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UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE INGENIERÍA Y CIENCIAS
APLICADAS
CARRERA DE INGENIERÍA CIVIL
 
QUÍMICA SANITARIA
 
ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO DE AGUAS MEDIANTE CONTEO NORMAL
TÍTULO
EN PLACA
GRUPO No: 4 PRÁCTICA No: 6
FLORES NICOLALDE VILMA CENEIDA
FLORES PROAÑO FRANK GUILLERMO
INTEGRANTES: GUERRERO MENA CRISTIAN ALONSO
HIDROBO NARVÁEZ ALISON CAROLINA
INGA MACANCELA MAYRA CRISTINA
DOCENTE Ing. Carlos Gabriel Enríquez Pinos MSc.
SEMESTRE: Octavo PARALELO: Primero
FECHA DE
FECHA DE REALIZACIÓN 16/03/2022 17/03/2022
ENTREGA:

RESUMEN:

Se realiza el análisis microbiológico del agua con el objetivo de conocer la calidad de

la misma determinando los microorganismos presentes en el agua analizada. El conteo
normal en placa es una de las técnicas más utilizados cuando se requiere investigar el
contenido de microorganismos viables en un líquido, el método consiste en realizar
diluciones repetidas de 1.0 y 10 ml de muestra de agua respectivamente, seguidamente en
cada una de las cajas se coloca el medio de cultivo, el cual es una solución con los nutrientes
necesarios para permitir, en condiciones favorables de pH y temperatura, el crecimiento de
virus, microorganismos, células, tejidos vegetales, para el crecimiento del cultivo, se
requieren nutrientes muy complejos, por eso la mayoría de los medios de cultivo, tienen
como base infusión de extractos de carne o peptona y se le agregan demás ingredientes, en la
práctica se utilizó el Agar, el cual se mezcla con movimientos rotacionales hasta que se
solidifique, es decir que se haga como gel; las placas posteriormente se incuban hasta que las
colonias son apreciables para su recuento.

DESCRIPTORES:

MICROBIOLÓGICO / PLACA / DISOLUCIONES / AGAR/COLONIAS

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INTRODUCCIÓN

Uno de los restrictores más importante del desarrollo económico del hombre es el
agua. Su escasez y contaminación amenazan aspectos fundamentales de la seguridad humana,
como son: el equilibrio del medio acuático, la producción de alimentos y la salud pública
(OPS, 2005).
En el agua pueden encontrarse una gran variedad de microorganismos, los cuales
afectan en mayor o menor medida a la calidad sanitaria del agua Además de la flora normal
presente en cualquier sistema acuático (ejemplos: Bacillus, Pseudomonas, etc.), pueden
existir otros microorganismos contaminantes, algunos de ellos patógenos para el ser humano
y/u otros animales. Una de las fuentes principales de contaminación son las aguas residuales
que contienen materia fecal que puede ser vehículo de transmisión de patógenos. (Ramírez,
2017)
En el agua que tiene como finalidad el consumo humano, no deben estar presente
bacterias que puedan perjudicar la salud. Sin embargo, existen contaminantes que deben ser
controlados por los requisitos microbiológicos máximos permisibles, como las coliformes,
Cryptosporidium, Giardia especificados en la Norma Técnica Ecuatoriana INEN NTE 1108-
2014.
Se puede definir el análisis microbiológico como el conjunto de operaciones
encaminadas a determinar los microorganismos presentes en una muestra problema de agua.
El interés se centra en los microorganismos patógenos, que son los diferentes tipos de
bacterias, virus, protozoos y otros organismos, que transmiten enfermedades (Obón, s.f.)
El procedimiento del contaje del número total de bacterias en placas provee un
método normalizado para la determinación de la densidad de bacterias heterotróficas aerobias
y anaerobias facultativas en el agua. Este es un método aproximado, debido a que las
bacterias se presentan en forma: unitaria, en pares, cadenas, racimos, o en paquetes; además,
el medio o el conjunto de condiciones físicas y químicas no pueden satisfacer los
requerimientos de todas las bacterias en una muestra de agua, consecuentemente, el número
de colonias que se desarrollan por cm3 puede ser sustancialmente más bajo que el número
real de bacterias viables presentes. Además, algunas bacterias, a causa de daños,
requerimiento de nutrientes especiales, reacción con el oxígeno, temperaturas desfavorables
de incubación u otros factores, son incapaces de formar colonias visibles bajo las condiciones
empleadas. (INEN, 2013)
El recuento en placa es uno de los métodos más utilizados para determinar cuál es el
número de microorganismos viables en un medio líquido. Cuando la concentración es baja se
procede a filtrar la muestra a través de una membrana que será pasada al medio de cultivo, en
una placa de Petri. Los microorganismos retenidos en la membrana se desarrollarán formando
colonias, permitiendo su cuantificación. Cuando la concentración es alta, se procede a la
preparación de diluciones seriadas en una secuencia de 1:10, alcanzándose diluciones de 10-7
o mayores. Pequeñas alícuotas de esas diluciones son sembradas en medio nutritivo en placa,
donde las bacterias se desarrollan formando colonias. En las placas donde la concentración de
 3

la alícuota sembrada es muy alta, las bacterias formarán crecimiento masivo, pero si la
concentración es muy baja, el número de UFC podrá ser muy bajo. (Ramírez, 2017)

OBJETIVOS

Objetivo General

1.1.1 Analizar el conteo en placa de microorganismos que se encuentran en las

muestras de agua potable y agua cruda para un contenido de 0.1, 1.0 y 10
ml.

1.2 Objetivos Específicos

1.2.1 Observar proceso de cultivo de microorganismos en las muestras de agua.
1.2.2 Identificar los microorganismos presentes en las muestras de agua potables y
agua cruda.
1.2.3 Analizar los valores del cultivo de microorganismos en el agua potable y agua
cruda.

PARTE EXPERIMENTAL

1.3 Materiales y Equipos

1.3.1 Materiales
Tabla 1: Materiales de vidrio
CANTIDAD NOMBRE CAPACIDAD APRECIACIÓN
2 Pipetas de Embolo 5 ml ± 0,1 ml
6 Caja Petri - -
1 Vaso de Precipitación 250 ml ± 5 ml
1 Vaso de Precipitación 400 ml ± 5 ml
1 Vaso de Precipitación 100 ml ± 10 ml
6 Tubos de Ensayo - -
Termómetro de
1 254 ºC ± 1 ºC
Mercurio
Fuente: Grupo 4, Marzo, 2022.

Tabla 2: Materiales de metal

CANTIDAD NOMBRE OBSERVACIÓN
Las cajas Petri de vidrio
1 Caja Porta Petri contiene una base y tapa, y
se encuentra esterilizadas.
Las Pipetas se deben
1 Caja Porta Pipetas
esterilizarlas.
3 Mecheros de alcohol -
1 Mechero de Bunsen -
1 Canastilla metálica -
1 Cucharilla -
 4

Fuente: Grupo 4, Marzo, 2022.

Tabla 3: Otros materiales

CANTIDAD NOMBRE
1 Gel refrigerante
1 Caja de Fósforos
1 Par de guantes de cuero
Franela o Paño
1
Absorbente
1 Toalla de papel blanco
Par de guantes
1
quirúrgicos
Frasco para recolectar
1
muestra de orina
6 Tapones de algodón
1 Mascarilla
1 Lápiz de cera
1 Par de guantes de látex
Fuente: Grupo 4, Marzo, 2022.

1.3.2 Equipos
Tabla 4: Equipos
EQUIPOS CAPACIDAD APRECIACIÓN OBSERVACIÓN
Incubadora con
circulación de aire 70 ºC ± 0,2 ºC -
caliente
Se usa para
Estufa 300 ºC ± 1 ºC esterilizar material
de vidrio
Autoclave 121 ºC Y 30 lb - -
Contador de colonias -
- -
con lente de aumento
Balanza 500 g ± 0,0001 g -
Fuente: Grupo 4, Marzo, 2022.

1.4 Sustancias y Reactivos

1.4.1 Sustancias
Tabla 5: Sustancias
CANTIDAD NOMBRE
1 Muestra de agua cruda
1 Muestra de agua potable
1 Alcohol industrial
1 Agua destilada
1 Alcohol antiséptico
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Fuente: Grupo 4, Marzo, 2022.

1.4.2 Reactivos
Tabla 6: Reactivos
Nombre
Fórmula
No. del Cantidad Concentración
Química
Reactivo
Agar
1 granulad C 14 H 24 O9 10 mL por tubo de ensayo 100 %
o
Compuesto por: - Triptona
- Extracto de
levadura
- Glucosa
Fuente: Grupo 4, Marzo, 2022.

3.3 Procedimiento

3.3.1 Muestreo de Agua

3.3.1.1 Toma muestra de Agua potable

3.3.1.1.1 Antes de tomar la muestra de agua del grifo se deja correr el agua por de 30 a
60 segundos aproximadamente.
3.3.1.1.2 Para matar cualquier microorganismo alóctono se limpia la boquilla de la
llave con la ayuda de un algodón y alcohol antiséptico.
3.3.1.1.3 Se procede a esterilizar el grifo con la ayuda de un mechero de alcohol y se
desinfecta nuevamente con alcohol antiséptico.
3.3.1.1.4 Se deja correr el agua por 60 segundos y se toma la muestra de agua en un
recipiente debidamente esterilizado. Es importante que la tapa de este no
tenga contacto con ninguna superficie.
3.3.1.1.5 Finalmente se coloca la etiqueta en el envase para identificación de la
muestra. La conservación de la muestra debe ser a 4ºC y sin la presencia del
Sol.

3.3.1.2 Toma muestra de Agua cruda

3.3.1.2.1 Designar el punto de toma de muestra en el cuerpo de agua cruda. La muestra

debe ser tomada evitando el fondo y la superficie del agua para que no
ingresen sedimentos.
3.3.1.2.2 Para la toma de la muestra se requiere de un recipiente debidamente
esterilizado, además al momento de la toma se debe cerrar de forma
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inmediata y de esta manera evitar que la tapa tenga contacto con ningún tipo
de superficie
3.3.1.2.3 Finalmente se coloca la etiqueta en el envase para identificación de la muestra
y se coloca en una funda negra para con el fin de evitar que los rayos solares
penetren la misma y se generen procesos fotosintéticos.
3.3.1.2.4 La conservación de la muestra debe ser a 4ºC y sin la presencia del Sol.

3.3.2 Desinfección del área de trabajo

3.3.2.1 Se procede a delimitar el área de trabajo, es decir un área de seguridad, para esto se
delimita con cinta adhesiva y se procede a limpiar y a desinfectar con alcohol.
3.3.2.2 Se coloca 3 mecheros de alcohol con el fin de mantener la zona de seguridad sin la
intromisión de microrganismos alóctonos.
3.3.2.3 En esta zona se colocan todos los materiales desinfectados.

3.3.3 Preparación del Agar

3.3.3.1 El Agar debe ser preparado 24 horas previas a la realización de la práctica, para esto
se realiza una mezcla de agua y agar.
3.3.3.2 En una balanza de precisión pesar cierta cantidad de agar, esta cantidad está
determinada en la hoja técnica del agar.
3.3.3.3 Se procede a colocar el Agar pesado en un vaso de precipitacón y se diluye con agua.
3.3.3.4 Para generar el cultivo por ebullición, se utiliza el Mechero de Bunsen, de esta manera
se calienta y se procede a mezclar con una varilla de vidrio hasta que se disuelva todo
el polvo de Agar.
3.3.3.5 Se coloca el agar en los tubos de ensayo para que proceda a la solidificación durante
24 horas.
3.3.3.6 Los tubos son tapados con algodón y se colocan en unas canastillas metálica para
mantenerlas en refrigeración hasta la realización del ensayo a una temperatura de 4ºC.
3.3.3.7 Los tubos de ensayo se colocan en la autoclave (olla de presión a nivel industrial), se
coloca una cierta cantidad de agua hasta que cubra la niquelina, se tapa y se cierra la
válvula de aire.
3.3.3.8 Luego de aproximadamente 15 a 20 minutos se tiene una presión de 15 psi que se
mide en el manómetro y se abre la válvula de aire, se espera hasta que la presión baje
a cero y se abre.
3.3.3.9 Se sacan las canastillas y se procede a colocar cada tubo de ensayo en las cajas Petri.

3.3.4 Conteo de microorganismos

3.3.4.1 Las cajas Petri a utilizar deben estar previamente des esterilizadas y para la
desinfección de las pipetas, se utiliza el mechero de alcohol y se flamea la punta de la
pipeta y se limpia con alcohol antiséptico respectivamente.
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3.3.4.2 Se abre cuidadosamente la tapa de la caja Petri y se toma con la pipeta 0.1 ml de la
muestra de agua depositándola enseguida en la caja. Esto se repite para disoluciones
de 1.0 y 10 ml de muestra de agua potable respectivamente.
3.3.4.3 Con otras pipetas de igual manera, se abre cuidadosamente la tapa de la caja Petri y se
toma con la pipeta 0.1 ml de la muestra de agua depositándola enseguida en la caja.
Esto se repite para disoluciones de 1.0 y 10 ml de muestra de agua cruda
respectivamente.
3.3.4.4 En cada una de las cajas se coloca el Agar contenido en los tubos de ensayo y una vez
que se tenga esto, se procede a mezclar con movimientos rotacionales y se espera a
que el Agar se solidifique, es decir que se haga como gel.
3.3.4.5 Con un lápiz de cera se procede a etiquetar las Cajas Petri con la cantidad y con el
tipo de muestra de agua analizada.
3.3.4.6 Se pasa a la incubadora durante 24 horas; pasado dicho tiempo se retira la tapa y se la
coloca en el contador de colonias
3.3.4.7 De esta manera se procede a identificar y contar los microorganismos presentes en
cada una de las muestras de agua, estos pueden ser bacterias, mohos y levaduras. Se
registran los valores obtenidos

DATOS EXPERIMENTALES

4.1 Datos Generales: 

 
Tabla 4.1.1. Datos de la Muestra 1
DATOS DE LA MUESTRA 1
NOMBRE MUESTREADOR  
LUGAR DE MUESTREO CISTERNA
FECHA/HORA TOMA MUESTRA 10/03/2022
NOMBRE DE QUIEN RECIBE LA MUESTRA Ing. Paulina Herrera
MÉTODO DE MUESTREO Recipiente Plástico
Fuente: Ing. Paulina Herrera, marzo, 2022.

Tabla 4.1.2. Datos de laboratorio (Muestra 1)

DATOS DE LABORATORIO
FECHA DE ENSAYO 10/03/2022
DIRECTOR DEL LABORATORIO Ing. Carlos Enríquez MSc.
PERSONA QUE REALIZÓ EL ENSAYO  
Fuente: Ing. Paulina Herrera, marzo, 2022.

Tabla 4.1.3. Resultados (Muestra 1)

RESULTADOS
Colonias de Muestra
Fotografía Mohos Levaduras
Bacterias (ml)
1 0 0 0.1
 8

5 0 0 1

142 0 0 10

Fuente: Ing. Paulina Herrera, marzo, 2022.

Tabla 4.1.4. Datos de la Muestra 2

DATOS DE LA MUESTRA
NOMBRE MUESTREADOR  
LUGAR DE MUESTREO POZO PROFUNDO
FECHA/HORA TOMA MUESTRA 10/03/2022
NOMBRE DE QUIEN RECIBE LA MUESTRA Ing. Paulina Herrera
MÉTODO DE MUESTREO Recipiente Plástico
Fuente: Ing. Paulina Herrera, marzo, 2022.

Tabla 4.1.2. Datos de laboratorio (Muestra 1)

DATOS DE LABORATORIO
FECHA DE ENSAYO 10/03/2022
DIRECTOR DEL LABORATORIO Ing. Carlos Enríquez MSc.
PERSONA QUE REALIZÓ EL ENSAYO  
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Fuente: Ing. Paulina Herrera, marzo, 2022.

Tabla 4.1.3. Resultados (Muestra 2)

RESULTADOS
Colonias Muestra
Fotografía de Mohos Levaduras
(ml)
Bacterias

0 0 0 0.1

6 0 0 1

33 2 0 10

Fuente: Ing. Paulina Herrera, marzo, 2022.

CÁLCULOS

Para la muestra 1 de Agua potable (Cisterna)

1.5 Cálculo número de colonias para una 0.1 ml de muestra
 10

N ( cm3 )
UFC Nº Colonias contadas (C.B.)
=
Cantidad total de muestra (C.M.)

Donde:
 N → número de concentración de colonias
 C . B .→ Total de colonias de bacterias
 C . M .→ Cantidad de muestra sembrada
N
UFC
ml (=
1
)
0.1(cm3)

N colonias = 10 (cm3
UFC
)
1.6 Cálculo número de colonias para un 1 ml de muestra

N ( UFC
ml ) 1 (cm3)
=
5

N Colonias= 5 (UFC
cm3 )

1.7 Cálculo número de colonias para 10 ml de muestra

N ( UFC
ml ) =
142
10(cm3)

N Colonias= 14.2 (UFC

cm3 )=15 (
cm3 )
UFC

1.8 Cálculo de promedio bacterias, mohos y levaduras.

10+5+15
Npbacterias=
3

Npbacterias=10 (UFC
cm3 )

0+0+0
Npmohos=
3

Npmohos=0 ( UFC
cm3 )
 11

0+0+ 0
Nplevaduras=
3

Nplevaduras=0 (UFC
cm3 )

RESULTADOS

Tabla 1. Resultado para la muestra de agua potable (Cisterna)

Muestra Colonias de Mohos Levaduras Colonias Promedio

(ml) Bacterias (UFC/ml) (UFC/ml)
0.1 1 0 0 10 10
1 5 0 0 5
10 142 0 0 15
Fuente: Grupo 4, marzo, 2022

Tabla 2. Resultado para la muestra de agua cruda (Pozo Profundo)

Muestra Colonias de Mohos Levaduras Colonias Promedio

(ml) Bacterias (UFC/ml) (UFC/ml)
0.1 0 0 0 0 4
1 6 0 0 6
10 33 2 0 4
Fuente: Grupo 4, marzo, 2022

ANÁLISIS DE RESULTADOS

 Para la muestra de agua potable tomada de una Cisterna se ensayó diferentes

tipos de concentraciones: 0.1, 1 y 10 (ml). Después de 24 horas para la
muestra de 0.1 ml se obtuvo valores de 1 Colonia, 0 Mohos y 0 levaduras, en
la segunda siembra de 1ml se obtuvo valores de 5 Colonias, 0 Mohos y 0
levaduras; y en la tercera siembra de 10 ml se obtuvo valores de 142 Colonias,
0 Mohos y 0 levaduras. Según estos valores se puede analizar un crecimiento
moderado de colonias de bacterias, esto debido al Agar que se implementó
generando la multiplicación de estas. Para los mohos y levaduras no se tiene
ningún incremento manteniéndose en todo momento del análisis con valores
de cero. Según la norma INEN 1108, Tabla 7. Requisitos microbiológicos que
el agua potable debe cumplir, indica que se debe tener un valor menor a 1 de
UFC/100ml. Para la muestra ensayada se obtuvo un valor promedio de 10
UFC/ml igual a 0.1 UFC/100ml; concluyendo que es apta para el consumo
humano.
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 En la muestra de agua potable (Cisterna) se obtuvieron en los resultados para

las diferentes concentraciones 0 mohos y 0 levaduras, esto se da
principalmente debido a que el agua potable cuenta con un proceso de
tratamiento para eliminar casi por completo estos microorganismos, por otro
lado, en la muestra de agua cruda (Pozo Profundo) se obtuvieron en los
resultados 2 mohos y 0 levaduras, para la disolución 10 ml, es decir que esta
agua es de buena calidad ya que aunque se propició las condiciones
adecuadas para su crecimiento, como son la alimentación mediante agar y una
temperatura adecuada en la incubadora su crecimiento fue insignificante.

CONCLUSIONES

 Es muy importante llevar a cabo la preparación de una sustancia que permita

la reproducción de microrganismos, para esto es fundamental la mezcla en
proporción del AGAR en conjunto con el agua.
 El análisis microbiológico de la muestra de agua cruda (Pozo Profundo) indica
poca presencia de microorganismo, entre ellos los que más se registra son
colonias de bacterias y una cantidad mínima de mohos, catalogando así a esta
afluente como una fuente no contaminada, esto se debe a que la composición
química del agua del pozo profundo es buena y los microorganismos,
bacterias, virus, hongos y otros agentes externos no han contaminar el agua
subterránea que abastece al pozo.

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https://www.climasmonterrey.com/cuales-son-las-propiedades-del-aire

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número total de bacterias en placas.:
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Microlab, I. (2015, Febrero 20). DBO, DQO. Obtenido de

https://www.aguasresiduales.info/revista/blog/analisis-comparativas-y-relaciones-entre-la-
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Agua. Libro VI, Anexo 1.

Obón, J. (s.f.). Análisis Microbológico del Agua. Obtenido de Universidad Politécnica de Cartagena:
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http://www.disaster-info.net/Agua/pdf/11-CloroResidual.pdf

ANEXOS

Imágenes
 14

Imagen 1. Toma de la muestra

Fuente: Laboratorio de Sanitaria UCE (2022)

Imagen 2. Ensayo de oxígeno disuelto por el método de Alsterberg

Fuente: Laboratorio de Sanitaria UCE (2022)

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Imagen 3. Normativa de referencia para el análisis

Fuente: Norma de Calidad Ambiental

RESUMEN/ DESCRIPTORES (VILMA)

INTRODUCCIÓN (ALI)

OBJETIVOS (FRANK)

MATERIALES, EQUIPOS, SUSTANCIAS Y REACTIVOS (CRISTIAN)

PROCEDIMIENTO (MAYRA)

ANÁLISIS DEL ENSAYO

CONCLUSIONES