Introducción a las Culturas Fed-Batch

Una célula viva de una fuente microbiana, vegetal o animal es esencialmente una Y dividir el reactor bioquímico
en el que un gran número de enzima-catalizada bio- Se producen reacciones químicas. Los cultivos microbianos
implican células microbianas vivas, Los cultivos de tejidos implican células vegetales o animales vivas. Estas
culturas pueden ser El caso de reacciones químicas y bioquímicas, en tres modos operativos clásicos:
Discontinuo, continuo o semi-discontinuo (semicontinuo). Durante las últimas tres décadas, Ha habido un
tremendo crecimiento en el uso de reactores semicontraíbles en el fermen- La biotecnología, la química y las
industrias de tratamiento de residuos debido al Demandas para productos químicos y productos químicos
especiales y para ciertas ventajas Los reactores. Los procesos por lotes y semi-lotes se utilizan para manejar,
Volumen, productos de alto valor tales como productos de fermentación, incluyendo aminoácidos
Y antibióticos, productos de ADN recombinante y productos químicos especiales. Debido a la alta Valores de
estos productos, la rentabilidad se puede mejorar mucho incluso con
Mejoras en rendimiento y productividad. Por lo tanto, existen incentivos para
Batch o semi-batch. Para un proceso por lotes o semi-lotes, el objetivo es maximizar el beneficio que puede
Al final de la carrera, momento en el que el contenido del reactor se recoge para
Procesamiento adicional tal como separación y purificación. Así, el problema se llama optimización de punto
final, ya que sólo al final, no el intermedio, los resultados son relevantes para
El beneficio total.

1.1 Culturas por lotes

En una operación por lotes, se añaden todos los componentes medios necesarios y el inóculo Al principio y no
durante el período de fermentación. Por lo tanto, su concentración No se controlan, sino que se les permite
variar a medida que las células vivas las toman. Los productos, ya sean intra o extracelulares, se cosechan sólo
al final de la operación.
Los controles básicos de pH, temperatura, oxígeno disuelto y espuma se aplican
El curso de cultivo por lotes. El pH, el oxígeno disuelto y la temperatura son normalmente
Mantenida constante durante el transcurso de la operación del reactor por lotes. La única optimización
Son la composición inicial del medio. Sin embargo, las optimizaciones de perfil de La temperatura y el pH
pueden conducir a un mejor desempeño sobre las operaciones Salida a temperatura constante y pH constante

1.2 Culturas Continuas

En una operación continua, una o más corrientes de alimentación que contienen los nutrientes necesarios Se
alimentan continuamente, mientras que la corriente efluente que contiene las células, productos,
Y los residuos se eliminan continuamente. Un estado estacionario se establece mediante el mantenimiento- Un
caudal volumétrico igual para las corrientes de alimentación y efluente. Al hacerlo,
El volumen del cultivo se mantiene constante, y todas las concentraciones de nutrientes permanecen en
constante. Las operaciones de reactor continuo son comunes en Industrias. Con la excepción de la producción
de proteínas de una sola célula,
Procesos de tratamiento de residuos municipales, las culturas continuas no
Han sido ampliamente adoptadas por la industria. No es un modo dominante de operación industrial
Principalmente por la dificultad de mantener la esterilidad (contaminación por Organismos) y la protección
contra los ataques o mutaciones de fagos y porque a menudo, Las operaciones de estado estable se encuentran
para dar resultados más pobres que las operaciones dinámicas, Por razones aún no plenamente comprendidas.
1.3 Culturas de Fed-Batch
Un cultivo de lote alimentado es una operación semicomerada en la que los nutrientes necesarios para El
crecimiento celular y la formación del producto se alimentan de forma intermitente o continua mediante
Una o más corrientes de alimentación durante el transcurso de una operación por lotes. El caldo de cultivo se
cosecha normalmente sólo al final del período de
Total o parcialmente (el resto sirve como inóculo para la siguiente operación repetida). Este proceso puede ser
repetido (repetido alimentado-lote) un número de veces si las células son Plenamente viables y productivos. Así,
hay una o más corrientes de alimentación, pero no hay efluente Durante el curso de la operación. Fuentes de
carbono, nitrógeno, fosfatos, nutrientes,Precursores o inductores se alimentan de forma intermitente o continua
en el cultivo
Manipulando las velocidades de alimentación durante la operación. Los productos son cosechados El final de
la carrera. Por lo tanto, el volumen de cultivo aumenta durante el transcurso de
Hasta que el volumen esté lleno. A continuación, se utiliza un modo de operación por lotes Para obtener los
resultados finales. Por lo tanto, el cultivo de lote alimentado es una operación dinámica. Por Manipulación de
las velocidades de alimentación, las concentraciones de nutrientes limitantes en el cultivo
Pueden ser manipulados para permanecer en un nivel constante o para seguir una configuración predeterminada
Perfil óptimo hasta que el volumen de cultivo alcance el máximo, y luego un lote Se utiliza para proporcionar
un toque final. Al hacerlo, la concentración de la
Producto o el rendimiento del producto al final de la operación se maximiza. Este tipo de operación se llama
primero un cultivo discontinuo alimentado o fermentación discontinuo alimentado. 1,2 También es conocido
como Zulaufverfahren en alemán o ryukaho 2 (un método de adición de flujo) en
Japonés. Obviamente, este tipo de operación es una operación de reactor semi-
Utilizado para reacciones químicas y bioquímicas. En ingeniería medioambiental con residuos tóxicos, este tipo
de operación se conoce como un relleno y dibujar operación o como un reactor de secuenciación por lotes. En
la ingeniería biomédica, el proceso respiratorio en fuera del pulmón que se conoce como palo y globo, como el
volumen de los pulmones aumenta
Inhalamos y disminuimos a medida que exhalamos, que es una forma de proceso alimentado por lotes

1.2 Culturas Continuas

En una operación continua, una o más corrientes de alimentación que contienen los nutrientes necesarios Se
alimentan continuamente, mientras que la corriente efluente que contiene las células, productos, Y los residuos
se eliminan continuamente. Un estado estacionario se establece mediante el mantenimiento- Un caudal
volumétrico igual para las corrientes de alimentación y efluente. Al hacerlo, El volumen del cultivo se mantiene
constante, y todas las concentraciones de nutrientes permanecen en constante. Las operaciones de reactor
continuo son comunes en Industrias. Con la excepción de la producción de proteínas de una sola célula,
Procesos de tratamiento de residuos municipales, las culturas continuas no Han sido ampliamente adoptadas
por la industria. No es un modo dominante de operación industrial Principalmente por la dificultad de mantener
la esterilidad (contaminación por Organismos) y la protección contra los ataques o mutaciones de fagos y porque
a menudo, Las operaciones de estado estable se encuentran para dar resultados más pobres que las operaciones
dinámicas, Por razones aún no plenamente comprendidas.

1.3 Culturas de Fed-Batch

Un cultivo de lote alimentado es una operación semicomerada en la que los nutrientes necesarios para
El crecimiento celular y la formación del producto se alimentan de forma intermitente o continua mediante
Una o más corrientes de alimentación durante el transcurso de una operación por lotes. Los El caldo de cultivo
se cosecha normalmente sólo al final del período de Total o parcialmente (el resto sirve como inóculo para la
siguiente operación repetida). Este proceso puede ser repetido (repetido alimentado-lote) un número de veces
si las células son Plenamente viables y productivos. Así, hay una o más corrientes de alimentación, pero no hay
efluente Durante el curso de la operación. Fuentes de carbono, nitrógeno, fosfatos, nutrientes, Precursores o
inductores se alimentan de forma intermitente o continua en el cultivo Manipulando las velocidades de
alimentación durante la operación. Los productos son cosechados El final de la carrera. Por lo tanto, el volumen
de cultivo aumenta durante el transcurso de Hasta que el volumen esté lleno. A continuación, se utiliza un modo
de operación por lotes Para obtener los resultados finales. Por lo tanto, el cultivo de lote alimentado es una
operación dinámica. Por Manipulación de las velocidades de alimentación, las concentraciones de nutrientes
limitantes en el cultivo Pueden ser manipulados para permanecer en un nivel constante o para seguir una
configuración predeterminada Perfil óptimo hasta que el volumen de cultivo alcance el máximo, y luego un lote
Se utiliza para proporcionar un toque final. Al hacerlo, la concentración de la Producto o el rendimiento del
producto al final de la operación se maximiza. Este tipo de operación se llama primero un cultivo discontinuo
alimentado o fermentación discontinuo alimentado. 1,2 También es conocido como Zulaufverfahren en alemán
o ryukaho 2 (un método de adición de flujo) en Japonés. Obviamente, este tipo de operación es una operación
de reactor semi- Utilizado para reacciones químicas y bioquímicas. En ingeniería medioambiental con residuos
tóxicos, este tipo de operación se conoce como un relleno y dibujar operación o como un reactor de
secuenciación por lotes. En la ingeniería biomédica, el proceso respiratorio en fuera del pulmón que se conoce
como palo y globo, como el volumen de los pulmones aumenta Inhalamos y disminuimos a medida que
exhalamos, que es una forma de proceso alimentado por lotes
1.3.1 Razones para las Culturas Fed-Batch
El cultivo de lote alimentado se ha practicado desde principios del siglo XX, cuando se En la producción de
levadura a partir de mosto de malta que la concentración de malta en el medio tenía que ser mantenido lo
suficientemente baja para suprimir la formación de alcohol y maximizar el rendimiento de 3 células de
levadura. Una alta concentración de malta aceleraría el crecimiento celular, que a su vez Causaría condiciones
anaeróbicas que favorecían la formación de etanol y Rendimiento de las células de levadura. Se añadió mosto
adicional a una velocidad que siempre fue menor que La velocidad a la que las células de levadura podrían
utilizarla. Alimentación intermitente o incremental de Nutrientes a un medio inicialmente diluido se introdujo
a continuación en levadura a gran escala Producción para mejorar los rendimientos de la levadura mientras
obvia la producción de etanol. 4 Sin embargo, hay algunas especulaciones de que una pequeña cantidad de
etanol puede ser necesaria Para asegurar la calidad de las levaduras del panadero. Mediante la manipulación de
una o más velocidades de alimentación, la operación alimentada por lotes puede Proporcionan un medio único
de regular la concentración de compuestos que controlan Las principales tasas de reacción y, por lo tanto, puede
proporcionar una ventaja Batch o funcionamiento continuo. Si es ventajoso controlar independientemente la
Concentración de más de una especie, se puede utilizar más de una corriente de alimentación.
La operación alimentada por lote descrita anteriormente también se puede demostrar que produce una supe-
(Un rendimiento más alto o una mayor productividad) para ciertos productos químicos y Reacciones
bioquímicas que presentan un máximo en la velocidad de reacción global o Maximizar la selectividad de un
producto específico en sistemas de reacciones Como reacciones biológicas y reacciones de polimerización. Los
ejemplos incluyen inhibidos Reacciones enzimáticas y reacciones autocatalíticas, reacciones en las que uno de
los productos Actúa como catalizador, ciertas reacciones adiabáticas y reacciones paralelas en serie. Fermenta-
Cultivos celulares son reacciones autocatalíticas en el sentido de que las células A su vez producen células
adicionales, y no es sorprendente encontrar que la mayoría de los Las fermentaciones industrialmente
importantes se llevan a cabo en modo alimentado por lotes. Extenso revisiones de técnicas de fed-batch 5-
7,145,146 están disponibles en otros lugares

1.3.2 Aplicaciones de las Culturas Fed-Batch

La más antigua y primera aplicación industrial bien conocida de una operación alimentada por lotes fue
Introducido después del final de la Primera Guerra Mundial. Fue la producción de células de levadura en la que
Azúcar (glucosa) se añadió de forma incremental durante el curso de la fermentación a Una baja concentración
de azúcar para suprimir la formación de alcohol. 3 La fabricación De la levadura por cultivo alimentado por
lotes ha pasado por una serie de mejoras y es Proceso alimentado industrialmente importante de la hornada. Este
proceso fue seguido históricamente por Fermentación de penicilina, en la que la fuente de energía (por ejemplo,
glucosa) y precursores (Por ejemplo, ácido fenilacético) se añadieron de forma incremental durante el transcurso
de fermentación 8 para mejorar la producción de penicilina. Antes de esta práctica, un metabolismo lento Pero
se usó un sustrato más caro, lactosa, en lugar de glucosa en un cultivo discontinuo.
El exceso de suministro de una fuente de carbono dio como resultado un mayor crecimiento micelial y una
penicilina baja , Mientras que la insuficiencia produjo un crecimiento micelial más lento y, finalmente,
Formación de penicilina más lenta. Las preguntas más importantes que se deben hacer en las operaciones de
cultivo Los compuestos deben ser alimentados y cómo se deben agregar. Las respuestas dependen Sobre las
características de los organismos utilizados. Los candidatos principales en la lista de
Los compuestos que pueden ser alimentados durante el curso de la operación incluyen el límite- Inductores,
precursores, una fuente de carbono, una fuente de nitrógeno, un fosfato Fuente, inductores y otras fuentes de
nutrientes. Los patrones de alimentación son de bucle abierto O retroalimentación controlada para mantener
algunas variables clave a valores óptimos constantes Tales como la tasa de crecimiento específico, cociente
respiratorio, pH, presión parcial de carbono Dióxido, oxígeno disuelto, concentración de sustrato y algún
metabolito concentrado Traciones. A veces, las velocidades de alimentación óptimas requieren mantener estos
parámetros Siguen ciertos perfiles óptimos en lugar de mantenerlos en valores constantes. Para maximizar la
tasa de formación de células para el caso de rendimiento de masa celular constante, Es evidente que la
concentración de sustrato debe mantenerse al valor que maximiza la tasa de crecimiento específico, S m, hasta
que el reactor está lleno. Por lo tanto, también es obvio que la concentración inicial de sustrato debe ser S m, es
decir, S (0) = s m, y que la concentración de sustrato debe mantenerse a S m en todo el Curso de
fermentación. Esto conducirá a la concentración máxima de células en la Final de la carrera. Para lograr esto,
la velocidad de alimentación debe estar regulada la constante a S m concentración de sustrato. Si no es posible
ajustar el valor inicial concentración de sustrato a S m por una razón u otra, la concentración de sustrato
Debe ser llevado a este valor tan pronto como sea posible aplicando al principio el velocidad de alimentación
de sustrato máxima (S (0) <S m) o un período de lotes (S (0)> S m) y luego la regulación a partir de entonces
para mantener la concentración de sustrato permanezca en S m hasta El fermentador está lleno. Una vez que el
fermentador está lleno, se ejecuta en un modo por lotes para reducir
La concentración de sustrato a un nivel deseado, y las células que contienen el producto Se cosechan. Esta es
la base para el caso más simple de un cultivo alimentado por lotes. Cultivos de lote alimentado con la adición
de nutrientes, precursores, inductores u otros
Aditivos han sido probados en laboratorios, plantas piloto y plantas industriales para producción de diversos
productos 2,5,6,7,9 tales como levaduras; Antibióticos; aminoácidos; multa
Ácidos orgánicos; Enzimas; Disolventes alcohólicos; Productos de ADN recombinante; Proteínas; Cultivos de
tejidos, incluyendo hibridomas y células de ovarios de hámster chino (CHO); insecto
Culturas celulares; y otros. Estos se enumeran en la Tabla 1.1
1.1.
1.3.3 Un ejemplo simple de una cultura Fed-Batch
Consideremos un ejemplo simple para ilustrar la ventaja de controlar el Concentración del nutriente
limitante. Considere el caso más simple de células en crecimiento, O un proceso de fermentación en el que la
concentración de metabolito intracelular es Proporcional a la concentración celular para que la producción de
metabolitos se maximice Maximizando la producción de masa celular. Supongamos que la tasa de crecimiento
Células se inhibe el sustrato. En otras palabras, la tasa aumenta primero con el sustrato concentración
alcanzando un valor máximo de μ m en la concentración de sustrato de S m y luego disminuye con el aumento
adicional de la concentración de sustrato. En otra Palabras, la tasa es una función no monotónica de la
concentración del sustrato, como se muestra
En la Figura 1.1. Si la tasa de crecimiento específico aumenta asintóticamente con la concentración de sustrato
Al máximo, como en el caso de la cinética monótona de tipo Monod, como Figura 1.2, entonces es obvio
mantener la concentración de sustrato lo más alta posible Para maximizar la tasa de crecimiento
específico. Debido a que la tasa de crecimiento total es el producto de

1.4 Alternativas a las Culturas Fed-Batch

Hay operaciones alternativas posibles. ¿Por qué no funcionar como una cultura continua con una tasa de
dilución adecuada para mantener la concentración de sustrato en S m, lo que corresponde A la tasa de
crecimiento específica máxima? Primero, asociado con una cultura continua Es el problema de la
contaminación por otros microorganismos, ataque por fagos, y Potenciales mutaciones durante un largo período
de operación. Además, el subStrate concentración S m puede ser sustancial y puede necesitar ser reducido aún
más para Separación más fácil o un mejor rendimiento. Por lo tanto, se requiere un reactor adicional para
Reducir la concentración del sustrato, tal como un lote o un gran volumen de fermentor. Además, hay pruebas
de que la tasa máxima de producción de algunos productos Puede lograrse en un entorno dinámico en el que
las células deben seguir creciendo, Por pequeño que sea. Por ejemplo, un intento de reemplazar los fermen-
tación por un cultivo continuo no ha sido exitosa para penicilina 144 y bacteriana
Antígenos 145 cultivos de alimentación discontinua proporcionan condiciones de crecimiento para las células
transitorias (menudo-
Veces el crecimiento exponencial de las células). A lo largo de esta línea de pensamiento, es bien sabido que
Los datos cinéticos experimentales de un tipo de biorreactor no se pueden utilizar para diseñar Otro tipo de
biorreactor, en particular, los datos de lote o de lote alimentado pueden no ser válidos para Biorreactores
continuos, y viceversa. Es mejor utilizar los datos experimentales obtenidos Del tipo de biorreactor que se va a
utilizar eventualmente para evitar esta dificultad. Esta Se supone que se debe a simplificar las suposiciones que
hacemos para un biorreactor complejo

REFERENCIAS

Por el contrario, las reacciones químicas son relativamente simples en términos de nuestra comprensión, Y por
lo tanto, los datos cinéticos obtenidos de un tipo de reactor químico usualmente Para cualquier otro tipo de
reactor
 TECNOLOGÍA DE LA CULTURA FED-BATCH
Abtrasc El uso de procedimientos alimentados por lotes ofrece claras ventajas sobre otros modos de Operación
de boreactores, y es una técnica ampliamente investigada. Estas ventajas son discutidos; Algunos de los usos
de los procedimientos de alimentación por lotes y los métodos asociados de Modelado y control

Introduccion Hay tres modos de operación de biorreactores identificados, a saber, lote puro, Continua, y
alimentada o seml-lote. En un proceso de fermentación discontinua Nutrientes requeridos, con la excepción de
la corrección del pH y el oxígeno si es aeróbico, Están en el medio de cultivo antes de la inoculación.
Fermentación continua Tienen un flujo de entrada y salida de medio nutriente tal que el medio Volumen en el
bloreactor permanece constante y todos los nutrientes en el medio son Presente a una concentración constante.
En el caso de un proceso alimentado por lotes, uno o Se suministran más nutrientes al biorreactor pero sin salida
durante la operación. Este procedimiento significa que la concentración de uno o más de los nutrientes El medio
puede ser manipulado externamente alterando la velocidad de alimentación durante la carrera De acuerdo con
la retroalimentación de los parámetros de control tales como la disolución (DO) (41), el pH o el cociente
respiratorio (RQ) (55). Alternativamente, el feed-forward Se pueden emplear estrategias utilizando perfiles de
alimentación preprogramados. Las ventajas Que estas técnicas dan al operador una tecnología de proceso
mejorada Dio lugar a su amplia aplicación industrial. Yamane y Shimizu (59) Inicialmente clasificar las
operaciones alimentadas por lotes en aquellas con control de retroalimentación y Los que no tienen, y luego se
subdividen de acuerdo con la estrategia de alimentación adoptada. Estos incluyen tasas de alimentación
constantes y exponenciales y procedimientos optimizados. Los primeros trabajos tienden a utilizar la
alimentación intermitente o las tasas de alimentación constante, Los avances en las técnicas de medición y
control hacen posible utilizar Sofisticados programas. El avance correspondiente en los sistemas informáticos
ha Resultó en su uso extensivo para el control y la optimización de los lotes alimentados Operaciones.
Recientemente se han publicado varias revisiones de dichas solicitudes (18, 39, 43). La ventaja principal que la
técnica fed-batch ofrece sobre lote puro Cultivo es la capacidad de controlar o alterar la concentración de uno
o más Nutrientes dentro del medio de cultivo. Por lo tanto, es ideal para procesos en los que Ya sea el
crecimiento celular o la formación del producto es sensible a la concentración del Limitante. También puede
permitir la sustitución de fuentes Nutrientes con componentes más definibles para que altos niveles de
reproducibilidad Y la previsibilidad sea posible

INHIBICION DEL SUSTRATO

En muchos procesos el nutriente utilizado para el crecimiento por el organismo, tales como Etanol o compuestos
aromáticos, inhibirán el proceso de crecimiento a Concentraciones. Esta inhibición puede ser superada usando
un procedimiento alimentado por lotes. Renard et al (41) previenen el efecto tóxico del metanol sobre
Pseudomonas AMI Utilizando adiciones de metanol en respuesta a la tensión medida de oxígeno disuelto. Esta
limitación del crecimiento evitada debido a la toxicidad del metanol oa la falta de Metanol. Similarmente,
Silman (46) encontró inhibición de la glucosa de Zymomonas En concentraciones superiores al 8% p / v, pero
superó esta inhibición
Alimentando la glucosa y así fue capaz de mantener productividades de etanol mayores De 4,5 g de etanol / L
/ h.
Para obtener altas concentraciones celulares en un cultivo discontinuo es necesario suministrar Altas
concentraciones iniciales de nutrientes. Tales valores altos pueden no ser posibles,
Ya sea debido a la inhibición del sustrato, no se observa a concentraciones más bajas, o Debido a las bajas
solubilidades de los sustratos; Sin embargo algunos procesos son sólo Económicamente atractivo si son posibles
altas concentraciones celulares. Suzuki et al (49) produjeron concentraciones de células de levadura superiores
a 150 g / l utilizando una alimentación de Todos los nutrientes. Controlaron la alimentación de sustrato (etanol)
usando un Teflon poroso Sensor de tubería y un control de pH para su fuente de nitrógeno. Un equilibrio de
masas, Se utilizó el principio para preparar y alimentar una solución de sales combinadas a una velocidad ligada
A la alimentación de etanol o amoniaco. El monitoreo de la concentración de etanol fue Utilizado por Huang y
Chu (21) para alimentar etanol para Candida utilis, obteniendo Concentraciones celulares de 64 g / l. Se superó
un problema de insolubilidad del sustrato Por Rodríguez y Enríquez (42) para obtener rendimientos de 19,9 g /
l de Cellulomonas sobre Bagazo de caña de azúcar

REPRESIÓN CATABOLITA
Si un organismo está utilizando una fuente de energía de carbono rápidamente metabolizable tal como Glucosa,
la disminución resultante en la concentración de AMP cíclico intracelular causa Enzima biosíntesis para
cesar. Este fenómeno se conoce como represión catabólica. Los procesos de lotes de Fed, limitando la tasa de
crecimiento debido a la alimentación
Fuente de carbono, despresurizar la formación de los productos deseados. Donde el La medición directa de las
tasas de crecimiento específico o de las concentraciones Difícil, las correlaciones indirectas tienen que ser
utilizadas para los propósitos del control. Los Una de las más comunes es la producción de antibióticos como
la penicilina.
Para crear una estrategia de control para la adición de azúcar en la producción de penicilina, Tanto la
concentración celular como la velocidad de crecimiento BlaSt sean conocidas. Sin embargo, continua La
medición de glucosa en el medio es difícil y por lo tanto una técnica de
Equilibrio bajo condiciones limitadas de carbono ha sido desarrollado por Mou y Cooney (30, 31). Inicialmente,
se utilizó la tasa de evolución del dióxido de carbono (CER) para calcular
La tasa de crecimiento y el dióxido de carbono total evolucionado se encontró para dar una precisión Estimación
de la cantidad de celio presente. Su estrategia de control adaptativo Permitió la adición de carbono para
controlar la tasa de crecimiento hasta que el deseado Se obtuvo la concentración celular. En ese momento, la
fase de producción fue
Iniciado por la alimentación lenta, controlado por una estimación de la tasa de crecimiento específico Y un
valor de la concentración de células obtenida por el efecto global e instantáneo
Balanzas de carbono. Nestaas y Wang (33, 34, 35, 36) utilizaron una filtración on-llne Sonda para caracterizar
la acumulación y degradación de la blomassa celular Cuantitativamente y fueron capaces de correlacionar la
densidad k
Síntesis de penicilina (35). Esto se conVidió entonces con una alimentación predeterminada
Para optimizar la síntesis de penicilina (35, 36). La sonda proporcionó
Sistema de control de retroalimentación para manipular el perfil de alimentación de Calculado a partir de un
modelo matemático. Nelligan y Calum (37) utilizaron un Sistema de control anticipatorio que mide la
producción de dióxido de carbono en lugar de Carbono, y fueron capaces de obtener una buena correlación con
sus predicciones Comportamiento utilizando un micro-coR ~ uter para controlar a condiciones óptimas. Trabajo
anterior Sobre la producción de penicilina se encuentra en la tabla de Yamane y Shimizu en su Alimentadas por
lotes (5 g).
Otra área de interés reciente en el que la represión catabollte ct que superar es en
La producción de celulasa usando fermentación por lotes alimentados (1, 16, 17, 19, 20, 26).
Esta técnica ha demostrado producir concentraciones de enzima más altas que Trabajo previo en cultivo
discontinuo o continuo. McLean y Podruzny (26) cita
Productos hasta 160 U.FPA / L / h utilizando alimentación intermitente de Solkafloc, y También la ventaja de
agitación y aireación más fácil debido a la menor
Densidades medias que en el crecimiento discontinuo. Hendy et al (19, 20) utilizaron un método continuo En
lugar de la alimentación intermitente de Solkafloc y citó una productividad máxima de 247 U./L/h a una
velocidad de adición de 2,5 g de celulosa / h. Recientemente se ha trabajado en la producción de tilosina por
Streptonlyces Fradlae, en la que Vu-Trong y Gray (51) encontraron mejores rendimientos
Previo obtenido utilizando una velocidad de alimentación constante (52, 53) alimentando tanto glucosa Y
glutamato monosódico de una manera cíclica. La producción de L-lisina por CoKynebacterlum ~ luta ~ cum,
usando un medio co-lexal basado en la glucosa, también ha (44) y la producción exitosa de cefalosporina C
Cephalosporium acre monium, utilizando una alimentación constante de glucosa y metionina

EFECTO DE GLUCOSA O CRABTREE

Se sabe desde hace mucho tiempo que en el cultivo de la levadura de panadería
Es una concentración crítica de glucosa por encima de la cual el sustrato es partlally Metabólico en etanol,
incluso en presencia de suficiente oxígeno disus-
Mantener el metabolismo aeróbico. Este fenonemon se conoce como la glucosa o Crabtree Efecto y el uso del
cultivo alimentado por lotes para evitar este efecto ha sido Investigado La concentración crítica en la que el
metabolismo parcial al etanol (55), que oscila entre 0,02 y 0,85 mM. Tiene Se ha sugerido que estas variaciones
se deben a diferencias en las cepas de levadura O sus condiciones fisiológicas. Los sustratos normales utilizados
en la industria son Melaza de remolacha o de caña y la coexistencia de los azúcares junto con la falta de Sensores
de sustratos directos en línea ha dado como resultado que el trabajo De modelos predictivos y parámetros de
control indirectos. Obra reciente de Dekker (5)
El análisis de gases de escape para calcular la tasa de absorción de oxígeno (OUR) y la Tasa de evolución del
dióxido de carbono (CER). Utilizando un modelo de diseño de dos celdas Y los modelos de equilibrio estético
y de estado simple para la biomasa y la biomasa Producción, genera las ecuaciones de salida para las variables
de estado, y Por lo tanto, una estimación de los valores de las variables de proceso usando matemáticas Técnicas
de filtrado. Estos valores se pueden utilizar para calcular las tasas óptimas de control para el substrato de
alimentación (6, 7) Otro método analítico desarrollado en Japón es el uso de un tubo poroso de Teflón Para
controlar la concentración de etanol en el medio y utilizar este parámetro para
Control de retroalimentación (2, 3). Nomba et al (32) utilizaron la concentración de gas de escape de etanol
Para retroalimentar el suministro de glucosa que estaba controlado inicialmente por una masa
Modelo de equilibrio. Un "sistema de control avanzado" fue desarrollado por Dalraku et al (2,3) usando la
concentración de etanol medida y una combinación de un PID (Proporcional-integral-derivado) y un modelo
matemático simple para
Permiten el autoajuste con mayor concentración celular. Este informe afirma bien
Control, el modelo que proporciona la estimación inicial de la tasa de alimentación exponencial Y el control
PID para compensar los errores causados por perturbaciones del sistema
O incertidumbres en el modelo.

OTROS SISTEMAS DE LOTES DE FED

Con el reciente aumento en el trabajo sobre cultivos celulares de plantas, Dalton (4)
Aumento de la tasa de producción específica de clorofila total y mayor potencial
La fotosíntesis mediante el uso de un cultivo alimentado con glucosa sobre un cultivo discontinuo puro de
Oclmum basllicum. Un mejorado
Producción de Cromatóforos de Rhodosplrllllum rubrum fue obtenido por Smeds y Enfors (47) mediante el
Intensidad de luz durante el transcurso del lote, que denominan lote alimentado. Horl et al (29) produjeron altas
concentraciones de sorbosa de sorbltol usando Alimentación intermitente de sorbltol a Glucanobacter subox ~
dans con DO-stat Control, obteniendo una concentración de 628 g / l de sorbosa después de 48 horas. Fond et
al (11, 12) han investigado la fermentación acetona-butanol con
Alimentación de glucosa, x ~ pérdida o piensos mixtos sobre un rango de tasas de alimentación. Ellos La
conversión final de azúcares en disolventes siempre aumentó con un Aumento de la tasa de alimentación.
Un estudio de la producción de etanol de Xylose por Pacl-ysolen. Tannophtlus por Woods y Htllts (56)
mostraron un rendimiento mejorado de etanol hasta 0,41 g / 9 ó 80 ~ De la teoría mediante el uso de la
alimentación lenta de xilosa, para dar una xilosa óptima Concentración de 5 a 8 g / l. Las concentraciones de
más de 10 g / l causaron ~ ylttol
Acumulación, mientras que por debajo de 3 g / l el etanol se oxtdtsed a acetato. Jefferles Et al (2Z) utilizaron la
alimentación interrumpida de glucosa para inhibir la respiración de Etanol producido por Pacholon tannophylus
a partir de xilosa, y aumentó su Etanol de 0,28 g / g a más de 0,41 g / g. Koshtmtzu et al (24) examinaron la
fermentación por lotes de melaza Saccharoces cerevisiae, tal como se utiliza comercialmente por las plantas
brasileñas de etanol,
Con el fin de cuantificar el efecto del inóculo, la concentración de alimento y la
Alimentación

CONTROL DE LAS TÉCNICAS DE LOTE DE FED

Como se ha indicado anteriormente, los sistemas de control para las operaciones alimentadas por lotes pueden
dividirse en Dos grupos, aquellos con y sin control de retroalimentación. Cuando no hay
Se utiliza el mecanismo de control de retroalimentación, se cambia la velocidad de alimentación Un perfil
predeterminado, que Yamane (59) ha clasificado como intermitente, Constante, exponencialmente creciente
(38), óptimo u otros. Si esta alimentación El perfil se utiliza para controlar el crecimiento de los
microorganismos, luego se El modelo matemático del proceso se utiliza generalmente para describir este
perfil. Los Modelos se generan específicamente para proporcionar una base para el control y pueden
Dividido en estructuras no estructuradas (fenomenológicas) o estructuradas (mecanicistas) Descripciones del
proceso. Los modelos no estructurados se utilizan para describir Las respuestas microbianas observadas, y no
permiten cambios en la composición celular como Los actos metabólicos cambian. Por otro lado, los modelos
estructurados
Permiten los mecanismos celulares que afectan al proceso global. Una variedad de Estructuras y grados de
complejidad disponibles. Ofrecen la posibilidad de
Predecir con precisión los efectos de las perturbaciones en el proceso global.
Las desventajas incluyen las dificultades para determinar las constantes cinéticas y En la resolución de grandes
números de ecuaciones. Sin embargo, los modelos estructurados son Haciéndose más prominente en la
operación de biorreactores controlados por computadora. Revisión general exhaustiva tanto de las estructuras
no estructuradas (g, 10, 39, 59) como estructuradas
Modelos están disponibles (18, 25, 39, 59).
Cuando el control de retroalimentación está disponible para la operación de alimentación por lotes, opera
idealmente
Con una señal directa tal como la concentración del sustrato de alimentación en el medio. Alternativamente, es
posible un control indirecto de retroalimentación
Parámetro observable que puede correlacionarse con la tasa de alimentación deseada es Controlados. Una
estrategia de control de retroalimentación directa es mejor que cualquier otro procedimiento Para minimizar las
desviaciones, pero la falta de sensores adecuados ha limitado el trabajo en esta área. Un sistema directo que ha
sido utilizado por Yamene (57, 58) es el Teflón Tubo sensor de etanol para controlar la adición de etanol como
única fuente de carbono
A un medio de sales para el cultivo de levadura. El sensor fue el desarrollado por
Dalraku et al. (2, 3). Ghoul et al (15) han desarrollado un muestreador automático que Que se utiliza con un
auto-analizador de glucosa para controlar una alimentación de glucosa a una levadura
Alimentada por lotes. Su sistema sería adecuado para otras aplicaciones en línea
Mediciones según sea necesario

La mst situación común hasta la fecha ha sido el uso de mediciones indirectas control de retroalimentación. Se
han utilizado varios parámetros, como el oxígeno disuelto (DO), cociente respiratorio (RQ), y el análisis de
gases de escape para calcular NUESTRO y CER. Como estos son parámetros indirectos, la correlación
matemática con el Se debe conocer el metabolismo de los organismos y la absorción del sustrato. Usos actuales
del trabajo
Algoritmos adaptativos y técnicas de filtrado de Kalman (8, 13, 14, 23, 28, 40, 45, 48) para obtener correlaciones
significativas. A menudo, el perfil de alimentación es controlado por
El modelo directamente en un modo de avance, y el control de retroalimentación se utiliza entonces Para fines
de corrección. Renard et al (41) han empleado una medida del óvulo disuelto para
La alimentación controlada por computadora del metanol en respuesta a una caída en DO. sin embargo Trabajo
más reciente tiende a controlar este tipo de alimentación del sustrato manteniendo
El nivel de DO en un set-point (DO-star). La producción de sorbitol por Mori et al (29) utilizaron esta técnica
Los gases de escape de un biorreactor se usan normalmente para calcular el OUR y el CER, Y de éstos el RQ. El
RQ se utiliza ampliamente como parámetro de control en
Producción de levadura de panadería, ya que los cuatro tipos de metabolismo de levadura El nivel del RQ (55)
y el RQ muestra una respuesta rápida a los cambios metabolismo. Dekker y Voetter (7) han desarrollado dos
controladores adaptativos para La regulación del RQ. Una se basa en el sistema modelo de dos compartimentos
(5), Y el otro es un controlador de autoajuste. Ambos sistemas usan el NUESTRO como Un parámetro de
control de retroalimentación del bucle interno. El método de equilibrio de masa de Mou y
Cooney (30, 31) para controlar la alimentación de glucosa para la producción de penicilina también
Se basa en una medición exacta del CER junto con las tasas de glucosa adición. En la fase de crecimiento, se
encontró que el CER era un buen indicador de la célula Tasa de crecimiento y dióxido de carbono total
evolucionado permitió una estimación de micelio presente. La estrategia de control adaptativo agrega suficiente
carbono para
Deseada, pero no sobrealimenta. A la concentración celular deseada,
Menores tasas de crecimiento se logran mediante la reducción de las tasas de
Los balances instantáneos de carbono permiten el cálculo del crecimiento celular específico tarifa.
La concentración de dióxido de carbono en el gas de salida resultó ser un buen indicador de El crecimiento de
Trlchoderma reesei utilizando la celulosa como sustrato principal y Alimentando celloblose para controlar la
tasa de crecimiento específica. Wakl et al (54) usaron un
Tiempo establecido para la concentración de dióxido de carbono en el gas de salida Control de la alimentación
de la celloblose, el control del pH también se ha utilizado para la alimentación Control. Esto es posible cuando
la utillsación de un medio particular Componente provoca una desviación del pH desde un punto de
consigna. Gottvaldova et al. (16)
Utilizó esta técnica para controlar una alimentación doble de carbono y nitrógeno para lograr Aumento de la
producción de celulosa por Trichoderma viride. Una técnica adicional que Es posible requiere que un
motabolito medible sea producido por el microbiano actividad. Este enfoque se ha utilizado para controlar la
fermentación de la levadura de Bakers La producción de etanol es detectable en el medio usando el Teflon (2,3)
o indirectamente por el vapor de etanol en el gas de salida (32). Los Principal limitación actual en el uso del
control de retroalimentación directa es la Sensores que pueden detectar químicos específicos en el medio
fermentador. Trabajo actual
Biosensores (50) que responden a productos químicos específicos ofrece la posibilidad de Mayor aumento en
la aplicación del control de retroalimentación en la fermentación tecnología.
CONCLUSIONES
La operación de la Fed-batch se está moviendo rápidamente de un procedimiento empírico a uno basado Sobre
modelos cinéticos y técnicas avanzadas de control. Un número creciente de Procesos se están operando de esta
manera. Los avances en las aplicaciones informáticas permiten
Procedimientos de optimización para ser examinados fuera de línea y control en línea de la computadora El uso
del control feed-forward y feed-back se está convirtiendo en una práctica común. UN La principal limitación a
la aplicación ulterior del control de retroalimentación surge de la De los sensores disponibles en línea