivent généralement être concentrés et purifiés davantage pour éliminer les interférences et
améliorer la sensibilité de la méthode.

Cela peut être réalisé par des techniques telles que l'évaporation sous vide, la reconstitution
dans un solvant approprié, ou l'utilisation de colonnes de purification spécifiques.

a) Principe de GC-MS/MS
Le principe de la GC-MS/MS (chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie
de masse en tandem) repose sur deux techniques analytiques puissantes : la chromatographie
en phase gazeuse (GC) et la spectrométrie de masse en tandem (MS/MS). Cette combinaison
permet une séparation efficace des composés et une détection sensible et spécifique des
analytes d'intérêt.

1. Chromatographie en phase gazeuse (GC) :

 La GC est une technique de séparation basée sur la volatilité des composés.

Les échantillons sont injectés dans un système de GC équipé d'une colonne de
séparation spécifique.

 Un gaz porteur, tel que l'hélium, est utilisé pour transporter les composés à
travers la colonne de séparation.

 Les composés se séparent en fonction de leurs interactions avec la phase

stationnaire de la colonne et la phase mobile (gaz porteur). Les composés les
plus volatils traversent la colonne plus rapidement que les composés moins
volatils.

2. Spectrométrie de masse en tandem (MS/MS) :

 La spectrométrie de masse en tandem est une technique d'analyse qui combine
deux analyseurs de masse en série.
 L'analyseur de masse primaire (Q1) sélectionne un ion spécifique (ion mère)
parmi les ions formés à partir des composés séparés par la GC.

20
 Chapitre 2 : Revue bibliographique

 L'ion mère sélectionné est fragmenté à l'aide d'une collision avec des gaz de
collision contrôlés (généralement de l'azote ou de l'argon) dans le second
analyseur de masse (Q2).
 L'analyseur de masse secondaire (Q2) mesure les fragments spécifiques (ions
fils) générés par la fragmentation des ions mère.
 La mesure des ions fils permet d'identifier de manière spécifique les composés
et de quantifier leur présence dans l'échantillon.
3. Sélectivité accrue avec la MS/MS :
 La MS/MS offre une sélectivité accrue par rapport à la spectrométrie de masse
simple (MS) en raison de la séparation des ions mères et fils dans les deux
analyseurs de masse.
 Les transitions de fragmentations spécifiques sont préalablement définies pour
chaque composé d'intérêt, permettant une détection plus précise et spécifique.
 L'utilisation de transitions spécifiques réduit les risques d'interférences
provenant d'autres composés présents dans l'échantillon, améliorant ainsi la
sensibilité et la sélectivité de la méthode.

Figure 5:Appareil GC-MS/MS

21
 Chapitre 2 : Revue bibliographique

Figure 6: Schéma simplifié d'un appareil GC-MS/MS

b) Principe de LC-MS/MS :
Le principe de base de la chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse en
tandem (LC-MS/MS) repose sur l'utilisation de deux étapes de spectrométrie de masse en
série pour une analyse plus spécifique et sélective des composés présents dans un échantillon.

1. Chromatographie liquide (LC) : Dans la première étape, l'échantillon est séparé en

ses différents composants par chromatographie liquide. La LC utilise une phase
mobile qui traverse une colonne chromatographique contenant une phase stationnaire.
Les composants de l'échantillon se séparent en fonction de leurs interactions
chimiques avec la phase stationnaire, ce qui entraîne leur étalement temporel le long
de la colonne.(figure)

22
 Chapitre 2 : Revue bibliographique

Figure 7 : Schéma simplifié de la chromatographie en phase liquide

2. Ionisation : Après la séparation par LC, le flux de sortie de la colonne

chromatographique est introduit dans l'interface LC-MS/MS, où les composés sont
convertis en ions chargés.
3. Spectrométrie de masse en tandem (MS/MS) : Cette étape utilise deux analyseurs
de masse en série, les ions pré-sélectionnés dans le premier analyseur de masse sont
fragmentés en ions plus petits par collision avec des gaz (généralement de l'azote ou
de l'argon). Les ions fragmentés sont ensuite analysés dans le deuxième analyseur de
masse, ce qui permet d'obtenir des spectres de masse en tandem.(figure8)

Figure 8 : Détecteur spectrométrie de masse

23
 Chapitre 2 : Revue bibliographique

4. Détection et quantification : Les spectres de masse en tandem obtenus fournissent

des informations précises sur les masses et les structures fragmentées des composés
présents dans l'échantillon. Ces informations sont utilisées pour identifier les
composés avec une grande spécificité. De plus, les intensités des pics de masse en
tandem sont utilisées pour quantifier les composés présents dans l'échantillon.

Figure 9 : Schéma simplifié de détecteur de spectrométrie de masse

5. Analyse des données : Les données de masse et de fragmentation obtenues sont
collectées et analysées à l'aide d'un logiciel spécialisé. Les spectres de masse en
tandem peuvent être comparés à des bases de données pour l'identification des
composés. La quantification des composés peut être réalisée en utilisant des étalons
internes ou des courbes d'étalonnage, en fonction de la méthode analytique utilisée.

La combinaison de la séparation par LC et de la spectrométrie de masse en tandem

dans LC-MS/MS permet une analyse plus sélective, sensible et spécifique des
composés cibles dans un échantillon complexe.

 Temps de rétention (RT) : Le temps de rétention est le temps nécessaire à un

composé spécifique pour passer à travers la colonne de séparation et atteindre le
détecteur.
 Pics chromatographiques : Les pics chromatographiques correspondent à la quantité
de composés présents dans l'échantillon.
 le chromatographe enregistre les spectres de masse des composés identifiés, dans le
cas de Thé vert, le chromatographe a réussi à détecter les traceurs qu’on a déjà
injecté au cours de l’analyse de l’échantillon. En plus, l’appareil a réussi à détecter un
insecticide nommé bifenthrin

Le bifenthrine est un insecticide de la famille des pyréthroïdes, largement utilisé pour

le contrôle des insectes nuisibles dans l'agriculture, les jardins, les structures

24
 Chapitre 2 : Revue bibliographique

résidentielles et commerciales. Il est efficace contre un large éventail d'insectes, y

compris les moustiques, les mouches, les termites, les fourmis, les puces et les mites.

LMR :

LMR fait référence aux Limites Maximales de Résidus. Ce sont des normes réglementaires
établies par les autorités sanitaires pour définir la quantité maximale de résidus de pesticides,
d'insecticides, de fongicides ou d'autres produits chimiques autorisés qui peuvent être présents
dans les aliments ou les produits agricoles.

Les LMR sont fixées en fonction de critères de sécurité alimentaire et de santé publique. Elles
visent à protéger les consommateurs en s'assurant que les niveaux de résidus de substances
chimiques présents dans les aliments sont inférieurs à des seuils jugés sans danger pour la
santé.

Les LMR sont généralement exprimées en termes de concentration maximale autorisée (en
milligrammes par kilogramme) pour chaque substance chimique ou chaque groupe de
substances. Ces limites varient selon les pays et les réglementations spécifiques, et peuvent
différer en fonction du type d'aliment, du mode de production et de l'application du produit
chimique.( Voir annexe 2 )

Calculer le pourcentage de récupération du traceur à partir d’un chromatogramme

 Taux de recouvrement TR : Le taux de recouvrement est un paramètre important

dans l'analyse des résidus de composés dans les échantillons. Il mesure l'efficacité de
la méthode d'extraction et de purification utilisée pour récupérer les composés cibles à
partir de l'échantillon.
Le taux de recouvrement est généralement exprimé en pourcentage et il est calculé en
comparant les concentrations mesurées des composés cibles dans les échantillons avec
les concentrations théoriques ou ajoutées connues.
Voici la formule générale pour calculer le taux de recouvrement :

TR =
Aire de l' échantillon 1 1
Concentration des standards × × × ×100
Aire des standards Concentration échantillon TF

25
 Chapitre 2 : Revue bibliographique

Avec :

TF : Taux de fortification

Lorsqu'on analyse des échantillons pour la présence de pesticides ou de contaminants, il est

courant d'utiliser des échantillons de contrôle ou des échantillons de référence fortifiés. Ces
échantillons sont préparés en ajoutant une quantité connue du composé d'intérêt à un
échantillon de base exempt de ce composé.

Le taux de fortification est la quantité ajoutée du composé par rapport à la quantité initiale de
Quantité du standard ajoutée
l'échantillon. TF= '
Quantité de l échantillon

26
Chapitre 3 : Partie expérimentale

27
 I. Méthodologie

1. Echantillonnage :
Lorsque des échantillons végétaux sont destinés à être analysés pour détecter la présence de
résidus de pesticides dans la section des résidus de pesticides du Laboratoire Officiel
d'Analyse et de Recherche Chimique (LOARC), le processus d'échantillonnage suit
généralement les lignes directrices et les protocoles spécifiques liés à cette section.

 Plan d'échantillonnage : La section des résidus de pesticides suit un plan

d'échantillonnage spécifique, qui peut être basé sur des réglementations nationales, des
directives internationales, des programmes de surveillance ou des exigences
spécifiques du client. Le plan d'échantillonnage détermine les types d'échantillons à
prélever, les méthodes d'échantillonnage appropriées et les critères de fréquence.
 Sélection des échantillons : Les échantillons végétaux à analyser sont sélectionnés en
fonction de critères tels que le type de culture, l'origine géographique, la saison de
récolte, les pratiques agricoles, etc. Cette sélection vise à représenter de manière
adéquate la diversité des produits et des zones de production.
 Prélèvement d'échantillons : Le prélèvement d'échantillons COMMENT IL EST
FAIT CONCRETEMENTs pour garantir la cohérence et la fiabilité des résultats.
 Traçabilité et étiquetage : Chaque échantillon est étiqueté de manière appropriée, en
indiquant des informations essentielles telles que la date, le lieu de prélèvement, le
nom de la culture, etc. Les informations sur l'échantillon, y compris la chaîne de
possession, sont enregistrées pour assurer la traçabilité.
 Conservation et transport : COMMENT EST FAIT EXACTEMENT LA
CONSERVATION DE TON ECHANTILLON Les échantillons sont généralement
conservés dans des conditions appropriées pour éviter la dégradation des résidus de
pesticides avant l'analyse. Des mesures de conservation spécifiques, telles que la
réfrigération ou la congélation, peuvent être utilisées pour maintenir l'intégrité des
échantillons. Les échantillons sont transportés au laboratoire en respectant les
conditions appropriées pour prévenir toute altération.

Une fois les échantillons parvenus à la section des résidus de pesticides du LOARC, ils sont
soumis à des méthodes d'analyse spécifiques pour détecter et quantifier les résidus de
pesticides conformément aux protocoles établis. Le processus d'échantillonnage vise à
 Chapitre 3 : Partie expérimentale

garantir la représentativité des échantillons prélevés et la fiabilité des résultats d'analyse pour
évaluer la conformité aux normes de sécurité des pesticides dans les produits végétaux.

 Types de matrices végétales : Le programme d'échantillonnage à LOARC peut

spécifier les types de matrices végétales ciblées pour l'analyse des résidus de
pesticides, tels que les fruits, les légumes, les céréales, les plantes à feuilles, etc.
 Taille et nombre d'échantillons : Le programme peut définir la taille des échantillons
requis ainsi que le nombre d'échantillons à prélever pour chaque matrice végétale, en
fonction des besoins analytiques et des objectifs de l'analyse.

II. Méthodes d’analyses :

Il existe divers méthodes pour l’analyse de résidus de pesticides dans les matrices végétales,
la méthode couramment utilisé à LOARC est la méthode QUECHERS.

La méthode QUECHERS (Quick, Easy, Cheap, Effective, Rugged, and Safe) est une
méthode d'extraction largement utilisée pour l'analyse des résidus de pesticides dans les
matrices végétales. Elle offre une approche simplifiée, économique et efficace pour extraire
les pesticides des échantillons végétaux avant l'analyse.

Voici les étapes principales de la méthode QUECHERS :

 Préparation de l'échantillon : L'échantillon végétal est préparé en le broyant

ou en le coupant en morceaux afin d'assurer une homogénéité appropriée.
 Ajout d'une solution d'extraction : Une solution d'extraction composée d'un
mélange d'acétate d'éthyle et de méthanol est ajoutée à l'échantillon végétal.
Cette solution permet de dissoudre les pesticides présents dans la matrice
végétale.
 Agitation : L'échantillon et la solution d'extraction sont agités vigoureusement
pour assurer une extraction efficace des pesticides. Cela peut être fait
manuellement ou à l'aide d'un équipement d'agitation.
 Ajout d'un agent de partitionnement : Un agent de partitionnement,
généralement du sel de sulfate de magnésium anhydre, est ajouté à l'échantillon
pour séparer la phase aqueuse de la phase organique et améliorer l'extraction
des pesticides.
 Centrifugation : L'échantillon est centrifugé pour séparer la phase aqueuse de
la phase organique.

21
 Chapitre 3 : Partie expérimentale

 Purification : La phase organique contenant les pesticides est purifiée à l'aide

de techniques telles que l'extraction en phase solide (SPE) ou la purification en
phase liquide (LLE) pour éliminer les interférences potentielles.
 Analyse : La solution purifiée est ensuite analysée par des méthodes
chromatographiques telles que la chromatographie en phase liquide (HPLC) ou
la chromatographie en phase gazeuse (GC) couplée à un détecteur approprié
pour quantifier et identifier les pesticides présents dans l'échantillon.

La méthode QUECHERS est largement reconnue pour sa simplicité, son coût abordable et sa
capacité à extraire efficacement une large gamme de pesticides dans les matrices végétales.

22
 Chapitre 3 : Partie expérimentale

Figure 10: Schéma simplifié de la méthode QUECHERS

a) Broyage de l’échantillon
b) Préparation de l’échantillon dans un tube
c) Ajout d’une solution d’extraction
d) Ajout des sels de séparation QUECHERS
e) Agitation
f) Centrifugation
g) Extraction de la phase supérieure
h) Mettre l’extrait dans des viales et extraire pour purification
i) Mettre l’extrait purifié dans une autre viale .

23
 Chapitre 3 : Partie expérimentale

2. Méthode d’extraction dans le thé vert :

1.1. Préparation de l’échantillon :

a) Peser avec précision 2 grammes d'échantillon de thé vert.
(Concentration de thé vert =0.2g/ml)
b) Si nécessaire, broyer l'échantillon à l'aide d'un mortier et d'un pilon pour obtenir une
poudre fine et homogène.
c) Ajouter 100 µl de bromophos-methyl et 100µl de triphenyl-phosphate .

1.2. Extraction :
a) Transférer l'échantillon de thé vert dans un tube de centrifugation.

b) Ajouter 20 ml d’acétonitrile .

c) Agiter vigoureusement le tube pendant quelques minutes pour extraire les résidus de
pesticides du thé vert.

1.3. Séparation des phases :

a) Ajouter une quantité appropriée des sels QuEchERS ( ce sont des sels qui éliminent les
molécules d’eau de l’échantillon ), généralement les sels sont sous forme d’un sachet .
b) Agiter vigoureusement le tube pour mélanger les composants.

1.4. Purification :
a) Centrifuger le tube à une vitesse élevée pour séparer les phases.

b) Transférer la phase supérieure, contenant les résidus de pesticides dissous, dans un nouveau
tube de réaction

1.5. Evaporation :
a) Évaporer une partie du solvant de la phase supérieure à l'aide d'un évaporateur rotatif ou
d'un flux d'azote, jusqu'à ce qu'un volume réduit soit atteint.

1.6. Purification finale :

a) Ajouter de l'hexane (un solvant de purification), pour éliminer les impuretés restantes.

b) Agiter ou secouer le tube pour mélanger les composants.

c) Centrifuger à nouveau pour séparer les phases.

24
 Chapitre 3 : Partie expérimentale

d) Transférer la phase supérieure, qui contient maintenant les résidus de pesticides purifiés,
dans un flacon d'échantillon approprié pour l'analyse ultérieure. QUELLE ANALYSE…A
Preciser

25
 Chapitre 4 : Résultats et discussions

1. Résultats obtenus :

a. 1er Cas :
 Chapitre 4 : Résultats et discussions

Le chromatogramme ci-dessous représente les pics ou les signaux, il affiche deux axes
principaux : l'axe horizontal représente le temps de rétention RT ( en minutes), tandis
que l'axe vertical représente l'intensité du signal.. . Ces pics sont relatifs à la sortie d'une
soluté de la colonne et qui sont détectés par l'appareil GC-MS/MS.

Les pics encerclés représentent les molécules trouvées (Bifenthrin) et ajoutées

(Triphenyl-phosphate;Bromophos-methyl) pendant l'étape d'extraction , les autres pics
correspondent à des solutés qui ont la même vitesse de déplacement que la phase mobile .
Donc il n'intéragit pas avec la phase stationnaire , ce qui nous donne des pics non identifiés.
Généralement ils sont caractérisés par Tm (temps mort).

Figure 11 : Chromatogramme GC-MS/MS de l’extrait du thé vert.

Figure 12 : Courbe d’etalonnage BM

27
 Chapitre 4 : Résultats et discussions

Calcul de taux de recouvrement de bromophos-methyl :

Avec :

Quantité du standard ajoutée Concentration BM × Volume BM

TF= = Concentration
'
Quantité de l échantillon Quantité pesée
BM = 10 ppm(µg/ml)

Volume BM = 100 µl

10× 100 10 µg /ml ×100 µl 10 µg ×100 µl 10 µg ×100 µl

TF= = = = =0 ,5 µg/ g
2 2g 1 ml ×2 g 1000 µl ×2 g

'
Aire de l échantillon 1 1
TR=Conc des standards× × × × 100
Aire des standards Conc échantillon TF

Donné par la courbe (509,26 ppb) (0,5µg/g)

Donc :

−3
509 ,26 ppb 509 , 26 ×10 ppm
TR = ×100= ×100=101, 8 % (70˂101.8˂120)
0.5 µg /g 0.5 µg / g

28
 Chapitre 4 : Résultats et discussions

Aire de TPP dans l'échantillon

Concentration
de TPP dans
l'échantillon

Figure 13 : Courbe d’etalonnage TPP

29
 Chapitre 4 : Résultats et discussions

Taux de recouvrement de triphenyl-phosphate (TPP) :

−3
455.772 ppb 455.772 ×10 ppm
TR = ×100= × 100=91.15 %
0.5 µg /g 0.5 µg /g

30
 Chapitre 4 : Résultats et discussions

Figure 11 : Courbe d’étalonnage de bifenthrin

Quantité de résidus de pesticides de bifenthrine trouvé = 96.067 ppb

31
 Chapitre 4 : Résultats et discussions

−3
96.097 × 10 =0.096 ppm avec : 1ppm = 1mg/kg

32
 Chapitre 4 : Résultats et discussions

Lecture de l’échantillon :

C’est un échantillon de thé qui comprend : 0.096 mg/kg de bifenthrin.

D’après les résultats obtenus, on constate que le pourcentage de traceur BM est inclus dans
l’intervalle donnée, donc l’échantillon a été analysé avec succès.

Et puisque la quantité de bifenthrin trouvé dans le thé est 0.096 mg/kg, et la limite maximale

des résidus de bifenthrin est 30mg/kg , l’échantillon Thé vert qu’on

a analysé est conforme et autorisé dans le marché MAROCAIN

Interdit en EUROPE.

b. 2ème Cas :
Pour la deuxième analyse, on a pris le même échantillon analysé dans le 1 er cas et on a décidé
de faire une deuxième analyse pour vérifier la conformité de l’échantillon.

33
 Chapitre 4 : Résultats et discussions

Après utilisation de la même méthode (QEchERS ) et après analyse GC-MS/MS et

LC-MS/MS , on a obtenu les résultats suivants :

Figure 12 : Analyse chromatographique de thé vert

La deuxième analyse n’a détecté aucun composé à part ceux ajoutés (bromophos-methyl
/triphenyl-phosphate) .

34
 Chapitre 4 : Résultats et discussions

Figure 13 : Courbe d'etalonnage TPP

35
 Chapitre 4 : Résultats et discussions

 TPP (triphenyl-phosphate) :

10× 100 10 µg /ml ×100 µl 10 µg ×100 µl 10 µg ×100 µl

TF= = = = =0 ,5 µg/ g
2 2g 1 ml ×2 g 1000 µl ×2 g

−3
456.170 ppb 456.17 ×10 ppm
TR = × 100= ×100=93.03 %
0.5 µg / g 0.5 µg / g

36
 Chapitre 4 : Résultats et discussions

Figure 14 : Courbe d'étalonnage BM

37
 Chapitre 4 : Résultats et discussions

 BM (bromophos-methyl) :

−3
557.317 ppb 557.317 × 10 ppm
TR = ×100= × 100=111.46 %
0.5 µg /g 0.5 µg/ g

Les taux de recouvrement des deux composés (BM/TPP) sont inclus dans l’intervalle exigé
(70˂93,03˂120) ; (70˂111,46˂120) . Donc l’échantillon est conforme même après une
deuxième analyse.

38
 Chapitre 4 : Résultats et discussions

Comparaison des profils chromatographiques de la 1ère et 2ème analyse

39
 Chapitre 4 : Résultats et discussions

Echantillon conforme , mais deux résultats différents

Dans le cas spécifique de l'analyse du thé vert, l'application des méthodes d'extraction
Quechers combinées à GC-MS/MS et LC-MS/MS peut également conduire à des résultats
légèrement différents pour un même échantillon.

1. Sélectivité des méthodes : Certaines substances chimiques présentes dans le thé vert
peuvent être mieux détectées et quantifiées par GC-MS/MS, tandis que d'autres
peuvent être plus appropriées pour l'analyse par LC-MS/MS. Par exemple, les
composés volatils peuvent être préférentiellement analysés par GC-MS/MS, tandis que
les composés plus polaires ou les métabolites peuvent être mieux analysés par LC-
MS/MS.

2. Matrice du thé vert : Le thé vert contient divers composés naturels, tels que les
polyphénols, les flavonoïdes et les catéchines, qui peuvent interagir avec les
procédures d'extraction et les méthodes d'analyse. Les différences de composition de
la matrice peuvent affecter la récupération des analytes et influencer les résultats
obtenus par GC-MS/MS et LC-MS/MS.

3. Variabilité analytique : Comme mentionné précédemment, des facteurs tels que

l'étalonnage des instruments, les conditions d'analyse et la performance des
équipements peuvent contribuer à la variabilité analytique entre les analyses GC-
MS/MS et LC-MS/MS.

Autres méthodes similaires à la méthode QUECHERS :

 Méthode PLE (Pressurized Liquid Extraction) :

La méthode PLE implique l'utilisation de solvants liquides sous pression élevée et
température élevée pour extraire rapidement et efficacement les analystes de la matrice
solide. Elle est considérée comme une technique d'extraction à haut débit et
respectueuse de l'environnement. La PLE est largement utilisée pour l'extraction de
composés bioactifs à partir de sources naturelles et pour la détermination de divers
analystes d'intérêt dans les échantillons alimentaires et environnementaux.

40
 Chapitre 4 : Résultats et discussions

Le processus d'extraction par liquide pressurisé se déroule en plusieurs étapes :

 1er étape : L’échantillon solide (broyé) est mis dans la cellule d’extraction (en acier
inoxydable pour supporter les hautes pressions)
 2ème étape : Le solvant est pompé dans la cellule d’extraction, et celle-ci est portée à la
température d’extraction voulue (la pression dans la cellule est ajustée selon la
température).

41
 Chapitre 4 : Résultats et discussions

 3ème étape : Après une durée d’extraction donnée, la vanne en sortie de cellule est
ouverte : le liquide contenu dans la cellule est transféré dans un récipient de collecte.
 4ème étape : Une purge à l’azote de la cellule permet de récupérer tout le solvant et les
composés extraits, et de les transférer dans le récipient de collecte.
 Méthode UAE (Ultrasound Assisted Extraction) :
La méthode UAE est une technique d'extraction assistée par ultrasons qui utilise des
ultrasons à haute fréquence pour faciliter l'extraction de composés bioactifs à partir de
différents échantillons, tels que les sous-produits de transformation des fruits et
légume.
Cette méthode permet une extraction rapide, avec une consommation d'énergie et de
solvant réduite, tout en préservant les propriétés bioactives des composés extraits.
Lorsque les ondes ultrasonores traversent le solvant, elles créent des bulles de
cavitation, qui implodent au contact de l'échantillon solide, générant ainsi des
températures et des pressions localisées élevées. Ces forces mécaniques induisent des
effets tels que la sonolyse, la destruction des membranes cellulaires et l'extraction de
matériaux intracellulaires

Figure 16 : Schéma technique d'extraction par ultrason UAE

L'avantage de la méthode UAE réside dans sa capacité à améliorer l'efficacité d'extraction des
composés d'intérêt en utilisant moins de temps, d'énergie et de solvant par rapport aux
méthodes conventionnelles. De plus, cette technique permet de travailler à basse température,
ce qui contribue à prévenir l'oxydation et la décomposition des produits naturels ciblés

Lorsque l'on compare ces trois méthodes (QUECHERS, PLE, UAE) , il est important de
prendre en compte les spécificités de l'échantillon et des analystes ciblés, ainsi que les
objectifs de l'analyse. Chaque méthode a ses avantages et ses limites en termes d'efficacité
d'extraction, de facilité d'utilisation, de coût et de temps nécessaire.

42
 Conclusion

L’utilisation de pesticides est fréquente sur les cultures végétales et

comporte des risques potentiels pour la sécurité alimentaire.

Pour confirmer ce résultat il serait souhaitable de refaire les analyses sur

plusieurs échantillons du même lot afin d’avoir un échantillon plus
représentatif et respectant les normes d’échantillonnage.

De plus, une information précise sur l’utilisation des insecticides et des

pesticides utilisés sur la culture permettra de mieux orienter le choix de
la substance à rechercher au laboratoire ; Insecticide ou pesticide.

Encourager la recherche et le développement de techniques et de méthodes de

cultures alternatives qui réduisent l'utilisation des pesticides dans la culture du thé vert. Cela
pourrait inclure des études sur les pratiques biologiques, l'utilisation de biopesticides et
l'amélioration de la résistance naturelle des plantes.

Promouvez l'étiquetage clair des produits de thé vert en ce qui concerne les résidus de
pesticides. Les consommateurs doivent être informés des procédures de contrôle de la qualité
et des résidus de pesticides éventuels présents dans les produits.

En combinant ces recommandations, on peut contribuer à une meilleure compréhension des

résidus de pesticides dans le thé vert, à l'amélioration des pratiques agricoles et à la protection
de la sécurité et de la santé des consommateurs.
 Références bibliographiques

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[ 2 ] BAKIRCI G.T., ACAY D.B.Y., BAKIRCI F., OTLES S., 2014. Pesticide residues in
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recommandations.

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pesticides, composition, utilisation et risques, edition Agrodock, 320p.

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méthode rapide et facile pour la détermination des résidus de 229 pesticides dans les
fruits et légumes par chromatographie en phase gazeuse et liquide et par détection par
spectrométrie de masse. J. AOAC Int. 2005, 88, 595-614. [Google Scholar] [CrossRef]
[PubMed] [Version verte]
 Annexes

ANNEXE 1 : Principale famille chimique de pesticides en fonction de leur activité

ANNEXE 2 : Liste des LMR