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    La sélection des cellules transformées

    RB promoteur gène d'intérêt marqueur de transfert LB

    • La transformation est loin d'être systématique: seul un


    petit nombre de cellules intègrent le transgène. Il faut
    donc sélectionner ces rares cellules transformées,
    parmi toutes celles qui sont présentes.
    • On utilise pour cela un gène marqueur de transfert.
    Transformation Par exemple, on peut coupler un gène de résistance
    aux antibiotique au gène d'intérêt, au sein du plasmide
    vecteur.
    • Après l'étape de transformation (par Agrobacterium,
    bombardement ou toute autre méthode), on soumet
    les cellules en cultures à l'antibiotique (par exemple la
    Sélection kanamycine)
    – les cellules transformées ont acquis la résistance à cet
    antibiotique
    – les autres cellules meurent

    13
    La régénération de plantes à partir de
    cellules isolées

    • Pour bon nombre d'espèces de plantes, on peut régénérer une plante à partir
    d'une cellule isolée.
    • On utilise pour ce faire des hormones végétales, qui induisent la multiplication
    des cellules et leur différenciation (formation des différents tissus: racines, tiges,
    feuilles, ...).
    • Les plantes régénérées sont ensuite capables de se reproduire normalement.
    • Si on applique cette méthode à une cellule transformée, on obtient une plante
    dont toutes les cellules portent le transgène, et qui transmettra ce transgène à
    sa descendance selon les lois de Mendel, au même titre que les gènes
    endogènes.

    http://www.irbv.umontreal.ca/francais/service/labo_culture_invitro.htm 14
    Résumé des étapes
    gène d'intérêt plante

    insertion dissociation

    plasmide vecteur régénération


    cellules isolées

    clonage
    plante
    transfert du plasmide
    transgénique
    bactérie
    insertion du fragment ADN-T
    dans le génome

    sélection des cellules


    transformées

    cellules transgéniques
    (de plante)
    16

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