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    Colesterol HDL

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    Gianfranco Galvez Gonzales
    1. Este documento describe un método para determinar el colesterol HDL en suero o plasma mediante dos reactivos que dependen de las propiedades de un detergente específico. 2. El método mide directamente los niveles de colesterol HDL sin necesidad de etapas de pretratamiento. 3. Se proveen instrucciones sobre la preparación de muestras, reactivos, calibración, control de calidad y especificaciones de desempeño del método.

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    Colesterol HDL

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    Gianfranco Galvez Gonzales
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    1. Este documento describe un método para determinar el colesterol HDL en suero o plasma mediante dos reactivos que dependen de las propiedades de un detergente específico. 2. El método mide directamente los niveles de colesterol HDL sin necesidad de etapas de pretratamiento. 3. Se proveen instrucciones sobre la preparación de muestras, reactivos, calibración, control de calidad y especificaciones de desempeño del método.

    Descripción original:

    hdl

    Título original

    Colesterol Hdl

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    1. Este documento describe un método para determinar el colesterol HDL en suero o plasma mediante dos reactivos que dependen de las propiedades de un detergente específico. 2. El método mide directamente los niveles de colesterol HDL sin necesidad de etapas de pretratamiento. 3. Se proveen instrucciones sobre la preparación de muestras, reactivos, calibración, control de calidad y especificaciones de desempeño del método.

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    Colesterol HDL

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    Gianfranco Galvez Gonzales
    1. Este documento describe un método para determinar el colesterol HDL en suero o plasma mediante dos reactivos que dependen de las propiedades de un detergente específico. 2. El método mide directamente los niveles de colesterol HDL sin necesidad de etapas de pretratamiento. 3. Se proveen instrucciones sobre la preparación de muestras, reactivos, calibración, control de calidad y especificaciones de desempeño del método.

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    COLESTEROL HDL (MTODO DIRECTO)

    Reactivo lquido para la determinacin fotomtrica del


    Colesterol HDL en suero o plasma.

    Para uso en el diagnstico in Vitro. Apto para usar en autoanalizador.


    License numbers PCT/JP00/03860 and PCT/JP97/04442
    SIGNIFICANCIA CLINICA
    El colesterol se encuentra presente en la sangre, bilis y tejido cerebral. Es
    precursor de los cidos biliares, esteroides, y vitamina D. El colesterol es
    transportado por tres lipoprotenas, la lipoprotena de alta densidad (HDL),
    la de baja densidad (LDL), y la de muy baja densidad (VLDL).
    Castelli y colaboradores han reportado que hay una estrecha relacin entre
    los niveles de HDL-Colesterol y el riesgo de enfermedad coronaria. La
    evaluacin de los niveles de HDL-Colesterol y Triglicridos provee una
    valiosa herramienta para la prediccin de enfermedad coronaria, y la
    clasificacin de las dislipidemias.
    FUNDAMENTOS DEL METODO
    El Colesterol HDL Directo VALTEK es un mtodo homogneo para la
    determinacin directa de los niveles de HDL-C en suero o plasma, sin
    necesidad de etapas de pretratamiento o centrifugaciones previas.

    Preparacin del Reactivo de Trabajo: los reactivos se proveen listo para su


    uso.
    MUESTRA
    Las muestras deben obtenerse en ayunas (12 a 14 horas).
    Suero: Obtener la muestra dejando coagular y remover el suero antes de 3
    horas 11
    Plasma: Obtener la muestra utilizando EDTA o Heparina (sodio Litio)
    removiendo el plasma antes de 3 horas. 11
    Las muestras pueden almacenarse hasta 1 semana entre 2 y 8 C o hasta por 3
    meses a -70 C.
    EQUIPO NECESARIO NO INCLUIDO
    Referirse a la programacin especfica para cada instrumento.

    Este mtodo, compuesto por dos reactivos, depende de la propiedades de


    un detergente especfico tal como se ilustra, y se basa en la aceleracin de la
    velocidad de reaccin de la enzima colesterol oxidasa (CO) con el colesterol
    no-esterificado, y la disolucin selectiva del la HDL utilizando un detergente
    especfico. En el primer reactivo, el colesterol no-esterificado no HDL es
    sometido a una reaccin enzimtica tras la cual el perxido producido es
    consumido por la enzima peroxidasa con DSBmT, obtenindose un producto
    incoloro. El segundo reactivo consiste en un detergente capaz de solubilizar
    el HDL especficamente, reaccionando con la enzima colesterol esterasa (CE)
    y el complejo cromognico de la etapa anterior, formndose un compuesto
    coloreado, en forma directamente proporcional a la concentracin de
    colesterol HDL en la muestra.
    HDL, LDL, VLDL
    Quilomicrones
    HDL

    Acelerador + CO
    DSBmT + Peroxidasa
    Detergente especfico

    HDL Colesterol

    CE + CO

    Peroxidasa

    H2O2 + DSBmT + 4-AAP

    TECNICA
    Puede utilizarse cualquier autoanalizador capaz de medir diferencia de
    absorbancia entre 700 nm y 600 nm.
    A continuacin se describe un procedimiento general para un equipo
    autoanalizador.
    Muestra

    (ul)

    Reactivo 1

    (ul)

    300

    Mezclar e incubar 5 minutos a 37C. Medir la diferencia de


    absorbancia entre 700 nm. y 600 nm.

    LDL no-reactivo, VLDL


    Quilomicrones

    Reactivo 2

    (ul)

    100

    Mezclar e incubar 5 minutos a 37C. Medir la diferencia de


    absorbancia entre 700 nm. y 600 nm.

    HDL Disociado

    4 Colestenona + H2O2

    Contactar a VALTEK para obtener aplicaciones especficas. Es responsabilidad


    del laboratorio validar esta aplicacin.

    Complejo Coloreado
    CALIBRACION

    REACTIVOS
    Conservados entre 2 y 8C. en frasco cerrado y protegidos de la luz, estables
    hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta. Los reactivos R1 y R2
    abiertos a bordo del autoanalizador entre 2 y 8C, son estables a lo menos
    por un mes. NO CONGELAR.

    Composicin de los Reactivos:


    Reactivo 1
    Good s Buffer
    Colesterol oxidasa (Fr:E.Coli)
    Peroxidasa (Fr:Horseradish)
    N,N-bis(4-sulphobutyl)-m-toluidine-disodium(DSBmT)
    Acelerador
    Preservante
    Ascorbato oxidasa (Fr. Curcubita sp.)
    Reactivo 2
    Good s Buffer
    Colesterol esterasa (Fr:Pseudomonas sp.)
    4-Aminoantipirina (4-AAP)
    Detergente
    Preservante

    <1000 U/L
    <1300 ppg U/L
    <1 mM
    <1 mM
    <0.06%
    <3000U/L

    CALCULOS
    Los valores de Colesterol HDL son obtenidos a partir de la calibracin
    realizada.
    CONTROL DE CALIDAD

    <1500 U/L
    <1mM
    <2%
    <0.06%

    En la calibracin se recomienda utilizar calibrador srico Valtek


    especfico para Colesterol HDL (cdigo 070-120), proceder de igual
    forma que con las muestras.
    Se recomienda recalibrar en cualquier momento que se evidencie
    alguno de estos acontecimientos:
    El lote de reactivo cambia
    Se realiza un mantenimiento preventivo del equipo
    Los valores de control han cambiado o se encuentran fuera
    de escala.

    Es conveniente analizar junto con las muestras sueros controles


    valorados para Colesterol HDL por este mtodo. Se recomienda la
    utilizacin de los sueros controles VALTROL-N (cdigo 210-100) y
    VALTROL-P (cdigo 210-110). La utilizacin de un control de calidad
    procesado como las muestras permite evaluar la exactitud y precisin
    del mtodo.

    Valtek S.A. Av. Marathon 1943, uoa, Santiago de Chile / Tel. + (562) 654 1100
    Fax + (562) 654 1199 / www.valtekdiagnostics.com / info@valtek.cl

    Si los valores obtenidos para los controles se encuentran fuera del


    rango de tolerancia, revisar el instrumento, el reactivo y el calibrador.
    Cada laboratorio debe disponer de su propio Control de Calidad y
    establecer las correcciones necesarias en caso de que no se cumpla
    con las tolerancias permitidas para los controles.

    Cada laboratorio debe establecer sus propios rangos de referencia en funcin


    de la poblacin de pacientes. Los rangos de referencia que se enumeran a
    continuacin estn tomados de la bibliografa existente.
    Hombres: 30 -70 mg/dL
    Mujeres: 30 -85 mg/dL

    ADVERTENCIAS Y MEDIDAS DE PRECAUCION:

    RANGOS DE REFERENCIA

    No usar anticoagulantes que contengan citrato.


    Proteger los reactivos de la luz solar directa.
    Almacenar los reactivos entre 2 y 8 C. No congelar.
    El NCEP recomienda no basar tratamientos en un resultado aislado del
    HDL-C.
    Muestras con triglicridos superiores a 2000 mg/dl no deben ser
    diluidas.
    Se ha reportado valores menores de HDL colesterol a los obtenidos por
    el mtodo de referencia en muestras provenientes de hgados con
    cirrosis.
    Alteraciones en el aspecto fsico de los reactivos o de los valores de los
    materiales del control, fuera del rango aceptable del fabricante,
    pueden ser una indicacin de inestabilidad de ellos.
    Consultar en nuestra pgina WEB la ficha de seguridad de este reactivo
    y observar todas las medidas de precaucin necesarias para la
    manipulacin y eliminacin de residuos.
    En autoanalizadores debe utilizarse contenedores de reactivos nuevos.

    ESPECIFICACIONES DE DESEMPEO:

    Para convertir los valores de Colesterol HDL en mg/dl a unidades


    internacionales estandarizadas, multiplicar el resultado por 0.0259.
    mg/dL x 0.0259 = mmol/L Colesterol HDL
    Conforme al NCEP, valores de HDL mayores o iguales a 40 mg/dL se
    consideran adecuados, y valores iguales o superiores a 60 mg/dL se considera
    que ofrecen algn grado de proteccin contra la enfermedad coronaria.
    Valores inferiores a 40 mg/dL se considera como un factor significante de
    riesgo de enfermedad coronaria.10

    PRESENTACIONES DISPONIBLES
    CODIGO
    070-110
    300080
    200080

    Linealidad: 2.5 mg/dL a 200 mg/dL


    Muestras que excedan 200 mg/dL deben ser diluidas con suero fisiolgico y
    multiplicar el resultado obtenido por el factor de dilucin.

    2.
    3.

    4.

    Los efectos de drogas en los niveles de HDL-C en el suero se pueden revisar


    en los trabajos de Young.13
    Exactitud: Los reactivos VALTEK no muestran diferencias sistemticas
    significativas cuando se comparan con otros reactivos comerciales. Los
    detalles del estudio comparativo estn disponibles bajo solicitud.

    5.
    6.
    7.
    8.

    Precisin Intra ensayo: n = 20


    Sueros humanos replicados 20 veces cada uno.
    Media (mg/dL)
    32.9
    50.6
    101.4

    SD (mg/dL) C.V.
    0.3
    0.2
    0.7

    9.
    10.

    0.8%
    0.5%
    0.7%

    Precisin Inter ensayo: n = 40


    Sueros humanos procesados en duplicados dos veces diarias durante diez
    das:
    Nivel
    Bajo <40 mg/dl
    Medio 40-59 mg/dl
    Alto 60 mg/dl

    Media (mg/dL)
    32.8
    50.0
    100.1

    SD (mg/dL) C.V.
    0.4
    0.7
    1.1

    1.3%
    1.5%
    1.1%

    Estos datos han sido obtenidos utilizando un autoanalizador. Los resultados


    pueden variar al cambiar de instrumento o al realizar el procedimiento
    manualmente.

    1 x 60 ml
    1 x 20 ml
    4 x 36 ml
    4 x 12 ml
    2 x 36 ml
    2 x 12 ml

    BIBLIOGRAFIA
    1.

    Interferencias: Los estudios de interferencias han sido realizados conforme a


    las sugerencias del NCCLS No.EP7-P.13. Hemoglobina 1000 mg/dL, bilirrubina
    conjugada 60 mg/dL, bilirrubina total 60 mg/dL, cido ascrbico 100 mg/dL,
    lipemia 1800 mg/dL, gamma-globulinas 5000mg/dL no presentan
    interferencias significativas (+/-10%)

    Nivel
    Bajo <40 mg/dl
    Medio 40-59 mg/dl
    Alto 60 mg/dl

    CONTENIDO
    Reactivo 1
    Reactivo 2
    Reactivo 1
    Reactivo 2
    Reactivo 1
    Reactivo 2

    11.

    12.

    13.

    14.
    15.

    16.

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