Uña de Gato
Uña de Gato
Uña de Gato
CICLO: IV
SECCIÓN: 1 A- M1
MUESTRA: Uncaria Tomentosa
INTEGRANTES:
DELGADO CANALES
LIMA-PERU 2017
DEDICATORIA
DEDICATORIA..................................................................................................... 2
ÍNDICE..................................................................................................................3
INTRODUCCIÓN.................................................................................................. 4
COMPETENCIAS................................................................................................. 5
1. MARCO TEÓRICO........................................................................................... 6
1.1. ANTECEDENTES..................................................................................... 6
1.2. INVESTIGACIÓN FITOQUÍMICA..............................................................7
1.3. BASES TEÓRICAS................................................................................... 7
1.3.1. FUNDAMENTO TEÓRICO DE PERCOLACIÓN......................... 7
1.3.2. FUNDAMENTO TEÓRICO DE SOLUBILIDAD............................7
1.3.3. FUNDAMENTO TEÓRICO DE TAMIZAJE FITOQUÍMICO.........7
2. MÉTODOS........................................................................................................8
2.1. PREPARACIÓN DE LA MUESTRA.......................................................... 6
2.2. EXTRACCIÓN DE MUESTRA...................................................................7
2.3. SOLUBILIDAD........................................................................................... 7
2.4. TAMIZAJE FITOQUÍMICO........................................................................ 7
3. RESULTADOS...................................................................................... 9-10- 11
CONCLUSIONES...............................................................................................12
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS...................................................................13
CUESTIONARIO.................................................................................................14
INTRODUCCIÓN
En el presente trabajo
COMPETENCIAS
PREPARACIÓN DE LA MUESTRA:
Selecciona y recolecta las muestras para el reconocimiento de
metabolitos secundarios.
Conoce el proceso de lavado y desinfección de muestra.
Estabilización de muestra por el secado.
TAMIZAJE FITOQUÍMICO:
Prepara los reactivos necesarios para el tamizaje fitoquímico.
Detecta los metabolitos secundarios derivados de la ruta del
shikimato como taninos, compuestos fenólicos, cumarinas,
leucoantocianidinas.
Reconoce los metabolitos secundarios derivados de la ruta del
mevalonato (terpenos, las saponinas, esteroides, cardiotónicos)
Identifica los metabolitos secundarios derivados de la ruta de los
aminoácidos, presentes en las plantas como son los alcaloides.
Reconoce los metabolitos secundarios derivados de la ruta del
acetato, presentes en las plantas como son las quinonas.
Identifica los metabolitos secundarios derivados de rutas
biogenéticas mixtas, presentes en las plantas, como son los
flavonoides y los antocianos.
MARCO TEÓRICO
ANTECEDENTES
PARTE EXPERIMENTAL
Características de la materia prima
Se hizo un trabajo previo de selección de lugares de colecta tomando en
cuenta características climáticas generales de acuerdo a isotermas e isoyetas
elaboradas por estudios realizados previamente1 0 , complementado con
información directa sobre el nivel altitudinal tomada en el trabajo de campo, tal
como se muestra en la tabla 1. Con esta información se ubicaron bosques
residuales en cuya composición florística se encuentre ejemplares de la
especie en estudio3.
Las cosechas se realizaron manualmente utilizando machete y tijeras de podar,
depositando el material de cada planta muestreada en envases de plástico
separados, para garantizar la precisión de las mediciones y facilitar el
transporte, conservación y procesamiento del material que será destinado a los
análisis.
Para estos análisis se siguió una serie de procedimientos aplicados de acuerdo
a los estándares establecidos para los estudios fitoquímicos de plantas
medicinales sugeridas por el Centro de Productos Naturales de La Habana 11.
Tratamiento a la droga cruda
Posterior a la cosecha que se realizó el mismo día en los 4 lugares, se secó en
horno solar; luego, molidas y tamizadas a 200 mallas para su conservación y
estudios de control de calidad, cumpliendo con los requisitos exigidos por la
farmacopea británica (BHP-2000) como son:
humedad gravimétrica menor a 10%; cenizas totales menor a 1%; cenizas
insolubles en HCl menor a 0,02%; cenizas insolubles en agua menor a 0,1%;
solubilidad óptima en etanol al 50%; ausencia de aflatoxinas por cromatografía
de capa delgada semicuantitativa (T.L.C.), los cálculos se efectuaron según
Norma NRSP-309/Cuba y la ISO 9014-Comité 54-Comision E.
Extracción de alcaloides
Como prueba preliminar se aplicó el método de extracción ácida en donde se
observaron pocos alcaloides con buena resolución; dos de ellos no estaban
bien separados y otros se observaban deprimidos en los cromatogramas, frente
a los del patrón secundario, por lo que fue necesario probar un nuevo método
de extracción por la vía alcalina evaluándose los resultados por TLC,
espectroscopía IR-TF, UV-visible (229 nm), HPLC-FR.
Método alcalino
A partir del resultado de cromatografía de gas de muestras diferentes de
corteza y el tamizaje fitoquímico por diferentes métodos (Dragendorff, Mayer,
Wagner, Marquis), se trató de descubrir la presencia o no de alcaloides en
muestras sometidas a análisis por HPLC. Se aplicó el método alcalino de
extracción amoniacal por maceración en etanol + NH 4OH + éter di-etílico,
utilizando un estándar secundario con igual tratamiento que la muestra y la
misma instrumentación para HPLC fase reversa.
Identificación de alcaloides por T.L.C., UV, IR-TF
Se aplicaron 10 µL de las muestras en placas de 20 x 20 F254 sílica gel de
Merck, evaluándose los valores de Rf de cada mancha, concordándose éstos
con el patrón internacional de Wagner utilizado para alcaloides indólicos. Las
manchas se rasparon, se eluyeron en metanol con AlCl3 como desplazante y
se encontraron las señales típicas de alcaloides oxindólicos a partir de
longitudes de onda de 315 nm. Estos fueron corroborados por espectroscopía
infrarroja en un equipo Varian IR-TF identificando cada grupo funcional
característico en 3700-3200 cm¹ para OH y NH 2; 1780-1620 para CO, 1600,
1550-1500 cm ¹ para aromáticos y 900-800 cm¹ para metoxilos y
metoxilendioxi.
Identificación de alcaloides clásicos por HPLC-FR
Cada muestra se evaluó por triplicado, reportándose los porcentajes de
alcaloides por cada localidad estudiada. Se usó un estándar de 99-98% de
pureza (Merck) los cuales aparecieron en el siguiente orden junto a la muestra
(tabla 2):
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
El método ácido aplicado para corteza en todas las muestras tuvo una baja
efectividad; los cromatogramas respectivos mostraron en todos los casos un
alcaloide mayoritario que, por el tiempo de retención, corresponde a la uncarina
F (tetracíclico); la pteropodina e isomitrafilina aparecen en baja concentración
en el caso de la localidad IIAP, mientras que en las otras tres localidades
aparecen deprimidos.
En la tabla 3 se muestra los contenidos promedio de alcaloide por cada
localidad logrados con el método de extracción alcalino; los cromatogramas
respectivos muestra los picos más definidos en todos los casos; sin embargo,
los alcaloides mayoritarios son diferentes.
Así se tiene que para el caso de las localidades de IIAP y Nuevo Ucayali, el
alcaloide mayoritario es la pteropodina (tetracíclico), con menor concentración
en IIAP y alta concentración en Nuevo Ucayali, mientras que para El Porvenir y
Tres de Octubre aparece como mayoritario la mitrafilina (pentacíclico);
coincidentemente las dos primeras localidades se encuentran a una menor
altitud (136 y 286 m.s.n.m.), mientras que las otras dos, relacionadas a la
mitrafilina están a mayor altitud (385 y 885 m.s.n.m.). Esto puede indicar el
efecto de la presencia de estos alcaloides con las características ambientales
de cada localidad; se puede decir que en este caso, mayores concentraciones
de alcaloides tetracíclicos se han presentado a menor altitud, mientras que los
pentacíclicos se manifestaron en mayor concentración a mayores altitudes.
De otro lado, en cuanto a alcaloides totales, la menor concentración se
presenta en las localidades de IIAP y El Porvenir; éstos tienen suelos más
ácidos con mayor contenido de arena; mientras que los suelos de Nuevo
Ucayali y Tres de Octubre tienen suelos con mayor contenido de arcilla, pH
más alto, ligado a un mayor contenido de materia orgánica.
En la figura 1 se observan picos bien definidos pero a bajas concentraciones,
en orden descendente la rinchofilina como mayoritario, seguido de la
pteropodina, a menor concentración la uncarina F, mitrafilina y especiofilina que
aparece deprimida. Las condiciones de suelos ácidos y pobres en nutrientes
caracterizan a esta localidad.
En la figura 2 se observa una alta concentración de pteropodina como
mayoritario, y a muy baja concentración la mitrafilina; la uncarina F aparece
deprimida.
A diferencia de la localidad IIAP, en la localidad El Porvenir (figura 3) se
presenta la pteropodina como mayoritario. En el caso de IIAP el mayoritario es
la rinchofililina, seguido de pteropodina y uncarina F (tetracíclico). Especiofilina
y mitrafilina, se presentan a muy bajas concentraciones, igual que en IIAP y no
aparece la rinchofilina a diferencia de IIAP que si se presenta, mientras que la
uncarina F (tetracíclico), aparece algo deprimida en este caso, el cual sugiere
la alta capacidad del método alcalino de deprimir tetracíclicos.
En la figura 4, se puede observar que el alcaloide mayoritario de esta localidad
es también la pteropodina, seguido de la uncarina F (tetracíclico). A más baja
concentración se presenta la mitrafilina, mientras que la especiofilina aparece
muy deprimida.
CONCLUSIONES
La aplicación del método alcalino de extracción de alcaloides ha
permitido obtener una mayor cantidad de alcaloides con la depresión de
tetracíclicos.
La corteza presenta altas concentraciones de alcaloides tetracíclicos en
relación a la presencia de pentacíclicos.
Existen diferencias significativas en el contenido de alcaloides de
corteza de diferentes localidades estudiadas.
Para todas las sustancias no valen los mismos disolventes, pues, por ejemplo,
en el caso del agua usada como disolvente, es útil para el alcohol o la sal, los
cuales se disuelven en ella fácilmente, en cambio, no se disuelven en ella el
aceite, o la gasolina.
Los caracteres, polar o apolar, son de gran importancia en la solubilidad, pues
gracias a estos, las sustancias variarán sus solubilidades.
Los compuestos que poseen menor solubilidad, son los que tienen menor
reactividad, como, por ejemplo, las parafinas, compuestos aromáticos, o
compuestos derivados de los halógenos.
MATERIALES
BEAKER 1000ml
PIPETAS Y BAGUETAS
PROBETA 100 ml
ESPÁTULA
PAPEL FILTRO
EQUIPOS
ESTUFA CON
RECIRCULACIÓN DE AIRE
BAÑO MARIA
BALANZA ANALÍTICA
REACTIVOS:
NaClO de 10 ppm
ÁCIDO CITRICO AL
1%
AGUA DESTILADA
PROCEDIMIENTO:
PESADO
LAVADO
H2o
DESINFECCIÓN
Ác.
Citrico
1%
ESCALDADO
SECADO
Materiales:
Beaker
Algodón
Equipos:
Estufa
Desecador
Equipo de percolación
Reactivos
Etanol
Hcl1,2M
H2O
Muestra:
Corteza seca de Uncaria Tomentosa (30gr)
Procedimiento :
REACTIVOS:
n-hexano
benceno
diclorometano
acetato de etilo
metanol
etanol
alcohol t-butílico
solución de hidróxido de sodio al5%
solución de ácido clorhídrico al 5% solución de bicarbonato al 5%
PROCEDIMIENTO:
Disolventes no activos
1. TAMIZAJE FITOQUIMICO
MATERIALES Y EQUIPOS:
Matraz Erlenmeyer
Probetas
Pipetas graduadas
Tubos de ensayo
Baguetas
Hot plate
Pizeta
Espátula
Balanza analítica
Propipeta
Baño maria
REACTIVOS
PROCEDIMIENTO
Reconocimiento de quinonas
Bortrager
1 got muestra +1ml éter de petróleo +1ml NAOH 5%
+ ++rojo
Reconocimiento flavonoides
r. shinoda
1got muestra +1ml etanol + cinta mg + 2 got hcl concentrado
Transparente –
Reconocimiento saponinas
Espuma
1got muestra +1ml agua destilada
Transparente –
Reconocimiento de taninos
1got muestra + 1ml agua destilada – 2 got reactivo
R. GELATINA – R fe cl3
+ verde
PRESENCIA DE ESPUMA -
Reconocimiento SQTL
- AMARILLO
R LEGAL 1 got muestra + 1ml agua destilada + 5 got nitroprusiato de sodio
+ 3 got de koh 2N
LADRILLO
Reconocimiento CARBOHIDRATOS
R. Molish
1got muestra + 1ml agua +5 gotas naftol + 2 got H2OS4 EN ZONA
MARRON
-
- MARRON
marron
Reconocimiento quinonas
1 gota muestra +2ml éter petróleo + 2ml NAOH5% reposar
R .bomtrager
++rojo
RECONOCIMIENTO DE FLAVONOIDES
R. SHINODA 1 got muestra + 2 ml ETOH+ mg agitar + 2 gotas HCL
concentrado agitar.
Transparente
Reconocimiento de alcaloides
1gota muestra +2ml HCL 1% + AGITAR + 2 GOTAS REACTIVO
R. DRAGENDORFF … PP ANARANJADO +
R.WAGNER……..MARRON
R.MAYER……MARRON
R. SONNENSCHEIM…..ANARANJADO
RE
RECONOCIMIENTO DE SQTL
R. BALJET 2 gotas muetra + 2 ml ETOH 96% + 5 gotas acido pícrico
agitar.
- ANARANJADO
ROJO +
RECONOCIMIENTO DE TANINOS
R. fecl3
R. GELATINA
R. GELATINA SAL
2 GOTAS muestra + 2 ml ETOH AGITAR + 2 GOTAS REACTIVO AGITAR
PREPARACIÓN DE LA MUESTRA
Partes por millón (ppm) es una unidad de medida con la que se mide la
concentración. Se refiere a la cantidad de unidades de una determinada
sustancia (agente, etc) que hay por cada millón de unidades del conjunto.
Partes por billón (ppb) es una unidad de medida con la que se mide la
concentración. Se refiere a la cantidad de unidades de una determinada
sustancia (agente, etc) que hay por cada billón de unidades del conjunto.
EXTRACCIÓN DE DROGA VEGETAL:
TAMIZAJE FITOQUÍMICO
1. Realice los cálculos correspondientes necesarios en la
preparación de los reactivos a emplear en la práctica.
2. Mencione los pasos a seguir en la preparación de soluciones
valoradas.
3. Escriba las ecuaciones químicas de las reacciones que ocurren en
el tamizaje fitoquímico.
4. En que se fundamenta la prueba a la gota.
RESULTADOS PREPARACIÓN DE LA MUESTRA
RESULTADOS EXTRACCIÓN
RESULTADOS DE SOLUBILIDAD
DISOLVENTES NO ACTIVOS
n-hexano CHCl3 BuOH PrOH-1 H2O
- ++ ++ ++ +++
CONCLUSIONES
PREPARACIÓN DE LA MUESTRA
EXTRACCIÓN DE DROGA VEGETAL
Ya que los alcaloides están contenidos en vacuolas es preciso romper la
célula para que se liberen, es por ello que es importante el troceado de
la droga antes de realizar el método de extracción, que en este caso fue
percolación.
Los disolventes empleados se eligen en función del método, en el caso
de percolación se emplearon disolventes con menor poder extractivo
pero más selectivos (EtOH,H2O,HCl1,2M).
SOLUBILIDAD DE EXTRACTO CRUDO
TAMIZAJE FITOQUÍMICO
REFERENCIAS
BIBLIOGRAFIA
Autor de la página (persona o organización) [Internet]. fecha del copyright o última
actualización, si se desconoce, poner n.d. Título de la página web. [Consultado el día, mes,
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https://www.plantas-medicinal-farmacognosia.com/temas/m%C3%A9todos-de-extracci
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https://es.slideshare.net/adnestelamartin/metodos-de-extraccion-y-purificacion-de-alcaloides
https://hardwarecosmetica.wordpress.com/tag/alcohol/
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Forestal Mundial. 1997. Vol. 2.
3. Domínguez, G. y Castillo, A. Crecimiento de un clon de uncaria
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