CLONAGEM DE DNA

Este processo consiste na produção de inúmeras cópias idênticas de um mesmo

fragmento da molécula de DNA. O início do procedimento é semelhante ao do DNA
recombinante:

► Isolamento do gene humano por enzimas de restrição;

► Inserção do gene no DNA de outros organismos (chamados de vetores);

Depois de isolados, os trechos são inseridos em organismos, como vírus e bactérias

(vetores), pois, além de aceitarem esta manipulação, eles multiplicam as moléculas
recombinantes ao se reproduzirem, dando origem a um grande número de cópias
idênticas (clones).

Bactérias possuem, além do seu cromossomo circular, moléculas menores – e

também circulares – de DNA conhecidas como plasmídeos. Essas moléculas são
utilizadas como vetores, pois não contêm genes essenciais à vida das bactérias
(geralmente são genes de resistência a antibióticos).
 Técnica de clonagem de DNA com o uso de
bactérias.

Quando o vetor utilizado para clonagem é um vírus, existem algumas etapas a mais
no processo: após o isolamento do DNA viral e sua recombinação com o gene de
interesse, o meio em que DNA recombinante se encontra recebe proteínas virais e
enzimas para que o vírus se constitua. Feito isso, os vírus são introduzidos em
culturas de bactérias ou de células de outros organismos, onde ocorre grande
replicação do DNA recombinante, formando vários vírus geneticamente idênticos.

Estas técnicas têm sido cada vez mais desenvolvidas e são usadas com muitas
finalidades. Algumas delas são:

► Produção de insulina ou somatotropina (hormônio do crescimento): quando

clonamos o gene humano em bactérias (e o estimulamos para entrar em atividade),
os microrganismos passam a produzir grandes quantidades de insulina, que é
posteriormente isolada e purificada para a utilização humana;

► Produção de algumas proteínas do sangue: a albumina e o fator VIII;

► Produção de alguns tipos de ativadores das defesas orgânicas para o
tratamento do câncer, como o fator necrosante de tumores;

► Criação de vacinas sintéticas contra malária e hepatite B;

► Criação e desenvolvimento de biotecnologias para pesquisa segura de

substâncias cuja manipulação envolve alto risco biológico, como na preparação
de vacinas com vírus infecciosos, de modo a controlar o risco de vazamento
descontrolado;

► Transgenia;

► Teste de paternidade.

Estudaremos as técnicas mais importantes em seguida.

Identificação de Pessoas
A técnica de identificação de pessoas, também conhecida como DNA fingerprint, é tão
segura para identificar indivíduos quanto as impressões digitais. Devemos fazer uma
ressalva aos gêmeos monozigóticos, que possuem o mesmo patrimônio genético e
não se distinguem pela análise de DNA. No entanto, suas impressões digitais podem
ser ligeiramente diferentes, pois estas características surgem durante o
desenvolvimento embrionário e são mantidas após do nascimento.

Técnica de identificação de pessoas

ou fingerprint. Sequências gênicas conseguem determinar a paternidade de uma
criança. Na imagem, sabemos que nem
o homem 1 e nem o 2 é o respectivo pai da criança.

Essa técnica tem sido útil para identificar suspeitos de crimes e determinar
paternidade, entre outros objetivos, com 99,9% de precisão. Para realizá-la, são
utilizadas sequências de DNA não codificantes formadas por repetições de unidades
compostas por poucos nucleotídeos (sequências VNTRs: número variável de
repetições em sequência). Cada indivíduo herda dos pais um padrão específico de
repetições desses nucleotídeos.

Exemplos de sequências VNTRs.

Obtendo-se células nucleadas de um indivíduo, pode-se obter este padrão ao isolar o

DNA nuclear e cortá-lo utilizando enzimas específicas de restrição para VNTRs. Com o
DNA fragmentado, segue-se o procedimento:

Aplica-se a metodologia de eletroforese em gel (figura 17), então, as moléculas de

DNA migram no gel do polo negativo para positivo, uma vez que o DNA apresenta
carga negativa. Quando a corrente elétrica é desligada, formam-se faixas no gel que
indicam o peso das moléculas de DNA: as moléculas grandes migram menos na placa
de gel, as menores migram mais. Desta forma, separam-se as cadeias de DNA
(desnaturação) com o auxílio de uma membrana de nitrocelulose e as cadeias de DNA
serão acrescidas de sondas (trechos de DNA já conhecidos e marcados
radioativamente) que se ligam (hibridizam) aos trechos específicos de VNTRs. Então,
um filme de raios X é colocado sobre a membrana de nitrocelulose e a radioatividade
impressiona esse filme, de forma que nele se obtêm as bandas indicando os locais
onde ocorreram as hibridações (onde estão as VNTRs, unidas às sondas). Desta
forma, o padrão de VNTRs do indivíduo investigado se revela e está pronto para
comparações com o DNA de outros indivíduos.

Eletroforese em gel de agarose.

Amostras contendo fragmentos de DNA de diferentes tamanhos são depositadas em
pequenas depressões do gel, que ficam sustentadas por placas de vidro e imersas em
solução aquosa. Eletrodos ligados nas duas extremidades estabelecem um polo
negativo e outro positivo. Desta forma, os fragmentos migram no gel (os maiores se
deslocam menos e os menores, mais). Quando a corrente elétrica é desligada, os
fragmentos ficam separados por tamanho, formando faixas no gel. Cada coluna
corresponde às diferentes amostras de DNA (na figura acima, há apenas uma).
PCR
Sabemos que a análise de material genético (DNA) obtido a partir de materiais
biológicos é útil em inúmeras situações, entre elas a importância no teste de
paternidade, diagnóstico de doenças genéticas, etc. Entretanto, a “pequena”
quantidade de DNA disponível na amostra dificulta muito o campo da pesquisa e do
estudo desta área da ciência. Em 1983, o bioquímico norte-americano Kary Mullis,
estudando bactérias termofílicas, resistentes a altas temperaturas, desenvolveu a
reação em cadeia da polimerase, técnica que acelera a multiplicação de fragmentos
de DNA.

A técnica da reação em cadeia da polimerase (PCR) permite o aumento da eficiência

da análise de pouco material genético através da duplicação de trechos de moléculas
de DNA in vitro. As enzimas utilizadas na polimerização (formação de moléculas de
cadeias longas, resultante da união de inúmeros monômeros, ou seja, os
nucleotídeos) são conhecidas como polimerases. A DNA polimerase participa da
duplicação da molécula de DNA.

O processo se inicia quando a solução contendo o DNA a ser replicado é inicialmente

aquecida, o que provoca a desnaturação da molécula, cujas cadeias duplas se
separam. Em seguida, os nucleotídeos livres, adicionados à reação, emparelham-se
com as fitas de DNA recém- separadas, formando cadeias complementares. Então, em
baixas temperaturas, a enzima DNA-polimerase ou a Taq-polimerase une os
nucleotídeos, formando moléculas de fita dupla contendo uma fita antiga e uma
complementar. Assim, de cada molécula de DNA formam-se duas. É dessa forma que
surgem duas moléculas de DNA idênticas.

Terapias Gênicas
Na terapia gênica, realiza-se a transferência de material genético com o propósito de
prevenir ou curar uma enfermidade qualquer. No caso de enfermidades genéticas,
nas quais um gene está defeituoso ou ausente, a terapia gênica consiste em transferir
a versão funcional do gene para o organismo portador da doença, de modo a reparar
o defeito. Por enquanto, por apresentarem alguns efeitos indesejados no organismo
receptor, a terapia gênica só é feita em células somáticas e em doenças causadas por
apenas um gene.

O procedimento consiste em inserir in vitro ou in vivo um fragmento de DNA, um gene,

na célula/tecido em questão, com a finalidade de que esse gene inserido passe a
expressar a proteína em quantidades suficientes para o organismo receptor. O gene
pode ser clonado em laboratório e injetado intramuscularmente ou na veia do
indivíduo (técnica in vivo). Também é possível, em laboratório, usar um vírus
modificado (conhecido como vetor) que contenha o alelo de interesse para infectar
células do paciente que apresentam a deficiência. Essas células incorporam o DNA
recombinante e permanecem no indivíduo pela ação da multiplicação celular.

Vacinas Gênicas
As vacinas convencionais atuam por meio de um agente patogênico inativado ou com
capacidade de infecção atenuada, o que pode causar problemas em produção de
vacinas em grande escala, nos quais podem ocorrer lotes com o agente patogênico
ativo. A vacina gênica se constitui por um processo em que os genes causadores de
doenças que codificam proteínas responsáveis por estimular o sistema imunológico
humano são isolados, inseridos em bactérias e clonados. As técnicas mais estudadas
de terapia gênica são a partir de plasmídeos, que são pequenas moléculas circulares
de DNA encontradas no citoplasma bacteriano, mas são incapazes de produzir uma
infecção. Então, o produto da ativação dos genes específicos (as proteínas geradas
destes genes constituem os antígenos) é purificado e pode atuar como vacina que,
aplicada em humanos, estimula a produção de anticorpos específicos. Por ser
utilizado apenas o produto do gene (proteína) e não o agente patogênico, a vacina
gênica é considerada mais segura.
 Terapia gênica em
células da M.O.V. (medula óssea vermelha).

Proteoma
O genoma é o conjunto de todos os genes apresentados por uma espécie, já o
proteoma, como o próprio nome revela, é o conjunto de proteínas expressas pelo
genoma. Diferentemente de qualquer genoma, que é fixo ou muito dificilmente se
modifica, o proteoma é variável. Ou seja, a expressão proteica, a regulação pós-
traducional, a quantidade gerada, etc., varia de célula para célula dependendo da
especialização do tecido celular em questão.

As proteínas são essenciais para a vida, pois realizam inúmeras funções, como
regulação, catálise, sustentação, transporte, movimentação, defesa, entre outras. Em
inúmeras doenças, como os vários tipos de cânceres, os pesquisadores procuram
detectar os chamados biomarcadores, que são proteínas específicas que indicam o
estado fisiológico em que a célula afetada se encontra e também as alterações
sofridas durante o processo neoplásico.
Clonagem de Organismos Multicelulares
Existem três técnicas para se obter um clone:

► Reprodução vegetativa (natural): plantas ou gêmeos monozigóticos – podem ser

estimulados em laboratório;

► A partir de células somáticas: a ovelha Dolly, por exemplo. Uma célula receptora
(ovócito) de uma ovelha da espécie A com material genético retirado recebe uma
célula somática atenuada de uma ovelha B; elas se fundem. Há um estímulo para
desencadear desenvolvimento embrionário – descarga elétrica. O zigoto é implantado
em uma “mãe de aluguel”. 277 embriões morreram até que Dolly nascesse. Ela sofreu
envelhecimento precoce e artrite e morreu com apenas 7 anos de idade. O maior feito
dos cientistas foi fazer com que uma célula adulta se tornasse totipotente (célula-
tronco) de novo. As células-tronco (ou totipotentes) possuem a capacidade de se
diferenciarem em diversos tipos de células, em um processo antes considerado
irreversível. Os animais utilizados apresentavam características fenotípicas bem
diferentes para os pesquisadores perceberem com clareza o andamento do evento de
clonagem.

► A partir de células embrionárias: é o caso da bezerra Vitória, primeiro animal

clonado no Brasil. Na experiência brasileira, houve transferência do núcleo de uma
célula de embrião de cinco dias, da espécie Simental, para um ovócito enucleado
tirado de uma vaca de raça diferente. O embrião foi implantado em uma “vaca de
aluguel” de espécie diferente. O filhote é a vaquinha Vitória, da Simental. Os animais
utilizados eram bem diferentes fenotipicamente entre si.
 Como nasceu Dolly.

► DNA mitocondrial (DNAm): A organela mitocôndria é herdada da mãe. O pai

contribui com o material genético para a formação do zigoto. O DNAm pode conter
algumas doenças (como a atrofia óptica de Leber, um tipo de cegueira) e influenciar
em algumas características específicas do organismo. Dessa forma, o processo de
clonagem pode não ser 100% fidedigno, ou seja, totalmente idêntico ao organismo
que se quer clonar: quando é estimulada a fusão, em laboratório, de um ovócito
desprovido de material nuclear e de um núcleo somático, o clone será imperfeito, pois
conterá material genético das mitocôndrias do óvulo. Da mesma maneira, se a fusão
ocorrer entre a célula 2n atenuada e o ovócito desprovido de núcleo, o clone terá
mitocôndrias tanto do ovócito quanto da célula que se fundiu a ele.

Transgênicos
São aqueles organismos que recebem genes de outras espécies. A transgenia permite
a obtenção de indivíduos com características vantajosas e que produzam substâncias
de interesse ao ser humano.

Existem diferentes técnicas de inserção de genes, como as seguintes:

► Transformação pela bactéria Agrobacterium tumefaciens: ocorre através da
introdução de plasmídeos no interior de células de plantas, um vetor natural. Método
eficiente para grande parte de dicotiledôneas e até mesmo para alguns fungos;

► Biobalística: ocorre com microprojéteis de ouro ou tungstênio, cobertos com o

material de interesse, acelerados a velocidades superiores a 1.500 km/h que são
introduzidos nas células. Método universal (células vegetais, animais e procarióticas);

► Eletroporação de protoplastos: método para inserção de macromoléculas em

células vegetais. Os protoplastos (células vegetais desprovidas de parede celular) são
mantidos em seleção junto com plasmídeos que contêm os genes de interesse. A
entrada dos genes no protoplasto ocorre por eletroporação, através da descarga de
alta voltagem que promove abertura temporária de poros na membrana plasmática.
Método preferencial para monocotiledôneas.

Transformação pela
bactéria Agrobacterium tumefaciens.
CLONAGEM DE DNA
Este processo consiste na produção de inúmeras cópias idênticas de um mesmo
fragmento da molécula de DNA. O início do procedimento é semelhante ao do DNA
recombinante:

► Isolamento do gene humano por enzimas de restrição;

► Inserção do gene no DNA de outros organismos (chamados de vetores);

Depois de isolados, os trechos são inseridos em organismos, como vírus e bactérias

(vetores), pois, além de aceitarem esta manipulação, eles multiplicam as moléculas
recombinantes ao se reproduzirem, dando origem a um grande número de cópias
idênticas (clones).

Bactérias possuem, além do seu cromossomo circular, moléculas menores – e

também circulares – de DNA conhecidas como plasmídeos. Essas moléculas são
utilizadas como vetores, pois não contêm genes essenciais à vida das bactérias
(geralmente são genes de resistência a antibióticos).
 Técnica de clonagem de DNA com o uso de
bactérias.

Quando o vetor utilizado para clonagem é um vírus, existem algumas etapas a mais
no processo: após o isolamento do DNA viral e sua recombinação com o gene de
interesse, o meio em que DNA recombinante se encontra recebe proteínas virais e
enzimas para que o vírus se constitua. Feito isso, os vírus são introduzidos em
culturas de bactérias ou de células de outros organismos, onde ocorre grande
replicação do DNA recombinante, formando vários vírus geneticamente idênticos.

Estas técnicas têm sido cada vez mais desenvolvidas e são usadas com muitas
finalidades. Algumas delas são:

► Produção de insulina ou somatotropina (hormônio do crescimento): quando

clonamos o gene humano em bactérias (e o estimulamos para entrar em atividade),
os microrganismos passam a produzir grandes quantidades de insulina, que é
posteriormente isolada e purificada para a utilização humana;

► Produção de algumas proteínas do sangue: a albumina e o fator VIII;

► Produção de alguns tipos de ativadores das defesas orgânicas para o
tratamento do câncer, como o fator necrosante de tumores;

► Criação de vacinas sintéticas contra malária e hepatite B;

► Criação e desenvolvimento de biotecnologias para pesquisa segura de

substâncias cuja manipulação envolve alto risco biológico, como na preparação
de vacinas com vírus infecciosos, de modo a controlar o risco de vazamento
descontrolado;

► Transgenia;

► Teste de paternidade.

Estudaremos as técnicas mais importantes em seguida.

Identificação de Pessoas
A técnica de identificação de pessoas, também conhecida como DNA fingerprint, é tão
segura para identificar indivíduos quanto as impressões digitais. Devemos fazer uma
ressalva aos gêmeos monozigóticos, que possuem o mesmo patrimônio genético e
não se distinguem pela análise de DNA. No entanto, suas impressões digitais podem
ser ligeiramente diferentes, pois estas características surgem durante o
desenvolvimento embrionário e são mantidas após do nascimento.

Técnica de identificação de pessoas

ou fingerprint. Sequências gênicas conseguem determinar a paternidade de uma
criança. Na imagem, sabemos que nem
o homem 1 e nem o 2 é o respectivo pai da criança.

Essa técnica tem sido útil para identificar suspeitos de crimes e determinar
paternidade, entre outros objetivos, com 99,9% de precisão. Para realizá-la, são
utilizadas sequências de DNA não codificantes formadas por repetições de unidades
compostas por poucos nucleotídeos (sequências VNTRs: número variável de
repetições em sequência). Cada indivíduo herda dos pais um padrão específico de
repetições desses nucleotídeos.

Exemplos de sequências VNTRs.

Obtendo-se células nucleadas de um indivíduo, pode-se obter este padrão ao isolar o

DNA nuclear e cortá-lo utilizando enzimas específicas de restrição para VNTRs. Com o
DNA fragmentado, segue-se o procedimento:

Aplica-se a metodologia de eletroforese em gel (figura 17), então, as moléculas de

DNA migram no gel do polo negativo para positivo, uma vez que o DNA apresenta
carga negativa. Quando a corrente elétrica é desligada, formam-se faixas no gel que
indicam o peso das moléculas de DNA: as moléculas grandes migram menos na placa
de gel, as menores migram mais. Desta forma, separam-se as cadeias de DNA
(desnaturação) com o auxílio de uma membrana de nitrocelulose e as cadeias de DNA
serão acrescidas de sondas (trechos de DNA já conhecidos e marcados
radioativamente) que se ligam (hibridizam) aos trechos específicos de VNTRs. Então,
um filme de raios X é colocado sobre a membrana de nitrocelulose e a radioatividade
impressiona esse filme, de forma que nele se obtêm as bandas indicando os locais
onde ocorreram as hibridações (onde estão as VNTRs, unidas às sondas). Desta
forma, o padrão de VNTRs do indivíduo investigado se revela e está pronto para
comparações com o DNA de outros indivíduos.

Eletroforese em gel de agarose.

Amostras contendo fragmentos de DNA de diferentes tamanhos são depositadas em
pequenas depressões do gel, que ficam sustentadas por placas de vidro e imersas em
solução aquosa. Eletrodos ligados nas duas extremidades estabelecem um polo
negativo e outro positivo. Desta forma, os fragmentos migram no gel (os maiores se
deslocam menos e os menores, mais). Quando a corrente elétrica é desligada, os
fragmentos ficam separados por tamanho, formando faixas no gel. Cada coluna
corresponde às diferentes amostras de DNA (na figura acima, há apenas uma).
PCR
Sabemos que a análise de material genético (DNA) obtido a partir de materiais
biológicos é útil em inúmeras situações, entre elas a importância no teste de
paternidade, diagnóstico de doenças genéticas, etc. Entretanto, a “pequena”
quantidade de DNA disponível na amostra dificulta muito o campo da pesquisa e do
estudo desta área da ciência. Em 1983, o bioquímico norte-americano Kary Mullis,
estudando bactérias termofílicas, resistentes a altas temperaturas, desenvolveu a
reação em cadeia da polimerase, técnica que acelera a multiplicação de fragmentos
de DNA.

A técnica da reação em cadeia da polimerase (PCR) permite o aumento da eficiência

da análise de pouco material genético através da duplicação de trechos de moléculas
de DNA in vitro. As enzimas utilizadas na polimerização (formação de moléculas de
cadeias longas, resultante da união de inúmeros monômeros, ou seja, os
nucleotídeos) são conhecidas como polimerases. A DNA polimerase participa da
duplicação da molécula de DNA.

O processo se inicia quando a solução contendo o DNA a ser replicado é inicialmente

aquecida, o que provoca a desnaturação da molécula, cujas cadeias duplas se
separam. Em seguida, os nucleotídeos livres, adicionados à reação, emparelham-se
com as fitas de DNA recém- separadas, formando cadeias complementares. Então, em
baixas temperaturas, a enzima DNA-polimerase ou a Taq-polimerase une os
nucleotídeos, formando moléculas de fita dupla contendo uma fita antiga e uma
complementar. Assim, de cada molécula de DNA formam-se duas. É dessa forma que
surgem duas moléculas de DNA idênticas.

Terapias Gênicas
Na terapia gênica, realiza-se a transferência de material genético com o propósito de
prevenir ou curar uma enfermidade qualquer. No caso de enfermidades genéticas,
nas quais um gene está defeituoso ou ausente, a terapia gênica consiste em transferir
a versão funcional do gene para o organismo portador da doença, de modo a reparar
o defeito. Por enquanto, por apresentarem alguns efeitos indesejados no organismo
receptor, a terapia gênica só é feita em células somáticas e em doenças causadas por
apenas um gene.

O procedimento consiste em inserir in vitro ou in vivo um fragmento de DNA, um gene,

na célula/tecido em questão, com a finalidade de que esse gene inserido passe a
expressar a proteína em quantidades suficientes para o organismo receptor. O gene
pode ser clonado em laboratório e injetado intramuscularmente ou na veia do
indivíduo (técnica in vivo). Também é possível, em laboratório, usar um vírus
modificado (conhecido como vetor) que contenha o alelo de interesse para infectar
células do paciente que apresentam a deficiência. Essas células incorporam o DNA
recombinante e permanecem no indivíduo pela ação da multiplicação celular.

Vacinas Gênicas
As vacinas convencionais atuam por meio de um agente patogênico inativado ou com
capacidade de infecção atenuada, o que pode causar problemas em produção de
vacinas em grande escala, nos quais podem ocorrer lotes com o agente patogênico
ativo. A vacina gênica se constitui por um processo em que os genes causadores de
doenças que codificam proteínas responsáveis por estimular o sistema imunológico
humano são isolados, inseridos em bactérias e clonados. As técnicas mais estudadas
de terapia gênica são a partir de plasmídeos, que são pequenas moléculas circulares
de DNA encontradas no citoplasma bacteriano, mas são incapazes de produzir uma
infecção. Então, o produto da ativação dos genes específicos (as proteínas geradas
destes genes constituem os antígenos) é purificado e pode atuar como vacina que,
aplicada em humanos, estimula a produção de anticorpos específicos. Por ser
utilizado apenas o produto do gene (proteína) e não o agente patogênico, a vacina
gênica é considerada mais segura.
 Terapia gênica em
células da M.O.V. (medula óssea vermelha).

Proteoma
O genoma é o conjunto de todos os genes apresentados por uma espécie, já o
proteoma, como o próprio nome revela, é o conjunto de proteínas expressas pelo
genoma. Diferentemente de qualquer genoma, que é fixo ou muito dificilmente se
modifica, o proteoma é variável. Ou seja, a expressão proteica, a regulação pós-
traducional, a quantidade gerada, etc., varia de célula para célula dependendo da
especialização do tecido celular em questão.

As proteínas são essenciais para a vida, pois realizam inúmeras funções, como
regulação, catálise, sustentação, transporte, movimentação, defesa, entre outras. Em
inúmeras doenças, como os vários tipos de cânceres, os pesquisadores procuram
detectar os chamados biomarcadores, que são proteínas específicas que indicam o
estado fisiológico em que a célula afetada se encontra e também as alterações
sofridas durante o processo neoplásico.
Clonagem de Organismos Multicelulares
Existem três técnicas para se obter um clone:

► Reprodução vegetativa (natural): plantas ou gêmeos monozigóticos – podem ser

estimulados em laboratório;

► A partir de células somáticas: a ovelha Dolly, por exemplo. Uma célula receptora
(ovócito) de uma ovelha da espécie A com material genético retirado recebe uma
célula somática atenuada de uma ovelha B; elas se fundem. Há um estímulo para
desencadear desenvolvimento embrionário – descarga elétrica. O zigoto é implantado
em uma “mãe de aluguel”. 277 embriões morreram até que Dolly nascesse. Ela sofreu
envelhecimento precoce e artrite e morreu com apenas 7 anos de idade. O maior feito
dos cientistas foi fazer com que uma célula adulta se tornasse totipotente (célula-
tronco) de novo. As células-tronco (ou totipotentes) possuem a capacidade de se
diferenciarem em diversos tipos de células, em um processo antes considerado
irreversível. Os animais utilizados apresentavam características fenotípicas bem
diferentes para os pesquisadores perceberem com clareza o andamento do evento de
clonagem.

► A partir de células embrionárias: é o caso da bezerra Vitória, primeiro animal

clonado no Brasil. Na experiência brasileira, houve transferência do núcleo de uma
célula de embrião de cinco dias, da espécie Simental, para um ovócito enucleado
tirado de uma vaca de raça diferente. O embrião foi implantado em uma “vaca de
aluguel” de espécie diferente. O filhote é a vaquinha Vitória, da Simental. Os animais
utilizados eram bem diferentes fenotipicamente entre si.
 Como nasceu Dolly.

► DNA mitocondrial (DNAm): A organela mitocôndria é herdada da mãe. O pai

contribui com o material genético para a formação do zigoto. O DNAm pode conter
algumas doenças (como a atrofia óptica de Leber, um tipo de cegueira) e influenciar
em algumas características específicas do organismo. Dessa forma, o processo de
clonagem pode não ser 100% fidedigno, ou seja, totalmente idêntico ao organismo
que se quer clonar: quando é estimulada a fusão, em laboratório, de um ovócito
desprovido de material nuclear e de um núcleo somático, o clone será imperfeito, pois
conterá material genético das mitocôndrias do óvulo. Da mesma maneira, se a fusão
ocorrer entre a célula 2n atenuada e o ovócito desprovido de núcleo, o clone terá
mitocôndrias tanto do ovócito quanto da célula que se fundiu a ele.

Transgênicos
São aqueles organismos que recebem genes de outras espécies. A transgenia permite
a obtenção de indivíduos com características vantajosas e que produzam substâncias
de interesse ao ser humano.

Existem diferentes técnicas de inserção de genes, como as seguintes:

► Transformação pela bactéria Agrobacterium tumefaciens: ocorre através da
introdução de plasmídeos no interior de células de plantas, um vetor natural. Método
eficiente para grande parte de dicotiledôneas e até mesmo para alguns fungos;

► Biobalística: ocorre com microprojéteis de ouro ou tungstênio, cobertos com o

material de interesse, acelerados a velocidades superiores a 1.500 km/h que são
introduzidos nas células. Método universal (células vegetais, animais e procarióticas);

► Eletroporação de protoplastos: método para inserção de macromoléculas em

células vegetais. Os protoplastos (células vegetais desprovidas de parede celular) são
mantidos em seleção junto com plasmídeos que contêm os genes de interesse. A
entrada dos genes no protoplasto ocorre por eletroporação, através da descarga de
alta voltagem que promove abertura temporária de poros na membrana plasmática.
Método preferencial para monocotiledôneas.

Transformação pela
bactéria Agrobacterium tumefaciens.