Métodos de Análisis.

Agosto - Diciembre 2019

PROBLEMARIO TERCER EXAMEN PARCIAL

1) De acuerdo al fundamento de la separación, defina con sus propias palabras qué es cromatografía

2) La ecuación de van Deemter es un modelo matemático que describe, en términos generales, cómo
afectan algunas variables fisicoquímicas en la altura H de los platos teóricos y por ende, en la
eficiencia de una columna cromatográfica. Con base en dicha ecuación resuelva:

a) ¿Qué significado tiene el coeficiente de difusión aparente o difusión de Eddy (A), y de qué forma es
afectado por la velocidad de elución?
b) ¿Cuál es el efecto de la velocidad de elución sobre la altura de cada plato teórico?
c) En términos globales, ¿cuáles son las precauciones que deben tenerse en el establecimiento de la
velocidad lineal de flujo de la fase móvil (denotada como u) para garantizar que el sistema
cromatográfico opere bajo condiciones óptimas?
d) ¿Qué representa el coeficiente longitudinal B y qué relación guarda con la altura del plato teórico (H)?
e) En un laboratorio de investigación se ha empleado desde hace tiempo un sistema cromatográfico en
el cual una corriente de gas helio funciona como fase móvil.
Si usted trabajara en dicho laboratorio y decidiera establecer las variables que afectan la eficiencia de
la columna que emplea gas como fase móvil, con respecto a la eficiencia de una columna en la que se
emplea un líquido como fase móvil, en cuál de ellas el coeficiente B tiende a causar un mayor impacto
sobre la altura H, ¿por qué?
R = En el cromatógrafo de gases, porque …

3) Describa brevemente el fundamento de operación de los siguientes sistemas de detección, indicando

en cada caso si estos son empelados en sistemas cromatográficos HPLC y/o cromatógrafos de gases.

a) Detectores de absorción UV-visible: HPLC y gases

b) Espectrómetro de masas: HPLC y gases
c) Detector de ionización de llama: Gases
d) Termoiónico de flama
e) Detector electroquímico
f) Detector de cambio de índice de refracción: HPLC
g) De captura electrónica

4) Defina qué es el tiempo muerto (tm) y describa de manera sucinta el protocolo experimental que
seguiría para determinar el valor de este parámetro en un sistema de cromatografía de gases.

5) ¿Cuál es el significado del factor de retención (k) y de qué forma afecta dicho parámetro en la
Resolución (Rs) de un sistema cromatográfico?

6) Tomando como referencia el proceso de destilación, P. Martin y R. Synge describieron la separación

de mezclas por cromatografía considerando a la columna cromatográfica como una torre de
fraccionamiento constituida por una serie de platos contiguos, denotados generalmente como N.
De acuerdo al análisis teórico propuesto por los investigadores citados, ¿qué representa cada plato
teórico (N) y cómo afecta la altura y el número de estos en la eficiencia del proceso de separación?

7) Una mezcla orgánica gaseosa formada por tres analitos, designados como R-279, R-247 y R-268, es
separada en un sistema cromatográfico. De acuerdo al cromatograma, se registra un tiempo muerto
de 0.89 minutos; un pico a los 5.9 minutos, con una anchura (w) = 0.63 minutos, correspondiente a la

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elución del analito R-279; la elución del analito R-247 se detecta a los 6.7 minutos, con un valor de w =
0.22 minutos; y la del analito R-268 a los 9.7 minutos, con un ancho de pico = 1.13 minutos.

a) De acuerdo a las características de la mezcla qué sistema cromatográfico sería el más adecuado para
su separación.
b) Determine el factor de retención (k) para cada uno de los analitos.
kR-279 = 5.63
c) Calcule el factor de selectividad () para la pareja de analitos R-279/R-247 y para el par R-247/268.
αR-279,R-247 = 1.16
d) ¿Cuál es la resolución del sistema cromatográfico en la separación de los analitos R-247/R-268?
Rs = 4.4
e) Determine la longitud de la columna (en m), si con base en la evidencia experimental, la altura de
cada plato teórico (H) es equivalente a 0.2 cm.
L = 11.62 m

8) Una bebida gaseosa es analizada mediante HPLC, después de efectuada la separación se registran dos
analitos: A que eluyó a los 549 segundos y B con un tiempo de elución de 615 segundos. El ancho de
banda (o pico) w fue de 21 y 19 segundos, respectivamente.
Con lo anterior:
a) Proponga las características de las fases estacionaria y móvil para llevar a cabo la separación de la
muestra referida, siguiendo el principio fisicoquímico de adsorción.
b) Determine el número de platos teóricos promedio (N) y la altura H de cada uno de ellos, si se sabe
que la columna tiene una longitud de 0.15 m.
N = 13850 y H = 1.08x10-5 m
c) ¿Cuál sería la nueva longitud de la columna y el número de platos teóricos si pretende incrementar el
valor de la resolución original 1.5 veces, conservando la altura H de cada plato teórico (H obtenida en
inciso b)?
N = 31163 y L = 0.34 m
d) ¿Cuál será el tiempo necesario para eluir ambos analitos (A y B), si se realiza la modificación a la
longitud de la columna sugerida en el inciso anterior? Mencione, ¿qué implicaciones prácticas pudieran
existir como consecuencia de la variación en el tiempo de elución?
tB = 23 minutos
Las implicaciones prácticas como consecuencia de aumentar el tiempo de elución son …
e) Proponga dos estrategias, adicionales a la modificación de la longitud de la columna, para mejorar la
resolución (Rs) del sistema cromatográfico en estudio.

9) Una mezcla gaseosa es separada en un equipo de cromatografía de gases utilizando una columna
capilar con un diámetro interno de 300 m.
La mezcla se adicionó con un volumen de gas metano, cuyo pico de elución se presentó a los 73
segundos. Después de analizar el cromatograma, se identificaron tres analitos denotados con las
literales t, w y z.
Con base en los datos referidos y tomando en cuenta que el espesor de la fase estacionaria adherida a
la columna es de 1.5 m, resuelva lo siguiente:

a) Estime el factor de retención (k) para el analito t, si se sabe que en el equilibrio, dicho analito
presentó un coeficiente de reparto (K) de 320.13 unidades.

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SUGERENCIA: considere que el área de la sección transversal de la columna se puede estimar como
*(di/2)2, y el área de la sección transversal de la fase estacionaria equivale a *Ds*l, donde:
di = diámetro de la cavidad interior (espacio de la columna por el cual puede fluir la fase móvil
libremente)
Ds = diámetro de la columna de centro a centro de la fase estacionaria = 2rs
rs = radio de la columna hasta el centro de la fase estacionaria
l = espesor de la fase estacionaria
kt  6.5
b) Si el analito w eluyó a los 9.8 minutos después de haber iniciado la corrida cromatográfica, ¿cuál es el
factor de retención (k) para este analito?
kw = 7.06
c) Considerando que el tiempo de retención del analito z es de 12 minutos, calcule el factor de
selectividad () para el par de analitos w y z?

10) En un cromatógrafo de gases se inyecta una mezcla de benceno, metano y tolueno. El pico del metano
es registrado a los 40 segundos, el del benceno a los 251 segundos, mientras que el tolueno eluye a los
330 segundos. Con base en los datos:

a) En el ejemplo anterior, ¿qué tiempo de retención considera como el tiempo muerto (t m), por qué y
qué representa este parámetro?
b) Calcular el tiempo de retención ajustado y el factor de retención (k) de cada analito
R = t´R del benceno = tS del benceno = 211 segundos
c) Determinar el factor de selectividad (retención relativa) 
d) Con base en el fundamento general de la separación cromatográfica, ¿a qué se debe la diferencia en
los tiempos de elución entre el benceno y el tolueno?

11) Una muestra de suelo es analizada mediante HPLC, después de efectuada la separación se obtiene un
cromatograma similar al representado en la figura 1.

Figura 1. Elución de muestra de suelo por HPLC

De acuerdo al análisis del cromatograma anterior (figura 1) se sabe que el pico L eluyó a 77 s, por su parte el M
lo hizo a 84 s. El ancho de banda (w) para los analitos fue de 1.5 s (L) y 2.8 s (M); con los datos proporcionados:

a) Calcule la resolución (Rs) del sistema cromatográfico.

b) Determine el número de platos teóricos promedio (N) y la altura H de cada uno de ellos, si se sabe que
la columna tiene una longitud de 0.25 m.

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c) Calcule la longitud de la columna (en cm) y el número de platos teóricos, si pretende reducir en un
55% el valor de la resolución obtenida en el inciso a, conservando la altura H determinada en el inciso
anterior (b).
d) ¿Cuál será el tiempo necesario para eluir a las sustancias L y M si se realiza la modificación a la longitud
de la columna sugerida en el inciso c?

12) Los componentes A y B de una mezcla separada por HPLC tienen tiempos de retención que difieren en
24 s. El primer pico eluye a los 15 minutos, y las anchuras de ambos picos pueden considerarse
prácticamente iguales.

a) Si el tiempo muerto es de 65 segundos, determine el número de platos teóricos (N) necesarios para
obtener los siguientes valores de resolución:
a.1) 0.75,
R = N  12996
a.2) 0.90,
a.3) 1.25
R = N  36100
a.4) 1.5

b) ¿Cuál sería la longitud de la columna necesaria para lograr la resolución del inciso a.3 si se espera que
cada plato teórico tenga una altura de 8.5x10-4 cm?
L = 30.685  31.0 cm
c) ¿Qué ocurriría con la resolución de la separación si la anchura del segundo pico fuera del doble de la
anchura del primer pico?
d) ¿Cómo podría invertir el orden de elución de los analitos A y B?

13) Una mezcla orgánica formada por benceno y tolueno es separada mediante cromatografía de gases.
De acuerdo al método se inyecta gas metano a fin de estimar el valor del tiempo muerto (t m) del
proceso de elución, presentando un pico agudo a los 42 segundos.
La columna cromatográfica tubular abierta tiene un diámetro interior de 250 m y está recubierta en
su cara interior con una fina capa de fase estacionaria de 1.0 m de espesor.
Si el área de la sección transversal de la columna se puede estimar como *ri2, y el área de la sección
transversal de la fase estacionaria equivale a *Ds*l, donde:
ri = radio de la cavidad interior. La cavidad interior se define como espacio de la columna por el cual
puede fluir la fase móvil libremente.
Ds = diámetro de la columna de centro a centro de la fase estacionaria
l = espesor de la fase estacionaria

a) Si se sabe que en el equilibrio el benceno presentó un valor de K = 308.75 unidades, estime el factor de
retención (k) para este analito.
b) Si el tolueno presenta un tiempo de retención equivalente a 5.2 minutos, calcule la fracción de tiempo en
la que dicho analito permanece en la fase móvil desde la aplicación de la muestra hasta su elución.
R = 0.14

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14) Mencione brevemente la diferencia entre cromatografía de adsorción en fase reversa y cromatografía
de adsorción en fase normal.

15) ¿Por qué es importante controlar el pH de trabajo durante la separación de mezclas por
cromatografía de intercambio iónico?

2+
16) Se determina la concentración de Cd en una muestra de agua tratada, la cual fue caracterizada en un
sistema de cromatografía líquida de alta resolución.
De acuerdo al protocolo, se preparó una disolución estándar pesando 0.0145 g de Cd(SO4), los cuales
se disolvieron en un matraz volumétrico de 500 mL. A partir de la disolución estándar, se prepararon 6
diluciones (Tabla 1, diluciones respecto a la concentración original), y 20 μL de cada dilución se
inyectaron, de manera independiente, en un cromatógrafo HPLC equipado con una columna de 20 cm,
empacada con una resina cargada con grupos sulfónicos como ion fijo. IMPORTANTE: entre la
aplicación de cada dilución, la columna se lavó, se estandarizó el flujo de fase móvil y se fijaron las
mismas condiciones de elución.
Posteriormente, la columna se lavó y se inyectó una alícuota de 20 μL de la muestra problema, y se
eluyó bajo las mismas condiciones que las diluciones estándar.
En la tabla 1 se reportan los valores del área bajo la curva (ABC) registrados por el equipo, para las
diluciones estándar y la muestra problema.

Tabla 1. Determinación cuantitativa de Cd2+ por HPLC

Dilución Concentración de Cd2+ ABC
(g/L) (u2)
1:100 0.000157 8.1
1:50 13.5
1:10 34.5
1:5 54.5
1:4 68.9
1:2 125.6
Muestra problema 47.9

Con la información reportada en la tabla 1 y tomando en cuenta el principio de separación de mezclas

por cromatografía de intercambio iónico y el fundamento de operación de los equipos HPLC, resuelva:

a) En términos generales, ¿qué característica(s) del sistema cromatográfico HPLC, mejoran la

resolución durante la separación de mezclas?
b) Con base en las características del ion fijo, defina si el intercambiador utilizado en el equipo HPLC
es de tipo catiónico o aniónico
c) La muestra de agua tratada contenía los siguientes iones: Cd2+ (el analito), Na+, Ca2+, Fe3+, Pb2+.
Considerando los factores que influyen la elución de sustancias en una cromatografía de
intercambio iónico, determine el orden de elución de los iones referidos.
d) Determine la concentración de Cd2+ (en ppm) presente en la muestra problema.
R = 2.63 ppm

17) Mencione y describa brevemente, una aplicación de la Cromatografía por Exclusión Molecular

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18) En los procesos de separación de mezclas por Cromatografía de Afinidad:

a) ¿Cuál es la función del ligando de afinidad?
b) ¿Qué propósito tiene la inclusión de brazos espaciadores en la matriz que forma parte de la fase
estacionaria?

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