Tema 7 ENZIMAS

Las enzimas son catalizadores de naturaleza proteica todas la reacciones ocurren gracias a
ellos y son la base de cómo funciona la bioquímica

Si no hay enzimas; una reacción biológica no se da.

PROPIEDADES GENERALES DE LOS ENZIMAS

En enzymologie, on désigne par substrat enzymatique toute molécule subissant une

réaction chimique catalysée par une enzyme

Le substrat est la molécule dont l'enzyme catalyse la transformation

- Son los catalizadores (algo que hace que algo ocurra) de las reacciones químicas
que se producen en los sistemas biológicos.

- Tienen gran poder catalítico (acceleran las reacionnes quimicas)

- Poseen un elevado grado de especificidad de sustrato

- Funcionan en soluciones acuosas en condiciones suaves (légère) de pH y

temperatura

La mayoría de las enzimas son proteínas:

Holoenzima: proteína completa (proteína +cofator) (cofactor = grupo prostético)

Apoenzima : parte proteica de una enzima

Las enzimas tienen una parte no proteica, que será su grupo prostético, son proteínas
conjugadas.

Le groupement prosthétique, ou le groupe prosthétique, désigne toute molécule non

protéique liée à une protéine pour lui permettre de fonctionner.

(La proteína va a ser el esqueleto de la enzima)

Cofactores o grupo prostético de las enzimas van hacer grupos que son no proteínas y
pueden ser :

- Iones inorgánicos

- Complejos orgánicos (Coenzimas)

Cuando el grupo prostético es un complejos orgánicos se le llaman coenzimas
Coenzimas; cofactores de naturaleza orgánica. Casi todos los coenzimas son derivados de
vitaminas. Una característica de las vitaminas es que todas ellas vienen de la dieta y la gran
mayoría de ellas no se pueden almacenar y el organismo necesita un suministro constante.
La enzima no funciona sin su cofactor

El grupo prostético o cofactor se adquieren principalmente a través de la dieta (las vitaminas

adquirimos por la dieta van a transformarse en cofactores van a ser precursores de la
molécula de enzima

Las vitaminas son esenciales para que la enzimas del cuerpo funcionan

Ezima + coenzima = Holoenzima

Diferencias de un enzima (catalizador biológico) con un catalizador químico

Mayor eficiencia catalítica. Debido a la capacidad de los enzimas de unir específicamente

ligandos y orientarlos adecuadamente, las reacciones enzimáticas son 10 puissance 6 – 10
puissance 12 veces más rápidas que las no catalizadas o las catalizadas por catalizadores
químicos no enzimáticos.

La enzimas biológicas más eficiente que las enzimas químicas

Catalizador: molécula ayuda que la reacción ocurra

Capaces de catalizar reacciones bajo condiciones ambientales suaves

(Temperatura ambiente, pH neutro, presión atmosférica...). En general, los catalizadores
químicos no enzimáticos requieren condiciones más extremas, como temperatura y presión
elevadas, pH extremo…

Especificidad. Los enzimas reconocen específicamente reactivos y productos. Raramente

existen reacciones secundarias en la catálisis enzimática.

Se va a unir en una otra cosa (no se equivocan)

Capacidad catalítica regulable. La actividad de los enzimas puede aumentar o disminuir
mediante mecanismos de regulación ( regulación alostérica, modificación covalente,
cambios de la cantidad de enzima)

Son regulables : la enzima se regula con una hormona que induce una expresión génica
hacer que la proteína se produzca o no

Cómo denominar las enzimas:

Las enzimas se clasifican según la reacción catalizada:

Nomenclatura:

- Número clasificatorio de 4 dígitos (E.C.)

- Nombre sistemático (nos va a decir con un nombre lo que va hacer la enzima)

- Nombre trivial, (cualquier enzima que acabe en -asa; transcribe un grupo fosfato.)

ATP + D-Glucosa ADP + D-Glucosa-fosfato

Número clasificatorio:

E.C. 2.7.1.1.

2. Clase: Transferasa (transfiere grupos) El primer número indica la clase de la enzima, que
tipo de reacción cataliza

7. Subclase: Fosfotransferasa (que va a transferir)

1.Fosfotransferasas con OH como aceptor (indica el grupo aceptor: el fosfato se va a unir a

un grupo OH)

1. D-glucosa como aceptor de fosfato (indica el sustrato final que va a utilizar la enzima)

Juste le comprendre et apprendre les catégories

Nombre sistemático (mas importante): ATP glucosafosfotransferasa

Nombre trivial : hexoquinasa

Clases de los enzimas : Acciones principales que hace una enzima

Clase 1: transferencia de electrón a través de grupos OH (oxido-reducción)

Clase 2: transferasas : transfieren grupos funcionales

Clase 3: hydrolasas : (hydrolyse: la ruptura de un enlace por el uso del agua) : van a romper
enlace con el agua

Clase 4: Liasas : participan en reacciones para dar o eliminar dobles enlaces

clase 5: isomerasas : va a cambiar de posición un grupo funcional para formar isómeros

Clase 6: ligases : liga = unir : forman enlaces covalentes orgánicos y van unir compuestos (o
por condensación)

Los enzimas son proteínas globulares; solo una parte interactúa con el sustrato. A esa parte
se le denomina centro activo. Esto proporciona un ambiente adecuado para el encuentro
entre sustratos.

En condiciones fisiológicas las reacciones sin catalizar tienden a ser lentas. (pueden ocurrir
pero lentas)

Muchas reacciones bioquímicas suponen situaciones poco probables.

Una enzima soluciona estos problemas proporcionando un ambiente tridimensional

favorable a la reacción.

sitio activo : imagen es una enzima : el sitio activo en rojo se va a unir al

sustrato
Características de los centros activos

1. El centro activo es una hendidura tridimensional formada por grupos que provienen de
diferentes partes de la secuencia lineal de aminoácidos.

2. Supone una pequeña porción del volumen total de la enzima. (por la estabilización)

3. Son hoyos (des trous) o hendiduras en los que el agua queda normalmente excluida. ( el
agua puede influenciar la reacciones)

4. Los sustratos se unen a la enzima por numerosas fuerzas débiles. (Modulables con los
cambios de las condiciones del entorno.)

5. La especificidad del enlace depende de la disposición exactamente definida de los

átomos del centro activo.

Interacciones en el centro activo (le centre actif se trouve sur l’enzyme)

Interacciones entre Sustrato y Enzimas :

1. No covalentes: puente de hidrógeno, van der Waals, electrostáticas, hidrofóbicas.

2. Covalentes: enlace E-S ó grupos que se transfieren entre E y S.

- Unión a cofactores

- Unión a cadenas laterales de aminoácidos

La máxima intensidad en la interacción aparece sólo durante el estado de transición

- Máxima intensidad: cuando más unidos estado

Estado de transición es el momento en el que el sustrato a cambiado mais ce n'est pas

encore un produit , está al punto de transformarse

Il n’est pas produit mais il n’est pas dans son état initial , il va devenir un produit mais ce
n’est pas encore un produit ce n’est donc ni un réactif ni produit (entre les deux)

En este estado el sustrato no puede redevenir sustrato

.
Las interacciones que estabilizan el estado de transición no tienen porqué ocurrir sólo en el
centro activo, sino también en otros lugares alejados.

Les interactions qui stabilisent l'état de transition ne doivent pas se produire uniquement
dans le centre actif, mais également à d'autres endroits éloignés.

Propiedades importantes de los enzimas: especificidad, catálisis, regulación

Reacciones enzimáticas:

Gráfico gauche: necesito mucho energía para

llegar al estado de transición

La enzimas reduce la energía y la reacción es

más fácil que ocurra

Por lo tanto la enzima alteran las velocidades

de las reacciones

En una reacción espontánea la energía libre del sustrato es mayor que la del producto; y por
tanto el incremento de energía libre es negativo. Una no espontánea necesita gasto de
energía.

Una enzima no transforma una reacción no espontánea en una espontánea.

Una enzima disminuye la energía que hace falta para llegar al estado de transición;
disminuyendo la energía de activación.

Cinética enzymatica:

Gracias a ellos se describió la velocidad de las regiones enzimáticas

Velocidad a la que se forma el producto o se consume el sustrato.

Se dió cuenta de que la velocidad de reacción es siempre independiente

de la concentración de sustrato; porque en condiciones biológicas la
concentración de sustrato siempre es mucho mayor que la
concentración de enzimas (el enzima siempre está en condición de
saturación).
Reacción enzimática:

Siempre tres constantes: 2 en la primera parte porque es reversible (K1 y K-1) y 1 en la

segunda parte K2 car on peut pas revenir en arrière

Las constantes nos dan la velocidad de la reacción

La concentración de sustrato afecta la velocidad de reacción catalizada por enzimas.

Se estudió la velocidad inicial a diferentes concentraciones de sustrato:

Las constantes cinéticas (Vmax y Km) de un enzima para un sustrato son dos parámetros
constantes para un sustrato y un enzima.

Km = concentración de sustrato a la cual se alcanza la mitad de la velocidad máxima. Habla

de la afinidad de un enzima con el sustrato. A menor Km, mayor afinidad del enzima con el
sustrato.

Plus la concentration à laquelle on va atteindre la moitié de la vitesse maximal est petite plus
l’affinité est grande

Affinité : qu'est-ce que c'est ? Capacité d'une enzyme de former un complexe avec un
substrat. Elle est inversement proportionnelle à la valeur de la constante de Michaelis (Km)
de l'enzyme envers le substrat.

L'affinité d'une enzyme est définie comme la force avec laquelle elle se lie à son substrat

Vmax es el tope es decir el número de enzima que hay

Km mayor : k1 petit donc poco afinidad (desplazamiento hacia izquierda)

La constante de Michaelis-Menten (KM) es un parámetro cinético importante pór múltiples
razones:

1.- KM es la concentración de un sustrato para la cual la velocidad de reacción es la mitad

de la velocidad máxima. (½ de vmax) (Relaciona sustrato con velocidad)

2.- El valor de KM caracteriza la interacción de la enzima con un sustrato dado. A menor

KM, mayor afinidad de la enzima por el sustrato, y a mayor KM, menor afinidad.

(Podemos saber dans quelle sens se déplace la réaction)

Si la concentration qu’il y a a la moitié de la vitesse de la réaction est petite c’est que

l’enzyme c’est lié fortement à son substrat donc l’affinité est élevé

Unidades de la velocidad de reacción

¿Cómo se mide la velocidad cinética?

Se define la unidad de actividad enzimática (U) como la cantidad de enzima que cataliza
la conversión de 1 μmol de sustrato en un minuto. (1 μmol/min).

La enzima va afectar la velocidad vamos a medir la velocidad a la quelle un sustrato se

convierte en un producto

Cuánto cantidad de enzimas necesito para transformar 1 micromol en un 1 min ?

LINEWEAVER- BURK
Es una transformación de la ecuación de Michaelis-Menten

La intersección Y (donde la línea cruza el eje Y) es igual a 1/Vmax. Esto nos da la velocidad
máxima de reacción si tuviéramos una cantidad infinita de sustrato.

La intersección X (donde la línea cruza el eje X) es igual a -1/Km. Km es una constante que
nos dice cuánta afinidad tiene la enzima por el sustrato; números bajos de Km significan alta
afinidad y números altos significan baja afinidad.

La pendiente de la línea (la inclinación) es igual a Km/Vmax. Esto nos da una idea de la
eficiencia de la enzima; cuanto más baja es la pendiente, más eficiente es la enzima.
 Inversa de la réaction Michaelis-Menten

Esto nos permite linealizar la réaction gráficamente (à la place d' une parabole on a une
droite)

Con la recta podemos interpretar mejor lo que pasa en la reacción, la intersection de la recta
sur l’axe des ordonné es la inversa de la velocidad máxima et sur l’axe des abscisse c’est
l’inverse de la concentration de substrat à la moitié de la vitesse de réaction

La pendiente nos dice la eficiencia de la reacción

Si la pendiente es grande vmax et petite donc menos eficiente: las más pendiente tiene
menos eficiencia
Regulación de las reacciones enzimáticas

La actividad de los enzimas puede regularse por:

1.- Expresión génica. (Un promotor es una secuencia génica que está en el extremo 5 ́ de un gen.
Recluten (recrutent) proteínas que van a disparar el proceso de transcripción. Obtengo un ARNm
que después se traduce a proteína. Si no hay proteína no hay enzima.)

2.- Efecto del pH. (enzyme digestivas con un ph bajo ácido)

3.- Efecto de la temperatura. (enzimas dejan de funcionar)

4.- Presencia de inhibidores. (inhibidor: bloquear, hacer que la reacción no ocurra)

5.- Modulación por proteolisis.

El efecto de pH :

Pepsina: Cuando hay un pH bajo la actividad es elevado ( pH acide = velocidad máxima) ,

más allá del 6 no funciona. Esta trabaja en el estómago, que tiene pH ácido. El pH básico es
decir alto no funciona.

Glucosa-6 fosfatasa: participa en la gluconeogénesis; una ruta metabólica, a partir de

moléculas de carbono se forma la glucosa. Arranca en la mitocondria, continua en el R

Su mayor eficacia sería a pH neutro

Un tipo de unión reversible de inhibición, existen 3 tipos de modalidades:

1. Inhibición competitiva.

· Compiten con el sustrato por el sitio activo.

· Estructura semejante a la del sustrato.

· Forman complejos EI (enzima-inhibidor).

· Ejemplo: AINEs

· Afectan a la Km : La Vmax no se altera. Km aumenta (parce les enzymes s’attache à

l'inibidor, il prenne la place du substrat donc sa concentration augmente par rapport au
enzyme)

El inhibidor compite con el sustrato il y en a qu' un qui va s'unir au site actif pas les deux en
même temps c'est pas possible

El inhibidor va a afectar a la afinidad de la enzima por el sustrato si compito van a ser que
menos sustrato se unen a la enzima

Si aumenta el inhibidor (qui va s'attache au site actif de l’enzyme) aumentó la pendiente

entonces menos afinidad …

La constante cinética que se ve perjudicada es la afinidad; hay un cambio de afinidad; por

tanto el valor de Km aumenta porque va a disminuir la afinidad.
El inhibidor competitivo cambia la velocidad a la que la enzima puede procesar el sustrato.
Esto se refleja en el cambio de la pendiente de las líneas en el gráfico: cuanto más inhibidor
hay, más inclinada es la línea y más disminuye la velocidad de reacción.

2. Inhibición acompetitiva.

No competitivo (son los más potentes porque siempre se van a unir)

El no se une a sitio activo se une a una otra parte entonces siempre va a unir y con la unión
se bloquea la formación de productos

No hay una competición, el inhibidor no se une al centro activo, se une al enzima, al complejo
enzima-sustrato afectándolo. Se ve afectada la velocidad máxima. La Km se queda igual, mientras
que la Vmáx disminuye.
Competitiva : no va afectar a la velocidad máxima lo que varía es la pendiente entonces la
afinidad y la eficiencia (graphique tous sur le même point)

No competitiva : afecta a la velocidad máxima (point déplace)

3. Inhibición mixta :

Puede unirse al centro activo o una otra parte

- Se unen a un sitio diferente del sitio activo.

- Pueden unirse a E y a ES.

INHIBIDORES IRREVERSIBLES

Se unen al centro activo de la enzima mediante interacciones fuertes, también se les

denomina inhibidores suicidas.

Se unen a la enzima et il peuvent pas se retirer donc l'enzyme est inactive para siempre

- Inactivan permanentemente la enzima.

- Permiten determinar los residuos del sitio activo.

- Inactivadores suicidas: moléculas generalmente inertes que sólo cobran actividad

cuando son transformadas por el enzima al que inactivan.
 El enzima los reconoce como sustratos, los modifica y reaccionan covalentemente
con el enzima.

(Ej: difluormetilornitina en el tratamiento de la tripanosomiasis africana)

Compuesto que se camufla en el sustrato original y la enzima se une a el y se transforma y

será inutilizable para siempre

Se utilizan como medicamentos (como principios activos).

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Retroalimentación en regulación de la actividad enzimática

Retroalimentación negativa aquí:

El propio producto quand il y en a assez arrête par lui la réaction il

n’y a donc pas d'excès de produit

El producto cuando hay muchas cantidad bloquean la enzima y deja

de se producir

Positivo : un produit aumenta la eficiencia de la reaction

Modificación covalente

Modificación de la enzimas

Se pueden unir compuesto a través de enlaces covalentes a otros grupos funcionales

Consiste en que sobre la cadena de proteínas vamos a añadir un grupo funcional, si

modifica su estructura modifica su función.

Otro método de regulación

ACTIVACIÓN POR CORTE PROTEOLÍTICO (corte de un enlace peptidico)

- Es una modificación covalente: se rompe un enlace covalente.

- Irréversible.

- Forma común de regulación de enzimas con riesgo para la células

- Zimógenos: se sintetizan como precursores (peligrosos); se activan con un corte

proteolítico, se elimina un trozo de la molécula.

(Enzimas que son peligrosos para la enzima que los sintetiza; se sintetizan de
manera inactiva en forma de zimógenos.)

Las enzimas suelen tener precursores

la tripsina como la pepsina corta el enlace peptídica entonces tiene una forma inactiva

Lo activo con un corte proteolítico, estas forman inactiva que se producen al principio