Prática N°333

UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN CRISTOBAL DE HUAMANGA
FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS
ESCUELA DE FORMACION PROFESIONAL DE AGRONOMIA.
CURSO:
GENÉTICA AGRÍCOLA (PV-244)
SEMANA N° 3 GRUPO N° 1
ALUMNO:
MORENO QUISPE, JUAN CARLOS
PROFESOR DE PRACTICA:
ING. GERMAN FERNANDO DE LA CRUZ LAPA
AYACUCHO – PERU
OBJETIVOS:
 Conocer el fundamento teórico – práctica de la tecnología: polimerasa
Chain Reaction (PCR)
 Repasar en forma práctica las etapas del PCR
 Interpretar los resultados de fotodocumentación del ADN con electroforesis
INSTRODUCCIÓN:
La invención de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) por K. Mullis y sus
colaboradores en 1985 ha revolucionado la biología molecular y la medicina
molecular (Saiki et al. 1985). La reacción en cadena de la polimerasa es una
técnica in vitro utilizada para amplificar enzimáticamente una región determinada
de ADN situada entre dos regiones de ADN cuya secuencia se conoce. Mientras
que antes solo podían obtenerse cantidades mínimas de un gen específico, ahora
incluso un único ejemplar de un gen puede amplificarse con la PCR hasta un
millón de ejemplares en tan solo unas pocas horas. Las técnicas de PCR se han
hecho indispensable para muchos procedimientos comunes, como la clonación de
fragmentos específicos de ADN, la detección e identificación de genes para
diagnóstico y medicina legal, y en la investigación de modelos de expresión de los
genes. Más recientemente, la PCR ha permitido la investigación de nuevos
campos, como el control de la autenticidad de los alimentos, la presencia de ADN
modificado genéticamente y la contaminación microbiológica. Para comprender los
principios de la PCR y sus aplicaciones, debe atenderse en primer lugar a la
naturaleza de la molécula del ADN, por lo que en la sección siguiente se describen
la estructura y la replicación del ADN.
CUESTIONARIO:
1. cuáles son los componentes del Mix de PCR.
Los viales de DNA AmpliGEL Master Mix-Strips contienen Biotools DNA
Polymerese; dNTPs; MgCl2; Buffer de Reacción y estabilizantes a
concentraciones idóneas para llevar a cabo una gama amplia de reacciones de
amplificación de ADN.
Alteraciones en las concentraciones de MgCl2, dNTPs y enzima usualmente
influyen poco en la mejoría de sensibilidad o especificidad de la prueba múltiple.
Algunas publicaciones basadas en los procesos de deriva y selección avalan
incrementos excesivos en la concentración de estos componentes (3,15),
adiciones que deben ser manejadas con prudencia y acorde a lo que se desea
investigar.
CICLAJE:
Se debe tener en consideración que la mayoría de las modificaciones que afectan
la reacción están directamente relacionados con los factores que afectan
alineamiento y extensión (2). La temperatura de alineamiento resulta más
dependiente de un correcto balance entre primers. Por su parte, la temperatura de
extensión lo es de la actividad enzimática y dNTPs.
2. por qué se utiliza agarosa y/o poliacrilamida.
 Agarosa: polisacárido, producto de algas (composición similar al agar –

agar), se disuelve en caliente (50 – 60°C) y al enfriar solidifica formado un
gel, de alta porosidad.
 Poliacrilamida: el gel es el resultado de la polimerización química de una

mezcla de acrilamida y bisacrilamida. Regulando la concentración de
ambas y su proporción se consiguen distintas porosidades, siempre
menores que la que los geles de agarosa.
3. después de electroforesis, para observar el ADN, porque se utiliza luz
ultravioleta?
El transiluminador más común es el que utiliza radiación ultravioleta, en un
espectro que varía entre longitud de onda de 100 a 400 nm. La energía
proveniente de la luz utravioleta excita los fluoróforos usados para marcar
moléculas como el ADN (ARN o proteínas), lo que permite ver una representación
en forma de banda de la agrupación de estas moléculas. En otras palabras, el tipo
de transiluminador depende de qué longitud de onda necesita en fluoróforo para
ser excitado.
Por lo general, el espectro UV-C (100 – 280nm), ha sido el más utilizado en
laboratorios; los fabricantes de transiluminadores se refieren comúnmente a este
tipo de equipo asociándolo con un rango espectral de 300 o 312 nm. Existe otras
opciones con rangos espectrales de hasta 254 o 365 nm. (ITM. Institución
Universitaria).
4. cuántas copias de ADN se tendrá si se repiten 35 ciclos de PCR?
Número de copias
1 2 4 8 16 32 64
0 1 2 3 4 5 6
# ciclos
232=4294967296
Bibliografía:
http://biotools.eu/documentospdf/DNA%20AmpliGel%20Master%20Mix-
Strips.esp.Ed%2003.Febrero%2016.pdf
file:///C:/Users/ASUS/Downloads/Dialnet-PCRYPCRMultiple-
4796903%20(1).pdf
http://biomodel.uah.es/tecnicas/elfo/inicio.htm

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2. por qué se utiliza agarosa y/o poliacrilamida.

 Agarosa: polisacárido, producto de algas (composición similar al agar –

 Poliacrilamida: el gel es el resultado de la polimerización química de una

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