Sección hematología

Paciente Neo hasta 1 mes de vida

Lactantes: punción digital

anular,mayor, y meñique

Anticoagulantes en hematología

Inhibir la coagulación sanguínea/ evitar

la agregación plaquetaria

No alterar el tamaño celular

No producir hemólisis

No alterar la morfología celular

Heparina: se utiliza para estudios eritrocitarios, mantiene la forma del glóbulo rojo, no produce hemolisis.

Es utilizado para la resistencia osmótica, estudios enzimáticos de los rojos o para la electroforesis de hemogloibina,
pero también se puede hacer con Edta

Citrato para pruebas de coagulacion

Muestra para la realización del HEMOGRAMA

Coloración MG-G

May Grunwald: tiene como base el metílico (3 min) , la función de este paso en la coloración es fijar los elementos

Se le agrega agua y lo dejo 1 min, tiene la función principal de precipitar, el colorante termina de colorear la formula

Se agrega Giemsa entre 10 y 15 min

Recuento de leucocitos (manual)

El RL total se realiza en una muestra de S. entera tras la lisis de los hematíes. Se diluye la muestra homogeneizada en
líquido de Turk, y se procede a realizar el recuento utilizando cámara de rto. celular al microscopio. El valor total se
calculará teniendo en cuenta el área contada, la dilución, y la altura de la cámara.
Líquido de Turk 2 ml de Ac. acético glacial 100 ml de H20 destilada (1ml. de violeta de genciana o Azul de metileno)

+ Coloración supravital que puede colorear o ingresar a las células sin la necesidad de estar fijadas. Azul brillante de
cresil para contar los reticulocitos

-0.38 ml. L Turk + 20 microlitros de S/ Dil = 1:20 - Llenar la cámara por capilaridad / dejar reposar - Enfocar a bajo
aumento para chequear la distribución de los elementos - Contar en 40x los L presentes en los 16 campos de los 4
cuadros grandes (A) - Elegir contar siempre células sobre líneas superior / derecha o inferior/ izquierda ( x ej) de los
bordes de un campo, para evitar agregar error al Rto.

Numero de leucos en mm3= Leucos contados x la dilución(1/20) x corrección de volumen(minutos 53 de charla)2,5

por regla de 3 x dilución, en este caso 20(2,5x20=50)

+ si la cantidad de globulos blancos fueran 100.000, en vez de contar los 4 cuadrantes , se cuenta todo y el volumen
seria 3 x3 x0,1, asi cambia el factor y se modifica el factor de dilución para poder contar

Finalidad del Turk es lisar todo lo que no tenga núcleo, si la muestra tiene eritroblastos no se van a lisar por lo que en
la cámara se contara como glóbulo blanco y el azul de metileno, lo que va a hacer es que el núcleo se vea de forma
más refringente. Se ve con poca luz porque no esta coloreada

Se usa la dilución 1/20, si el paciente tiene 150.000 blancos, hay que utilizar una mayor cantidad en la dilución yaque
sino es imposible contar. Para diferenciar en ORINA si son eritrocitos O levaduras se puede utilizar, se puede agregar
acetico al 2% porque el eritrocito se va a romper y la levadura queda (se puede usar turk)

Para Glob blancos

La diferencia entre lo que se conto entre cuadrantes no
debe ser mayor a 10, sino la cámara está mal cargada. Se
debe informar en las mismas cifras significativas
Hematocrito – microhematocrito(36 para mujer 38 o 39 para hombre)

- Muestra: - Sangre Capilar: punción digital o plantar usado

mayormente en pediatría. Importancia de punción correcta, para
minimizar errores - Sangre venosa / hemograma EDTA*

- Materiales: - Tubos capilares 7cm largo x 1 mm diámetro

heparinizados (rojo)para cagar desde el paciente- Tubos capilares ídem
SIN heparina* - Microcentrífuga ( 10-15000 g)

Microhematocrito

Muestra homogeneizada> microhematocrito> sellado>

microcentrífuga > 5 min> 12000 g Lectura: se mide la columna
eritrocitaria con respecto a la columna total ( %)
Recuento de
reticulocitos

Los reticulocitos son eritrocitos jóvenes, con remanentes de ácido ribonucleico ( ARN) citoplasmático, que tienen la
propiedad de reaccionar con con colorantes básicos ( azur B, azul brillante de cresilo, azul de metileno), adquiriendo
una coloración azulada o púrpura dichos gránulos o filamentos. La presencia de reticulocitos en S periférica es un
indicador preciso de la actividad eritropoyética y en el caso de una anemia la clasifica fisiopatológicamente. ( IPR >2,
IPR< 2) .Es una técnica indirecta y hay que enfocar en un campo de glob rojo homogéneo y lo divido por 4., cuento
un cuadrante y lo multiplico por 4. Ej si cuento 50 en un cuadrante lo multiplico por 4 y me da 200 por campo. Si el
extendido esta bien hecho tengo la misma cantidad de glóbulos rojos por lo que cuento campos seguidos hasta
llegar a los 1000 rojos. Voy a otro lado de extendido y cuento 1000 mas. La técnica dice que sea en 5000 rojos y de
ser posible en 2 vidrios para disminuir el error

Adultos y niños = 50-100 x 10^9/l. ( 0.5 - 2.5%) persona normal, si es regenerativa la anemia aumenta la cant retis

Lactantes ( a término) = 2-5%

Método: en tubo de plástico, añadir 2 o 3 gotas de colorante y agregar el mismo volumen de Sangre de muestra Ac
con EDTA, ( proporción mayor de S anémica, y menos policitémica)mezclar suavemente. Incubar a 37º 15-20
minutos. Volver a mezclar la suspensión y realizar varios extendidos con ella. >Microscopio> Recuento

Elegir áreas de distribución pareja y no distorsionada de hematíes.

Se deben contar al menos 1000 GR en campos seguidos ( en total 5000 GR y dos vidrios→disminuir el error)
Reticulocitos en n campos= X

GR en en campos = Y

Y GR que conte en todos los campos—— X reticulocitos

100-------------------- Reticulocitos %

Rto. Absoluto de reticulocitos= % x Rto. GR ( total)

Cuado hay anemia severa se expresa el Índice Reticulocitario Corregido Ret% x Hb o HTO medidos/ Hb o Hto
normales p la edad y el sexo

Los globulos rojos también se colorean porque en su

interior tiene ARN, son mas grandes, mas
transparentes,

*A los reticulocitos se le ven los puntos internos, y se

ven 2 puntos o 1 punto y 1 raya

Para saber si es retículo y no precipitado se tiene que ir

del foco junto con el glóbulo rojo al mover el micro.

Hay que buscar lugares en donde el rojo no este

distorsionado ej, con la cruz de malta

LA MUJER EMBARAZADA ESTA ANEMICA POR DEBAJO DE 11g de hemoglobina y mujer normal 12

Anemia ferropénica retis bajos

Si desarrolla síndrome de help en el que hay una anemia hemolítica, hay un aumento de reticulocitos
 Velocidad de sedimentación globular/
Eritrosedimentación

Es una de las pruebas más antiguas, relativamente

más sencilla y de bajo costo, para evidenciar algún
desbalance entre la relación Albumina/ Globulinas
y/ o estas y el paquete globular, lo cual se produce
más frecuentemente en procesos inflamatorios. A
pesar de su baja especificidad, es una muy buena
técnica de screening, principalmente en pacientes
ambulatorios, ya que cualquier alteración de la
misma, evidencia un problema subyacente en curso
o resuelto ( persistencia de Igs elevadas después de
haber resuelto una infección, por ejemplo, lo que la
hace útil además para hacer seguimiento de
procesos inflamatorios ej. Glob blancos
aumentados, crónicas) aunque puede verse alterada
en situaciones fisiológicas (Ej: embarazo y tercera
edad, tiene un valor de referencia distinta entre 30-
40mm)No siendo posible correlacionar de la misma
manera los valores en pacientes internados, con
administración parenteral de fluidos que modifican la composición plasmática. En pacientes ambulatorios de la
puede relacionar con la proteína C reactiva(PCR), y también a veces se puede relacionar con una anemia porque
tengo un paquete globular muy chiquito o porque esta muy perfundido yaqué entro deshidratado y tiene suero.
Podría ser por un infarto o quemadura que es un proceso inflamatorio, problemas hepáticos

FUNDAMENTO: la técnica se basa en la alteración de las interacciones electrostáticas de la superficie de los

hematíes ( disminución del potencial Z que es lo que los mantiene separados unos de otros cuando circulan) ante la
modificación de la composición proteica del plasma ( Ej. Fibrinógeno(es la proteína que acelera la
eritrosedimentacion) y globulinas aumentan / albumina disminuye la agregación globular) lo cual se mide en cuantos
mm desciende en una columna una muestra de S citratada en 60 min.

Cuando hay esferocitosis o drepanocítica, como los globulos rojos no pueden hacer la pilita de monedas

Mientras más rápida sea la fase de agregación, más alta será la eritrosedimentacion, 4 partes de sangre por 1 de
citrato, las pipetas van de 0 a 200mm. Si saco del citológico , tomo 50 mm de citrato y 200 mm de sangre

Diferenciación entre la coloración supravital: no se fija el elemento para poder colorearlo por lo que el grojo es
metabólicamente activo y se debe procesar rapido y MG-G: el elemento que quiero colorear se fija,por lo que no
puede entrar un colorante supravital (en formula normal el reti se ve un poco más grande y lila al tener más ARN,
con una depresión central, en general esta deformada ya que es un GR que acaba de eliminar su núcleo, y
entonces hasta que se vuelva bicóncavo se encuentra alterada) hay policromasia, es decir un glóbulo rojo
cromatofilo

El glob rojo forma la hemoglobina en un 30 o 40% luego de expulsar el núcleo

Ej de policromasia: hipoxia, hemolisis periférica o anemia

CLASE 2

AUTOMATIZACIÓN DEL HEMOGRAMA

AUTOMATIZACIÓN: Mecanizar todo o la mayoría de los pasos manuales en un proceso o en todo el procedimiento
“Es una solución que combina varios procesos en un solo sistema eficiente que elimina el riesgo de error asociado a
la operatividad humana. Las tareas intensivas en trabajo : etiquetado, manejo, preparación y almacenamiento de las
muestras, que se realizan utilizando numeroso personal, cada uno de los cuales pueden introducir errores u otros
problemas, pueden ser fácilmente automatizables.”

“La evolución ha sido grande y vertiginosa hacia los últimos años, desde el método manual hasta los equipos
modulares más sofisticados, con tecnologías combinadas, ingeniería y software innovadores que permiten una
mayor eficiencia y seguridad en el informe de los resultados.”

VENTAJAS: •Mejora de la productividad. •Reducción de los costos operativos. •Mayor precisión, exactitud,
trazabilidad de los resultados. •Optimización de los recursos. •Incorporación de nuevos parámetros que permiten
ampliar la capacidad diagnóstica y pronóstica del área.
PRINCIPIOS BÁSICOS •Impedancia •Radiofrecuencia •Dispersión óptica (distintas formas de medir tipos celulares)

IMPEDANCIA ELECTRONICA

Se basa en la resistencia que presentan las células que

no son conductoras eléctricas al paso de la corriente
eléctrica (es decir la resistencia eléctrica que genera la
célula ) cuando atraviesan un pequeño orificio,
conocido como “orificio de apertura” que separa dos
medios con diferente potencial. Cada vez que una
célula atraviesa el orificio de apertura se presenta un
cambio en la resistencia eléctrica que el instrumento
interpreta como un pulso que es proporcional al
volumen del líquido electrolítico desplazado.
FLUJO HIDRODINAMICO: las células se meten en una celda, a la cual se le aplica un flujo continuo que a medida que
se va haciendo mas angosta, que va generando un flujo laminar celular, en donde las células se empiezan a alinear
una atrás de otra. Esto evita que pasen 2 cels al mismo tiempo o que haya flujo retrogrado o acumulación de
proteínas ya que hay un flujo continuo en el canal de medicion

RADIOFRECUENCIA

muchos contadores
utilizan el flujo laminar en
conjunto con la
radiofrecuencia(esta tiene
la capacidad de atravesar
la célula, por lo que de
esta manera la resistencia
que genera al paso de esa
radiofrecuencia, es
proporcional a la
complejidad celular de
esa célula)

Ambos parámetros
permiten obtener el
tamaño y la complejidad
de la celula, separando las
distintas poblaciones de
leucocitos
DISPERSIÓN ÓPTICA

Las células se inyectan en una celda de flujo

que se encuentra en el camino óptico de
una fuente de luz, normalmente un láser.
Las células mantienen su orientación y
posición en la celda de flujo debido a las
características laminares de fluido
envolvente, y pasan en fila india a través del
haz láser: enfoque hidrodinámico. Las
células al atravesar el haz de luz la dispersan
en múltiples ángulos. Se miden de forma
frontal (Forward Scatter) dispersión
horizontal o 180º, idea del tamaño celular y
lateral (Side Scatter), es la luz que se refleja
en diferentes ángulos. La dispersión Frontal
de la luz da idea del tamaño celular y la
dispersión lateral de la complejidad.

Hay células que se pueden preteñir con

algún tipo de fluoroforo, lo que hace que a
través de la coloración se distingan los glob
blancos, reticulocioto y eritroblastos en los casos de contadores mas modernos.

Todo los contadores hematológicos emiten dos tipos de resultados: un informe numérico y un informe gráfico.

Las señales generadas por los detectores son digitalizadas y procesadas automáticamente en la pantalla las
representaciones gráficas de las distintas poblaciones celulares mediante diagramas de dispersión e histogramas.

LOS CONTADORES HEMATOLOGICOS

MODERNOS PUEDEN COMBINAR EN
UN MISMO ANALIZADOR VARIOS
METODOS DE DETECCIÓN Y DE
CARACTERIZACIÓN CELULAR:
•Impedancia eléctrica

•Radio frecuencia o conductividad

eléctrica

•Citometria de flujo :-Dispersión

óptica

-Fluorescencia

•Absorción de luz (hemoglobina) produciendo reacciones colorimétricas para la detección de hemoglobina

•Citoquimica (peroxidasa)

•Lisis selectiva (basofilos)

IMPEDANCIA(Nº CELS VS TAMAÑO CELULAR)// TAMAÑO Y COMPLEJIDAD CELULAR (Ne son los de mayor tamaño y
complejidad, Mo y Li que son los de menor tamaño y complejidad- por ultimo permite ver los restos celulares y/o
cels rotas)
DETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACION DE HEMOGLOBINA ( se hace con la lisis de glob rojos que viene del canal
donde se procesa los glob blancos yaqué se libera la hemoglobina )

•Se suele utilizar el sobrenadante de la dilución con que se realizó el conteo de Glóbulos Blancos.

•La mayoría de los equipos utilizan un método fotométrico.

SULFATO LAURIL DE SODIO, es el que se usa en la actualidad, se une a la hemoglobina y se forma una reacción
colorimétrica que se mide a una determinada longitud de onda

Cuando están presentes estas interferencias lo que hace

que se genere opalescencia en la muestra

El problema que se puede generar

es cuando hay glóbulos rojos
rotos(esquistocitos) ya que son de
menor tamaño que uno normal ,
también puede haber algún resto
de células rotas o restos de estas
que no tienen núcleo y caen en la
zona de las plaquetas o Cuando
por alguna patología disminuye el
VCM(volumen corpuscular medio)
también sucede lo mismo
 Son los más
modernos

Suman todos los

pulsos de
glóbulos rojos
para calcular el
volumen total
de estos y
sabiendo el
volumen de
muestra que
tomo el aparato

Calculan e hematocrito a partir del vcm por cant de glob rojos

*Los eritroblastos pueden ser confundidos con linfocitos en el contador hematológico

+LIQUIDO CEFALORAQUIDEO PATOLOGICO: Mas de 10 leucocitos por mm3

ASEGURAR UN FUNCIONAMIENTO ADECUADO

•Limpieza diaria.

•Conteo de lecturas de fondo.

•Chequeos electrónicos.
•Chequeo de reactivos.
•Realizar el inicio y cierre
correspondiente.
•GARANTIZAR LA SEGURIDAD
ANALITICA DEL SISTEMA DE
MEDICIÓN.

GUIA EPA15A2: para verificar la

precisión del sistema, el bias
para ver si cumple con los
requerimientos del fabricante
para verificarlo.

Control de calidad interno con

muestras estabilizadas en el
tiempo
Alteraciones cuantitativas relativas, neutrofilias ( >75%), linfocitosis (>43%), monocitosis (>13%) y eosinofilias (>8%);

HEMOGRAMA NORMAL

POBLACIONES: ROSAS: LINFOCITOS

VERDES: MONOCITOS

CELESTE: NEUTROFILOS

ROJO: EOSINOFILO

*HEMOGLOBINA X 3 ES CASI IGUAL A HEMATOCRITO/// VCM ES COMO EL DNI DE LA PERSONA

CASOS
HAY 2 POBLACIONES DE GLOB ROJOS YA QUE AL RECUPERAR HIERRO PORQUE EL PACIENTE ESTA CON UN
TRATAMIENTO

SE PUEDE VER LA PRESENCIA DE MICROCITOS FERROPENICOS HIPOCROMICO Y GLOB ROJOS DE VOLUMEN NORMAL,
POSIBLEMENTE POR TRANFUNDIR AL PACIENTE, HUBO AUMENTO DEL RWD Y HEMOGLOBINA,HCM

EN EL GRAFICO DE PLAQUETAS SE PUEDE OBSERVAR NORMAL YA QUE OBSERVO LA CURVA DENTRO DEL PUNTO DE
COHORTE

CASO 2

HAY UNA DISMINUCION ABRUPTA DE

PLAQUETAS, Y AL OBSERVAR EL FROTIS VEO
ESTA IMAGEN, POSIBLEMENTE LA MUESTRA
ESTA COAGULADA O ESTAN AGLUTINADAS
LAS PLAQUETAS

SE OBSERVAN PLAQUETAS AGREGADAS,

POR EXTRACCION DIFICULTOSA. NO SE
PUEDE INFORMAR, VOLVER A EXTRAER

SIN FORMARSE EL MICROCOAGULO EN LA

MUESTRA, SE VE EN EL EXTENDIDO EL
CUMULO DE PLAQUETAS
CASO 3 MUY COMUN EN INVIERNO, PACIENTES QUE TIENE CRIOAGLUTININAS EN SANGRE, QUE AL DESCENDER LA
TEMPERATURA CORPORAL SE UNEN A SUS EPITOPES QUE ESTAN EN LOS GLOBULOS ROJOS, GENERANDO CUMULOS
EN LOS GLOBULOS ROJOS. SI LA AGLUTINACION ES MUY SEVERA, ESTOS PACIENTES PUEDEN CURSAR CON
HEMOLISIS SEVERAS, PERO EN MUCHOS CASOS NO SE LLEGA.

AL PASAR EL CUMULO POR EL CONTADOR HEMATOLOGICO, AUMENTA MUCHO LA CONCENTRACION DE

HEMOGLOBINA POR LA AGLUTINACION DE LOS GROJOS, POR LO QUE SE PIERDE LA RELACION HEMOGLOBINA -
HEMATROCRITO Y SE TIEN EL CHCM ALTO

LA RELACION ENTRE LA HEMOGLOBINA Y EL HEMATOCRITO, NO SE CUMPLE EN ESTE CASO YA QUE EL

HEMATOCRITO ES MENOR A A LAS 3 VECES DE LA HEMOGLOBINA.

HCM Y CHCM (32-36 NORMAL) CONCENTRACION DE HEMOGLOBINA MUY ALTA, ES DECIR QUE HAY MUCHA
HEMOGLOBINA EN UN GLOBULO ROJO- VCM AUMENTADO PERO DENTRO DEL RANGO NORMAL, gr dim, hg se
mantiene porque los gr se lisan igual para medirla

SI OBSERVO ESTOS RESULTADOS, EN EL LABO LLEVO LA MUESTRA AL BAÑO A 37 Cº DURANTE 1 HORA, a esta
temperatura la
crioaglutinina deja de
aglutinarse con los
globulos rojos y LUEGO DE
UN TIEMPO SE PASA
NUEVAMENTE POR EL
CONTADOR.

MISMA MUESTRA CON

TODOS LOS PARAMETROS
NORMALES, pero debo
informar para que el
medico evalúe de tratarlo
o no al paciente

COOMBS: +, EN
CRIOALGLUT
CASO 4

GRAFICO DE PLAQUETAS ALTERADO, PODRIA SER POR LA PRESENCIA DE ESQUISTOCITOS, ESTAN MUY
DISMINUIDAS Y NO PUEDO VALIDAR EL RESULTADO AL OBSERVAR ESE GRAFICO, POR LO QUE VOY AL FROTIS Y
VEO

RDW =25 , POR LO

QUE VEO UNA
CURVA BASTANTE
ANCHA EN LA
GRAFICA

ANISOSITOSIS Y
ESQUISTOCITOS
el contador esta contando por
exceso la presencia de
plaquetas.

Por lo que hay que hacer un

conteo manual de plaquetas en
camara o pedir que las mida por
fluorescencia.

Observo la química, si la urea

esta alta ayuda al dx y veo la
Ldh para ver si hay lisis

DX: Síndrome urémico

hemolítico
Caso 5

Observo el grafico de las plaquetas, que va para abajo y luego asciende muy rápido lo que demuestra que tenemos
gr con vcm muy bajo,con rdw no tan alto y una hemoglobina no tan baja. Es una anemia microcítica por lo que
puede ser ferropénica pero suelen tener una anisocitosis mas marcada(diferente tamaño) , podría ser una talasemia

Vidrio veo punteado basófilo(mas caract

de esta que ferropenica), cels targets.

TALASEMIA
Caso 6

Cuando se observa un chorreado para arriba de linfos, esta demostrando que hay atípicos pero nose cuantos hay

EJEMPLO DE DENGUE, donde tiene las plaquetas bajas y linfos atípicos

Caso 7

Tiene las plaquetas normales, los gblancos elevados y también se hace el chorreado por encima de los monos,
largando la alarma de que posiblemente haya linfos atípicos
presencia de linfos atípicos

CASO 8

Gran chorreado que no se logra diferenciar los Mo de los Li. Hay 512 gb y el recuento de plaqueta es normal.

Paciente de 87 años con un gran número de linfocitos tan grandes que se me mezclan con los Mo. Podría ser una
Leucemia linfatica crónica
linfocitos atípicos con sombras de grumprecht

Caso 9

Se observa chorreado celeste en la zona de los neutrófilos, el equipo tira señales de células inmaduras 8% pero no se
que son.
En el extendido observo mielocitos, metamielocitos

Caso 10
Plaquetas bajas, en la la grafica se observa que hay una mezcla de mo y li , y se va para abajo, lo que indica la
presencia de blastos pero no puede distinguir cuales son y en que porcentaje. Presencia de blastos

Caso 11

No hay alarma en los glóbulos rojos pero si en los globulos blancos por lo que veo el frotis
Presencia de tripanosoma cruzi(parasito en sangre). Paciente trasplantado de riñón que recibió chagas por el
donante

Caso 12
Policromafilia

Esferocitocis
hereditaria (glob
rojos llenos)

11% de Retis