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Association entre l’infection palustre et la réponse en anticorps chez des enfants vivant en zone
endémique du paludisme au Burkina Faso
Association between malaria infection and antibody response in children living in malaria
endemic area in Burkina Faso
Ouédraogo O1, Cherif KM2,3, Diarra A3, Sanou GS,4 Kambire D1, Ouédraogo HG1, Ouédraogo A4, Tiono BA3,4, Traore
Y,5 Kouanda S1, Sirima BS 3, Nebie I3
1
Institut de Recherche en Sciences de la Santé (IRSS, CNRST), Ouagadougou, Burkina Faso
2
Unité de Recherche et de Formation en sciences et Techniques, Université Nazi BONI, Bobo Dioulasso, Burkina Faso
3
Groupe de Recherche Action en Santé (GRAS), Ouagadougou.
4
Centre National de Recherche et de Formation sur le paludisme (CNRFP), Ouagadougou
5
Laboratoire de Biochimie et d’Immunologie Appliquées (LaBIA), Université Joseph KI-ZERBO, Ouagadougou
Auteur correspondant : Ouédraogo Oumarou, Institut de Recherche en Sciences de la Santé, 03 BP 7192 Ouagadougou
Burkina Faso, Email: ouedoumarou.77@gmail.com
Résumé
Introduction
Le paludisme demeure un problème majeur de santé publique. Une meilleure connaissance de l’immunologie du
paludisme peut contribuer à la recherche vaccinale ainsi qu’à une meilleure connaissance de l’épidémiologie de cette
maladie. L’objectif de ce travail était de connaitre l’association entre l’infection palustre et la réponse en anticorps chez
les enfants de moins de cinq ans.
Matériel et méthodes: Des échantillons et des données parasitologiques collectés au cours de deux enquêtes
transversales ont permis de mesurer le niveau des anticorps IgG et des sous classes IgG dirigés contre 5 antigènes de
stade érythrocytaire (MSP3, MSP2A, MSP2B, GLURP R0, GLURP R2) de Plasmodium falciparum chez des enfants de
moins de cinq ans. Ces données ont également permis d’évaluer l’influence de la parasitémie concomitante sur le niveau
des anticorps IgG et des sous classes IgG. Le niveau des anticorps a été mesuré en utilisant la technique ELISA. La
goutte épaisse et le frottis mince ont été utilisés pour le diagnostic microscopique quantitatif et qualitatif du paludisme.
Résultats : Les résultats de l’étude ont montré que la présence du Plasmodium falciparum était associée à un niveau plus
élevé d’anticorps IgG et sous classes IgG. Au-delà d’un certain niveau de charge parasitaire, le niveau d’anticorps
baissait, probablement à cause de l’utilisation de ces anticorps.
Conclusion : Cette étude a permis de connaitre l’influence de la parasitémie concomitante sur le niveau d’anticorps chez
les enfants de moins de cinq ans naturellement exposés à l’infection palustre.
Mots clés: anticorps, Burkina Faso, infection palustre
Abstract
Introduction
Malaria remains a major public health problem. . A better knowledge of the immunology of malaria can contribute to
vaccine research as well as a better knowledge of the epidemiology of this disease. The aim of this work was to
understand the association between malaria infection and the antibody response in children under 5 years old.
Material and Methods: Samples and parasitological data collected during two cross-sectional surveys made it possible
to measure the level of IgG antibodies and IgG subclasses directed against 5 antigens of the erythrocyte stage (MSP3,
MSP2A, MSP2B, GLURP R0, GLURP R2) of Plasmodium falciparum in children under five. These data also made it
possible to assess the influence of concomitant parasitaemia on the level of IgG antibodies and IgG subclasses. The level
of the antibodies was measured using the ELISA technique. The thick drop and thin smear have been used for the
quantitative and qualitative microscopic diagnosis of malaria.
Results: The results of the study showed that the presence of Plasmodium falciparum was associated with a higher level
of IgG antibodies and IgG subclasses. Above a certain level of parasite load, the level of antibodies fell, possibly due to
the use of these antibodies.
Conclusion: This study revealed the influence of concomitant parasitaemia on the level of antibodies in children under
five naturally exposed to malaria infection.
Key words: antibody, Burkina Faso, malaria infection
gouttes épaisses et frottis sanguins ont été réalisés chez dans un tampon à une concentration de 0,5 µg/ml
tous les enfants. Le taux d’hémoglobine a aussi été d’antigène par puits. Les plaques ont été
mesuré. Un prélèvement veineux de 5 ml a été réalisé convenablement étiquetées et gardées au réfrigérateur à
chez chacun des enfants et le plasma obtenu a été +4°C toute une nuit. Le lendemain, les antigènes
conservé au congélateur à -20° C pour les analyses contenus dans les plaques ont été bloqués avec un
immunologiques. Une prise de la température axillaire a tampon de blockage (PBS+ Tween-20 0,1% + lait
été également effectuée chez chacun des enfants. Les écrémé 5%) en distribuant 200 µl de tampon par puit.
enfants qui étaient fébriles au moment des enquêtes Les plaques ont été incubées à température ambiante
transversales (température axillaire ≥ 37,5 °C) ont pendant une heure de temps. Après l’étape du blockage,
bénéficié d’un test de diagnostic rapide (TDR) du les échantillons de plasma dilués à 1/200 dans un
paludisme. En cas de TDR positif, l’enfant recevait un tampon de dilution (PBS +Tween 20, 0,1% + lait
traitement à base de Coartem (combinaison écrémé à 2,5% +0,02% de d’azide de sodium), les
thérapeutique à base d’artemisinine). standards et les contrôles positifs et négatifs dilués ont
Les antigènes utilisés été distribués dans les puits à raison de 100 µl par puit.
Cinq antigènes de stade erythrocytaires de Plasmodium Les plaques ont été placées sur un agitateur et incubées
falciparum ont été evalués au cours de l’etude : il s’agit pendant 2 heures à température ambiante. Ensuite, à
de (MSP2A : Merozoite Surface proteinA), MSP2B chaque puit ont été ajoutés 100 µl d’une dilution
(Merozoite Surface proteinB), MSP3 (Merozoite appropriée d’anti-immunoglobuline conjuguée à de la
Surface protein 3), GLURP R0 (Glutamate Rich Protein peroxydase. Les plaques, placées sur agitateur ont été
R0) et GLURP R2 (Glutamate Rich Protein R2). La incubées pendant une heure à température ambiante.
description de ces antigène est faite dans une Entre les principales étapes décrites plus haut, les
publication anterieure [14]. plaques ont été lavées avec un tampon de lavage (PBS,
Diagnostic microscopique du paludisme Tween-20 0,1 % + NaCl 0,5 M). Après le dernier
Au laboratoire du Centre National de Recherche et de lavage, 100µl d’une solution de révélation (tetramethyl-
Formation sur le Paludisme (CNRFP), la goutte épaisse benzidine) contenant le substrat de l’enzyme ont été
et le frottis sanguin séchés à l’air libre ont été colorés au ajoutés à chaque puit et les plaques ont été incubées
Giemsa (dilué à 6%) pendant 35 minutes et analysés au pendant 30 minutes à l’obscurité à température
microscope optique à l’objectif 100 sous huile à ambiante. Pour l’arrêt de la réaction, 100 µl d’une
immersion. Chaque lame a été lue par deux solution d’acide sulfurique à 0,2M ont été ajoutés à
microscopistes indépendants. Les résultats des deux chaque puit. La lecture de l’absorbance est faite à 450
lecteurs ont été confrontés et ceux pour lesquels le taux nm en utilisant un lecteur de plaque ELISA. La
de discordance était de moins de 30% ont été retenus. conversion des valeurs des densités optiques en
Lorsque le taux de discordance dépassait 30% entre les concentrations exprimées en unités arbitraires (UA) a
deux lectures, la lame était soumise à une troisième été réalisée en utilisant le programme ADAMSEL.
lecture qui est réalisée par un troisième lecteur et les Validation des resultats
deux résultats les plus proches étaient considérés. Les Afin de s’assurer de la qualité des résultats, les
parasites (stades asexués et sexués) et les leucocytes ont conditions suivantes devraient être remplies :
été comptés simultanément sur la goutte épaisse. Le . L’utilisation de contrôles positifs et négatifs qui ont
frottis sanguin a servi à l’identification de l’espèce permis de s’assurer du bon déroulement des
plasmodiale. La densité plasmodiale a été déterminée expériences,
par microlitre de sang soit à partir de la goutte épaisse . L’utilisation de standards obtenus à partir de pools
soit à partir du frottis sanguin. A partir de la goutte d’échantillons de sujets ayants des anticorps IgG dirigés
épaisse elle a été établie en fonction du nombre de contre les antigènes de Plasmodium falciparum (La
parasites compté pour 200 leucocytes comptés et en courbe standard devait avoir un score ≥ 97 % si non la
considérant une numération de la lignée blanche de plaque n’était pas validée). L’obtention d’un coefficient
8000 leucocytes/µl de sang. Une lame n’était déclarée de variation des résultats des duplicatas des blancs, des
négative que lorsqu’après avoir examiné 100 champs échantillons et des standards inférieur à 15%.
microscopiques aucun parasite n’était trouvé. Considerations ethiques
Determination du niveau d’anticorps Les échantillons utilisés ont été obtenus dans le cadre
Les niveau des immunoglobulines G (IgG) et des sous d’une étude qui a été conduite dans l’aire sanitaire du
classes (IgG1, IgG2, IgG3, IgG4) specifiques des district de Saponé. L’étude a été approuvée par le
antigènes testés ont été mesurés par ELISA en utilisant comité d’éthique pour la recherche en santé du Burkina
la procédure opératoire mise au point par le Faso. Les enfants étant mineurs, une fiche
réseau Afro-Immuno Assay (AIA). La procédure de d’assentiment a été administrée à chaque parent afin
mesure du niveau d’anticorps a été précédemment d’obtenir son consentement libre et éclairé. Avant
décrite [14]. Brièvement, des plaques de microtitration l’administration de la fiche d’assentiment, les objectifs
(Maxisorp) ont été coatées avec 100 µl d’antigène dilué ainsi que les avantages et contraintes que peuvent
présenter l’étude ont été clairement expliqués aux Pour la comparaison des moyennes géométriques du
parents des enfants. Le principe de la confidentialité de niveau d’anticorps entre les enfants infectés par
même que le respect de la dignité des participants à Plasmodium et les non infectés, nous avons utilisé le
l’étude ont été respectés. Par ailleurs, les enfants test de Student. Pour ces différents tests, la différence
était statistiquement significative si la valeur de p était <
Niveau d'anticorps en UA (IC 95%) 0,05.
Anticorps Absence de Présence de P. Résultats
P
P. falciparum falciparum
Caractéristiques de la population au cours des
n = 325
Antigène MSP3 enquêtes transversales
IgG 3,5 (2,9-4,2) 4,9 (4,1-5,9) 0,052 Le tableau I donne le résumé des caractéristiques de la
IgG1 6,4 (5,6-7,3) 6,2 (5,58-6,9) 0,47 population d’étude. Il s’est agi des enfants de moins de
IgG2 4,8 (4,3-5,2) 5,1 (4,6-5,6) 0,166 5 ans qui étaient présents au cours des deux enquêtes
IgG3 1,6 (1,3-1,9) 2,3 (1,9-2,8) 0,006 transversales. Ils étaient au nombre 325 dont 152
IgG4 2,8 (2,6-3,1) 3,2 (2,9-3,5) 0,884 garçons et 172 filles avec un âge moyen de 2,78 ans.
IgG 3,5 (2,9-4,23) 4,9(4,1-5,9) 0,052 Les prévalences de l’infection à Plasmodium
Antigène MSP2A falciparum étaient de 59,7% au cours de la première
IgG 12,7 (10,1-15,9) 34,5 (29,1-40,9) < 0,001 enquête qui a été réalisée à la saison de faible
IgG1 3,3 (2,8-3,9) 5,74 (5,02-6,55) 0,786
transmission du paludisme (saison sèche) et de 50,8%
IgG2 3,2 (2,8-3,63) 4,02 (3,61-4,46) 0,147
IgG3 7,9 (6,4-9,8) 21,2 (18,1-24,8) < 001 au cours de la deuxième enquête, faite à la saison de
IgG4 2,0 (1,6-2,5) 3,08 (2,62-3,63) 0,884 haute transmission du paludisme (saison humide). La
Antigène MSP2B moyenne de la densité parasitaire était plus élevée en
IgG 17,5 (14,2-21,7) 46,4 (39,1-5,0) 0,003 saison humide qu’en saison sèche.
IgG1 6,9 (5,9 - 8,2) 10,2 (8,9-11,6) 0,111
IgG2 3,3 (2,9 -3,7) 4,6 (4,1-5,1) 0,018 Tableau I : Caractéristiques des participants
IgG3 7,1 (5,7 - 8,9) 20,5 (17,0-24,7) < 0,001
IgG4 1,4 (1,1 - 1,8) 2,2 (1,8 2,7) 0,248 Influence de la parasitémie concomitante sur le
Antigène GLURP R0 niveau des anticorps IgG et sous classes IgG
IgG 3,9 (3,2 - 4,8) 5,6 (4,6- 6,9) 0,099 Afin d’évaluer l’effet de la parasitémie concomitante
IgG1 3,2 (2,7 - 3,7) 3,9 (3,3-4,5) 0,165
sur le niveau de production des immunoglobulines G
IgG2 2,6 (2,2 - 3,0) 1,9 (1,7 -2,3) 0,025
IgG3 1,1 (0,9-1,3) 1,25 (1,1-1,5) 0,817
(IgG) et des sous classes IgG (IgG1, IgG2, IgG3, IgG4),
IgG4 0,7 (0,6-0,8) 0,78 (0,7-0,9) 0,062 les enfants ont été répartis en deux groupes: ceux dont
Antigène GLURP R2 le résultat du diagnostic microscopique était positif et
IgG 24,5 (20,3-29,6) 40,1 (33,7- 47,7) 0,022 ceux dont la microscopie était négative. Les résultats
IgG1 21,8 (17,5 27,3) 31,4 (25,6- 38,6) 0,025 ont montré une association positive entre la production
IgG2 13,1 (10,6-16,3) 16,5 (13,5- 20,1) 0,325 d’anticorps IgG et la présence de parasite.
IgG3 9,9 (7,7-12,9) 19,7 (15,6-24,7) 0,164
IgG4 5,4 (4,7-6,2) 6,4 (5,5-7,3) 0,986 Tableau II : Niveau d’anticorps en fonction de
Paramètres N=325
Sexe ratio (M/F) 152/172 0,9
Moyenne d'âge (Année) 2,78 ± 0,1
Prévalence de l’infection palustre
Saison sèche N (%) 194 59,7%
Saison humide N (%) 165 50,8%
Densité plasmodiale (moyenne ± écart type)
En saison sèche (tropho /l) 2627 ± 645
En saison humide (tropho /l) 6024 ± 1918
parasités et qui présentaient des symptômes du l’infection palustre
paludisme ont été pris en charge conformément au
protocole de prise en charge du paludisme en vigueur au Les résultats ont montré que le niveau d’anticorps IgG
Burkina Faso. dirigé contre la plupart des antigènes était plus élevé
Analyse statistique des données chez les enfants porteurs de formes asexuées de P.
Les données de la présente étude ont été saisies en falciparum que chez les non porteurs avec une
double par deux opératrices de saisie et validées par EPI différence statistiquement significative pour MSP2A (p
INFO version 6. L’analyse de l’ensemble des données a < 0,001), MSP2B (p = 0,003), et GLURP R2 (p =
été réalisée en utilisant les logiciels EXCEL et STATA. 0,022). De façon générale, Il existait une association
E
Figure 1 : Variation de la moyenne géométrique des
IgG anti plasmodiques en fonction de la densité
plasmodiale
A E
Figure 2 : Variation du ratio IgG cytophiliques/IgG non
cytophiliques en fonction de la densité plasmodiale
Discussion
Le travail que nous avons réalisé a permis d’évaluer
l’influence de la parasitémie concomitante sur la
réponse d’anticorps dirigée contre des antigènes de
Plasmodium falciparum. L’influence de la présence du
parasite sur le niveau des immunoglobulines G et ses
sous classes a été évaluée. Aussi l’influence du niveau
de la parasitémie sur le niveau d’anticorps a été évaluée.
B L’étude a par ailleurs permis d’évaluer la relation entre
la charge parasitaire et le niveau d’anticorps
cytophiliques produit. En ce qui concerne l’évaluation
de l’influence de la parasitémie concomitante sur le
niveau des anticorps mesuré, les résultats ont montré de
façon générale que les individus porteurs de
Plasmodium falciparum au moment de la collecte des
échantillons sanguins avaient un niveau d’anticorps plus
élevé que les individus chez qui le résultat du diagnostic
microscopique était négatif. Ainsi, selon les résultats de
l’étude, nous constatons que la présence de formes
asexuées de P. falciparum chez l’enfant stimule la
production d’IgG. L’étude de la variation du taux
C
d’anticorps en fonction de l’infection palustre a montré
que la parasitémie concomitante influence positivement
la production d’anticorps dirigés contre les antigènes de
P. falciparum. Ces résultats pourraient s’expliquer par
le fait que la présence du Plasmodium permet de
stimuler et de maintenir la production des anticorps.
Cette production d’anticorps en l’absence de protection
permet de mesurer le niveau de la transmission de la ou modérées. Une étude conduite au Burkina Faso par
maladie dans une zone géographique donnée. En effet, Nebie et al. a montré qu’il y’avait une association
un niveau élevé d’anticorps pourrait témoigner de la négative entre la charge parasitaire et le niveau
présence du parasite au moment du prélèvement ou d’anticorps dirigé contre certains antigènes de
d’un contact récent de l’individu avec le parasite. Des Plasmodium falciparum [22].
résultats similaires ont été trouvés par Onome et al, qui, Conclusion
en 2008 ont trouvé que les enfants porteurs de P. Les résultats de l’étude ont montré que la présence du
falciparum avaient un niveau d’IgG plus important que Plasmodium influence positivement la production des
les enfants non infectés [18] Des résultats allant dans le anticorps anti palustres chez l’hôte. Cependant les fortes
même sens ont également été obtenus par Sarr et al qui charges parasitaires sont associées à un niveau moins
ont trouvé que le niveau d’IgG était plus important élevé d’anticorps. Ces résultats permettent de mieux
chez les sujets infectés que chez les sujets non infectés comprendre le comportement de l’immunité anti
par P. falciparum [19]. Le maintien du taux d’anticorps palustre chez les populations vivant en zone d’endémie
à un niveau pouvant assurer la protection contre le et peuvent contribuer à mieux comprendre
paludisme nécessite également le contact régulier du l’immunologie du paludisme qui est assez complexe à
sujet avec le parasite. Les mêmes tendances sont explorer.
observées en ce qui concerne les résultats des sous
Conflit d’intérêt : Aucun
classes d’IgG. Le niveau des sous classes
d’Immunoglobulines G était plus élevé chez les Références
individus qui avaient une goutte épaisse positive
comparativement à ceux chez qui la goutte épaisse était 1. WHO, World malaria report 2020. 2020. World
négative. Ces résultats concernent surtout les malaria report 2020 (who.int) (Accessed July 30,
2021) .2021.
Immunoglobulines cytophiliques notamment IgG 3. Les
2. INSD, Tableau de bord social. 2019. TBS_2018.pdf
ratio IgG cytophiliques/IgG non cytophiliques les plus
(insd.bf) (consulté le 28 Juillet 2021). 2021.
élevés sont observés chez les individus qui avaient une
3. Benoit-Vical, F., L. Paloque, and J.M. Augereau,
parasitémie modérée. Chez les individus avec une
parasitémie importante, ce ratio était faible. Plusieurs [Plasmodium falciparum resistance to artemisinin-
études ont montré le rôle des IgG cytophiliques (IgG1, based combination therapies (ACTs): Fears of
widespread drug resistance]. Bull Acad Natl Med,
IgG3) dans la protection contre l’infection palustre.
2016. 200(3): p. 477-89; discussion 490.
L’association des ratio élevés d’IgG cytophiliques avec
4. Pwalia, R., et al., High insecticide resistance
les parasitémies faibles ou modérées pourraient
intensity of Anopheles gambiae (s.l.) and low
s’expliquer par le fait que ces immunoglobulines
permettent de contrôler la charge parasitaire chez les efficacy of pyrethroid LLINs in Accra, Ghana.
individus infectés. L’étude de la variation du niveau Parasit Vectors, 2019. 12(1): p. 299.
5. Soma, D.D., et al., Insecticide resistance status of
d’anticorps en fonction de la densité plasmodiale a
malaria vectors Anopheles gambiae (s.l.) of
montré que le niveau d’anticorps augmente avec la
southwest Burkina Faso and residual efficacy of
densité parasitaire jusqu’à un certain seuil, puis diminue
pendant que la charge parasitaire augmente. Ce seuil indoor residual spraying with microencapsulated
varie en fonction des antigènes. Ces résultats pourraient pirimiphos-methyl insecticide. Parasit Vectors,
2021. 14(1): p. 58.
s’expliquer par le fait que la forte parasitémie au lieu de
6. Courtin, D., et al., The quantity and quality of
stimuler le système immunitaire provoque l’épuisement
African children's IgG responses to merozoite
des anticorps produits qui sont utilisés non seulement
surface antigens reflect protection against
dans la neutralisation des parasites qui ont stimulé leur
production (formation du complexe immun, Anticorps- Plasmodium falciparum malaria. PLoS One, 2009.
parasite) mais aussi dans l’activation du système du 4(10): p. e7590.
7. Dent, A.E., et al., Temporal stability of naturally
complément et dans la cytotoxicité dépendante des
acquired immunity to Merozoite Surface Protein-1
anticorps [20]. Stanistic et al ont montré au cours
in Kenyan adults. Malar J, 2009. 8: p. 162.
d’une étude réalisée en 2009 en Papouasie Nouvelle
8. Doolan, D.L., C. Dobano, and J.K. Baird, Acquired
Guinée que les parasitémies modérées stimulent et
maintiennent la production d’anticorps dirigés contre immunity to malaria. Clin Microbiol Rev, 2009.
les antigènes du Plasmodium [21]. Comparativement 22(1): p. 13-36, Table of Contents.
9. Marsh, K. and S. Kinyanjui, Immune effector
aux enfants ayant de fortes parasitémies, le niveau
mechanisms in malaria. Parasite Immunol, 2006.
d’IgG cytophiliques est plus important chez les enfants
28(1-2): p. 51-60.
modérément parasités. Ces résultats pourraient
10. Kleinschmidt, I. and B. Sharp, Patterns in age-
s’expliquer par le rôle protecteur de ces anticorps. Les
enfants ayant un niveau élevé d’IgG cytophiliques sont specific malaria incidence in a population exposed
mieux protégés et ont des densités plasmodiales faibles to low levels of malaria transmission intensity. Trop
Med Int Health, 2001. 6(12): p. 986-91.