1.

Perkenalan

Ketotifen fumarate (KTF) ditetapkan secara kimiawi sebagai 4- (1-

methylpiperidin-4-ylidene) -4,9-dihydro-10H-benzo [4,5] cy-clohepta
[1,2-b] thiophen-10-one hidrogen (E) -butenediene. Formulanya adalah
C19H19NOS • C4H4O4, dan massa molekulnya: basa: 425,5 g mol − 1. Ini
memiliki struktur yang ditunjukkan pada Gambar 1 [3, 4].

Obat ini diterima secara luas sebagai obat antiasthmatic /

antianaphylactic dan juga meredakan gangguan alergi melalui kombinasi
beberapa tindakan. Misalnya, ketotifen adalah antagonis yang relatif
selektif dan tidak kompetitif dari reseptor histamin H1 dan merupakan
penstabil sel mast, menghambat pelepasan mediator inflamasi dari sel
mast [1, 2, 5]. Ketotifen fumarat ditentukan menggunakan
spektrofotometri [6-10],

kromatografi [11–15], dan metode elektroanalisis [16-19].

Dalam beberapa tahun terakhir, sensor membran potentiometri telah banyak

digunakan dalam analisis farmasi [20-22]. Hal ini terutama karena desain yang
sederhana, biaya rendah, selektivitas yang memadai, batas deteksi rendah,
akurasi tinggi, rentang konsentrasi yang luas, dan penerapan elektroda
selektif untuk solusi berwarna dan keruh. Titrasi potensiometri cocok untuk
penentuan jumlah obat yang relatif besar. Peralatan yang diperlukan untuk
membuat pengukuran potensial dan melakukan titrasi umumnya tidak responsif
dan pada dasarnya sederhana secara detail. Untuk alasan ini, pengukuran
potensial menemukan penerimaan luas dalam industri sebagai alat analisis,
baik di laboratorium dan dalam proses dan kontrol kualitas untuk analisis
rutin [23, 24].

GAMBAR 1: Rumus struktur ketotifen fumarat.

Makalah ini membahas persiapan elektroda selektif pasta karbon (CPE) dan
polivinil klorida (PVC), dan karakteristik kinerja dari sensor ini akan
dievaluasi sesuai dengan rekomendasi IUPAC [25]. Sensor ini akan digunakan
untuk penentuan tekno-potentio ketotifen fumarate dalam bentuk murni dan
dalam sediaan farmasi dan cairan biologisnya (urin) menggunakan metode
potensiometri langsung, kalibrasi, dan penambahan standar. Studi rinci
tentang perilaku elektro-kimia dari elektroda diberikan.
2. Bagian Eksperimental

2.1. Reagen. Semua reagen adalah kelas analitis, dan air tawar digunakan di seluruh percobaan.
Ketotifen fumarate dipasok dari Memphis Co. untuk Pharm. dan Chem. Ind., Mesir. o-
Nitrophenyloctylether (o-NPOE) dari Fluka digunakan untuk persiapan sensor. Jenis lain dari plasticizers,
yaitu, dibutylphthalate (DBP), dioctylphthalate (DOP), dioctylsebacate (DOS), dan tricresylphosphate
(TCP), dibeli dari Merck, Sigma, Merck dan Alfa-Aesar, masing-masing. Berat molekul PVC relatif tinggi
dipasok dari Aldrich. Agen pasangan ion, potassium tetraphenylborate (KTPB, Fluka), digunakan.
Tetrahydrofuran (THF) dipasok dari El-Nasr Company, Mesir.

2.2. Sampel. Sediaan farmasi (tablet Zaditen,1 mg / tablet) diberikan oleh Novartis Pharma
S.A.E., Kairo, Mesir.

2.3. Aparat. Pengukuran potensi laboratorium dilakukan menggunakan 716 DMS Titrino
Metrohm terhubung dengan 728 Metrohm stirrer. Titrino ini memiliki elektroda gabungan,
yang lebih nyaman untuk digunakan, dilengkapi dengan perak-perak klorida double-junction
referensi elec-trode (Metrohm 6.0222.100) dalam konjugasi dengan elektroda ion-selektif
elektrolit yang berbeda. Mikroanalisis untuk karbon, hidrogen, nitrogen, dan belerang
dilakukan di pusat Mikroanalisis, Universitas Kairo, menggunakan alat analisa unsur Perkin-
Elmer CHN 2400. Pengukuran pH dilakukan dengan model pH-300 Jenway 3505.

2.4. Persiapan Elektroda. Elektroda pasta karbon pra-dikupas dengan tangan mencampur
secara akurat berat (500 mg) bubuk grafit yang sangat murni dan plasticizer (0,2 mL DOP, TCP,
DBP, DOS, atau o-NPOE) menggunakan mortar agate di mana campuran pasta dikemas
menjadi pemegang Teflon yang digerakkan piston

[26]. CPE hasil fabrikasi dikondisikan dalam air suling selama 24 jam dan direndam dalam
suspensi pasangan ion yang baru disiapkan.

Untuk elektroda PVC, koktail (terdiri dari 240 mg o-NPOE, 240 mg PVC, dan 6 mL THF) diaduk
selama 5 menit dan dituangkan ke dalam cawan Petri “5 cm” diameter. Setelah 24 jam
penguapan pelarut lambat, membran induk dengan ketebalan 0,11 mm diperoleh yang
dipasang pada ujung pipa PVC yang diperhalus dengan bantuan larutan perekat
disiapkan dengan melarutkan PVC di THF. Tabung PVC tertutup dengan membran diisi dengan
0,25 mL 1 mol L − 1 KCl dan diselesaikan hingga 25 mL dengan 1,0 × 10−2 mol L − 1 KTF solusi
obat yang sedang diselidiki menggunakan Ag / AgCl sebagai elektroda referensi internal.
Elektroda yang dibuat direndam dalam larutan pasangan ion selama 24 jam.

2.5. Pengaruh Suhu pada Respon Elektroda. Respons potensial yang ditampilkan oleh elektroda
membran CPE dan PVC dipantau sebagai fungsi suhu dalam kisaran 10–40 dan 10–60◦C untuk CPE.

2.6. Pengaruh pH pada Respon Elektroda. Pengaruh pH pada nilai potensial dari dua sistem elektroda
dipelajari selama rentang pH 2–12 pada interval unit 1-pH. Setiap elektroda direndam dalam 10−2 dan
10

−4 mol L − 1 KTF solu-tions. Nilai pH dicatat, sementara aliquot larutan natrium hidroksida encer atau
asam hidroklorat ditambahkan.

2.7. Kalibrasi Elektroda. Sensor CPE dan PVC baru dikalibrasi dengan mentransfer 3 mL aliquot
10−7 ke 10−2 mol L − 1 solusi KTF ke dalam 25 mL gelas pada 25◦C diikuti dengan merendam
ISE untuk setiap KTF dalam konjugasi dengan referensi Ag / AgCl elektroda dalam larutan.
Potensi perubahan diplot terhadap logaritma konsesi KTF dari mana kurva kalibrasi dibangun.

2.8. Analisis Sampel Farmasi. Potensiometri dete-rminasi KTF dalam sampel farmasi. Volume yang
diketahui dari tablet Zaditen (1 mg / tablet) dibuat hingga 25 mL dengan air dalam labu volumetrik
dan disaring. 3 mL aliquot dari larutan encer dipindahkan ke gelas kimia 25 mL. Kandungan KTF dalam
sediaan farmasi diperkirakan melalui titrasi potensiometri dengan KTPB.

2.9. Persiapan Sampel Urine. Sampel urin diperoleh dari sukarelawan yang sehat dan dibubuhi larutan
standar KTF 4.0 × 10−7 g L − 1. Sampel urin sintetis disentrifugasi pada 2500 rpm selama 10 menit.
Kemudian, lapisan atas dipisahkan kemudian langsung dianalisis menggunakan sensor yang diusulkan.

3. Hasil dan Pembahasan

Pasangan ion KT-TPB dibentuk dalam rasio 1: 1 [KT +]: [TPB−], dan memiliki
warna putih dan dicirikan menggunakan analisis unsur dengan perhitungan% C =
82,30,% H = 6,22,% N = 2,23, dan% S = 5,10, dan menemukan% C = 79,53,% H =
7,06,% N
= 2,05, dan% S = 5,70. Temuan ini konsisten dengan data yang dipublikasikan
sebelumnya [17].

3.1. Kalibrasi Elektroda. Sensor CPE dan PVC dikalibrasi dengan merendam
elektroda yang dilumasi dengan DBP bersama dengan elektroda referensi Ag /
AgCl rangkap dua dalam larutan KTF dalam kisaran 10−2–10−7 mol L − 1. Mereka
diizinkan untuk menyeimbangkan sambil mengaduk dan merekam e.m.f. bacaan.
Sensor membran CPE dan PVC menunjukkan respon linier selama rentang
konsentrasi dari 10−7-10 −2 mol L − 1 dengan kemiringan Nernstian 52,51 ±
0,20 dan 51,51 ± 0,25 mV dekade −1 dan batas deteksi 9,81 × 10−8 dan 1,20 ×
10−7 untuk elektroda membran CPE dan PVC, masing-masing, (Gambar 2).

3.2. Pengaruh Plasticizer. Lima plasticizers, DOS, o-NPOE, DOP, TCP, dan DBP
digunakan untuk memeriksa optimalisasi elektroda dengan plasticizer. Hasil
yang diperoleh menunjukkan bahwa kinerja respon dari membran yang disiapkan
agak berbeda tergantung pada penggunaan plasticizer. Plasticizer terbaik
ditemukan menjadi o-NPOE dan DOS untuk elektroda membran CPE dan PVC.

Kinerja analitik CPE dibandingkan dengan elektroda membran PVC menggunakan o-

NPOE dan DOS, masing-masing. CPE memiliki kinerja terbaik sehubungan dengan
total potensi perubahan, potensi putus di titik akhir, serta waktu respon
dibandingkan dengan elektroda PVC.

3.3. Pengaruh Waktu Perendaman. Elektroda yang baru disiapkan harus direndam
untuk mengaktifkan permukaan pasta karbon dan lapisan membran PVC untuk
membentuk lapisan gel yang sangat tipis di mana pertukaran ion terjadi.
Proses preconditioning ini membutuhkan waktu yang berbeda tergantung pada di
usion dan equilibration pada antarmuka solusi uji elektroda; pembentukan
ekuilibrium yang cepat tentu saja merupakan kondisi untuk respons potensial
yang cepat. Dengan demikian, karakteristik kinerja dari elektroda ion-
selektif KTF diselidiki sebagai fungsi dari perendaman waktu. Untuk tujuan
ini, elektroda membran CPE dan PVC direndam dalam suspensi pasangan ion KTF-
TPB dan kurva titrasi diplot dari mana total perubahan potensial dicatat
setelah 0, 15, 30, 60, 120 menit dan 12 dan 24 jam. . Waktu perendaman
optimum ditemukan menjadi 5 dan 30 menit untuk elektroda membran CPE dan PVC,
masing-masing.

3.4. Pengaruh pH. Pengaruh pH terhadap respons dari sensor membran CPE dan
PVC diperiksa dengan merekam pembacaan potensial sel untuk larutan yang
mengandung 10−4 dan 10−2 mol L −1 KTF pada nilai pH yang berbeda (pH 2–11) .
Variasi nilai pH dilakukan dengan menambahkan volume larutan HCl dan / atau
NaOH yang sangat kecil (0,1-1 mol L − 1 masing-masing) hingga 5 mL larutan
KTF dan memplot E (mV) versus nilai pH (Gambar 3). Plot E (mV) versus pH
menunjukkan bahwa respon elektroda adalah pH independen dalam kisaran pH 3,0-
6,0 dan 2,0-7,0 untuk elektroda CPE dan PVC, masing-masing. Pada nilai pH
kurang dari 2, potensi peningkatan yang mungkin disebabkan oleh pembentukan
spesies terprotonasi, sedangkan pada nilai pH lebih tinggi dari 6 atau 7,
potensi menurun, ini mungkin karena deprotonasi obat KTF.

3,5. Selektivitas Elektroda. Koefisien selektivitas

(log KDpot, B) untuk beberapa kation anorganik dari CPE dan membran PVC
ditentukan menggunakan metode solusi terpisah (SSM) dengan persamaan Nicolsky
yang disusun kembali [27, 28]:
log KDpot,B = E1 − E2 + 1 +z1 log a, (1)
 S z2
dimana, E1 adalah potensi yang diukur dalam 1 × 10−3 mol L − 1 KTF (D), E2
potensi yang diukur dalam 1 × 10−3 mol L − 1 dari senyawa yang mengganggu
(B), z1 dan z2 adalah muatan dari KTF (D) dan spesies pengganggu (B), masing-
masing dan S adalah kemiringan plot kalibrasi elektroda. Sementara koefisien
selektivitas untuk banyak senyawa nitrogen seperti pati, gula dan glisin
diperoleh dengan metode yang cocok yang benar-benar independen dari persamaan
Nicolsky:

log KDpot,B aD − aD . (2)

= aB
Untuk menentukan koefisien selektivitas dengan metode yang cocok, aktivitas
yang dikenal (aD) dari larutan ion primer ditambahkan ke dalam larutan
referensi yang berisi aktivitas tetap (aD) dari ion primer, dan perubahan
potensial yang sesuai (E) dicatat. Selanjutnya, solusi dari specie yang
mengganggu ditambahkan ke solusi referensi sampai perubahan potensial yang
sama (E) tercapai dan aktivitas interfering (aB) dicatat. Perubahan potensial
yang dihasilkan pada latar belakang konstan dari ion primer harus sama pada
kedua kasus. Hasil yang diperoleh dirangkum dalam Tabel 1.

Pengaruh beberapa kation anorganik, gula, dan glisin pada KTF-elektroda

diselidiki. The selec-tivity coe ffi cients nilai dari CPE dan PVC membran
elektroda mencerminkan selektivitas yang sangat tinggi dari di
selidiki
250
200

150
E (mV)

100

50
0
0 2 4 6 8 10 12
−50

−100
pH
a
b

(a)

(PVC)
180
160
140
(mV)

120
100
80
E

60
40
20
0
 0 2 4 6 8 10 12
GAMBAR 3: Pengaruh pH pada (a) 10−2 dan (b) 10−4 mol L −1 KTF pada pembacaan
potensial CPE dan elektroda membran PVC.

elektroda untuk kation ketotifen (KT +). Kation anorganik tidak mengganggu
karena perbedaan dalam ukuran ion, dan akibatnya mobilitas dan permeabilitas
mereka, dibandingkan dengan KT +. Juga, semakin kecil energi hidrasi kation,
semakin besar respon mem-brane. Dalam kasus gula dan glisin, selektivitas
tinggi terutama dikaitkan dengan perbedaan dalam polaritas dan sifat
lipofilik dari molekul mereka relatif terhadap KTF [24].

3.6. Pengaruh Suhu. Untuk mempelajari pengaruh suhu, potensial elektroda 10−3
mol L − 1 KTF solusi ditentukan dalam 10, 20, 30, 40, 50, dan 60◦C dan
potensi elektroda standar (E◦elec.) (Diperoleh dari plot kalibrasi sebagai
penyadapan di pKTF = 0) sesuai dengan setiap suhu ditentukan. Untuk penentuan
koefisien isotermal (dE◦ / dT) dari elektroda, potensi elektroda standar
(E◦elec.) Pada suhu yang berbeda diplot terhadap (t - 25), di mana t adalah
suhu larutan uji (Gambar 4). Sebuah plot garis lurus diperoleh
TABLE 1: Potentiometric selectivity coefficient of CPE (DOS) and PVC (DOS) membrane electrodes.

pot
log KD ,B

Interfering ions (B) SSM Matched method

CPE PVC CPE PVC

Glucose — — 3.95 2.20

Lactose — — 3.90 4.13

Fruc tose — — 2.85 1.60

Maltose — — 3.65 0.35

Starch — — 2.50 1.50

Sucrose — — 4.00 1.10

Glycine — — 2.30 1.15

2+
Ca 1.30 1.70 — —

2+
Ni 1.70 1.20 — —

2+
Co 2.40 0.60 — —

2+
Cd 2.50 0.90 — —
+
Na 3.00 1.09 — —
TABLE 2: Critical response characteristics of CPE and PVC sensors.

Parameter CPE PVC

Linear range (mol L− ) 10− to 10− 10− to 10−

1 7 2 7 2

Slope, mV decade−
1
52.51 ± 0.20 51.51 ± 0.25

Intercept 480.98 392.98

Correlation coefficient 0.9865 0.9973

Percent recovery (%) ± SD 98.97 ± 0.53 98.62 ± 0.74

Detection limit (mol L− ) 9.81 × 10− 1.2 × 10−

1 8 7

Working pH range 3–6 2–7

Life time, day 82 35

RSD (%) 1.54 1.69

Accuracy (%) 99.27 98.85

Precision (%) 0.98 1.88

according to the following [24]:

dE◦
E◦ E◦ (25) + (t 25). (3)
= dT −

Kemiringan garis lurus yang diperoleh (E◦ = −122.07 + 2.701 (t-25))

menunjukkan koefisien isotermal elektroda (sebesar 0,00092 dan 0,00049 V / ◦C
untuk sensor CPE dan PVC, resp.) Dan mengungkap stabilitas termal yang baik
dari elektroda dalam rentang suhu yang diizinkan.

3.7. Seumur hidup. Untuk penentuan stabilitas penyimpanan, elektroda

fabrikasi diuji mingguan dalam titrasi potentio-metrik 10−2 mol L − 1 KTF
dengan menggunakan 10−2 mol L − 1 NaTPB. Elektroda pasta karbon ditemukan
lebih stabil daripada elektroda membran selektif PVC dan masa operasi panjang
(12 dan 5 minggu untuk CPE dan PVC, resp.) Seperti yang di tunjukkan pada
Tabel 2.
TABLE 3: Determination of ketotifen fumarate in pure solutions and pharmaceutical preparations using CPE and PVC sensors.

CPE PVC

Taken Standard addition

(mg) Direct method Standard addition method Direct method method

Recovery % RSD % Recovery % RSD % Recovery % RSD % Recovery % RSD %

4.255 98.93 0.74 98.54 1.77 98.50 0.80 99.02 2.25

12.77 97.97 0.97 97.89 1.54 98.07 1.46 98.56 1.35

Pure KTF

21.28 98.96 1.14 99.02 0.99 99.18 1.42 97.86 1.87

29.79 97.83 1.73 99.42 0.83 98.79 1.36 98.22 1.76

Zaditen tablet

(1 mg/tablet) 4.26 98.90 0.98 99.00 1.65 97.48 2.08 99.16 1.64

Grafik panjangn gelombang 4

3.8. Penentuan Potensiometri Ketotifen Fumarat di Murni, Persiapan Farmasi,
dan Urine. Karakteristik respon sensor CPE dan PVC diberikan pada Tabel 2.
Dalam analisis farmasi, penting untuk menguji selektivitas terhadap eksipien
dan pengisi yang ditambahkan ke sediaan farmasi. Untungnya, bahan semacam itu
kebanyakan tidak mengganggu. Ini jelas dari hasil yang diperoleh untuk
sediaan farmasi (Tabel 3) bahwa eksipien ini tidak mengganggu.

Elektroda digunakan sebagai sensor untuk penentuan konsentrasi yang berbeda

dari KTF (4,255-229,785 mg) dalam larutan murni (Gambar 5) menerapkan titra-
tions potensiometri dan metode penambahan standar, dan% pemulihan dan RSD%
tercantum dalam Tabel 3 Pemulihan% rata-rata dan% RSD menunjukkan bahwa
metode yang divalidasi dapat diadopsi untuk penentuan obat yang diteliti
dalam sediaan farmasi tanpa campur tangan dari adjuvan yang diregulasi. Hasil
yang diperoleh menerapkan sensor membran CPE dan PVC memiliki keuntungan
bahwa itu tidak memerlukan ekstraksi atau p
emisahan.
Gambar 5
Teknik tambahan langsung, kalibrasi, dan penambahan standar digunakan untuk
penentuan obat KTF dalam sampel urin berduri. Pemulihan rata-rata yang
diperoleh diberikan pada Tabel 4. Elektroda yang diusulkan karena itu dapat
diterapkan untuk penentuan KTF dalam bentuk murni, farmasi for-mulations, dan
dalam sampel urin tanpa takut gangguan

TABLE 4: Determination of KTF in spiked human urine using CPE and PVC membrane electrodes.

Statistical CPE PVC

Sample
parameters
Standard Standard
Direct Direct
Calibration graphs addition Calibration graphs addition
method method
method method

Mean
98.43 98.28 97.89 98.73 98.09 98.17
recovery (%)

N 4 4 4 4 4 4

Human urine Variance 0.847 0.748 0.657 0.454 0.607 0.439

SD 0.752 0.455 0.768 0.859 0.559 0.947

SE 0.398 0.695 0.836 0.693 0.465 0.551

RSD (%) 0.849 0.479 0.790 0.906 0.573 0.994

yang disebabkan oleh eksipien yang diharapkan hadir dalam tablet atau dalam
konstituen cairan tubuh.

4. Validasi Metode ISE yang Diusulkan

4.1. Ketepatan. Untuk penentuan ketotifen fumarat dalam larutan murni dan
sediaan farmasi, akurasi metode ISE yang diusulkan (menggunakan CPE dan
membran elektroda PVC) diselidiki. Jelas dari hasil yang dirangkum dalam
Tabel 3 bahwa metode CPE dan PVC ISE yang diusulkan adalah metode yang akurat
untuk penentuan ketotifen fumarate dalam sediaan farmasi tanpa gangguan dari
eksipien coformulated sebagaimana ditunjukkan oleh persentase nilai
pemulihan.
4.2. Linearitas. Di bawah kondisi eksperimental yang optimal, hubungan linear
ada antara potensial elektroda / mV dan logaritma konsentrasi yang sesuai
dari obat (Gambar 2). Data regresi, koefisien korelasi (r), dan parameter
statistik lainnya sebelumnya tercantum dalam Tabel 2.

4.3. Presisi. Ketepatan metode CPE dan PVC membran yang diusulkan, diukur
sebagai persentase deviasi standar relatif (RSD%), diuji dengan mengulangi
metode yang diusulkan untuk penentuan obat yang diteliti dalam sediaan
farmasi dari tiga ulangan. Nilai% RSD untuk penentuan berulang ditemukan
menjadi 1,54 dan 1,69% untuk elektroda selektif CPE dan PVC selektif, masing-
masing, (Tabel 3). Nilai RSD kurang dari 2% menunjukkan presisi yang baik.

5. Kesimpulan

Pekerjaan ini menunjukkan pembuatan elektroda CPE dan

PVC menggunakan metode persiapan yang berbeda.
Elektroda yang diusulkan menunjukkan lereng Nernstian
dalam rentang konsentrasi 10−7 hingga 10−2 mol L − 1.
Elektroda yang dibuat berhasil diterapkan untuk
penentuan potensiometri KTF dalam bentuk murni, farmasi
dan cairan biologis. Selain itu, metode yang diusulkan
memiliki beberapa keuntungan penting: elektroda
terbukti berhasil, menyediakan metode potentio-metrik
cepat, sederhana, dan biaya rendah untuk penentuan
ketotifen fumarate dalam larutan murni, dalam sediaan
farmasi, dan dalam urin. Ini memastikan akurasi yang
baik untuk uji ketotifen fumarat karena kemungkinan
untuk mengontrol aktivitas ion secara terus menerus dan
juga uji cepat tablet ketotifen.