2nde

THEME 1 : Constitution et transformation de la matière

TP N°4
Séparation et identification d’espèces chimique par
chromatographie

Compétence - S’approprier : Un protocole

s - Réaliser : - le mettre en œuvre dans une situation donnée.
- Observer le résultat.
- Valider : Interpréter une observation
- Communiquer : Présenter et formuler une conclusion
- Autonomie : travailler en binôme et dans le calme.

En 1906, un botaniste russe Mikhail Semenovich TSWETT purifie des pigments végétaux, comme la
chlorophylle, sur une colonne de craie. Il donne alors à ce phénomène de séparation le nom de
chromatographie (du grec khrôma, couleur et graphein, écrire) qu'il définit comme l'enregistrement
graphique des couleurs. On assiste alors à la naissance de la chromatographie, dont la définition a
fortement évolué.

Principe de la chromatographie
La chromatographie est une méthode permettant de séparer et d’identifier les espèces chimiques
présentes dans un mélange. Son principe repose sur le fait que les constituants du mélange possèdent
une affinité différente vis à vis de deux phases :
 un support, appelé phase stationnaire. Ce peut être par exemple un milieu poreux fait de
sable ou de silice ou une feuille en papier ou en carton.
 un solvant, mobile, liquide, appelé éluant qui pénètre dans la phase stationnaire et qui
monte par capillarité (comme dans un buvard). Cet éluant ne doit pas réagir avec les
constituants à séparer.
Le mélange des constituants A, B,... est déposé sur la phase stationnaire, au-dessus de l’éluant. La
montée de l’éluant le long de la phase stationnaire sépare les constituants en fonction de leur différence
d’affinités vis à vis du support ou de l’éluant. Si A est plus soluble dans l’éluant que B, il sera entraîné
plus vite, alors que B, plus retenu par la phase stationnaire montera moins vite. On peut ainsi séparer
les deux constituants.

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IDENTIFICATION DES PRINCIPES ACTIFS DANS TROIS MÉDICAMENTS

CONTEXTE DU SUJET :

Jamal Alatet désire prendre rapidement un médicament pour soigner une

fièvre. Il dispose de trois médicaments contre les douleurs et fièvres :
 l’A
sp
iri
ne
du
Rh
ôn
e
50
0
m
g
 l
e

D
o
l
i
p
r
a
n
e

5
0
0

m
g
 le Novacétol
Malheureusement Jamal les a mélangés dans sa pharmacie ! Il doit être très
vigilant car il est allergique à l’aspirine.
Il faut donc l'aider à identifier les principes actifs des trois médicaments.
Pour cela, on dispose de trois médicaments M1, M2 et M3 et d’acide
acétylsalicylique pur. Votre mission est d’identifier par chromatographie, les
médicaments M1, M2 et M3.
Les espèces chimiques étudiées sont chacune disponibles dans une solution
d’éthanol (1 comprimé broyé dans 10 mL d’éthanol). L’éluant utilisé est un
mélange de 60% d’acétate de butyle, de 40% de cyclohexane et de quelques
gouttes d’acide acétique.

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Document 1 : Chromatographie sur couche mince

Dans la Chromatographie sur Couche Mince (C.C.M) la phase stationnaire est un gel de
silice (SiO2) ou d’alumine (Al2O3) déposé sur un support rigide (feuille métallique).
L’éluant migre spontanément par capillarité en entraînant les constituants du mélange
à séparer.
La séparation des différents constituants du mélange est due à leur différence d’affinité
vis-à-vis de la plaque ou de l’éluant.
Pour un éluant et un support donnés, une espèce chimique migre de la même façon
qu’elle soit pure ou dans un mélange. L’identification se fait par comparaison avec des
espèces chimiques pures. Deux espèces qui migrent à la même hauteur lors d’une
chromatographie sont identiques.

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Document 2 : Un outil important : le rapport frontal
Chaque constituant (espèce chimique) est caractérisé par son rapport frontal Rf.
Pour une plaque et un éluant déterminés, le rapport frontal Rf ne dépend que de la
nature de la substance présente ; il est indépendant de la présence d’autres
substances chimiques dans le mélange étudié.
Deux corps présentant le même rapport frontal Rf sur un même chromatogramme
sont identiques, ainsi les constituants d’un mélange peuvent être identifiés par
comparaison de leurs déplacements (ou Rf) à ceux d’autres corps purs connus.

On définit le rapport frontal Rf d’une espèce chimique pour un éluant considéré :

R f = distance parcourue par l'espèce chimique = h Rf est une grandeur sans unité
distance parcourue par l'éluant H

Document 3 : Les notices des médicaments étudiés

ASPIRINE DU RHONE 500 mg
Composition : Acide acétylsalicylique 500 mg. Excipients : amidon, gel de silice.

Classe thérapeutique : Antalgique, antipyrétique, anti-inflammatoire à dose élevée, antiagrégant

plaquettaire.

Mode d'administration : Doit être utilisé de préférence avant ou au cours d'un repas même léger.
Absorber les comprimés après les avoir fait désagréger dans un verre d'eau.

Contre indications : Ne doit pas être utilisé en cas d'ulcère de l'estomac ou du duodénum, de maladies
hémorragiques.

DOLIPRANE 500 mg
Composition : Paracétamol : 500 mg. Excipients : lactose, amidon prégélatinisé, amidon de blé, talc,
carboxyméthylamidon, stéarate de magnésium pour un comprimé.
Classe thérapeutique : Antalgique, antipyrétique.

Mode d'administration : Les comprimés sont à avaler tels quels avec une boisson (eau, lait ou jus de
fruit).
Contre indications : Allergie au paracétamol

NOVACÉTOL
Composition : Paracétamol : 250 mg, Acide acétylsalicylique : 300 mg, Codéine : 10 mg
Excipients : acide stéarique, hypromellose, silice, cellulose microcristalline, amidon de maïs.

Classe thérapeutique : Antalgique, antipyrétique.

Mode d'administration : Les comprimés sont à délayer ou à avaler tels quels avec une boisson (eau, lait
ou jus de fruit).
Contre indications : Allergie au paracétamol et à l’aspirine, maladie grave du foie, ulcère à l’estomac.

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TRAVAIL À EFFECTUER

S’APPROPRIER :
1. Mettre une légende au montage expérimental de chromatographie ci-dessous :

2. Pourquoi la technique de chromatographie est-elle une technique de séparation ?

3. Pourquoi la technique de chromatographie est-elle une technique d’identification ?

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RÉALISER :
Manipuler les plaques CCM par la tranche pour éviter les traces de doigts !
Sur une plaque de CCM, tracer avec soin (sans appuyer) la ligne de base à 1,5 cm du bas de la
plaque.
Préparer la cuve à chromatographie en y plaçant de l’éluant et en la refermant.
Vérifier que la ligne se situe bien au dessus du niveau d'éluant dans la cuve.
Tracer quatre traits équidistants notés M1, M2 et M3 et AA pour l'acide acétylsalicylique.
Réaliser chaque dépôt à l’aide d’un tube capillaire sans appuyer sur la plaque.
® Garder la pointe bien verticale et répéter des dépôts brefs pour obtenir des taches fines
et concentrées.
® Changer de tube capillaire pour chaque échantillon.
® Vérifier la qualité des dépôts à la lampe UV.
Placer délicatement la plaque dans la cuve et laisser migrer l’éluant jusqu’à environ 1 cm du bord
supérieur de la plaque (vérifier régulièrement la migration, elle peut durer plus de 10 min).
Pendant l'élution, ne pas faire bouger la cuve, complétez votre compte-rendu de TP
Sortir la plaque, tracer immédiatement au crayon de papier la ligne repérant le niveau atteint
par l’éluant appelée front de l’éluant.
Sécher la plaque.
Le chromatogramme obtenu n’est pas visible à l’oeil nu ! Il faut donc révéler les taches.

4. Éclairer la plaque à l’aide d’une lampe UV en la tenant avec une pince en bois et entourer au crayon
de papier les taches qui apparaissent.
Reproduire le chromatogramme obtenu :

5. Faire les mesures des hauteurs h et H pour l'acide acétylsalicylique.

Calculer le rapport frontal Rf de l’acide acétylsalicylique :

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VALIDER :
6. Les trois médicaments contiennent-ils un seul principe actif ? Justifier.

7. Identifier les médicaments contenant de l’acide acétylsalicylique ? Justifier.

8. Existe-t-il une autre espèce chimique commune à certains des médicaments étudiés ? Justifier.
À l’aide des notices, identifier quelle est cette autre espèce chimique.

9. À l’aide des notices, identifier les trois médicaments M1, M2 et M3.

10. Quel médicament Jamal doit-il prendre ?