HEMOCULTURE

Introduction – Généralités
L’hémoculture est un examen important en bactériologie
médicale, il permet de mettre en évidence le passage de
micro-organismes dans le sang, de les identifier et enfin de
déterminer leurs profils de sensibilité aux ATB. De très
nombreux agents pathogènes peuvent être isolés à partir
d’hémoculture, à savoir des bactéries et des champignons.
Pendant longtemps, les techniques manuelles étaient le
seul outil diagnostique jusqu’à l’arrivée des automates
révolutionnant la phase analytique.
Perspectives: d’autres technologies Biologie
moléculaire.
Définitions-
Rappels physiopathologiques
1- Bactériémie:
La bactériémie est la présence éphémère de bactéries dans la
circulation sanguine, les décharges bactériennes se font soit
via le syst lymphatique, soit directement dans le sang de
façon passagère ou durable, s’accompagnant ou pas de
symptômes cliniques.

Le tableau clinique consiste svt en un syndrome de réponse

inflammatoire systémique (SRIS) associant 2 des signes
suivants: fièvre, hypotension, tachycardie, tachypnée,
leucopénie ou hyperleucocytose.
Définitions-
Rappels physiopathologiques
Actuellement, on définit 3 types de bactériémies:
- Transitoire: décharges brèves de bactéries dans le sang,
sans manifestations cliniques et spontanément
résolutives;
- Continue: décharges continuelles qui se rencontrent
notamment lors d’endocardites ou en cas de brucellose
ou de fièvres typhoïde;
- Intermittente: décharges bactériennes répétées à la
suite d’infections diverses.
Définitions-
Rappels physiopathologiques
2- Septicémie:
Appelée aussi sepsis, désigne une infection grave de
l’organisme caractérisée par la présence de germes
pathogènes dans le sang, les voies lymphatiques et les
organes.
Il existe différents types de septicémies:
• Septicémie d’origine thromboembolique: porte d’entrée
muqueuse ou tégumentaire;
• Septicémie d’origine lymphatique: porte d’entrée svt
digestive;
• Septicémie par effraction: (milieu extra hospitalier:
interventions dentaires sanglantes; milieu hospitalier:
chirurgie digestive, endoscopie,…)
• Septicémie néo-natale
 Etiologies microbiennes
Groupes Rôle Agents microbiens
Gpe I: Agents pathogènes Indiscutable: -Salmonella typhi
spécifiques 1 flc (+) suffit pour poser -Salmonella paratyphi A, B, C
de diagnostic -Brucella spp
-Haemophilus influenzae
-Neisseria menigitidis
-Campylobacter jejuni
-Streptococcus pneumoniae
-Streptococcus BH gpe A, B
-Clostridium perfringens
-Bacteroides fragilis
Gpe II: Agents pathogènes Discuté en fonction: -Entérobactéries: E.coli, KES,
opportunistes - nbre de flcs (+) Proteus, Salmonelles mineures
- porte (s) d’entrée -Pseudomonas aeruginosa
- terrain -Staphylococcus aureus / SCN
-Streptocoque gpe D et NG
-Levures: Candida albicans
Gpe III: Agents commensaux Très discuté: -Acinetobacter baumanii
ou saprophytes - flores normales et -Stenotrophomonas maltophilia
environnement -Corynebacterium spp
- contaminants fréquents -Bacillus spp
-Propionibacterium acnes
Hémoculture
1- Définition

L’hémoculture consiste à mettre en culture du sang

circulant qui est normalement stérile, afin de pouvoir
rapidement détecter et identifier l’agent infectieux
responsable d’une bactériémie. L’échantillon de sang
doit être prélevé aseptiquement et en quantité suffisante,
le délai de culture est souvent long.
2- Contexte et objectifs
Toute fièvre d’origine indéterminée, surtout si elle est
accompagnée de signes cliniques évocateurs d’infection,
doit faire pratiquer des hémocultures.
Selon le contexte clinique, les objectifs sont les suivants:
- Diagnostic étiologique de la bactériémie
- Recherche du foyer originel (porte d’entrée)
- Choix de l’antibiothérapie
- Suivi et surveillance de l’efficacité du traitement
antibiotique.
3- Prélèvement
En milieu hospitalier, les hémocultures représentent les
prélèvements les plus fréquemment prescrits.
Mode de prélèvement: doit être réalisé après antisepsie
rigoureuse, pour éviter toute contamination par des germes
cutanés ou ambiants.
Technique:
Préleveur: - lavage des mains
- port de gants
Patient: - asepsie de la peau au point de ponction de façon
centrifuge (nettoyage à l’alcool éthylique à 70°, ATS avec
produit iodé telle la polyvidone iodée) ou (2 fois alcool à 70°)
3- Prélèvement
Il faut désinfecter l’opercule du flacon avec alcool 70° ou
polyvidone iodée.
Le système de prélèvement est une tubulure munie de 2
aiguilles, l’une servant à pratiquer la ponction veineuse et
l’autre à inoculer le flacon grâce à un adaptateur.
Site du prélèvement:
- Site habituel: ponction veineuse au niveau de la veine du pli
du coude
- Veine jugulaire, KT ombilical ou talon (dispositif de
microhémoculture): N né, prématuré
- KT intra artériel ou intra veineux: prvt à proscrire
Technique de prélèvement
3- Prélèvement
Moment du prélèvement: Quand prélever?
Objectif du choix du moment: éviter tout faux négatif
 Prélever le plus tôt possible au cours de la maladie
 En dehors de toute antibiothérapie ou sous fenêtre
thérapeutique de 48 - 72H.
 Bactériémie continue: peu importe le moment
 Bactériémie discontinue: pic thermique, hypothermie,
frissons ou sueurs
 3- Prélèvement
Nombre de flacons :
1 hémoculture = 2 flacons (anaérobie/aérobie)
Bactériémie continue: 3 à 4 hémoc sur 48H, espacées de 30
à 60 min
 Si antibiothérapie dans les 10 j: faire 6 hémoc
supplémentaires pdt 3j (2/j).

Bactériémie intermittente: 4 à 6 hémoc en 48H (pics),

prvts espacés.
3- Prélèvement
Volume de sang:
Le recueil d’un volume suffisant de sang est nécessaire
pour augmenter les chances d’isolement des germes, mais
un ratio (sang/bouillon) de 1/10 voire 1/5 doit etre
respecté, afin d’inactiver le pouvoir bactéricide du sérum
et de diluer les ATB éventuels.
 Chez l’adulte: 10 ml minimum (20 ml), car densité
bactérienne faible
 Chez l’enfant: 5 ml; Chez le nouveau né, nourrisson: 1 à
2 ml, car densité bactérienne plus élevée
 4- Milieux d’hémoculture
On ensemence 2 flacons pour chaque prélèvement, un flc
aérobie et un flc anaérobie.
Nature des milieux utilisés:
Actuellement 3 milieux sont utilisés comme base :
• Cœur-cervelle pour les flcs SA et SN dépourvus de
charbon (automate BacT/ALERT)
• Trypticase soja pour les flcs FA et FN comportant du
charbon (automate BacT/ALERT), les flcs BD (automate Bactec) ainsi
que les flcs manuels (Signal)
• Bouillon à base de peptones pour les flcs manuels
(Hémoline) ainsi que les flcs Versa TREK REDOX (automate
Versa TREK).
4- Milieux d’hémoculture
Tous ces milieux sont enrichis en nutriments et facteurs
de croissance (vitamines, hémine, hydrate de carbone,
cystéine,…) pour permettre la culture des micro-
organismes rencontrés en pathologie humaine.

NB: en Algérie on utilise le bouillon citraté (aérobie)

(IPA), il se présente sous forme de flc de 250ml avec
180ml de bouillon citraté à 0,5%
Différents types de flacons d’hémoculture
5- Systèmes d’hémoculture
Système automatisés:
 Bactec ® (Becton Dickinson)
 BacT/ALERT ® (bioMérieux)
 VersaTREK ® (Trek Diagnostic System)
Ces automates assurent en continu et simultanément la
surveillance, l’agitation et l’incubation de tous les flcs
d’hémocultures introduits. Ils permettent de détecter plus
facilement et plus rapidement la croissance bactérienne. Les
lectures se font toutes les 10 min et la positivité d’un flc est
signalée par une alarme visuelle et ou sonore.
Une incubation de 5 j, à 35°C sous agitation douce, est
suffisante.
 5- Systèmes d’hémoculture
La croissance bactérienne sera mesurée par différents
systèmes:

 Bactec: mesure de la baisse du pH par fluorescence;

 BacT/ALERT: capteur colorimétrique de CO2 au fond
du flc, analyse par réflectrométrie;
 VersaTREK: détection de la variation de pression à
l’intérieur du flacon par un capteur de pression.
6- Traitement des flacons au
laboratoire
- Acheminement au laboratoire: le plus rapidement possible
afin d’être introduit dans l’étuve (syst manuel) ou dans
l’automate. Chaque hémoculture doit être étiquetée
correctement (N° d’enregistrement, Nom/prénom, service,
date et heure du prvt, T°) et accompagnée d’une fiche de
renseignements comportant :
o Nom / prénom / âge
o Service d’origine
o Date / heure / mode de prvt
o Renseignements cliniques / diagnostics évoqués
o Traitements ATB éventuellement en cours
o Examens biologiques
o Autres hémoc pratiquées et résultats
6- Traitement des flacons au
laboratoire
- Surveillance – Repiquage – Lecture:
Surveillance:
Les flcs sont incubés à 35°C pdt 15 j (voire 30 J), la
surveillance visuelle se fait tous les jours, à partir de la
6ème heure, en recherchant un signe de positivité:
trouble, voile, hémolyse, coagulum, mie de pain,
colonies sur la gélose, production de gaz.
NB: attention aux germes qui troublent peu ou pas le
bouillon d’hémoc: Brucella, Haemophilus, Neisseria,…
Pour les syst automatisés, une incubation de 5 j suffit
(parfois 10 à 15j).
 6- Traitement des flacons au
laboratoire
Repiquage: 2 types
Repiquage suite à l’apparition de signes de positivité:
effectué à la moindre suspicion de culture (+), un
échantillon du bouillon d’hémoc est ensemencé sur GSF
(+ strie de staph), GSC, Columbia au sang et selon les
résultats de l’ED, d’autres milieux peuvent être
additionnés.
Repiquage systématique: en l’absence de signe de culture
À la 48H - au 5ème et 15ème j (ou 30ème jour).
6- Traitement des flacons au
laboratoire
Lecture des boites:
Si absence de culture, réincuber les boites jusqu’à 48H
ou plus.
Si culture positive, on identifie les colonies pour chaque
flacon d’hémoc (+sieurs flcs d’un même patient):
- Aspect des colonies
- Examen microscopique : EF - Gram
- Tests d’orientation
- Identification biochimique et antigénique
- Tests de sensibilité aux ATB: antibiogramme-CMI
 6- Traitement des flacons au
laboratoire
- Recherches particulières:
a- Recherche de Streptocoques déficients: Suspicion
d’endocardite

Il faut faire un enrichissement à partir du bouillon d’hemoc

(8gttes) sur BGT + 4gttes polyvitex ou EG. Incubation 48H
ou plus (10j) puis repiquage sur GSF + strie de staph
recherche de col. satellites après 48-72H d’incubation.
6- Traitement des flacons au
laboratoire
b- Recherche de Brucella: suspicion de brucellose
les flacons d’hémoc seront gardés à l’étuve pdt 30 j, si
absence de signe de culture: repiquage systématique sur GSF
/ GSC incubation à 37C°, sous CO2 pdt 10 j.
c- Recherche d’autres germes: à préciser sur la demande
afin d’utiliser les techniques et milieux appropriés.
- Antibiogramme d’urgence:
Flc monophasique (liquide): signe de positivité, ED (+):
ATB d’urgence à partir du bouillon.
Flc diphasique: ouvrir et racler les colonies à partir de la
gélose Gram, identification et ATB.
 7- Interprétation:
Hémoculture Bactérie en cause Interprétation
+sieurs flcs (+) à 1seul Quelque soit la bactérie Vraie bactériémie
germe, même ATB
+sieurs flcs (+) à +sieurs Svt Entérocoques associés - Faute d’asepsie
germes - Foyer polymicrobien:
digest, hémopathie,
brulures étendues

Tous les flcs sont (–) N’élimine pas le diagnostic de

bactériémie:
- Volume de sg insuffisant
- Nbre de flcs insuffisants
- Prvt non réalisé au bon moment
- Bactéries particulières
- Antibiothérapie aveugle
- Contrôle d’efficacité d’un trt
ATB
- Dc étiologique d’un état fébrile:
Synd inflammatoire, allergie,
néoplasie
 7- Interprétation:
Bactérie à pouvoir pathogène Vraie bactériémie
indiscutable

Bactérie à pouvoir pathogène • Au moins 2 flcs (+)

discutable: B peu fréquente, • Même bactérie isolée au
germe de souillure niveau du foyer infectieux
1 flc (+) sur l’ensemble des • Contexte clinique en faveur
hémoc pratiquées Exp: E.coli / IU

Bactérie fréquemment • Au moins 2 flcs (+)

responsable de contamination • Même bactérie isolée d’un
autre foyer infectieux ou
autre porte d’entrée
• Terrain
Exp: S. epidermidis chez
porteur de valve ou KT
Isolement de: Bacillus Contamination vraisemblable
Micrococcus
Corynebacterium NB: si terrain fragilisé, faire
une nouvelle série d’hémoc
Propionibacterium