FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUIMICA

MICROBIOLOGIA GENERAL

GUÍA DE
PRÁCTICAS

Alumno > OSCAR JOSUE VILLAFANA RIOJA

Cod- Alumno > 2022202195

2023
FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUIMICA

MICROBIOLOGIA GENERAL

GUÍA DE
PRÁCTICAS

COORDINADOR: DR. JESUS COLLANQUE PINTO

DOCENTE: Mg JOSE RINCON CHAVEZ
DOCENTE: Mg OMAR PILLACA PULLO

2023
 MICROBIOLOGIA GENERAL
INTRODUCCION:

La Microbiología es una ciencia que estudia a los organismos microscópicos denominados

microorganismos los cuales se definen como aquellos seres vivos unicelulares o
pluricelulares carentes de organización tisular y que no pueden ser visualizados al ojo
humano necesitando para ello el microscopio
Para el estudio de este tipo de seres vivos se necesita el conocimiento de técnicas únicas
denominadas Técnicas microbiológicas
Estas Técnicas han permitido el conocimiento de las diferentes estructuras y composición
bacteriana pudiendo comprenderse como muchas bacterias se relacionan con el hombre ya
sea como integrantes de la flora normal o como agresoras para el mismo
El estudio de la composición bioquímica de la estructura bacteriana junto al conocimiento
de su metabolismo permite hoy la comprensión del mecanismo de acción de los diferentes
antibióticos
Hoy en día los avances de la genética bacteriana hacen posible el desarrollo de técnicas de
Biología molecular con aplicaciones a nivel de la investigación científica y el diagnóstico
donde los microorganismos cumplen un rol protagónico
El conocimiento, manejo y utilización de los principales equipos, instrumentos y
materiales utilizados en el laboratorio de microbiología es indispensable para la ejecución y
desarrollo de las prácticas durante el curso de microbiología general que permitirán al
alumno, futuro profesional de la salud aplicar estos conocimientos en el estudio de
diferentes especialidades en el campo de la microbiología

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 PRACTICA Nº 1
BIOSEGURIDAD, NORMAS BÁSICAS, APLICACIÓN DE LOS
CUIDADOS QUE SE DEBE TENER EN LABORATORIO, DENTRO Y
FUERA, ICONOS, PICTOGRAMAS, INTERPRETACIÓN, APLICACIÓN

1.1 Marco teórico

El laboratorio de microbiología presenta diversos lo materiales, reactivos y sobre todo
medios de cultivo, cepas microbianas y otros recipientes con sustancias contaminadas que
constituyen material de práctica, estudio e investigación, por lo que requieren el manejo
cuidadosos de los mismos, por ello la bioseguridad, constituye un papel importante para
evitar un riesgo dañino para la salud y el medio ambiente proveniente de la exposición a
sustancias y agentes biológicos causantes de contaminación y propagación de
enfermedades de todas las personas que se hallan presentes en el laboratorio.,

1.2 Competencias
1.2.1 Conoce y aplica los procedimientos de seguridad personal
1.2.2 Prepara y comprende los pictogramas fundamentales de laboratorio
1.2.3 Registra los problemas de contaminación y el procedimiento para resolverlos

1. 3 Materiales y equipos
 Equipos de protección personal, como mascarilla, guantes, gorro, guardapolvo,
gafas protectoras.
 Pictogramas de bioseguridad
 Paños para limpieza de mesas de laboratorio
 Frascos con desinfectantes variados.
 Campana protectora de gases.
 Tachos de residuos de diversos colores
 Tacho guardián
 Extinguidor
 Beaker, matraz erlemeyer, probeta, pipetas, propipetas,
 Stikers de bioseguridad de frascos reactivos
 Frascos con reactivos ácidos, bases débiles y fuertes cerradas.

1. 4. Procedimiento
1.4.1 Explica cada material de uso personal de manera correcta, colocándose
individualmente y conoce los riesgos de no usarlos adecuadamente.
1.4.2 Ingresar al laboratorio usando los materiales de Protección Personal como
mascarilla, guantes, gorro, guardapolvo, lentes de protección (opcional), se
recomienda no usar lentes de contacto. No se podrá ingresar sin tener estos
materiales
• Lavarse las manos antes y después de cada práctica de laboratorio.

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 • No manipular ni hacer funcionar ningún equipo que no se conozca y sin
autorización del docente de aula.
• Todos los desechos deben ser eliminados correctamente según las indicaciones
que realizara el docente
• No está permitido ingerir ningún tipo de alimento ni maquillaje dentro del
laboratorio.
• Una vez recibido los materiales, revisar y cerciorarse del buen estado, en caso de
algún material deteriorado avisar al docente
 No usar anillos, relojes ni pulseras en el laboratorio.
 Se tiene que usar calzado cerrado.
 El cabello recogido con moñera.
• Cualquier percance en laboratorio o daño de algún material o instrumento
informar inmediatamente al docente de aula.

1.4.3 Realizar la limpieza de laboratorio sobre todo la mesa de trabajo con los reactivos
adecuados, evitando la contaminación que puede causar en caso se incurra en error.

1.4.4 Conocimiento de los pictogramas de prevención y alerta de peligro.

 Elabora gráficos de cada pictograma y su explicación e importancia en la
prevención de accidentes.
 Se expone casos de errores posibles al no tener cuidado en la interpretación de los
pictogramas en los envases de reactivos proporcionados por el laboratorio.
1.4.4. Uso correcto de materiales e instrumentos de laboratorio
* Uso correcto de las pipetas, beaker, matraz, realizar mediciones.
* Uso correcto del microscopio.
1. 5 Resultados
Se registra y grafica con detalle cada una de las observaciones hechas y se realiza los mapas
conceptuales necesarios de los distintos puntos tratados.
1. 6 Cuestionario.

1.- ¿Se puede abrir un frasco directamente frente al laboratorista?

2.- ¿Por qué es importante conocer los pictogramas que se hallan en los envases de
reactivos?
3.- ¿Qué medidas de bioseguridad son las más importantes en el laboratorio?
1. 7 Fuentes de información
 Normas de Bioseguridad y Seguridad Laboral en Fac. de Ciencias
Veterinarias Argentinas. U. N. L. Pam. Alvarez E.; Garcia C. M.; Campi A.
 ISSN 1028-9933 144 Rev Inf Cient. 2014; 83(1):144-152

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 Cuestionario.

1.- ¿Se puede abrir un frasco directamente frente al laboratorista?

Debido a las características de las prácticas y/o ensayos que se realizan en el laboratorio se
pueden aperturar accidentes de diversa consideraciones, como salpicaduras de líquidos
químicos, incendios, explosiones intoxicaciones y quemaduras.

Debe disponerse, por tanto, de los criterios de actuación adecuados para que estos efectos
puedan ser controlados. La seguridad empieza por la prevención y la acertada elección de
materiales y productos. Con el objeto de prevenir accidentes, debemos conocer antes de
comenzar a trabajar en el laboratorio, que durante el desarrollo de las práctica, se van a
manejar productos potencialmente peligrosos y a realizar procesos, algunos de los cuales, si no
tomamos las precauciones pertinentes, podrían entrañar algún tipo de riesgo. Por ello, debemos
tener en cuenta las siguientes normas de seguridad:

 Mantener informado al profesor de cualquier hecho que ocurra y aclarar con el profesor
cualquier tipo de duda.
 Antes de comenzar una práctica debes conocer y entender los procesos que vas a realizar.
\ Es obligatorio la utilización de bata, ya que evita que posibles proyecciones de sustancias
químicas lleguen a la piel. También evitarás posibles deterioros en tus prendas de vestir. - Si
tienes el pelo largo, en el caso de las damas es conveniente que lo lleves recogido.
 Evita los desplazamientos innecesarios y no correr dentro del laboratorio.
 No se puede comer, ni tomar bebidas, ni fumar o hacer fuego dentro del laboratorio.
 No colocar sobre la mesa del laboratorio, ningún tipo de prenda. - Debes mantener silencio y
estar concentrado en el trabajo que estés realizando.
 No debemos coger ningún producto químico. El docente lo proporcionará. - Tampoco
debemos devolver nunca a los frascos de origen los sobrantes de los productos utilizados sin
consultar con el docente.
 Los aparatos así como los reactivos, estarán lejos del borde de la mesa. - Nunca pipetees
líquidos corrosivos o venenosos. - Mantén las sustancias inflamables lejos de las llamas de los
mecheros - Si hubiera que calentar tubos con estos productos, se hará al baño María, nunca
directamente a la llama.
 Para prevenir salpicaduras, nunca mires por la boca de los tubos de ensayo o matraces cuando
se esté realizando una reacción
 Cuando mezcles productos, generalmente debes hacerlo en pequeñas cantidades y despacio. -
No puedes tocar con las manos, ni mucho menos con la boca, los productos químicos - Al
diluir ácidos, hay que echar siempre el ácido sobre el agua y con cuidado.  Si por descuido
tocas o te cae algún producto, lávate con abundante agua la zona afectada, y comunícalo
enseguida al docente.
 Utiliza gafas y guantes en aquellas operaciones que por sus peculiaridades lo requieran. - Tira
los residuos sólidos a la papelera
 Utiliza la campana extractora en las prácticas donde se desprendan gases venenosos.
 Al acabar el ensayo, deja limpio y seco el material y puesto de trabajo.

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 2.- ¿Por qué es importante conocer los pictogramas que se hallan en los envases
de reactivos?

La función principal de los pictogramas es llamar la atención sobre el daño que el mal
uso de una determinada sustancia química o mezcla puede provocar a la salud o al
medio ambiente.

Un pictograma de peligro es una imagen adosada a una etiqueta que incluye un

símbolo de advertencia y colores específicos con el fin de transmitir información
sobre el daño que una determinada sustancia o mezcla puede provocar a la salud o al
medio ambiente.

Etiquetar correctamente los productos químicos no solo es importante para indicar de

qué sustancia se trata, también debe informar sobre los cuidados y medidas de
precaución en su uso y otros datos como el de contacto.

Un pictograma es un dibujo figurativo o una representación gráfica que hace explícito

un objeto o un mensaje. Permite transmitir una idea o un concepto de forma rápida y
sencilla. El pictograma es especialmente eficaz para enviar un mensaje de carácter
informativo, obligatorio, de señalización o de peligro.

3.- ¿Qué medidas de bioseguridad son las más importantes en el laboratorio?

Normas de bioseguridad general

 Evitar maquillarse, fumar, comer o beber en el sitio de trabajo.

 No guardar alimentos en los equipos donde se refrigeran sustancias contaminantes o
químicas.
 Manejar a todo paciente como si pudiera estar infectado.
 Lavarse con cuidado las manos antes y después de cada procedimiento.

Normas de Bioseguridad

❖ Antes de ingresar al laboratorio es necesario lavarse las manos con agua y jabón, y luego
higienizarlas con gel Antibacterial.
❖ Se debe garantizar el aforo máximo permitido por laboratorio, para mantener el
distanciamiento social.
❖ Cada estudiante debe ingresar con su esfero y libreta de apuntes. Estos elementos son de uso
personal por lo que no se permite el préstamo entre estudiantes.
❖ Mantener las puertas de acceso abiertas, para evitar su manipulación.
❖ Como medida de prevención para el ingreso al laboratorio, se debe utilizar ropa cómoda que
cubra totalmente los brazos y las piernas, utilizar zapatos cerrados, sin tacón alto y llevar el
cabello totalmente recogido, en caso de tenerlo largo.
❖ Identificar los sitios en donde se encuentran localizados la ducha de seguridad, el extintor, los
botes de basura, el guardián, los bidones y la bolsa roja para desecho de material biológico.
❖ Haber preparado con anticipación el trabajo a realizar.8
❖ Hacer uso racional de los reactivos e insumos de laboratorio.
6
❖ Mantener los implementos de trabajo cerca al área asignada.
❖ Mantener en condiciones de orden y limpieza el lugar de trabajo.
❖ Seguir todas las indicaciones dadas por el profesor.
❖ Dejar los reactivos en el sitio asignado, evitar cruzar las pipetas para prevenir la contaminación
de reactivos.
❖ Está totalmente prohibido pipetear con la boca. Debe utilizar las peras de succión.
❖ No inhalar, aspirar o probar las sustancias químicas.
❖ Conservar las sustancias químicas inflamables alejadas de fuego y planchas de calentamiento.
❖ Utilizar papel craft para proteger el mesón de trabajo, en caso de realizar actividades que
involucren el uso de colorantes y de material corrosivo. Hacer uso siempre del mismo lavabo,
para limpiar el material que contenga colorantes.
❖ Verificar que los equipos requeridos para el desarrollo del trabajo, funcionen adecuadamente.
Al terminar el uso, desconectar el equipo y entregarlo limpio.
❖ Durante la práctica los profesores y asistentes de gestión estarán atentos a los requerimientos
de los estudiantes, al adecuado uso de los equipos del laboratorio, y en garantizar el cumplimiento
de las normas de bioseguridad para evitar accidentes.
❖ Avisar oportunamente en caso de accidente, al profesor encargado o al auxiliar. En todo caso,
evitar comportamientos que generen accidentes.
❖ Desechar los residuos líquidos y sólidos en los colectores adecuados; si no está seguro de la
disposición de estos, consulte al asistente de gestión del laboratorio. Los residuos de tipo
biológico (partes de animales, tubos con muestras biológicas como sangre u orina, cultivos in
vitro, cultivo de hongos, bacterias, etc.), deberán ser depositados en la caneca con bolsa roja y los
elementos corto punzantes en el guardián. El desecho de residuos debe cumplir con la ruta
sanitaria definida por la Universidad.

Al finalizar el trabajo:
❖ Cerrar bien los frascos que contienen reactivos.
❖ Hacer entrega del material completo y limpio.
❖ Limpiar el mesón de trabajo y dejar las sillas ordenadas.
❖ Descartar todos los elementos de protección personal desechables en la caneca con bolsa roja.
❖ Retirar la bata, cuando haya salido del laboratorio.
❖ Lavar las manos con agua y jabón e higienizarlas con gel Antibacterial

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 PRACTICA Nº 2
MANEJO DE LOS PRINCIPALES EQUIPOS E
INSTRUMENTOS, PREPARACIÓN DE MATERIAL DE VIDRIO,
MATERIAL AUXILIAR Y SU FORMA DE ESTERILIZACIÓN
2.1.- Marco teórico
En el laboratorio de Microbiología es necesario utilizar material limpio, sin trazas de
detergente y estériles para el aislamiento y posterior identificación de los gérmenes que se
está investigando.
Limpieza: al proceso físico utilizado en los objetos en uso del laboratorio para eliminar
materia orgánica y residuos, mediante el lavado con agua con o sin detergente.
Desinfección: Es un proceso en el que se utilizan principalmente agentes químicos.
Esterilización: que viene a ser la destrucción de toda forma de vida, ésta puede ser por
vapor saturado (autoclave) o por calor seco (horno)

2.2 Competencias
2.2.1 Maneja y usa equipos y materiales en el Laboratorio.
2.2.2 Estudia “in Vitro” a los microorganismos.
2.2.3 Prepara e identifica el material de vidrio
2.2.4 Los métodos de esterilización

2. 3 Materiales y equipos
 Equipos e instrumentos tales como: Autoclave, horno, incubadora, baño María,
refrigeradora, equipo para luz ultravioleta, equipo de esterilización por filtración,
cámara de flujo laminar, centrifuga y microscopio compuesto,
 Portaobjetos y cubreobjetos
 Papel para lente
 Aceite de inmersión
 Torundas de algodón
 Gasa
 Asa de Kolle
 Cultivo bacteriano
 Papel kraft
 Tubos de prueba
 Placas Petri
 Balones, vaso de precipitados, pipetas y matraz de vidrio
 Cinta indicadora de esterilización (para autoclave)

2. 4 Procedimiento
2.4.1.- Examina cada uno de los siguientes equipos e instrumentos del laboratorio:
autoclave, horno, incubadora, cámara de flujo laminar, baño maría, equipo de

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Esterilización por filtración, centrifuga y microscopio e identifica sus componentes, su
aplicación y utilización en el laboratorio.

2.4.2.- Observa al microscopio las muestras que a continuación se indican:

Cultivo bacteriano:
 Coloca sobre la lámina portaobjeto una gota de cultivo bacteriano y deja caer la
lámina cubre objeto.

2.4.3.- .Preparación de material de vidrio y material auxiliar:

 Confecciona tapones de algodón para el material de vidrio proporcionado, estos
deben ser consistentes y de un tamaño apropiado que permita su manipulación.
 Empaqueta este material con papel kraft, en igual forma también se procede con
todo el material auxiliar que se use en el laboratorio para someterlo a un proceso
de esterilización y luego conservar su esterilidad .un tiempo adecuado
 Las placas Petri y los tubos de prueba (previamente taponados) se envuelven
formando paquetes de tres y seis unidades respectivamente. Debe tenerse especial
cuidado en que el papel utilizado se encuentre íntegro y sin orificios. Para las
torundas e hisopos se procede de igual forma.
 En el caso de las pipetas, se cortan bandas largas (tiras) de papel kraft y se las
envuelve en forma diagonal y empezando por la punta, colocando un refuerzo de
papel en esta sección, de esta forma la pipeta quedará íntegramente cubierta por el
papel. Al final de la envoltura se dejará una porción en la que se escribirá en
números la capacidad de volumen de la pipeta.
2. 5 Resultados
Se registra detalladamente cada una de las observaciones hechas y se realiza los esquemas
y dibujos necesarios: Equipo de laboratorio (indicando sus componentes). Procede de igual
forma con el material de laboratorio empleado
2. 6 Cuestionario.

1.- ¿Con qué propósito se envuelve totalmente el material a esterilizar?

2.- ¿En un cuadro comparativo explicar las diferentes formas y condiciones del proceso de
esterilización que emplea según el tipo de material a esterilizar?

2. 7 Fuentes de información
 Tortora, G. J., Funke, B. R., & Case, C. L. Microbiology: An Introduction, Books
a la Carte Edition. 13va edición. Editorial Pearson. 2018

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 Cuestionario.

1.- ¿Con qué propósito se envuelve totalmente el material a esterilizar?

El objetivo es eliminar toda suciedad o partícula extraña visibles en los instrumentos, lo que
reduce la carga microbiana (microorganismos residentes) y por tanto la contaminación inicial
se hace menos peligrosa.

La función principal es mantener la esterilidad de los insumos hasta el momento de su uso.

• La esterilización y la desinfección terminal son procedimientos que se llevan a cabo para la
destrucción de microorganismos patógenos.
• Los residuos orgánicos y la Biocarga microbiana se reducen sustancialmente, de que los
o0bjetos pueden utilizarse con seguridad
• La Biocarga es el número relativo de microorganismos reales o sospechosos que se pueden
encontrar en un objeto determinado
• La esterilización elimina los microorganismos en sus fases vegetativas y de espora. No
obstante para que el proceso sea eficaz, la Biocarga de los objetos debe ser relativamente baja.
• Todos los objetos deben haberse limpiado a fondo antes de ser sometidos a al proceso de
esterilización o a la desinfección de alto nivel.
• Las esporas bacterianas son los organismos vivos más resistentes por su capacidad de resistir
a los agentes destructivos externos.
Los métodos de esterilización se clasifican en Físicos y Químicos.

2.- ¿En un cuadro comparativo explicar las diferentes formas y condiciones del
proceso de esterilización que emplea según el tipo de material a esterilizar?

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 REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

Tortora, G. J., Funke, B. R., & Case, C. L. Microbiology: An Introduction, Books a la Carte
Edition. 13va edición. Editorial Pearson. 2018
Normas de Bioseguridad y Seguridad Laboral en Fac. de Ciencias Veterinarias
Argentinas. U. N. L. Pam. Alvarez E.; Garcia C. M.; Campi A.

ISSN 1028-9933 144 Rev Inf Cient. 2014; 83(1):144-152

De La LDEQYA. PROTOCOLO DE SEGURIDAD EN LABORATORIOS

[Internet]. Edu.pe. [citado el 5 de abril de 2023]. Disponible en: https://www.ucv.edu.pe/wp-
content/uploads/2020/01/28.MV1-PROTOCOLO-DE-SEGURIDAD-EN-LABORATORIO-DE-
QUIMICA-Y-AFINES-DE-LA -UNIVERSIDAD-CESAR-VALLEJO-SAC-2021-V3.pdf

Manejo de material reutilizable Esterilización La esterilización y desinfección de los artículos de

atención clínica, son una pieza clave de los programas [Internet]. Slideplayer.es. [citado el 5 de
abril de 2023]. Disponible en: https://slideplayer.es/slide/17068415/

Médica M, Patrick R. PhD Profesor, Departamento de Ciencias Médicas Integradas Northeast

Ohio Medical University Rootstown, Ohio Profesor adjunto.

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F-CV3-3B-2 12 REV. FEBRERO 2023
F-CV3-3B-2 13 REV. FEBRERO 2023