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    Tijeras Del DNA

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    Laura Peña
    Este documento describe una actividad sobre el corte de ADN por enzimas de restricción como EcoRI, SmaI y HindIII. Los estudiantes simulan la actividad de estas enzimas cortando moléculas de ADN de doble cadena a lo largo de los sitios de restricción. Los extremos producidos por cada enzima son descritos, así como si son cohesivos o romos. También se comprueba si los extremos de fragmentos cortados por la misma enzima son complementarios entre sí para poder unirse mediante la ligasa.

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    Este documento describe una actividad sobre el corte de ADN por enzimas de restricción como EcoRI, SmaI y HindIII. Los estudiantes simulan la actividad de estas enzimas cortando moléculas de ADN de doble cadena a lo largo de los sitios de restricción. Los extremos producidos por cada enzima son descritos, así como si son cohesivos o romos. También se comprueba si los extremos de fragmentos cortados por la misma enzima son complementarios entre sí para poder unirse mediante la ligasa.

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    Actividad N.

    º3
    Tijeras del DNA
    Actividad nº1
    Corte las cintas de secuencias de DNA por los bordes. Estas cintas representan
    moléculas de DNA de doble hebra. Cada cadena de letras representa el esqueleto
    fosfodiéster, y las líneas verticales entre los pares de bases representan los enlaces de
    hidrógeno entre las bases.
    1. Simularemos la actividad de la Eco RI. Busque a lo largo de la cinta hasta
    encontrar el sitio de la Eco RI. Realice los cortes a través del esqueleto
    fosfodiéster cortando justo entre la primera G y A del sitio de restricción en
    ambas hebras. Recuerde que la Eco RI corta el esqueleto de cada hebra por
    separado.
    2. Ahora separe los enlaces de hidrógeno entre los sitios de corte cortando por las
    líneas verticales. Separe las dos piezas de DNA. Mire los dos nuevos extremos
    producidos por Eco RI. ¿Estos son cohesivos o romos? Escriba el nombre de Eco
    RI en los extremos cortados. Deje los fragmentos sobre su mesa.
    3. Repita el procedimiento con la cinta 2, esta vez simule la acción de SmaI.
    Encuentre el sitio para SmaI y corte a través del esqueleto fosfodiéster en el sitio
    indicado. ¿Cómo son los extremos producidos, cohesivos o romos? Marque los
    nuevos extremos con SmaI y déjelos en su mesa.
    4. Simule la actividad de HindIII con la cinta 3. ¿Ahora tiene extremos cohesivos o
    romos? Marque estos nuevos extremos con el nombre de la enzima (HindIII), y
    déjelos en su mesa.
    5. Repita el procedimiento una vez más con la cinta 4 simulando la actividad de la
    Eco RI.
    6. Tome el fragmento delantero Eco RI de la cinta 4 y el extremo posterior HindIII
    de la cinta 3. Ambos fragmentos tienen colas de 4 bases simples. Escriba las
    secuencias de ambas colas y rotúlelas con Eco RI y HindIII. ¿Son
    complementarias?
    R. No son complementarias.

    7. Deje el fragmento HindIII, y tome el fragmento de DNA posterior de la cinta 1


    (cortada con Eco RI). Compare las colas de este fragmento y el fragmento de la
    cinta 4 también cortado con Eco RI. Escriba las secuencias de ambas colas y
    rotúlelas los 3` y 5`. ¿Son complementarias?
    R. Sí son complementarias.

    8. Imagine que está cortando un DNA desconocido con EcoRI. ¿Cree que las colas
    de hebra simple de estos fragmentos puedan ser complementarios con las colas
    de hebra simple de los fragmentos de la cinta 1 y de la cinta 4?
    R. Son complementarias.
    9. Una enzima llamada DNA ligasa reforma los enlaces fosfodiéster entre los
    nucleótidos. Para que la enzima trabaje, los dos nucleótidos deben estar cerca y
    tener la orientación apropiada para el enlace (el extremo 5` debe estar cerca del
    extremo 31 del otro). ¿Piensa que debe ser más fácil para la enzima (DNA ligasa)
    reconectar dos fragmentos cortados con EcoRI o un fragmento cortado con
    EcoRI con otro cortado con HindIII? ¿Cuál es la razón?
    R. Para que la ligasa pueda unir los fragmentos, cada extremo debe ser
    complementario y cortado por la misma enzima.
    Actividad 2
    El esquema del mapa de restricción del plásmido YIP5 anteriormente señalado, si se
    digiere con Eco RI quedará una molécula lineal de 5,541 pares de bases.

    YIP 5

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