Pantalones
Pantalones
Pantalones
• Es una técnica Separativa que se emplea para separar ácidos nucleicos y las
proteínas.
Sesión 20/01/2022 2
Sesión 20/01/2022 3
Electroforesis
La mayoría de las biomoléculas:
• Poseen una carga eléctrica cuya magnitud depende del pH del medio
en el que se encuentran.
Sesión 20/01/2022 4
Electroforesis
Por lo tanto, en una electroforesis, los
ácidos nucleicos como tienen carga
negativa migrarán hacia el polo positivo o
el ánodo.
El principio de la electroforesis
consiste en la migración
proporcional de las moléculas a
través de un gel u otro tipo de
matriz porosa, según su peso
molecular o tamaño; movimiento
generado por el campo eléctrico.
Sesión 20/01/2022 5
Electroforesis
Durante la electroforesis las macromoléculas son empujadas a través de los
poros y su tasa de migración depende de ciertos factores:
Sesión 20/01/2022 7
Electroforesis
Como la mayor parte de la potencia que libera la electroforesis es en
forma de calor, esto puede producir estos efectos perjudiciales:
Sesión 20/01/2022 8
Electroforesis
La separación de acs nucleicos se puede realizar en gel de agarosa o de
acrilamida.
Los geles de agarosa se pueden hacera distintas concentraciones:
• Los geles más concentrados→ tamaño poro más pequeño por lo tanto
separan mejor los fragmentos pequeños
Sesión 20/01/2022 9
Componentes delaElectroforesis
AGAROSA
Polisacárido natural de cadena lineal que se extrae de algas Permiten
una electroforesis rápida pero la resolución es limitada Obtención
Suspensión de agarosa seca en polvo en un tampón acuoso se hace hervir la
muestra hasta que se disuelve la agarosa y forma una solución
transparente.
Se vierte en un molde para gel donde se ha colocado el peine para
formar los pocillos en los que posteriormente se introducirán las
muestras
Sesión 20/01/2022 1
Componentes de la Electroforesis
El peine puede ser:
2. Peine grueso→ que nos dará bandas de menor resolución, se retira una
vez solidificado el gel y con cuidado para que no se produzcan roturas.
Sesión 20/01/2022 11
Sesión 20/01/2022 12
Componentes de la Electroforesis
1.Tampón o Buffer de electroforesis
Éste proporciona el medio para la transmisión de la corriente eléctrica y
mantiene el pH sin variaciones mientras se realiza el proceso.
Es decir aporta la fuerza iónica necesaria para que aumente la conductancia y
el ADN migre.
Sesión 20/01/2022 13
Componentesde LaeLectroforesisen geLde agarosa
Sesión 20/01/2022 15
Sesión 20/01/2022 16
Como se hace la
Electroforesis
Sesión 20/01/2022 17
Electroforesis
Pasos:
1. Cargamos los pocillos con la muestra introduciendo un poco la
punta de la pipeta en el pocillo.
2. Se cargan ADN marcadores d tamaño conocido y un control positivo y
uno negativo
3. Se tapa la cubeta de electroforesis, se conectan los cables para
aplicar el voltaje adecuado.
4. El ADN migrará al polo positivo o ánodo y podremos observarla migración de
las muestras por el avance del colorante del tampón de carga.
Sesión 20/01/2022 18
Visualización de los ácidos nucleicos
Introduciendo bromuro de etidio en el propio gel, es una sustancia que se
intercala entre las Bases Nitrogenadas del ADN y emite fluorescencia al
iluminarlo con luz UVA
Como es una sustancia tóxica y mutagénica se suele utilizar otros
colorantes fluorescentes alternativos como el Safe View que no son
nocivos.
Una vez terminada la electroforesis se desconectan lo cables y se
introduce el gel en un transiluminador UVA y se fotografía.
Sesión 20/01/2022 19
Sesión 20/01/2022 20
Sesión 20/01/2022 21
A ver si lo has entendido