C1TP4 Chromatos

C1-TP4 IDENTIFICATION PAR CHROMATOGRAPHIE
SUR COUCHE MINCE

I. Chromatographie: aspects généraux
1) Définitions:
La chromatographie, découverte par le botaniste russe TSWETT en 1903,
permet de séparer et de caractériser les constituants d’un mélange homogène
coloré ou non.
Elle est basée sur la différence de solubilité d’une substance dans deux phases
non miscibles : une phase stationnaire liée au support (gel de silice sur support
d’aluminium ou de plastique, papier Whatman) et une phase mobile appelée
éluant.
Plus la substance est soluble dans l’éluant, plus elle est entraînée par cette
phase. Inversement, une substance peut soluble dans l’éluant migre peu et
lentement.
2) Eléments d’une CCM

Les principaux éléments d'une séparation chromatographique sur couche mince sont:
 la cuve chromatographique : un récipient habituellement en verre, de forme variable, fermé
par un couvercle étanche.
 la phase stationnaire :
 l'échantillon à analyser: environ un microlitre (μL).
 l'éluant : un solvant pur ou un mélange
3) Principe
Lorsque la plaque sur laquelle on a déposé l'échantillon est placée dans la cuve, l'éluant monte à
travers la phase stationnaire, essentiellement par capillarité. Chaque composant de l'échantillon
(soluté) migre à une vitesse qui dépend de sa nature et de celle du solvant.
4) Révélation
Une fois la migration terminée, l'identification des substances isolées se fait selon différentes
méthodes :
 directement si les substances sont colorées ;
 à l'aide de révélateurs si elles sont incolores afin de les transformer en taches colorées ;
- utilisation de produits chimiques (vapeurs de diiode ou solution de permanganate de
potassium)
- sous rayonnement UV
Dans tous les cas, il faut noter les positions des taches colorées juste à la fin de la chromatographie
en les cerclant au crayon à papier car certains produits disparaissent avec le temps.
L'ensemble des taches apparues à la fin de la chromatographie est appelé chromatogramme
5) Rapport frontal
La façon dont une substance a migré est quantifiée par une
grandeur appelée Rapport Frontal et noté Rf
On appelle rapport frontal, le rapport suivant :
dis tan ce parcourue par le soluté
Rf
dis tan ce parcourue par le solvant
Le schéma ci-contre montre comment calculer le Rf dans le cas
x
d’une CCM : Rf
y
Un soluté très soluble dans la phase fixe aura un Rf faible (migre peu)
Un soluté très soluble dans la phase mobile, aura un Rf élevé et proche de 1 (migre beaucoup).
Le rapport frontal est une caractéristique d’un soluté vis-à-vis du couple phase fixe/éluant.
6) Interprétation d'un chromatogramme

Si le chromatogramme issu d'un dépôt contient n taches, c'est que le dépôt contenait n espèces
chimiques différentes.
Si les chromatogrammes issus de deux dépôts présentent chacun une tache à la même position c'est
qu'ils contiennent la même substance.
7) Conclusion
La chromatographie permet :
- de déterminer le nombre d'espèces composant un échantillon testé
- d'identifier des espèces contenues dans l'échantillon en comparant les rapports frontaux
avec la littérature ou avec d'autres échantillons analysés.
II. Séparation et identification de colorants alimentaires par chromatographie sur

papier
Les colorants alimentaires sont des additifs alimentaires qui ont un numéro de code C.E.E de 100 à
199 précédé de la lettre E.
On dispose tout d'abord d'un lot de trois colorants alimentaires de référence commercialisés sous la
marque Vahiné:
 colorant jaune:E 102, tartrazine
 colorant rouge: E 122, azorubine
 colorant vert: mélange de tartrazine (Jaune, E 102) et de Bleu Patenté V (Bleu E 131)
D'autre part, on dispose de bonbons chocolatés "M & M's".
Vous devez réaliser sur une même plaque, la chromatographie de chacun des colorants Vahiné et d'un
colorant M & M's afin d’identifier les colorants utilisés.
1) Extraction du colorant du M &M’s

Dans un becher sont placés les bonbons d’une même couleur puis quelques gouttes d’eau. Agiter
délicatement afin de dissoudre le colorant.
2) Préparation de la cuve
Verser 10mL d’éluant dans la cuve. Fermer la cuve afin de la saturée en vapeurs d’éluant
3) Préparation de la plaque de chromatographie

Sur la plaque, tracer un trait au crayon à environ 1,5 cm du bord inférieur. Ce trait représente la
ligne de dépôt.
Sur la ligne de dépôt :
A l’aide de cure dents différents, déposer une tache de chaque colorant Vahiné puis une tache de
chaque colorant du bonbon (vous pourrez faire 2 applications successives au même endroit pour avoir
une tache bien colorée).
Identifier chaque dépôt par une lettre.
4) Obtention du chromatogramme
Introduire délicatement la plaque dans la cuve. Laisser, par capillarité, monter l’éluant jusqu’à
environ 2 cm du bord supérieur. Sortir la plaque, noter au crayon de papier les positions du
solvant (front du solvant) et de chaque tache si nécessaire. Séchez la plaque rapidement au
sèche-cheveux
Coller ou représenter le chromatogramme obtenu
5) Résultats exploitation:
 Pourquoi la plaque est elle mouillée ?
 Pourquoi les colorants ont ils migré ?
 Pourquoi les colorants ont ils migré de façon différente ?
 En chromatographie, qu’appelle t’on :
phase fixe ? Donner l’exemple utilisé ici.
phase mobile ou éluant ? Donner l’exemple utilisé ici.
 Que peut on dire de la composition du colorant vert vahiné ?
 La tâche laissée à la fin de l’expérience par un colorant, est-elle toujours à la même hauteur
(par rapport à la ligne de dépôt) que ce colorant soit seul ou dans un mélange ?
 Quel est l’intérêt de la chromatographie ?
 Mesurer les Rf de chaque constituant .Pour les taches étalées, on prendra le milieu de la
tache.
 Rechercher la présence éventuelle des colorants E 102, E 122 et E 131 dans les colorants
alimentaires des M & M's.
III. IDENTIFICATIONS PAR Chromatographie sur Couche Mince

1. Réaliser la chromatographie de :
L’extrait d’huile essentielle de lavande obtenue par hydrodistillation (E)
L’acétate de linalyle du commerce (C)
Du linalol (L)
Placer l’éluant (dichlorométhane) dans la cuve de chromatographie. Bien refermer la

cuve.
Préparer la plaque de chromatographie : tracer la ligne de depôt.
Déposer une goutte de chacune de ces substances sur la plaque à chromatographie,
sécher la plaque et la plonger dans la cuve.
Introduire la plaque dans la cuve. Puis bien boucher la cuve.
Lorsque le front du solvant est arrivé à environ 2 cm du bord supérieur, sortir la
plaque et noter le front du solvant. Sécher à l’air.
Aucune de ces substances n’étant colorée, révéler les tâches à l’aide d’une solution de
permanganate de potassium :
- Verser un peu de permanganate dans le cristallisoir (très peu sur quelques
millimètres d’épaisseur seulement).
- En tenant un des coins de la plaque repliée avec une pince métallique, immerger la
plaque dans la solution (face blanche vers le fond). Sortir la plaque, l’égoutter et
la sécher sur du papier filtre puis au sèche cheveux.
Entourer délicatement (sans abîmer la couche de silice) les taches obtenues.
Scotcher la plaque afin de mieux la conserver.
Récupérer l’éluant dans le flacon étiqueté « récupération »
2. Questions relatives à la CCM

 Pourquoi est-il nécessaire de révéler le chromatogramme ?
 Comparer le Rf de chaque substance et interpréter le chromatogramme obtenu

C1TP4 Chromatos

Transféré par

Droits d'auteur :

Formats disponibles

C1TP4 Chromatos

Transféré par

Informations du document

Description originale:

Titre original

Copyright

Formats disponibles

Partager ce document

Partager ou intégrer le document

Options de partage

Avez-vous trouvé ce document utile ?

Ce contenu est-il inapproprié ?

Droits d'auteur :

Formats disponibles

C1TP4 Chromatos

Transféré par

Droits d'auteur :

Formats disponibles

C1-TP4 IDENTIFICATION PAR CHROMATOGRAPHIE

SUR COUCHE MINCE

2) Eléments d’une CCM

6) Interprétation d'un chromatogramme

II. Séparation et identification de colorants alimentaires par chromatographie sur

1) Extraction du colorant du M &M’s

3) Préparation de la plaque de chromatographie

III. IDENTIFICATIONS PAR Chromatographie sur Couche Mince

Placer l’éluant (dichlorométhane) dans la cuve de chromatographie. Bien refermer la

2. Questions relatives à la CCM

Vous aimerez peut-être aussi