Biología y Microbiología 2021 – I Marzo

GUÍA N°1
Análisis microbiológico

2021- II
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Laboratorio N°1: Análisis microbiológico

LABORATORIO DE BIOLOGIA Y MICROBIOLOGIA

 Biología y Microbiología 2021 – I Marzo

LABORATORIO Nº1

ANALISIS MICRIOBIOLOGICO
I. OBJETIVOS
- Aplicar la siembra por agotamiento o estrías para realizar
el análisis bacteriológico de alimentos y superficies en agar nutritivo
- Evaluar la eficacia de la lejía en la desinfección de superficies y alimentos

II. PRINCIPIOS TEÓRICOS

Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y
otros componentes que suministran los compuestos necesarios para el
desarrollo de los microorganismos.
El agar Mac Conkey   es un medio de cultivo sólido que permite el
aislamiento exclusivo de bacilos Gram negativos. Por esta razón es
un medio selectivo y además permite distinguir entre bacilos
fermentadores y no fermentadores de la lactosa, lo que lo hace un
medio diferencial. Es uno de los medios de cultivo más utilizado en
un laboratorio de microbiología.
Este medio se usa principalmente para el aislamiento de bacilos
Gram negativos pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae,
incluyendo las especies oportunistas y las enteropatógenas.
COMPOSICION DEL AGAR MAC CONKEY :
Peptona de gelatina  17.0 g
Peptona de carne y caseina 3.0 g
Monohidrato de Lactosa 10.0 g
Sales biliares 1.5 g
Cloruro de Sodio  5.0 g
Rojo Neutro 0.03 g
Cristal Violeta 0.001 g
Agar 13.5 g
El medio agar MacConkey debe tener un pH final ajustado a 7,1 ± 0,2.
Para un litro de medio Mac Conkey se debe pesar 50 gr del medio
deshidratado, luego se coloca en un matraz y se disuelve en un litro de agua
destilada. Después de 10 minutos de reposo se calienta mezclando
constantemente hasta dejar hervir por 1 minuto.
Luego se coloca el matraz en la autoclave y se esteriliza a 121°C por 20
minutos. Culminado el tiempo, se saca de la autoclave y se deja enfriar hasta

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alcanzar una temperatura de 45°C, para posteriormente colocar 15 ml de este

medio en las placas de Petri estériles.

Resultados

La morfología característica de las colonias en el medio de cultivo Mac

Conkey es la siguiente:

1 E. coli Colonias de color de rosa a rojo (pueden estar

rodeadas de una zona con precipitación de bilis)
2 Enterobacter, Colonias mucoides de color rosa
Klebsiella
3 Proteus Colonias incoloras, inhibición de agrupamiento
dinámico alrededor de colonias aisladas
4 Salmonella, Shigella Colonias incoloras. Color del medio: Anaranjado
a ámbar
5 Pseudomonas Colonias irregulares, de incoloras a color rosa

Inhibición entre parcial y completa de bacterias gram positivas.

En los alimentos y superficies existen miles de bacterias, parásitos, hongos y

otra gran cantidad de agentes infecciosos que son imperceptibles para el ojo
humano. Obtener las superficies limpias  y los alimentos inocuos es un
requisito obligatorio para evitar la transmisión de enfermedades e infecciones
no sólo a nuestro organismo sino a otras personas.
Es evidente que si los trabajadores no siguen prácticas de higiene
adecuadas pueden contaminar los alimentos que manejan así como ingerir o
brindar alimentos contaminados con microorganismos patógenos.
Mantener los alimentos y las superficies libres de estos peligrosos
organismos es sencillo, basta con lavarlos adecuadamente y con la
concentración de lejía u otro desinfectante en la concentración precisa. Por
supuesto que también es una medida importante lavarse las manos antes de
cocinar tras usar el teclado del ordenador, cuando nos apoyamos en el
pasamanos de escaleras, al usar el teléfono o incluso al estrechar la mano de
otras personas.

Bacterias y hongos en los alimentos

En los alimentos se encuentran muchas bacterias patógenas cuya presencia
depende de la forma en la que son manipulados, envasados, conservados y
cultivados. Es decir que aquellos vegetales que son cultivados en contacto
con el suelo suelen tener una mayor cantidad de bacterias que pueden
ocasionar enfermedades gastrointestinales. La única manera de evitar

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infecciones es realizar una buena desinfección de estos vegetales y una

alternativa es lavarlos con lejía, amonio cuaternario u otro desinfectante.
Lo mismo sucede con las superficies, especialmente con aquellas que se
utilizan para cortar, picar o servir los alimentos, los cuales deben encontrarse
en buenas condiciones higiénicas para garantizar la buena calidad de los
alimentos que son tratados y con mucho mayor cuidado aquellos que son
consumidos sin cocción como las verduras u hortalizas.
Algunas de las bacterias que podemos encontrar son:
1. Salmonella: se puede encontrar en
- Los huevos crudos en primer lugar y todos los derivados en cuya
elaboración se utiliza huevo crudo, como mayonesa, clara batida o
leche con huevo.
- Aves crudas o poco cocinadas.
- Alimentos ya elaborados que se dejan a temperatura ambiente
durante varias horas.
2. E. coli :
- Carne de res cruda o poco cocinada.
- Productos frescos crudos.
- Leche cruda.
- Jugos de fruta sin pasteurizar.
- Agua contaminada o sin un adecuado tratamiento de potabilización

3. Listeria monocytogenes
- Alimentos refrigerados (se multiplica de forma rápida durante el
almacenamiento de los alimentos a una temperaturas de refrigeración).
- Alimentos listos para consumir a base de carne de res, pollo o pescado.
- Leche cruda.
- Quesos blandos.
- Verduras con un excesivo almacenamiento en origen.
- Productos en conserva o ahumados

4. Campylobacter jejuni
- Carne de pollo cruda o poco cocinada.
- Leche sin pasteurizar.
- Agua sin un adecuado tratamiento de potabilización o contaminada.
- Pescado crudo o poco cocinado.

5. Staphylococcus aureus
- Alimentos cocinados ricos en proteínas: jamón cocido, carne de
ave.
- Productos de pastelería (sobre todo los rellenos de crema).
- Productos lácteos.

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- Ensaladas.

6. Shigella
- Productos lácteos.
- Carne de res y de pollo.
- Ensaladas.
- Frutas y verduras crudas.
- Ostras crudas.
- Agua no potabilizada o contaminada

7. Yersinia enterocolítica
- Carne de res.
- Pescado.
- Marisco crudo.
- Productos lácteos.
- Productos frescos.
- Agua no potabilizada o contaminada.

BIBLIOGRAFÍA
1. Gaviño, G. Juárez, C y Figueroa H. (1995) Técnicas biológicas selectas
de laboratorio y de campo, México, Editorial Limusa
2. Jawetz, E. (1989) Microbiologia Médica. México Editorial Manual
Moderno
3. Zinsser, H. (1997) Microbiologia. Buenos Aires. Editorial Panamericana

III. PARTE EXPERIMENTAL

4.1. PROCEDIMIENTO CUALITATIVO:

4.1.1. Laboratorio:
a. Preparación de medio de cultivo: El agar Mac Conkey (50 g
/L.) es disuelto en agua destilada con ayuda de calor hasta
obtener una coloración transparente.
b. Esterilización del medio de cultivo y material: El medio será
colocado en una autoclave a una temperatura de 121 °C y 15 Lb
de presión por espacio de 20 minutos. Al mismo tiempo se
colocarán en el autoclave el material a ser utilizado en la siembra
como los hisopos, agua destilada y placas Petri en donde se
realizara la siembra. Todo este material será colocado en una
bolsa de polipropileno.
c. Plaqueo: Se llevará a cabo en una cámara de flujo laminar
previamente desinfectada con luz UV y alcohol. Aquí se
colocaran aproximadamente 10 ml de medio en cada placa Petri.

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Cuando el medio haya enfriado se realizará su sellado con

Plástico film.
d. Conservación de los medios de cultivo: Los medios de cultivo
ya en las placas serán colocadas en una refrigeradora hasta el
momento de utilizarlas.
e. Preparación de la cámara de siembra:
Para desinfectar la cámara de siembra se utilizará alcohol al
70% y se colocará un mechero por espacio de 10 minutos y
luego de ello se colocara el material a utilizar.
f. Hisopado de manos: Se tomará el hisopo que ha sido
esterilizado, el cual será humedecido con agua destilada estéril,
luego se realizará el hisopado de la palma de las manos sin lavar
y luego de lavadas. Para realizar la comparación de UFC.
Luego la muestra será sembrada por el método de agotamiento
en el medio de cultivo Mac Conkey. Cada muestra deberá
sembrarse en un cuarto de la placa. Para poder realizar la
comparación de número de (UFC). La muestra obtenida será
sembrada por el método de agotamiento en el medio de cultivo
Mac Conkey.
g. Hisopado de las superficies: Se tomará el hisopo que ha sido
esterilizado el mismo que será humedecido con el agua destilada
estéril y se pasará por la superficie a evaluar. Se debe medir la
misma para obtener el área y poder realizar el cálculo de UFC
(Unidades Formadoras de Colonias). En primer lugar se realizará
hisopado de la superficie sin desinfectar con lejía y luego se
tomará otra muestra luego de pasar la superficie con lejía a 200
ppm. Cada muestra deberá sembrarse en un cuarto de la placa.
Para poder realizar la comparación de número de (UFC). La
muestra obtenida será sembrada por el método de agotamiento
en el medio de cultivo Mac Conkey.
h. Hisopado de los alimentos: Con un hisopo humedecido en agua
destilada estéril se realizará el hisopado de la superficie de los
vegetales a evaluar. Esta muestra al igual que la anterior será
sembrada en un cuarto de la placa. Y en el cuarto de placa
aledaño se realizará la siembra del hisopado del alimento
desinfectado con lejía a 200 ppm. La muestra obtenida será
sembrada por el método de agotamiento en el medio de cultivo
Mac Conkey.
i. Sellado de la placa: Terminada la siembra de toda la placa para
evitar que se contamine, se procede a realizar el sellado de la
misma con plástico film.
j.. Rotulado: Para terminar se realizará el rotulado de la placa Petri,
colocando el nombre del estudiante que sembró, el nombre del
vegetal evaluado y si fue desinfectado con lejía o no y la fecha.
k. Incubación: Las placas serán colocadas en un sobre de papel
con los datos señalados en el punto anterior e incubadas a
37°C por 48 horas o más si es necesario.

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4.2. Materiales, equipos y reactivos

i. Materiales de laboratorio:
- Vaso de precipitados de 1000 ml (4)
- Mecheros de alcohol (6)
- Hisopos
- Papel toalla
- Pipetas 10 ml (2)
- Pizeta
- Agua destilada
- Asa de Khole
- Probeta de 1000 ml y 100 ml
- Alcohol para mecheros
- Plastic film
- Papel Aluminio
- Matraz de Kitasato 500 ml
- Medio de cultivo Mac Konkey
- Bolsas de polipropileno
- Placas Petri
- Papel craft o papel periódico A4
- Pabilo
- Plumón indeleble

- Material biológico
- Fruta
- Gaseosas
- Agua de bebida
- Jaboncillos

ii. Equipos
- Cocinilla eléctrica
- Phmetro

iii. Reactivos
- Alcohol de 96%
- Lejía Clorox (250 ml)

4.3. PROCEDIMIENTO CUANTITATIVO:

Transcurridas las 48 horas se procederá a la lectura de la placa. Para ello
se realizará el conteo de la Unidades Formadoras de Colonias (UFC) en
cada cuarto de la placa Petri con la finalidad de realizar la comparación
entre el número de colonias presentes sin desinfectar y luego de
desinfectar tanto los vegetales como las superficies con lejía.

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Limites permisibles para superficies vivas

SUPERFICIES
ENSAYO
VIVAS
Coliformes <100 ufc / manos(*)
Staphylococcus aureus <100 ufc / manos(*)
Salmonella sp. Ausencia / manos

Límites permisibles para superficies inertes regulares

ENSAYO SUPERFICIES INERTES

Coliformes <1 ufc / cm2   (*)
Salmonella sp. Ausencia / 100 cm2

Límites permisibles para superficies inertes irregulares

ENSAYO SUPERFICIES INERTES

Coliformes <100 ufc / utensilio (*)
Salmonella sp. Ausencia / utensilio(s)

5. PROCEDIMIENTO DE MANEJO DE RESIDUOS

Una vez culminada la práctica de laboratorio, con ayuda del docente se
procederá a la identificación y segregación de los residuos generados
(ejemplo: residuos químicos y/o residuos sólidos) para su manejo, según
se detalla a continuación:

A. Residuos químicos:
1. Verter el residuo líquido que contiene el matraz en el sistema armado que
se encuentra dentro de la campana extractora o en la mesa indicada por el
docente.
2. Agregar agua destilada al matraz, repetir el procedimiento N°01.
Nota: Usar guantes de seguridad durante este procedimiento. Usar la
menor cantidad de agua posible.
1. Doblar y colocar el papel filtro impregnado con el residuo sólido en el
recipiente indicado por el docente.

Nota: Usar guantes de seguridad durante este procedimiento.

B. Residuos Sólidos:

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Según las indicaciones del docente se realizará la segregación de los

residuos sólidos en los tachos correspondientes para su recolección.

Importante: El asistente de laboratorio responsable del ambiente, procederá a recoger el

residuo químico segregado y/o tratados para luego envasarlo, rotularlo y almacenarlo
temporalmente hasta su disposición final.

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REPORTE DE LABORATORIO: BIOLOGÍA Y MICROBIOLOGÍA

PRÁCTICA 02:

PROFESOR:
FECHA:
HORARIO: INTEGRANTES:
Apellidos y Nombres
1 CHECCA KATATA JOHN ALEXIS

I. PROCEDIMIENTO CUALITATIVO
Se realizará la observación de las colonias presentes y para su evaluación se tomará en cuenta el
color y su morfología. Para esta última característica comparar con el cuadro adjunto.
FIGURA Nº 1

Superficie Lisa Rugosa

Consistencia Seca Cremosa
Luz reflejada Mate Brillante

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II. PROCEDIMIENTO CUANTITATIVO

a. Se realizará el conteo de las UFC en cada cuarto de la placa Petri con la finalidad
de realizar la comparación entre el número de colonias presentes en el hisopado
de manos.
b. Se presentarán cuadros resumen de todas las placas sembradas por el grupo
tomando en cuenta el número UFC y características de las colonias sin
desinfección y luego de desinfectar los vegetales, hisopado de manos e
hisopado
de superficies anotando los resultados. Asimismo se tomarán las fotos
respectivas de cada placa Petri y rotularlas. Colocar los datos mencionados en el
siguiente cuadro.

CUESTIONARIO
1. Que medios de cultivo existen para evaluar bacterias coliformes?

Existen los medios de cultivos de filtración de membrana agar chromocult,

cromogenico son los mas eficientes y tienes un menor costo

2. Cuál es la concentración adecuada de lejía y Amonio cuaternario para

desinfectar superficies y porque?

3. Realice un flujograma indicando la metodología empleada para la

determinación de bacterias Coliformes en superficies inertes (mesa),
dibuje o coloque fotos

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4. Que es una autoclave y en que se basa el principio de esterilización de la

misma?

Es un recipiente metalico de paredes gruesas con cierre hermético que

permite trabajar con vapor de agua a alta presión y alta temperatura que
sirve para esterilizar instrumental

5. En el Cuadro Nº1 indicar las características de 4 colonias mostradas en la

Figura Nº 2 (Placa cultivada).

FIGURA Nº 2

CUADRO N°1

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CARACTERÍSTICAS DE LAS COLONIAS

Bacterias
Característica 1 2 3 4
s
UFC Ronal Humu Palan Manza
s ca del za sin
baño lavar
Color Blacno Rojo y Blanc blanco
blanc o
o
Forma puntifor puntifor puntifor puntifor
me me me me
Margen o
borde
Elevaci
ón
Superfi
cie

DEFINICIÓN DE pH
El pH es una medida de acidez o alcalinidad de una  sustancia. El pH indica
la concentración de iones de Hidrógeno presentes en determinadas
disoluciones. La sigla significa  potencial de Hidrogeniones.

CUADRO Nº 10
MEDICIONES DE pH

Sustancia pH
evaluada
1 Cal 11.7
2 Ceniza 10.53
3 Sangre 7.40
4 Gaseosa 2.4
5 Humus 7.5 y
8.5
6 Vinagre 2.7
7 Jabón de ropa 10
8 Jaboncillo de 10
tocador
9 Saliva 5.6 a

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7.9
10 Agua destilada 5.8

III. CONCLUSIONES:

1.

Cada colonia presenta diferentes caracteres que nunca pensé que tuvieran una forma, un
margen y una elevación
.

2. Todo alimento tiene que se lavado y desafectado con cloro ya que en el laboratorio muestra que fue la zona
que presentada muchas bacterias y si esto se consume sin lavar seria prejudicial para la persona

3. Siempre uno tiene que realizar una buena desafección de los lugares mas concurridos ya que
en el laboratorio muestra cuantas bacterias aparecen.

IV. CUESTIONARIO
1. ¿Qué sustancias químicas existen para la desinfección de alimentos o
superficies?
El cloro es una sustancia que su usa para la desinfección de comida y superficies y
alcoho
2. Se tiene un alcohol al 96% y se desea preparar 5500 ml de una solución de
alcohol al 70%. ¿Cuánto de alcohol al 96% se requiere para preparar dicha
solución?
alcohol al 70%. ¿Cuánto de alcohol al 96% se requiere para preparar dicha
solución? Fórmula para convertir: Ci.Vi=Cf.Vf Vi=2552.08ml de alcohol de 96
3. Se desea preparar 8.5 Lt de una solución de lejía al 0.1% para desinfectar
una superficie en la cocina ¿Cuánto de lejía se requiere si la concentración
de la misma es de 40000 ppm? Y cuánto de esta solución se debe preparar
si se requiere desinfectar un área de 185 m2, si el gasto por m2 es de 260
ml?
A)2600.00 ml de lejía
B) Se necesita 21.45 ml para desinfectar el área de 〖165 m〗^2
4. ¿Cómo se debe almacenar la lejía para que conserve su propiedad
desinfectante y cuál es la concentración recomendada para desinfectar
alimentos, utensilios, superficies (pisos, techos y paredes), áreas
contaminadas con sangre, vómito, heces u otras fuentes de materia
orgánica?

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El Hipoclorito de sodio (NaClO) es usado a gran escala para la Sanitización de

áreas, grupos y mesas de trabajo que sean resistentes a la oxidación, supresión de
olores, sanitización de agua y procedimiento de alimentos. Una vez que se preserva
en su recipiente original, a temperatura ambiente y sin destaparlo, puede
conservarse a lo largo de un mes, sin embargo una vez que se ha utilizado para
elaborar resoluciones, se debería modificar diariamente (20).El hipoclorito de sodio
es letal para diversos microorganismos, virus y bacterias vegetativas, sin embargo
es menos efectivo contra esporas bacterianas, hongos y protozoarios.
5. ¿A qué se denominan bacterias mesófilas? mencione 5 patógenas?
Las bacterias coliformes se utilizan frecuentemente como indicador bacteriano de la
calidad sanitaria de los alimentos y el agua Los coliformes pueden encontrarse en
ambientes acuáticos, suelo y vegetación; además de estar presentes en grandes
cantidades en las heces de los animales de sangre caliente
6. ¿Qué es una ETA y que es una ETS? Mencionar 5 ejemplos de cada una
Las ETA pueden ser intoxicaciones o infecciones • Infección transmitida por
alimentos: se produce por la ingestión de alimentos que contienen microorganismos
vivos perjudiciales para la salud, como virus, bacterias y parásitos. Ejemplo:
salmonella, virus de la hepatitis A, triquinella spirallis. • Intoxicación causada por
alimentos: se produce por la ingestión de toxinas o venenos que se encuentran
presentes en el alimento ingerido, y que han sido producidas por hongos o
bacterias, aunque éstos ya no se hallen en el alimento. Ejemplo: toxina botulínica,
enterotoxina de Staphylococcus. Las enfermedades de transmisión sexual (ETS)
Son infecciones que se contagian de una persona a otra usualmente durante el sexo
vaginal, anal u oral. Ejemplo: Clamidia, Gonorrea, Herpes, SIDA, Papiloma humano

7. ¿Qué es un antibiograma y porqué es necesario realizarlo?

El amonio cuaternario es un producto químico derivado del amoniaco. Es muy
utilizado en la industria alimenticia porque es un desinfectante de alto efecto, es
decir, actúa sobre virus, bacterias, hongos, esporas, levaduras y más. Su forma
pura, al igual que la lejía, puede ser perjudicial para la salud. Por eso, es
fundamental seguir las indicaciones que se observan en los envases de los
productos. Por ejemplo, el amonio cuaternario Betagen debe mezclarse en una
proporción de 4 ml por cada litro de agua. El efecto desinfectante y residual de este
producto lo convierte en una herramienta ideal en la lucha contra el coronavirus,
hepatitis, influenza y otros virus. Además, es mucho más amigable con el ambiente
y no genera el fuerte olor característico de la lejía. Su fórmula química NH3
(nitrógeno, hidrógeno 3).
8. ¿En que medios de cultivo se pueden cultivar Microsporum sp y
Epidermophyton sp?
Las dioxinas pueden producirse en procesos naturales como las erupciones
volcánicas y los incendios forestales, pero son sobre todo subproductos de los
procesos industriales. Es decir, no se crean conscientemente, sino que son
residuos. La incineración descontrolada de desechos suele ser la principal causa. El
humo del tabaco también las contiene, aunque en bajos niveles. Constituyen un
grupo de compuestos químicos que son contaminantes ambientales persistentes
(COP) se encuentran en el medio ambiente de todo el mundo y se acumulan en la
cadena alimentaria, principalmente en el tejido adiposo de los animales. Más del
90% de la exposición humana se produce por medio de los alimentos, en particular

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los productos cárnicos y lácteos, pescados y mariscos. Numerosas autoridades

nacionales ejecutan programas de seguimiento de los artículos alimentarios. Las
dioxinas tienen elevada toxicidad y pueden provocar problemas de reproducción y
desarrollo, afectar el sistema inmunitario, interferir con hormonas y, de ese modo,
causar cáncer.
9. ¿Cuáles son los Límites Máximos Permisibles (LMP) de Coliformes en
alimentos y superficies? ¿Puede haber presencia de E. coli en alimentos y
su presencia que nos indicaría?
Límites permisibles para superficies vivas
ENSAYO SUPERFICIES VIVAS
coliformes <100 ufc / manos(*)
Staphycoccus aures <100 ufc / manos(*)
Salmonella sp Ausencias/ manos

Límites permisibles para superficies vivas inertes regulares

ENSAYO SUPERFICIES INERTES
Coliformes <1 ufc / cm2(*)
Salmonella sp Ausencia / 100 cm2

10. Porque el SARS Cov II “muere” cuando nos lavamos las manos con jabón o
nos aplicamos alcohol?
El agua y el lavado con las manos son importantes para este proceso porque la
combinación crea más burbujas de jabón, que interrumpen los enlaces químicos que
permiten que las bacterias, virus y otros gérmenes se adhieran a las superficies

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