Modelo Experimental para O Estudo Da Gastrosquise em Embriões de Galinha

UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO SUL
PRÓ-REITORIA DE PÓS-GRADUAÇÃO E PESQUISA

FACULDADE DE MEDICINA
PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM MEDICINA: CIRURGIA
ÁREA DE CONCENTRAÇÃO: DEFEITOS DA PAREDE ABDOMINAL
MODELO EXPERIMENTAL PARA O ESTUDO

DA GASTROSQUISE EM EMBRIÕES
DE GALINHA
Carlos André Tarrio Gandara
Porto Alegre
2002
UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO SUL
PRÓ-REITORIA DE PÓS-GRADUAÇÃO E PESQUISA
FACULDADE DE MEDICINA
PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM MEDICINA: CIRURGIA
ÁREA DE CONCENTRAÇÃO: DEFEITOS DA PAREDE ABDOMINAL
MODELO EXPERIMENTAL PARA O ESTUDO

DA GASTROSQUISE EM EMBRIÕES
DE GALINHA
Carlos André Tarrio Gandara
Dissertação apresentada ao Programa de

Pós-Graduação em Medicina: Cirurgia, da
Universidade Federal do Rio Grande do Sul
para obtenção do título de Mestre em Medi-
cina.
Orientador: Prof. Dr. Ubirajara Índio Carvalho da Motta
Porto Alegre
2002
Ficha Catalográfica
G195m Gandara, Carlos André Tarrio

Modelo experimental para o estudo da gastrosquise em em-
briões de galinha / Carlos André Tarrio Gandara ; orient. Ubira-
jara Índio Carvalho da Motta. – Porto Alegre, 2002.
153 f. : il. color.
Dissertação (Mestrado) – Universidade Federal do Rio Gran-

de do Sul. Faculdade de Medicina. Programa de Pós-Graduação
em Medicina: Cirurgia.
1. Gastrosquise. 2. Modelos animais de doenças. 3. Embrião

de galinha. I. Motta, Ubirajara Índio Carvalho da. II. Título.
NLM: WI950
Catalogação Biblioteca FAMED/HCPA

Pegue vinte ou mais ovos e deixe-os para serem chocados por
duas ou mais galinhas. Então a cada dia, a partir do
segundo dia de incubação, retire um ovo, quebre-o e
examine-o.
Você encontrará exatamente as situações que eu
informo, pois a natureza da ave assemelha-se
à do homem.
Hipócrates (460-377 a.C.)

À minha amada esposa Mariângela, minha
maior incentivadora, por ter proporcionado a
tranqüilidade necessária para realizar este
sonho.
À nossa filha Maria Eduarda, que nasceu

em meio à dissertação e encheu de alegria
nossas vidas.
Aos meus pais, pelo exemplo.

“Soñar lo imposible soñar
Vencer al invicto rival
Sufrir el dolor insufrible
Morir por un noble ideal...
...Con fe una estrella alcanzar
Luchar por un mundo mejor
Perseguir lo mejor que hay en ti
Llegar donde nadie há llegado
Y soñar lo imposible soñar”
Don Quijote y Aldonza

Letra de Joe Darion
Do musical “El hombre de La Mancha”
Ao Dr. Ubirajara Índio Carvalho da Motta,

exemplo de Médico e Amigo,
a quem tantos outros cirurgiões pediátricos, como eu, devemos aquilo que temos de mais
precioso na medicina, nossa formação e nosso amor pelos pacientes.
Obrigado.
Agradecimentos
• Ao colega Eduardo Spadari Araújo, amigo e colaborador, que com seu
espirito científico contribuiu diretamente para esta dissertação.
• Ao Dr. Tanju Aktug, da Dokuz Eyul University, Izmir, Turquia, que pa-
cientemente respondeu a todas as minhas dúvidas, forneceu preciosas
sugestões e prestou significativa colaboração para o desenvolvimento
deste estudo.
• Aos mestres Elinês Oliva Maciel, João Vicente Bassols e João Carlos
Ketzer de Souza, pelo exemplo, estímulo e amizade.
• Ao médico veterinário Aírton Cogo, exímio especialista na criação de
aves, que, com sua experiência, auxiliou no aprendizado do desenvolvi-
mento e criação dos embriões, e à sua empresa, a Sulave S.A, que gen-
tilmente cedeu os animais para a pesquisa.
• Ao Dr. Celso Piccoli Coelho, diretor do Centro de Ciências Biológicas e
da Saúde, da Universidade de Caxias do Sul (UCS), pelo apoio à exe-
cução do experimento nos laboratórios da UCS.
• Aos colegas médicos patologistas Alessandra Godoy, Vinícius Silveira
e Ana Maria Geiger, pela competência na preparação e análise do mate-
rial anatomopatológico.
• Ao amigo e colega de mestrado Clândio de Freitas Dutra, pelas inúme-
ras vezes em que trocamos idéias sobre nossas dissertações nestes dois
anos de convivência.
• Ao Dr. Mário Wagner, que, com sua competência e objetividade, iluminou
os caminhos da estatística e da epidemiologia.
• À Dra. Maria do Horto Motta, pelo requinte e competência na revisão de
linguagem de todo o trabalho.
• Aos funcionários do Biotério da UCS, em especial à Sra. Maria Ilani da
Silveira, pela paciência e carinho que dedicou no cuidado diário dos em-
briões e pintos.
• Aos professores e funcionários do Programa de Pós-Graduação em
Cirurgia da Universidade Federal do Rio Grande do Sul.

Sumário
LISTA DE TABELAS
LISTA DE FIGURAS
RESUMO
SUMMARY
1 - INTRODUÇÃO ..................................................................................................................................... 2
1.1 - Definições ................................................................................................................................ 6
1.2 - Aspectos Históricos ....................................................................................................... 9
1.3 - Patogênese da Gastrosquise ................................................................................. 12
1.4 - Epidemiologia....................................................................................................................... 16
1.5 - Diagnóstico Pré-Natal dos Defeitos da Parede
Abdominal ............................................................................................................................... 18
1.6 - Etiologia da Lesão Intestinal na Gastrosquise....................................... 19
1.7 - Modelos Experimentais de Gastrosquise ................................................... 26
1.7.1 - Modelos Experimentais em Coelho ........................................................ 27
1.7.2 - Modelos Experimentais em Ovelha ........................................................ 28
1.7.3 - Modelos Experimentais em Rato .............................................................. 29
1.7.4 - Modelos Experimentais em Galinha ..................................................... 30
1.7.4.1 - A Incubação de Embriões de Galinha ............................... 30

1.7.4.2 - A Embriologia da Ave .................................................................... 33
1.7.4.3 - O Embrião de Galinha como Modelo Expe-
rimental ................................................................................................... 38
1.7.4.4 - Embrião de Galinha e as Técnicas de Troca

de Líquido Amniótico ..................................................................... 42
2 - OBJETIVOS ........................................................................................................................................... 47
2.1 - Objetivo Principal.............................................................................................................. 47
2.2 - Objetivos Secundários ................................................................................................. 47
3 - MATERIAL E MÉTODO ............................................................................................................... 49
3.1 - Delineamento da Pesquisa ....................................................................................... 49
3.2 - Local da Pesquisa ............................................................................................................ 49
3.3 - Estudo Piloto......................................................................................................................... 49
3.4 - Amostra...................................................................................................................................... 53
3.4.1 - Critérios de Inclusão ......................................................................................... 53
3.4.2 - Critérios de Exclusão ....................................................................................... 53
3.4.3 - Grupos......................................................................................................................... 54
3.5 - Método ........................................................................................................................................ 55
3.6 - Variáveis em Estudo....................................................................................................... 67
3.7 - Ética em Estudos Experimentais ....................................................................... 68
3.8 - Análise Estatística ............................................................................................................ 70
4 - RESULTADOS .................................................................................................................................... 72
4.1 - Sobrevida ................................................................................................................................. 72
4.2 - Acidentes no Procedimento .................................................................................... 75
4.3 - Peso, Comprimento e Largura dos Ovos e Peso dos
Embriões .................................................................................................................................. 76
4.4 - Análise Macroscópica das Vísceras Expostas....................................... 78
4.5 - Análise Microscópica das Alças Intestinais ............................................. 82
4.6 - Número de Plexos Nervosos .................................................................................. 90
4.7 - Espessura Intestinal ....................................................................................................... 92
5 - DISCUSSÃO ......................................................................................................................................... 96
6 - CONCLUSÕES ................................................................................................................................... 108
7 - PERSPECTIVAS ................................................................................................................................ 110
8 - REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS ................................................................................... 112
ANEXOS
Lista de Tabelas
Tabela 1 Comparação entre os estudos no Brasil e Ingla-

terra ................................................................................................................................... 4
Tabela 2 Gastrosquise versus Onfalocele .................................................................. 9
Tabela 3 Fatores de risco para gastrosquise ........................................................... 17
Tabela 4 O embrião de galinha como modelo experimental
para outras patologias que não a gastrosquise ............................... 40
Tabela 5 Avaliação histológica do intestino dos embriões de
galinha ............................................................................................................................. 69
Tabela 6 Acidentes no procedimento para criar uma gas-
trosquise......................................................................................................................... 75
Tabela 7 Medidas de peso, comprimento e largura dos ovos,
peso dos embriões e relação peso do embrião pe-
so do ovo (média ± desvio padrão) ........................................................... 76
Tabela 8 Análise histológica das alças de intestino delgado
dos 3 grupos, baseado no escore padronizado da
tabela 5 (média ± desvio padrão)................................................................ 89
Tabela 9 Número de plexos nervosos por corte de intestino
(média ± desvio padrão) .................................................................................... 91
Tabela 10 Medidas de espessura intestinal em micrômetros ......................... 93
Tabela 11 Sobrevida dos modelos experimentais de gastros-
quise.................................................................................................................................. 100
Lista de Figuras
Figura 1 Gastrosquise .................................................................................................................. 7

Figura 2 Gastrosquise – detalhe .......................................................................................... 7
Figura 3 Onfalocele – Observar o saco recobrindo, as alças in-
testinais .............................................................................................................................. 8
Figura 4 O embrião de galinha e suas relações com as mem-
branas extra-embriônicas. (1) Embrião, (2) Cavidade
amniótica – âmnio, (3) Gema – saco da gema, (4) Al-
bumina, (5) Cavidade alantóide – membrana alantói-
de, (6) Câmara de ar, (7) Membrana amnioalantóide,
(8) Membrana corioalantóide, (9) Casca do ovo –
membrana do ovo. ..................................................................................................... 36
Figura 5 Embrião de 13 dias de desenvolvimento.................................................. 50
Figura 6 Transiluminação evidenciando o ovo fecundado (a) e
não fecundado (b) ...................................................................................................... 51
Figura 7 Gancho manufaturado a partir de um estilete cirúrgico,
utilizado para identificar e trazer para fora o cordão
umbilical, diminuindo o risco de lesão do embrião............................ 52
Figura 8 Incubadora....................................................................................................................... 55
Figura 9 Incubadora aberta ...................................................................................................... 56
Figura 10 Antissepsia com álcool 70%, na extremidade mais
alargada do ovo ........................................................................................................... 58
Figura 11 Abertura do orifício na extremidade mais alargada do
ovo, com o uso da pinça tipo “mosquito” .................................................. 59
Figura 12 Orifício de 0,7 a 1 cm de diâmetro aberto sobre a câ-
mara de ar para abordagem cirúrgica ........................................................ 59
Figura 13 Orifício sobre a câmara de ar com visão da membrana
do ovo ................................................................................................................................. 60
Figura 14 Abordagem da cavidade alantóide e amniótica com o
gancho, para abrir as membranas e localizar o cordão
umbilical ............................................................................................................................. 60
Figura 15 Gancho trazendo o cordão umbilical ........................................................... 61
Figura 16 Gancho trazendo o coto umbilical com as alças intes-
tinais visíveis mas cobertas pela membrana do cor-
dão. ....................................................................................................................................... 61
Figura 17 Tesoura de Iris abrindo o cordão umbilical, tomando-
-se o cuidado de não lesar a artéria e veia umbilical ...................... 62
Figura 18 Cordão umbilical aberto e as alças intestinais parcial-
mente expostas............................................................................................................ 62
Figura 19 Alças intestinais fora do cordão umbilical, liberadas
das membranas que recobrem ........................................................................ 63
Figura 20 Cordão umbilical devolvido para dentro do ovo e o ori-
fício sendo coberto por um curativo plástico adesivo ..................... 63
Figura 21 Fechamento do orifício com curativo plástico ....................................... 64
Figura 22 Final do procedimento, ovos devolvidos à incubadora
para controle de temperatura, umidade e viragem até
o 19o dia ............................................................................................................................ 64
Figura 23 No 19o dia de desenvolvimento o ovo é aberto e a vi-
talidade do embrião é avaliada pelos movimentos es-
pontâneos ou pelo sangramento das membranas da
casca.................................................................................................................................... 65
Figura 24 Embrião no 19o dia, no momento da abertura do ovo. .................. 65
Figura 25 Detalhe do abdômen do embrião com o saco da ge-
ma, o cordão umbilical e as alças intestinais com as-
pecto espessado protuídas para fora do abdômen .......................... 66
Figura 26 Embriões mortos do grupo gastrosquise .................................................. 72
Figura 27 Embrião do grupo gastrosquise morto ....................................................... 73
Figura 28 Embrião do grupo gastrosquise, que no 19o dia apre-
sentava cicatrização completa do coto umbilical, sem
exteriorização das alças ........................................................................................ 74
Figura 29 Distribuição dos ovos e embriões na amostra...................................... 75
Figura 30 Gráficos de média e barra de erro (± desvio padrão)
representando a comparação de diversas variáveis
entre os grupos em estudo (G: gastrosquise; M: mistu-
ra; C: controle) .............................................................................................................. 77
Figura 31 Embrião vivo do grupo gastrosquise ........................................................... 78
Figura 32 Embrião vivo do grupo gastrosquise ........................................................... 79
Figura 33 Embrião vivo do grupo gastrosquise. Alças intestinais
expostas, aderidas e com parede espessada, ainda é
possível identificar o saco da gema ............................................................. 79
Figura 34 Embrião vivo do grupo gastrosquise. Alças intestinais
expostas, lateralmente ao cordão umbilical e ao saco
a gema................................................................................................................................ 80
Figura 35 Embrião do grupo mistura.................................................................................... 80
Figura 36 Embrião do grupo controle .................................................................................. 81
Figura 37 Detalhe do coto umbilical aberto do embrião do grupo
controle. ............................................................................................................................. 81
Figura 38 Corte histológico do intestino de embrião do grupo C,
(100x .................................................................................................................................... 82
(100x). Enterite leve ................................................................................................. 83
(400x .................................................................................................................................... 83
Figura 41 Corte histológico do intestino de embrião do grupo M,
(100x) .................................................................................................................................. 84
(400x). Enterite leve ................................................................................................... 84
Figura 43 Corte histológico do intestino exposto de embrião do
grupo G, (40x) ............................................................................................................... 85
grupo G, (100x) ............................................................................................................ 85
grupo G, (100x) ............................................................................................................ 86
grupo G, (100x) ............................................................................................................ 86
grupo G, (400x). Serosite severa ................................................................... 87
grupo G, (400x) ............................................................................................................ 87
grupo G, (100x) ............................................................................................................ 88
grupo G, (400x) ............................................................................................................ 88
grupo G, (400x) ............................................................................................................ 89
grupo G, (400x) ............................................................................................................ 90
(400x) .................................................................................................................................. 91
(40x). Demonstração das camadas intestinais
medidas pela morfometria digital.................................................................... 92
Figura 55 Gráficos de média e barra de erro (± desvio padrão)
representando a comparação de medidas de espes-
suras intestinais. (G: gastrosquise; M: mistura; C: con-
trole) ..................................................................................................................................... 94
RESUMO
RESUMO
A gastrosquise passou, nos últimos 50 anos, da condição de uma pa-
tologia fatal para índices de sobrevida ao redor de 90%, graças aos avanços
na neonatologia e cirurgia neonatal modernas. Porém uma significativa mor-
bidade permanece, relacionada principalmente com o atraso no início do fun-
cionamento intestinal normal. Este tema é objeto de estudo em vários cen-
tros visando determinar a origem do problema e promover soluções. Os mo-
delos experimentais em animais são parte importante desses estudos. O
objetivo deste trabalho foi o de reproduzir o modelo experimental da gastros-
quise em embriões de galinha e comprovar que as alterações histopatólogi-
cas apresentadas são comparáveis às da gastrosquise em humanos. Foram
utilizados 278 ovos galinha da raça Leghorn (Gallus domesticus). Os em-
briões foram divididos em três grupos: grupo gastrosquise, no qual, através
de um orifício na casca do ovo, o cordão umbilical foi aberto e as alças intes-
tinais expostas a uma mistura de líquidos amniótico e alantóide; grupo mistu-
ra, no qual se promovia apenas a mistura de líquidos amniótico e alantóide,
sem a manipulação do coto umbilical e sem a exposição de alças intestinais;
e o grupo controle, que consistia de embriões normais e nos quais nenhum
procedimento foi realizado. Os procedimentos foram feitos no 13o dia do de-
senvolvimento embrionário, e o estudo encerrado no 19o, quando as alças

intestinais dos embriões foram removidas e encaminhadas para análise his-
tológica convencional e análise morfométrica digital. Ao final do experimento,
foram obtidos 23 embriões vivos do grupo gastrosquise (11,1% de sobre-
vida), 18 dos quais apresentavam alças intestinais expostas (8,7% de su-
cesso). No grupo mistura, 12 (70,5%) de 17 embriões sobreviveram ao pro-
cedimento. Como controle foram utilizados 10 embriões normais. Os em-
briões do grupo gastrosquise apresentaram um peso menor que os dos ou-
tros grupos. Este grupo também desenvolveu alterações intestinais consis-
tindo em infiltrado inflamatório da serosa e mucosa, alterações isquêmicas
da parede intestinal e formação de uma camada de fibrina sobre as alças.
Tais achados são característicos da gastrosquise humana e não foram
observados nos demais grupos. Os embriões do grupo gastrosquise mostra-
ram também espessamento da parede intestinal, principalmente da serosa,
quando em comparação com os outros grupos. Desta forma, o modelo ex-
perimental em embriões de galinha mostrou ser capaz de reproduzir as alte-
rações intestinais da gastrosquise humana.

SUMMARY
SUMMARY
In the last 50 years gastroschisis has gone from a fatal condition to a disease
with survival rates of around 90%. This is due to advances achieved in
modern neonatology and neonatal surgery. However, there is still significant
morbidity, related mainly to the delay in beginning normal intestinal function
observed in these patients. This topic has been studied at several centers
with a view to determining the source of this problem and achieving solutions.
Experimental animal models are a major part of these studies. The purpose
of this study was to reproduce the experimental model of gastroschisis in
chicken embryos and to prove that the histopathological changes that occur
in this model can be compared to those in human gastroschisis. A total of
278 Leghorn hen (Gallus domesticus) eggs were used. The embryos were
divided into three groups: the gastroschisis group, in which the umbilical cord
was opened through an orifice made in the eggshell, and the intestinal loops
were exposed to a mixture of amniotic liquid and allantoid; the mixture group,
in which the amniotic liquid and allantoid were simply mixed without
manipulating the umbilical stump and without exposing intestinal loops; and
the control group which consisted of normal embryos in which no procedure
was performed. The procedures were performed on the 13th day of embryo
development and the study was ended on the 19th day, when the intestinal
loops of the embryos were removed and sent for conventional histological
study and digital morphometric analysis. At the end of the experiment, 23 live
embryos were obtained in the gastroschisis group (11.1% survival), and 18 of
these presented exposed intestinal loops (8.7% success). In the mixture
group, 12 (70.5%) of 17 embryos survived the procedure. And 10 normal
embryos were used as control. The embryos of the gastroschisis group
weighed less than those of the other two groups. The gastroschisis group
also developed intestinal changes consisting of an inflammatory infiltrate of
the serosa and mucosa, ischaemic changes in the intestinal wall and
formation of a fibrin layer over the loops. These findings are characteristic of
human gastroschisis and were not observed in the two other groups studied.
The embryos of the gastroschisis group also presented a thickening of the
intestinal wall, particularly the serosa, as compared with the other groups.
Thus, the experimental model in chicken embryos proved able reproduce the
intestinal changes of human gastroschisis.

1 - INTRODUÇÃO
1 - Introdução 2
1 - INTRODUÇÃO
O prognóstico dos recém-nascidos portadores de anomalias congênitas
vem se modificando nos últimos anos. Cinqüenta anos atrás a gastrosquise
era uma malformação fatal, e hoje em dia mais de 90% das crianças sobre-
vivem e têm um excelente prognóstico a longo tempo1.
Mas a que fatores se atribui esta importante melhora?
A partir de 1943, quando ocorreu o relato do primeiro paciente portador
de gastrosquise que sobreviveu ao tratamento cirúrgico, muita coisa mudou2.
Desde então foram criadas e aprimoradas as unidades de terapia intensiva
neonatal, centros terciários complexos que compreendem, além de equipa-
mentos sofisticados, profissionais altamente capacitados. Outro aspecto im-
portante foi o desenvolvimento da nutrição parenteral, que veio para atenuar
o problema das crianças que permaneciam por longos períodos em jejum
após a cirurgia. Desenvolveram-se também os métodos de diagnóstico pré-
natal, incluindo aí principalmente a ecografia, assim como houve o apri-
moramento dos cuidados obstétricos em gestações de alto risco. A qualifica-
ção técnica das equipes cirúrgicas e o aprimoramento dos materiais utiliza-
dos para correção desses defeitos, como as bolsas de silicone, acrescenta-
ram também sua parcela ao sucesso alcançado. Esses benefícios se esten-
deram para todas as patologias neonatais, além da gastrosquise, como a
atresia de esôfago, a hérnia diafragmática e a enterocolite necrosante3, 4.

1 - Introdução 3
Desta forma, diante, hoje, de uma patologia com um índice de cura de
90% dos casos, o que resta por estudar nesses pacientes?
A verdade é que, em gastrosquise, problemas fundamentais ainda não
foram solucionados, permanecendo como objeto de estudo por muitos pes-
quisadores:
a) a sua etiologia e sua relação com as onfaloceles;
b) a ação deletéria e inconstante do líquido amniótico sobre as alças
intestinais expostas;
c) a razão para a diminuição da atividade peristáltica dessas alças;
d) o manejo correto das atresias intestinais associadas;
e) as indicações dos tratamentos estagiados (silos);
f) o manejo da síndrome do intestino curto resultante de ressecções
intestinais por múltiplas atresias, ou decorrente da diminuição de
comprimento do intestino.
Muitas perguntas ainda pendentes a respeito da gastrosquise não po-
dem ser respondidas sem a utilização de modelos experimentais da doença.
Os pacientes portadores dessa patologia raramente fornecem material para
estudo histológico, ou seja, não faz parte do tratamento a ressecção de por-
ções do intestino que serviriam como fonte de informação histológica. E,
quando tais ressecções se fazem necessárias, são devidas a atresias intesti-
nais ou volvo de intestino médio com necrose, material que não representa
propriamente a doença. Reside aí a importância de trabalhos que buscam
desenvolver estudos em modelos animais dessa malformação congênita,

1 - Introdução 4
mesmo em países em desenvolvimento, onde a dedicação à pesquisa bá-
sica é menos intensa, como no Brasil.
Em tempos em que expressões como terapia gênica, clonagem e ética
saíram do vocabulário científico e passaram a ser usados pela população e
pelos meios de comunicação, estudos experimentais de cirurgia fetal são ca-
da vez mais bem-vindos, desenvolvendo, em animais, futuros conceitos e te-
rapias para serem utilizadas em seres humanos.
Em 2001, Vilela et al.5 publicaram, no Journal of Pediatric Surgery, a
primeira casuística brasileira de crianças portadoras de gastrosquise na lite-
ratura mundial. Nessa mesma revista, seis meses antes, Driver et al.6 ha-
viam apresentado dados semelhantes a respeito de pacientes de Manchester,
Inglaterra. A tabela 1 traz um resumo desses dois estudos.
Tabela 1 - Comparação entre os estudos no Brasil e Inglaterra
Vilela, 20015 Driver, 20006

Recife Manchester
Local
Brasil Inglaterra
Período 1995-99 1991-97
Número de casos 31 91
Idade gestacional ≥ 37 sem 22 (71%) média 36,7 sem
< 37 sem 9 (29%) (31-41 sem)
≥ 2,5 kg 17 (54,8%) média 2,37 kg
Peso ao nascer
< 2,5 kg 14 (45,2%) (1,29 - 3,47 kg)
Diagnóstico pré-natal 10 (32,3%) 89 (98%)
Parto em centro terciário 11 (35,5%) 81 (89%)
Via do parto V 17 (54,8%) V 67 (73%)
C14 (45,2%) C 24 (27%)
Tipo de cirurgia FP 13 (41,9%) FP 72 (80%)
Silo 18 (58,1%) Silo 18 (20%)
Mortes 16 (51,6%) 7 (7,7%)
Sem: semanas, V: vaginal, C: cesariana, FP: fechamento primário

1 - Introdução 5
Os contrastes entre os dois estudos são evidentes. No de Vilela et al.5,
altas taxas de mortalidade estavam associadas com ausência de diagnóstico
pré-natal, prematuridade, baixo peso ao nascer, nascimento fora de um cen-
tro de atendimento especializado e atraso no tratamento cirúrgico inicial. O
desenvolvido na Inglaterra apresenta mortalidade baixa (7,7%) relacionada
com septicemia.
A falta de leitos em unidades de terapia intensiva neonatal, o deficiente
treinamento das equipes paramédicas, a escassez de centros terciários ca-
pazes de lidar de maneira correta com malformações complexas e a quase
inexistência de serviços de transporte de recém-nascidos de risco são pro-
blemas comuns no Terceiro Mundo e têm impacto nos resultados.
Altas taxas de mortalidade (51,6%), como a observada no estudo bra-
sileiro, e dificuldades de manejo também são relatados em outros países po-
bres como a Nigéria7. Esses índices contrastam com os de unidades de te-
rapia intensiva neonatal de países desenvolvidos, nas quais a mortalidade
por gastrosquise varia de 10% a 0%1, 6, 8, 9, 10, 11, 12, 13.
No momento em que pesquisadores de todo o mundo concentram seus
esforços para diminuir a lesão intestinal da gastrosquise e alongar o intestino
nas situações da síndrome de intestino curto, as dificuldades brasileiras ain-
da se situam na área dos cuidados básicos.
Mesmo atribuindo grande parte da morbimortalidade no Brasil à falta de
cuidados de atenção básica à saúde, estudos em todos os campos de aten-
ção devem ser incentivados dentro das condições disponíveis em cada local.
O desenvolvimento de linhas de pesquisa que envolvam um baixo custo na

1 - Introdução 6
sua execução bem como a utilização de modelos experimentais baratos se
fazem necessários.
O presente trabalho visa iniciar uma linha de pesquisa tendo como mo-
delo experimental o embrião de galinha, modelo esse que foi apresentado à
comunidade científica pelo Dr. Dick Tibboel14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26,
do Sophia Childrens Hospital, Erasmus University, Roterdam, Holanda e
continuado por Tanju Aktug14, 27, 28, 15, 29, 30, 31, 32, da Dokuz Eylul University,
Izmir, na Turquia.
1.1 - Definições
No grupo de defeitos congênitos da parede abdominal, a gastrosquise
freqüentemente é confundida com a onfalocele.
A gastrosquise pode ser definida como um defeito de espessura total
da parede abdominal paraumbilical, geralmente pequeno (de poucos centí-
metros), entre o músculo reto abdominal e o cordão umbilical, na maioria das
vezes à direita33 (figuras 1 e 2), podendo raramente ser à esquerda34. Por
esse defeito protuem as vísceras abdominais, mais freqüentemente o intes-
tino delgado, algumas vezes o estômago e a bexiga e raramente o fígado.
Não existe saco cobrindo as alças intestinais que estão imersas, em contato
com o líquido amniótico33. As alças intestinais apresentam-se, em geral, es-
pessadas, edematosas, encurtadas e cobertas com uma grossa membrana
de fibrina e colágeno a que a literatura de língua inglesa denominou de peel
(que significa casca), designação que se consagrou em várias línguas.

1 - Introdução 7
Fig. 1 - Gastrosquise
Fig. 2 - Gastrosquise – detalhe

1 - Introdução 8
As onfaloceles são defeitos da linha média do abdômen na cicatriz
umbilical que apresenta um anel herniário, por onde protui conteúdo abdo-
minal (intestino e freqüentemente o fígado) dentro de um saco formado inter-
namente por peritônio e, na sua camada externa, por âmnio33 (figura 3). A
tabela 2 compara os achados de gastrosquise e onfalocele.
Fig. 3 - Onfalocele – Observar o saco recobrindo, as alças intestinais

1 - Introdução 9
Tabela 2 - Gastrosquise versus Onfalocele
Parâmetro Gastrosquise Onfalocele
Tamanho do defeito Pequeno Pequeno ou grande
Conteúdo Intestino Intestino, fígado e baço
Saco herniário Ausente Presente (íntegro ou roto)
Inflamação Presente Ausente (a menos que o saco esteja

roto)
Cordão umbilical Lateral ao defeito Inserido no centro do saco herniário
Anomalias associadas Raras (a mais freqüente Freqüentes (defeitos cardíacos)

é atresia intestinal)
História familiar Rara Freqüente
(modificado de Molenaar e Tibboel21)
1.2 - Aspectos Históricos
Nem sempre é simples afirmar a quem se deve a primeira descrição de
uma doença ou anomalia congênita e, no caso da gastrosquise, sua seme-
lhança com a onfalocele provocou inicialmente muita confusão no diagnós-
tico.
Segundo Irving2, foi Ambroise Paré, famoso cirurgião que viveu no pe-
ríodo renascentista (1510-1590), quem fez as primeiras descrições da onfa-
locele.
Já Nikolas Bax33, no livro intitulado Cirurgia do Recém-Nascido, atribui
a Calder, em 1733, a primeira descrição de uma gastrosquise. Bax também
refere que o primeiro relato de uma onfalocele teria sido feito em 1557 por
1 - Introdução 10
Lycosthenes, com base na célebre publicação Manual de Patologia e Hi-
giene Antenatal de autoria de J.W. Ballantyne, em Edimburgo, Escócia, em
1904.
Em 1887, Olshausen propôs a mobilização de retalhos de pele, obtidos
a partir de descolamento da pele do abdômen, para cobrir o defeito das
onfaloceles. Esse método foi reintroduzido por Willians em 1930 e retomado
por Gross em 19482, 33, 35. A técnica, inicialmente muito atraente, mostrou-se
falha porque originava uma grande hérnia ventral que, ao contrário do que
se esperava, não diminuía com a idade, mas aumentava cada vez mais a
desproporção entre a hérnia e o tamanho da cavidade abdominal35.
Ahlfeld2, 33 desenvolveu, em 1899, o chamado tratamento conservador
com curativos embebidos em álcool sobre o saco da onfalocele. Esse méto-
do foi reintroduzido 60 anos depois por Grob2, 35, utilizando iodo e mercúrio, o
que tampouco reduziu a mortalidade.
Ballantyne, em 1904, foi quem propôs o termo gastrosquise para de-
signar todos os defeitos somáticos abdominais, com exceção da hérnia de
cordão umbilical fisiológica.
Em 1943, Watkins descreveu com sucesso o primeiro caso de correção
cirúrgica de gastrosquise2.
Dez anos mais tarde, Moore e Stokes redefiniram o termo gastrosqui-
se, restringindo-o aos defeitos ventrais da parede abdominal sem a presença
de saco2. Assim, embora a gastrosquise tenha sido descrita em 1733, so-
mente a partir de 1953 ela foi claramente diferenciada da onfalocele.

1 - Introdução 11
Em 1969, Allen e Wrenn36 utilizaram, para a correção da gastrosquise,
a técnica de fechamento do defeito com retalhos de pele, anteriormente des-
crita para a onfalocele.
Outro marco importante no tratamento dessas anomalias foi a descri-
ção por Schuster37 (1967) do uso do silo de material protético para acomo-
dar as alças intestinais no tratamento estagiado da onfalocele e da gastros-
quise.
Em 1972, Richard Earlam38 publicou nos Anais do Colégio Real do Ci-
rurgiões de Londres, Inglaterra, o primeiro relato da utilização de embriões
de galinha como animal de experimentação para o estudo de anomalias do
trato gastrointestinal, com o artigo intitulado Um estudo sobre a etiologia da
estenose congênita do intestino. A seguir surgiram também as pesquisas do
grupo da Holanda, chefiados por Dick Tibboel e, após, as da Turquia, coor-
denadas por Tanju Aktug, que permanecem até hoje como importantes con-
tribuições na área de investigação da gastrosquise utilizando o mesmo mo-
delo animal.
A Dommergues et al.39 se devem os dois primeiros relatos, datados de
1996, sobre amnioinfusão para o manejo da gastrosquise associada com oli-
godrâmnio, onde foram observados os benefícios da diluição do líquido
amniótico sobre a inflamação intestinal presente ao nascer, e a Aktug et al.29
o relato do primeiro caso de troca de líquido amniótico como forma de tera-
pia intra-útero em fetos humanos com gastrosquise.

1 - Introdução 12
1.3 - Patogênese da Gastrosquise
Na literatura médica, a verdadeira natureza da gastrosquise e da
onfalocele permanece em discussão. Enquanto alguns embriologistas e ci-
rurgiões pediátricos consideram que elas representam entidades distintas
com diferentes aspectos embriológicos e patológicos33, outros pesquisado-
res julgam corresponder a gastrosquise à ruptura intra-útero do saco de uma
pequena onfalocele, representando ambas, desta forma, anomalias simila-
res40, 41
Gross e Blodgett, citados por Kluth e Lambrecht42, descreveram a onfa-
locele como um defeito originado por uma interrupção no desenvolvimento
da cavidade corporal que parava de se expandir entre a 8a e a 12a semanas
de gestação; como resultado, o intestino não conseguiria retornar para a ca-
vidade ao redor da 10a semana e permaneceria em uma posição anormal.
Porém, sendo assim, como explicar a presença de fígado, estômago e baço
no saco herniário das onfaloceles gigantes, já que tais estruturas não estão
presentes na hérnia fisiológica de cordão?
Shaw41 prefere definir a onfalocele como um verdadeiro defeito de for-
mação da parede do abdômen (não somente no anel umbilical) para, desta
forma, explicar a presença do fígado no saco e a associação de onfalocele
com defeitos severos da parede abdominal, como a extrofia de cloaca.
Para explicar a origem da gastrosquise existem hoje, na literatura mé-
dica, quatro teorias:

1 - Introdução 13
1. Evento teratogênico: Em 1963, Duhamel43 sugeriu que um evento
teratogênico precoce deveria estar presente e, assim, evitaria a diferencia-
ção do mesênquima que forma as bordas da somatopleura, sendo a falha
nesse suporte a origem do defeito abdominal adjacente à cicatriz umbilical.
Outros pesquisadores concordam com a opinião de Duhamel44, 45, porém a
falha nessa teoria está na ausência de defeito na musculatura dos retos
abdominais1. Gray e Skandalakis, citados por Kluth e Lambrecht42, assim se
manifestaram na primeira edição de seu livro Embriologia para Cirurgiões
(1972): o defeito ocorre pela falha na migração da musculatura a partir dos
miótomos dorsais que invadem a esplancnopleura da parede abdominal em-
brionária. Já na segunda edição (1994) os autores admitem não haver uma
perfeita explicação embriológica para a gastrosquise.
2. Ruptura de uma pequena onfalocele: Shaw41 acredita ser a gas-
trosquise o resultado final da ruptura intra-útero das membranas que reco-
brem uma hérnia de cordão umbilical (nome dado na época às pequenas
onfaloceles). O distúrbio poderia ocorrer a partir da involução anormal (em
tempo ou extensão) da veia umbilical direita, em cujo local ficaria uma zona
de infarto com subseqüente defeito. Shaw41 faz uma crítica aos artigos e de-
finições que apresentam a gastrosquise como um defeito lateral a um cordão
umbilical “normalmente” inserido. Segundo ele, várias fotos nos próprios arti-
gos mostram que o cordão não está “normalmente” formado. A sugestão de
que a gastrosquise é gerada pela ruptura de uma membrana que cobre uma
hérnia do cordão umbilical é reforçada pela presença muito freqüente de má-
-rotação intestinal associada, bem como pelo relato do caso de um feto com
1 - Introdução 14
34 semanas de gestação, apresentando gastrosquise, que, em uma ultra-so-
nografia realizada sete semanas antes, apresentava apenas um hérnia um-
bilical, facilmente demonstrada. Esse fato chamou tanto a atenção da comu-
nidade científica que os autores denominaram o artigo40 publicado no Journal
of Pediatric Surgery, em 1985, de O elo perdido da gastrosquise. Glick et
al.40 entendem que existem dois tipos distintos de onfaloceles, as relaciona-
das com síndromes, nas quais a onfalocele em geral é gigante, as anomalias
associadas são freqüentes e o prognóstico é ruim, e as onfaloceles não-rela-
cionadas com síndromes, nas quais o tamanho do defeito é variável, as ano-
malias associadas são raras e o prognóstico é bom, sugerindo que a gas-
trosquise poderia ser ruptura intra-útero de onfaloceles não relacionadas
com síndromes. Interessante também é a constatação de que, em modelo
experimental de embriões de galinha, como o aqui apresentado, a gastros-
quise é produzida com mais fidedignidade de aspectos histopatológicos
quando o defeito é criado no coto umbilical e não na parede abdominal do
embrião lateral ao cordão15.
3. Anomalias da veia umbilical direita: Teorias mais recentes têm
centrado foco na hipótese de uma anomalia vascular. Em humanos, a veia
umbilical direita involui ao redor da 5a semana de gestação. Baseado na
observação de uma série de embriões, DeVries46 postulou que a gastrosqui-
se seria originada a partir da prematura atrofia ou da prolongada persistência
da veia umbilical direita (e raramente a esquerda), interferindo no desenvol-
vimento da parede abdominal e na junção com o coto umbilical.

1 - Introdução 15
4. Defeito nas artérias onfalomesentéricas: Alternativamente, tem se
postulado que um acidente vascular envolvendo as artérias onfalomesen-
téricas seria a causa da gastrosquise47, 48

. As artérias onfalomesentétricas
são ramos embrionários da aorta, pares, a artéria esquerda involui e a direita
persiste como a artéria mesentérica superior49. A disrupção intra-uterina da
artéria onfalomesentérica direita poderia comprometer a irrigação da parede
abdominal com necrose da base do cordão umbilical e herniação do intes-
tino. O interessante dessa teoria é que ela poderia explicar a associação de
gastrosquise com atresia intestinal, relativamente freqüente, já que esta úl-
tima tem uma gênese vascular comprovada. Seriam as atresias uma lesão
secundária ao comprometimento vascular e não ao estrangulamento do in-
testino no anel herniário como já foi postulado41. Um reforço à teoria de me-
canismo vascular é a associação de consumo de álcool, fumo e compostos
com substâncias vasoativas (como os descongestionantes nasais e cocaína)
com fetos com gastrosquise1, 50, 51

. O álcool é conhecido por atravessar a
barreira placentária e afetar a circulação umbilical; o cigarro também atua
causando vasoconstricção e vasoespasmo placentário51.
Não existe consenso sobre o momento da gestação em que ocorre a
gastrosquise. Estudos de ultra-sonografia já evidenciaram fetos de 12 e 14
semanas com o defeito8, 52, 53, mas, em abortos de 8 semanas, já foi encon-
trada a anomalia18, 19, 20. Alguns autores identificaram gastrosquise no último
trimestre de gestação quando ultra-sonografias prévias eram normais1.

1 - Introdução 16
1.4 - Epidemiologia
Estima-se a prevalência global da gastrosquise em 1,36 para cada
10.000 nascimentos (variando de 0,4 a 3,01), número que passa a 1,96 para
10.000 quando se incluem os abortamentos e cai para 1,06 quando somente
nativivos são considerados1. Um aparente incremento na prevalência vem
sendo observado nas últimas duas décadas e pode se dever parcialmente
ao aumento no número de diagnósticos e a uma maior acurácia na diferen-
ciação com as onfaloceles, mas, em contrapartida, a prevalência mantida em
outras regiões do globo fala a favor de um aumento real. Dados do Estudo
Colaborativo Latino-Americano de Malformações Congênitas – ECLAMC54
informam que a prevalência da gastrosquise na América Latina é de 1,24 pa-
ra cada 14.000 nascimentos vivos, já a onfalocele situa-se em 1 para cada
4.000 nascimentos vivos. Em 16 maternidades de Porto Alegre que partici-
pam do ECLAMC, no ano de 2000 houve 23.518 nascimentos e 9 casos re-
gistrados de gastrosquise, com uma taxa de 3,8 para cada 10.000 nasci-
mentos55. No Hospital de Clínicas de Porto Alegre, a prevalência de gastros-
quise entre nascidos vivos é da ordem de 4,13 para cada 10.000. Esta ele-
vada taxa deve-se ao fato de ser um centro de tratamento terciário que rece-
be casos com diagnóstico pré-natal encaminhados de todo o estado do Rio
Grande do Sul55.
Muitas possibilidades têm sido levantadas como fatores de risco para
gastrosquise. A tabela 3 resume os principais.

1 - Introdução 17
Tabela 3 - Fatores de risco para gastrosquise
Fator em estudo Evidência
Fatores Obstétricos
Mães jovens50, 51 Forte
Doença materna (gripe)51 Fraca
Baixo índice de massa corporal56 Fraca
Agentes Químicos
Fumo1 Fraca
Álcool51 Fraca
Salicilatos50, 51 Fraca
Descongestionantes nasais50, 51 Fraca
Ibuprofeno50, 51 Fraca
Drogas (cocaína e Canabis)1 Fraca
Fatores Socioeconômicos
Classe social baixa56 Fraca
Fatores Ambientais
Moradia próxima de depósitos de lixo57 Fraca
Nutrientes da dieta1 Fraca

1
Modificado de Curry et al.
Ocorrência familiar de gastrosquise tem sido descrita por vários
autores58. No estudo populacional da Califórnia56, 6 (4,7%) de 127 famílias
tiveram mais de um filho acometido, e o risco de recorrência é calculado em
3,5%.
1 - Introdução 18
1.5 - Diagnóstico Pré-Natal dos Defeitos da Parede Abdominal
O desenvolvimento das técnicas de diagnóstico pré-natal tem sido cada
vez mais rápido nas últimas duas décadas59. Um grande número de anoma-
lias atualmente pode ser diagnosticado no período gestacional.
Decisões importantes são tomadas a partir desses diagnósticos, razão
pela qual alguns autores defendem a interrupção da gravidez quando do
diagnóstico de uma anomalia cromossômica, de uma onfalocele gigante ou
de alterações sabidamente incompatíveis com a vida59, 60.
O diagnóstico diferencial, através da ultra-sonografia, entre onfalocele
e gastrosquise pode ser difícil no primeiro trimestre gestacional52. Porém a
disponibilidade cada vez maior de sondas de ecografia transvaginal de alta
resolução (5 e 7,5 MHZ) tem possibilitado um maior detalhamento das estru-
turas embriológicas no início da gravidez, tanto assim que Bahlmann et al.52,
estudando 58 fetos com diagnóstico de defeito da parede abdominal, obtive-
ram 100% de diagnóstico diferencial entre onfalocele e gastrosquise por ul-
tra-sonografia.
Elevação nos níveis de alfafetoproteína no soro materno tem sido asso-
ciada com defeitos do fechamento do tubo neural e da parede abdominal,
assim como níveis baixos estão associados com defeitos cromossômicos.
Bahlmann et al.52 encontraram alta sensibilidade para detecção de gastros-
quise utilizando a dosagem de alfafetoproteína no soro materno. Na sua sé-
rie, os valores de alfafetoproteína foram 7 vezes superiores aos da média
para casos de gastrosquise e 4,1 vezes aos de casos de onfalocele. Acredi-

1 - Introdução 19
ta-se que a diferença entre o nível de detecção de onfalocele e gastrosquise
se deva à presença do saco que cobre as onfaloceles. Uma vez que a alfa-
fetoproteína é liberada pelo intestino na troca de proteínas que realiza com o
líquido amniótico, o saco das onfaloceles diminuiria essa troca e, conse-
qüentemente, sua reabsorção pelo sangue materno52, 61. Além das medidas
no soro materno, alfafetoproteína e acetilcolinesterase podem ser dosadas
no líquido amniótico62, 63.
1.6 - Etiologia da Lesão Intestinal na Gastrosquise
A gastrosquise é muitas vezes complicada pela lesão do intestino del-
gado herniado, resultando em distúrbios da motilidade, ocasionalmente ne-
crose intestinal e atresias61,64, 65, 66, 67, o que se torna importante na medida
em que o prognóstico desses pacientes está relacionado com as condições
do intestino ao nascimento61, 68, 69, 70.
A obtenção de tecido humano para estudo da lesão intestinal na gas-
trosquise é difícil. Na maioria dos casos, não se realizam ressecções intes-
tinais que possam produzir material para análise histológica e, quando isso
ocorre, geralmente trata-se de associações com atresia ou com lesões que
tornaram parte do intestino inviável.
Uma valiosa fonte de informação foram as pesquisas de Tibboel et al.

18, 19, 20
que apresentaram em alguns trabalhos uma análise detalhada de fe-
tos com gastrosquise originados de abortos. Estudando esses fetos, os auto-
res puderam concluir que o defeito que origina uma gastrosquise deve ocor-
1 - Introdução 20
rer precocemente na formação do embrião, ao redor da 6a a 8a semanas.
Observaram ainda que fetos com menos de 30 semanas de idade gestacio-
nal não apresentavam sinais de lesão intestinal, como fibrose ou edema, ca-
racterísticas da gastrosquise, tendo tais alterações sido verificadas somente
em fetos com mais de 33 semanas. Essas observações suportaram a hipó-
tese levantada por Tibboel et al. de que as alterações do intestino estavam
relacionadas ao início do funcionamento renal pleno e ao aumento da urina
fetal no líquido amniótico. A idéia foi compartilhada com alguns outros auto-
res, como Lopez de Torre et al.71, 72, que demonstraram ser a gastrosquise
uma espécie de diálise peritoneal intra-útero na qual trocas entre o líquido
amniótico e o plasma se efetuam através do peritônio, levando a uma certa
desidratação hipercalêmica. Essas mesmas trocas seriam a gênese da hi-
poalbuminemia, da hipogamaglobulinemia e da diminuição dos níveis séricos
de transferrina nos recém-nascidos com gastrosquise73. A hipótese de que a
urina fetal seria o agente causal do dano ao intestino foi posteriormente
questionada por estudos mais aprofundados28, 31, 74 como veremos a seguir.
Albert et al.75, em em 1993, criaram um modelo experimental para con-
firmar o efeito do líquido amniótico sobre as alças intestinais. Utilizando coe-
lhas prenhas, criaram, cirurgicamente, um feto com a metade posterior do
corpo para fora do útero (feto extra-aminiótico). A conclusão do estudo foi
que o intestino da gastrosquise na ausência de líquido amniótico não desen-
volvia as alterações de espessamento e inflamação que se observam quan-
do em contato com o líquido.

1 - Introdução 21
Com a intenção de provar que os dejetos urinários estavam envolvidos,
Klück et al.16 desenvolveram um experimento com embriões de galinha,
aproveitando a característica desse animal de apresentar um saco alantóide
isolado do líquido amniótico onde são depositados seus dejetos. Até o 5o dia
embrionário, é possível criar uma gastrosquise no embrião de galinha sem
misturar o líquido amniótico com os dejetos do alantóide, criando assim um
modelo de gastrosquise no qual o intestino está somente embebido em líqui-
do amniótico, enquanto, a partir do 7o dia de desenvolvimento embrionário, a
criação de uma gastrosquise só é possível através da abertura do alantóide
e mistura de líquidos, criando um líquido amniótico que se assemelha ao hu-
mano. Com esse modelo, os autores mostraram que os achados histológicos
de espessamento intestinal só estavam presentes no grupo em que se mis-
turava o líquido. Acreditavam ter confirmado, assim, a hipótese de que a uri-
na estaria envolvida na lesão intestinal.
Em 1998, Aktug et al.28 realizaram um estudo semelhante utilizando o
mesmo animal. Através da troca de líquido amniótico e do estudo bioquímico
do líquido trocado, foi possível demonstrar que com esse procedimento se
promovia uma diminuição de dejetos intestinais no líquido (ácidos biliares e
bilirrubina), mas não a diminuição de dejetos urinários (uréia e creatinina),
provavelmente pela sua produção relativamente rápida. Nos embriões em
que se realizou a troca de líquido amniótico (diminuindo os dejetos intesti-
nais) a lesão intestinal foi muito menor. Esse fato, associado às comprova-
ções de que fetos, mesmo fora de situações de estresse, evacuam “fisiologi-
camente” pequenas quantidades de mecônio no líquido amniótico76, 77, 78

,
1 - Introdução 22
consolidou a idéia de que seriam os dejetos intestinais e não os urinários os
promotores do espessamento e da inflamação intestinal.
Olgumer et al.31, em outro importante estudo do grupo da Turquia, reali-
zaram um experimento no qual, utilizando embriões de galinha no 5o dia de
desenvolvimento embrionário, criaram gastrosquise sem abrir o saco alantói-
de, ou seja, mantendo o líquido amniótico livre de dejetos próprios do em-
brião e instilaram urina e mecônio de recém-nascidos humanos no líquido
amniótico dos embriões. Ao contrário dos embriões que receberam urina de
recém-nascidos, os que receberam mecônio apresentaram espessamento,
inflamação e depósitos de fibrina e colágeno na serosa, alterações descritas
na gastrosquise humanas. Com esse trabalho os autores reforçaram a idéia
de que são os dejetos intestinais os causadores da lesão do intestino da
gastrosquise.
Em outro estudo realizado no Reino Unido, Morrison et al.79 analisaram
amostras de líquido amniótico no final da gestação de 10 mães que apresen-
tavam fetos com gastrosquise, comparando-as com líquido amniótico de
gestações normais. O interesse desse estudo foi avaliar a presença de me-
diadores de inflamação. A análise microscópica do líquido de mães de bebês
com gastrosquise mostrou a presença de um exsudato inflamatório compos-
to predominantemente por polimorfonucleares. Essas células inflamatórias
não estavam presentes no líquido amniótico dos controles. Da mesma for-
ma, observou-se que havia aumento do antígeno celular CD15 e, nessas cé-
lulas, aumento dos níveis de CD11b, quando comparados com os controles.
A elevação de CD11b na população de células CD15 revela que as células

1 - Introdução 23
derivadas do líquido amniótico estavam em pleno estado ativado. Mas, a
partir desses achados, como identificar quem produziu as células inflamató-
rias, se a mãe ou o feto? Para responder a essa pergunta os pesquisadores
tiparam as células inflamatórias nas gestações com fetos masculinos, com-
provando que elas eram provenientes do feto e não da mãe.
Guo et al.80 apresentaram um estudo experimental de gastrosquise em
fetos de coelho, utilizando dexametasona no líquido amniótico, que mostrou
menor lesão histológica da parede intestinal e melhor atividade de enzimas
digestivas da mucosa, sugerindo o efeito protetor do corticóide como antiin-
flamatório.
Outro campo de estudo é a influência do óxido nítrico como gênese do
dano intestinal na gastrosquise. O óxido nítrico, um poderoso neurotransmis-
sor vital para as funções normais do intestino, é produzido pela enzima óxido
nítrico sintase. Anormalidades nessa enzima têm sido apontadas como cau-
sa de distúrbios da motilidade intestinal e de malabsorção81. Dois estudos fo-
ram realizados para tentar comprovar a relação entre o óxido nítrico e a le-
são do intestino da gastrosquise. O primeiro, em 1996, realizado por Bealer
et al.81, no Centro de Tratamento Fetal da Universidade da Califórnia, em
São Francisco, utilizou o modelo experimental em coelhos para medir a ativi-
dade da enzima óxido nítrico sintase no intestino. Com esse experimento, os
autores conseguiram mostrar que existe um aumento na atividade total da
enzima no intestino eviscerado.
Em 1999, Dilsiz et al.30, utilizando o modelo experimental de embriões
de galinha, testaram novamente a hipótese da influência do óxido nítrico no

1 - Introdução 24
processo de inflamação da gastrosquise, desta vez utilizando um inibidor da
óxido nítrico sintase, o chamado NG-nitro-L-arginina metil ester (L-NAME).
Os investigadores colocaram L-NAME na cavidade âmnio-alantóide de em-
briões de galinha submetidos ao procedimento para criar uma gastrosquise.
Comparando com o grupo controle que não utilizava o bloqueador da enzima
óxido nítrico sintase, o grupo com o L-NAME mostrou menor lesão intestinal.
Entretanto, nem todos os pesquisadores estão certos de que o contato
com o líquido amniótico seja a origem do problema. Deans et al.82 relataram
cinco casos de gastrosquise acompanhados com ultra-sonografias pré-na-
tais por pelo menos 18 semanas, nos quais os recém-nascidos não apresen-
tavam sinais de espessamento das alças ou peel, e concluíram que, apesar
da prolongada exposição das alças intestinais, esses casos seriam uma im-
portante evidência de que não há relação entre o tempo de exposição ao lí-
quido amniótico e a lesão intestinal. Da mesma forma, Steinbrecher, Hanna
e Burge83 publicaram, em 1996, o relato do caso de um recém-nascido que
apresentava uma onfalocele e o intestino no interior do saco mostrava-se se-
melhante ao intestino da gastrosquise, espessado, endurecido e inflamado.
Os autores identificaram pelo menos uma zona de estenose visível e atribuí-
ram os achados ao estreito colo da onfalocele por onde protuíam as alças.
Assim, afirmavam ser a constricção do anel o principal efeito sobre as alças
intestinais, já que o intestino não havia sido exposto ao líquido amniótico em
virtude do saco da onfalocele. Os achados histológicos de congestão, infla-
mação e fibrose da serosa, atrofia da mucosa e edema e fibrose da submu-
cosa realmente são os encontrados na gastrosquise, mas não há relato da

1 - Introdução 25
formação do peel nesse caso. Parece haver uma relação entre o contato do
líquido amniótico e o depósito de fibrina e colágeno na serosa, como de-
monstraram Amoury et al.84 e Langer et al.61.
Na tentativa de identificar quais fatores estavam relacionados com a le-
são intestinal, Langer et al.61 desenvolveram um estudo utilizando um mode-
lo de fetos de ovelha. Os autores submeteram o intestino fetal à constricção
por ligadura e ao contato com o líquido amniótico, isoladamente e em asso-
ciação. O surgimento do peel foi observado somente no intestino exposto ao
líquido amniótico, com ou sem a constricção do mesentério. Dilatação ve-
nosa e de vasos linfáticos, espessamento da camada muscular e alterações
da mucosa foram observados em animais onde se utilizou a fita para criar a
constricção do mesentério, independentemente de estar ou não exposta ao
líquido amniótico. E, tanto no modelo de exposição ao líquido amniótico
quanto no modelo de constricção do mesentério, surgiram distúrbios da moti-
lidade intestinal. Com esse estudo, os autores conseguiram isolar os dois fa-
tores, ou seja, a camada fibrosa, peel, estaria relacionada à exposição do in-
testino ao líquido amniótico, as lesões estruturais da parede intestinal esta-
riam ligadas à obstrução crônica ocasionada pela constricção do intestino na
parede abdominal. O distúrbio da motilidade intestinal estaria relacionado a
ambas.
Santos85, através da análise com técnicas histopatológicas especiais,
correlacionou, em fetos de coelhos, a hipomotilidade intestinal com altera-
ções na maturação dos neurônios dos plexos mioentéricos da gastrosquise.

1 - Introdução 26
Albert et al.86, em 2001, publicaram um experimento no qual submetiam
fetos de coelho a dois tamanhos diferentes de defeito de parede para criar
uma gastrosquise (respectivamente 1,5 e 3 vezes o diâmetro do intestino), e
os compararam com um grupo controle sem manipulação. O objetivo era
avaliar se o anel herniário por onde protuem as alças da gastrosquise teria
influência nas modificações observadas no intestino. Não houve diferenças
entres os grupos e, desta forma, não foi possível estabelecer uma relação
entre a constricção causada pelo anel herniário e as lesões presentes na
gastrosquise.
1.7 - Modelos Experimentais de Gastroquise
Gastrosquise pode ocorrer espontaneamente em ratos, coelhos da ra-
ça nova zelândia, cães da raça beagle e gatos1. E é passível de ser induzida
em laboratório por uma variedade de agentes como escopolamina e trianci-
nolona em galinhas, antagonistas do estrogênio em cães, 6-mercaptopurina
e óxido nitroso em hamster, metilmercúrio em patos, aurotiomalato, concava-
lina e tioglicose ouro em coelhos, benzopirenos, pirabital, hidroxiuréia, raios
X, nitrosuréia, cádmio, cisplatina, metilsalicilatos e hipertermia materna em
ratos1, 87
. Apesar desse grande número de possibilidades, modelos terato-
gênicos de gastrosquise têm o inconveniente de apresentar baixo índice de
sucesso, além de poder gerar anomalias associadas que se constituiriam em
fonte de confusão na avaliação de resultados. Existem vários modelos cirúr-
gicos, em coelhos, ovelhas, ratos e galinhas88.

1 - Introdução 27
1.7.1 - Modelos Experimentais em Coelho
A primeira vez que coelhos foram utilizados para produzir gastrosquise
foi em 1972. O trabalho, apresentado por Sherman et al.89 na reunião anual
da Academia Americana de Pediatria, foi publicado no ano seguinte. Os
autores realizaram um procedimento cirúrgico no qual criavam gastrosquise
em coelhos da raça nova zelândia. Das 12 ninhadas submetidas ao experi-
mento foram obtidos 37 (88%) de 42 fetos. Os embriões que tiveram o intes-
tino exposto ao líquido amniótico apresentaram um comprimento intestinal
menor que os dos outros grupos e maiores alterações histopatológicas, co-
mo serosite e enterite severas. Alguns problemas foram observados, como a
contaminação freqüente do líquido amniótico por Pasturella multocida e o fa-
to de alguns fetos, nos quais se criou gastrosquise, ao final do procedimento
apresentarem também o fígado para fora do abdômen, evento que não é co-
mum na gastrosquise.
Aoki, Ohshio e Komi90, pesquisadores japoneses, repetindo o procedi-
mento para criar gastrosquise em fetos de coelho muito semelhante ao des-
crito por Shermann et al.89, conseguiram demonstrar os achados da gastros-
quise, mas com altos índices de mortalidade que variaram de 15% a 56%.
Phillips et al.91, em 1991, apresentaram uma proposta de modificação
dos modelos experimentais de Shermann et al.89 e de Aoki, Ohshio e Komi90,
com o intuito de aumentar a sobrevida dos fetos. Para tanto utilizaram os
mesmos princípios cirúrgicos básicos, mas agregaram um manuseio mais
delicado dos fetos (usando eletrocautério para diminuir sangramentos), ado-

1 - Introdução 28
taram o uso profilático de antibióticos e trocaram a anestesia com barbitú-
ricos pelo emprego de halotano com oxigênio, com o que conseguiram um
índice de sobrevida de 82%.
Kubaski92, em 1994, repetiu o experimento proposto por Philips et al.91,
em 15 fetos de coelho submetidos à cirurgia para criar uma gastrosquise,
tendo obtido sucesso em 9 (60%). Os fetos com gastrosquise apresentavam
um peso ao nascer menor que os do grupo controle, e alterações histológi-
cas como enterite e serosite foram observadas, porém não foi possível esta-
belecer diferença entre o grupo gastrosquise e o grupo controle quanto a
essas alterações.
Estabelecido o modelo, a literatura médica continua até o momento re-
cebendo importantes contribuições de pesquisadores utilizando este animal
em seus experimentos75, 80,81,85, 86.
1.7.2 - Modelos Experimentais em Ovelha
Haller et al.93, da Universidade Johns Hopkin, Baltimore, Estados Uni-
dos, aproveitaram sua experiência prévia com cirurgia experimental em ove-
lhas para produzir intra-útero a coartação da aorta e, em 1974, publicaram o
primeiro relato do modelo experimental de gastrosquise em ovelhas. Foram
operados 31 fetos, com uma sobrevida de 19 (61%). O interessante desse
modelo foi o prolongado período gestacional (145 dias), o que permitiu expor
o intestino da gastrosquise durante 10 a 30 dias ao líquido amniótico. Nova-
mente as alterações mais marcantes, como edema, serosite e formação de

1 - Introdução 29
peel, foram notadas no grupo com maior tempo de exposição. Um achado
interessante desse estudo foram alterações nas células ganglionares do in-
testino, consistindo em atrofia e diminuição da quantidade de acetilesterase
e acetilcolinesterase. Os autores relacionaram a essas alterações os distúr-
bios da peristalse típicos das crianças operadas por gastrosquise, porém a
maioria dos trabalhos desenvolvidos nos anos seguintes não conseguiram
reproduzir esse achado18, 19, 20, 92.
O modelo descrito por Haller et al.93 foi adotado pela equipe de pes-
quisadores do Programa de Tratamento Fetal da Universidade da Califórnia,
São Francisco, Estados Unidos, chefiado pelo Dr. Michael Harrison. Esse
grupo, um dos mais expressivos no estudo de Medicina Fetal na atualidade,
publicou três importantes artigos, compondo uma série denominada Etiologia
da Lesão Intestinal na Gastrosquise61, 68, 94.
1.7.3 - Modelos Experimentais de Gastrosquise em Rato
Correia-Pinto et al.95 apresentaram, em 2001, um novo modelo experi-
mental para gastrosquise, desta vez em ratos. Utilizando ratos da raça
Wistar, criaram a gastrosquise através de cirurgia fetal, por abertura do útero
e da parede abdominal dos fetos com exposição do intestino. Na análise dos
resultados, os autores demonstraram fetos com gastrosquise com peso cor-
poral, peso do intestino e comprimento do intestino menores que os dos con-
troles. Na avaliação histológica, o intestino exposto apresentava-se edema-
toso, com achatamento das vilosidades, dilatação venosa e linfática, mas

1 - Introdução 30
sem infiltrado inflamatório. Os autores acreditam serem as principais van-
tagens do modelo o curto período gestacional, o extenso conhecimento a
respeito da anatomia, embriologia e histologia dos ratos, a necessidade de
pouco material cirúrgico, a facilidade de criação do animal, a grande quanti-
dade de fetos por ninhada e, principalmente, a grande disponibilidade de
marcadores e reagentes para análise de DNA em ratos, capaz de permitir a
utilização do modelo em pesquisas a nível molecular.
Em outro estudo, Ferreira et al.74 utilizaram ratos adultos para mime-
tizar, através de injeção intraperitoneal, os efeitos da urina e do mecônio nas
alças intestinais. Conseguiram desta forma demonstrar a importância dos
dejetos intestinais na lesão da gastrosquise e reproduzir graus variados de
lesão.
1.7.4 - Modelos Experimentais em Galinha
1.7.4.1 A Incubação de Embriões de Galinha
Para a realização desta pesquisa, fez-se necessário conhecer melhor
os princípios e práticas de incubação de ovos de galinha, o que foi obtido
através do estudo dos manuais de criação de aves96, 97, 98, 99.
Para se obterem bons resultados, o ideal é que os ovos tenham a cas-
ca íntegra e limpa e sejam normais em todos os seus aspectos. Os ovos de
galinha pesam em média 60 g96, 98. Algumas características individuais dos
ovos podem influenciar na sua capacidade de eclodir; são elas: o tamanho, a
qualidade do seu interior, a qualidade da casca e a idade. Para o desenvolvi-

1 - Introdução 31
mento da pesquisa os ovos foram selecionados de acordo com esses cri-
térios. Morris et al.98, em 1968, estudaram o percentual de fertilidade e eclo-
são de acordo com o peso do ovo. Ovos de 44 g tiveram 81% de fertilidade e
51% de eclosão, já os de 58 g tiveram 91% de fertilidade e 74,5% de eclo-
são. O peso médio do pinto ao nascer e o percentual sobre o peso do ovo
também foram estudados, sendo a média e o percentual, respectivamente,
de 34 g e 66,8% do peso do ovo.
Ao colocar os ovos na incubadora, procura-se manter a extremidade
mais larga para cima, para que o embrião não se desenvolva com a cabeça
voltada para a cavidade mais estreita, desprovida da câmara de ar97. A po-
sição do ovo é importante na medida em que, se a câmara de ar não estiver
presente na extremidade em que está a cabeça do embrião, este poderá
morrer de asfixia quando iniciar a respiração pulmonar, ao redor do 20o dia
de incubação. Da mesma forma, o processo de perfuração da casca não se
completa na extremidade mais estreita do ovo, por não haver espaço sufi-
ciente para o embrião mover a cabeça em várias direções96.
O controle da temperatura é um item importante no desenvolvimento
do experimento. As incubadoras automáticas com ventilação forçada ou com
ventiladores de circulação de ar devem manter uma temperatura ao redor
dos 37,5º C; nas incubadoras de ar parado, naquelas em que nenhum venti-
lador ou nenhuma corrente de ar se move dentro delas, a temperatura deve
ser mais elevada, ao redor de 38 a 39,5º C. Flutuações na temperatura alte-
ram seriamente o processo de crescimento e desenvolvimento do embrião.
Baixas temperaturas atrasam a eclosão, enquanto temperaturas de incuba-

1 - Introdução 32
ção elevadas fazem o pinto eclodir antes dos 21 dias. Apesar de o embrião
ser relativamente resistente a períodos curtos de exposição a baixas tempe-
raturas, ele é muito sensível a altas temperaturas96.
A umidade contida no ar da incubadora é muito importante para o de-
senvolvimento normal e conseqüente eclosão do ovo. A manutenção de uma
umidade relativa de aproximadamente 65% previne, sob condições normais,
uma perda excessiva de umidade dos ovos99. Em incubadoras pequenas,
onde a viragem manual e individual dos ovos é realizada com a abertura da
máquina, a cada vez que a máquina é aberta ocorre uma perda muito rápida
de umidade. Apesar de a água estar presente na incubadora, a recuperação
da umidade envolve considerável retirada de água do interior dos ovos. Incu-
badoras pequenas podem necessitar de um borrifamento de água morna a
cada abertura para viragem. Nesta pesquisa foi mantida a umidade relativa
ao redor de 80%, graças à colocação de água quente no reservatório espe-
cífico da incubadora96.
Com respeito à viragem, ela têm por finalidade prevenir a aderência do
embrião na casca. Os manuais de criação aconselham virar os ovos pelo
menos 5 vezes ao dia. As incubadoras grandes mantêm os ovos em uma
posição de 45º e procedem à viragem automática e regular dos ovos. Esse
procedimento deve ser realizado durante todo o período de incubação e in-
terrompido 3 dias antes da eclosão96, 99.
As incubadoras devem fornecer uma troca de ar contínua para remover
o dióxido de carbono produzido pela respiração do embrião e fornecer oxigê-

1 - Introdução 33
nio. Outro aspecto importante é a manutenção da limpeza e desinfecção da
incubadora a fim de evitar contaminações no procedimento.
1.7.4.2 - A Embriologia da Ave
As espécies aviárias com sua reprodução sexuada peculiar, na qual o
feto se desenvolve fora da mãe, oferecem um sistema excelente para estudo
da embriologia. Grande parte do processo de desenvolvimento que ocorre
no embrião aviário pode ser diretamente relacionado com o processo de de-
senvolvimento comum a muitos outros animais, mas que não pode ser tão
facilmente estudado como no embrião de aves.
Nas aves, a primeira divisão celular começa aproximadamente 3 horas
após a fertilização, quando a gema chega ao istmo do oviduto96, o que cor-
responderia em humanos ao período de 24 horas após a fecundação49. A
primeira diferenciação da camada celular ocorre no útero imediatamente an-
tes de o ovo ser posto; esse processo é denominado de gastrulação96, 100

.
Após a postura do ovo fértil, a divisão celular e a diferenciação continuam
sempre que o ovo for mantido em uma temperatura acima de 27º C, de pre-
ferência ao redor de 37,5º C96.
Durante o primeiro dia de incubação desenvolve-se todo o ectoderma
primitivo, ou seja, o canal neural100. O tecido do trato digestivo anterior esta-
rá diferenciado em 24 horas de incubação, assim como as células sexuais
primárias96, 100, 101.

1 - Introdução 34
Durante o segundo dia de incubação a partir da divisão das células pri-
márias, surgem o cérebro, os olhos e os ouvidos, e são formados os extratos
da cauda e do sistema vascular. Esse estágio corresponde no homem a
aproximadamente 3 a 4 semanas de desenvolvimento embriônico49. No se-
gundo dia de incubação também inicia-se a formação do coração do embrião
e durante o 4o ou 5o dia o coração estará completamente desenvolvido. Du-
rante o 3o dia de incubação formam-se os membros e o esôfago. No 4o dia o
ovo embrionado de galinha equivale a 2 meses de gestação humana49. No
5o dia pode-se observar a formação dos pulmões, da traquéia, do esôfago,
do fígado, do pró-ventrículo, da moela, do pâncreas e dos órgãos sexuais100,

101
. Durante esse dia o embrião de galinha tem uma aparência semelhante à
dos embriões de muitos outros animais em estágio de desenvolvimento equi-
valente. No 6o dia de incubação o embrião torna-se visivelmente diferen-
ciado do de outros animais. As divisões estruturais iniciam a formar as asas
e as pernas. A alça duodenal forma-se e o intestino delgado protui pelo anel
para dentro do cordão umbilical. Os primeiros movimentos voluntários apare-
cem no 6o dia. No 7o dia o bico típico das aves surge, o intestino começa a
ganhar volume e prolonga-se ocupando o interior do cordão umbilical, em
seguida o abdômen torna-se mais proeminente. No 8o dia começam a surgir
os folículos das penas sobre a pele e no 9o o contorno é típico de uma ave.
No 12o dia tem início o surgimento da penugem, e as penas são visíveis no
13o dia. Até o 14o dia o embrião permanece perpendicular ao eixo longitudi-
nal do ovo, mas, a partir desse estágio, torna-se muito longo para essa po-
sição e deve girar paralelamente para melhor acomodar-se. No 15o dia o

1 - Introdução 35
abdômen começa a envolver o intestino delgado que habitava o cordão um-
bilical e no 16o dia as escamas e as unhas estão mais duras e a albumina
está toda consumida. Durante o 17o dia o embrião inicia sua preparação final
para eclodir. O líquido amniótico é absorvido, apesar de o âmnio ainda estar
aderido ao embrião emplumado e úmido, e o intestino, que estava herniado
no cordão umbilical, retornará para o abdômen. O embrião ocupa nesse mo-
mento quase todo o espaço no ovo. No 18o dia o conteúdo restante da gema
começa a entrar para o abdômen do embrião através da retração do saco da
gema pela abertura umbilical essa retração perdura até o 19o dia, e a aber-
tura umbilical não estará completamente fechada antes da eclosão. Durante
o 19o dia o bico apresenta um capuz pontiagudo chamado dente do ovo, que
perfura a câmara de ar, tendo início a respiração pulmonar. No 20o dia co-
meçam a diminuir a respiração e a circulação pela membrana corioalantóide,
as quais finalmente, cessam. É essencial que esta membrana esteja avas-
cular no momento da eclosão para que não ocorram hemorragias. No 21o
dia ocorre a eclosão96, 101.
No estudo da interação entre o líquido amniótico e as alças intestinais
extrusas da gastrosquise, um aspecto importante é o reconhecimento das
membranas que recobrem o embrião de galinha, sua disposição e suas fun-
ções. Quatro são as membranas encontradas no interior do ovo: saco da ge-
ma, âmnio, córion e alantóide (figura 4).

1 - Introdução 36
Fig. 4 - O embrião de galinha e sua relação com as membranas extra-embriônicas. (1)

Embrião, (2) Cavidade amniótica – âmnio, (3) Gema – saco da gema, (4) Albu-
mina, (5) Cavidade alantóide – membrana alantóide, (6) Câmara de ar, (7)
Membrana amnioalantóide, (8) Membrana corioalantóide, (9) Casca do ovo –
membrana do ovo (modificado de Molenaar, Meijers e Tibboel100)
O saco da gema tem algumas características peculiares relacionadas
com a sua função. Ele é uma membrana vascularizada. As ilhotas de sangue
se desenvolvem a partir da sua camada externa. A camada interna se dife-
rencia em células epiteliais glandulares que secretam enzimas digestivas
que digerem os nutrientes da gema, e em outras células que absorvem esses
nutrientes digeridos e os transportam para o sistema sangüíneo. O sistema
vascular do saco da gema é contínuo ao do embrião, levando assim nutrien-
tes importantes da gema para alimentar o embrião em crescimento96.

1 - Introdução 37
Uma segunda membrana extra-embriônica, o âmnio, que começa a se
formar no 2o dia de incubação, é uma membrana transparente avascular que
cresce sobre e através do embrião, envolvendo-o completamente. Aos 3,5
dias de incubação o embrião está totalmente envolvido por ele. O âmnio é
preenchido por um líquido claro e incolor, no qual o embrião se encontra
imerso. Esse líquido permite que o embrião se mova naturalmente, enquanto
se protege de forças externas excessivas, portanto sua função é análoga à
do líquido amniótico nos humanos49. Retornando ao 2o dia de incubação, o
córion é formado com o âmnio a partir de uma dobra próxima da cabeça. No
entanto, ao invés de crescer envolvendo diretamente o embrião, como faz o
âmnio, o córion forma um grande saco, semelhante a uma bolsa, que envol-
ve ambos. O córion surge e vai fundir-se com a membrana interna da casca
do ovo. Mais tarde, no 3o dia de incubação, na região abdominal do embrião,
uma nova membrana brota como um balão e, à medida que cresce para fora
do embrião, ocupa o espaço entre o córion e o âmnio; essa membrana é o
alantóide. O alantóide desenvolve um sistema sangüíneo altamente vascu-
larizado que se prolonga com o embrião. Ele continua a se expandir no inte-
rior do córion em desenvolvimento e, no 7o dia de incubação, se une ao có-
rion, formando a membrana corioalantóide, a qual tem uma superfície de
contato com a casca e com a albumina do ovo, importante para a função
digestiva do alantóide. A membrana alantóide secreta enzimas que digerem
a albumina. Os nutrientes digeridos a partir da albumina bem como o cálcio
da casca do ovo são absorvidos pelo sistema capilar do alantóide e transpor-
tados ao embrião em desenvolvimento. O alantóide efetua duas funções adi-

1 - Introdução 38
cionais igualmente importantes: ele recebe os produtos da excreção metabó-
lica dos rins do embrião, retirando-os do sangue e depositando-os na cavida-
de do ovo16, 96, 100, e colabora com a respiração embriônica, antes de ocorrer
o desenvolvimento funcional do pulmão, captando oxigênio dos poros da
casca. O sistema capilar sangüíneo do alantóide fortemente aderido à casca
através do córion absorverá oxigênio e liberará dióxido de carbono, que será
eliminado pelos poros da casca. Portanto ele funciona como um pulmão em-
briônico temporário96.
O saco alantóide dá ao embrião de galinha uma característica peculiar,
ele é o depósito das excretas do embrião. Portanto, no embrião de galinha,
as excretas urinárias e intestinais não se misturam com o líquido amniótico,
como acontece em humanos. Nos estágios iniciais de desenvolvimento, ou
seja, até o 6° dia embrionário, o saco alantóide é pequeno, sendo relativa-
mente fácil abordar o embrião sem abri-lo. Porém, a partir do 7o dia, a abor-
dagem da membrana amniótica, do cordão umbilical e do embrião só é pos-
sível através da abertura do saco alantóide. Isto proporcionou aos pesqui-
sadores a possibilidade de criar gastrosquise em que o intestino fosse ba-
nhado por líquido amniótico com e sem dejetos urinários e intestinais16, de
acordo com o momento do no qual se realiza o experimento.
1.7.4.3 - O Embrião de Galinha como Modelo Experimental
O primeiro relato do uso do embrião de galinha como modelo experi-
mental em cirurgia pediátrica encontra-se no trabalho de Earlam38, datado

1 - Introdução 39
de 1972 e publicado nos Anais do Colégio Real de Cirurgiões da Inglaterra.
Nesse estudo, através da abertura no ovo, o autor provocava lesão no me-
sentério a fim de desenvolver atresia e estenose intestinais. Earlam utilizou
160 ovos no 14o dia de desenvolvimento e em 38 provocou a lesão dos va-
sos mesentéricos: 5 (13%) embriões desse grupo sobreviveram e 3 (8%)
apresentaram estenose intestinal.
O trabalho de Earlam38 serviu de base para Tibboel, Molenaar e Van
Nie17, em 1979, darem início à utilização ampla desse modelo animal. Em
seu artigo inicial denominado Novas perspectivas em cirurgia fetal: o em-
brião de galinha, os autores utilizaram 1372 embriões para desenvolver um
estudo que ia desde a simples dissecção para familiarizar-se com o animal
até a criação de um modelo de peritonite meconial (através da perfuração de
uma alça intestinal do embrião) e de outro de atresia intestinal (através da le-
são dos vasos do mesentério).
Para testar separadamente os efeitos da hipóxia generalizada e da is-
quemia localizada sobre o intestino, Tibboel, Van Nie e Molenaar26 em 1980,
utilizaram novamente o modelo de embrião de galinha. Nesse segundo estu-
do, submeteram um grupo de ovos a um ambiente com moderada e severa
hipóxia e, em outro grupo, repetiram o experimento de ligadura do mesen-
tério com fio de sutura, para criar uma isquemia mesentérica localizada e
temporária. No grupo submetido a hipóxia, os embriões nasceram com le-
sões intestinais semelhantes às observadas na enterocolite necrosante; em
contrapartida, os embriões submetidos a isquemia localizada do mesentério
apresentaram tipos variados de atresia intestinal.

1 - Introdução 40
Nos anos seguintes o embrião de galinha foi utilizado como modelo ex-
perimental para várias doenças. A tabela 4 apresenta alguns desses experi-
mentos.
Tabela 4 - O embrião de galinha como modelo experimental para outras
patologias que não a gastrosquise
Doença Autor/ Ano Experimento Objetivo Sobrevida ao

Experimento
Estudo da diferen- Hutson102, Enxerto de ductos de Estudar o papel da morte 18% a 43%*
ciação sexual 1984 Muller no peritônio en- celular programada nos
tre embriões de gali- mecanismos de regressão
nha dos ductos de Muller
Atresia de esôfa- Kleckner103, Sutura colocada no Produzir atresia de esôfa- 34% a 51%*
go 1984 pólo cranial obrigando go (sem sucesso)
o embrião a assumir
uma postura de hiper-
flexão da cabeça
Kluth104, Preparação e análise Estudar a formação e se-
1987 através de microsco- paração do esôfago e tra-
pia eletrônica do in- quéia −
testino anterior de em-
briões de galinha em
diversas fases do de-
senvolvimento
Doença de Meijers24, Demarcação de célu- Analisar a migração de
Hirschsprung 1987 las nervosas com H3 células nervosas −
timidina
Meijers23, Transecção do intesti- Desenvolver um modelo ex-
1989 no do embrião em di- perimental para estudo da −
versas fases do de- doença de Hirschsprung
senvolvimento
Meijers22, Culturas de intestino de Estudar a colonização do
1992 embriões de galinha intestino por células ner- −
vosas
Atresia intestinal Tibboel25, Lesão de vasos do me- Testar a hipótese vascular
e peritonite 1989 sentério e perfuração das atresias intestinais e 82%
meconial de alças do embrião provocar contato do 78%
mecônio com o peritônio
fetal
Atresia intestinal Tovar105, Coagulação de vasos Estudar através de mi-
1991 do mesentério para croscopia eletrônica as 19,4%
criar atresia intestinal atresias intestinais
Meningomielo- Olgumer106, Modelo experimental Testar a troca de líquido −
cele 2001 de meningomielocele amniótico como forma de
em embriões de gali- diminuir a lesão medular
nha
* Valores variáveis em virtude de o estudo ter utilizado embriões em diferentes fases de desenvol-
vimento
1 - Introdução 41
Klück et al.16, em 1983, publicaram o primeiro estudo com o modelo ex-
perimental de gastrosquise em embriões de galinha. Foram utilizados 999
embriões com uma sobrevida global de 32%, mas com apenas 6% de su-
cesso no desenvolvimento de uma gastrosquise. Os autores conseguiram
reproduzir os achados histológicos do intestino de gastrosquise e ainda le-
vantaram a hipótese de que seria a urina fetal a causadora das alterações.
Em 1987 e 1989, Gheri e Bryk107, 108 apresentaram dois importantes es-
tudos sobre o desenvolvimento do intestino delgado de embriões de galinha.
Através de análise morfométrica digital, realizaram medidas de área e de es-
pessura do duodeno e do íleo de embriões de galinha normais em diferentes
dias de desenvolvimento. A pesquisa tem sua importância concentrada no
fato de que, apesar de ser um modelo experimental, hoje consagrado, pou-
cos artigos estão disponíveis a respeito da embriologia e da histologia nor-
mais. Os estudos mostraram que é possível calcular o índice de encurta-
mento dos espécimes de intestino de embriões de galinha submetidos à pre-
paração histológica, que se situa ao redor de 13% em média, e forneceram
importantes tabelas a respeito da espessura e da área da parede intestinal
normal nesse modelo.
O embrião de galinha serviu também como modelo experimental na
tentativa de testar as hipótese de origem da gastrosquise. Aktug et al.15 rea-
lizaram um experimento no qual embriões de galinha no 13o dia de desen-
volvimento embrionário eram submetidos à criação de uma gastrosquise
através de dois métodos distintos. Um grupo tinha o defeito criado na parede
abdominal (DPA) e o outro grupo no coto umbilical (DU). A sobrevida dos

1 - Introdução 42
embriões ao experimento foi de 40% no grupo DPA e de 87% no grupo com
DU, sendo que metade dos embriões vivos no grupo de DPA apresentava-se
sem gastrosquise e com cicatrização do defeito. Na análise do defeito e das
alças intestinais extrusas, os autores constataram que, no grupo DPA, havia
um firme anel nas bordas e o intestino se apresentava com características
hemorrágicas. Já no grupo DU as alterações macroscópicas e microscópi-
cas, como edema, formação de peel e espessamento de parede, eram mais
compatíveis com as observadas na gastrosquise. Seria esta uma comprova-
ção da teoria de que a ruptura do cordão umbilical daria origem à gastros-
quise.
Apesar de a maioria dos pesquisadores dar preferência a modelos de
mamíferos quando realizam estudos do trato gastrointestinal e das malfor-
mações congênitas, alegando que a embriogênese dos mamíferos é seme-
lhante, o desenvolvimento dos embriões de galinha pode ser comparado ao
de humanos em alguns pontos. A peristalse nos embriões humanos inicia no
segundo trimestre da gestação, o mesmo se aplicando à produção de bile e
à deglutição de líquido amniótico pelo feto. A literatura relata que, da mesma
forma, o embrião de galinha inicia a deglutição e a peristalse e passa a pro-
duzir a bile ao redor do 16o dia de incubação17.
1.7.4.4 - O Embrião de Galinha e as Técnicas de Troca de Líqui-

do Amniótico
No âmbito das pesquisas da influência do líquido amniótico na gênese
da lesão da gastrosquise, o embrião de galinha foi o animal de experimen-

1 - Introdução 43
tação preferido para estudos que avaliavam os mecanismos de inflamação,
como mediadores inflamatórios79, óxido nítrico30 e efeito do mecônio e da
urina31 sobre as alças. A partir desses experimentos surgiu a idéia de “purifi-
car” o líquido amniótico dos fatores agressores ao intestino, promovendo sua
diluição.
Em 1995, Aktug et al.14 publicaram os resultados do primeiro experi-
mento que utilizou a troca de líquido amniótico. No modelo de embrião de
galinha, diluíram o líquido amniótico em uma solução fisiológica e, ao final do
experimento, observaram menor lesão das alças submetidas à troca, tanto
macro como microscopicamente.
Um ano depois, Dommergues et al.39 publicaram o primeiro relato de
infusão de solução fisiológica na cavidade amniótica em fetos humanos com
gastrosquise. Esses pesquisadores franceses aproveitaram dois casos de
gestações com fetos com gastrosquise e oligodrâmnios para propor amnioin-
fusão, com o intuito de diminuir os efeitos lesivos da ausência de líquido
amniótico, tendo observado uma melhora no aspecto macroscópico do intes-
tino da gastrosquise. Sapin et al.109, aproveitando a experiência de Dommer-
gues et al.39, adotaram o mesmo procedimento com outros dois fetos com
gastrosquise e oligodramnia, obtendo também bons resultados. Mas foi so-
mente em 1998 que Aktug et al.29, acumulando a experiência com o modelo
de embrião de galinha, realizaram a troca de líquido amniótico por uma so-
lução salina fisiológica em uma gestação de um feto com gastrosquise e
sem oligodrâmnio. Ao nascer, a criança apresentava mínimo edema de al-
ças, o que possibilitou o fechamento fascial sem dificuldade e com início da

1 - Introdução 44
via oral no 5o dia e alta hospitalar no 8o dia, o que não é o habitual nos casos
de gastrosquise.
Luton et al.110 apresentaram o primeiro estudo comparando gestações
de gastrosquise com e sem troca de líquido amniótico (10 casos em cada
grupo). Como resultado houve uma melhor evolução clínica dos pacientes
submetidos à troca de líquido amniótico, porém ensaios clínicos com um
número maior de pacientes são necessários.
Simultaneamente os estudos foram sendo aprofundados e, com o obje-
tivo de testar duas diferentes soluções para troca de líquido amniótico na
gastrosquise, Aktug et al.27, em 1998, utilizaram o embrião de galinha como
modelo experimental, trocando líquido por uma solução fisiológica, e em ou-
tro grupo, uma solução hiperosmolar com glicose. Novamente os melhores
resultados foram obtidos com a troca de líquido pela solução fisiológica. Os
autores concluíram ser a simples diluição do líquido o fator determinante da
melhora das alças intestinais. No mesmo ano esses pesquisadores publica-
ram um artigo complementar28 ao anterior no qual realizavam a análise do
líquido amniótico pós-troca, tendo descoberto que ocorria uma importante
diminuição dos dejetos intestinais (ácidos biliares e bilirrubina), ao contrário
dos urinários, que não se alteravam. Assim, a melhora no aspecto do intesti-
no após a troca de líquido amniótico por uma solução fisiológica muito pro-
vavelmente se devia à eliminação de dejetos intestinais, não urinários, deter-
minando, desta forma, uma correção às conclusões do primeiro artigo14.
Recentemente, Kanmaz et al.111 utilizaram o modelo de gastrosquise
em embriões de galinha para testar a alcalinização do líquido amniótico com

1 - Introdução 45
bons resultados na diminuição da lesão intestinal, podendo ser esta uma al-
ternativa à troca de líquido, mais simples de ser executada.

2 - OBJETIVOS
2 - Objetivos 47
2 - OBJETIVOS
2.1 - Objetivo Geral
• Reproduzir o modelo experimental da gastrosquise em embriões de galinha.
2.2 - Objetivos Específicos
• Determinar as taxas de sobrevida dos embriões ao experimento.
• Avaliar o aumento ponderal dos embriões.
• Analisar, à microscopia ótica, as alterações histológicas do intestino dos
embriões.
• Utilizar técnicas de morfometria digital para medir a espessura da parede
intestinal dos embriões.
• Comparar as diferenças entre o intestino exposto ao líquido amniótico e o
intestino não-exposto.
• Determinar se o modelo desenvolvido apresenta as alterações observadas
na gastrosquise.
3 - MATERIAL E MÉTODO
3 - Material e Método 49
3 - MATERIAL E MÉTODO
3.1 - Delineamento da Pesquisa
Este estudo foi do tipo experimental, randomizado, contemporâneo, cego e
controlado.
3.2 - Local da Pesquisa
A pesquisa foi desenvolvida no Biotério e Laboratório de Cirurgia Experimental
do Centro de Ciências Biológicas e da Saúde da Faculdade de Medicina da Uni-
versidade de Caxias do Sul, Rio Grande do Sul.
3.3 - Estudo Piloto
Visando adquirir experiência com a estrutura do ovo de galinha e com a ana-
tomia do embrião, realizou-se a exploração e dissecção de 14 ovos, estudando-se a
disposição das membranas embrionárias, a estrutura do cordão umbilical com as
alças intestinais em seu interior e a distribuição do líquido amniótico (figura 5).

Fig. 5 - Embrião de 13 dias de desenvolvimento. Notar o cordão umbilical com as alças
intestinais no seu interior (seta) e o saco da gema (sg)
Com o objetivo de verificar a viabilidade do experimento, adquirir familiaridade
com o diagnóstico dos ovos fecundados e não-fecundados, desenvolver a técnica e
escolher o melhor momento de criar a gastrosquise, foi realizado um estudo piloto
com 90 ovos, cujos resultados são apresentados a seguir: em 8 ovos foi possível
diagnosticar a ausência de embrião através da ovoscopia. A ovoscopia, um proce-
dimento diagnóstico simples e muito utilizado pelos criadores, realiza-se colocando o
ovo contra uma fonte de luz com razoável intensidade (em nossa pesquisa utiliza-
mos uma lâmpada de Halogênio – Decostar – Osram® - Germany 500w – 12v); a com-
pleta transiluminação do ovo, sem sombras no seu interior, faz o diagnóstico da au-
sência do embrião, ao passo que os ovos fecundados apresentam uma sombra que
corresponde ao embrião em desenvolvimento (figura 6). Em 10 ovos não se realizou
nenhum procedimento, eles foram deixados para nascer, a fim de se confirmar o dia
do desenvolvimento embrionário no qual se encontravam os ovos da mesma série.
Fig. 6 - Transiluminação evidenciando o ovo fecundado (a) e não fecundado (b)
Foram selecionados para o procedimento piloto de criação da gastrosquise 72
ovos. Em 59 o procedimento foi feito seguindo as descrições prévias da literatura14,

15, 27, 28
. No 19o dia, havia 55 embriões mortos e 4 (7,2%) vivos. Nos restantes 13
(18%) embriões, selecionados para o procedimento, houve algum acidente técnico
que impossibilitou a execução. Em 1 caso ocorreu fratura da casca do ovo, em 6 ca-
sos, abertura acidental do saco da gema, em 2 casos, sangramento importante das
membranas que envolvem o embrião e, em 4 casos, houve lesão do corpo do em-
brião pelo instrumental cirúrgico.

A partir do estudo piloto optou-se por realizar a pesquisa no 13o dia embrioná-
rio, considerando não só a facilidade propiciada pelo tamanho do embrião como
também o fato de que a maioria dos autores dos trabalhos de troca de líquido amnió-
tico desenvolveram seus estudos nessa fase14, 15, 27, 28, 112
. Foi constatada também
uma extrema dificuldade técnica na manobra de exteriorização do cordão umbilical,
quando se utilizavam instrumentos cirúrgicos delicados convencionais, como a pinça
de Adson e a pinça hemostática tipo mosquito. A apreensão do corpo do embrião
por essas pinças ocasionou variados graus de lesão, indo desde uma escoriação até
arrancamento completo de membros, razão pela qual se desenvolveu um instrumen-
to próprio para realização do procedimento que consiste em um gancho, manufatu-
rado a partir de um estilete cirúrgico (figura 7). Com esse gancho foi possível facil-
mente exteriorizar o cordão umbilical, junto à sua implantação no corpo do embrião,
e não foram mais observadas lesões tipo arrancamento.
Fig. 7 - Gancho manufaturado a partir de um estilete cirúrgico, utilizado para identificar e

trazer para fora o cordão umbilical, diminuindo o risco de lesão do embrião
3.4 - Amostra
3.4.1 - Critérios de Inclusão
Foram utilizados na pesquisa 278 ovos fecundados de galinha da raça Leghorn
(Gallus domesticus), fornecidos por um mesmo incubatório e procedentes de diver-
sos criadores da região nordeste do Rio Grande do Sul.
O ovos foram selecionados por veterinário especialista em criação de aves e
levados para o laboratório em uma caixa isolante térmica, a fim de evitar perda de
calor durante o transporte. O transporte do incubatório até o laboratório de pesquisa
não demorou mais de 10 minutos na maioria das vezes. Os ovos selecionados para
o estudo foram retirados do incubatório no 11o ou 12o dia de desenvolvimento em-
brionário para a realização do procedimento no 13o dia. Na chegada ao laboratório
os ovos foram submetidos à ovoscopia: os sem embrião foram excluídos e os ovos
com embrião foram identificados com o número do seu protocolo, escrito na casca
com lápis preto, pesados e medidos no seu comprimento e largura e as informações
registradas no protocolo de pesquisa (Anexo 1).
3.4.2 - Critérios de Exclusão
Foram considerados critérios para exclusão do estudo:
a) ovos nos quais ocorreu algum tipo de acidente no procedimento de criação
da gastrosquise, como sangramento abundante do cordão umbilical, lesão com ex-
travasamento do saco da gema, lesão traumática do embrião (laceração ou arranca-
mento de membros) e fratura da casca do ovo;

b) embriões que, mesmo sendo submetidos ao procedimento de criação de
gastrosquise, apresentavam uma regeneração total do coto umbilical, sem exteriori-
zação de vísceras no momento da abertura do ovo no 19o dia;
c) embriões mortos.
3.4.3 - Grupos
Utilizou-se para análise dos dados a divisão da amostra em 3 grupos:
• Grupo G (Gastrosquise): 18 embriões nos quais foi realizado o procedi-
mento cirúrgico para criar uma gastrosquise no 13o dia de desenvolvimento embrio-
nário e que no final do experimento, no 19o dia, na abertura do ovo apresentavam-se
vivos e com o intestino protuído para fora da cavidade abdominal.
• Grupo M (Mistura de líquido amniótico e alantóide somente): 12 em-
briões nos quais foi realizado o experimento no 13o dia, consistindo na abertura do
orifício na casca e abertura das membranas amniótica e alantóide, promovendo a
mistura dos líquidos amniótico e alantóide, mas que diferia do grupo gastrosquise
por não haver a manipulação do cordão umbilical (sem expor as alças). No 19o dia
os ovos foram abertos, e o coto umbilical de cada animal vivo foi examinado para ga-
rantir que não havia visceras expostas, sendo então abordado. As alças de intestino
delgado ali localizadas foram removidas para exame.
• Grupo C (Controle): 10 embriões do 19o dia, trazidos diretamente do incu-
batório, nos quais nenhum procedimento foi realizado. Os ovos foram abertos e o
intestino delgado junto ao anel umbilical foi removido para exame.

3.5 - Método
No laboratório os ovos eram colocados em uma incubadora com sistema de
aquecimento através de ar quente circulante, própria para esta finalidade (Hova-
-Bator® Incubator, Model G.Q.F. Mgf. Co. Savannah, Ga. USA) (figuras 8 e 9), man-
tidos a uma temperatura de 37,5º C e em um ambiente com 80% de umidade e gira-
dos manualmente 1 ou 2 vezes ao dia até o procedimento. A temperatura da incu-
badora era controlada por 2 termômetros, um termômetro-higrômetro digital (Hygroterm
– Kat Nr. 30.5000 – TFA – Germany) com variação de – 10° a + 60° C de tempera-
tura, com divisões de 0,1° C e com variação de 10% a 99% de umidade relativa,
com divisões de 1%, e um termômetro a mercúrio, próprio para pequenas incuba-
doras (Incoterm® - ref. 89345/01), de 25° a 40° C, com divisões de 1° C. A umidade
relativa era controlada pelo termômetro-higrômetro digital citado acima.
Fig. 8 - Incubadora
Fig. 9 - Incubadora aberta
Os ovos previamente randomizados por grupo, numerados, pesados e medidos
eram retirados da incubadora e colocados em um suporte apropriado para o proce-
dimento, tendo-se o cuidado de manter o pólo mais largo, aquele que contém a câ-
mara de ar, voltado para cima, porque ali se daria a abordagem. Luvas cirúrgicas es-
téreis eram calçadas e um campo estéril era colocado sobre o ovo, de forma a per-
mitir a exposição da área a ser manipulada. Em seguida se procedia à antissepsia
do local de abordagem com álcool isopropílico a 70% (figura 10). O instrumental ci-
rúrgico era selecionado e consistia de uma tesoura de íris, uma pinça de Adson sem
dente, uma pinça de preensão tipo “mosquito” e o gancho fabricado para este pro-
cedimento. Com a pinça mosquito iniciava-se a confecção de um orifício no pólo do
ovo de 0,7 a 1 cm de diâmetro (figura 11). A seguir abordava-se a câmara de ar do
ovo (figura 12) e no assoalho da câmara de ar encontrava-se a membrana do ovo

que era aberta em conjunto com a membrana corioalantóide (figura 13). A abertura
em separado dessas duas membranas não era possível. Os sangramentos eram
controlados com o delicada preensão dos vasos ou com uma pinça de cautério do
tipo bipolar. Em seguida abordava-se a cavidade amniótica e com o gancho proce-
dia-se à busca pelo cordão umbilical (figura 14). Esta manobra é facilitada seguindo-
se os grandes vasos umbilicais que são facilmente identificados (figura 15) ou explo-
rando com o gancho junto aos membros inferiores do embrião. Após identificado, o
cordão umbilical era gentilmente exteriorizado do ovo e procedia-se à identificação
das estruturas do seu interior. As alças intestinais são facilmente visíveis dentro do
cordão umbilical (figura 16). Com a tesoura de irís e com auxílio da pinça de Adson,
fazia-se a abertura do cordão umbilical o mais próximo possível do abdômen do em-
brião (figura 17), na zona denominada coto umbilical. Em seguida uma gentil pres-
são era realizada a fim de que algumas alças intestinais saíssem pela abertura (fi-
gura 18). Atenção especial nesse momento era dada aos vasos umbilicais que cru-
zam dentro do cordão umbilical (figura 19); uma lesão desses vasos, com conse-
qüente sangramento, inviabiliza o procedimento. Após exteriorização das alças, o
cordão umbilical retornava para dentro do ovo. A borda da abertura na casca era
limpa de resíduos de sangue e líquido amniótico e o orifício era fechado com o uso
de curativo plástico (figuras 20 e 21) (Tegaderm® - 3M Health Care, St. Paul, USA).
Em seguida o ovo era recolocado na incubadora e seguia com cuidados de
verificação de temperatura e umidade 3 vezes ao dia e viragem manual 1 a 2 vezes
ao dia (figura 22). Em cada lote em incubação, pelo menos um ovo normal era dei-
xado para nascer espontaneamente, afim de confirmar o dia previsto para a eclosão
do lote. Os ovos eram examinados diariamente pelo pesquisador e, mesmo cons-
tatando-se a morte do embrião, eles não eram retirados da incubadora. Ao final do

experimento, no 19o dia, os ovos eram retirados da incubadora, pesados e abertos
para exame. Os animais vivos, identificados pela presença de movimentos espon-
tâneos e/ou sangramento de membranas na abertura da casca (figura 23), eram
examinados e classificados como apresentando gastrosquise ou não. Aqueles que
não apresentavam alças intestinais expostas eram excluídos e os com as alças de
intestino delgado expostas eram submetidos à secagem do excesso de líquido
amniótico, fotografados, pesados e realizada eutanásia por exangüinação dos vasos
umbilicais, sendo removido o intestino protuído pelo defeito abdominal para posterior
análise anatomopatológica (figuras 24 e 25). Esses embriões vieram a compor o
grupo gastrosquise (G) no estudo.
Fig. 10 - Antissepsia com álcool 70%, na extremidade mais alargada do ovo

Fig. 11 - Abertura do orifício na extremidade mais alargada do ovo, com o uso da pinça
tipo “mosquito”
Fig. 12 - Orifício de 0,7 a 1 cm de diâmetro aberto sobre a câmara de ar para aborda-

gem cirúrgica
Fig. 13 - Orifício sobre a câmara de ar com visão da membrana do ovo
Fig. 14 - Abordagem da cavidade alantóide e amniótica com o gancho, para abrir as

membranas e localizar o cordão umbilical
Fig. 15 - Gancho trazendo o cordão umbilical. Notar a grande artéria umbilical presente
no seu interior (seta)
Fig. 16 - Gancho trazendo o coto umbilical com as alças intestinais visíveis mas cober-
tas pela membrana do cordão. Notar o corpo do embrião logo adjacente (seta)
Fig. 17 - Tesoura de Iris abrindo o cordão umbilical, tomando-se o cuidado de não lesar
a artéria e veia umbilical
Fig. 18 - Cordão umbilical aberto e as alças intestinais parcialmente expostas

Fig. 19 - Alças intestinais fora do cordão umbilical, liberadas das membranas que reco-
brem. Notar a grande artéria umbilical (seta) que encontra-se no campo cirúrgico
Fig. 20 - Cordão umbilical devolvido para dentro do ovo e o orifício sendo coberto por
um curativo plástico adesivo
Fig. 21 - Fechamento do orifício com curativo plástico
Fig. 22 - Final do procedimento, ovos devolvidos à incubadora para controle de tempe-

ratura, umidade e viragem até o 19o dia
Fig. 23 - No 19o dia de desenvolvimento o ovo é aberto e a vitalidade do embrião é ava-

liada pelos movimentos espontâneos ou pelo sangramento das membranas da
casca (setas)
Fig. 24 - Embrião no 19o dia, no momento da abertura do ovo. Notar a circulação ativa, o
sangramento das membranas (memb) e o intestino protuído pelo defeito umbili-
cal (seta), junto ao saco da gema (sg)
Fig. 25 - Detalhe do abdômen do embrião com o saco da gema, o cordão umbilical e as

alças intestinais com aspecto espessado protuídas para fora do abdômen (se-
ta)
As alças intestinais eram fixadas em formol a 10% e encaminhadas para o la-
boratório de patologia, para fixação em parafina. Para obter cortes transversos (de 5
micrômetros de espessura), o ângulo entre o eixo longitudinal do espécime e a lâ-
mina do micrótomo foi o mais próximo possível de 90°. Os cortes do intestino eram
montados em lâminas de vidro e corados com hematoxilina e eosina. Procedia-se à
avaliação histológica usual dos cortes à procura de sinais inflamatórios e da forma-
ção de peel, conforme a tabela 5. As análises morfométricas foram realizadas a par-
tir da digitalização das imagens obtidas em microscopia ótica com microscópio
Zeiss® (Modelo Axiastar) com ótica plana acromática e foto-tubo (videocâmara

Sony® DXC 151) e analisadas através do programa integrado de morfometria e aná-
lise de imagem Image Pro Plus – Media Cybernetics®.
Através da análise digital foi possível calcular a espessura da parede intestinal
para cada corte histológico em micrômetros.
3.6 - Variáveis em Estudo
As variáveis estudadas foram:
• Peso do ovo em gramas: aferido através de balança semi-analítica da mar-
ca Micronal, modelo B2000, com divisões de 0,01 g.
• Comprimento e largura do ovo em milímetros: aferidos por de um pa-
químetro com divisões de 1 mm.
• Mortalidade de embriões ao procedimento: avaliada mediante exame vi-
sual de movimento do embrião e/ou sangramento de membranas na abertura da
casca do ovo, para diagnóstico de vitalidade.
• Peso do embrião em gramas: aferido pelo mesmo método de pesagem de
ovos.
• Relação peso embrião pelo peso do ovo (PE/PO): em percentuais – cal-
culada pela fórmula: (Peso do embrião / Peso do ovo no 19o dia ) X 100.
• Acidentes do procedimento: identificados pelo pesquisador e anotados no
protocolo de pesquisa.
• Avaliação das estruturas exteriorizadas na gastrosquise: identificadas
pelo pesquisador e anotadas no protocolo de pesquisa.

• Avaliação da inflamação intestinal: realizada através de escore semiquan-
titativo, por análise histológica convencional. A tabela 5 apresenta os critérios de
avaliação histológica utilizados no estudo
• Medidas das espessuras intestinais: expressas em micrômetros, aferidas
através de análise morfométrica digital dos cortes, realizando-se 6 medidas aleató-
rias para cada embrião, quais sejam:
− espessura total de parede;
− espessura da serosa;
− espessura da camada muscular;
− espessura da mucosa (medida a partir da base do vilo até o início da ca-
mada muscular).
• Avaliação do número de plexos nervosos mioentéricos: efetuada por
análise histológica convencional em hematoxilina-eosina.
3.7 - Ética em Estudos Experimentais
A utilização dos embriões foi realizada sob condições éticas e científicas regu-
lamentadas pela Lei Federal no 6.638, de 08 de maio de 1979, a qual estabeleceu as
normas para a prática didático-científica da experimentação com animais113. Esta
pesquisa foi autorizada pela coordenação do Centro de Ciências Biológicas e da
Saúde – Laboratório de Cirurgia Experimental, da Faculdade de Medicina da Univer-
sidade de Caxias do Sul, onde foi desenvolvido o trabalho experimental.

Tabela 5 - Avaliação histológica do intestino dos embriões de galinha
Classificação Grau Histologia Escore
Serosite
Ausente 0 Ausência de alteração anatomopatológica 0
Leve I Edema e infiltrado inflamatório grau I (até 5 leucócitos por

1
campo de 40X)
Moderada II Edema e infiltrado inflamatório grau II (de 5 a 25 leucócitos

2
por campo de 40X) + proliferação endotelial
Severa III Edema e infiltrado inflamatório grau III (mais de 25 leucócitos

por campo de 40X, com exsudato seroso e hiperemia in- 3
tensa) + proliferação mesotelial
Enterite
Leve I Edema e infiltrado inflamatório grau I com discreta ectasia ve-

nosa e linfática, com discreto edema vilositário (sem atrofia 1
da vilosidade), do cório da mucosa ou do mesentério
Moderada II Edema e infiltrado inflamatório grau II, com congestão veno-

sa e ectasia linfática + discreta atrofia vilositária com mo-
2
derado edema das vilosidades, do cório da mucosa ou do
mesentério
Severa III Edema e infiltrado inflamatório grau III apresentando conges-

tão venosa intensa com extravasamento de hemácias para o
interstício + atrofia vilositária severa com alargamento ou 3
achatamento vilositário, do cório da mucosa ou do me-
sentério
Necrose
Leve I Necrose restrita à serosa 1
Moderada II Necrose estendendo-se à serosa e muscular 2
Severa III Necrose transmural 3
Depósito de colágeno e fibrina na serosa (Peel)
Ausente 0 Ausência de peel sobre a serosa 0
Leve I Depósito focal de peel sobre a serosa 1
Moderado II Depósito moderado de peel sobre a serosa 2
Severo III Depósito extenso de peel sobre a serosa 3
Modificada a partir de Sherman et al.89, Ferreira et al.76 e Kubaski92.

3.8 - Análise Estatística
Inicialmente os dados foram descritos através de média e desvio padrão.
Variáveis qualitativas foram expressas por freqüência e percentual. Na comparação
dos grupos utilizou-se a análise de variância com 1 (um) critério de classificação
(ANOVA one-way). A localização de diferenças significativas foi feita mediante o do
teste de comparações múltiplas de Duncan. A comparação de variáveis assimétricas
foi confirmada pela utilização do procedimento não paramétrico de Kruskal-Wallis,
com localização de diferenças pelo teste de Dunn. O nível de significância foi de
α = 0,05. Os dados foram processados e analisados com o auxílio dos programas
SSPS® (v.10) e Sigmaplot® (V 2.1).

4 - RESULTADOS
4 - Resultados 72
4 - RESULTADOS
4.1 - Sobrevida
Dos 236 ovos do grupo gastrosquise (G), 207 (87,7%) tiveram o procedimento
cirúrgico realizado com sucesso e 29 (12,3) apresentaram acidentes na execução.
Dos 207 embriões submetidos à criação de uma gastrosquise, 184 (88,9%) es-
tavam mortos ao final do experimento (figuras 26 e 27) e 23 vivos, sendo, portanto,
de 11,1% a taxa de sobrevida ao procedimento para criar uma gastrosquise.
Fig. 26 - Embriões mortos do grupo gastrosquise

4 - Resultados 73
Fig. 27 - Embrião do grupo gastrosquise morto. Observar a presença do defeito abdo-
minal com as alças intestinais exteriorizadas (seta)
Dos 23 embriões que sobreviveram ao experimento, 5 (21,7%) mostravam ci-
catrização do defeito abdominal sem alças intestinais expostas (figura 28) e 18 apre-
sentavam gastrosquise, reconhecida pelo exame do embrião. Então, considerando
os 207 embriões submetidos inicialmente ao procedimento, a taxa de sucesso na
realização de gastrosquise foi de 8,7% (IC 95%: 5,4 a 13,6).
Dos 17 embriões do grupo mistura (M), 12 (70,5%) sobreviveram ao experi-
mento, o que resultou em taxa de sobrevida de 70,5%.

4 - Resultados 74
Fig. 28 - Embrião do grupo gastrosquise, que no 19o dia apresentava cicatrização com-
pleta do coto umbilical, sem exteriorização das alças. Observas a zona de cica-
triz no coto umbilical (seta)
A comparação da taxa de sobrevida desses dois grupos mostrou haver entre
eles diferença estatisticamente significativa (P = 0,045).
Os 15 ovos deixados para nascer eclodiram no dia previsto para ser o 21o do
desenvolvimento embrionário.
A figura 29 resume a distribuição da amostra nos grupos de estudo.

4 - Resultados 75
AMOSTRA
Total de ovos
278
Grupo gastrosquise Grupo mistura Grupo controle Embriões

para nascer
236 17 10 15
Procedimento de
Procedimento para
criar uma gastrosquise mistura de líquidos
somente
Sucesso no Acidente Embriões vivos Embriões mortos

procedimento no procedimento 12 5
207 29 (70,5%) (29,5%)
(87,7) (12,3%)
Embriões vivos Embriões mortos

23 184
(11,1%) (88,9%)
Com Gastrosquise Sem Gastrosquise

18 5
(8,7%) (21,7%)
Fig. 29 - Distribuição dos ovos e embriões na amostra
4.2 - Acidentes no Procedimento
A tabela 6 indica os acidentes ocorridos no procedimento cirúrgico que fizeram
com que 29 ovos do grupo G fossem desprezados.
Tabela 6 - Acidentes no procedimento para criar uma gastrosquise
Acidente cirúrgico f %
Lesão do saco da gema 16 55,17
Fratura da casca do ovo 2 6,90
Sangramento dos vasos umbilicais 11 37,93
Total 29 100,00
4 - Resultados 76
4.3 - Peso, Comprimento e Largura dos Ovos e Peso dos Embriões
A tabela 7 apresenta o peso, o comprimento e a largura dos ovos, bem como o
peso dos embriões e a relação peso do embrião/peso do ovo (PE/PO).
Tabela 7 - Medidas de peso, comprimento e largura dos ovos, peso dos embriões e
relação peso do embrião/peso do ovo (média ± desvio padrão)
GRUPOS
Variáveis G M C P
n = 18 n = 12 n = 10
Peso do ovo no dia 13 (g) 53,51 ± 5,70 57,71 ± 3,62 54,20 ± 4,34 0,069
Peso do ovo no dia 19 (g) 51,67 ± 5,50 55,72 ± 3,44 52,40 ± 3,96 0,066
Comprimento (mm) 55,44 ± 3,07a 58,25 ± 2,73b 56,40 ± 2,37a, b 0,038
Largura (mm) 42,67 ± 1,41 42,83 ± 1,03 42,70 ± 1,64 0,946
Peso do embrião (g) 17,43 ± 4,01a 21,98 ± 1,74b 25,43 ± 2,44c < 0,001
Relação PE/PO 33,79 ± 7,26a 39,60 ± 4,04b 48,51 ± 2,69c < 0,001
Letras-índice não-coincidentes apresentam diferenças estatisticamente significativas.
As médias de comprimento dos ovos mostraram uma diferença estatisticamen-
te significativa no Grupo M, porém não foram evidenciadas diferenças nas compara-
ções do peso do ovo no dia 13 e no dia 19 e da largura.
A comparação do peso do embrião e da relação PE/PO nos três grupos mos-
trou uma diferença estatisticamente significativa, indicando que houve uma diminui-
ção no peso do embrião do grupo gastrosquise quando comparado com os grupos
mistura e controle.
A figura 30 apresenta em gráficos as medidas de peso, comprimento e largura
dos ovos, peso dos embriões e relação PE/PO.

4 - Resultados 77
70 70
Peso do ovo no
Peso do ovo no
60 60
13 dia (g)
19 dia (g)
50 50
o
o
40 40
0 0
G M C G M C
Grupo Grupo
Comprimento do ovo
Largura do ovo (mm)

70 50
60 45
(mm)
50 40
40
0 0
G M C G M C
Grupo Grupo
Peso do embrião (g)
32 60
Relação PE/PO
50
24
40
16 30
20
8
10
0 0
G M C G M C
Grupo Grupo
Fig. 30 - Gráficos de média e barra de erro (± desvio padrão) representando a compara-

ção de diversas variáveis entre os grupos em estudo (G:gastrosquise; M: mis-
tura; C: controle).
4 - Resultados 78
4.4 - Análise Macroscópica das Visceras Expostas
A avaliação por inspeção das visceras expostas ao nascimento mostrou que
em todos os casos do grupo G as vísceras expostas foram alças do intestino delga-
do (figuras 31, 32, 33 e 34). Não foi observado fígado exposto em nenhum dos ca-
sos. Nos grupos M e C, no momento da abertura do ovo, o cordão umbilical encon-
trava-se intacto e não havia visceras expostas em nenhum deles (figuras 35, 36 e
37).
Fig. 31 - Embrião vivo do grupo gastrosquise. Observar a dilatação e hiperemia das alças
intestinais expostas
4 - Resultados 79
Fig. 32 - Embrião vivo do grupo gastrosquise. Observar o espessamento e a aglutinação

de alças intestinais, lembrando uma gastrosquise humana (seta)
Fig. 33 - Embrião vivo do grupo gastrosquise. Alças intestinais expostas, aderidas e com
parede espessada, ainda é possível identificar o saco da gema
4 - Resultados 80
Fig. 34 - Embrião do grupo gastrosquise. Alças intestinais expostas, lateralmente ao cor-

dão umbilical e ao saco a gema. Notar a hiperemia e o aspecto inflamatório das
alças.
Fig. 35 - Embrião do grupo mistura. Notar o coto umbilical intacto e o início do processo
de retração do saco da gema
4 - Resultados 81
Fig. 36 - Embrião do grupo controle. Observar o coto umbilical intacto (seta), e o pleno de-
senvolvimento do animal no 19o dia
Fig. 37 - Detalhe do coto umbilical aberto do embrião do grupo controle. Observar as al-
ças intestinais com aspecto normal, sem edema ou hiperemia
4 - Resultados 82
4.5 - Análise Microscópica das Alças Intestinais
A avaliação microscópica das alças intestinais baseada no escore previamente
apresentado (tabela 5) classificou os achados de serosite, enterite, necrose e peel.
Os grupos M e C exibiram poucas alterações ao exame histopatológico (figuras 38,
39, 40, 41 e 42). Diferentes graus de lesão puderam ser observados no Grupo G,
conforme se pode ver nas figuras 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50 e 51.
Fig. 38 - Corte histológico do intestino de embrião do grupo C, (100x). Observar o aspecto
normal das camadas do intestino

4 - Resultados 83
Fig. 39 - Corte histológico do intestino de embrião do grupo C, (100x). Enterite leve
Fig. 40 - Corte histológico do intestino de embrião do grupo C, (400x). Observar o aspecto
normal das vilosidades intestinais e das camadas mucosas e muscular

4 - Resultados 84
Fig. 41 - Corte histológico do intestino de embrião do grupo M, (100x). Observar infiltrado
inflamatório nas vilosidades intestinais
Fig. 42 - Corte histológico do intestino de embrião do grupo M, (400x). Enterite leve. Observar
o nítido infiltrado inflamatório nas vilosidades intestinais

4 - Resultados 85
Fig. 43 - Corte histológico do intestino exposto de embrião do grupo G, (40x). Observar
espessamento da parede, as alças intestinais aderidas
espessamento da parede, edema e infiltrado inflamatório na serosa

4 - Resultados 86

espessamento da parede, e os sinais de enterite severa, com infiltrado inflama-
tório na mucosa
a congestão dos vasos do mesentério (seta)

4 - Resultados 87
Fig. 47 - Corte histológico do intestino exposto de embrião do grupo G, (400x). Serosite
severa. Observar o infiltrado inflamatório na serosa (setas)
espessamento da serosa e infiltrado inflamatório e fibrina

4 - Resultados 88

a necrose de toda a parede intestinal e o depósito de fibrina sobre a serosa.
Desorganização da estrutura normal da parede
infiltrado inflamatório na serosa e também na mucosa (enterite)

4 - Resultados 89

intenso infiltrado inflamatório do mesentério
A tabela 8 apresenta as médias dos escores de avaliação histopatológica obti-
dos pelos três grupos em estudo.
Tabela 8 - Análise histológica das alças do intestino delgado dos 3 grupos, baseado
no escore padronizado da tabela 5 (média ± desvio padrão)
Grupos
Achados G M C P
n = 18 n = 12 n = 10
a b
Serosite 2,17 ± 0,79 0,25 ± 0,45 0,3 ± 0,48b < 0,001
Enterite 1,83 ± 1,04a 0,25 ± 0,45b 0,3 ± 0,67b < 0,001
a b b
Necrose 0,94 ± 1 0 0 < 0,001
a b b
Peel 1,28 ± 1,07 0 0 < 0,001
Total 6,22 ± 3a 0,5 ± 0,8b 0,6 ± 0,84b < 0,001
Letras índice não-coincidentes apresentam diferenças estatisticamente significativas.

4 - Resultados 90
A comparação dos escores obtidos pelos 3 grupos mostrou diferença estatisti-
camente significativa para todos os parâmetros do grupo G em relação aos de-
mais.
4.6 - Número de Plexos Nervosos
O número de plexos nervosos da parede intestinal foi contado (figuras 52 e 53)
e a tabela 9 apresenta os resultados.
os plexos nervosos mioentéricos (setas)

4 - Resultados 91
Fig. 53 - Corte histológico do intestino de embrião do grupo M, (400x). Observar o plexo
nervoso mioentéricos (seta)
Tabela 9 - Número de plexos nervosos por corte de intestino (média ± desvio pa-
drão)
Grupos
G M C P
n = 13 n = 12 n = 10
Plexos Nervosos 12,23 ± 3,92 11,5 ± 3,15 11,1 ± 2,23 0,69
Não houve diferença estatisticamente significativa na contagem de plexos ner-
vosos nos 3 grupos estudados.

4 - Resultados 92
Em 5 amostras do grupo G, as condições técnicas da preparação histológica
não pertimiram uma contagem precisa do número de gânglios, tendo sido esses ca-
sos excluídos.
4.7 - Espessura Intestinal
A tabela 10 apresenta as médias dos resultados obtidos das medidas da es-
pessura da parede intestinal total e de suas diferentes camadas, mediante análise
morfométrica digital (figura 54).
Fig. 54 - Corte histológico do intestino de embrião do grupo C, (40x). Demonstração das

camadas intestinais medidas pela morfometria digital (azul: espessura total; rosa:
mucosa; vermelho: serosa; verde: muscular)
4 - Resultados 93
Tabela 10 - Medidas de espessura intestinal em micrômetros
Grupos
Camadas G M C P
n = 18 n = 12 n = 10
Mucosa 187,13 ± 16,45a 175,31 ± 12,77b 176,85 ± 7,71a, b 0,048
Muscular 173,76 ± 71,98 194,73 ± 57,97 181,68 ± 52,87 0,679
Serosa 96,98 ± 25,57a 62,41 ± 14,26b 51,7 ± 10,76c 0,001
Total 457,86 ± 75,34 432,46 ± 54,27 410,24 ± 45,64 0,163
Letras-índice não-coincidentes apresentam diferenças estatisticamente significativas
Os valores da espessura intestinal mostraram uma diferença estatisticamente
significativa nas medidas da serosa e da mucosa. A espessura da muscular não
apresentou diferença.
Encontrou-se diferença na espessura total entre os grupos G e C, no entanto
essa diferença (que pode ser considerada de tamanho moderado), não atingiu signi-
ficância estatística clássica. No entanto, ao realizar-se uma análise de regressão li-
near, por estarem os grupos ordenados por magnitude de efeito, constatou-se uma
significância limítrofe (P = 0,056). Isto quer dizer que, à medida que a exposição do
embrião ao líquido amniótico modificado aumenta, maior é a espessura observada
na parede do intestino.
A figura 55 contém os gráficos de espessuras intestinais nos três grupos em
estudo.
4 - Resultados 94
220 280
muscular (μm)
240
Espessura da
Espessura da
200
mucosa (μm)
180 200
160 160
120
140
0 0
G M C G M C
Grupo Grupo
140 550
Espessura total da
120
Espessura da
500
serosa (μm)
serosa (μm)
100
450
80
60 400
40 350
20
0 0
G M C G M C
Grupo Grupo
Fig. 55 - Gráficos de média e barra de erro (± desvio padrão) representando a comparação

das medidas de espessuras intestinais. (G: gastrosquise; M: mistura; C: controle)
5 - DISCUSSÃO
5 - Discussão 96
5 - DISCUSSÃO
A prevalência global de gastrosquise vem aumentando na última década, fa-
lando-se até em “epidemia da gastrosquise”114. Em contrapartida, avanços signi-
ficativos foram alcançados nas diferentes áreas de atenção aos pacientes. As ques-
tões ainda pendentes quando ao manejo são hoje matéria de intenso estudo por
pesquisadores de todo o mundo, e modelos experimentais em animais são parte fun-
damental das pesquisas.
O objetivo deste estudo foi o de reproduzir e, desta forma, avaliar o modelo
experimental em embriões de galinha, testando a hipótese de que este modelo ani-
mal seria capaz de desenvolver achados intestinais compatíveis com a gastrosquise
humana.
O embrião de galinha tornou-se o modelo experimental de gastrosquise em
pelos menos dois grandes centros de pesquisa: Holanda e Turquia.
Sem dúvida, suas principais vantagens são o baixo custo de execução do ex-
perimento, o descarte fácil, a dispensa de anestesia e reduzido o material cirúrgico
utilizado.
O embrião de galinha é um modelo único, principalmente porque o procedi-
mento pode ser realizado no período em que o intestino protui pela hérnia do cordão
umbilical15, e pelo fato de o líquido amniótico estar livre de dejetos urinários e intes-
tinais fetais que estão contidos no saco alantóide. Assim sendo, pode-se optar por
criar uma gastrosquise misturando ou não os dejetos cloacais do embrião ao líquido

5 - Discussão 97
amniótico, basicamente na dependência do momento do desenvolvimento embrio-
nário em que se realiza o procedimento. Criar uma gastrosquise banhada somente
por líquido amniótico, sem dejetos, pode ser útil quando se quer testar separada-
mente substâncias irritantes ao intestino, como urina e mecônio humanos31.
Outra vantagem é a de que, no embrião de galinha, a gastrosquise pode ser
realizada em estágios precoces do desenvolvimento16, 19, 31 como se acredita ser sua
embriogênese18, 19.
Os custos com este modelo experimental são sensivelmente mais baixos do
que com outros animais, os ovos de galinha embrionados são de baixíssimo custo e
os gastos com incubação e procedimento cirúrgico também são modestos. O alto
custo é a principal desvantagem dos modelos que empregam ovelhas.
As principais desvantagens do embrião de galinha como modelo experimental
se situam na alta taxa de mortalidade e nas diferenças observadas nas membranas
embrionárias e na composição do líquido amniótico.
Uma das críticas ao modelo em galinhas seria que a composição do líquido
amniótico e do sangue seria distinta da dos mamíferos, em especial o homem. A os-
molaridade plasmática e do líquido amnioalantóide do embrião de galinha é real-
mente menor que em humanos71, porém o comportamento do líquido amnioalantóide
e do líquido amniótico humano se assemelha. Ambos apresentam diminuição dos
níveis de sódio e elevação na concentração de potássio, uréia e creatinina, relacio-
nadas ao início do pleno funcionamento renal, que acontece ao redor do 15o dia nos
embriões de galinha e na 30ª semana nos fetos humanos19.
Outra desvantagem do modelo é a dificuldade técnica em obter espécime de
intestino no qual se possa medir o comprimento e, dessa forma, calcular a densi-
dade, como realizado por Kubaski92. As alças intestinais, no presente estudo, na

5 - Discussão 98
maioria das vezes estavam agrupadas e aderidas, o que impossibilitou a medida do
seu comprimento.
Quando comparados com o modelo experimental em ratos desenvolvido por
Correia-Pinto et al.95, os embriões de galinha têm a vantagem de ser animais maio-
res (o peso do embrião de galinha no 19o dia é cinco vezes maior que o do feto de
rato no 21o dia embrionário). Sem dúvida, os ratos talvez sejam os animais com os
quais os pesquisadores tenham maior experiência, porém, apesar das vantagens
citadas pelos autores, como modelos experimentais de gastrosquise os fetos de rato
são animais pequenos. Mesmo o trabalho de Correia-Pinto et al.95 necessitou da uti-
lização de microscópio (16x de aumento) para realizar o procedimento.
A infecção seguida de abortamento foi uma complicação observada em mode-
los experimentais em coelhos89, 92. Nos embriões de galinha deste estudo, a conta-
minação não foi considerada, pois os ovos de galinha são estruturas colonizadas por
germes, no seu exterior e interior. Para reduzir as perdas, os criadores utilizam mé-
todos para controlar a contaminação, como vaporização com formalina, com per-
manganato de potássio ou banho em solução com antibióticos96. Nenhum desses
métodos, porém, foi utilizado nesta pesquisa, uma vez que o uso de produtos po-
deria causar danos ao embrião. Ovos de galinha contaminados são fáceis de ser
identificados pelo odor característico, e os embriões não resistem à infecção.
A escolha do melhor momento para realizar gastrosquise em embriões de gali-
nha leva em conta muitos fatores. Como este experimento desejava criar condições
de líquido amniótico que se assemelhassem ao humano, o procedimento deveria ser
realizado após o 7o dia de desenvolvimento16. Porém embriões de 7 dias são ani-
mais pequenos112 e de difícil manipulação sem microscópios ou lupas cirúrgicas31.

5 - Discussão 99
A opção por realizar o procedimento no 13o dia foi baseada na maioria dos tra-
balhos que consideraram a data ao redor desse dia como a ideal14, 15, 28, 30, 31, 71. Da
mesma forma, o final do procedimento foi realizado no 19o dia para proporcionar um
período relativamente longo de exposição das alças intestinais ao líquido amnioa-
lantóide e porque, no 20o e 21o dias, o embrião cresce significativamente, começa a
movimentar-se intensamente no interior do ovo, a quantidade de líquido diminui e
existe o risco de o intestino eviscerado aderir a outras estruturas. Entretanto, auto-
res16, 71 já demonstraram que, quanto mais precocemente se realiza a gastrosquise,
maior é a sobrevida.
A decisão de realizar a abertura do coto umbilical do embrião ao invés de fazê-
-lo na parede abdominal, para promover a saída das alças, baseou-se no estudo de
Aktug et al.15, que comparou esses dois procedimentos e demonstrou que os acha-
dos histopatológicos das alças intestinais do grupo em que se realizava uma abertu-
ra do coto umbilical, eram mais representativos da gastrosquise.
Os embriões onde se realiza a gastrosquise através da abertura da parede
abdominal desenvolvem nítidas alterações isquêmicas do intestino, como se o anel
na parede tivesse exercido constricção sobre o mesentério das alças extrusas e le-
vado à necrose intestinal com completa cicatrização do defeito15. Esse fato também
é observado em humanos, existindo relatos de fetos com diagnóstico de gastrosqui-
se em ecografias pré-natais e que nascem com o abdômen sem defeito e com atre-
sia intestinal associada (vanishing bowel)65, 115, 116. A constricção do defeito pode ser
explicada pela cicatrização das bordas da pele e dos tecidos da parede abdominal
como músculo e aponeurose. Sabe-se, atualmente, que o processo de cicatrização
intra-útero ocorre de maneira distinta do observado fora do útero117. Ferimentos da
pele intra-uterinos resolvem sem formar cicatriz, mas feridas no estômago ou em

5 - Discussão 100
músculos como o diafragma produzem importantes cicatrizes cobertas por fibrina,
efeito esse que os estudos atribuem ao contato com o líquido amniótico117, 118, 119 Po-
rém algum mecanismo de autoproteção deve estar envolvido, salvaguardando o cor-
dão umbilical, pelo fato de que, nos defeitos umbilicais, se os bordos do coto umbi-
lical cicatrizassem em contato com o líquido amniótico, isso colocaria em risco a vida
do feto já que faria constricção sobre o vasos umbilicais.
A sobrevida observada neste estudo é considerada baixa mesmo em compa-
ração com a de outros estudos em embriões de galinha. A tabela 11 compara a so-
brevida dos animais em vários trabalhos experimentais.
Tabela 11 - Sobrevida dos modelos experimentais de gastrosquise
Autor / Ano Animal Sobrevida ao experimento (%)

Haller93 / 1974 Ovelha 48,7
61
Langer et al. / 1989 Ovelha 42,8
Aoki et al.90 / 1980 Coelho 15, 23,56a
Phillips et al.91 /1991 Coelho 78
75
Albert et al. / 1993 Coelho 38,1
Kubaski92 / 1994 Coelho 73,3
85
Santos / 2000 Coelho 86,9
95
Correia-Pinto et al. / 2001 Rato 90,6
Klück et al.16 / 1983 Galinha 32b (6c)
Lopez de Torre et al.71 / 1991 Galinha 51b (22,8c)
Aktug et al.14 / 1995 Galinha 41c
Aktug et al.15 / 1997 Galinha 87 ( 80c)
Dilsiz et al.30 / 1999 Galinha 36,6c
Gandara / 2002 Galinha 11,1b (8,7c)
a
Taxa de sobrevida variável em decorrência de diferentes momentos da gestação
em que foi realizado o procedimento.
b
Sobrevida global de embriões de galinha ao procedimento (com e sem gastros-
quise).
c
Sobrevida de embriões com gastrosquise em relação ao número total de em-
briões submetidos ao procedimento.
5 - Discussão 101
Um fato relevante observado no presente estudo foi o de que a sobrevida dos
embriões aumentou à medida que se diminuía o número de viragens dos ovos (de 3
para 1 vez ao dia), o que pode se dever ao fato de se reduzir também o número de
vezes em que a incubadora foi aberta, tornando menor assim, a perda de calor e
umidade. Porém o número de viragens dos ovos não foi uma variável controlada.
Uma maior sobrevida foi observada também nos últimos grupos em que se rea-
lizou o procedimento, fato que acredita-se estar relacionado à curva de aprendizado
cirúrgico na realização da gastrosquise.
A elaboração do gancho para manipulação e tração do cordão umbilical foi fun-
damental para evitar lesões ao embrião. Com o gancho é possível abrir as mem-
branas de maneira romba e com pouco sangramento, tornando-se, dessa forma, a
tração sobre os vasos umbilicais também mais segura. Não há na literatura pesqui-
sada relatos de sua utilização.
A utilização de microscópio e de material de microcirurgia (pinças e tesouras) é
uma opção ao material empregado neste estudo; certamente a manipulação mais
delicada dos embriões resultará em menor mortalidade.
Comparativamente houve diferença estatística entre a sobrevida do grupo G e
do grupo M, basicamente, acredita-se, em decorrência da manipulação (tração e
dissecção) do cordão umbilical e dos vasos (artéria e veia umbilicais), já que a dife-
rença entre esses dois grupos aí se situa. Em outros trabalhos15, 16 que adotaram o
mesmo modelo experimental, a manipulação do cordão, com conseqüente espasmo
ou sangramento dos vasos umbilicais, foi considerada a principal causa de morte do
embrião.
A perfuração do saco da gema foi o acidente cirúrgico mais comum no grupo
G, fato que determinou, obrigatoriamente, interromper-se o procedimento e despre-

5 - Discussão 102
zar o embrião, visto que essa lesão provoca a mistura indesejável dos nutrientes da
gema com o líquido amniótico, modificando-o. A fratura da casca do ovo leva à per-
da de líquido amniótico, e a lesão dos vasos umbilicais produz intenso sangramento
e morte do embrião.
Outro importante aspecto a ser discutido é o fato de que, em modelos experi-
mentais de ratos e coelhos, com freqüência se observa a evisceração do fígado, es-
tômago, intestino grosso, bexiga e até mesmo rins pelo defeito89, 90, 91, 92, enquanto
no embrião de galinha ocorre somente a evisceração do intestino delgado, parecen-
do representar melhor o que acontece na maioria dos pacientes com gastrosquise.
Existe uma intensa troca entre o embrião em desenvolvimento e o meio, atra-
vés da casca do ovo. Oxigênio é absorvido pela membrana corio-alantoíde e chega
até o embrião que excreta gás carbônico e água pelos poros da casca, com conse-
qüente diminuição do peso do ovo durante a incubação. Em virtude disso, realizou-
-se o controle do peso do ovo no início e no final do estudo. Apesar da abertura do
ovo e da manipulação, não houve diferença de peso nos três grupos estudados, sig-
nificando que as trocas através da casca foram semelhantes.
Uma diferença foi detectada no comprimento do ovo do grupo M. A intenção
inicial foi a de que os grupos fossem iguais, principalmente na forma do ovo, razão
pela qual se optou pela randomização. Porém, como os outros parâmetros de largu-
ra e peso se mantiveram sem diferença entre os grupos, esta observação não deve
ter sido relevante.
O fato do peso do embrião ter sido menor no grupo G em relação aos grupos M
e C demonstrou que a exposição das alças intestinais no modelo experimental pro-
moveu o baixo peso, que é uma característica comum da gastrosquise5, 6, 8, 120, 121,
122, 123, 124, 125
. Em embriões de galinha, a alimentação por via transamniótica consti-
5 - Discussão 103
tui-se em significativa parcela de sua nutrição e, ao contrário das gestações em hu-
manos, o líquido amniótico do embrião de galinha tem altos níveis de proteínas71.
Explicações para o baixo peso poderiam ser a alteração do líquido amniótico pela
mistura com o líquido alantóide, a dificuldade de trânsito intestinal e a alta taxa cata-
bólica à qual são submetidos os embriões no procedimento14.
Da mesma forma, a relação PE/PO foi menor no grupo G. O controle dessa
relação é útil para diminuir as variações possíveis nos pesos dos ovos. Este método
é adotado pelos criadores96, 98

e foi utilizado também por Dilsiz et al.30 e Aktug et
al.14.
O funcionamento normal do trato gastrointestinal parece ser um fator essencial
no crescimento intra-uterino, e recém-nascidos com gastrosquise são pequenos para
idade gestacional provavelmente em virtude disso125, 126. Assim, se justifica um rigo-
roso controle do bem estar fetal durante a gestação como forma de identificar e ten-
tar controlar situações de sofrimento fetal, dilatação de alças intestinais e retardo do
crescimento127.
A análise histológica realizada através do escore padronizado mostrou ser o
Grupo G distinto, em todos os aspectos avaliados, dos grupos M e C. Sem dúvida, a
exposição do intestino ao líquido amnioalantóide foi a causa dessa diferença. Em to-
dos os estudos em embriões de galinha como modelo para gastrosquise, alterações
como serosite, enterite, necrose e formação do peel são observadas em diferentes
graus14, 15, 16, 27, 28, 30, 31, 71.
A serosa mostrou ser o local de maiores alterações, certamente por ser a su-
perfície em real contato com o líquido amnioalantóide. Também, no estudo em fetos
humanos realizado por Amoury et al.84, foi a serosa que mostrou o maior comprome-
timento, com edema e acúmulo de colágeno e fibrina (peel). Nos modelos de ovelha
5 - Discussão 104
de Haller et al.93, houve uma importante hipertrofia do peritônio visceral. Edema sub-
seroso e formação de peel parecem ser achados constantes em humanos e nos em-
briões de galinha84, 18, 19, 20

. Langer et al.61 descreveram uma intensa reação infla-
matória, com tecido de granulação e neovascularização na serosa de seu modelo
em ovelhas, que também foi encontrado no presente estudo.
Comparando com os modelos em fetos de coelho, o embrião de galinha conse-
gue reproduzir os achados de formação de peel, o que não é demonstrados nos ex-
perimentos com coelhos85, 92. Em virtude do peel ser considerado um elemento im-
portante na caracterização do intestino da gastrosquise, sendo, inclusive, associado
aos distúrbios da motilidade intestinal61, 68, 69, 94, os modelos em coelhos falham nes-
se aspecto. Possivelmente o tempo de exposição do intestino ao líquido amniótico
não seja suficiente para desenvolver o peel em coelhos.
Espécimes de intestino de gastrosquise humana têm mostrado uma mucosa de
aspecto normal84, o que também se repetiu nos modelos de embrião de galinha de
Kluck et al.16 e Tibboel et al.18. No presente estudo, a mucosa exibiu graus variados
de enterite inespecífica, achado compartilhado também em modelos de coelho89, 92.
Já Haller et al.93 demonstraram sérias alterações na produção de enzimas da muco-
sa.
Alterações isquêmicas foram observadas nos espécimes do Grupo G, consis-
tindo de necrose da mucosa e áreas de necrose parietal. Tais alterações que não
são vistas em outros modelos85, 90, 92, 93, já foram descritas por Tibboel et al.18 e Aktug
et al.15. Essas áreas isquêmicas podem ser explicadas por constricção das alças de
intestino, e conseqüentemente do mesentério, no anel formado pela cicatrização do
defeito se este se estendeu além do coto umbilical, na parede abdominal do em-
brião. A isquemia poderia explicar as atresias intestinais associadas, o vanishing do

5 - Discussão 105
intestino e o alto percentual de cicatrização dos defeitos observados no presente es-
tudo e em outros relatos da literatura15, 16, 71.
A simples contagem do número de plexos nervosos mioentéricos não mostrou
diferença nos três grupos deste estudo. Isto se repete em outros trabalhos com di-
versos modelos experimentais18, 19, 20, 92 e na série de gastrosquise em humanos de
Amoury et al.84. Pórem Haller et al.93, em seu modelo em ovelhas, conseguiram de-
monstrar lesão nas células ganglionares mioentéricas e progressiva redução da ativi-
dade da ATPase nas camadas musculares da parede intestinal, justificando assim
as alterações do peristaltismo. Recentemente, Santos85 aprofundou a análise sobre
os plexos mioentéricos do modelo de gastrosquise em coelhos, utilizando técnicas
histoquímicas especiais, e identificou nítida deficiência de maturação neuronal no
intestino.
A opção por se utilizar a análise morfométrica digital para avaliar a espessura
do intestino se baseou no fato de que os espécimes de intestino de embriões de
galinha são estruturas pequenas e delicadas à manipulação, o que tornou difíceis,
inclusive, os processo de preparação histológica. A totalidade dos autores consul-
tados utilizou a régua microscópica para medir a espessura intestinal dos modelos
experimentais27, 28, 30, 31, 92, porém em espécimes tão pequenos esse método compa-
rativo poderia gerar um importante viés de aferição. Baseado nos artigos de Gheri e
Bryk107,108, que utilizaram morfometria digital para estudo do intestino de embriões
de galinha normais, deu-se preferência por essa técnica.
A serosa foi a camada da parede intestinal que apresentou maior espessamen-
to no grupo G quando comparado com os grupos M e C. A camada muscular não
mostrou espessamento, o que também não foi visto nos estudos de Kluck et al.16 e
Tibboel et al.18. O espessamento da parede intestinal é atribuído às enzimas pro-

5 - Discussão 106
venientes do trato gastrointestinal do embrião, como a fosfatase alcalina, as dissa-
caridases e a tripsina, dissolvidas no líquido em contato com as alças128, 129. O inte-
ressante é que essas substâncias estão presentes no líquido amniótico de gesta-
ções humanas normais, mas ausentes quando o feto apresenta atresia intesinal ou
fibrose cística. Nos embriões de galinha foi demonstrada também a presença de sais
biliares e bilirrubina na mistura de líquidos27.
Qual dessas substâncias estaria diretamente envolvida com os achados, ou em
que proporção cada uma delas participa são questões que necessitam de mais es-
tudos para serem respondidas. De qualquer forma, o embrião de galinha se constitui
num bom modelo para tais investigações.

6 - CONCLUSÕES
6 - Conclusões 108
6 - CONCLUSÕES
Com base nos resultados obtidos, é possível estabelecerem-se as conclusões
a seguir:
• modelo experimental da gastrosquise em embriões de galinha é passível de
ser reproduzido, nas condições deste estudo.
• A taxa de sobrevida dos embriões ao experimento foi de 11,1%, e a de so-
brevida dos embriões com gastrosquise, de 8,7%.
• Os embriões com gastrosquise apresentaram baixo peso.
• As alterações histológicas observadas são comparáveis às da gastrosquise
humana e não estavam presentes no intestino não-exposto ao líquido amnioalantói-
de. São elas:
− sinais histopatológicos de serosite, enterite, formação de peel e áreas de
necrose em diferentes graus de intensidade;
− espessamento das camadas serosa e mucosa intestinais;
− aumento da espessura total da parede intestinal;
− plexos nervosos mioentéricos quantitativamente normais.

7 - PERSPECTIVAS
7 - Perspectivas 110
7 - PERSPECTIVAS
C’est un malade
(Eis a doença!)
Exclamação atribuida a J.M. Charcot, ao ser demonstrado o

modelo experimental do acidente vascular cerebral, por destruição
do córtex de macacos, durante o 7o Congresso Médico Mundial
em Londres, 1881.
Desenvolvido o modelo experimental para o estudo da gastrosquise em em-
briões de galinha, deve-se agora prosseguir com as pesquisas na busca de alterna-
tivas e soluções para os problemas descritos na introdução desta dissertação:
• gênese da gastrosquise;
• estudo da maturação neuronal;
• novas terapias, como o uso de corticoesteróides e antinflamatórios sistêmi-
cos ou no líquido amniótico;
• modificação do líquido amniótico como forma de reduzir a lesão intestinal;
• estudo da formação e da estrutura do peel.

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8 - Referências Bibliográficas 112
8 - REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
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ANEXOS
Anexos
ANEXO 1
Protocolo de Pesquisa
Embrião de galinha como modelo para gastrosquise

Protocolo de Pesquisa Número do Ovo
Número do Lote
Grupo em Estudo: Gastrosquise Mistura Controle
13o dia de desenvolvimento Peso do ovo gramas

Data: Comprimento do ovo mm
Largura do ovo mm
Acidentes no procedimento
19o dia de desenvolvimento Peso do ovo gramas

Data: Peso do embrião gramas
Embrião Vivo Morto
Estruturas evisceradas: Nenhuma

Intestino
Outra, qual ?
Anexos
ANEXO 2
Resultados das medidas dos ovos e embriões nos três grupos
Peso Peso Comprimento Largura Peso Relação

Número do ovo do ovo no 13o do ovo no 19o do ovo do ovo do embrião (g) PE/PO
dia (g) dia (g) (mm) (mm)
G46 50,03 48,05 55 41 17,35 36,11
G71 63,12 61,02 59 45 13,71 22,47
G103 53,14 50,5 53 44 14,41 28,53
G114 60,53 57,21 60 43 21,82 38,14
G126 53,83 52,01 56 43 14,77 28,40
G138 56,98 55,35 59 44 21,32 38,52
G159 51,89 50,11 53 42 24,45 48,79
G173 56,29 54,11 54 44 18,61 34,39
G217 47,67 46,29 53 41 11,48 24,80
G221 43,19 42,03 51 41 13,68 32,55
G242 44,74 43,26 50 41 14,39 33,26
G243 47,78 45,88 53 42 19,75 43,05
G244 48,97 47,25 55 41 12,37 26,18
G259 52,85 51,23 54 42 23,38 45,64
G266 59,53 58,11 57 44 18,06 31,08
G268 55,82 54,25 60 42 17,11 31,54
G269 61,08 59,39 58 45 22,42 37,75
G271 55,73 53,98 58 43 14,61 27,07
M01 57,15 55,52 59 42 23,28 41,93
M02 55,55 53,83 54 44 25,48 47,33
M04 60,78 59,01 59 44 20,42 34,60
M06 57,14 54,89 60 42 23,06 42,01
M07 60,98 58,52 61 43 22,25 38,02
M09 54,8 53,01 58 41 23,4 44,14
M11 58,56 56,4 61 42 21,33 37,82
M12 49,7 47,95 54 42 19,24 40,13
M13 58,2 56,19 59 43 20,92 37,23
M14 62,38 59,69 59 44 19,87 33,29
M16 61,92 59,99 61 44 22,2 37,01
M17 55,32 53,59 54 43 22,34 41,69
C02 56,11 54,06 59 46 27,26 50,43
C03 59,1 55,99 60 43 26,99 48,21
C04 48,7 47,08 54 40 24,18 51,36
C05 58,89 57,21 56 44 27,94 48,84
C06 58,12 56,19 59 42 26,49 47,14
C07 50,45 48,88 54 41 25,05 51,25
C08 54,01 52,66 57 43 24,65 46,81
C11 53,66 52,05 56 43 26,06 50,07
C12 56,21 54,14 56 43 26,35 48,67
C13 46,75 45,77 53 42 19,37 42,32
Anexos
ANEXO 3
Avaliação Histológica do intestino nos embriões de galinha

(Escore da Tabela 5)
Número Serosite Enterite Necrose Peel Total Gânglios

G 46 2 2 0 1 5 10
G 71 1 2 1 3 7 12
G 103 2 2 1 1 6 8
G 114 1 1 0 0 2 16
G 126 2 1 1 2 6 10
G 138 2 2 0 0 4 14
G 159 3 3 3 0 9 3
G 173 2 1 0 1 4 12
G 217 3 3 1 3 10 −
G 221 1 1 0 0 2 14
G 242 3 3 1 1 8 −
G 243 3 3 2 1 9 −
G 244 3 3 2 2 10 −
G 259 2 2 0 2 6 14
G 266 2 0 1 1 4 12
G 269 3 3 3 2 11 −
G 268 3 1 1 3 8 18
G 271 1 0 0 0 1 16
M 1 0 1 0 0 1 7
M 2 0 0 0 0 0 11
M 4 0 0 0 0 0 8
M 6 1 1 0 0 2 12
M 7 0 0 0 0 0 11
M 9 0 0 0 0 0 18
M 11 0 0 0 0 0 14
M 12 1 0 0 0 1 8
M 13 0 0 0 0 0 12
M 14 0 0 0 0 0 15
M 16 0 0 0 0 0 10
M 17 1 1 0 0 2 12
C 2 0 0 0 0 0 14
C 3 0 0 0 0 0 6
C 4 0 0 0 0 0 9
C 5 0 0 0 0 0 12
C 6 0 0 0 0 0 12
C 7 1 0 0 0 1 12
C 8 1 0 0 0 1 10
C 11 1 1 0 0 2 12
C 12 0 0 0 0 0 12
C 13 0 2 0 0 2 12
Anexos
ANEXO 4
Valores de espessura intestinal total e de suas diferentes camadas (médias

das seis medidas, expressas em micrômetros)
Número Mucosa Muscular Serosa Total

G46 153 246 103 502
G71 199 100 103 402
G103 182 253 074 509
G114 171 115 090 376
G126 176 193 062 431
G138 190 130 085 406
G159 207 253 091 552
G173 188 174 076 437
G217 205 269 164 638
G221 192 151 079 421
G242 221 009 118 348
G243 182 161 133 476
G244 163 243 132 538
G259 190 102 109 401
G266 183 257 054 493
G268 176 120 078 374
G269 201 212 106 519
G271 190 141 087 418
S01 142 257 086 486
S02 179 106 072 358
S04 172 268 037 477
S06 162 127 066 354
S07 174 209 050 433
S09 181 143 066 391
S11 179 257 046 482
S12 182 190 052 424
S13 186 275 075 535
S14 182 163 059 403
S16 191 169 064 424
S17 173 173 077 423
C02 177 107 063 347
C03 172 271 032 475
C04 163 127 054 344
C05 172 206 043 422
C06 176 144 057 377
C07 179 259 042 479
C08 182 194 047 423
C11 191 170 057 418
C12 172 174 067 412
C13 184 166 055 405

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UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO SUL

PRÓ-REITORIA DE PÓS-GRADUAÇÃO E PESQUISA

MODELO EXPERIMENTAL PARA O ESTUDO

Carlos André Tarrio Gandara

MODELO EXPERIMENTAL PARA O ESTUDO

Carlos André Tarrio Gandara

Dissertação apresentada ao Programa de

Orientador: Prof. Dr. Ubirajara Índio Carvalho da Motta

G195m Gandara, Carlos André Tarrio

Dissertação (Mestrado) – Universidade Federal do Rio Gran-

1. Gastrosquise. 2. Modelos animais de doenças. 3. Embrião

Catalogação Biblioteca FAMED/HCPA

Hipócrates (460-377 a.C.)

À nossa filha Maria Eduarda, que nasceu

Aos meus pais, pelo exemplo.

Vencer al invicto rival

Sufrir el dolor insufrible

Morir por un noble ideal...

...Con fe una estrella alcanzar

Luchar por un mundo mejor

Perseguir lo mejor que hay en ti

Llegar donde nadie há llegado

Y soñar lo imposible soñar”

Don Quijote y Aldonza

Ao Dr. Ubirajara Índio Carvalho da Motta,

• Ao colega Eduardo Spadari Araújo, amigo e colaborador, que com seu

espirito científico contribuiu diretamente para esta dissertação.

cientemente respondeu a todas as minhas dúvidas, forneceu preciosas

sugestões e prestou significativa colaboração para o desenvolvimento

Ketzer de Souza, pelo exemplo, estímulo e amizade.

• Ao médico veterinário Aírton Cogo, exímio especialista na criação de

aves, que, com sua experiência, auxiliou no aprendizado do desenvolvi-

tilmente cedeu os animais para a pesquisa.

• Ao Dr. Celso Piccoli Coelho, diretor do Centro de Ciências Biológicas e

da Saúde, da Universidade de Caxias do Sul (UCS), pelo apoio à exe-

cução do experimento nos laboratórios da UCS.

• Aos colegas médicos patologistas Alessandra Godoy, Vinícius Silveira

e Ana Maria Geiger, pela competência na preparação e análise do mate-

• Ao Dr. Mário Wagner, que, com sua competência e objetividade, iluminou

os caminhos da estatística e da epidemiologia.

• À Dra. Maria do Horto Motta, pelo requinte e competência na revisão de

linguagem de todo o trabalho.

• Aos funcionários do Biotério da UCS, em especial à Sra. Maria Ilani da

• Aos professores e funcionários do Programa de Pós-Graduação em

Cirurgia da Universidade Federal do Rio Grande do Sul.

1.7.4.1 - A Incubação de Embriões de Galinha ............................... 30

1.7.4.4 - Embrião de Galinha e as Técnicas de Troca

Tabela 1 Comparação entre os estudos no Brasil e Ingla-

Figura 1 Gastrosquise .................................................................................................................. 7

A gastrosquise passou, nos últimos 50 anos, da condição de uma pa-

na neonatologia e cirurgia neonatal modernas. Porém uma significativa mor-

bidade permanece, relacionada principalmente com o atraso no início do fun-

cionamento intestinal normal. Este tema é objeto de estudo em vários cen-

tros visando determinar a origem do problema e promover soluções. Os mo-

delos experimentais em animais são parte importante desses estudos. O

objetivo deste trabalho foi o de reproduzir o modelo experimental da gastros-

quise em embriões de galinha e comprovar que as alterações histopatólogi-

cas apresentadas são comparáveis às da gastrosquise em humanos. Foram

utilizados 278 ovos galinha da raça Leghorn (Gallus domesticus). Os em-