Informe de Bioquimica 1-1

UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS
(Universidad del Perú, Decana de América)
Facultad de Medicina
ESCUELA PROFESIONAL DE TECNOLOGÍA MÉDICA
TERAPIA FÍSICA Y REHABILITACIÓN
Asignatura:
BIOQUÍMICA Y NUTRICIÓN
Docente:
Yesica Llimpe Mitma
Alumnos:
Aguirre Palomino, Elder Jefferson

Cajavilca Ordoñez, Alison Nayeli
Contreras Tamani, Josheph Abdul
Figueroa Yzaguirre, Maria Angelli
Garcia Mori, Alexandra Romina
Lima, Perú
2022 - II
ÍNDICE
ÍNDICE 2
Objetivo de la práctica 3
Marco Teórico 3
Materiales 3
Procedimientos 4
Desarrollo de los cálculos 4
Obtención de la concentración de los tubos (T1, T2, T3 y T4) 4
Curvas de calibración 4
Obtención de los Factores de Calibración (Fc) y promedio 5
Interpretación de los resultados 7
Cuestionario 8
Referencias Bibliográficas 10
Objetivo de la práctica
● Aprender el fundamento de la espectrofotometría.
● Conocer los pasos procedimentales que se dan en la espectrofotometría para
obtener la concentración de las muestras.
● Determinar la longitud de onda de máxima absorbancia.
● Construir e interpretar una curva de calibración.
● Determinar el factor de calibración.
● Averiguar la concentración de una muestra problema aplicando la curva de
calibración y el factor calibración.
Datos de la práctica
Marco Teórico
Espectrofotometría:
Es un método de absorción molecular que nos permite cuantificar sustancias y está basado
en la medición de la intensidad de la luz monocromática transmitida a través de una
solución coloreada, ya sea que se trate de sustancias naturalmente coloreadas o que se
han conseguido coloreadas mediante reacciones químicas adecuadas (1).
● Averiguar la concentración de tubos.

● Obtener la longitud de onda óptima.
● Obtención de la concentración de una muestra problema con la curva de calibración.
● Obtención de la concentración de una muestra problema con el factor de calibración.
Materiales
● 5 tubos
● Muestra stock
● Agua destilada
● 2 pipetas
● Espectrofotómetro
● Papel toalla
Procedimientos
1. Primero pasamos a realizar las muestras de los 4 tubos con los datos que nos dan.
2. Pasaremos a cada muestra por el espectrofotómetro para poder así obtener la
absorbancia de los tubos y así hallar la absorbancia óptima.
Desarrollo de los cálculos
Obtención de la concentración de los tubos (T1, T2, T3 y T4)

● Para esto utilizamos la fórmula:
C1 x V1 = C2 x V2
Concentración tubo T1:
10mg% * 0.5mL = Cf * 5mL
Cf = 10 mg% * 0.5mL / 5mL
Cf = 5 mg% / 5mL
Cf = 1 mg%
10 mg% * 1.0mL = Cf * 5mL
Cf = 10 mg% * 1.0mL / 5mL
Cf = 10 mg% / 5mL
Cf = 2 mg%
10 mg% * 1.5mL = Cf * 5mL
Cf = 10 mg%* 1.5mL / 5mL
Cf = 15 mg% / 5mL
Cf = 3 mg%
1000 uM * 2.0mL = Cf * 5mL
Cf = 10 mg% * 2.0mL / 5mL
Cf = 20 mg% / 5mL
Cf = 4 mg%
Curvas de calibración
1. Obtención de la longitud de onda (λ) óptima (máxima)
Obtención de los Factores de Calibración (Fc) y promedio
1. Determine los factores de calibración (Fc) para cada concentración estándar.
Obtenga un promedio de Fc.
Usamos la fórmula:
En este caso usaremos las muestras T2, T3 y T4:

Factor de calibración de T2:
Fc = 2mg % / 0.114 A
Fc = 17.54
Fc = 3mg % / 0.179 A
Fc = 16.759
Fc = 4mg % / 0.237
Fc = 16.877
Promedio de factor de calibración (Fc):
T2 +T3 + T4 = 51.176
= 51.176 / 3
= 17.058 mg %
2. Con el Fc promedio y el dato de absorbancia de la muestra proporcionada por el

docente, calcule la concentración de la muestra problema.
Usaremos la siguiente fórmula:
Datos:
Fc= 17.058
A(mp) = 0.200
Resolvemos:
[ ] MP = 0.200 * 17.058
[ ] MP = 3.41
3. Con los datos obtenidos: Construir en un papel milimetrado las gráficas de
absorbancia versus concentración de Permanganato de Potasio (KMnO4)
Determinar la concentración de la muestra problema por el Método de la Curva de
Calibración.
Usaremos los datos obtenidos y la gráfica de λ máximo
CONCENTRACIONES ABSORBANCIA
2 0.114
3 0.179
MP 0.200
4 0.237
Interpretación de los resultados
Se determino la concentración y absorbancias de los tubos (T1, T2, T3 y T4)

[T1]= 1 mg% en λ optimo A=0.054
Se determino el λ optimo en: 257nm
Se determino la concentración usando el método Curva de calibración
Se observo la relación entre absorbancia y concentración. La absorbancia de una solución es

directamente proporcional a su concentración, es decir, a mayor número de moléculas mayor
interacción de la luz con ellas.
Se Obtuvo los Factores de Calibración (Fc) y promedio
Factor de calibración de T2: Fc = 17.54
Promedio de factor de calibración (Fc):
Fc= 17.058 mg %
Se calculo la concentración de la muestra problema usando el Fc

[ ] MP = 3.41
Conclusiones:
- Se logro comprender el fundamento de la espectrofotometría, este es un método de
absorción molecular que nos permite cuantificar sustancias basándose en la medición de
la intensidad de la luz monocromática transmitida a través de una solución coloreada.
- Se conocieron los pasos procedimentales que se dan en la espectrofotometría para
obtener la concentración de las muestras por los métodos Curva de calibración y Factor
de calibración.
- Se logro construir e interpretar correctamente las curvas de calibración realizadas con
los datos de las practicas.
- Se logro determinar la concentración de una muestra problema aplicando los métodos
de Curva de calibración y el Factor calibración.
Cuestionario
1. ¿Cuándo a una sustancia se le considera un estándar?
Se considera estándar cuando contiene una concentración conocida de un elemento o

sustancia específica. También es llamada patrón primario.
2. ¿Con qué datos Ud. construye un factor de calibración?

El factor de calibración (Fc) se construye relacionando la concentración de una sustancia
estándar con su absorbancia.
Fc= [estándar]/Absorbancia estándar.
3. Para que una sustancia pueda ser medida en un espectrofotómetro de luz visible,
¿qué condición debe tener?
La espectrofotometría de luz visible está dominada por bandas anchas de baja intensidad por
lo que su uso se ve restringido para muestras sólidas y líquidas. Generalmente, es utilizado
en análisis medioambientales, farmacéuticos y de alimentos, así como también puede
emplearse en la industria de polímeros y plásticos. (2)
4. Averigüe la concentración de una muestra problema cuya Absorbancia = 0.63. Haga

uso de su curva de calibración para conseguir la concentración de la muestra.
Obtenga también la concentración de la muestra por medio del Fc obtenido en la
práctica.
-Método curva de calibración
Datos:
Absorbancia de la muestra problema: 0.63
[Conc. muestra problema]≈ 10mg%
-Por medio de Fc obtenido en la práctica:

Datos:
- Fc: 17.058 mg %
- Absorbancia: 0.63
Usamos: [Conc. muestra problema] =Fc x Abs. Muestra problema
[Conc. muestra problema]= 17.058 mg % x 0.63

[Conc. muestra problema]= 10.74654 mg%.
5. Si en el problema anterior se le da el dato de que la muestra problema tuvo que ser

diluida 1/5. ¿Cuál es su concentración?
Usamos: [Conc. muestra problema diluida] =Fc x Abs. Muestra problema x Fd

Fd(Factor de dilución)
[Conc. muestra problema diluida]= 10.74654 x 1/5

[Conc. muestra problema diluida]= 2.149308 mg%.
6. A qué se le denomina longitud de onda (λ).
Se conoce como longitud de onda al periodo espacial de la misma, es decir la distancia en la

que se repite la forma de la onda. En una onda periódica la longitud de onda es la distancia
física entre dos puntos a partir de los cuales la onda se repite.
7. ¿Cuáles son las partes básicas de un espectrofotómetro?
● Fuente de luz: Es la que estará encargada de iluminar a la muestra y será

posteriormente leída por el espectrofotómetro más adelante, tiene que
presentar ciertas condiciones como estabilidad, direccionalidad, distribución
de energía espectral continua y larga vida.
● Monocromador: Es aquel que aísla las radiaciones de longitud de onda
deseada que inciden o se reflejan, es usado para obtener luz monocromática.
● Compartimento de muestra: Es el lugar donde será colocada la muestra a
evaluar, por lo tanto es donde ocurre la interacción entre la luz y la materia.
Durante este proceso es donde se aplicará la ley de Lambert - Beer, debido a
sus leyes de absorción.
● Detector: Capta la radiación electromagnética de la muestra para su posterior
análisis y estudio, puede ser de dos tipos: los que responden a fotones o los
que responden a calor.
● Registrador: Es aquel que ayudará a que el fenómeno físico pueda ser
entendido, es decir, será el encargado de convertirlo en números
proporcionales. (3)
Referencias Bibliográficas
1. (S/f). Upo.es. Recuperado el 25 de septiembre de 2022, de
https://www.upo.es/depa/webdex/quimfis/docencia/quimbiotec/FQpractica4.pdf
2. Servicios Técnicos de Investigación. Universidad de Alicante. ESPECTROSCOPÍA
ULTRAVIOLETA VISIBLE [Internet]. Sstti.ua.es. 2022 [citado el 24 de septiembre de
2022]. Disponible en: https://sstti.ua.es/es/instrumentacion-cientifica/unidad-de-rayos-
x-de-monocristal-y-espectroscopias-vibracional-y-optica/espectroscopia-ultravioleta-
visible.html
3. Artedinamico. QUÉ ES Y USOS DEL ESPECTROFOTOMETRO. [citado el 24 de
septiembre de 2022]; Disponible en: http://equiposylaboratorio.com/portal/articulo-
ampliado/quE-es-y-usos-del-espectrofotometro

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Aguirre Palomino, Elder Jefferson

● Averiguar la concentración de tubos.

Desarrollo de los cálculos

Obtención de la concentración de los tubos (T1, T2, T3 y T4)

En este caso usaremos las muestras T2, T3 y T4:

Promedio de factor de calibración (Fc):

2. Con el Fc promedio y el dato de absorbancia de la muestra proporcionada por el

Usaremos la siguiente fórmula:

Interpretación de los resultados

Se determino la concentración y absorbancias de los tubos (T1, T2, T3 y T4)

Se determino la concentración usando el método Curva de calibración

Se observo la relación entre absorbancia y concentración. La absorbancia de una solución es

Promedio de factor de calibración (Fc):

Se calculo la concentración de la muestra problema usando el Fc

Se considera estándar cuando contiene una concentración conocida de un elemento o

2. ¿Con qué datos Ud. construye un factor de calibración?

4. Averigüe la concentración de una muestra problema cuya Absorbancia = 0.63. Haga

-Por medio de Fc obtenido en la práctica:

Usamos: [Conc. muestra problema] =Fc x Abs. Muestra problema

[Conc. muestra problema]= 17.058 mg % x 0.63

5. Si en el problema anterior se le da el dato de que la muestra problema tuvo que ser

Usamos: [Conc. muestra problema diluida] =Fc x Abs. Muestra problema x Fd

[Conc. muestra problema diluida]= 10.74654 x 1/5

Se conoce como longitud de onda al periodo espacial de la misma, es decir la distancia en la

7. ¿Cuáles son las partes básicas de un espectrofotómetro?

● Fuente de luz: Es la que estará encargada de iluminar a la muestra y será

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