UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CALLAO

FACULTAD DE INGENIERA QUMICA

Escuela Profesional de Ingeniera Qumica

TINCION GRAM
LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA

Profesora:
Ing. Herrera Snchez Sonia

Integrantes:

Alejos Gallo Mariana Alexandra

Cabrera Fernndez Aldo Leonardo
Chavarra Crdova Oliver Jess
Meza Silva Pedro Abel

2016
I.

INTRODUCCIN
1

Actualmente la identificacin de las bacterias se realiza por medio de

mtodos convencionales, basados en las caractersticas fenotpicas, puesto
que su realizacin y coste los hace ms asequibles. Los mtodos
genotpicos suelen reservarse para las bacterias que no se pueden
identificar con mtodos convencionales.
Los esquemas tradicionales de identificacin fenotpica bacteriana se basan
en las caractersticas observables de las bacterias, como morfologa,
desarrollo, y propiedades bioqumicas y metablicas.
El cultivo, cuando es factible, continuo siendo el mtodo diagnstico de
eleccin; permite el aislamiento del microorganismo implicado, su
identificacin, el estudio de sensibilidad a los antimicrobianos y facilita la
aplicacin de marcadores epidemiolgicos. En el cultivo es esencial la
correcta eleccin del medio de crecimiento y las condiciones de incubacin.

II.

OBJETIVOS

1. Identificar por el mtodo de tincin de las bacterias Gram positiva y

Gram negativa
2. Comparar y diferenciar entre la bacteria Gram positiva y Gram
negativa

III.

MARCO TERICO

Las bacterias son organismos unicelulares microscpicos, sin ncleo ni clorofila,

que pueden presentarse desnudas o con una cpsula gelatinosa, aisladas o en
grupos y que pueden tener cilios o flagelos.
La bacteria es el ms simple y abundante de los
organismos y puede vivir en tierra, agua, materia
orgnica o en plantas y animales.
Tienen una gran importancia en la naturaleza,
pues estn presentes en los ciclos naturales del
nitrgeno, del carbono, del fsforo, etc. y pueden
transformar sustancias orgnicas en inorgnicas
y viceversa.

Son tambin muy importantes en las

fermentaciones aprovechadas por la industria y
en la produccin de antibiticos.
Desempean un factor importante en la destruccin de plantas y animales
muertos.
En efecto, la vida en nuestro planeta no existira sin bacterias, las cuales
permiten muchas de las funciones esenciales de los ecosistemas. Una bacteria de
tamao tpico es tan pequea que es completamente invisible a la vista.
Las bacterias son muy importantes para el ser humano, tanto para bien como para
mal, debido a sus efectos qumicos y al rol que juegan en diseminar
enfermedades.
Las bacterias pertenecen a la clase procariota debido a que su ncleo no est
rodeado por una membrana y consiste de una sola molcula de ADN cuya divisin
es no-mittica.
En su efecto beneficioso, algunas bacterias producen antibiticos tales como
estreptomicina capaces de curar enfermedades.
Anlogamente, las bacterias son muy importantes ya que convierten nitrgeno en
una forma til por ciertas races de plantas o proveen el gusto intenso en yogurt.
Las bacterias se usan en la produccin de cido actico y vinagre, varios
aminocidos y enzimas, y especialmente en la fermentacin de lactosa a cido
lctico, la cual coagula las protenas de la leche, y se usan en la fabricacin de
casi todos los quesos, yogurt y productos similares.

Ellas tambin ayudan a la descomposicin de la materia orgnica muerta.

Actualmente, los mtodos de la ingeniera gentica son usados para mejorar los
tipos de bacterias con fines comerciales y muestran una gran promesa futura.
En cosmticos, muchos de los activos, tales como protenas y pptidos de bajo
peso molecular, ingredientes antiarrugas y antioxidantes, estn siendo creados
con el uso de tipos especficos mejorados de bacterias.
La mayora de las bacterias pueden clasificarse en tres categoras de acuerdo a
su respuesta al oxgeno gaseoso.
La bacteria aerobia crece en la presencia de oxgeno y lo requiere para su
continuo crecimiento y existencia.
Otras bacterias son anaerobias, y no pueden tolerar el oxgeno gaseoso.
El tercer grupo es el anaerobio facultativo, el cual prefiere crecer en presencia de
oxgeno, aunque puede hacerlo sin l.

Morfologa y estructura
Las bacterias son microorganismos procariontes (no poseen membrana nuclear
por lo que su ADN est libre en la clula) de organizacin muy sencilla.
Pertenecen al reino Protista.
La clula bacteriana consta de:
Citoplasma (todas son citoplasmticas). Presenta un aspecto viscoso, y en su
zona central aparece un nucleoide que contiene la mayor parte del ADN
bacteriano, y en algunas bacterias aparecen fragmentos circulares de ADN con
informacin gentica, dispersos por el citoplasma: son los plasmidos.
La membrana plasmtica presenta invaginaciones, que son los mesosomas,
donde se encuentran enzimas que intervienen en la sntesis de ATP, y los
pigmentos fotosintticos en el caso de bacterias fotosintticas.
En el citoplasma se encuentran inclusiones de diversa naturaleza qumica.
Muchas bacterias pueden presentar flagelos generalmente rgidos, implantados
en la membrana mediante un corpsculo basal. Pueden poseer tambin
fimbrias o pili muy numerosos y cortos, que pueden servir como pelos sexuales
para el paso de ADN de una clula a otra
Poseen ARN y ribosomas caractersticos, para la sntesis de protenas.
Pared celular, que es rgida y con molculas exclusivas de bacterias.

BACTERIA GRAM POSITIVA

Tiene una capa gruesa de Peptidoglicano (mureina) y dos clases de cidos
teicoicos: cido Lipoteicoico que est en la superficie, empotrado en la
capa de peptidoglicano y unido a la membrana citoplsmica. Y cido
teicoico de la Pared que est en la superficie y se une slo a la capa de
peptidoglicano. El cido Teicoico es el responsable del determinante
antignico del organismo.

BACTERIA GRAM NEGATIVA

Tiene una capa delgada de Peptidoglicano (mureina) unida a una
membrana exterior por lipoprotenas. La membrana exterior est hecha de
protena, fosfolpido y lipopolisacrido. En el lipopolisacrido, la porcin de
lpido est embebida en el fosfolpido y el antgeno O polisacrido est en la
superficie. El lpido se llama Lpido A y es txico, pero el lipopolisacrido
entero se llama Endotoxina. La pared de la clula tiene poros llamado
Porines para el transporte de substancias de peso molecular bajo. Entre la
membrana citoplsmica y la pared celular hay un espacio periplsmico con
enzimas hidrolticas, enzimas inactivadoras de antibiticos y protenas de
transporte.

TECNICA DE TINCION DE BACTERIAS

La tcnica de tincin de membranas de bacterias de Gram, desarrollada por Hans
Christian Gram en 1884, ha supuesto un antes y un despus en el campo de
la medicina, y consiste en teir con tintes especficos diversas muestras de
bacterias en un portaobjetos para saber si se han teido o no con dicho tinte.
Una vez se han adicionado los tintes especficos en las muestras, y se ha lavado
la muestra pasados unos minutos para evitar confusiones, hay que limpiarlas con
unas gotas de alcohol etlico. La funcin del alcohol es la de eliminar el tinte de las
6

bacterias, y es aqu donde se reconocen las bacterias que se han tomado: si la

bacteria conserva el tinte, es una Gram positiva, las cuales poseen una pared ms
gruesa constituida por varias decenas de capas de diversos componentes
proteicos; en el caso de que el tinte no se mantenga, la bacteria es una Gram
negativa, la cual posee una pared de una composicin diferente. La funcin
biolgica que posee sta tcnica es la de fabricar antibiticos especficos para
esas bacterias.

a)

Alimentacin

El xito evolutivo de las bacterias se debe en parte a su versatilidad metablica.

Todos los mecanismos posibles de obtencin de materia y energa podemos
encontrarlos en las bacterias.
Segn la fuente de carbono que utilizan, los seres vivos se dividen
en auttrofos, cuya principal fuente de carbono es el CO 2, yhetertrofos cuando
su fuente de carbono es materia orgnica.
Por otra parte segn la fuente de energa, los organismos o seres vivos pueden
ser fottrofos, cuya principal fuente de energa es la luz, y quimitrofos, cuya
fuente de energa es un compuesto qumico que se oxida.
Atendiendo a las anteriores categoras, entre las bacterias podemos encontrar las
siguientes formas, como puede apreciarse en el esquema:
1. Las bacterias quimiohetertrofas, utilizan un compuesto qumico como fuente
de carbono, y a su vez, este mismo compuesto es la fuente de energa. La mayor
parte de las bacterias cultivadas en laboratorios y las bacterias patgenas son de
este grupo.
2. Las bacterias quimioauttrofas, utilizan compuestos inorgnicos reducidos
como fuente de energa y el CO 2 como fuente de carbono. Como, por
ejemplo, Nitrobacter, Thiobacillus.
3. Las bacterias fotoauttrofas, utilizan la luz como fuente de energa y el
CO2 como fuente de carbono. Bacterias purpreas.
4. Las bacterias fotohetertrofas, utilizan la luz como fuente de energa y
biomolculas
como
fuente
de
carbono.
Ejemplos
comoRodospirillum y Cloroflexus.
7

b)

Reproduccin de las bacterias

Generalmente las bacterias se reproducen por biparticin, como se ve en el

siguiente esquema:

Tras la duplicacin del ADN, que est dirigida por la ADN-polimerasa que se
encuentra en los mesosomas, la pared bacteriana crece hasta formar un tabique
transversal separador de las dos nuevas bacterias.

Pero adems de este tipo de reproduccin asexual, las

bacterias poseen unos mecanismos de reproduccin
sexual o parasexual, mediante los cuales se intercambian
fragmentos de ADN.
Esta reproduccin sexual o parasexual, puede realizarse
por transformacin, por conjugacin o por transduccin.

1.- TRANSFORMACIN: Consiste en el intercambio

gentico producido cuando una bacteria es capaz de captar fragmentos de ADN,
de otra bacteria que se encuentran dispersos en el medio donde vive.

2.- CONJUGACIN: En este proceso, una bacteria donadora F+ transmite a

travs de un puente o pili, un fragmento de ADN, a otra bacteria receptora F-. La
bacteria que se llama F+ posee un plasmido, adems del cromosoma bacteriano.

3.- TRANSDUCCIN: En este caso la transferencia de ADN de una bacteria a otra

se realiza a travs de un virus bacterifago, que se comporta como un vector
intermediario entre las dos bacterias.

a, el virus se acopla a la bacteria

b., el virus rompe la pared bacteriana
c, el virus inyecta su ADN

c)

Clasificacin de las bacterias

La identificacin de las bacterias es tanto ms precisa cuanto mayor es el nmero

de criterios utilizados. Esta identificacin se realiza sobre la base de modelos,
agrupados en familias y especies en la clasificacin bacteriolgica.
Las bacterias se renen en once rdenes:
- Las eubacteriales, esfricas o bacilares, que comprenden casi todas las
bacterias patgenas y las formas fottrofas.
- Las pseudomonadales, orden dividido en diez familias entre las que cabe citar
las Pseudomonae y las Spirillacae.
- Las espiroquetales (treponemas, leptospiras).
- Las actinomicetales (micobacterias, actinomicetes).
- Las rickettsiales.
- Las micoplasmales.
- Las clamidobacteriales.
- Las hifomicrobiales.
- Las beggiatoales.
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- Las cariofanales.
- Las mixobacteriales.

d) Relaciones entre la bacteria y su husped

Ciertas bacterias viven independientes de otros seres vivos. Otras son parsitas.
Pueden vivir en simbiosis con su husped ayudndose mutuamente o como
comensales (sin beneficio). Pueden ser patgenas, es decir, vivir de su husped.
La virulencia es la aptitud de un microorganismo para multiplicarse en los tejidos
de su husped (creando en ellos alteraciones). Esta virulencia puede estar
atenuada (base del principio de la vacunacin) o exaltada (paso de un sujeto a
otro). La virulencia puede ser fijada por liofilizacin. Parece ser funcin del
husped (terreno) y del entorno (condiciones climticas). La puerta de entrada de
la infeccin tiene igualmente un papel considerable en la virulencia del germen.
El poder patgeno es la capacidad de un germen de implantarse en un husped y
de crear trastornos en l.
Dicho poder patgeno est ligado a dos causas:
- La produccin de lesiones en los tejidos mediante constituyentes de la
bacteria, como pueden ser enzimas que ella excreta y que atacan tejidos vecinos,
o productos txicos provenientes del metabolismo bacteriano.
- La produccin de toxinas. Se puede tratar de toxinas proteicas (exotoxinas
excretadas por la bacteria, transportadas a travs de la sangre y que actan a
distancia sobre rganos sensibles) o de toxinas glucoproteicas (endotoxinas),
estas ltimas actuando nicamente en el momento de la destruccin de la bacteria
y pudiendo ser responsables de choques infecciosos en el curso de septicemias
provocadas por grmenes gramnegativos en el momento en que la toxina es
brutalmente liberada.
A estas agresiones microbianas, el organismo opone reacciones defensivas
ligadas a procesos de inmunidad, mientras que el conflicto husped-bacteria se
traduce por manifestaciones clnicas y biolgicas de la enfermedad infecciosa.

Uso de las bacterias en la tecnologa y la industria

Muchas industrias dependen en parte o enteramente de la accin bacteriana. Gran
cantidad de sustancias qumicas importantes como alcohol etlico, cido
11

actico, alcohol butlico y acetona son producidas por bacterias especficas.

Tambin se emplean bacterias para el curado de tabaco, el curtido
de cueros, caucho, algodn, etc. Las bacterias (a menudo Lactobacillus) junto
con levaduras y mohos, se han utilizado durante miles de aos para la preparacin
de alimentos fermentados tales como queso, mantequilla, encurtidos, salsa de
soja, chucrut, vinagre, vino y yogur.
Las bacterias tienen una capacidad notable para degradar una gran variedad de
compuestos orgnicos, por lo que se utilizan en el reciclado de basura y
en biorremediacin. Las bacterias capaces de degradar los hidrocarburos son de
uso frecuente en la limpieza de los vertidos de petrleo. As por ejemplo, despus
del vertido del petrolero Exxon Valdez en 1989, en algunas playas de Alaska se
usaron fertilizantes con objeto de promover el crecimiento de estas bacterias
naturales. Estos esfuerzos fueron eficaces en las playas en las que la capa
de petrleo no era demasiado espesa. Las bacterias tambin se utilizan para la
biorremediacin de basuras txicas industriales. En la industria qumica, las
bacterias
son
utilizadas
en
la
sntesis
de
productos
qumicos enantiomricamente puros para uso farmacutico o agroqumico.
Las bacterias tambin pueden ser utilizadas para el control biolgico
de parsitos en sustitucin de los pesticidas. Esto implica comnmente a la
especie Bacillus thuringiensis (tambin llamado BT), una bacteria de suelo Grampositiva. Las subespecies de esta bacteria se utilizan como insecticidas
especficos para lepidpteros. Debido a su especificidad, estos pesticidas se
consideran respetuosos con el medio ambiente, con poco o ningn efecto sobre
los seres humanos, la fauna y la mayora de los insectos beneficiosos, como por
ejemplo, los polinizadores.

IV.

PROCEDIEMIENTO EXPERIMENTAL:

12

 Desinfectamos la placa y tambin el asa de siembra ponindolo al mechero

al rojo vivo.

Muestra 1

Muestra 2

Cogemos la muestra con el asa de

siembra y luego le agregamos una gota
de agua destilada.

Echar 1 gota de azul violeta por un

intervalo de un minuto, luego pasaremos a
enjuagarlo con agua para bajar el tono.

Echar una gota de alcohol- acetona, para

lavar la muestra.

Echar una gota de safranina por

un intervalo de un minuto.
una gota de safranina por 13
un

 Enjuagarlo con agua y por ultimo dejarlo secar para poder

analizar la muestra.

Repetimos los mismos pasos para la segunda muestra.

V.

ANALISIS DE LOS RESULTADOS Y CONCLUSIONES:

14

En la figura 1 y 2, se puede apreciar

GRAM POSITIVOS. Esta bacteria se observa de color VIOLETA ya que en el
proceso de tincin donde se le agrego los diferentes colorantes, quedaron teidas.
Estas bacterias presentan este color ya que la envoltura celular de las bacterias
Gram-positivas cubren la membrana citoplasmtica y una pared celular compuesta
por una gruesa capa de peptidoglicano, que rodea a la anterior. La pared celular
se une a la membrana citoplasmtica mediante molculas de cido lipoteicoico.
La capa de peptidoglicano le proporciona una gran resistencia a estas bacterias y
es la responsable de retener el tinte durante la tincin de Gram
al poseer una gran proporcin de este polmero complejo (murena) la cual no
la hace susceptibles a la accin del solvente orgnico, sino que este
acta deshidratando los poros cerrndolos, lo que impide que pueda escaparse el
complejo cristal violeta, y manteniendo la coloracin azul-violcea.
CONCLUSIONES
1.

La tincion gram es una tecnica fundamental a la hora del estudio de

bacterias y microorganismos, ya que segn el comportamiento frente a
dicha tecnica , fue posible diferenciar los grupos de bacterias debido al
color que adquirian en su menbrana.

2.

Mediante la tincin de Gram, se logr identificar las bacterias

Gram positivas y Gram negativas gracias al color que tornan despus de
ser teidas ; en el caso de las bacterias Gram positivas se tien de
violeta( esto se debe a que gracias a que contienen una pared gruesa
de peptidoglicano) Lo contrario ocurre con el caso de las Gram
negativas, las cuales poseen una pared delgada con menos cantidad
de peptidoglicano .

VI. BIBLIOGRAFIA

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1. (METODOLOGIA Y METODO TINCION GRAM)https://es.wikipedia.org/wiki/Tinci

%C3%B3n_de_Gram

2. https://www.seimc.org/contenidos/documentoscientificos/procedimientosmicrobiologia/
seimc-procedimientomicrobiologia37.pdf

3. GRAMPOSITIVA https://es.wikipedia.org/wiki/Bacteria_grampositiva

4. GRAMNEGATIVA https://es.wikipedia.org/wiki/Bacteria_gramnegativa

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