Estructura de microscopio

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MICROBIOLOGÍA

GENERAL
UNIDAD IV:
Siembra y aislamiento de
microorganismos.

Estructura del microscopio.

Gabriela M. Jaramillo
gmjaramillo@utmachala.edu.ec
Objetivo:
• Describir microorganismos mediante la aplicación de técnicas
microbiológicas para su posterior siembra, observación e
identificación.
Microscopía
El microscopio es el instrumento
más antiguo y más básico.
herramienta habitual para
visualizar las células microbianas.
Microscopio electrónico
• Los microscopios ópticos
se usan para examinar
células a relativamente
pocos aumentos y resolución
aproximada de 0,2 µm, y los
electrónicos para examinar
células y estructuras
celulares a muchos Microscopio Óptico
aumentos y mayor
resolución.
• Todos los microscopios utilizan lentes que amplifican la imagen. No
obstante, el aumento no es el factor limitante en la capacidad para
ver objetos pequeños; es la resolución

regula la habilidad para ver lo muy pequeño

• Los aumentos se pueden aumentar prácticamente sin límite, con la


resolución no ocurre lo mismo, ya que es una función de las propiedades f
físicas de la luz
Microscopio Óptico
El microscopio óptico utiliza la luz visible para
iluminar las estructuras celulares

Aumento y resolución

El aumento total de un microscopio de luz compuesto es el


producto del aumento del objetivo por el del ocular.
El límite superior de los microscopios ópticos es de
unos 2.000 aumentos, y a aumentos superiores la
resolución no mejora.

función de la λ de la luz utilizada y


capacidad de la lente para captar la luz.
10-20 aumentos

Las lentes con más aumentos normalmente


tienen una apertura numérica más alta.

10-100 aumentos
* La mayor resolución posible en un microscopio
inmersión en aceite óptico compuesto es de unos 0,2 μm.
aumenta la capacidad de una lente para captar la luz
- campo claro
- contraste de fases
Microscopio - contraste por interferencia
ópticos: diferencial
- campo oscuro
Imágenes obtenidas son
bidimensionales. - fluorescencia
Microscopio de campo claro
Las muestras se visualizan por las pequeñas diferencias de contraste que existen entre las
estructuras celulares y el medio que las rodea, y estas diferencias son debidas a que las células
absorben o dispersan la luz en distinto grado.

Células bacterianas → no tienen un contraste


significativo con el medio circundante.

crear contraste (en algunos


casos) Método de tinción
m.o pigmentados → ofrecen contraste
por su propio color
Tinción: aumento del contraste en el microscopio de campo claro
Colorantes → teñir las células y mejorar el contraste

Compuestos orgánicos, y cada clase de colorante tiene una


afinidad por materiales celulares concretos.

Azul de metileno, el cristal violeta y la safranina

Azul de metileno
Aceite de
inmersión

Aunque los colorantes se usan mucho en microscopía óptica, la tinción mata


las células y puede alterar sus características.
La diferencia de color en la tinción de Gram se debe a
diferencias en la estructura de la pared celular de las células.
De: Madigan, Michael T. (2004). Biología de los microorganismos. España: Pearson Educación.
Microscopía de contraste de fases y de campo oscuro

La microscopía de contraste de fases se basa en el principio según el cual las células


tienen un índice de refracción.
la luz que atraviesa una célula tiene una fase distinta
de la que atraviesa el líquido circundante.
Anillo de fases → que genera una imagen oscura sobre un fondo claro
En el microscopio de campo oscuro, la luz llega a la muestra únicamente desde
los lados → aparece clara en un fondo oscuro.

motilidad microbiana
Microscopio de Fluorescencia
La microscopía de fluorescencia se utiliza para visualizar muestras que emiten
fluorescencia, es decir, que emiten luz de un color diferente al de la luz que han
absorbido.

Sustancias fluorescentes naturales: clorofila

o bien porque están teñidas con un colorante fluorescente → DAPI (forma complejos con el ADN)
Microscopía de contraste por interferencia diferencial

Este modelo en específico es ideal para el


análisis de la superficie de las células.
Es un tipo de microscopía óptica que utiliza
un polarizador en el condensador para
producir luz polarizada.
Microscopio confocal de barrido con láser

Es un microscopio controlado por ordenador


en el que se acopla un láser a un microscopio de
fluorescencia.

El láser genera una imagen tridimensional


brillante y permite al observador acceder a la
muestra desde diversos planos de enfoque
Microscopía electrónica de transmisión (TEM)

Los microscopios electrónicos utilizan electrones en


lugar de luz visible (fotones) para generar imágenes de
células y estructuras celulares.

se utiliza para examinar células y estructuras


celulares a muchos aumentos y gran resolución.

estructuras a escala molecular


El poder de resolución de un microscopio óptico es de
unos 0,2 micrómetros, el de un TEM es de unos 0,2
nanómetros, mil veces más.
molécula individual de proteína o de ácido
nucleico
A la célula es necesario obtener secciones finas de ella, y
luego estabilizarlas
ácido ósmico, permanganato, o sales de uranio, lantano o plomo.
Microscopía electrónica de barrido

Imagen tridimensional óptima


de una célula.
En la microscopía electrónica de
barrido, la muestra se cubre con una
capa fina de un metal pesado,
normalmente oro.

En el microscopio electrónico de barrido se pueden observar también muestras


bastante grandes.
PRINCIPIO DE EJEMPLO DE
MICROSCOPIO FUNCIONAMIENTO IMAGEN APLICACIONES VENTAJAS DESVENTAJAS APLICACIÓN

Observación de células y
Ilumina la muestra Brillante y colorida, Bajo Observación de
Campo claro tejidos, muestras de agua y Simple, económico.
con luz blanca. bajo contraste. contraste. células sanguíneas.
suelo.

Halos de
Retrasa la luz y
Contraste de Blanco y negro, Observación de células vivas Permite observar difracción. Observación de
utiliza un anillo de
fases mejor contraste. sin teñir, bacterias y virus. células vivas sin teñir. Equipo más bacterias.
fase.
caro.

Blanco y negro, Permite observar


Interferencia Observación de células vivas
Divide la luz en dos contraste similar al células vivas sin teñir y Equipo más Observación de
diferencial sin teñir, estructuras celulares
haces polarizados. de contraste de estructuras pequeñas. caro. mitocondrias.
(Nomarski) pequeñas y delicadas.
fases, sin halos. No hay halos.

Ilumina la muestra Observación de células y Permite observar Campo de


Blanco y negro, Observación de
Campo oscuro con luz desde un tejidos sin teñir, bacterias y células sin teñir con visión más
fondo oscuro. espermatozoides.
ángulo oblicuo. virus. fondo oscuro. pequeño.

Observación de células y
Utiliza un filtro de Permite observar
Brillante y colorida, tejidos teñidos con Equipo más Observación de
Fluorescencia excitación y un células teñidas con
alta especificidad. fluorocromos, bacterias, virus caro. ADN.
fluorocromo. alta especificidad.
y hongos.
Microscopio de transmisión Microscópio de barrido electrónico
Característica
electrónica (TEM) (SEM)

Utiliza un haz de electrones enfocado Utiliza un haz de electrones enfocado


Principio de funcionamiento
para atravesar una muestra ultra fina. para barrer la superficie de una muestra.

Muestra la estructura interna de la Muestra la topografía de la superficie de


Imagen muestra en blanco y negro, con alta la muestra en 3D, con una resolución
resolución (hasta 0,1 nm). menor que el TEM (hasta 1 nm).

La muestra debe ser muy fina (menos La muestra debe estar conductora o ser
Preparación de la muestra
de 100 nm) y ultrarrápida. recubierta con una capa conductora.
Estudio de la topografía de la superficie
Estudio de la estructura ultra fina de
Aplicaciones de células, tejidos, minerales y
células, virus, moléculas y materiales.
materiales.
Permite obtener imágenes 3D de la
Ventajas Alta resolución espacial.
superficie de la muestra.
La preparación de la muestra es La resolución espacial es menor que la
Desventajas
compleja y requiere mucho tiempo. del TEM.
Visualización de la estructura del virus Estudio de la superficie de un implante
Ejemplos de aplicaciones
del VIH. dental.
TALLER # 5
1. ¿Cuál es el límite superior de aumento para un microscopio de campo claro? ¿Por
qué?.
2. ¿El microscopio de contraste de fases permite observar células vivas sin teñir?.
3. El tipo de microscopio que utiliza un haz de electrones enfocado para barrer la
superficie de una muestra es el __________.
4. ¿Cómo se puede hacer que las células emitan fluorescencia?
5. La tinción que se utiliza para observar el ADN en las células es la __________.
6. ¿Cuál de los siguientes tipos de microscopio se utiliza para estudiar la estructura
ultra fina de virus?
a) Microscopio de campo claro
b) Microscopio de contraste de fases
c) Microscopio de barrido electrónico (SEM)
d) Microscopio electrónico de transmisión (TEM)
7. ¿Cuál de las siguientes tinciones se utiliza para observar las bacterias?
a) Tinción de DAPI
b) Tinción de Gram
c) Tinción de Giemsa
d) Tinción de Wright

8. ¿Cuál de las siguientes partes del microscopio permite controlar la cantidad de luz que
llega al ocular? a) Diafragma b) Condensador c) Ocular d) Objetivo

9. El microscopio que permite observar estructuras celulares pequeñas y delicadas sin teñir es el
__________.

10. La parte del microscopio que permite enfocar la imagen es el __________.


Bibliografía:
• Madigan, Michael T. (2004). Biología de los microorganismos. España: Pearson
Educación (BCQS00690).
• Harvey, R.A. Champe, P.C. y Fisher, B. D.. (2008). Microbiología (2a. ed.).. Wolters
Kluwer Health.. https://elibro-
net.basesdedatos.utmachala.edu.ec/es/lc/utmachala/titulos/125446.
MUCHAS
GRACIAS!

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