UNIVERSITE DE SETIF

FACULTE DE MEDECINE
LABORATOIRE DE BIOCHIMIE

Prélèvements en biochimie médicale

Cours : 3ème année Médecine

(2024/2025)
Biochimie Clinique

Dr.ADIMI Meriem
Maitre assistante en biochimie médicale
 Plan de travail
Introduction
I. Définitions
II. Les différentes étapes du prélèvement
II.1. Prescription médicale
II.2.Prise de contact et préparation du patient
II.3. Modalité de prélèvement
II.4. Transport des échantillons
II.5.Reception et identification
II.6. pré traitement de l’échantillon
II.7. Conditionnement au moment de l’analyse
II.8. Conservation avant et après analyse.

III. Automatisation de la phase pré analytique

IV. Assurance qualité

V. Conclusion
 Introduction

L'examen biologique est un ensemble complexe d'étapes qui, de la prescription (ordonnance) au compte rendu final
(résultats), exige une surveillance permanente avec des contrôles contribuant à une assurance qualité.

Ces étapes sont :

1-étape pré analytique: commence dès le contact du patient.

2-étape analytique: est l'étape technique proprement dite de l’analyse.

3-étape post-analytique: consiste à valider les résultats bruts et les présenter dans une forme permettant une bonne
interprétation.
La Phase Pré analytique
 Définition

•La phase pré analytique commence dés la prescription des paramètres

biologiques (prescripteur) et s’arrête au début de l’analyse (phase
analytique).

• Elle comprend notamment:

 le prélèvement
 le transport
 et le prétraitement-conservation de l’échantillon
La maîtrise de la phase pré analytique est délicate car elle met en jeu différents
intervenants lors de tâches successives et sur des lieux différents.

«Un mauvais échantillon, même passé sur un bon analyseur,

donnera de mauvais résultats »

contrôle de qualité
 Prélèvement

Le premier stade de toute analyse ( et l’un des plus important) est le prélèvement de
l’échantillon à analyser.

 Prélèvement : acte permettant l’obtention d’un échantillon biologique.

 Echantillon biologique : échantillon obtenu par recueil ou acte de prélèvement et sur lequel
vont être effectuées des analyses de biologie médicales ( sang, urines, liquides de
ponctions…)
 But du contrôle de qualité

1.Conditionner la qualité du résultat final:

 intérêt diagnostic ;
 intérêt thérapeutique ;
 intérêt suivi et pronostic

2. Eviter l’endommagement des analyseurs (le bouchage)

3. Eviter un coût estimé à 25 % du budget annuel du à la non- conformité de

l’échantillon.
 Traçabilité

La traçabilité est définie comme :

«l’aptitude à retrouver l’historique, l’utilisation ou la localisation d’une entité au
moyen d’identifications enregistrés »

Elle permet de suivre la demande d'examens depuis la prescription jusqu'à la remise

des résultats.
II. Les différentes étapes du prélèvement
 1- la prescription médicale

«c’est le prescripteur qui juge l'indication des analyses et en attend des

résultats contribuant au diagnostic et à la thérapeutique».

La prescription doit comporter :

• Identité du patient : nom/prénom, age, sexe, adresse

• Identité du prescripteur
• Actes à réaliser avec contexte clinique
• Renseignements liés au patient : cliniques, physiologiques (poids,
tabagisme, gravidité, exercice physique, alcool, régime alimentaire…)
traitement en cours
• Notion d’Urgence ou non
 1- la prescription médicale

Fiche de suivi
Ordonnance

Identité du prescripteur

Identité du malade,
âge ,sexe Permet de tracer l’ensemble
des données correspondant
au prélèvements
Tous renseignements utiles
à la qualité de l’analyse
urgence, hospitalisation, intérêt du
bilan (Dc, Pc , suivi, dépistage ,
épidémio, médico-légale,
recherche ) …….
Exemple type de fiche de suivi
 2-la prise de contact, et préparation du patient

Des facteurs liés au patients influe sur la qualité du résultat obtenu et doivent être pris en considération

Age : Hormones sexuelles, PAL, ferritine, Calcium, Phosphore, bilirubine, créatinine, protéinurie, TSH

Sexe : Hormones sexuelles, GGT, Créatinine, CK, acide urique, PSA

Jeune :
12 heures → bilan lipidique, acide urique, phosphore, insuline, glucagon ,Prolactine, cortisol, PTH
8 heures → glycémie, calcémie, urée, albumine, fer sérique..
3 heures → la majorité des autres paramètres
Aliments ingérés

Tabagisme : Cortisol, ACE, Hb, Hb-CO,

Café : Glycémie, cortisol catécholamines
Alcool : Lactate, TG, GGT, Acide urique, glycémie (diminution)
Banane : Catécholamines et dérivés
Sucres : TG, phosphore (diminution)
 Médicaments pris :
Neuroleptiques → Prolactine
Anti-tuberculeux → ASAT/ALAT
Diurétiques → Na+, K+, acide urique
Corticoides → Cortisol, glycémie
Estroprogestatifs → TG, GGT, ASAT/ALAT, cortisol, prolactine
➔ Ca2+, PO4 : diminution
Moment du prélèvement :
Rythmes circadiens : ACTH, Cortisol, Fer sérique, Testostérone, TSH
Cycle menstruel : Phase folliculaire (J3 – J5) → FSH, LH, Estradiol
Phase lutéale J21 → progestérone
Ménopause : chute des stéroides sexuels et augmentation de FSH/LH

Grossesse : Diminution → Protéines, Urée, acide urique, Ca2+, ASAT/ALAT ferritine

Augmentation → PAL, Cholestérol, TG, AFP, Cortisol, Prolactine,

Poids : Insuline, cortisol, bilan lipidique, calcul de la clearance de créatinine

Position : protéinurie

Stress : Cortisol, ACTH, prolactine, Catécholamine, glycémie

Activité musculaire : CK, LDH, Lactate, K+
 Différents types de prélèvements en biochimie

Sang
Dosage de substrats (glycémie, urée, créat…etc.) et d’enzymes (ASAT, ALAT, CK…
etc.)

 Urines

 LCR et autres liquides de ponction

Biopsies tissulaires (foie, muscles +++)

 3- Modalités de prélèvement

SANG

 Le sang veineux
 Le sang capillaire
 Le sang artériel
 SANG VEINEUX

Ponction veineuse au niveau du pli du coude

«Avec respect des consignes de sécurité et d’hygiène »

Entre 7 et 9h du matin

Position du patient: allongé ou assis car volume plasmatique diminue en position debout (Δ 5 à 15 % ).

Choix du site de ponction: éviter: cicatrice, hématome fistule, œdème…

Le garrot:

-situé à ± 10 cm au-dessus du site de prélèvement

Garrot stase Fuite d’eau

vers Hemo-
séré prolongée concentration
l’interstitium

Variations: Hb +3-7%, TG 5-11 %, HDL 8%

prot totales, enz, Hte, GR et GB
Le niveau de remplissage:

- Respecter ratio sang/anticoagulant:

interférences entre l’additif et certains marqueurs :
exp: TnIc et héparine.

-Volume insuffisant :
néonatologie et pédiatrie.
Récipients (tubes) :

 Tube avec anticoagulants → Plasma (après centrifugation)

 Tube sec → sérum (après centrifugation

le n° de lot et la date de péremption sont inscrits sur chaque boîte, chaque tube et chaque aiguille (Traçabilité) .

Choix et ordre des tubes

 système sous-vide

♦ Hygiène et sécurité
- Stérile: fonctionne en circuit fermé.
- Manipulation réduite.

♦ Confort du patient
- Absence de manipulation de l’aiguille
- Prélèvement plus court ( flux sg important)

♦ Fiabilité du prélèvement:
-Contact direct du sang avec l’anticoagulant
- Le vide calibré garantit un rapport constant
sg/additif, avec un remplissage normalisé et précis .
 « Un mauvais prélèvement est pire qu’aucun
prélèvement »

 Prélèvement sur site de perfusion :

-fortement déconseillé.
-si non il faut toujours:
-Arrêter la perfusion.
-Attendre 2 min après et 15 min si héparine.
-Prélever en dessous du site actif.
-Garrot appliqué au-dessous du site de la perfusion.
-Choisir une autre veine.
-Prendre un premier tube pilote sec 3 à 5 ml.
-Redémarrer la perfusion rapidement.
-Mentionner l’origine du prélèvement.
 Hémolyse= libération intra érythrocytaire avec une coloration du sérum ou du plasma qui est parfois
invisible.
L’hémolyse invalide les résultats:

- Concentrations intra érythrocytaire des substances est plus importante que dans le sérum (interférence
biologique voir tableau)

- Coloration rougeâtre interfère dans la lecture colorimétrique (interférence analytique).

La plupart des spécimens ne seront pas analysés avec un degré élevé d’hémolyse.
constituants []
Éryth/sérum
Créat 1,60

K 25
Mg 2,7

LDH 160

Phosphatases acides 57

TGO 3

TGP 20
 Causes d’hémolyse

– Prélèvement au cathéter ;
– Application prolongée ou serrée du garrot.
– Manipulation de l’aiguille pendant le flux .
– Tps de conservation et de transport non appropriée.
– Transport des échantillons
– Absence de mélange .
– Prélèvement au niveau d’un hématome .
SANG CAPILLAIRE

 En particulier chez les enfants, chez les nouveaux nés et même chez les prématurés
 On utilise :
- Des lancettes
- Vaccinostyles à usage unique
SANG CAPILLAIRE

le prélèvement se fait à la pulpe du doigt, au lobe de l’oreille ou au talon pour les enfants
 SANG ARTERIEL
Ponction artérielle (Gaz du sang, étude de
l’équilibre acido-basique,….)

Le sang artériel présente une composition uniforme a travers tout le corps,

 site: artère radiale, brachiale, fémorale

 matériel utilisé :
-Aiguille (biseau court, paroi mince, petit diamètre)
-Anticoagulant: héparine lyophilisée (EDTA et citrate modifient le pH )

Procédure:
-conditions respiratoires du malade stables avant et pendant le prélèvement.
-Aspiration lente de l’échantillon (éviter la formation d’un vide dégazer
l’échantillon)
-Chasser les bulles d’air avant toute agitation.
-mélanger immédiatement pour éviter les caillots.
-Indiquer la T°; FIO2 et le taux d’Hg du malade
 3- Modalités de prélèvement
Urines

« Paradoxalement c’est le prélèvement le plus difficile à pratiquer»

 Recueil des urines de 24 h:

- Pour une réalisation correcte des analyses; un recueil complet et précis est fondamental.

- S’il est réalisé par le patient lui-même, une information détaillée, orale ou écrite lui sera donnée lors de
chaque prélèvement. des urines de 24h
♦ Procédure de recueil des « urines de 24 heures »

1. Vider la vessie le matin au lever.

2. Jeter ces urines et noter la date et l'heure.
3. À partir de ce moment-là, collecter les urines de chaque miction, tout au long de la
journée.
4. Faites le dernier recueil, le jour suivant, au lever, à la même heure que la veille.
5. Apporter le récipient au laboratoire le plus vite possible.

♦ Les récipients

- Des récipients gradués et propres; préparés et remis par le laboratoire

- A défaut: Bouteilles d'eau minéral vidées (non rincées par l'eau du robinet)
♦ Nécessité de récipients particuliers:

- Décalcifiés par EDTA, citrate ou HCL calciurie

- Acidifiée dérivés méthoxylés, porphyrines

- Avec conservateur (Ac Borique) Aa urinaires

 3- Modalités de prélèvement
Liquides des ponctions

1. liquide céphalo-rachidien
2. le liquide d’ascite
3. le liquide pleural
4. le liquide synovial
5. le liquide péricardique
6. le liquide gastrique
7. la bile
8. le liquide duodénale
9. le liquide amniotique

Homogénéiser ces liquides par mélange et éliminer les éléments figurés et la fibrine éventuellement
présents par centrifugation.
LCR

-Modalités

- patient en décubitus latéral.

- Condition vigoureuses d’asepsie.
- Ponction lombaire (PL) au niveau de l’espace L4-L5 ou L5-S1 (parfois : sous
occipitale, ventriculaire directe)
- Ponction transfontanellaire chez le nouveau-né.
- Recueil dans trois tubes stérile

- Centrifugation si liquide hématique

 3- Modalités de prélèvement

Biopsies tissulaires (foie, muscles +++)

 Dosage d’inclusions (glycogène, cuivre, fer) : recherche de surcharges

 Dosage d’Enzymes tissulaires : recherche de déficits
 4 -Transport des échantillons

T°c et Rapidité : Diffusion cellulaire (K+ PO4, Mg LDH), produits métabolique (Lactate),
consommation (glucose O2, pyruvate), dégradation (ACTH, PTH,insuline, peptide C), modification du
PH (gazométrie +++)

 1 heure à 2 heures pour la plupart des analyses à température ambiante

 15 min : Gazométrie, Lactate, ACTH, PTH, Ammoniac, LCR
 A l’abri de la lumière : bilirubines, porphyrines, Vitamine C
 Sur la glace : Ammoniac, Gazométrie
NB : Urgence médico-chirurgicale l’emporte sur la stabilité du paramètre (Troponine, lipase,
Ionogramme, hémostase…etc)
 5- réception et identification

 Vérifier les erreurs de transcription (étiquetage et prescription)

 Vérification de la conformité de l’échantillon (quantité, qualité, récipient…)

 Mettre un n° d’identification spécifique

 6-Prétraitement de l’échantillon

centrifugation

-Au max 1 h après le prélèvement.

- Respecter le temps de rétraction du caillot pour le sérum: 15min à tp ambiante ( postcoagulation ).

-Adapter les conditions de centrifugation aux paramètres, au méthodes de dosage et au type d’échantillon.

-Equilibrer la centrifugeuse.

La température de centrifugation:

- <30°C (activation de la coagulation par le froid et la chaleur).

- 4° à 18°C pour les paramètres dénaturés par la chaleur.

(centrifugeuse thermostatée, aérée, voir réfrigérée)
 7- Conditionnement au moment de l’analyse

-S’assurer d’avoir le bon échantillon .

-Ramener à température ambiante: 20 à 25° C (si l’échantillon est conservé au réfrigérateur).

-Homogénéiser par inversion , tout en évitant la formation de mousse.

Analyser le plus rapidement possible après réception

Si non il faut respecter les conditions spécifiques de conservation

- Protection de la lumière par une feuille de papier aluminium. (bili, vitC, la Ck et les folates).

- Boucher les flacons pour éviter l’évaporation ou contamination.

-Stocker toujours les récipients contenant du sang verticalement ; le processus de coagulation est accéléré.

Urines : se conservent moins bien que le plasma / sérum, mais, le cas échéant, l’addition d’un
conservateur est possible
III. Automatisation de la phase pré analytique
 Automatisation de la phase pré analytique

-centraliser la réception: traitement commun de tout les échantillons

-L'informatisation de l’identification: échantillons munis d'un code-barre
-Automate munis d' une unité d'entrée, une centrifugeuse, un déboucheur et une unité de sortie .

Les avantages:

-Meilleure qualité de l’échantillon

-volume de travail et productivité plus élevés (17 %).
-Coût plus bas.
 IV. Assurance qualité

« Un système d’assurance qualité permettant de garantir la qualité dans les LABM pour toutes les phases
d’analyse est indispensable; pour ce faire il existe un certain nombre de normes et de référentiels
comportant de nombreuses exigences métrologiques concernant le laboratoire de biologie médicale »

Norme ISO15189
Spécifique aux LABM et couvre la totalité de leur activité
 V. Conclusion

La fiabilité des résultats des examens biologiques (particulièrement biochimiques) dépend étroitement
du respect des conditions de la phase pré-analytique

ce de résultats vaut mieux que des résu