Int. J. Morphol.

,
30(4):1343-1347, 2012.

Células Troncales en el Desarrollo y las Perspectivas de

Reprogramación Celular para la Regeneración

Stem Cells in Development and the Perspectives of Cellular Reprogramming for Regeneration

Muñoz, L. & Concha, M. L.

MUÑOZ, L. & CONCHA, M. L. Células troncales en el desarrollo y las perspectivas de reprogramación celular para la regeneración.
Int. J. Morphol., 30(4):1343-1347, 2012.

RESUMEN: Los organismos multicelulares se desarrollan a partir de una sola célula: el cigoto. A lo largo de su ontogenia, las
células que derivan del cigoto despliegan distintos programas celulares, los cuales son estabilizados por mecanismos epigenéticos. Los
programas de las células troncales son más inclusivos, siendo mayor el silenciamiento que la activación de genes durante el proceso de
diferenciación celular. Experimentalmente, se ha logrado que células en estado de diferenciación terminal reactiven el programa de
células troncales y recuperen su pluripotencialidad, proceso llamado reprogramación. Esto despierta esperanzas en el avance de una
medicina regenerativa con nuevas capacidades para el tratamiento de enfermedades crónicas, sin las restricciones éticas del uso de
células embrionarias.

PALABRAS CLAVE: Células troncales; Pluripotencialidad; Reprogramación celular; Factores de transcripción; Oct4;
Sox2; Nanog; Medicina regenerativa.

INTRODUCCIÓN

Los organismos multicelulares están conformados por do la identidad celular (Bonasio et al., 2010). Todas las cé-
una gran diversidad de células, las que se organizan y espe- lulas de un organismo multicelular tienen exactamente la
cializan en funciones muy definidas para sostener la vida. misma información genética, pero “adquieren el compro-
Es impresionante que esa diversidad de formas y funciones miso” de usar sólo una determinada parte de ella y no lo
deriven de una sola célula: el cigoto. Este, al dividirse, re- “olvidan”. ¿Cómo lo hacen?
plica y transmite fielmente su genoma completo, de la mis-
ma forma que lo sigue haciendo toda su progenie cada vez En 1997, se publicó el nacimiento de Dolly. Se trata-
que se vuelve a dividir. Sin embargo, el proceso de diferen- ba de una oveja que había sido concebida por el transplante
ciación celular implica que las células de diferente linaje del núcleo de una célula somática en estado de diferencia-
utilizan distinta información, a partir de aquella disponible ción terminal proveniente de un organismo adulto, a un
en su genoma. La selección de los genes que se expresan o ovocito al que se le había retirado su propio núcleo. Este
se silencian en una célula determinada es el “programa” de tipo de experimentos, llamados de “reprogramación celular
esa célula y determina su compromiso de linaje. Este com- mediante transferencia nuclear”, demostraron en forma in-
promiso, es decir, la determinación del tipo celular en el equívoca que todas las células de un organismo adulto con-
cual se diferencia una célula, se adquiere durante el desa- servan la información genética capaz de llevar adelante el
rrollo embrionario. La imagen de la “adquisición de un com- desarrollo de un organismo completo. Por lo tanto, la infor-
promiso” es adecuada, dado que expresa muy bien el hecho mación genética no se pierde durante la diferenciación ce-
de que los estímulos o señales que provocan que una célula lular, es su expresión la que cambia a lo largo de la ontogenia
despliegue un determinado programa celular para formar celular (Jaenisch et al., 2008). Los programas son estables,
parte, por ejemplo, del hígado o el cerebro, ocurren sólo pero los experimentos de “reprogramación” demuestran que
durante el desarrollo embrionario. Posteriormente, existen son modificables. Desde el punto de vista de la aplicación
mecanismos de “memoria” que permiten replicar el progra- biomédica, los conceptos que emanan de este tipo de expe-
ma indicado cada vez que las células se dividen, mantenien- rimentos sugieren que mediante la reprogramación celular

Laboratorio de Estudios Ontogénicos, Programa de Anatomía y Biología del Desarrollo, Facultad de Medicina, Universidad de Chile.
Instituto de Neurociencias Biomédicas, Universidad de Chile, Santiago, Chile.

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se podría llegar a regenerar tejidos como estrategia de trata- logra mediante divisiones mitóticas asimétricas, en las que
miento de diferentes enfermedades degenerativas. una de las células hijas conserva las características de la
Reprogramar implica, que células ya diferenciadas vuelvan célula madre, es decir sigue siendo célula troncal, y la otra
a un estado pluripotencial y se rediferencien en el tipo celu- adquiere nuevas características que la van diferenciando
lar de interés, que sirva como sustrato para regenerar tejidos hacia un cierto linaje celular. La primera se mantiene siem-
de órganos que han fallado. Todo esto a partir de células pre en el ciclo celular y conserva la capacidad de generar
obtenidas del mismo paciente. Ejemplos de estos tratamien- progenies de células troncales y/o de células diferenciadas
tos podrían ser la generación de células ß de los islotes en forma indefinida, mientras que la segunda en algún mo-
pancreáticos, encargadas de producir la insulina, para el tra- mento de su ontogenia pasa a la etapa G0 del ciclo celular.
tamiento de la Diabetes Mellitus tipo 1, la generación de Las técnicas de reprogramación celular evolucionaron des-
neuronas de la Sustancia Nigra pars compacta en la enfer- de los experimentos de transferencia nuclear hasta que en
medad de Parkinson (Xu et al., 2010), o la regeneración de 2006, Takahashi & Yamanaka (2008) publicaron la
células troncales hematógenas después del tratamiento por reprogramación directa de una célula diferenciada sin afec-
quimioterapia de una leucemia. Sin embargo, aún estamos tar su integridad. Ellos reprogramaron fibroblastos median-
lejos de saber cómo se puede controlar la reprogramación te la transducción viral de cuatro factores de transcripción:
celular. Para acceder a este tipo de conocimiento, parece Oct4, Sox2, c-myc y Klf4. Los dos primeros son factores de
lógico comenzar por intentar entender cómo se produce la transcripción específicos de células troncales, asociados a
programación en la naturaleza, es decir entender la ontogenia pluripotencialidad. Los dos últimos son factores de trans-
celular a lo largo del desarrollo. cripción oncogénicos u oncogenes. Posteriormente se ha
demostrado que estos oncogenes son prescindibles para el
Ontogenia Celular. El cigoto tiene que ser capaz de dar éxito del proceso pero que aumentan importantemente su
origen a todas las células embrionarias y extraembrionarias. eficiencia, hasta que recientemente se logró realizar una
A su vez, las primeras células embrionarias, llamadas célu- reprogramación directa sólo mediante la transducción de
las troncales embrionarias, tienen que ser capaces de dar Oct4 (Xu et al.). En estos experimentos, se obtuvo células
origen a todas las células de un organismo adulto, pero no en dos condiciones de reprogramación, una parcial y otra
son capaces de dar origen a los tejidos extraembrionarios. A completa. Un análisis genómico integrativo de gran escala
su vez, las células diferenciadas, cuyo potencial proliferativo mostró que existía una diferencia entre estas dos condicio-
es limitado, mientras pueden dividirse no pueden dar origen nes en cuanto a la “remodelación epigenética”. En las célu-
a células distintas a si mismas. En otras palabras, a medida las que se reprogramaron sólo parcialmente existía una per-
que la ontogenia celular avanza, las células van perdiendo sistencia de la hipermetilación del ADN a nivel de islas CpG
la potencialidad de dar origen a la gama de tipos celulares de los promotores de los principales factores de transcrip-
posibles. De totipotenciales, pasan a ser pluripotenciales y ción asociados a la pluripotencialidad. La utilización de un
luego derivan en oligopotenciales, hasta perder toda poten- inhibidor de las ADN metiltransferasas durante la
cialidad de diferenciarse en algo distinto a ellas mismas reprogramación provocó que la mayoría de las células se
(Jaenisch et al). Si los programas celulares son combinatorias reprogramaran en forma completa y muy pocas quedaran
de expresión o represión estable de genes, intuitivamente se en el estado intermedio (Mikkelsen et al., 2008). La expli-
puede plantear que una célula pluripotencial expresa más cación de este fenómeno es que, al evitar la metilación del
genes que una célula terminalmente diferenciada. Si bien ADN, los promotores de los factores de transcripción
no se conocen exactamente los mecanismos involucrados involucrados en la troncalidad quedan asequibles a sus fac-
en este proceso ontogénico, la evidencia existente apoya esta tores de transcripción, pudiéndose activar el programa de
visión. En un modelo de diferenciación in vitro, se demos- troncalidad (Jaenisch et al.).
tró que en el paso de una célula troncal embrionaria a una
célula progenitora de neuronas, la relación entre Los factores de transcripción centrales responsables
silenciamiento de genes versus activación de genes es de de la mantención de la pluripotencialidad son Oct4, Sox2 y
23:1. Es decir, en la adquisición de un compromiso de linaje Nanog. Sox2 se expresa en forma más abundante que los
son muchos más los genes que se reprimen que los que se otros dos y no es exclusivo de células pluripotenciales. Sin
activan (Mohn et al., 2008). embargo, la presencia de Oct4, el cual se encuentra en baja
expresión y es específico del estado pluripotencial, permite
Reprogramación celular directa. Las células troncales que Sox2 y Oct4 formen heterodímeros y se unan al promo-
embrionarias se definen por dos capacidades esenciales: la tor de Nanog, posibilitando su transcripción. Una vez pre-
pluripotencialidad, que es la capacidad de generar una pro- sentes los tres factores, promueven la transcripción de genes
genie que se diferencia en distintos tipos celulares, y la ca- propios de células troncales embrionarias, además de unirse
pacidad de autorrenovarse (Jaenisch et al.). Esto último se a sus propios promotores, formando un circuito de retroali-
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mentación positiva consigo mismos y con los otros dos. Por lo tanto, mientras blastema y proliferación de las células del
ellos estén presentes se autoperpetuarán logrando mantener este estado celu- blastema. Una vez formado el blastema,
lar (Boyer et al., 2005) (Fig. 1). El inicio de la diferenciación no ocurre sin la se piensa que el proceso continúa de ma-
represión activa de la transcripción mediante factores de transcripción nera similar a lo que ocurre en el brote de
represores, como primer evento y posteriormente silenciamiento epigenético. un miembro durante el desarrollo embrio-
Posteriormente se produce la activación de la expresión de los genes propios nario, en cuanto a sus aspectos
del estado diferenciado, muchos de los cuales ya están siendo transcritos en el morfogenéticos, formación de patrones, y
estado indiferenciado pluripotencial (Mohn et al.). rediferenciación (Han et al.).

Perspectivas de la aplicación clínica de

la reprogramación celular directa. Re-
cientemente se publicó la experiencia del
uso de células inducidas a ser pluripo-
tenciales, para el tratamiento de un mode-
lo de enfermedad de Parkinson en ratas.
La enfermedad de Parkinson es una en-
fermedad degenerativa caracterizada por
la presencia de alteraciones motoras pro-
vocada por la pérdida de neuronas
dopaminérgicas de la Sustancia Nigra del
cerebro. Experimentalmente, se puede
provocar la muerte específica de este tipo
de neuronas en ratas mediante la adminis-
tración intracerebral de 6-hidroxi-
dopamina (6-OH-DA). Esto genera un
cuadro de parkinsonismo. En el estudio,
Fig. 1. Circuito central de pluripotencialidad celular formado por los factores de trans- se reprogramó fibroblastos de estas ratas
cripción Oct4, Sox2 y Nanog. Sox2, que es más abundante y ubicuo que los otros dos y se indujo su diferenciación a neuronas
factores, forma heterodímeros con Oct4, el cual se expresa a bajos niveles y en forma dopaminérgicas, las que posteriormente
específica en las células pluripotenciales. El heterodímero Oct4-Sox2 se une al promo- fueron implantadas en el cerebro de los
tor del gen Nanog, promoviendo el inicio de su transcripción. Oct4, Sox2 y Nanog mismos animales. Cuatro semanas des-
promueven el despliegue del programa propio de células troncales embrionarias, in- pués se vio una recuperación clínica evi-
cluyendo la promoción de su propia transcripción, formando un triple circuito de re- dente de las ratas implantadas con
troalimentación positiva que estabiliza ese estado celular.
neuronas dopaminérgicas, en comparación
con ratas a las cuales se sometió a la mis-
Reprogramación celular en la naturaleza. El proceso por el cual una célula ma operación pero en las que no se dejó
diferenciada termina adquiriendo otro fenotipo diferenciado, distinto al ante- implante alguno. Cuatro semanas después
rior, se denomina transdiferenciación. Existen en la naturaleza ejemplos de también se realizó un examen histológico
transdiferenciación de células adultas en condiciones fisiológicas. Uno de es- del cerebro de las ratas sometidas al im-
tos ejemplos es el de los blastemas en salamandras o peces cebra. En estos plante, el que mostró presencia de un nú-
casos, células integras serían capaces de recibir mensajes del medio ambiente mero significativo de células con
que les permite llevar a cabo el proceso de reprogramación. Este proceso tiene morfologías complejas que presentaban
una fase de desdiferenciación hacia una célula troncal, la que se autorrenueva marcadores moleculares de neuronas
y prolifera, generando una progenie que evoluciona hacia estados diferencia- dopaminérgicas, estando el cuerpo celu-
dos distintos al original. Esto permite que se regenere un segmento amputado lar en el sitio del implante pero emitiendo
específico (Han et al., 2005). largas prolongaciones hacia estructuras
cerebrales vecinas, tal como lo hacen las
La regeneración es una respuesta local de las células del muñón, y neuronas (Wernig et al., 2008).
atraviesa por una serie de etapas, que incluyen: cierre de la herida a nivel de la
epidermis, desdiferenciación de los tejidos del muñón, transformación del Experimentos de este tipo despier-
epitelio en una estructura especializada llamada cresta apical epitelial o AEC tan la esperanza de estar frente a una nue-
(apical epithelial cap), que es requerida para el brote de la extremidad, migra- va estrategia terapéutica. Las principales
ción de células desdiferenciadas al centro de la herida donde se forma el ventajas respecto a intentos terapéuticos
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previos con células madre, es que en estos procedimientos ha logrado en cultivo en forma sencilla, mediante el uso
se realizan implantes con células propias del paciente, que de medios condicionados por células de carcinoma em-
evitan rechazos del sistema inmune, y que en estos casos brionario. En ese medio de cultivo estarían las señales que
no se requiere del uso de embriones, evitando así conflic- son transducidas por las células reclutando su propia ma-
tos éticos. Sin embargo, su uso en seres humanos aún debe quinaria de pluripotencialidad, sin aporte de moléculas
superar una gran escollo. La reprogramación celular reali- exógenas al intracelular. Este proceso también es
zada por transducción de genes mediante el uso de optimizable con el uso de fármacos inhibidores de
lentivirus, integra a estos genes en forma aleatoria en el deacetilasas o metiltrasferasas, facilitando la remodelación
genoma de la célula, pudiendo generar mutaciones epigenética necesaria para la reactivación de la
oncogénicas en la célula y producir un cáncer en el pa- transcripcción de los genes de pluripotencialidad. No to-
ciente (Xu et al). dos los tipos celulares son igualmente susceptibles a este
tipo de reprogramación, probablemente dependiente de su
Reprogramación celular sin introducción de ácidos estado transcripcional previo. Así, se ha visto que tipos
nucleicos. En 2009, se logró por primera vez la celulares que ya expresan alguno de los factores
reprogramación de fibroblastos embrionarios con la reprogramadores, son más eficientemente reprogramables
transducción de proteínas recombinantes de los mismos por cualquiera de los métodos mencionados. Dentro de los
factores de transcripción Oct4, Sox2, Klf-4 y c-myc. Esto cuatro factores, la inducción de la transcripción de Oct4
superaría los riesgos oncogénicos de la reprogramación sería el paso crítico, el cual al heterodimerizar con Sox2,
directa, sin embargo, tiene desventajas en cuanto a la cor- de expresión menos restringida en distintos tipos celula-
ta vida media de las proteínas, necesitando aplicaciones res, promovería la transcripción de Nanog, completando el
repetidas, con una ineficiencia importante. Esta última ha circuito central, que posteriormente se autoperpetúa, sos-
sido mejorada con el uso de ácido valproico, un teniendo la condición pluripotencial (Parameswaran et al.).
anticonvulsivante de uso habitual en seres humanos, que
actúa inhibiendo la deacetilasa de histonas (HDAC)
(Parameswaran et al., 2011). CONCLUSIONES

Reprogramación celular mediante señales no autóno-

mas. Esta aproximación interesante, es la que se acerca La ontogenia celular está dada por señales autó-
más a los mecanismos normales de la ontogenia celular nomas y no autónomas que van modulando y
durante el desarrollo. Se basa en que si células madre ya estabilizando su programa celular. Este proceso es rever-
especificadas para un tejido en particular (células sible, pudiendo generar nuevas identidades celulares,
multipotentes) son colocadas en un ambiente propio de potencialmente útiles en medicina regenerativa humana.
estadios del desarrollo embrionario más tempranos, ellas La seguridad y eficiencia de métodos de reprogramación
son capaces de reprogramarse hacia un estado pluripotente, libres de restricciones éticas por la ausencia de la necesi-
como la de una célula madre embrionaria. De esta forma dad de utilización de embriones en el proceso, está en
se puede dar origen a células de las tres capas embrionarias pleno desarrollo. Siendo la tendencia natural a imitar los
(ectodermo, mesodermo y endodermo), es decir, se está mecanismos utilizados por las células durante su desa-
ante un proceso de transdiferenciación. Este ambiente se rrollo, para de esta forma evitar alterar su integridad.

MUÑOZ, L. & CONCHA, M. L. Stem cells in development, and the perspectives of cellular reprogramming for regeneration. Int. J.
Morphol., 30(4):1343-1347, 2012.

SUMMARY: Multicellular organisms develop from one cell: the zygote. During ontogeny, cells derived from the zygote display
different cellular programs that are stabilized through epigenetic mechanisms. The programs of stem cells seem more inclusive, and
during the process of differentiation a larger number of genes are silenced than activated. The reactivation of pluripotency recovers of the
stem cell program in terminally differentiated cells has been achieved experimentally. This process, called reprogramming, brings new
hope for the development of a regenerative medicine with new capabilities for the treatment of chronic diseases, without the ethic
restrains imposed by the use of embryonic cells.

KEY WORDS: Stem cells, pluripotency, cellular reprogramming, transcription factors, Oct4, Sox2, Nanog, regenerative
medicine.

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