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    Bicarbonate (Méthode Enzymatique)

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    Ce document décrit une méthode enzymatique pour le dosage quantitatif du dioxyde de carbone total dans le sérum ou le plasma humains. Le document fournit des détails sur le principe, les réactifs, le prélèvement d'échantillons, la procédure, les performances, les interférences et les références de la méthode.

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    BICARBONATE

    REACTIFS BIOLABO
    www.biolabo.fr

    Mthode enzymatique

    FABRICANT :
    BIOLABO SA,

    Ractif pour le dosage quantitatif du dioxyde de carbone total


    dans le srum ou le plasma humains.

    02160, Maizy, France


    REF 99832

    R1 8 x 30 mL Ractif de travail R2 1 x 30 mL Etalon

    REF 99852

    R1 6 x 100 mL Ractif de travail R2 1 x 30 mL Etalon

    CODE CNQ : IX

    SUPPORT TECHNIQUE ET COMMANDES


    Tel : (33) 03 23 25 15 50

    IVD USAGE IN VITRO

    Fax : (33) 03 23 256 256

    INTERET CLINIQUE (1)

    PREPARATION DES REACTIFS

    Le CO2 total dans le plasma est constitu de CO2 dissout en solution


    aqueuse, de CO2 faiblement li aux groupements amines des protines,
    de bicarbonate HCO3-, de petites quantits dions CO32- et dacide
    carbonique (H2CO3). Environ 90% du CO2 dans le plasma est sous
    forme de bicarbonate.
    La mesure du CO2 total, conjointement avec les trois paramtres
    principaux de lionogramme (Na+, K+, Cl-), et avec les valeurs du pH et
    des gaz du sang, est utilise pour valuer la concentration en HCO3- et
    explorer les perturbations de lquilibre acido-basique, rsultant dun
    dysfonctionnement mtabolique ou respiratoire.

    Ajouter sans dlai au contenu dun flacon R1 le volume d'eau


    dminralise frache indiqu sur l'tiquette.
    Agiter doucement jusqu' complte dissolution (environ 2 minutes).
    De manire limiter la contamination du ractif avec le CO2, utiliser
    uniquement de l'eau frachement dminralise qui n'a pas t stocke
    plus d'un jour. Ne pas pipetter avec la bouche.

    PRINCIPE (4)(5)
    Mthode enzymatique pour quantifier le CO2 total en tant que
    bicarbonate et gaz dissout. Le schma ractionnel est le suivant :
    PEPC
    Oxaloactate + H2PO4
    HCO3 + Phosphoenolpyruvate
    Oxaloactate + NADH

    MDH

    Malate + NAD +

    La diminution de l'absorbance due loxydation du NADH en NAD+ est


    directement proportionnelle la concentration en CO2 total dans le
    specimen et est mesure 380 nm.

    Srum non hmolys. Les spcimens doivent tre collects en condition


    anarobie. Prfrer lhparine comme anticoagulant.
    Ne pas conserver les spcimens plus dune heure 2-8C.

    REACTIF DE TRAVAIL

    Phophonolpyruvate
    NADH
    Phosphonolpyruvate carboxylase (PEPC)
    Malate dshydrognase (MDH)
    Tampon pH (20C) 8.0 + 0.1
    Conservateur
    flacon R2

    Stocker dans le flacon dorigine bien bouch 2-8 C et labri de


    la lumire.
    Ractif (flacon R1) et Etalon (flacon R2): Transvaser la quantit
    ncessaire, bien reboucher le flacon et stocker 2-8C.
    Avant ouverture, les ractifs sont stables jusqu' la date de
    premption indique sur ltiquette du coffret, sils sont utiliss et
    conservs dans les conditions prconises.
    Aprs reconstitution, le ractif de travail est stable 4 mois en
    labsence de contamination dans le flacon dorigine bien rebouch.
    Ne pas utiliser le ractif sil est trouble ou si labsorbance 380 nm
    est < 1,000.
    Ne pas utiliser le ractif de travail aprs la date de premption
    indique sur ltiquette du coffret.

    PRELEVEMENT ET PREPARATION DU SPECIMEN (2) (6)

    REACTIFS
    flacon R1

    STABILITE ET CONSERVATION

    8,0
    1.6
    > 1000
    > 200
    66

    mmol/L
    mmol/L
    IU/L
    IU /L
    mmol/L

    Hmoglobine : Aucune interfrence jusqu 1,5 g/L.


    Bilirubine:
    Aucune interfrence jusqu 300 mg/L.
    Lipmie :
    Ne pas utiliser de srum lipmiques.
    Young D.S. a publi une liste des substances interfrant avec le dosage.

    REACTIFS ET MATERIEL COMPLEMENTAIRES

    ETALON

    Bicarbonate de sodium

    INTERFERENCES (3)

    27

    mmol/L

    1. Equipement de base du laboratoire danalyses mdicales.


    2. Srums de contrle normaux et pathologiques.
    3. Eau dminralise pour la reconstitution du ractif.

    PRECAUTIONS

    CALIBRATION

    Les ractifs BIOLABO sont destins du personnel qualifi, pour un


    usage in vitro.
    Vrifier lintgrit des ractifs avant leur utilisation.
    Utiliser des quipements de protection (blouse, gants, lunettes).
    Ne pas pipetter avec la bouche.
    En cas de contact avec la peau ou les yeux, rincer abondamment
    leau et consulter un mdecin.
    Les ractifs contiennent de lazide de sodium (concentration < 0,1%)
    qui peut ragir avec les mtaux tel que le cuivre ou le plomb des
    canalisations. Rincer abondamment.
    La fiche de donnes de scurit peut tre obtenue sur simple
    demande.
    Elimination des dchets : respecter la lgislation en vigueur.
    Par mesure de scurit, traiter tout spcimen comme potentiellement
    infectieux. Respecter la lgislation en vigueur.

    Etalon du coffret (flacon R2) ou tout calibrant raccord sur une


    mthode ou un matriau de rfrence.
    La frquence de calibration dpend des performances de lanalyseur et
    des conditions de conservation du ractif.
    Il est recommand de calibrer nouveau dans les cas suivants :
    1. Changement du lot de ractif.
    2. Aprs oprations de maintenance sur lanalyseur.
    3. Les valeurs de contrle sortent des limites de confiance, mme aprs
    utilisation dun nouveau flacon de contrle.
    Version : FT 99832 18 09 2008

    CONTRLE DE QUALITE

    CODE CNQ : IX

    Tout srum ou solution de contrle titr pour cette mthode.

    Programme externe de contrle de la qualit.


    Il est recommand de contrler dans les cas suivants :

    Au moins un contrle par srie.

    Au moins un contrle par 24 heures.

    Changement de flacon de ractif.

    Aprs oprations de maintenance sur lanalyseur.


    Lorsquune valeur de contrle se trouve en dehors des limites
    indiques, appliquer les actions suivantes :
    1. Rpter le test en utilisant le mme contrle.
    2. Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, prparer un
    contrle fraichement reconstitu et rpter le test.
    3. Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, utiliser un autre
    calibrant ou un calibrant fraichement reconstitu et rpter le test.
    4. Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, calibrer nouveau
    en utilisant un autre flacon de ractif et rpter le test.
    5. Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, contacter le
    service technique BIOLABO ou le revendeur local.

    Ramener le ractif et les spcimens temprature ambiante.


    Mesurer dans des tubes 37C,
    (30C) :

    Blanc

    Etalon

    Dosage

    Ractif de travail (flacon R1)

    1 mL

    1 mL

    1 mL

    Eau dminralise

    10 OL
    10 OL

    Etalon

    10 OL

    Spcimen
    Bien mlanger et incuber 5 minutes 37C (30C).

    Utiliser une cuve de 1 cm de trajet optique et lire labsorbance 380 nm contre


    de leau dminralise.

    Remarque : des procdures spcifiques sont disponibles pour les


    analyseurs automatiques. Contacter le service technique BIOLABO.

    CALCUL (2)

    INTERVALLES DE REFERENCE (2)


    Bicarbonate

    MODE OPERATOIRE (TECHNIQUE MANUELLE)

    Le rsultat est dtermin daprs la formule suivante :

    (mEq/L)

    (mmol /L)

    Artriel

    21-28

    [21-28]

    Veineux

    22-29

    [22-29]

    (Abs Blanc Abs Essai)

    CO2 total (*) =

    Il est recommand au laboratoire de dfinir ses propres intervalles de


    rfrences pour la population concerne.

    (*)

    (Abs Blanc Abs Etalon)

    x concentration de lEtalon

    Le CO2 total est environ 10 % plus lev que le Bicarbonate.

    REFERENCES

    PERFORMANCES (7)

    (1)

    Analyse manuelle
    Intra-srie
    N = 20

    Taux
    faible

    Taux
    lev

    Inter-srie
    N = 20

    Taux
    faible

    Taux
    lev

    Moyenne mmol/L

    12,4

    38,2

    Moyenne mmol/L

    12,4

    38,2

    S.D. mmol/L

    0,9

    0,7

    S.D. mmol/L

    0,4

    2,1

    C.V. %

    7,4

    1,8

    C.V. %

    3,1

    5, 5

    (2)
    (3)
    (4)
    (5)
    (6)
    (7)

    Analyse automatise
    Intra-srie
    N = 20

    Taux
    faible

    Taux
    lev

    Inter-srie
    N = 20

    Moyenne mmol/L

    10

    40

    Moyenne mmol/L

    10

    40

    S.D. mmol/L

    0,7

    0,6

    S.D. mmol/L

    0,8

    1,6

    C.V. %

    7,3

    1,4

    C.V. %

    8,0

    3,9

    Taux
    faible

    Taux
    lev

    Limite de dtection : environ 3 mmol/L


    Sensibilit pour 1 mmol/L : environ 0.010 Abs
    Comparaison avec ractif du commerce :
    Analyse manuelle : y = 1,004 x + 0,31
    r = 0,9744
    Analyse automatise : y = 0,96 x + 0,40
    r = 0,96

    TIETZ N.W. Text book of clinical chemistry, 3rd Ed. C.A. Burtis, E.R. Ashwood,
    W.B. Saunders (1999) p. 1104-1124.
    Clinical Guide to Laboratory Test, 3rd Ed., N.W. TIETZ (1995) p. 84-85.
    YOUNG D.S., Effect of Drugs on Clinical laboratory Tests, 4th Ed. (1995) p. 384 3-88.
    Norris KA, Atkinson AR, Smith WG. Clin Chem 1975; 21:1093.
    Forrester RL, Wataji JJ, Silverman DA, Pierre JK. Clin Chem 1976; 22:p.243245
    Henry RJ. Clinical Chemistry: Principles and Technics. Harper and Row New
    York 1974.
    National Committee for Clinical Laboratory Standards. User evaluation of
    Precision Performance of Clinical Chemistry Devices. NCCLS, 1984, NCCLS
    Publication EP5-T.

    Made in France
    Version : FT 99832 18 09 2008

    LIMITE DE LINEARITE
    La raction est linaire jusqu 50 mmol/L (50 mEq/L).
    Au-del, diluer le spcimen avec de leau frachement dminralise
    exempte de CO2 et refaire le dosage en tenant compte de la dilution
    dans le calcul du rsultat. La limite de linarit dpend du rapport de
    dilution spcimen/ractif.

    Fabricant

    Date de premption

    IVD

    Usage in vitro

    Temprature de conservation

    REF

    Rfrence du produit

    Consulter la notice

    LOT

    Numro de lot

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