INSTITUTO SUPERIOR POLITĖCNICO DE MANICA

DIVISÃO DA AGRICULTURA
CURSO DE LICENCIATURA EM TECNOLOGIA DE PROCESSAMENTO DE
ALIMENTO
MODULO DE ANALISE MICROBIOLOGICA DE ALIMENTOS
2º ANO
TEMA: DETENÇÃO E ENUMERAÇÃO DE MICRO-ORGANISMOS EM AMOSTRAS
ALIMENTARES

Discentes:
Faera Raice Fole
Nelson Elias
Vasco Zano
Kuziwa Kalembo

Docente

Matsinho
2024
Índice
1. Introdução..................................................................................................................3

1.1. Objetivos:...............................................................................................................3

2. REVISÃO DE LITERATURA..................................................................................4

2.1. Princípios gerais..................................................................................................4

3. METODOLOGIAS PARA IDENTIFICAÇÃO DE MICROORGANISMOS..........5

3.1. Métodos bioquímicos..........................................................................................6

3.2. Métodos automatizados......................................................................................6

3.3. Técnicas de espectrometria de massas................................................................6

3.4. Técnicas moleculares..........................................................................................6

3.5. Métodos de análise quantitativos........................................................................7

 Número Mais Provável (NMP)..............................................................................7

3.6. Contagem de Unidades Formadoras de Colônias (UFC)....................................8

3.7. Plaqueamento em Superfície (Spread Plate)......................................................8

4. LEITURA DOS RESULTADOS DO MÉTODO DE CONTAGEM EM PLACAS 9

4.1. Métodos de análise qualitativos..........................................................................9

4.2. Enriquecimento...................................................................................................9

4.3. Confirmação.........................................................................................................10

5. MICRORGANISMOS INDICADORES DE CONTAMINAÇÃO DO ALIMENTO

10

5.1. MESÓFILOS....................................................................................................10

5.2. PSICROTRÓFICOS.........................................................................................11

5.3. TERMÓFILOS.................................................................................................12

5.4. BOLORES E LEVEDURAS............................................................................12

 1. Introdução
A detecção e identificação de micro-organismos em qualquer ambiente é essencial para
controle de qualidade, controle de processos de fabricação e manipulação, garantia da
segurança em alimentos e qualidade microbiológica em ambientes hospitalares. A
identificação de micro-organismos também é essencial para tomada de decisão de ações
corretivas em casos de contaminações, ou na validação da higienização em que se deve
ter um ambiente controlado, como um hospital com alas de tratamento intensivo, onde a
condição dos pacientes é delicada e eles não podem estar expostos a micro-organismos
patogênicos, ou que possam levar a uma piora do quadro da saúde.
Os micro-organismos são os seres vivos que estão presentes nos lugares mais comuns,
como no ar, na água, no solo, no corpo humano, nos alimentos, nos animais, e até nos
mais improváveis, como no vácuo, por exemplo. Alguns são micro-organismos
benéficos aos humanos, como aqueles utilizados para fabricação de alimentos (os
fermentadores), outros podem ser utilizados como alimentos funcionais, ou como
probióticos.

Os classificados como micro-organismos deteriorantes, diminuem o rendimento do

processo de fabricação, produzem substratos indesejados, competem com micro-
organismos benéficos pela fonte de alimento. Além disso, alguns podem formar
biofilme, que criam condições para crescimento de micro-organismos patogênicos.
Os micro-organismos patogênicos são os responsáveis pelas doenças transmitidas por
alimentos (DTAs) e pelas IRAS em ambientes hospitalares. Alguns deles, por exemplo,
apresentam grandes danos à saúde do consumidor final e não podem ser identificados
nem em pequenas quantidades em alimentos Apenas uma pequena fração dos micro-
organismos na natureza, entre 0.1 a 1%, dependendo do habitat, são cultivados por
intermédio do emprego de métodos microbiológicos convencionais (Amann et. al,
1995).

1.1. Objetivos:
1.2. Objetivo geral – Identificar os métodos de enumeração e identificação
de micro-organismos.
1.3. Objetivos específicos:
 Avaliar o desempenho dos métodos de identificação quanto ao rigor de
aplicação;
  Entender a necessidade de aplicação de cada método e nível de aplicação
de cada um.

2. REVISÃO DE LITERATURA
2.1. Princípios gerais

A microbiologia convencional permite detectar células viáveis e cultiváveis, embora

uma recuperação de células injuriadas possa se fazer necessária para que seja possível
sua detecção pelos métodos de cultivo. Os microrganismos podem ser detectados ou
enumerados por meio de ensaios qualitativos e ensaios quantitativos, respectivamente.
Cada ensaio segue procedimentos diferenciados, que dependem do microrganismo alvo
(ou grupo de microrganismos), mas a maioria deles utiliza as mesmas técnicas culturais
básicas de microbiologia.
Quando a intenção for quantificar o agente ou grupo, a primeira etapa é realizar a
Diluição Decimal e Seriada da amostra (10 -1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5, 10-6..) cujo princípio se
baseia em reduzir a carga de bactérias/fungos presente no alimento em dez, cem, mil,
dez mil, cem mil, milhão ... de vezes. Assim, um alimento que apresente 100.000
bactérias por ml (ou g) terá a sua população reduzida em 10x a cada diluição: de
100.000 cai para 10.000, e depois 1.000 e depois, depois 100, depois 10, depois 1 e, se a
diluição continuar, a carga vai para 0,1, depois 0,01 bactérias por ml (ou g) do alimento.

As semeaduras podem ser feitas em meios de cultura líquidos, semi-sólidos ou sólidos.

Quando a intenção da análise for avaliar a presença/ausência (num determinado
volume/massa de amostra), uma alíquota da amostra deverá ser colocada em caldo de
enriquecimento para dar a oportunidade ao microrganismo-alvo de se recuperar, se
estiver injuriado, e de aumentar em número, aumentando as chances de ser detectado
naquele volume/massa de alimento analisado.

O estado VNC, também conhecido como estado de dormência celular, pode ser definido
como um estado fisiológico em que os micro-organismos não são capazes de crescer em
meios de cultura, mas apresentam características de células vivas, inclusive virulência e
patogenicidade. Fatores químicos e ambientais têm sido relatados como indutores de um
estado VNC, incluindo a falta de nutrientes, temperaturas extremas, concentrações
osmóticas e oxigênio. Esse estado fisiológico tem sido descrito para algumas bactérias e
fungos e deve ser considerado pelo microbiologista.
Células injuriadas significam células que foram reversivelmente danificadas após, por
exemplo, passarem por um tratamento de conservação do alimento. Esses
microrganismos injuriados sobreviveram a um stress, porém algumas vias de biossíntese
foram danificadas. A pesar dos microrganismos conseguirem se multiplicar no alimento
eles demoram mais (aumento da fase Lag). Portanto, é preciso criar condições
favoráveis (pH, Aw e Tº de incubação) para que eles tenham capacidade de reparar o
dano e, assim, se multiplicar no mesmo ritmo que as células normais.

A Análise Microbiológica dos Alimentos auxilia a indústria na avaliação da eficácia da

gestão de higiene e qualidade do sistema de produção-armazenamento-distribuição do
alimento, contribuindo com os sistemas de garantia da qualidade microbiológica e da
inocuidade do alimento - food hygiene e food safety. Isso pode se dar em três frentes:

 Análises para verificar a eficácia dos controles executados pelos GMP e

HACCP, numa determinada etapa da fabricação o alimento, garantido o
atendimento aos critérios microbiológicos estabelecidos pela legislação ou aos
padrões estabelecidos pelo controle de qualidade;
 Estudos para avaliar a vida útil (shelf-life) do alimento: a análise temporal
alimento (de um microrganismo ou grupo de microrganismo que melhor indique
sua deterioração), sob diferentes condições de armazenamento;
 Estudos para avaliar o risco do alimento vir a causar danos à saúde do
consumidor (risco de um patógeno estar presente no alimento em níveis acima
do aceitável, no momento do consumo): obtido por estudos microbiológicos
sobre a cinética de sobrevivência/morte/multiplicação do patógeno naquele
alimento – e assim subsidiar a empresa nas medidas para mitigação do risco.

A análise microbiológica dos alimentos também é fundamental para garantir justas

práticas de comércio e preservar a saúde do consumidor e, para tanto os Órgãos Oficiais
de Fiscalização analisam o produto para verificar o atendimento aos critérios legais
microbiológicos, para tomada de decisão de aceitação ou não do alimento para
consumo.

Nos casos de investigações de surtos de Doenças Transmitidas por Alimentos (DTA) os

investigadores têm como objetivo identificar o agente etiológico, o alimento envolvido,
a carga do contaminante no alimento, o local de ocorrência, as falhas que tenham
contribuído com a ocorrência do surto, entre outros.
 3. METODOLOGIAS PARA IDENTIFICAÇÃO DE MICROORGANISMOS
Cultivo microbiológico -Esta metodologia depende da reprodução de condições para
crescimento ideal do micro-organismo (meios seletivos e diferentes condições de
crescimento). A análise é fenotípica e a detecção é apenas de organismos cultiváveis,
que representa apenas 1% do total de espécies da amostra. Os resultados desta
metodologia são os mais demorados.

3.1. Métodos bioquímicos

A identificação de micro-organismos por métodos bioquímicos consistem em kit
comerciais, que possuem provas bioquímicas, que identificam diferentes grupos de
micro-organismos. Portanto, é necessário o prévio conhecimento de qual grupo deseja
identificar. Para esta análise é feita a cultura, a suspensão bacteriana e a inoculação. Na
maioria dos kits, os resultados são interpretados de maneira visual, outros são plotados
em um software e a leitura é automatizada.

3.2. Métodos automatizados

Para este método são necessárias a cultura bacteriana e a prévia seleção do grupo que
deseja identificar, através da coloração de Gram, por exemplo. Todos os estágios de
identificação de leitura de resultados são automatizados, acelerando o processo de
análise microbiológica clássica.

3.3. Técnicas de espectrometria de massas

Método Maldi-tof – Este método permite um diagnóstico muito mais rápido, podendo
levar até 15 minutos após obter um material enriquecido. A amostra da cultura é
colocada em uma placa e bombardeada com um laser que a evapora. Cada micro-
organismo tem um espectro característico que é analisado por um software e faz a
leitura dos resultados. À medida que o uso dessa técnica aumenta, os bancos de dados
ficam mais completos e a identificação, melhor.

3.4. Técnicas moleculares

As técnicas moleculares para identificação de micro-organismos são baseadas em
análises genotípicas de moléculas como DNA e RNA, sem necessidade de os micro-
organismos estarem vivos e oferece uma “imagem” de toda a comunidade microbiana
da amostra. A detecção é feita mesmo com um número baixo de micro-organismos e os
resultados são mais rápidos e precisos que nas demais técnicas. Além das muitas
aplicações que este método engloba, como evolução e genômica comparativa, forense,
epidemiologia, diagnósticos médicos e terapêuticos.

3.5. Métodos de análise quantitativos

São métodos que determinam a quantidade do(s) microrganismo(s) alvo na amostra,
geralmente por unidade de massa ou volume.

 Número Mais Provável (NMP)

Permite determinar o Número Mais Provável (NMP) do (s) microrganismo (s) alvo na
amostra, por meio da inoculação de alíquotas dessa amostra em uma série de tubos,
contendo um meio de cultura líquido adequado ao seu crescimento. A determinação do
número mais provável de microrganismos é baseada no princípio de que subdividindo a
amostra em alíquotas, algumas alíquotas vão conter microrganismos e outras não,
dependendo da quantidade de microrganismos na amostra.

Após a incubação, a partir o número de alíquotas com e sem microrganismos é possível

estimar, por cálculo de probabilidade, a densidade original dos microrganismos na
amostra. O valor pode ser obtido usando fórmulas, mas para a maioria das combinações
de tubos positivos e negativos que ocorrem com maior frequência, os valores já foram
calculados e tabulados em tabelas de NMP, expressando o resultado como NMP/g ou
ml da amostra na dependência da amostra ser sólida (g) ou líquida (ml).

A aplicação desta teoria da probabilidade pressupõe que os microrganismos estejam

distribuídos ao acaso e de forma homogênea por toda a amostra. Para obter amostras
homogeneizadas os tubos devem ser agitados cuidadosamente, no caso de amostras
líquidas. Já no caso das amostras sólidas, este resultado só é conseguido no preparo e
homogeneização da primeira diluição, tomando-se as alíquotas a partir dessa diluição.

São necessárias pelo menos 3 diluições (0,1, 0,01, 0,001 ou 10 -1, 10-2, 10-3 ) da amostra
com 3 tubos de diluição (denominado triplicata). Apesar dos ensaios geralmente serem
realizados em triplicata é possível ainda inocular séries de 5 ou 10 tubos por diluição.
Quanto maior for o número de tubos por diluição, maior será a precisão da contagem.

NMP: Para quê serve? Enumerar diferentes microrganismos ou grupo de

microrganismos presentes em uma amostra. Os microrganismos comumente
enumerados por este método são os Coliformes Totais (30º), Coliformes Fecais/Termo
tolerantes (45º) e E. coli presentes em produtos de origem animal. Outra aplicação da
NMP: Adaptação de métodos qualitativos para quantitativos, como a contagem de
Salmonella, Listeria monocytogenes e outros microrganismos específicos que são
tradicionalmente analisados por meio de técnicas qualitativas (presença/ausência).

3.6. Contagem de Unidades Formadoras de Colônias (UFC)

O princípio envolvido na contagem é o de que cada célula microbiana irá formar uma
colônia isolada e visível, quando fixadas em um meio de cultura sólido adequado. São
menos sensível do que a técnica do NMP, mas permite isolar colônias quando outros
testes são necessários. Além disso, usa menos material, ocupa menos espaço.

 Técnicas de inoculação (plaqueamento):

Plaqueamento em Profundidade (Pour Plate)

No procedimento de plaqueamento em profundidade adiciona-se o meio de cultura

fundido após a inoculação da alíquota da amostra diluída na Placa de Petri.
Limitações do procedimento: Obrigatoriedade da fusão do meio de cultura antes do uso
(expõe os microrganismos ao calor do meio fundido, o que pode matá-lo), limite de
detecção de 10UFC/g em produtos sólidos (adaptações do procedimento podem ser
feitas para detecção de 1UFC/g) e 1UFC/ml para produtos líquidos. São utilizados mais
comumente para ensaios de Contagem total de aeróbios mesófilos, contagem de
enterobactérias, clostrídios sulfito redutores, contagem de enterococos e de bactérias
lácticas.

3.7. Plaqueamento em Superfície (Spread Plate)

No procedimento de plaqueamento em superfície inocula-se a amostra e/ou suas
diluições diretamente na SUPERFÍCIE do meio sólido, JÁ distribuído e solidificado nas
placas.
Para quê são utilizados mais comumente? Ensaios de contagem total de aeróbios
psicrotróficos, mesófilos, contagem de bolores e levedura, de Staphylococcus aureus e
de Bacillus cereus.

Vantagens: Não expõe o microrganismo ao calor do meio fundido, permite a

visualização de características morfológicas e diferenciais de colônias, facilita a
transferência de colônias, permite a utilização de meios que não podem ser fundidos
depois de prontos e não exige que meio sejam translúcidos.

Desvantagens: O volume inoculado é limitado à capacidade de absorção de líquido pelo

meio de cultura, que não permite a inoculação de mais do que 0,5ml por placa. O
procedimento padrão é a inoculação de 0,1ml ou 1ml/placa de cada diluição, com limite
de detecção de 100 UFC/g para produtos sólidos ou 10UFC/ml para produtos líquidos.

4. LEITURA DOS RESULTADOS DO MÉTODO DE CONTAGEM EM

PLACAS
Como as células microbianas muitas vezes ocorrem em agrupamentos (pares, tétrades,
cachos, cadeias etc.), não se pode estabelecer uma relação DIRETA entre o número de
colônias e o número de células microbianas presente no alimento. Essa correlação é
feita entre o número de colônias e o número de “Unidades Formadoras de Colônias”
(UFC), que podem ser tanto células individuais quanto agrupamentos característicos de
certos microrganismos. O resultado é expresso em UFC/ g ou ml.

4.1. Métodos de análise qualitativos

Verificam a presença ou ausência do (s) microrganismo (s) alvo em uma dada
quantidade da amostra, sem quantificar, com base em suas propriedades físicas,
químicas ou biológicas. Todos os ensaios utilizam as mesmas técnicas microbiológicas
básicas, que são o enriquecimento em um ou mais caldos específicos e o posterior
isolamento em meios sólidos. Para quê são aplicados? Salmonela, Listeria
monocytogenes, Yersínia enterocolitica, Campylobacter sp., Escherichia coli O157:H7,
Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus e Vibrio vulnificus.

4.2. Enriquecimento
Alguns patógenos estão presentes nos alimentos em número baixo, eventualmente
abaixo do limite de detecção de uma técnica quantitativa. Outras vezes as células
patogênicas podem estar injuriadas, dadas as características do alimento e condições de
conservação, ou mesmo podem estar em desvantagem numérica contra microbiota
competitiva que dificulta sua sobrevivência e multiplicação. Células injuriadas exigem
um período de tempo em condições ótimas de crescimento, para reativação das vias
metabólicas responsáveis pela multiplicação. Assim, o enriquecimento é uma etapa
onde a célula tem a chance se recuperar de injúrias, se multiplicar, diluir eventuais
substâncias inibidoras presentes no alimento, ganhar vantagem competitiva frente aos
demais microrganismos, maximizando a chance de detectá-la caso esteja presente
naquela alíquota amostral. No entanto, esta etapa faz com que se perca a relação
numérica entre o que inicialmente estava presente na amostra e o que é detectado nela.
São métodos comumente utilizados quando o microrganismo pesquisado tem critério de
aceitação de duas classes (presença/ausência), o que normalmente está relacionado à
baixa dose infectante do agente.

 Isolamento em meios sólidos (plaqueamento diferencial) - Empregam-se, em

geral, meios seletivos e diferenciais para suprimir a microbiota competidora e
evidenciar a célula-alvo.

4.3. Confirmação
Fase em que se confirma a identidade da cultura isolada, através de testes que verificam
características típicas do microrganismo alvo, como morfológica, bioquímica,
sorológica. Vale apontar que em alguns casos é preciso confirmar o gênero (é o caso da
Salmonella spp., já que todos os sorotipos são patogênicos para o homem), em outros
casos, é preciso confirmar a espécie (caso da Listeria monocytogenes que é a única,
dentre as demais espécies patogênicas do gênero, que está associada à doença
transmitida por alimentos) e em outros casos é preciso confirmar o sorotipo (quando
apenas algumas cepas da espécie são patogênicas para o homem quando ingeridas, é o
caso da Escherichia coli O157:H7).

5. MICRORGANISMOS INDICADORES DE CONTAMINAÇÃO DO

ALIMENTO

Grupo ou espécies de microrganismos que não representam por si só um perigo para a

saúde do consumidor, mas indicam a presença de outros organismos que representam
risco à saúde do consumidor. O nível de contaminação de um indicador pode fornecer
informações sobre a possibilidade de ocorrência de outros patógenos ou sobre as
condições higiênicas do produto (matéria prima, processamento, manipulação
armazenamento, preparo ou distribuição), podendo indicar também o potencial estado
de deterioração alimento. Indicadores gerais de contaminação do alimento.
A presença desses microrganismos fornece informações gerais sobre a qualidade de
produtos, práticas de manufatura, matérias-primas utilizadas, condições de
processamento, manipulação e vida de prateleira (shelf life). Os Microrganismos
Aeróbios Estritos e Facultativos Viáveis - mesófilos, psicotróphicos e termófilos - são
indicadores GERAIS de contaminação do alimento.

5.1. MESÓFILOS
Os microrganismos mesófilos têm como temperatura ótima de crescimento a
temperatura ambiente (entre 25ºC e 40ºC, sendo a ideal 35ºC). Segundo o Internacional
Commission on Microbiological Specifications for Foods (ICMSF) a contagem de
Microrganismos Aeróbios Mesófilos no alimento é o indicador microbiológico de
qualidade mais utilizado como indicador geral de contaminação do alimento. A maioria
dos alimentos que apresentam números superiores à 106 UFC/g ou ml são considerados
em deterioração e, assim, são indicadores de higiene. Exceção feita aos alimentos
fermentados e não tratados termicamente após a fermentação, onde é obrigatória uma
população tão alta quanto 106 UFC/g ou ml devido à presença dos fermentadores.

Quase todas as bactérias patogênicas de origem alimentar são mesófilas. Portanto, uma
alta contagem de mesófilos pode indicar que houve condições para que esses patógenos
se multiplicassem, se estivessem presentes. No entanto, NÃO são indicadores
sanitários (apesar de serem indicadores de higiene), pois não há relação DIRETA com
a presença de patógenos ou toxinas. Classificação dos microrganismos em função da
TºC ótima de crescimento (...FILO) e da temperatura de crescimento mesmo não sendo
ótima, onde a velocidade de multiplicação é mais lenta (...TRÓFICO).

5.2. PSICROTRÓFICOS
Os representantes desse grupo incluem os microrganismos psicrófilos e também os
Mesófilos presentes que tiverem capacidade de crescer em temperatura de
refrigeração (0-7ºC). a contagem de psicrotróficos avalia o grau de deterioração de
alimentos refrigerados.
Eles são bastante encontrados no leite e derivados. Durante a fase log eles sintetizam
enzimas extracelulares (lipases, proteases) que degradam os componentes do leite. A
pesar de a pasteurização eliminá-los, esse tratamento térmico tem pouco efeito sobre a
atividade das enzimas termorresistentes produzidas pelas bactérias mesófilas.
Os principais psicrotróficos em alimentos (lácteos, cárneos, aves, peixes, frutos do mar)
são: algumas espécies de: Vibrio (deteriorante de pescado), Bacillus (deteriorante de
lácteos), Clostridium, Enterobacter, Yersinia, Pseudomonas (amolecimento e
deterioração de vegetais refrigerados), Brochotrix, Lactobacillus, membros da família
Enterobacteriaceae (deteriorantes de alimentos embalados à vácuo ou atmostfera
modificada), Pseudomonas, Klebsiella.
Algumas bactérias patogênicas como a Listeria monocytogenes, Baccilus cereus, Vibrio
cholerae, Yersinia enterocolitica, algumas cepas de E. coli enteropatogênica,
Clostridium botulinum tipo E e tipos B e F não proteolíticos etc são aeróbias
psicrótróficas.

5.3. TERMÓFILOS
A contagem de termófilos avalia o grau de deterioração de produtos submetidos à
tratamento térmico. A tºc ótima de crescimento é de 45ºC, mas eles crescem entre 45-
65ºC. Alguns termófilos extremos conseguem crescer a 90ºC e o mínimo a 35ºC.
A maior parte das bactérias termófilas de importância alimentícia são dos gêneros
Bacillus e Clostridium.

5.4. BOLORES E LEVEDURAS

A maioria desse grupo está presente no solo, no ar, na água, em animais, no homem e
em detritos em geral. Os bolores são AERÓBIOS ESTRITOS e, assim, crescem melhor
em substratos sólidos firmes, pois na superfície têm fácil acesso ao O2. No entanto,
algumas espécies de conseguem crescer em substratos com pequenas dissoluções
absolutas de oxigênio, não necessitando do oxigênio da ATM.

Já as leveduras são anaeróbias facultativas e, por serem unicelulares, dispersam-se mais

facilmente em alimentos líquidos. Esses alimentos favorecem uma condição anaeróbica
de forma que, nestas condições, as leveduras usam a via metabólica fermentativa para
sua multiplicação. Os bolores e as leveduras são bastante resistentes a condições
adversas, como pH ácido e baixa Aw.

São pouco afetados pela variação de pH na faixa de 3 a 8, sendo 5 pH ótimo de

crescimento. Quanto mais afastado do pH ideal mais diminuirá a velocidade de
crescimento dos fungos, porém vários bolores ainda crescem abaixo de 2 e diversas
leveduras abaixo de 1,5. Se houver outros fatores de inibição além do pH.
Como o crescimento de bolores e leveduras é mais lento do que o de bactérias em
alimentos com baixa acidez e alta Aw, nestas condições as bactérias causarão a
deterioração do alimento antes que os bolores e leveduras consigam deteriorá-lo.
No entanto, em sucos de frutas, vegetais e cereais é mais comum observar a
deterioração pelos fungos devido à baixa Aw e/ou à alta acidez. As leveduras não estão
associadas à doenças veiculadas por alimentos, mas os bolores podem produzir toxinas
(micotoxinas) termoestáveis e causar intoxicação alimentar. Difícil evitar a
contaminação por bolores, pois são bastante disseminados pelo ambiente, as estratégias
de prevenção estão associadas a cuidados no cultivo, colheita e estocagem, evitando que
haja lesão nos grãos que permita a entrada do bolor, multiplicação e produção da toxina.
O controle de insetos e roedores também uma das medidas para evitar lesões
superficiais que sirvam de porta.

6. Referências bibliográficas

BRASIL, Ministério da Agricultura e do Abastecimento. Secretaria Nacional de Defesa

Agropecuária. Laboratório Nacional de Referência Animal – LANARA. Métodos
Analíticos para o Controle de Produtos de Origem Animal e seus Ingredientes -
Métodos físicos e químicos. Brasília, 1981. Disponível em:
http://www.agricultura.gov.br/assuntos/laboratorios/legislacoes-e-metodos/poa/
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ago. 2018

FRANCO, B. D. G.; LANDGRAF Microbiologia dos Alimentos, Atheneu, 1996.

ICMSF Organismos de los alimentos 1 – Tecnicas de analisis microbiologico.

ACRIBIA, Zaragoza, s.d.

HARRIGAN, W. F. Laboratory Methods in Food Microbiology, 3ªedição, 1998.

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edição, VARELA, São Paulo, 2010.

Amann, R. I.; Ludwing, W.; Schleifer, K. H. Phylogenetic identification and in situ

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Palleroni, N. J. Microbial diversity and the importance of culturing. Culture Collections

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